Revista Brasileira de Cincias Farmacuticas Brazilian Journal of Pharmaceutical Sciences vol. 40, n. 2, abr./jun.

, 2004

Estudo comparativo de duas tcnicas farmacopicas de avaliao da atividade antimicrobiana dos frmacos: nistatina, eritromicina, neomicina e gentamicina
Tatiane Margato Vital*, Cleomenes Reis, Marco Tlio Antonio Garca-Zapata, Luiz Carlos da Cunha
Medicina Tropical, Instituto de Patologia Tropical e Sade Pblica, Universidade Federal de Gois

*Correspondncia: T. M. Vital R. C-97 Q.202 L.3 Sudoeste 74303-380 Goinia GO E-mail:tatianemv@hotmail.com

Atravs das tcnicas de difuso em gar com discos de papel e cilindros de ao inoxidvel, analisou-se quantitativamente a atividade antimicrobiana de 123 medicamentos contendo os frmacos: nistatina (43 amostras de creme vaginal), eritromicina (14 amostras de comprimidos e 9 amostras de suspenso oral), gentamicina (33 amostras de lquido injetvel) e neomicina (24 amostras de creme de uso tpico), mediante as seguintes cepas de microrganismos: Saccharomyces cerevisiae ATCC 2601 para a nistatina; Staphylococcus epidermidis 12228 para a gentamicina e neomicina e Micrococcus luteus ATCC 9341 para a eritromicina. O preparo das cepas, solues de padro e amostra e meios de cultura nos dois mtodos seguiram as recomendaes da Farmacopia Brasileira IV (1988) e Farmacopia Americana 24 (2000). Os resultados foram analisados estatisticamente pelos testes de Fisher (p=0,05) e Student (p=0,05). Dentre as 43 amostras de nistatina creme vaginal analisadas, verificaram-se pelo teste de Student , diferenas pouco significativas (para p=0,05) de atividade antimicrobiana entre os mtodos dos discos e cilindros; porm no teste de Fisher no houve diferenas. Nas amostras de eritromicina, gentamicina e neomicina no se obtiveram diferenas significativas entre os testes estatsticos de Fisher e Student. Conclui-se que, para a eritromicina, gentamicina, neomicina e nistatina, a anlise de atividade antimicrobiana pela tcnica dos discos de papel pode substituir a tcnica dos cilindros de ao inoxidvel.

Unitermos Atividade antimicrobiana Nistatina Eritromicina Neomicina Gentamicina

INTRODUO
A determinao da atividade antimicrobiana de frmacos uma anlise microbiolgica in vitro essencial na avaliao da qualidade de medicamentos antimicro-

bianos produzidos pelas indstrias farmacuticas (Paredes, Carranza, 1993; Mendes, 1997; Organizacin Mundial de la Salud, 1999). A Farmacopia Brasileira IV (1988) recomenda os ensaios microbiolgicos por difuso em gar e turbidime-

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tria como adequados para a avaliao da atividade antimicrobiana quantitativa de antibiticos. Contudo, a tcnica de difuso em gar descrita por Bauer et. al., em 1966, figura entre os mtodos mais utilizados em laboratrios de controle de qualidade microbiolgico (Farmacopia Internacional, 1989; Carvalho, Jurgensen, 1991; Cruz et al., 1998). Dentre vrios parmetros considerados, o meio de cultura, o inculo do microrganismo, a difuso do frmaco, as condies de incubao e os critrios de leitura so fundamentais para a confiabilidade do mtodo (Mamizuka et al ., 1983; Ranali, Biral, 1989; Oliveira et al., 2000). A Farmacopia Brasileira, 4 edio (1988) tambm normatiza os principais parmetros de anlise aos diversos antimicrobianos, descritos em monografias. Para a difuso dos frmacos em gar, indica a perfurao de poos, cilindros de ao inoxidvel ou porcelana e discos de papel (Frehlich, Schapoval, 1990; Pinto et al., 2000). Devido contnua necessidade de se padronizar mtodos em laboratrios de anlise microbiolgica de medicamentos, o presente estudo tem a finalidade de comparar dois meios de difuso de frmacos antimicrobianos em gar: com a utilizao de cilindros de ao inoxidvel e com a utilizao de discos de papel, mediante quatro frmacos: nistatina, eritromicina, neomicina e gentamicina. Este estudo foi realizado no laboratrio de controle de qualidade microbiolgico do Laboratrio Neoqumica Ltda em Anpolis/GO.

