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Introduction

INTRODUCTION :
Chez les humains, la microflore intestinale constitue un riche cosystme compos dune vaste gamme de micro-organismes prsentant une activit mtabolique. Dans le tube digestif, la colonisation bactrienne touche particulirement le gros intestin, qui produit habituellement jusqu 1012 bactries/gr de selles. Lun des principaux effets bnfiques manant leur alliance est la protection ainsi lamlioration de la rsistance aux maladies infectieuses de lorganisme hte. Les travaux de Metchnikoff (1907) ont dmontr que la consommation daliments ferments permet de rtablir la flore intestinale en gnrant des effets bnfiques sur la sant de lhte et des animaux. Depuis quelques annes, on voit apparatre sur le march de lagro-alimentaire des spcialits laitires fermentes avec des bactries lactiques comme le Bifidus, du sucre enrichi en FOS (Fructo-oligosaccharides) ou en inuline ou encore des complments alimentaires contenant des bactries. Ds tudes scientifiques ont rapport les proprits prophylactiques et thrapeutiques de certains micro-organismes et substances prsents dans les aliments, ces derniers sont souvent appels alicaments ou aliments fonctionnels ; les principaux groupes dalicaments sont les probiotiques, les prbiotiques et les symbiotiques. Dans ce contexte liant alimentation et sant, les probiotiques : micro-organismes vivants qui, lorsquils sont consomms en quantits adquates, produisent un bnfice pour la sant de lhte, et les prbiotiques : ingrdients alimentaires non digestibles qui stimulent de manire slective au niveau du clon la multiplication ou lactivit dun ou dun nombre limit de groupes bactriens susceptibles damliorer la sant de lhte. Enfin, les symbiotiques sont une combinaison entre les probiotiques et les prbiotiques. Ce travail est une synthse bibliographique (micro-projet) qui apporte lensemble des tudes antrieures ralises dans ce contexte. Elle comporte quatre chapitres, le premier : traitant lcosystme gastro-intestinal, le deuxime : gnralits sur les principaux micro-organismes potentiel probiotique, le troisime : les probiotiques et je termine par le quatrime chapitre : les prbiotiques et les symbiotiques.

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Chapitre I

Ecosystme gastro-intestinal

I. Ecosystme gastro-intestinal : I.1. Notions de souches, despces et de genres bactriens : I.1.1. Souches : une souche bactrienne correspond lensembles des micro-organismes issus dune seule cellule (isole). La souche est conserve en collection. A chaque souche est attribu un code choisi par le laboratoire ou la collection. (AFSSA, 2003). I.1.2. Espce bactrienne : une espce bactrienne est dfini par un ensemble de souches considres comme semblables. Pour chaque espce, une souche type est arbitrairement dsigne parmi les premires souches isoles, on basant toujours sur le concept despces phylogntique. La dfinition de lespce est fragile et peut tre modifie lorsque des critres plus discriminants sont identifis. Laccs aux gnomes a conduit dfinir une valeur seuil de similarit globale entre deux gnomes pour que les souches correspondantes appartiennent la mme espce au moins 70% de similarit sont ncessaires. A cette valeur correspond une similarit de squences des gnes codant pour les ARN ribosomaux denviron 98%. I.1.3. Genre bactrien : un genre bactrien correspond une entit bien dfinissable, clairement spare des autres genres. Il n y a cependant pas un consensus complet sur la dfinition des genres et des redfinitions sont occasionnellement proposes. Les espces dun mme genre ont des gnomes dont le degr de similarit est compris entre 30 et 70%. Pour la classification une espce type fait rfrence pour chaque genre bactrien (AFSSA, 2003). Par convention, le nom despce est crit en minuscules et il est toujours associ au nom de genre correspondant portant une majuscule. Les noms latins sont crits en italique et le nom de genre peur tre abrg par la majuscule initiale, ainsi dans lexemple de : Bifidobacterium lactis Bb-12, Bifidobacterium est le nom du genre, lactis le nom de lespce et Bb-12 lidentifiant de la souche. I.2. Notions de colonisation, implantation, prolifration et survie : I.2.1. Colonisation : la colonisation de lcosystme digestif par une souche, une espce ou un genre bactrien se caractrise par une population microbienne de niveau constant au cours du temps et nexigeant pas de r-inoculation priodique. (AFSSA, 2005). La colonisation dsigne, gnralement la capacit du micro-organisme darriver dans le tube digestif et de sy implanter et de persister. (Corthier, 2004). Les bactries ayant colonis une niche donne sy multiplient un taux gal au taux dlimination pour cette niche. Dune faon gnrale, un micro-organisme dit autochtone ou indigne colonise naturellement un habitat du tube digestif, autochtone pour un habitat donn, le micro-organisme peut tre allochtone pour dautres habitats o il transite aprs limination de son habitat dorigine (Hao et Lee, 2004). I.2.2. Implantation : est un terme synonyme de colonisation et les auteurs utilisent indiffremment lun ou lautre terme. Il est quelquefois utilis dans un sens plus spcifique pour dsigner la multiplication bactrienne qui prcde la colonisation. I.2.3. Prolifration : la prolifration bactrienne correspond une forte multiplication dans la niche cologique considre. Si elle concerne des bactries pathognes (Salmonella, Shigella), elle conduit souvent une pathologie. Pour les autochtones, la prolifration permet la colonisation. Pour les bactries en transit qui ne colonisent pas, deux situations sont possibles : la survie ou la mort. (AFSSA, 2003).

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I.2.4. Survie : la survie est exprime en pourcentage du nombre de micro-organismes ingrs, ou en concentration atteintes en diffrents sites intestinaux, et cette survie peut tre diffrente entre genres microbiens, espces et mme parfois souches. (Marteau et Seksik, 2005). Durant le transit, le micro-organisme qui survit peut tre inactif (cas des spores ne germant pas) ou dvelopper une activit en fonction de lenvironnement digestif (cas des probiotiques). Enfin, mme en labsence de survie, la lyse bactrienne dans la lumire intestinale peut librer des composs biologiquement actifs (AFSSA, 2005). I.3. Description gnrale de lcosystme digestif : Le tractus gastro-intestinal est un cosystme complexe et ouvert aux micro-organismes exognes. De part sa surface totale (muqueuse) estim de 200 300 m2, il reprsente la plus grande surface du corps en contact avec lenvironnement (Holzaptel et al., 1998). Lcosystme gastro-intestinal est gnr par une alliance stable entre lpithlium gastrointestinal, le systme immunitaire et une importante flore microbienne. Ces trois composants sont continuellement lis entre eux et voluent ensemble en assurant une fonction et une activit normale de lcosystme. La figure -1 montre les principaux compartiments constituant le tractus gastro-intestinal de lhomme. Les interactions entre les micro-organismes et lhte peuvent tre de trois types : symbiose, commensalisme et pathognicit (Hooper et Gordon, 2001).

Figure -1 : les principaux compartiments constituant le tractus gastro-intestinal. (Aggett et al., 2003).

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I.4. La microflore intestinale : Selon la dfinition de Isolauri et al., (2002), la flore intestinale normale est une collection complexe et en quilibre de micro-organismes qui habitent normalement le tractus gastrointestinal (TGI) et remplissant un rle dans la nutrition, la physiologie et le contrle du systme immunitaire de lhte. Aprs une colonisation complte, la microflore intestinale est considre comme un organe acquis aprs la naissance. Il est constitu dune grande diversit despces microbiennes assurant diffrentes fonctions pour lhte et cette microflore est estime prs de 1013 1014 cellules microbiennes reprsentant 400 500 espces et sous espces. Cette microflore reprsente environ 10 fois le nombre total de cellules du corps humain (Bjorksten, 2004). La prvalence des bactries dans le TGI dpend des conditions rgnant dans le compartiment du tractus. Deux catgories de bactries ont t identifies : les bactries autochtones ou indignes se trouvant dans les niches particulires et les bactries allochtones ou transitoires rencontres dans dautres habitats du tractus. La majorit des bactries pathognes sont allochtones et vivent normalement en harmonie avec lhte. (Hao et Lee, 2004). I.5. Rpartition des espces microbiennes : Du point de vue microbiologique, lenvironnement gastro-intestinal comprend trois rgions principales qui offrent des conditions trs diffrentes pour la survie des diffrents micro-organismes, comme le montre la figure -2.

Figure -2 : Schma simplifi dcrivant les compartiments de lappareil digestif de lHomme et leurs microflores (Ouwehand et Vesterlund, 2003).

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I.5.1. Lestomac : la prolifration microbienne est fortement rduite par la prsence doxygne apport par la dglutition et dune forte acidit. De ce fait, lestomac hberge slectivement les micro-organismes acidotolrants et anarobies facultatifs comme les lactobacilles, streptocoques, levuresetc. (Gournier-chteau, 1994). I.5.2. Lintestin grle : la microflore est constitue essentiellement de bactries anarobies facultatives tels que les lactobacilles, les streptocoques et les entrobactries et anarobies strictes notamment les bifidobactries, les bactroides et les clostridies. I.5.3. Le colon : cest le dernier compartiment, dpourvu doxygne. Le transit digestif est plus lent et la flore microbienne est plus abondante, reprsentant 35 50 % du volume du contenu du colon humain (Cummings et al., 1989 ; Gournier-chteau, 1994). La microflore du colon est trs complexe et domine pas les bactries anarobies strictes (Bactroides spp, Clostridium spp, Bifidobacterium spp,.. ), tandis que les bactries anarobies facultatives sont moins nombreuses et les levures sont relativement faiblement reprsentes. La charge microbienne dans le diffrents compartiments a t estime environ 104, 103-4, 105-7, 107-8 et 1010-11 (UFC/gr) dans lestomac, le duodnum, le jjunum, lilon et le colon respectivement. (Ouwehand et Vestrerlund, 2003 ; Isolauri et al., 2004). Les bifidobactries et les lactobacilles, certains entrocoques, E.coli, streptocoques et bactroides, se distinguent par leurs effets bnfiques sur la sant de lhte (Gibson et Roberfroid, 1995 ; Rastall, 2004). Les principaux composants de la flore du colon ainsi que leurs effets su r lhte sont prsents dans la figure-3.

Figure -3 : Vue gnrale sur la microflore du clon humain (Gibson et Roberfroid ,1995).

