HEMOGRAMA MANUAL

Bqco. Gonzalo A Ojeda Ctedra Hematologa Clnica Fa.C.E.N.A-U.N.N.E 2011

Definicin
ES EL ESTUDIO CUALI Y CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS CORPUSCULARES DE LA SANGRE
CUANTITATIVO : Recuento de GR, GB Dosaje de Hb ndices Hematimtricos ( VCM, HCM, CHCM ) Frmula Leucocitaria CUALITATIVO : Frmula Leucocitaria Estudio Morfolgico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq

Determinaciones Adicionales
RECUENTO DE Pq

Reticulocitos
VSG

ETAPA Pre-ANALTICA

Condiciones del Paciente

Tipo y Toma de Muestra

Condiciones del Paciente

NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se sugiere al menos 2 h). NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FSICA INTENSA PERMANECER PREFERENTEMENTE SENTADO DURANTE LA EXTRACCION

DATOS A TENER EN CUENTA

EDAD
DX. PRESUNTIVO SEXO

REFERENTE A LA MUESTRA
TIPO DE MUESTRA -VENOSA

-CAPILAR -ARTERIAL??

PUNCION VENOSA

VENTAJAS -Tcnica rpida y segura -Permite obtener volmenes adecuados para las dems determinaciones. -Permite repetir el anlisis en caso de dudas. -Reduce los posibles errores de la puncin capilar.

DESVENTAJAS -Resultados errneos por hemoconcentracin (torniquete prolongado) -Hematomas y dolor (extraccin dificultosa) -No se recomienda en neonatos o pacientes quemados. -Paciente Oncolgicos

PUNCION CAPILAR

VENTAJAS -Resulta sencillo para neonatos y nios -Se puede realizar ms de una vez en pacientes especiales (quemados, oncolgicos, etc) -til en pacientes con patologas Hemorrgicas.

DESVENTAJAS -Recuentos errneos por hemoconcentracin o hemodilucin -Dificultad para obtener flujo continuo. -Recuentos de Pq disminuidos, coagulacin. -Errores por contaminacin -Paciente Oncolgicos

ANTICOAGULANTES

SALES DE EDTA :Forman complejos con el Ca++, efectivo en pequeas cc, no necesita ser evaporado (Posible error por dilucin a tener en cuenta) 0.01mL (10 L) sirven para anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION NORMALMENTE USADA ES 10 L ms 1 mL de sangre (1:100) PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS HASTA 48 SIN ALTERAR LOS VALORES

MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO ( MEZCLA DE WINTROBE) Acta precipitando el Ca+ Proporcin 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre) HEPARINA: Acta neutralizando la trombina. Proporcin 10-50 UI/mL sangre.

Obtenida la muestra

HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS VECES ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR LENTA Y REPETIDAS VECES!!!

ETAPA ANALTICA
RECUENTOS DE GB , GR y Plq Hematocrito Dosaje de Hb Frmula Leucocitaria

RECUENTO DE GB
DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK -Acido actico glacial (20 mL) -Cristal Violeta 1% (10 mL) -Levar a 1000 mL con agua destilada Dilucin : 1/20 380 L + 20 L muestra

Muestra Secar con papel el dispositivo de cargado Homogeneizar Por agitacin

RECUENTO DE GB
CAMARA DE NEUBAUER

PIPETAS

CAMARA DE NEUBAUER Se trata de un portaobjetos con una

depresin en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrcula. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separacin entre dos lneas consecutivas de 0.25 mm. As pues el rea sombreada y marcada L corresponde a 1 mm. La depresin central del cubreobjetos est hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos ste dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 mm.

Aumento 10X

Aumento 10x

Consideraciones prcticas

PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LQUIDOS EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL TORNILLO MICROMETRICO. NO DEMORARSE

Elementos contados 4 mm X 1mm X N/4 Dado que el espesor de la cmara es 0.1 mm, para expresar el nmero de elementos por mm deberemos multiplicar el valor X por 10. X= (N/4) X 10 Como se ha efectuado una dilucin de 1/20, debemos multiplicar por la dilucin, es decir: X= Nx10x20= N x 50= N de GB/mm 4 Segn el ICSH, debe expresarse este resultado en N de GB. 10x9/l