Os frmacos apresentavam-se nos medicamentos nas seguintes formas qumicas: estolato de eritromicina, sulfato de gentamicina, sulfato de neomicina e nistatina base. Todas as amostras analisadas encontravam-se dentro do prazo de validade de dois anos aps a data de fabricao e conservadas ao abrigo da luz e umidade. Tcnicas e procedimentos Seleo das cepas microbianas Microrganismos indicadores so cepas de bactrias ou fungos, especficas aos frmacos, recomendadas pelas Farmacopias anlise da atividade antimicrobiana de medicamentos, conforme mostra a Tabela I. As cepas utilizadas foram: Saccharomyces cerevisiae ATCC 2601 (USP) para a nistatina, Staphylococcus epidermidis ATCC 12.228 (USP) para a gentamicina e neomicina, e Micrococcus luteus ATCC 9341 (USP) para a eritromicina (Morell et al., 1987; Marques et al., 1988; Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000). Os microrganismos foram inoculados em tubos de ensaio (180 x 18 Mm ) com 10 mL de gar para dosagem de antimicrobianos n. 1 (Merck) com o meio de cultura inclinado para bactrias e gar para dosagem de antimicrobianos n. 19 (Merck) inclinado para fungos, objetivando o crescimento e conservao, 35 C e 30 C, respectivamente (Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000). Preparo do material para a metodologia O preparo e esterilizao de vidrarias, solues e meios de cultura para o desenvolvimento da metodologia foi realizado conforme descrito na Farmacopia Americana (United States Pharmacopoeia, 2000). Preparo dos padres e das amostras Padres antimicrobianos so frmacos quimicamente puros e com ausncia de contaminantes, com certificado de pureza e qualidade expedido pelo fabricante, seguindo a Farmacopia Americana (USP). Devem ser divididos em pores menores, denominados padres de trabalho e dessecados at obter-se o peso constante para perder a umidade (Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000). Os diluentes e as concentraes dos padres e amostras podem ser observados na Tabela II. A proporo de frmaco livre nos padres foi para a neomicina 670 g/mg; nistatina 5.212UI/mg (1489 g/mg); gentamicina 623 g/mg e eritromicina 678,7 g/mg. Segundo a Farmacopia Americana (2000), o sal

MATERIAL E MTODOS
Amostras do estudo Neste estudo foram analisadas 123 amostras dos frmacos nas seguintes propores: 43 amostras de nistatina creme vaginal (34,97%); 23 de eritromicina (18,70%), sendo 14 de comprimidos (11,38%) e 9 de suspenso oral (7,32%); 24 amostras de neomicina creme para uso tpico (19,52%) e 33 de gentamicina injetvel (26,81%). As amostras dos medicamentos foram coletadas ale atoriamente, seguindo a frmula n +1, onde n representa o nmero de caixas de medicamentos produzidos em cada lote, de acordo com o ritmo da produo, do universo de amostras produzidas (Farmacopia Brasileira, 1988). Os produtos so da linha de similares da Neoqumica Indstria Farmacutica Ltda., localizada no distrito Agroindustrial (DAIA) de Anpolis GO. A presena de substncias ativas antimicrobianas em sua composio e a sua freqente produo implicaram a escolha destes medicamentos.

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TABELA I - Microrganismo padro e meio de cultura para o teste da atividade antimicrobiana de frmacos Meios de cultura Frmaco Microrganismo, temperatura de crescimento e perodo de incubao Micrococcus luteus ATCC 9341 (35 C) (24h) Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 (35 C) (24 h) Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 (35 C) (24h) Saccharomyces cerevisiae ATCC 2601 (30 C) (48h) Tubo Base (20 mL) Meio N 11 (Merck) Meio N 11 (Merck) Meio N 11 (Merck) Superfcie (8 mL) Meio N 11 (Merck) Meio N 11 (Merck) Meio N 11 (Merck) Meio N 19 (15 mL) (Merck) Microrganismos no inculo (%) Escala 0,5 de Mac Farland 2.25 x 104 ufc/mL (1.5%) 4.5 x 103 ufc/mL (0.03%) 1.5 x 105 ufc/mL (1.0%) 1.0%