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I.6. Rle de la microflore intestinale : Des milliards de bonnes bactries sont normalement prsentes dans notre TGI, elles constituent la flore intestinale. Ces bactries vivent en parfaite intelligence avec notre organisme et qui sont indispensables notre systme de dfense. Les principales fonctions de la flore intestinale sont : Digestion et absorption des nutriments nos digestibles qui les bactries sont capables de dgrader (cellulose, hmicellulose, pectine), Protection vis--vis des germes pathognes (par un phnomne de comptition), Lantagonisme contre les pathognes et la modulation de la fonction immunitaire (Schrezenne et al., 2001), Modification du contenu de lintestin (pH, production de mtabolites, vitamines (K, B2, B8), enzymes digestives), rduction des mtabolites (ure, cholestrol), Modification anatomique du tube digestif (rduction du volume caecal, rduction de la morphomtrie des villosits), Modification du fonctionnement digestif (acclration du transit gastrique et intestinal et laccroissement de labsorption des composants abiotiques), Amlioration de la rsistance aux infections gastro-intestinales (effet de barrire et modulation de la scrtion des toxines dans lintestin), Stimulation des fonctions immunitaires. (Moreau et al., 2000). I.7. Les facteurs majeurs influenant la microflore gastro-intestinale : La composition et les fonctions de la microflore du TGI sont influences par divers facteurs lis au changement des conditions physiologiques de lhte (ge, tat de sant,), de la composition du rgime alimentaires et des circonstances environnementales (contamination par les pathognes, antibiothrapie, chimiothrapie, climat, stress, hygine..) (Mitsuoka, 1989 ; Hopkins et al., 2002). Selon, Holzapfel et al. (1998), les facteurs majeurs influenant la microflore gastro-intestinale sont rsums dans le (tableau -1). Tableau -1 : les principaux facteurs influenant la composition et la fonction de la microflore intestinale (Holzapfel et al., 1998). Facteurs mdis par lhte * pH, scrtion (Ig, bile, sels, enzymes * Motilit (pristaltisme) * Physiologie, selon les compartiments * Cellules dtaches, mucines, exsudats de tissus. Facteurs microbiens * Adhsion * Motilit * Flexibilit nutritionnelle * Spores, capsules, enzymes, composants antimicrobiens * Temps de gnration. Interactions Microbiennes Synergie Antagonisme/stimulation * Coopration mtabolique * AGCC, amines * Excrtion de vitamines et facteurs de * Changement de Eh, pH et tension croissance dO2, * Changement de Eh, pH et tension * Composants antimicrobiens, dO2 * Besoins nutritionnels, etc Rgime alimentaire Composition, fibres non digestibles, Drogues, etc

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Chapitre II

Gnralits sur les principaux micro-organismes potentiel probiotique

II. Les principales souches microbiennes potentiel probiotique : Les souches ou espces probiotiques sont des composants normaux de la flore intestinale (Dunne et al., 2001). En alimentation humaine, les genres microbiens les plus utiliss comme probiotiques sont les lactobacilles, Bifidobacterium et streptococcus (Goldin et Gorbach, 1992 ; berg, 1998). II.1. Les bactries lactiques : Les bactries lactiques sont des cellules procaryotes, htrotrophes et chimioorganotrophes. Elles sont Gram +, gnralement immobiles, asporules et dont des exigences nutritionnelles complexes pour les acides amins, les peptides, les vitamines, les sels, les acides gras et les glucides fermentescibles. (Dellaglio et al., 1994). Douze genres bactriens figurent dans la catgorie des bactries lactiques : Aerococcus, Alloicoccus, Carnobacterium, Enterococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Vagococcus et Weissela . Les bactries du genre Bifidobacterium ne sont pas considres comme des bactries lactiques typiques, mais leur usage se rpond en industrie laitire. (Drouault et Corthier, 2001 ; Salminen et al., 1998). Elles ont des formes en btonnet ou en coques, elles ont galement un mtabolisme arobie facultatif et ne produisent pas de catalase mais possdent plutt une peroxydase, moins efficace que la catalase et elles sont considres comme micro-arophiles. Les bactries lactiques ont en commun la capacit de fermenter les sucres en acide lactique (Sanders, 2001 ; Fooks et Gibson, 2002). Certaines sont dites homofermentaires car elles produisent majoritairement de lacide lactique alors que dautr es sont dites htrofermentaires et produisent de lacide lactique en temps que dautres composs (Actate, thanol et CO2) (Sillanpaa, 2001 ; Fooks et Gibson, 2002 ; Klaenhammer et al., 2002). Les bactries lactiques sont utilises pour la fermentation dun grand nombre de produits dorigine animale ou vgtale. Le rle principal des bactries lactiques est la production dacide lactique qui influence la texture, le got et la qualit microbiologique du fromage. Labaissement du pH limite la croissance des bactries indsirables (Gilliand, 1985) et elles jouent aussi un rle dans laromatisation, comme elles produisent des exopolysaccharides et des bactriocines. Parmi les principales bactries lactiques utilises on trouve les lactobacilles, ces derniers sont en gnral des btonnets non flagells, non sporuls et Gram + (Gomez et Malcata, 1999). Plus de 56 espces de lactobacilles ont t dnombres, dont 21 ont t trouvs chez lhomme (Gomez et Malcata, 1999 ; Vaughan et al., 2002). Leurs principales caractristiques sont : un mtabolisme des sucres homofermentaires ou htrofermentaires, des conditions de croissance anarobies facultatives, un pourcentage de bases G+C variant de 32 55 % et une faible variabilit dans la composition des peptidoglycanes. II.2. Les bifidobactries : La dcouverte des bifidobactries remonte au dbut du sicle lorsque Henri Tessier (1900) les a isoles partir des fces dun enfant allait au sein, une bactrie anarobie de morphologie bifide quil appela Bacillus bifidus. Les bifidobactries sont des btonnets aux formes varies (bifide ou ramifi) dont la plus caractristique est une forme en Y. Les bifidobactries sont Gram +, immobiles, non sporules, non productrices de gaz, anarobies strictes (sauf quelques espces pouvant tolrer loxygne), catalase (-)

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Gnralits sur les principaux micro-organismes potentiel probiotique

ngatives (except B.indicum et B.asteroides) htrofermentaires et saccharolytiques, ayant un pourcentage de bases G+C compris entre 55 et 67%, et dont la composition de leurs peptidoglycanes est trs variable. (Gomez et Malcata, 1999). Leurs niches cologiques sont lintestin de lhomme, la cavit buccale, le TGI de lanimal, lintestin de linsecte et les eaux rsiduaires (Ventura et al., 2004). La temprature de croissance des bifidobactries isoles de lhumain ou des animaux varies respectivement de 36 38 C et de 41 43C et des valeurs de pH comprises entre 6,5 7. (Dong et al., 2000). Parmi les 32 espces de bifidobactries rpertories, 10 sont considres comme tant dorigine humaine alors que les autres sont isoles dans les matires fcales danimaux divers (Curk et al., 1994). Les souches de bifidobactries identifies chez lhumain et les plus utilises sont : B.longum, B.bifidus, B.infantis, B.breve, B.catenulatum, B.adolescentis ,etc. La variation de la distribution des bifidobactries dans le TGI de lhomme selon lge est indique dans le tableau -2. Tableau -2 : Distribution des diffrentes espces de Bifidobactries dans le tractus digestif de lhomme en fonction de lge (Ballogne, 1993). Population Jeunes enfants nourris au sein Espces mineures Espces majeures B.longum B.infantis B.breve B.adolescentis B.infantis B.breve B.bifidum biovar.b B.longum B.adolescentis biovar.a et b B.adolescentis biovar.b B.longum

Jeunes enfants nourris B.bifidum biovar.b au biberon. Enfants et adolescents Adultes Personnes ges B.bifidum biovar.a

Du point de vue physiologique, les bifidobactries se caractrisent par leur activit enzymatique leur permettant dutiliser de nombreux sucres, comme le lactose, le galactose, le raffinose, lamylose,(Scardovi, 1984) et de produire de lacide lactique et de lacide actique. Les bifidobactries se distinguent des lactobacilles principalement par la production dune enzyme caractristique fructose-6-phosphoctolase implique dans la voie mtabolique de D-fructose-6-phosphate (De vries et Stouthamer, 1967). Cette enzyme caractrise essentiellement les bifidobactries provenant de lhumain, alors que les bifidobactries isoles des animaux se distinguent par le duo de substrat : xylulose-5phosphate/fructose-6-phosphate phosphoctolase (Meile et al., 2001). Une autre enzyme cl intervenant dans la fermentation des sucres qui est la -galactosidase qui catalyse les ractions dhydrolyse et de transgalactosylation (Zarate et al., 1990 ; Tannock et al., 2004). Enfin, en plus de leur capacit tre incluses dans les produits laitiers liquides, les Bifidobactries peuvent aussi tre lyophilises pour des applications dans la prparation de poudre de lait infantile et dentrer dans la composition de certaines formulations pharmaceutiques (Ngawa et al., 1998).
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Gnralits sur les principaux micro-organismes potentiel probiotique

II.3. Les levures : Les levures sont des champignons chez les quels la forme unicellulaire est prdominante. Les cellules vgtatives peuvent tre sphriques, ovodes, allonges, cylindriques, ogivales ou en forme de citron. Le mode de reproduction est le bourgeonnement. Depuis de nombreuses annes, les levures sont galement utilises comme rgulateurs de la flore intestinale chez lhomme et les additifs alimentaires chez les animaux, ils induisent des effets positifs sur la sant, mais ne peuvent pas coloniser le tractus digestif. Les levures utilises comme probiotiques sont des souches de Saccharomyces cerivisiae et une souche bien dtermine est dnomme Saccharomyces boulardii (Rolfe, 2000 ; Toma et al., 2005). Chez lhomme les principaux effets du supplment en levure sont : La stimulation des disaccharides bordure en brosse, crant un milieu riche en protine et en vitamines, principalement en vitamines du groupe B (il sagit de lune des plus importantes sources naturelles de thiamine). (Kung, 2001 ; Auclair, 2001). Leffet anti-adhsion contre les pathognes (Auclair, 2001 ; Anonyme1, 2002) Stimulation de la rponse immunitaire (Coppla et Turnes, 2004).

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Chapitre III

Les probiotiques

III. Les probiotiques : III.1. Dfinition : Selon la dfinition adopte par le groupe de travail mixte form par la Food and Agriculture Organisation des Nations Unies et lorganisation mondiale de la sant (OMS) (Report of FAO/OMS, 2002), ont tabli rcemment des lignes directrices pour lutilisation du terme Probiotiques dans les aliments et formul la dfinition micro-organismes vivants qui, lorsquils sont administrs en quantits adquats, produisent un bnfice pour la sant de lhte . En effet, ils amliorent les proprits de sa flore intestinale ( Robin et Rouchy, 2001). Il sagit, le plus souvent de bactries ou de levures prsents soit dans des aliments, notamment les produits laitiers ferments, soit dans des mdicaments ou des complments alimentaires sous forme lyophilise (Marteau et Seksik, 2005). III.2. Historique : La notion de probiotique a t dveloppe grce aux travaux de Elie Metchnikoff (1907), qui avait pour thorie que les paysans bulgares, grands consommateurs de laits ferments, vivaient trs vieux et en bonne sant, ainsi, Metchnikoff avait propos lingestion de bactries vivantes, particulirement des bactries lactiques, pour rduire les dsordres intestinaux et amliorer lhygine digestive, et donc augmenter lesprance de vie (Gournier-chteau et al., 1994). Le terme probiotique drive des deux mots grecs pros et bios qui signifient littralement pour la vie contrairement au terme antibiotique signifiant contre la vie . Ce terme a t introduit pour la premire fois par Lilly et Stiwell (1965) pour dcrire des substances produites par un micro-organisme et stimulant la croissance dautres microorganismes. En 1974, Parker choisit dlargir la dfinition des organismes et substances qui contribuent lquilibre de la flore . Cependant, Fuller reprocha cette nouvelle dfinition dinclure potentiellement les antibiotiques et proposa alors des micro-organismes ajouts lalimentation et influenant de manire bnfique lanimal hte en amliorant lquilibre de sa flore intestinale (Fuller, 1991). Enfin, selon la dfinition adopte par le groupe du travail FAO/OMS, 2002 la dfinition est garde comme rfrence. III.3. Classification et caractristiques des probiotiques : Les probiotiques sont des micro-organismes ingrs vivants, les principaux microorganismes probiotiques connus ce jour sont des bactries ; lactobacilles, bifidobactries, propionibactries, Escherichia coli, entrocoque...etc. et des levures (Saccharomyces boulardii) (Ouwehand et al., 2002), la plupart des micro-organismes employs comme probiotiques sont cits dans le (tableau -3).