Clculos

Valores de Referencia
ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm NIOS - RN : 12.000 a 25.000 GB / mm - Hasta 1 ao : 6000 a 18.000 GB / mm - 3 a 6 aos : 5000 a 15.000 GB / mm - 6 a 12 aos: 4500 a 13.500 GB / mm

CAUSAS DE ERROR

DEL MATERIAL CUBREOBJETOS MAL COLOCADO SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION RESTOS DE G.R. APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS DESGASTE DE TECNICA EXTRACCION DE SANGRE DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA) LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL AUTOAGLUTINACION DEL OPERADOR DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO FATIGA OCULAR

LEUCOCITOSIS
-

FISIOLGICAS Embarazo, Lactancia, Puerperio, Perodo menstrual Ejercicio violento, Stress.

LEUCOCITOSIS PATOLOGICAS
CAUSAS INFECCIOSAS -Bacterias pigenas : Strepto, Staphylo , Meningo y gonococo. -Tos convulsa (Bordetella) Leucocitosis con Linfocitosis -Sarampin (Inc) -Cuadros septicos : Peritonitis, Neumona
CAUSAS NO INFECCIOSAS -Cuadros inflamatorios -Post hemorragias -Vmitos, convulsiones, crisis eclmpsicas, epilepsia, taquicardias -Hipertemias no infecciosas -Quemaduras extensas -Sock traumtico -IMC, necrosis de tejido tumoral, pancreatitis. -Leucemias -Enfermedades metablicas : DBT, Coma diabtico, Acidosis -IRC -Endcrinopatias : Cushing - Corticoterapia

Leucopenias
-Constitucional

(Rara) tener presente resultados previos -Digestiva (post prandial) -Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea -Sepsis de mala evolucin -Casi todas las virosis (Sarampin, Varicela, Gripe, Neumona ) -Intoxicacin por benzoles o sulfas -Hemopatas: Leucemias leucopnicas, aplasia medular, etc -Afecciones hepatoesplnicas -Cirrosis heptica, trombosis de la vena porta o esplnica -Leucopenias alrgicas, shock anafilctico -Afecciones reumticas -Quimioterapia -Leucopenias carenciales -Colagenopatas: LES, Esclerodermia -AINES

DOSAJE DE Hb
Mtodo de la Cianmetahemoglobina Fue recomendado por el Comit Internacional para la Estandarizacin de Hematologa (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el ms recomendado.

REACTIVO DE DRABKIN

Fe(CN)6K3---------------200 mg KCN---------------------------- 50 mg K3HPO3--------------------140 mg Sterox Se o Triton X-100-------1 mL Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el pH a 7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N. Guardar en frasco color caramelo, a T amb, estable 6 meses.

Fundamento del Mtodo

Hb ( Fe II ) Fe(CN)6K3 Meta Hb ( Fe III)

KCN

CIANMETAHEMOGLOBINA

MAXIMO DE ABS A 540 nm

Tcnica
5 mL Rvo Drabkin + 20 L sangre entera anticoagulada

5 minutos

Leer a 540 nm en espectrofotmetro o en fotocolormetro con filtro verde

Curva de calibracin
Se realiza cada vez que se prepara o adquiere reactivo. Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal, alto ) Muestra testigo de cc conocida (trabajo con dilucin al y con el doble )

Curva de Calibracin
Abs A=.b.C

g/dL

VENTAJAS DE LOS METODOS

KIT COMERCIAL -Controla la linealidad del equipo -Estado del rvo MUESTRA TESTIGO -Controla la linealidad del equipo -Controla la manipulacin del material de medicin volumtrico (en forma indirecta) pues el patrn se procesa como si fuese una muestra -Posible deterioro del reactivo -Variaciones de tensin, Int de la -Lampara,etc.

Para tener en cuenta

La determinacin de un patrn diario nos permite: -Controlar que el reactivo no ha sufrido deterioro -Controlar el factor humano -Cambios en la tensin elctrica o funcionamiento del equipo de lectura.