Eritromicina

Meio N 01 (Merck) Meio N 01 (Merck) Meio N 01 (Merck) Meio N 19 (Merck)

Gentamicina

Neomicina

Nistatina

Fonte: Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000. TABELA II - Diluentes e concentrao das solues de antimicrobianos Frmaco Diluente da soluo estoque Metanol Tampo 02 pH = 8,0 Tampo 02 pH = 8,0 Dimetilformamida Concentrao Prazo de validade da soluo sob refrigerao estoque (mg/mL) (4 C) 1 1 1 0,2857 14 dias 30 dias 14 dias 1 dia Diluente final Tampo 02 pH = 8,0 Tampo 02 pH = 8,0 Tampo 02 pH = 8,0 Tampo 04 pH =6,0 Concentrao P1/A1 e P2/A2 2,0 e 1,0 mg/mL 0,1 e 0,2 mg/mL 2,0 e 1,0 mg/mL 0,0114 mg/mL e 0,0057 mg/mL*

Eritromicina Gentamicina Neomicina Nistatina

Fonte: Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000. * Kalant, Roschlau, 1991 (1 mg = 3500 U.I). estolato de eritromicina deve conter em relao ao padro 90% a 120% da substncia ativa eritromicina; o sulfato de gentamicina, de 90% a 125% do frmaco gentamicina o sulfato de neomicina 90% a 135% do frmaco neomicina de a nistatina base, de 90% a 130% do frmaco nistatina, considerando-se a qualidade varivel de extrao das amostras. O peso do antimicrobiano foi relacionado com a concentrao do frmaco ativo na frmula do medicamento, sendo para a eritromicina comprimidos 1 grama (500 mg de substncia ativa), suspenso 5 mL (500 mg de substncia ativa); gentamicina 2 mL de soluo injetvel (280 mg de substncia ativa); neomicina creme de uso tpico 1 grama (5 mg de substncia ativa) e nistatina creme vaginal 1 grama (25.000 UI de substncia ativa). O padro para cada antimicrobiano teve concentrao equivalente da amostra (Korolkovas, Burckhalter, 1988; Dicionrio de Especialidades Farmacuticas, 2000). A soluo-estoque a primeira diluio do medicamento ou padro em concentrao elevada da substncia ativa. A eritromicina, na forma farmacutica de comprimidos, foi triturada, misturada, pesada e dissolvida no

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solvente; a nistatina creme foi pesada, misturada com o solvente e decantada a fase de maior peso molecular para anlise; a eritromicina suspenso e a gentamicina injetvel foram medidas com pipeta volumtrica e dissolvidas em seus solventes correspondentes. Para a eritromicina foi usado como solvente o metanol; para a gentamicina e neomicina, o tampo 2 (pH 8,0) e para a nistatina utilizou-se a dimetilformamida, tanto para as amostras como para seus padres correspondentes. As concentraes variaram de acordo com cada frmaco: 1 mg/mL para a eritromicina, gentamicina e neomicina, e 1.000 UI/mL para a nistatina, o que equivale a 0,2857 mg/mL. O volume final dos bales de vidro foi de 50 mL, tanto para o padro mais e menos concentrado (P1 e P2) e para as amostras mais e menos concentrada (A1 e A2). Em ensaios de rotina, quando a linearidade do sistema foi comprovada usando o ensaio de trs pontos, pode-se utilizar o ensaio de dois pontos (Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000). Nas diluies posteriores, o tampo 2 (pH 8,0) foi utilizado para solubilizar as solues de eritromicina, gentamicina e neomicina, porm para a nistatina utilizouse o tampo 4 (pH 6,0). As concentraes finais das solues da amostra 1 e 2 e o padro 1 e 2 foram para a eritromicina e neomicina 2,0 mg/mg (P1 e A1) e 1,0 g/mg (P2 e A2), respectivamente; enquanto que para a gentamicina foi de 0,1 g/mg (P1 e A1) e 0,2 g/mg (P2 e A2) e para a nistatina, 40 UI/mL (A1 e P1) e 20 UI/mL (P2 e A2) (Farmacopia Brasileira, 1988). A composio dos tampes foi: Tampo 2 (Tampo de fosfato de potssio a 0,1M, pH 8,0) fosfato de potssio dibsico (Synth ) 16,73 g; fosfato de potssio monobsico (Synth ) 0,523 g; gua desionizada para 1000 mL e ajuste de pH para 7,9 8,1, com cido fosfrico (Synth) 6 M ou hidrxido de potssio (Synth) 10 M e Tampo 4 (Tampo de fosfato de potssio a 10%, pH 6,0) fosfato de potssio dibsico (Synth) 20,0 g; fosfato de potssio monobsico (Synth) 80,0 g; gua desionizada para 1000 mL e ajuste de pH para 5,9 6,1 com cido fosfrico (Synth) 6 M ou hidrxido de potssio (Synth) 10 M. Meios de Cultura A composio dos meios de cultura para o crescimento e conservao dos microrganismos foi: gar para dosagem de antimicrobianos n. 1 (Merck): peptona seca (6,0 g); casena de digesto pancretica (4,0 g); extrato de levedura (3,0 g); dextrose (1,0 g); gar (15,0 g) e gua desionizada para 1000 mL (pH final 6,6) e gar para dosagem de antimicrobianos n. 19 (Merck) : peptona seca (9,4 g); extrato de levedura (4,7 g); extrato de carne