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Chapitre III

Les probiotiques

Tableau -3 : Classification des micro-organismes considrs comme probiotiques (Dacosta, 2001 ; Holzapfel et al., 2001 ; Marteau et Seksik, 2005).
Lactobacilles Bifidobactries Autres bactries lactiques Bactries non lactiques levures et moisissures

Lb.acidophilus B.adolescentis Enterococcus faecalis Bacillus cereus a, d a Lb.brevis B.animalis DN 173010 Enterococcus faecium SF 568 Bacillus subtilis d c Lb.amylovorus B.bifidum Lactococcus lactis E.coli Nissele 1917 c Lb.bulgaricus B.breve Leuconostoc mesenteroides Saccharomyces Lb.casei DN 114001 B.infantis Pediococcus acidilactici boulardii d b Lb.casei shirota B.lactis Bb 12 Propionibacterium freudenreichii Aspergillus niger Lb.crispatus B.langum Streptococcus thermophilus Aspergillus oryzae Lb.gallinarum a B.thermophilus Lb.gasseri Lb.johnsonii La1 Lb.lactis Lb.paracasei Lb.plantarum 299v Lb.reutri Lb.rhamnosus GG Lb.cellubiosus Lb.fermentum Lb.salivarius a : surtout utilis pour les animaux b : identique B.animalis c : trs peu dinformation sur leur proprits probiotiques d : prparations pharmaceutiques.

De faon plus spcifique, pour quun microorganisme soit considr comme tant potentiellement probiotique il doit prsenter les caractristiques suivantes : Etre un habitant naturel de lintestin (origine humaine), Etre capable de coloniser le milieu intestinal, persister et se multiplier, Adhrer aux cellules intestinales et exclue ou rduit ladhrence des pathognes, Avoir un mtabolisme actif et produire des substances inhibant les pathognes (acides, H2O2, bactriocines,), Non invasif, non carcinogne et non pathogne, Etre capable de co-agrger pour former une flore normale quilibre, Survivre aux diffrents procds technologiques de production, Garder sa viabilit dans laliment et durant le transit intestinal (Salminen et al., 1996 ; Tannock, 1999a,b ; Stanton et al., 2001), Absence de toxicit, Possibilit de production en grande chelle, Possibilit de cryoprotection, Rsistance la bile et au mucus intestinal (lacide) (Marteau et Seksik, 2005). Dans toutes les dfinitions prononces, la notion de viabilit apparat comme un critre de slection important, cependant mme les souches non viables de probiotiques sont capables dexercer certains effets positifs sur la sant entre autres la stimulation de certaines fonctions immunitaires, linhibition de ladhsion et linvasion de certains pathognes (Coconier et al., 1993 ; Ouwehand et al., 1999).

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Chapitre III

Les probiotiques

III.4. Innocuit des probiotiques : Linnocuit de la souche microbienne probiotique doit tre prouve avant toute utilisation dans laliment et demande quon assure au pralable, par des tudes bien conduites : Quils ne sont pas toxiques, mme des doses nettement plus leves que celles pratiques dordinaire, Que les produits de leur mtabolisme ne le sont pas non plus, Quils ne dgradent pas le mucus et lpithlium de lintestin, Quils ne sont pas susceptibles denvahir lorganisme et dy causer des infections, Que leurs enzymes nexercent pas deffet indsirable, par exemple une d conjugaison excessive des sels biliaires, Quils nont pas de rpercussions ngatives sur limmunomodulation, Quils ne contiennent pas des plasmides de rsistance des antibiotiques, car le transfert de ces plasmides des souches pathognes pourrait avoir des consquences graves (Dacosta, 2001), Dautres listes non exhaustives de critres dvaluation de toxicit potentielle prendre en compte pour la slection de souches probiotiques pourrait existe : La prise en compte des populations les plus risques en terme de pathognicit de bactries lactiques ou de levures. Des facteurs de risques ont t identifis, lis soit lhte soit au micro-organisme : limmunodficience (Wagner et Balish, 1998), la prsence de cathter, de pathologies valvulaires cardiaques existantes, la production par les souches de certaines protases et de glycosidases interfrant en particulier avec le mtabolisme de la fibrine (Salminen et al., 1998), La capacit par le micro-organisme de dgrader le mucus intestinal (Ruseler Van Embden et al., 1995), ou de dconjuguer fortement ou dshydroxyler les acides biliaires (Marteau et al., 1995), La rsistance aux antibiotiques associe ou non des plasmides. Il sagit certainement dun des points les plus srieux pour lavenir, car les rsistances aux antibiotiques posent de plus en plus de problmes de sant publique (Salminen et al., 1998). Il est souhaitable que chaque producteur de produits probiotiques connat prcisment lantibiogramme de ses souches afin de pouvoir intervenir rapidement en cas de problme infectieux. Tableau -4 : Scurit demploi par lhomme des principaux probiotiques (Salminen et al., 1998)
Micro-organisme Lactobacillus Lactococcus Leuconostoc Streptococcus Enterococcus Bifidobacterium Levures Saccharomyces Risque ventuel dinfection Essentiellement non pathognes, quelques trs rares cas dinfection opportunistes (sujets immunodprims) Essentiellement non pathognes Essentiellement non pathognes, quelques cas isols dinfection. Ceux ingrs par voie orale sont essentiellement non pathognes, quelques uns sont susceptibles de causer des infections opportunistes. Quelques souches sont des pathognes opportunistes dots dun pourvoir hmolytique et dune rsistance aux antibiotiques Essentiellement non pathognes, quelques cas isols dinfection. Essentiellement non pathognes, quelques cas isols dinfection.

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Chapitre III

Les probiotiques

III.5. Mthodes de slection des probiotiques : Les probiotiques prsentent des proprits qui sont variables selon lespce ou la souche microbienne. Le choix des probiotiques dpend de ces proprits et du type dutilisation. Selon le rapport de la FAO/WHO (2002), pour quun produit soit reconnu comme tant probiotique, une valuation du produit base sur plusieurs critres doit tre effectue suivant les recommandations suivantes : III.5.1. Dsignation du Genre/Espce/Souche : il est ncessaire de connatre le genre et lespce de la souche utilise, car les effets probiotiques sont spcifiques la souche microbienne. Le probiotique doit porter un nom reconnu scientifiquement et son identification doit tre effectue laide de mthodes rcentes et valides combinant les tests phnotypiques et gnotypiques. III.5.2. Dpistage des probiotiques potentiels par des tests in vitro : les tests in vitro sont raliss afin de dterminer les mcanismes par les quels les micro-organismes probiotiques exercent leurs effets bnfiques. Il est recommander dutiliser des tests spcifiques la cible et appropris pouvant corrler avec les rsultats des essais in vivo. Les principaux tests in vivo raliss pour tudier les probiotiques sont : Rsistance lacide gastrique, Rsistance aux acides biliaires, Adhrence au mucus et/ou cellules pithliales humaines, Activit antimicrobienne contres les bactries potentiellement pathognes, Capacit de rduire ladhsion des pathognes aux surfaces, Activit de lhydrolyse sur les sels biliaires (dissociation des sels biliaires), Rsistance aux spermicides (application vaginale des probiotiques). (Amrouche tahar, 2005), III.5.3. Innocuit de souches probiotiques : les probiotiques utiliss dans les produits alimentaires sont des micro-organismes appartenant la flore normale intestinale. Cependant, linnocuit de la souche microbienne doit tre prouve avant toute utilisation du probiotique dans laliment. Les bifidobactries ne prsentent aucun risque dinfection chez lhomme. III.5.4. Etudes in vivo sur des animaux et humains : afin de confirmer ou valider les rsultats des tests in vitro, il serait ncessaire de raliser des essais in vivo sur des animaux de laboratoire ou de prfrence sur des sujets humains dans des conditions exprimentales appropries. En gnral, une mthode standard dvaluation clinique des probiotiques comprend les phases suivantes : Phase 1 : consistant valuer linnocuit de la souche probiotique. Phase 2 : permet dtudier lefficacit dun probiotique par comparaison un placebo. Phase 3 : permet de comparer des probiotiques avec un traitement standard (condition spcifique). Phase 4 : consisterait surveiller lutilisation du probiotique (effets produits) III.5.5. Allgations sant et marque du produit : la mention dallgations gnrales est actuellement autorise sur les produits contenant des probiotiques dans certains pays comme les Etats-Unis, Angleterre. Il est cependant recommand de mentionner sur les produits des allgations spcifiques lorsque des donnes scientifiques sont disponibles. Par exemple, mentionner rduit lincidence et la svrit des diarrhes rotavirus chez les enfants au lieu de amliore la sant de lintestin .

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La marque (tiquette) doit porter : Genre/espce/souche, nombre minimal de cellules viables, allgations sant, conditions de stockageetc. En plus de linnocuit et des proprits fonctionnelles, des critres technologiques sont galement pris en considration dans la slection des souches probiotiques selon Saarela et al., 2000 ces critres sont : Bonnes proprits sensorielles, Rsistances aux phages, Viabilit durant le traitement technologique, Stabilit dans le produit et durant le stockage. Lensemble des proprits et critres de slection des probiotiques sont prsents dans la (figure -4).

Figure -4 : Proprits et critres de slection des probiotiques (Salminen et al., 1998)

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III.6. Survie des probiotiques dans le tube digestif : Lun des objectifs les plus importants de la pharmacologie des probiotiques est la description de leur pharmacocintique jusquaux cibles, cest--dire leur survie, leur capacit dadhsion, la colonisation et le devenir des principes actifs dans le TGI. Les probiotiques peuvent tre considrs comme un moyen de vhicule des principes actifs (enzymes, composants de paroi, peptides ou nuclotides immunomodulateurs, protines antibactriennes) jusqu leur cible daction dans le tractus digestif. La survie, de probiotiques ingrs diffre entre genres microbiens, espces et mme parfois souches. Certains micro-organismes sont dtruits ds leur passage dans lestomac alors que dautres tels que Bifidobacterium, L.plantarum ou L.acidophilus ont une haute capacit de survie, ils traversent lintestin grle et parfois mme le colon haute concentration et survie jusque dans les selles (Marteau et Seksik, 2005). Les bactries du yaourt Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus et Streptococcus thermophilus ont une rsistance lacide faible et sont rapidement dtruites en quelques minutes des pH 1. Pochart et al., ont observ que les concentrations des bactries du yaourt contenant 107 UFC/ml tait denviron 105 UFC/ml au moment du pic (Pochart et al., 1999). Certaines bifidobactries, ingres dans les produits laitiers ferments, ainsi que Lactobacillus plantarum NCIB 8826 ont aussi une survie trs importante jusque dans les selles avec des concentrations fcales observes suprieures 10 8 UFC/gr (Bouhnik et al., 1992 ; Kullen et al., 1997 ; Pochart et Marteau, 2000 ; Marteau et Shanahan, 2003). Tableau -5 : Exemples de pourcentages de rcupration de bactries lactiques et bifidobactries probiotiques vivantes dans les selles aprs leur ingestion.
Probiotique
Bifidobacterium sp. L.plantarum NCIB 8826 L.acidophilus L.rhamnosus souche GG " gastroprotg " lait ferment " capsules Lactococcus lactis MG 1363 L.fermentum souche KLD Lactococcus lactis TCI 65.5

% de survie*
30 7 25 15 1 1 2 1 0.5 0,1 2

Rfrence

Gastroenterology, 1992 ; 102 : 875-878 Alim Pharmacol ther, 2000 ; 4 : 823-828 J Dairy sci, 1978 ; 61 : 1-10 Dig Dis sci, 1992 ; 37 : 121- 128 Microb Ecol Health Dis, 1993 ; 6 :119-22 Microb Ecol Health Dis, 1993 ; 6 :119-22 Int J Food Microb, 1995 ; 25 : 199-203 Alim Pharmacol ther, 2000 ; 4 : 823-828 Alim Pharmacol ther, 2000 ; 4 : 823-828 Appl Environ microbiol, 1995 ; 61 : 2771-2774 L.reuteri Capsules 0,01 Microb Ecol Health Dis, 1995 ; 8 :41-51 * rsultat fourni dans la rfrence ou calcul partir dun poids de selles thorique de 150 g/j.