VALORES DE REFERENCIA
Bibliografa Laboratorio

Mujeres

11,5 - 14 g%

12 15 g%

Varones

13,5 17 g%

13 17 g%

HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR

Definicin
ES

EL VOLUMEN DE MASA GLOBULAR EXPRESADO COMO UN % EN EL VOLUMEN DE SANGRE TOTAL

Tcnica
1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES: Sangre venosa : Sin heparina Puncin digital: Con heparina 2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR EN UN EXTREMO CON PLASTILINA 3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL: 15000 rpm 5 a 6 min 4-LEER EN ABACO ESPECIAL

VENTAJAS

RPIDO < VOLMEN DE SANGRE TUBOS CAPILARES DESCARTABLES MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR LA SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR LOS G.R. EN DICHA CAPA ES <

Valores de referencia
Recin Nacido 52 65 % Varones 40 48 % Mujeres 37 47 %

VALORES ALTOS

VALORES BAJOS -ANEMIAS -FASE DE RECUPERACIN DE PERDIDA DE SANGRE -EMBARAZADAS

POLIGLOBULIA REAL HEMOCONCENTRACION : QUEMADURAS , ECLAMPSIAS, SHOCK QUIRURGICO O TRAUMATICO ESTADOS DE DESHHIDRATACION (VOM. DIARREAS, DIABETICOS) HIPOXIA DE LAS ALTURAS FUMADORES

RECUENTO DE GLBULOS ROJOS

EL CONTAJE HA ADQUIRIDO MUCHA PRESICION CON LOS METODOS AUTOMATIZADOS EL RECUENTO EN CAMARA ES OBSOLETO Y SUJETO AGRAVES ERRORES TANTO QUE CUANDO NO SE DISPONE DE VALORES POR AUTOMATIZACION ES MEJOR PRESCINDIR DE ESTE DATO Y GUIARSE POR LOS VALORES DE HTO Y HB.

VALORES DE REFERENCIA
Mujeres 4 4.8 millones/mm Varones : 4.5 -5.5 millones / mm RN : 5.6 millones / mm 4 semanas: 4 millones/ mm 6 semanas: 3.6 millones/ mm 12 semanas : 3.8 millones/mm 6 a 12 aos : 4.5 millones / mm

INDICES HEMATIMTRICOS
VCM Expresa el volumen medio del GR HCM Cantidad de Hb contenida en un hematie CHCM % de Hb contenida en la masa globular total 32 35 %
Hb x 100 Hto

90 5 fL
Hto x 10 GR

29 3 pg
Hb x 10 GR

ANLISIS DE FROTIS SANGUNEOS

Coloracin May Grwald - Giemsa

May Grwald -Eosinato Azul de Metileno -Metanol Giemsa -Eosinato de Azur II -Azur II -Glicerina y Metanol

TCNICA
1-Realizar el extendido Dejar secar- Rotular 2- Cubrir 3 minutos con MG (FIJACIN) 3-Agregar en igual proporcin al colorante buffer o agua comn : agua destilada (1:1) con movimientos sin eliminar todo el colorante anterior (ACTIVACION) 4-Volcar la mezcla anterior y (enjuagar) cubrir con Giemsa al 10% durante 15 minutos. PREPARAR EN EL MOMENTO 5-Dejar secar Observar con Aceite de Inmersin

MG

Metanol : Agente Fijador Eosinato : colorea partes bsicas del citoplasma (rosado) : hemates, grnulos de Eos, citoplasma de granulocitos. Azul de Metileno: granulaciones especficas de granulocitos, nucleolos, citoplasmas basfilos, hemates policromatfilos, colorea levemente el ncleo.

Giemsa
Colorea fuertemente las granulaciones inespecficas (azurfilas), colorea adems fuertemente los ncleos diferenciando la cromatina. Tie tambin cuerpos de Howell Jolly, anillos de Cabot y Bastones de Auer

RESUMIENDO

NCLEOS: En violeta rojizo CITOPLASMA DE LAS CELULAS LINFOIDEAS :en azul -celeste luminoso. Los grnulos linfoideos en rojo purpreo LOS GRANULOS NEUTRFILOS .en rosado pardusco LOS GRANULOS EOSINFILOS: en naranja pardo o rojo ladrillo LOS GRANULOS BASFILOS: En azul marino con tonalidad violcea ERITROCITOS en rosado rojizo

BASOFILO

NEUTROFILO LINFOCITO

EOSINOFILO

MONOCITO

Frmula Leucocitaria
Cayados0 - 2% Neutrfilos.50 - 70% Eosinfilos.0 8 % Basfilos0 1% Linfocitos20- 40 % Monocitos.. 4 6 %

OCULARES

OBJETIVOS PLATINA

MACRO

CONDENSADOR MICRO

FIN