(2,4 g); cloreto de sdio (10,0 g); dextrose (10,0 g); gar (23,5 g) e gua desionizada para 1000 mL (pH final 6,1). Para cada antimicrobiano analisado foram utilizadas seis placas de Petri (100 x 20 mm) estreis - trs placas para o padro (P) e trs para as amostras (A) (Farmacopia Brasileira, 1988). Aps o preparo e autoclovao, os meios de cultura foram armazenados em geladeira (4 C) por no mximo dois dias e fundidos em banho-maria a 60 C. As placas para a anlise do antifngico nistatina possuam uma camada nica com 15 mL (5 mM) de gar para teste de atividade de microrganismos n. 19 (Merck) hidratado e autoclavado, contendo o inculo. Para os demais medicamentos, ulitizaram-se 20 mL do gar para teste de atividade de microrganismos n. 11 (Merck) que o meio n. 1 com pH 8,0 na base e, aps a sua solidificao, sobrepuseram-se 4 mL do mesmo meio de cultura com o inculo (bicamada), homogeneizando-se de forma circular at recobrir a camada base uniformemente (Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000). Para o preparo do inculo foi feita uma suspenso com 3 mL de soluo fisiolgica (salina) juntamente com os respectivos microrganismos em crescimento, de acordo com o recomendado anlise de cada frmaco. Utilizou-se a escala MacFarland 0,5, empregada para antibiogramas, para a padronizao. As concentraes dos inculos foram 1% aos testes da neomicina e nistatina; 1,5% para a eritromicina e 0,03% para a gentamicina. O inculo foi adicionado ao meio de cultura na temperatura de 40 C (Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000). Aplicao dos Discos de Papel Os discos de papel de filtro com 13 mm de dimetro esterilizados foram embebidos nas preparaes de antimicrobianos e aplicados nas placas com o inculo, opondo-se o disco da amostra de maior (A1 e P1) de menor (A2 e P2) concentrao, equidistantemente distribudos. Cada disco foi embebido levemente por trs vezes e pressionado contra a parede do recipiente por mais trs vezes a fim de retirar o excesso do lquido. As placas com os antibiticos foram incubadas a 35 C por 24 horas e com o antifngico a 30 C por 48 horas (Farmacopia Brasileira, 1988; United States Pharmacopoeia, 2000). Para cada amostra e padro fez-se uma placa semeada com o inculo, destinada ao controle em branco dos discos de papel. Anlise com Cilindros de Ao Inoxidvel As amostras de medicamentos, as cepas de microrganismos, os diluentes, os meios de cultura e as tcnicas de