Parmi les facteurs influenant la survie des probiotiques, on trouve quelle dpend essentiellement de la dose du produit ingr mais aussi de la souche, des facteurs lis lhte et de laliment vecteur (Marteau et al., 2003). On cite par exemple lacide gastrique, lO2, le potentiel redox, les sels biliaires, les dfensives et linteraction avec la flore endogne (Blehaut et al., 1989 ; Marteau et Vesa, 1998 ; Godward et al., 2000). Pour augmenter leur taux de survie, les probiotiques doivent tre ingrs pendant le repas, ou bien protgs dans des capsules ou par micro-encapsulation (Kailaspathy, 2002).

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III.6.1. Adhsion : ladhsion la muqueuse intestinale est gnralement considre comme une proprit importante des micro-organismes probiotiques. Ce phnomne implique la participation de deux partenaires, la bactrie et la surface sur la quelle elle aura la capacit dadhrer dans les deux cas, ce sont essentiellement les structures externes des bactries dune part et des cellules dautres part, qui sont impliques dans ce phnomne (Bourlioux, 1994). Certaines souches de probiotiques ont une capacit dadhrence lpithlium et au mucus intestinale, ceci peut tre tudi in vitro avec des lignes cellulaires telles que les cellules CaCo-2 (Carcinome du colon) et des glycoprotines de lilostomie humaine, respectivement. Les rsultats de la (figure -5) montrent que deux souches Lactobacillus johnsonni La-1 et Lb.GG adhrent aux lignes cellulaires CaCo-2 et au mucus intestinal. La souche la plus adhrente au CaCo-2 est Lactobacillus casei et la souche la plus adhrente au mucus intestinal est Lactobacillus GG. Alors que Lactobacillus casei, Lactobacillus casei shirota et Lactobacillus rhamnosus adhrent moins aux deux modles par rapport aux autres probiotiques tests ainsi leur adhsion au mucus intestinal est presque nulle (Tuomola et al., 2001).

Figure -5 : Adhsion de quelques souches de probiotiques aux lignes cellulaires et au mucus intestinal (Tuomola et al., 2001). III.6.2. Colonisation : les probiotiques ingrs ne peuvent pas persister durablement dans le tube digestif. Ils le transitent sans le coloniser (Moreau, 2001) et persistent pendant la priode de consommation. Ils sont ensuite limins en quelques jours aprs leur ingestion (Bocl et Thomann, 2005). Dautres spcialistes rtorquent que ladhsion nest pas une condition ncessaire, car il suffit que les probiotiques survivent au cours de leur transit dans lintestin, au cours du quel ils scrtent des mtabolites, et leur augmentation souligne que : des probiotiques qui nadhrent pas peuvent sopposer au dveloppement et la fixation de pathognes, les ferments du yaourt, bien quils meurent dans le duodnum, y jouent un rle utile en librant leur catalases,

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en toute rigueur, ne peuvent le cas chant adhrer (car les places sont dj prises) que des bactries appartenant aux mmes souches que celles qui colonisent lintestin de chaque individu, les autres ne se fixent pas, ladhsion nest en tout tat de cause que temporaire, comme le montre le fait que les probiotiques napparaissent plus dans les selles un certains temps aprs la fin de lingestion. III.7. Effets des probiotiques : Les probiotiques peuvent exercer des effets directs dans la lumire de lintestin sur le chyme, ou au niveau parital sur les entrocytes ou les cellules immunocomptentes du GALT (GutAssociated Lymphoid Tissue, tissu immunitaire associ lintestin). Ils peuvent aussi avoir des effets indirects lis aux modifications de lcosystme ou du systme immunitaire local (Salminen et al., 1998 ; Marteau et Rambaud, 1993). Plusieurs effets bnfiques sur la sant ont t associs la consommation des probiotiques. La (figure -6) illustre la diversit des effets bnfiques sur la sant documents et rapports dans la littrature.

Figure 6- : Prsentation des effets bnfiques sur le sant humaine de la consommation des probiotiques (Saarela et al., 2002)

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III.7.1. Amlioration de la digestion du lactose : Le premier effet dmontr avec un haut niveau de preuve a t lamlioration de lintolrance au lactose et de la malabsorption de ce sucre par des bactries lactiques et tout particulirement celles du yaourt (Marteau et al., 1990 ; De verse et al., 2001). Le lactose est un disaccharide, sa digestion ncessite une lactase qui coupe sa liaison et autorise alors labsorption des sucres simples librs. Lintolrance au lactose due labsence dassimilation du lactose, principal glucide du lait, celle -ci est la consquence dun dfaut de synthse de la lactase ou -galactosidase (Bocl et Thomann, 2005). Cette anomalie provoque de nombreux troubles gastro-intestinaux chez les sujets sensibles suite au lactose qui nest pas digr dans lintestin grle et passe dans le colon, o il est mtabolis par la flore microbienne avec production dacides gras chanes courte et de gaz tels que lhydrogne, le mthane et le dioxyde de carbone (Dacosta, 2001). Ces produits provoquent des douleurs abdominales, ballonnements et diarrhes osmotiques (Adolfsson et al., 2004). Plusieurs travaux explicatifs ont montr que la lactase de bactries lactiques participe la digestion du lactose du yaourt (90%) chez les sujets dficients en lactase. En pratique, le remplacement du lait par du yaourt conduit une meilleure absorption et une meilleure tolrance chez les sujets prsentant une intolrance primaire (Boudraa et al., 1990). De plus, les bactries dont la membrane est facilement lyse par les acides biliaires librent leur lactase dans lintestin ce qui expliquerait son activit accrue (Marteau et al., 1990). III.7.2. Effets sur la flore endogne : Les effets de probiotiques sur la composition de la flore endogne sont paradoxalement assez mal connus si lon excepte la survie du probiotique lui-mme. Des effets sur la composition et la physiologie de la microflore rsidente ont t dcrits de manire indirecte par une modification reproductible dactivits enzymatiques bactriennes fcales, telles que la glucuronidase, lazorductase ou la nitrorductase (Marteau et al., 1993) ou la diminution de la production dacides biliaires secondaires (Salvioli et al., 1982). III.7.3. Inhibition de la flore pathogne : Linhibition des bactries indsirables ou pat hognes par les probiotiques peut se faire de diffrentes faons. La production dacides organiques (acide lactique ou actique) partir de glucides lors de leur fermentation, en abaissant le pH, le dveloppement des E.coli, des salmonella et des coliformes dans le tube digestif est inhib (Perceval, 1997). En milieu humide, les lactobactries produisent du peroxyde dhydrogne inhibiteur de nombreuses souches bactriennes pathognes, mais respectant lcosystme des bactries elles-mmes. De plus, lacidification favoriserait la rgulation du transit intestinal (Glot, 1996). En plus de lacide lactique, les probiotiques ont la capacit de scrter de nombreux mtabolites ou de librer des substances antimicrobiennes de type bactriocine (Heller, 2001). De mme certaines souches utilises comme probiotiques possdent la capacit de dconjuguer les sels biliaires. Par ailleurs, les probiotiques pourraient agir en inhibant limplantation des germes pathognes par comptition pour la colonisation (Fuller et al., 2000).Certains lactobacilles adhrent aux villosits intestinales et inhibent la fixation dE.coli entropathognes. Les bifidobactries produisent des AGCC tels que les acides propionique, butyrique et actique. Ces bactries exercent un effet inhibiteur sur la croissance des bactries pathognes (Perceval, 1997).

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III.7.4. Inactivation des composs toxiques : Les probiotiques interviennent trs certainement dans la neutralisation de produits toxiques. Ils provoqueraient une attnuation du catabolisme intradigestif et une orientation de la microflore intestinale pour rduire labsorption des substances toxiques (ammoniac, amines et indoles) et diminuer les biotransformations des sels biliaires et des acides gras en produits toxiques (Vanballe et al., 1994). Les bactries probiotiques auraient aussi la capacit de produire des mtabolites susceptibles de neutraliser in situ certaines toxines bactriennes. Lorsque la microflore intestinale nest pas quilibre, il peut avoir accumulation de phnol et dindole rsultant des processus de putrfaction. Le rquilibrage de la microflore par des bactries lactiques permet de rduire la teneur en phnol et en indole (Bottazzi et Mercenier, 1994). III.7.5. Effet sur le systme immunitaire : Lintestin est un organe immunitaire trs particulier. Sa muqueuse reprsente la plus grande surface (60 70% de cellules immunes) de contact entre le monde extrieur et le systme immunitaire de lhomme (Coulon et al., 2003). De point de vue anatomique, le systme lymphode d e lintestin comprend les plaques de Peyer ou des follicules isols, le Lamina propria enrichi en cellules plasmatiques (cellules dendritiques), les ganglions lymphatiques msentriques et les plaques cryptiques. Ces compartiments constituent les sites dinduction et les effecteurs de limmunit intestinale. La (figure -7) montre une description schmatique gnrale du systme immunitaire de lintestin. Lantigne au niveau intestinal peut traverser : soit travers les cellules pithliales intestinales et les cellules M (jonctions), soit par interaction des cellules dendritiques de Lamina propria avec des cellules pithliales (Spahn et Kucharzik, 2004). Selon Bourlioux (1994), les probiotiques sont capables dinduire une stimulation du systme immunitaire. Plusieurs travaux ont montr que lingestion de fortes quantits de bactries du yaourt augmentent la capacit des lymphocytes du sang scrter diverses cytokines, notamment linterfron gamma () aprs stimulation. Plusieurs essais randomiss contrls ont montr que la souche L.rahmnosus GG chez les enfants entrane une augmentation de limmunit spcifique reflte par une augmentation des cellules circulantes capables de scrter des immunoglobulines (Marteau et Ramb, 1998). De Simon et al., ont montr que lingestion dun mlange de Bifidobacterium bifidum et Lactobacillus acidophilus entrane une augmentation de pourcentage de lymphocyte dans le sang (Droualt et Corthier, 2001). Par ailleurs, une tude mene chez des enfants sains a rvle que ladministration dun produit ferment par des Bifidobactries et Lactobacillus acidophilus entrane une augmentation significative de la concentration des anticorps pendant la consommation du produit (Bocl et Thomann, 2005).

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Figure -7 : Description schmatique gnrale du systme immunitaire associ la muqueuse intestinale. A, B et C : voies dentre de lantigne: (A), les cellules pithliales intestinales ; (B) interaction des cellules dendritiques et cellules pithliales; (C) cellules M. Flches : sens de drainage lymphatique des plaques de Peyer et de Lamina propria des villosits (vers les nodules lymphatiques msentriques) (Spahn et Kucharzik, 2004). III.7.6. Prvention et traitement des diarrhes : Des tudes cliniques ont dmontr que des infections gastro-intestinales causes par Helicobacter pylori, la diarrhe du voyageur, diarrhe aux rotavirus, diarrhe associe aux antibiotiques comme celle cause par Clostridium difficile, peuvent tre contrecarres avec succs par lutilisation de probiotiques (Mercenier et al., 2002 ; Turchet et al., 2003 ; Wang et al., 2004 ; Plummer et al., 2004). III.7.6.1. Diarrhe rotavirus : La diarrhe rotavirus est une infection qui affecte les nourrissons et les enfants en bas ge. Elle est cause par la multiplication des rotavirus au niveau de lintestin grle, ce qui provoque la destruction des cellules villositaires (Bezkorovainy, 2001) ; la dure et la svrit de cette diarrhe peuvent tre rduites par plusieurs souches de probiotiques telles que L.casei, L.rhamnosus, L.casei paracasei, L.reuteri, Bifidobacterium bifidum et Streptococcus thermophilus. (Bourlioux et al., 2003). Lactobacillus rhamnosus GG prsente une meilleure efficacit dans la diminution de la dure de diarrhe rotavirus (Marteau et al., 2004). Cette dernire rsulte de la stimulation des anticorps IgA antivirus (Roos et Katan, 2000 ; Droualt et Corthier, 2001) Un essai randomis contrl a montr que ladministration des nourrissons hospitaliss de Bifidobacterium sp. et S.thermophilus diminuait significativement le risque de diarrhe et de portage de rotavirus.

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III.7.6.2. Diarrhe du voyageur (Tourista) : La diarrhe du voyageur est une situation clinique trs frquente, affectant jusqu 50% des touristes dans certaines rgions du monde : son mcanisme est le plus souvent infectieux (Marteau et Seksik, 2005). La prvention de cette diarrhe par les probiotiques a t dmontre par des tudes randomises, o lefficacit thrapeutique de certaines souches de probiotiques a t compare celle dun placebo vis--vis de la diarrhe des voyageurs (tableau -6). Les rsultats montrent que lassociation de deux souches de Lactobacillus acidophilus et de Lactobacillus bulgaricus sont plus efficaces que le placebo dans le traitement de la diarrhe des voyageurs. Cependant, leffet thrapeutique des Lactobacillus fermentum souche KLD est quivalent celui du placebo, par contre les autres probiotiques tests prsentent des effets infrieurs ceux du placebo (Marteau et al., 2001). Tableau -6 : Essais contrls randomiss des probiotiques pour la prvention de diarrhe des voyageurs (Marteau et al., 2001)
Probiotiques Lb.acidophilus + Lb.bulgaricus Lactobacillus Lb.fermentum souche KLD Lb.acidophilus souche NS Lactobacillus + Bifidobacterium + Streptococcus Saccharomyces boulardii Lb.rahmnosus souche GG Effets thrapeutiques * 35 % compar avec 29 % 55 % compar avec 51 % 23.8 % compar avec 23.8 % 25.7 % compar avec 23.8 % 43 % compar avec 71 % (p = 0,02) 28.7 % compar avec 39.4 % (p < 0,05) 41 % compar avec 48.5 % (p = 0,05)

* : pourcentage des sujets souffrant de la diarrhe des voyageurs dans les groupes probiotiques et placebo respectivement.

III.7.6.3. Diarrhe associe aux antibiotiques : Les diarrhes associes la prise dantibiotiques constituent un problme frquent qui touche environ 20% des patients hospitaliss et qui sont causes par un bacille non invasif : Clostridium difficile. En effet, ces bactries opportunistes prolifrent dans lintestin lorsque ladministration dantibiotiques abaisse la rsistance la colonisation, et elles produisent deux toxines (toxine A et B) qui dclenchent la diarrhe et la colite (Dacosta, 2001). Plusieurs essais randomiss contrls ont montr lefficacit des souches de probiotiques pour prvenir les perturbations digestives lies lantibiothrapie. Le (tableau -7) rapport par Marteau et al., (2001) montre les rsultats de plusieurs tudes exprimentales.

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Tableau -7 : Effet thrapeutique de probiotiques dans la gurison des diarrhes associes aux antibiotiques (Marteau et al., 2001).
Antibiotiques
Ampicilline. Nomycine. Amoxilline olaverlanate. Antituberculeux. Miscellaneux. Erythromicine. Erythromicine. Miscellaneux. Clindamycine. -lactamine ou ttrecycline. Miscellaneux -lactamine. Saccharomyces boulardii Saccharomyces boulardii Oui Oui 9,5% compar avec 21,8% 7,2%% compar avec 14,6%

Probiotiques
L. acidophilus + L. bulgaricus. L. acidophilus + L. bulgaricus. L. acidophilus + L. bulgaricus Enterococcus faecium SF 68 Enterococcus faecium SF 68 Bifidobacterium longum L. rhamnosus GG L. rhamnosus GG B. longum + Lactobacillus Saccharomyces boulardii

Double tude
Oui Non Non Non Oui Oui Non Non Oui Oui

Effet thrapeutique1
8,3% compar avec21%. 20% compar avec42% Positive2. 5% compar avec18% 8,7% compar avec 27,2% Positive2. Positive2. 17% compar avec 48% Positive2. 4,5% compar avec17,5%

1 : pourcentage des patients guris avec les probiotiques et le placebo, respectivement 2 : leffet positif des probiotiques existe mais le pourcentage nest pas dtermin.

III.7.7. Traitement de linfection due Helicobacter pylori : Helicobacter pylori est une bactrie pathogne qui colonise lestomac de lhomme et adhre lpithlium gastrique. Linfection par cette bactrie joue un rle pour favoriser les risques dulcre du duodnum et de lestomac et de certains cancers et lymphomes gastriques (Dial et Lichtenberges, 2002). Un essai a montr une diminution de lactivit urasique d H.pylori chez des sujets recevant une surnageant de culture de Lb.johnsonni souche LA1 (Michetti et al., 1999). Dans un essai men en double aveugle, Felly et al., ont montr que ladministration orale du probiotique LA1 des sujets porteurs dune gastrite due H.pylori entranait une diminution significative de linflammation gastrique et de lintensit de linfection gastrique par le pathogne (Felly et al., 2001) . Wang et al., (2004) ont rapport que la consommation rgulire de yogourt additionn de Lb.acidophilus La5 ou de Bifidobacterium lactis Bb12 induit une suppression effective de linfection due Helicobacter pylori. La croissance dH.pylori est inhibe par la production de quantits importantes dacide lactique (Zubillaga et al., 2001) et par la production de bactriocines notamment la lacticine produite par Lactococcus lactis et qui exerce une activit antimicrobienne contre plusieurs souches dHelicobacter pylori. III.7.8. Effets sur la constipation : Les lactobacilles peuvent avoir des effets sur la constipation, leur administration mme faible dose amliore le transit intestinal et permet de rduire lutilisation de laxatifs. Les laxatifs ont linconvnient majeur dliminer, en plus du bol fcal, diffrentes substances essentielles lorganisme comme les acides amines, les minraux Des effets bnfiques sur la constipation ont t obtenus en utilisant des souches de Bifidobacterium. Des rsultats sont obtenus aussi, avec ladministration dune prparation contenant Lactobacillus casei (3.1010) 50 patients pendant 30 jours et observrent dans 67 % des cas une amlioration par rapport un placebo (Ogawa et al., 1974).
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III.7.9. Traitement des maladies inflammatoires de lintestin : Les processus inflammatoires impliqus dans les pathologies de lintestin de lhomme comme la maladie de Crohn, la colite ulcreuse et la pouchite sont contrls par les probiotiques. Une tude de Guandalini (2002) a montre que lingestion de Lactobacillus GG entrane une amlioration notable de ltat clinique chez des enfants souffrant de la maladie de Crohn. De mme Gosselink et al.,(2004) ont observ des effets cliniques bnfiques chez des patients affects par une colite ulcreuse aprs ingestion de produits ferments contenant Lactobacillus GG (1-2 1010 bactries/j). La maladie de Crohn peut toucher nimporte quelle partie du tube digestif, de la bouche lanus, mais elle intervient le plus souvent dans la rgion iloccale et dans le colon, et se traduit pas des douleurs abdominales, de diarrhes, (Dacosta, 2001). Une tude a t ralise chez des sujets atteints de maladie de Crohn, Campieri et al., (2000) ont administr pendant 12 mois, 40 malades venant dtre oprs de maladie de Crohn, un traitement par le probiotique VSL#3 (ce probiotique est un mlange de quatre souches de lactobacilles, casei, plantarum, acidophilus, bulgaricus ; trois souches de bifidobactries : longum, breve, infantis et dun Streptococcus salivarius subsp thermophilus ) pendant 9 mois, avec 20% de rechute. Dautres tudes ont aussi suggres lefficacit de Saccharomyces boulardii sur la diarrhe au cours de cette maladie (Plein et Hotz, 1993 ; Guslandi, 2004). La pouchite, une inflammation rcidivante de la poche ilale, est une consquence frquente du traitement chirurgical (coloproctectomie) de la colite ulcreuse. Les rsultats de plusieurs essais cliniques avec placebo mens sur des sujets souffrants de pouchite rcidivante indiquent quune prparation spcifique de VSL#3 permet de prvenir les rechutes (Gionchetti et al., 2003). Des tudes avec Escherichia coli Nissle 1917, ont montr lefficacit de traitement et des rechutes importantes sont observes dans le traitement de la maladie de Crohn colique et la rectocolite hmorragique (RCH) (Marteau et Seksik, 2005). Le (tableau -8) montre lefficacit et les rsultats de quelques essais contrls obtenus pour le traitement des maladies inflammatoires de lintestin. Tableau -8 : Rsultats des essais contrls testant lefficacit de probiotiques des maladies inflammatoires chroniques de lintestin (Marteau et Seksik, 2005).
SITUATION RCH RCH RCH RCH Pouchite rfractaire Pouchite rfractaire AIA, prvention de pouchite MC, prvention postopratoire MC E. coli Nissle1917 Placebo 30 vs 70% VSL#3 5-ASA 20 vs 40% PROBIOTIQUE E. coli Nissle1917 E. coli Nissle1917 E. coli Nissle1917 S. boulardii+5-ASA VSL#3 VSL#3 VSL#3 CONTROLE 5-ASA 1,2 g/j 5-ASA 1,2 g/j 5-ASA 1,5 g/j 5-ASA seul Placebo Placebo Placebo RECHUTE PRO VS CONTROLE 16 vs 11, 3% 67 vs 73% 36 ,4 vs 33% 30 vs 35% 15 vs 100% 15 vs 94% 10 vs 40% P NS NS NS NS

* * * * *

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MC MC, prvention postopratoire

S. boulardii+5-ASA L. rhamnosus GG

5-ASA seul Placebo

6,3 vs 37,5% 60 vs 35 %

*
NS chec

RCH : rectocolite hmorragique ; MC : maladie de Crohn ; AIA : anastomose ilo-anale, 5-ASA : acide 5-aminosalicylique ; * : p < 0,05. NS : non significative.

III.7.10. Soulager les symptmes du syndrome de lintestin irritable : Le syndrome de lintestin irritable affecte plus de 15% de la population adulte et plus frquemment la femme, il se traduit par un excs de motilit du gros intestin, provoquant des douleurs abdominales (Dacosta, 2001). Deux essais cliniques avec placebo mens auprs de 100 sujets atteins du syndrome de lintestin irritable. Les rsultats indiquent quune prpar ation base de Lactobacillus plantarum 299v ou DSN 9943 administre durant quatre semaines pour soulager la douleur abdominale et diminuer les flatulences associes cette affection (Nobaek et al., 2000 ; Niedzielin et al., 2001). Au cours dune tude rcente, la souche Bifidobacterium infantis a amliore les symptmes de lintestin irritable tandis que Lb.salivarius na pas fait mieux que le placebo. (OMahony et al., 2005). III.7.11. Prvention du cancer du colon : La flore intestinale et le systme immunitaire jouent un rle dans la cancrogense colique. Plusieurs tudes ont montr que certains probiotiques pouvaient diminuer lactivit denzymes, de mutagnes ou des acides biliaires secondaires dans les selles, qui pourraient tre impliqus dans la carcinogense colique (Marteau et al., 1993). De nombreux arguments suggrent que certaines souches de probiotiques peuvent intervenir dans la diminution du risque du cancer du colon, caus par des enzymes bactriennes de la flore colique. Selon certaines tudes, les bactries probiotiques ont la proprit dinhiber les processus conduisant la formation du cancer du colon chez lhomme. En effet, Matsumoto et Benno (2004) ont mentionn que la consommation du yogourt contenant Bifidobacterium lactis LKM 512 rduit significativement la mutagncit dans lintestin de volontaires par comparaison un placebo. Certaines tudes montrent chez lhomme, que les bactries lactiques sont capables de diminuer lactivit des enzymes de la flore (-glucuronidase, -glucosidase, azorductase ou de nitrorductase) qui sont responsables de la transformation des substances procarcinognes (Salminen et al., 1996 ; Drouault et Corthier, 2001, Corthier, 2004). Boutron et al., ont observ une moindre risque dadnomes coliques de grande taille (prcurseurs des cancers du colon) chez les sujets consommant du yaourt plus de 3 fois par semaine (Boutron et al., 1996). Deux essais randomiss contrls ont montr que ladministration orale de Lactobacillus casei souche biolactis diminuait de manire significative le risque de rcidive de tumeur superficielle de vessie chez lhomme (Aso et al., 1995 ; Aso et Akazan, 1992). En outre, la consommation dun lait ferment aux Bifidobactries pendant 12 jours, diminue lactivit de la -glucoronidase (Roos et Katan, 2000 ; Dacosta, 2001). III.7.12. Rgulation de la permabilit intestinale : Laltration de la permabilit intestinale (fonction barrire) cause par une infection, toxines ou autre facteur favorise un transfert aberrant dantignes (y compris la microflore locale) travers lintestin en augmentant des rponses immunitaires inappropries (ractions inflammatoires ou auto-immunes) (Baumgart et Dignass, 2002 ; Gill, 2003).