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preparo foram as mesmas para a anlise da atividade antimicrobiana de frmacos com cilindro de ao inoxidvel. Aps a solidificao dos meios de cultura, foram colocados seis cilindros de ao inoxidvel, com dimetro externo de 8 0,1 mm, dimetro interno de 6 0,1 mm e comprimento de 10 0,1 mm sobre a superfcie do gar inoculado com os microrganismos, para se inserir as solues em anlise (0,2 mL) e medir os halos de inibio formados, calculando-se os resultados como na metodologia dos discos de papel (Farmacopia Brasileira, 1988). Critrios de Avaliao da Leitura A leitura dos resultados foi realizada com contador de colnias (Biomatic) e paqumetro( Mitutoyo) medidor do dimetro das zonas de inibio produzidos ao redor dos discos de antimicrobianos (Farmacopia Brasileira, 1988). As porcentagens de princpio ativo e a atividade antimicrobiana dos frmacos foram calculadas da seguinte forma: log m = 0,30103 x A1 + x A2 x P1 x P2 x A1 x A2 + x P1 x P2 em que: x P1 = mdia dos dimetros dos halos de inibio do padro 1 (maior concentrao) x P2 = mdia dos dimetros dos halos de inibio do padro 2 (menor concentrao) x A1 = mdia dos dimetros dos halos de inbio da amostra 1 (maior concentrao) x A2 = mdia dos dimetros dos halos de inbio da amostra 2 (menor concentrao) Atividade Antimicrobiana (AA) = log m x 100 As amostras dos lotes de antimicrobianos analisadas foram remetidas para o Laboratrio Cultura em Santo Andr/SP para controle de qualidade microbiolgico, que realizou o mtodo da determinao da atividade antimicrobiana de frmacos utilizando cilindros de ao inoxidvel, sendo posteriormente analisados por testes estatsticos de comparao de mdias como os resultados deste estudo. Anlise Estatstica Os resultados foram analisados utilizando-se os testes paramtricos de distribuio normal de Fisher (1924) e teste de Student (1908), com nvel de significncia de 5% (p=0,05) (Beiguelman, 1996).

RESULTADOS E DISCUSSO
Neste estudo, atravs das tcnicas farmacopicas de difuso em gar por discos e cilindros, verificou-se a atividade antimicrobiana de quatro frmacos: nistatina, gentamicina, eritromicina e neomicina mediante os microrganismos: Saccharomyces cerevisiae (ATCC 2601), Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228), Micrococcus luteus (ATCC 9341) e Staphylococcus epidermidis (ATCC 12228), respectivamente. Os tamanhos dos halos de inibio dos microrganismos foram observados mediante dois testes de difuso em gar utilizando-se discos de papel e cilindros de ao inoxidvel, dois mtodos amplamente utilizados em controle de qualidade industrial, de acordo com a Figura 1. A mdia de atividade (IC 95%) para cada um dos frmacos foi: para a nistatina creme vaginal 1493,78 g/mg para os discos e 1486,02 g/mg para os cilindros; para a eritromicina comprimidos 681,85 g/mg para os discos e 678,94 g/mg para os cilindros; para a eritromicina suspenso de 675,96 g/mg para os discos e 674,99 g/mg para os cilindros; para a neomicina creme obtiveram-se 667,92 g/mg para os discos e 668,93 g/mg junto aos cilindros e para a gentamicina injetvel 615,90 g/mg para os discos e 616,21 g/mg nos cilindros, como na Tabela III. Verificou-se a existncia de diferenas entre os mtodos dos discos e cilindros para o frmaco nistatina no teste estatstico de Student, o que no se detectou no teste estatstico de Fisher; recomenda-se ento que o teste de avaliao da atividade antimicrobiana atravs dos discos pode, apesar da diferena pouco significativa para p = 0,05, substituir a anlise atravs dos cilindros de ao inoxidvel. Aos demais frmacos: eritromicina, neomicina e gentamicina, que nos dois testes estatsticos apresentaram resultados semelhantes, recomenda-se portanto que os dois mtodos de anlise da atividade antimicrobiana podem ser intercambiados com a mesma confiabilidade de resultados no controle de qualidade microbiolgico nas indstrias farmacuticas. As Figuras 2 e 3 mostram as curvas de distribuio normal de freqncia dos frmacos, comparando-se os dois mtodos de anlise em discos de papel e cilindros de ao inoxidvel. As curvas dos frmacos eritromicina suspenso, neomicina creme e gentamicina injetvel normalmente se sobrepem, indicando que as anlises obtiveram resultados similares. Para o frmaco eritromicina comprimidos, as curvas se sobrepem em pontos especficos, indicando diferenas entre os testes (no significativas a p 0,05) e para a nistatina, h diferenas pouco significativas (para p 0,05) entre as curvas em diversos pontos.