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Chapitre III

Les probiotiques

Des tudes rcentes ont montr que la consommation de probiotiques stabilise la fonction barrire de lpithlium intestinal. Par exemple, Isolauri et al., (1990) ont dmontr que Lactobacillus GG normalise le processus de permabilit intestinale chez le rat. En outre, une tude rcente de Rosenfeldt et al. (2004) a dmontr quune administration de probiotiques (Lactobacillus rhamnosus et Lactobacillus reuteri) permet de stabiliser la fonction barrire de lintestin et de diminuer les symptmes gastro-intestinaux chez des enfants souffrant dune dermatite atopique. Cependant, les mcanismes impliqus dans cette normalisation ne sont pas encore bien connus. III.7.13. Translocation bactrienne : Elle est en dehors de ses aspects proprement immunologiques et bactriologiques une expression au moins partielle de la fonction barrire de la muqueuse intestinale. Dans une tude, ladministration orale dune soupe contenant Lactobacillus reuteri R2LC diminuait significativement la translocation bactrienne chez des personnes en situation dinsuffisance hpatique aigu induite par rsection hpatique subtotale (Wang et al., 1995). Ladministration rectale de L.reuteri R2LC, L.plantarum DSM 9843 et dautres lactobacilles sest avre capable de diminuer la translocation bactrienne et de moduler linsuffisance hpatique chez des rats chez les quels une insuffisance hpatique exprimentale tait induite par galactosamine (Adawi et al., 1997). III.7.14. Rgulation de la motilit intestinale : La motilit intestinale joue un rle important dans la rduction de la croissance des microorganismes pathognes dans lintestin. Les probiotiques pourrait avoir des effets positifs sur la motilit de lintestin en rduisant le temps de transit des micro-organismes pathognes (Tabiguchi et al., 1998). Une tude de Grimaud et al. (1993) a montr que lingestion de lait ferment avec Bifidobacterium animalis entrane une rduction significative du temps de transit du contenu gastro-intestinal chez des volontaires. Tandis que Verdu et al. (2004) ont rapport que leffet de Lactobacillus paracasei sur la motilit de lintestin se traduit par une attnuation de lhyper-contractilit post-infection du muscle. III.7.15. Effet sur lapoptose : L.rhamnosus GG a un effet anti-apoptotique aussi bien dans une ligne de cellules coliques de souris que dans la ligne colique humaine HT-29 : il active la protine Kinase antiapoptotique Akt et inhibe lactivation de MAP-kinase pro-apoptotique p38 par diverses cytokines pro-inflammatoires (TNF, IL-1, IFN-) (Yan et Polk, 2002). Saccharomyces boulardii retarde, dans la ligne colique humaine T84, lapoptose induite par E.coli entropathogne (Czerucka et al, 2000). Ces donnes sont potentiellement intressantes, notamment pour ce qui est du traitement des maladies inflammatoires chroniques de lintestin au cours des quelles la dficience de la barrire muqueuse implique au premier chef une production accrue de cytokines pro-inflammatoires et une augmentation marque de lapoptose des cellules intestinales. III.7.16. Diminution du taux de cholestrol : Lapparition de maladies cardio-vasculaires a suscit lintrt de plusieurs chercheurs ces dernires annes. Certaines bactries lactiques inhibent la conversion de lactate en cholestrol. Streptococcus thermophilus serait responsable de cette action (Novel, 1993). Des tudes prliminaires ont rvl que la consommation de yogourt ou de lait ferment contenant des probiotiques entrane une diminution du taux de cholestrol dans le sang, et par consquent la rduction des risques dhypercholestrolmie responsable des maladies coronariennes. Par exemple, Bukouska et al. (1998) ont mis en vidence une diminution du

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Les probiotiques

taux de cholestrol sanguin chez des sujets soumis un rgime supplment avec Lactobacillus plantarum 299v. Certaines bactries lactiques du genre Lactobacillus et Bifidobacterium possdent une activit hydrolase intracellulaire, cette enzyme dont le poids molculaire est de 128Kd chez L.acidophilus, catalyse in vitro lhydrolyse des acides biliaires conjugus pour donner des acides biliaires libres qui fixent moins le cholestrol et les acides amins. Cette dconjugaison prsente un intrt important dans la rduction du cholestrol srique (Stonge et al., 2000). III.7.17. Intervention contre la cirrhose hpatique : Les probiotiques peuvent de mme intervenir en cas de cirrhose en modifiant la circulation sanguine au niveau du systme portehpatique. Des observations ont t faites sur un patient g de 78 ans est atteint dune hpatite C, les complications ont volu vers une cirrhose et des varice-oesophagiennes. Le patient est trait avec de forte concentration de probiotiques (6g/j de bactries 1011 UFC/g) pendant un mois, (on y retrouve de Streptococcus thermophilus, Bifidobactrium, Lb.acidophilus, Lb.plantarum, Lb.casei, Lb.bulgaricus et Streptococcus faecium) et une rduction remarquable est obtenue (Marteau et Ramb, 1998). Les auteurs estiment que les infections bactriennes peuvent avoir une place dans la pathogense des consquences hmodynamiques que lon retrouve chez des patients atteints dune cirrhose. On recommande tout de mme une probiothrapi e orale avec une forte concentration de probiotiques de faon mieux contrler la pression portale (Glot, 1996). III.7.18. Allergies : Lide de lutilisation de probiotiques dans le traitement des dsordres allergiques est base sur le fait que cette pathologie pourrait tre associe une dysrgulation des rponses lymphocytaires Th1/Th2 vis--vis des antignes exognes. Les tudes rapportes ont dmontr leffet anti-prolifration des souches probiotiques sur les cellules immunitaires impliques dans les ractions allergiques (dermatite et allergies alimentaires), lexpression des rcepteurs et la production de cytokines. En effet, une tude clinique de Mastrandrea et al. (2004) effectue sur des sujets humains (6 48 ans) prsentant des symptmes cliniques dasthme et/ou conjonctivite, rhinite, urticaire, dermatite atopique, allergie alimentaire et le syndrome de lintestin irrit a montr les effets positifs des probiotiques dans le traitement des maladies allergiques. Selon cette tude, une administration quotidienne dun mlange de Lb.acidophilus, Lb.bulgaricus et Streptococcus thermophilus permet de rduire significativement le taux de prcurseurs circulants de lymphocytes CD+34 impliqus dans linflammation allergique systmique. Lquipe dErica Isolauri en Finlande a t pionnire pour tenter de prvenir lapparition de manifestation datopie par des probiotiques chez des nourrissons. Dans un essais randomis double aveugle le L.rhamnosus GG a t administr aux mres denfants risque puis chez les nourrissons pendant 6 mois, sur les 132 enfants suivis pendant 2 puis 4 ans, il a t observ une diminution de moiti du risque deczma atopique soit 23% vs 46% 2 ans (p = 0,008) (Kalliomaki et al., 2001) et 26 % vs 46 % 4 ans. Je guise la synthse pour cette partie, le (tableau -9) rcapitule les souches probiotiques et leurs effets thrapeutiques.

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Tableau -9 : Les effets cliniques de quelques probiotiques (Gibson et Collins ,1999)


Effets cliniques Amlioration de la digestion du lactose Inhibition des bactries pathognes C.difficile. Rgulation des processus immunitaires Probiotiques L. bulgaricus, S. thermophilus, L. rhamnosus, L. johnsonii L. rhamnosus, S. boulardii Lactobacillus acidophilus, L. casei, L. rhamnosus, L. plantarum, L. delbrueckii, L johnsonii, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis L. rhamnosus, B. bifidum, S thermophilus B. bifidum, L. bulgaricus, S. thermophilus, L. acidophilus, E. faecium, L. rhamnosus GG, L. reuteri ,Lactobacillus casei L. rhamnosus, L. acidophilus. L. bulgaricus, B. bifidum, Streptococcus thermophilus, L. johnsonii, S. boulardii L. rhamnosus, L. acidophilus. L. bulgaricus, Saccharomyces boulardii, B. longum, Enterococcus faecium Lactobacillus acidophilus Lactobacillus bulgaricus Lactobacillus plantarum Streptococcus thermophilus Enterococcus faecium Lactobacillus johnsonii Lactobacillus paracasei L. acidophilus, L. casei, L. plantarum, L. delbrueckii, L. gasseri, B. longum, B. bifidum, B. adolescentis, B. infantis Escherichia coli, Nissle strain (1917) Bifidobacterium Saccharomyces boulardii, VLS# 3. Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus bulgaricus Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus johnsonii, Bifidobacterium longum S. thermophilus. Lactobacillus rhamnosus GG, Saccharomyces boulardii Escherichia coli, Nissle strain (1917)

Traitement de diarrhe rotavirus Traitement diarrhes aigu

Rduction de la diarrhe du voyageur (Tourista) Traitement de diarrhe associe aux antibiotiques Diminution du taux de cholestrol

Traitement de linfection due Helicobacter Prvention du cancer du clon Traitement de colite ulcreuse Soulager les symptmes du syndrome de lintestin irritable

Traitement de la maladie de Crohn

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III.8. Mode daction des probiotiques : Mme sils ont en commun dtre des micro-organismes, les probiotiques diffrent considrablement les uns des autres. La diversit des situations cliniques dans lesquelles une efficacit a t montre est elle aussi grande (des effets sur la scrtion intestinale, la motricit, linflammation, la cancrogense). Tout ceci suggre quun mcanisme daction unique est improbable et quau contraire ce sont de multiples mcanismes qui sont impliqus (Marteau et Seksik, 2005). Les probiotiques peuvent exercer des effets directs sur le chyme, la flore, ou la muqueuse intestinale, ou des effets indirects lis aux modifications de lcosystme ou du systme immunitaire local. III.8.1. Effets directs : Les effets directs des probiotiques dans la lumire intestinale ou la paroi sont les plus faciles tudier et prdire. Les exemples de la lactase des bactries du yaourt, de la saccharase de S.cerevisiae ou du mtabolisme de loxalate par Oxalobacter formigenes. Les auteurs ont montr que ladministration orale de Lactococcus lactis gntiquement modifi pour scrter de lIL-10, amliorait des colites exprimentales induites chez lanimal par le dextran-sulfate ou linvalidation du gne de lIl-10 (Steidler el al., 2000, 2003). Plusieurs probiotiques particulirement S.boulardii ont des effets directs sur la muqueuse intestinale, sa trophicit et son capital enzymatique (Czeruka et Rampal, 2000). Lun des principes actifs semble tre les polyamines vhicules par cette levure (De Keyser et De Raedemaeker, 1994). III.8.2. Effets sur la flore endogne et indirects par son intermdiaire : Les effets de probiotiques sur la composition de la flore endogne sont paradoxalement assez mal connus si lon excepte la survie du probiotique lui-mme. Il a t montr que lingestion de certaines souches de lactobacilles ou de bifidobactries pourraient modifier de manire reproductible certaines activits enzymatiques bactriennes fcales, telles que la glucoronidase, lazorductase ou la nitrorductase (Marteau et al., 1993 ; Rafter, 2003). Les tentatives de modulation de la production dacides gras courte chane ou du pH intra colique par des probiotiques, sont en revanche jusquici restes infructueuses. III.8.3. Effets sur la barrire muqueuse et immunologique et effets indirects par cet intermdiaire : De nombreuses tudes ralises chez lanimal, ont montr que ladministration orale de divers probiotiques pourrait moduler la barrire immunitaire muqueuse et/ou systmique. Les travaux pionniers ont montr que lingestion de trs fortes quantits de bactries du yaourt augmentait la capacit des lymphocytes du sang circulant scrter diverses cytokines notamment linterfron-. Ladministration orale de L.johnsonni souche La-1 a augment la rponse anticorps lors dune vaccination orale par Salmonella typhi Ty 2a chez lhomme (Link-Amster et al. 1994) Ce mme probiotique tait galement responsable dune stimulation du pouvoir phagocytaire des granulocytes sanguins et dans deux travaux indpendants dune augmentation discrte des IgA plasmatiques. (Schiffrin et al., 1995). Les principes actifs des probiotiques identifis jusquici incluent des peptides formyls, des lipo-polysaccharides, des peptidoglycanes composants de la paroi cellulaire et des nuclotides. De manire gnrale, lhte distingue les signaux mis par les micro-organismes grce des rcepteurs dits toll-like rcepteurs (TLR) prsents sur les cellules immunitaires et les cellules pithliales intestinales (Beutler et al., 2003). Les cellules immunitaires utilisent plusieurs TLR pour dtecter simultanment diffrents signaux dun mme micro organisme.

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Les probiotiques

Des tudes ralises in vitro ont montr que la rponse des cellules immunocomptentes diffrents micro-organismes pathognes ou probiotiques ntait pas la mme et que divers probiotiques taient capables dinhiber la production de TNF- sur des biopsies ex vivo provenant de muqueuse de sujets atteints de maladie de Crohn (Borruel et al., 2004). Les probiotiques pourraient galement influencer le dveloppement des cellules T rgulatrices ce qui permettrait dexpliquer leur efficacit clinique apparente dans des maladies immunologiques impliquant la rponse immunologique TH1 et TH2. III.9. Emploi des probiotiques dans les aliments : Bien que le premier lait ferment par des bifidobactries ait t mis sur le march il ya prs de 50 ans, le domaine des aliments probiotiques ne sest dvelopp que dans les annes 1970 (Tamine et al., 1995). En 1997, plus de 70 produits laitiers industriels tels que les laits ferments, fromage blanc, du beurre et des desserts surgels contenant des bactries probiotiques, dont plus de la moiti au Japon (Shah, 1997). Aujourdhui, les marques LC1 (Nestl), Vifit (Campina Melkunie), Actimel ( Danone) et Yakult ont merg comme les chefs de fil dans les yogourts et laits ferments probiotiques (Stanton et al., 2001). Par ailleurs, les laits ferments AB milk et Cultura contenant L.acidophilus et B.bifidum sont trs populaires au Danemark (Tamime et al., 1995). Dautres produits comme les yogourts acidophilus-bifidus, les laits bifidus, Biogarde, Biomild et les laits Diphilus et Ophilus. III.9.1. Yaourts et laits ferments : Peu de produits laitiers probiotiques traditionnels, figurent toujours dans les marchs comme le Kfir qui contient un potentiel de souches probiotiques, qui reste trs populaires dans son pays origine, la Russie. Le march des produits ferments base de probiotiques sest dvelopp ainsi que diffrents types de yogourts sont disponibles travers le monde. III.9.2. Les crmes glaces : Les crmes glaces contenant les laits ferments par des probiotiques sont parfois appeles yogourts surgels ou glace au yaourt . Il vaudrait donc mieux les dnommer crmes glaces aux probiotiques (Dacosta, 2001). Hagen et Narvhus (1999) ont produit de la crme glace, en utilisant du mix de la crme glace additionne de 10% du lait ferment contenant L.reuteri, L.acidophilus LA-5, Bifidobacterium BB-12 et L.rhamnosus GG aprs incubation de 24 heures au conglateur (20C), la survie est de 52 semaines. La qualit organoleptique fut satisfaisante et les auteurs en dduisirent que les crmes glaces peuvent servir dexcellent vhicule pour lincorporation de probiotiques lalimentation. III.9.3. Les fromages : Les fromages semblent tre une voie intressante pour lincorporation de probiotiques aux aliments, quoique, peu de ralisations avaient le jour jusqu prsent : lune delles lance en 1996 par la firme Allemande Tuffi, contenait des L.acidophilus, Bifidobacterium bifidum, L.casei (Dacosta, 2001). Dinakar et al. (1994) fabriqurent des fromages de Cheddar supplments par des B.bifidum ATCC 15696, ceux-ci, naffecta pas la composition des fromages malgr une lgre diffrence dans la production dacide lactique.

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Les probiotiques

III.9.4. Les saucisses fermentes (Saucissons secs) : Les saucissons secs sont le fruit dun processus fermentaire complexe, qui commence lors de la prparation de la mle et se poursuit durant toute la priode de stockage - maturation. Arihara et al. (1998) utilisrent sparment comme ferments, dans la fabrication de saucisses, six souches japonaises de probiotiques, la dose initiale de 106 UFC/gr : L.acidophilus JMC 1132, L.crispatus JMC 1185, L.amylovirus JMC 1126, L.gallinarum JMC 2011, L.gesseri JMC 1131 L.johnsonii JMC 2012 (Dacosta, 2001). III.9.5. Autres produits : a) b) c) d) le jus de Soja. Farine davoine fermente par L.plantarum 299v Supplments alimentaires : capsules, poudres et tablettes Laits en poudre, beurre, chocolat, crales au petit djeuner, boissons etc.

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Les prbiotiques et les symbiotiques

IV.1. les prbiotiques : Certains composants de la microflore intestinale, particulirement les bifidobactries, sont capables de fermenter des substances essentiellement non digestibles dans le colon grce son pouvoir saccharolytique important (Kaplan et al., 2000). Les effets bnfiques gnrs par ces substances ont permis le dveloppement du nouveau concept Prbiotique . IV.1.1. Dfinition : Le concept des prbiotiques a t dfini comme tant des ingrdients alimentaires non digestibles exerant des effets bnfiques sur lhte en stimulant slectivement dans le colon la croissance et/ou lactivit dune ou dun nombre limit de bactries capables damliorer la sant de lhte (Gibson et al., 1995). Les prbiotiques doivent tre non digestibles pour servir de substrat aux bactries spcifiques, principalement les bifidobactries et les lactobacilles, qui sont actives et amliore la sant de lhte. IV.1.2. Proprits et gnralits : Il existe plusieurs constituants qui peuvent tre dfinis comme prbiotiques, les fibres alimentaires comme les polysaccharides tels que lamidon, linuline, la pectine, la gomme agar et les oligosaccharides non digestibles sont ainsi ferments par les bactries intestinales en produisant des acides gras courte chane notamment les acides actiques, propionique et butyrique qui sont alors utiliss par les diffrents tissus de lhte comme substrats nergtiques, ou comme facteurs de rgulation cellulaire (Blaut, 2002). La plupart sont des glucides ayant deux origines diffrentes : vgtale ou synthtique, mais peuvent tre galement dorigine animale ou microbienne. Pour tre considr comme prbiotique, un ingrdient alimentaire doit : tre ni hydrolys, ni absorb dans le tractus gastro-intestinal ; tre slectif pour un nombre limit de bactries endognes ; modifier la microflore intestinale en amliorant sa composition ; induire les effets intestinaux ou systmiques bnfiques pour la sant de lhte (Gibson et al., 1995). Les prbiotiques sont prsents dans certains aliments, et en particulier dans les artichauts, les asperges, les oignons, lail, les poireaux, les tomates, les bananes. Linuline, est pr sente dans plusieurs vgtaux (oignons, ail, asperges) mais elle est galement extraite des tubercules de la chicore, et dautres sont soit synthtiss par des enzymes partir de saccharose, soit dgrades partir de linuline par hydrolyse. IV.1.3. Catgories des prbiotiques : Les catgories des prbiotiques ne sont pas exhaustives, parce que les recherches continues de donner le jour beaucoup de nouveaux produits grce au progrs de gnie enzymatique, le (tableau -10) illustre les catgories des prbiotiques connus jusqu nos jours.

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Chapitre IV

Les prbiotiques et les symbiotiques

Tableau -10 : Les diffrents prbiotiques avrs et supposs (Gibson et Fuller, 2000 ; Frank, 2002)
Substances Fructanes Linaires * Inulines * FOS * Levanes Branchs (graminanes) Lactulose Oligo (trans) galactosidase (FOS) Oligoxylosides (XOS) Oligosides de soja (Raffinose et stachyose) Isomaltooligosides Oligolaminaranes (-glucanes) D-tagatose Amidon rsistant Condensats de Palatinose Composition Glucose, fructose * Liaisons -2,1 * -2,1 * -2,6 * Liaisons -2,6 et -2,1 Galactose, fructose, liaisons -1,4 Glucose, galactose, liaisons -1,6 Xylose, liaisons -1,4 Galactose, glucose, fructose liaisons -1,6 et -1,2 Glucose liaisons -1,6 Glucose, (mannitol) liaisons -1,3 et 1,6 Tagatose Glucose, liaisons -1,4 et 1,6 Molcules de sucrose rarranges par voie enzymatique Degr de polymrisation 10 60 29 20 30 (lorsque dorigine vgtale) * inconnu 2 25 29 34 25 5 25 1 > 1000 27

Selon Marteau et al. (2004), les prbiotiques les plus utiliss sont : lactulose, les fructanes (Fructooligosaccharides (FOS) et Inuline) et dautres oligosides de galactose et transgalactose. a) Le lactulose : Cest un disaccharide rducteur de forme brute C12H23O11, il est obtenu partir du lactose, en convertissant par une isomrisation chimique le radical glucosyl de celui-ci en radical fructosyl, et cest par action dun milieu alcalin (Figure -8). Les disaccharidases de lpithlium intestinal ne lhydrolyse pas, la diffrence des enzymes de la flore digestive, il est mal absorb par la muqueuse de lintestin grle (Adrian et al., 2003) b) Les Fructo-oligosaccharides (FOS) : Ce sont des polymres de fructose (Figure -8) obtenus par lhydrolyse partielle de linuline dont le degr de polymrisation varie de 3 9. Les Fructo-oligosaccharides sont indigestibles et atteignent le colon ou ils sont mtaboliss par la flore microbienne en acide lactique, et en acides gras courte chane. Ils stimulent la croissance des bifidobactries et inhibent celle de Clostridium perfringens (Adrian et al., 2003) c) Linuline : Cest un polymre de -fructose (figure -8), avec des liaisons de type -2,1, il appartient la famille des Fructo-oligosaccharides. Elle est extraite leau chaude des racines de chicore par la socit belge Orafti, ou des topinambours. Il sagit dun glucide non hydrolys et non absorb dans lintestin grle, mais qui est dgradable par la flore colique (Adrian et al., 2003).