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FIGURA 1 - Placas com discos de papel testando a atividade antimicrobiana.

TABELA III - Atividade antimicrobiana dos frmacos nistatina, eritromicina , neomicina e gentamicina, em mg/mg do medicamento, obtidas pelas tcnicas farmacopicas dos discos e cilindros em Anpolis/GO, 2001
Anlise de Varincia (F) 1 2,482 P2 0,119 Teste t Dados pareados Valor t P4 calculado 3 2,018 0,003

Discos Frmaco Nistatina (creme vaginal) Eritromicina (comprimidos) Eritromicina (suspenso) Neomicina (creme) Gentamicina (injetvel)
1

Cilindros Mdia Desvio C.V. (I.C. 95%) Padro % 1486,023 7,270 678,949 4,819 674,999 18,478 668,939 4,010 616,213 5,005 23,623 1,590

N Mdia Desvio C.V. amostras (I.C. 95%) Padro % 43 1493,784 6,781 681,854 5,954 675,964 17,950 667,920 4,990 615,903 5,098 22,035 1,475

14

10,312

1,512

8,346

1,229

4,225

0,420

2,160

0,080

23,352

3,455

24,039

3,561

4,494

0,932

2,306

0,607

24

11,817

1,769

9,498

1,420

0,108

0,743

2,069

0,439

33

14,378

2,334

14,114

2,290

0,008

0,930

2,037

0,780

Teste F (Beiguelman, 1996); 2Probabilidade associada a F;3Teste t para diferenas entre pares de observaes (Student, 1908); 4 Probabilidade associada a t.

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FIGURA 2 - Distribuies das freqncias das atividades dos frmacos eritromicina, gentamicina, neomicina e nistatina, obtidas pelas tcnicas farmacopicas de difuso em discos e cilindros em Anpolis/GO, 2001.

FIGURA 3 - Curvas de distribuio de freqncia das atividades dos frmacos eritromicina, gentamicina, neomicina e nistatina, obtidas pelas tcnicas farmacopicas de difuso em discos e cilindros em Anpolis/GO, 2001.

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CONCLUSO
O mtodo de anlise de atividade antimicrobiana por difuso em gar com discos de papel pode substituir o mtodo de difuso em gar com cilindros de ao inoxidvel para medicamentos antimicrobianos contendo os frmacos: eritromicina, gentamicina, neomicina e nistatina.

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ABSTRACT
Comparison of two pharmacopeical thecnics to the evaluation of the antimicrobial activity of the drugs: nystatin, erythromycin, neomycin and gentamicin Through the diffusion techniques in culture media with paper disc and stainless steel cylinders the antimicrobial activity in 123 pharmaceutical preparations was evaluated: nystatin (43 samples of vaginal cream), erythromycin (14 samples of tablets and 9 of oral suspension), gentamicin (33 samples of injectable liquid) and neomycin (24 samples of cream of topic use), against the microorganisms: Saccharomyces cerevisiae ATCC 2601 to nystatin; Staphylococcus epidermidis 12228 to gentamicin and neomycin, and Micrococcus luteus ATCC 9341 to erythromycin. The preparation of the test organisms, standard solution, test solutions and culture media in both methods followed the recomendations of Brazilian Pharmacopoeia IV (1988) and United States Pharmacopoeia 24 (2000). The results was statically analysed by tests of Fisher (p=0,05) and Student (p=0,05). Among the 43 samples of vaginal cream nystatin analysed, checked out by the Students test, differences of antimicrobial activity between methods of disc and cylinder were observed. However, the Fishers test does not presented difference. The samples of erythromycin, gentamicin and neomycin did not show any difference when submitted to Fisher and Student tests in conclusion, to the erythromycin, gentamicin, neomycin and nystatin, the analysis of antimicrobial activity by the technique of paper discs can substitute the technique of the cylinders of stainless steel. UNITERMS: Antimicrobial activity. Nystatin. Erythromycin. Neomicyn. Gentamicin.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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Estudo comparativo de duas tcnicas farmacopicas de avaliao

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