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Les prbiotiques et les symbiotiques

Figure -8 : Structures chimiques du lactulose (a), des Fructo-oligosaccharides (b) et de linuline (c) (Bezkorovainy, 2001). d) Le lactosucrose : Le lactosucrose est un disaccharide form dune molcule de lactose la quelle est greff un radical fructosyl, et le reliant au radical glucosyl par une liaison -1,2. Sa formule est : Galactosyl glucosyl fructosyl. Il est fabriqu par une transfructosylation dun mlange de lactose et de saccharose, en utilisant lenzyme -fructofuranosidase. Il est mtabolis prfrentiellement par les Bifidobacterium (Dacosta, 2001). e) Les galacto-oligosaccharides : Les galacto-oligosaccharides sont prsents dans le lait maternel. On les obtient partir du lactose, en employant lenzyme -galactosidase. Sa formule est : Glucosyl 1-4 [galactosyl 1,6]n (n = 2 5) Ceux-ci ne sont pas digestibles par lhomme (Dacosta, 2001). f) Les malto-oligosaccharides : Ne sont pas de vrais prbiotiques, car ils sont en partie absorbs par le systme digestif de lhomme et ne dveloppent pas spcialement les bifidobactries du colon. Leur molcule est forme de radicaux glucosyl, au nombre de 2 7, attachs entre eux par des liaisons -1,4 : [glucosyl 1-4]n g (n = 2 7). Ils sont produits partir de lamidon par laction dune enzyme qui en coupe les ramifications par exemple la pullulanase ou lisoamylase, combine une hydrolyse par diverses -amylases (Dacosta, 2001). g) Les isomalto-oligosaccharides : Par rapport aux prcdents, la diffrence rside dans la liaison des radicaux glucosyl, qui ici est de type -1,6 : [glucosyl 1-6]n (n = 2 5). La molcule peut aussi comprendre des radicaux glucosyl attachs par des liaisons -1,4. Fooks et al.(1990) dclarent que ce sont des prbiotiques trs efficaces pour stimuler la flore lactique. Sont produit partir de lamidon par un processus en deux tapes : hydrolyse par une -amylase, puis traitement par une amylase et une -glucosidase.
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Les prbiotiques et les symbiotiques

h) Les palatinose-oligosaccharides : Ces molcules proviennent du palatinose, disaccharide digr par lintestin de lhomme et ne pouvant donc servir de prbiotique. Par une dshydratation intermolculaire, on obtient un polycondensat qui, lui, arrive intact dans le colon o il stimule la croissance des Bifidobacterium sa formule est [glucosyl 1-6-fructosyl]n (n = 2 4) On le prpare partir du saccharose en employant une -glucosyltransfrase (Dacosta, 2001) i) Les oligosaccharides des graines de soja : Ce sont le stachyose et le raffinose, non digrs par lhomme, mais qui dans le colon stimulent les Bifidobactries et avec une moindre ampleur celle de Bactroides et de Lactobacillus salivarius , daprs Hayakawa et al. (1990) (Dacosta, 2001). j) Les gentio-oligosaccharides : Ce sont des chanes de radicaux glucosyl assembls par des liaisons -1,6 : [glucosyl 1-6]n (n = 2 5) Il ne sont pas digres par lhomme et stimulent dans le colon la croissance des Bifidobactries et des lactobacilles. On les prpare partir du sirop de glucose par une transglucosylation enzymatique (Dacosta, 2001). k) Les xylo-oligosaccharides : Les xylo-oligosaccharides sont des chanes de radicaux xylosyl attachs par des liaisons 1,4 : [xylosyl 1-4]n (n = 2 9). Ils stimulent la croissance des Bifidobacterium dans le colon (Okazaki et al., 1990). On les produit en extrayant des xylanes des pis de mas, quon hydrolyse ensuite par lenzyme endo-1,4--xylanase. Enfin, purification en retirant le xylose et les glucides de poids molculaire lev (Dacosta, 2001). IV.1.4. Procds dobtention des prbiotiques : Extraction ; Hydrolyse enzymatique ; Biosynthse enzymatique ; Synthse chimique ; Bioconversion enzymatique ; Transglucosylation enzymatique. (AFSSA, 2005)

IV.1.5. Rles des prbiotiques et leurs effets sur la sant : Le rle bnfique des prbiotiques sur la sant de lhte serait li diffrents effets physiologiques (figure -9). Absorption colique du Calcium et Magnsium : Un effet stimulant des prbiotiques, notamment inuline et FOS, sur labsorption colique du calcium et du magnsium la faveur de labaissement du pH colique et de la production dAGCC, est probable ; son impact dans des situations de carence en lun et/ou dautre de ces cations reste formellement dmontrer chez lhomme (AFSSA, 2005). Motricit intestinale et transit intra-luminal : Les NOS augmentent chez lhomme adulte le poids des selles. Leffet gazogne a t suggr comme un possible facteur dclenchant de lacclration du transit que peuvent induire les prbiotiques. Augmentation du nombre des bifidobactries dans le colon : Il sagit de leffet bifidogne. Les rsultats obtenus jusqu maintenant sont trs encourageants.

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Chapitre IV

Les prbiotiques et les symbiotiques

Augmentation de la biodisponibilit du calcium ; effet favorisant la lutte contre lostoporose : La plupart des explications possibles reposent sur la form ation dAGCC au cours de la fermentation de linuline par la flore intestinale. Diminution du taux de lipides dans lorganisme et diminution de lathrosclrose : Linuline pourrait prvenir cette maladie en diminuant la concentration dans le plasma du cholestrol et des triglycrides. Les prbiotiques entranent une rduction de cette concentration plasmatique associe la diminution, de la restirification des acides gras dans le foie et de la lipogense hpatique. Modification de la composition bactrienne ; Effets sur les capacits enzymatiques de la flore ; Effets sur les fonctions et la barrire intestinale ; Effets sur lpithlium intestinal et le renouvellement cellulaire ; Effets curatifs et/ou prventifs des maladies intestinales telles que la constipation, les diarrhes infectieuses ou encore les maladies inflammatoires intestinales et la diminution du risque de cancer colorectal ; Amlioration du transit intestinal ; Stimulation de limmunit locale ; Diminution des bactries pathognes.

Figure -9 : Schma montrant les mcanismes daction possibles des prbiotiques (Topping et Clifton, 2001). Les lignes continues indiquent des modes relativement bien tablis d'action. Les lignes pointilles indiquent des modes moins bien tablis ou spculatifs d'action

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Les prbiotiques et les symbiotiques

IV.1.6. Utilisation des prbiotiques en alimentation humaine : Les prbiotiques se trouvent naturellement dans les lgumes, les fruits, les crales et dans le lait maternel. Aujourdhui, laddition des prbiotiques a t largie de nombreux produits alimentaires tels que : Les boissons, Les ptes alimentaires, Les produits de boulangerie, Les ptes tartiner, Les sauces, Les produits carns, Les laits artificiels et aliments de sevrage, Les crales du petit djeuner, Les soupes, Les confiseries, barres croquer et desserts (Holm, 2001). IV.2. Les symbiotiques : Rcemment, le concept de symbiotique association dun probiotique avec un prbiotique qui lui est spcifique a fait son apparition. Cette association permet au probiotique daugmenter ses chances de survie dans le tube digestif et damliorer son implantation dans lintestin ventuellement et ainsi de potentialiser ses effets. IV.2.1. Dfinition : Un symbiotique est un mlange de probiotiques et de prbiotiques qui affecte positivement lhte en amliorant la survie et limplantation despces microbiennes vivantes. Apportes gnralement sous forme de supplments alimentaires dans le tractus gastro-intestinal pour la sant et le bien-tre de lhte (Isolauri et al. 2002). Le terme symbiotique, voquant la proprit de synergie, est rserv uniquement aux produits contenant les probiotiques et les prbiotiques au mme temps. IV.2.2. Effet symbiotique : Il existe plusieurs difficults face la survie des probiotiques dans lorganisme (acidit de lestomac et les scrtions de la bile), pour viter ces problmes il faut ajouter des prbiotiques. IV.2.2.1. Stimulation du systme immunitaire : Au niveau de la muqueuse intestinale, les probiotiques et les prbiotiques, peuvent influencer directement ou indirectement le systme immunitaire (figure -10). Via les cellules M actives qui permettent le transfert de lantigne aux CPA. Leur action peut conduire la modification de lquilibre Th1/Th2 en faveur dune augmentation de lymphocytes B produisant des IgA et dune rduction concomitante de lymphocytes B scrtant des IgE responsables des allergies (Ouwehand et al., 2002). IV.2.2.2. Prvention du cancer colique : Leffet symbiotique amliore le systme immunitaire, car ce dernier entrane la production dinterfron qui agissent de manire antivirale et aide limiter la prolifration de cellules potentiellement dangereuses. (Anonyme 2).

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Figure -10 : Action des probiotiques et des prbiotiques sur le systme immunitaire de lintestin de lhomme (Ouwehand et al., 2002).

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Conclusion

CONLUSION :
Les aliments fonctionnels sont, de plus en plus, prsents dans notre alimentation. En effet, ils peuvent offrir un grand potentiel pour amliorer la sant et/ou prvenir et mme traiter certaines maladies condition quils soient pris au sein dun rgime quilibr et dun mode de vie sain. Les probiotiques trouvent leurs principales indications dans les troubles gastrointestinaux : infections digestives bactriennes et virales, intolrance au lactose, diarrhes, gaz, ballonnements, constipations, Ils devraient tre utilises pour rensemencer la flore intestinale aprs une antibiothrapie. Une probiothrapie serait utile en traitement adjuvant de lulcre gastro-duodnal et de la cirrhose. Les prbiotiques sont de plus en plus prsents, les plus tudis et les plus utiliss sont linuline, les FOS (Fructo-oligosaccharides) et les XOS (xylo-oligosaccharides) et leurs effets sur lorganisme dont lequel ils agissent sont les plus documen ts. Ces aliments ont des effets curatifs plus que prventifs, leur efficacit est quotidienne, ds larrt de la prise alimentaire, et sont recommands surtout pour les personnes prsentant des dficits alimentaires. Dautre part, mme si le domaine des probiotique et prbiotique connat un grand essor, des tudes doivent encore tre menes pour tablir leurs mcanismes dactions quils offrent pour la sant. En perspective ; une nouvelle voie de recherche souvre nous, de nombreuses questions restent sans rponses, et que nous devons accomplir. Fabrication et diversification daliments et mdicaments probiotiques en Algrie ; Mettre en lumire les mcanismes daction des probiotiques ; Action antagoniste entre les bactries probiotiques ; Application chimique des probiotiques gntiquement modifie (PGM).

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Rsum
Les probiotiques sont des microorganismes vivants exhibant des effets bnfiques hors du commun, pour la sant humaine. Les prbiotiques sont des lments qui possdent la facult de stimuler la flore Intestinale. Les symbiotiques reprsente linteraction qui existe entre les prbiotiques et les probiotiques. Ils servent, gnralement, dans la prparation des aliments ainsi que les mdicaments. Les effets quils procurent sont multiples mais cessent ds larrt de la prise alimentaire. Il a t prouv de manire significative, quils permettaient damliorer la digestion du lactose, de prvenir certains types de diarrhes, de stimuler le systme immunitaire et de rduire certaines ractions inflammatoires ou allergiques. Ces alicaments ne sont pas encore connus mais font lobjet de nombreuses tudes afin de dterminer le mcanisme daction exacte des bactries probiotiques et les prbiotiques ainsi que leurs associations.

Mots cls : flore intestinale, alicament, probiotique, prbiotique, symbiotique.