DETERMINACIN DE AZUCAR SANGUNEO ESPECTROFOTOMETRIA METODO ENZIMATICO

La espectrofotometra se refiere a los mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen como mtodos espectrofotomtricos y segn sea la radiacin utilizada como espectrofotometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta, infrarroja. Ley de Bourguer, Lambert y Beer Bourguer, Lambert y Beer, a travs de sus observaciones establecieron relaciones de la variacin de la intensidad de luz transmitida por una muestra con el espesor de ella o con la concentracin de la sustancia, para materiales translcidos. Estas relaciones se conocen como la ley de Bourguer-Lambert-Beer o ley general de la espectrofotometra que permite hallar la concentracin de una especie qumica a partir de la medida de la intensidad de luz absorbida por la muestra.

La ley de Lambert-Beer establece que la absorbancia est directamente relacionada con las propiedades intrnsecas del analito, con su concentracin y con la longitud de la trayectoria del haz de radiacin al atravesar la muestra. La expresin matemtica de la ley de Lambert-Beer es:
T = I / I0 % T = 100x I / I0

A=C. .L

DETERMINACION DE GLUCOSA EN SANGRE INTRODUCCIN La glucosa es la principal fuente de energa para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a travs de la alimentacin, y se almacena principalmente en el hgado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hgado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el pncreas. La glucosa es un azcar que es utilizado por los tejidos como forma de energa al combinarlo con el oxgeno de la respiracin. Cuando comemos el azcar en la sangre se eleva, lo que se consume desaparece de la sangre, para ello hay una hormona reguladora que es la insulina producida por el

pncreas (islotes pancreticos). Esta hormona hace que la glucosa de la sangre entre en los tejidos y sea almacenada en forma de glucgeno, aminocidos, y cidos grasos. Cuando la glucosa en sangre est muy baja, en condiciones normales por el ayuno, se secreta otra hormona llamada glucagn que hace lo contrario y mantiene los niveles de glucosa en sangre.

Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situacin se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos rganos. Esta es la razn principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y alteraciones que tambin la provocan. El tejido ms sensible a los cambios de la glucemia es el cerebro, en concentraciones muy bajas o muy altas aparecen sntomas de confusin mental e inconsciencia. En cuanto a los Mtodos enzimticos: a) Mtodo de la hexoquinasa:

Emplea las enzimas hexoquinasa y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa. Por cada molcula de glucosa se forma una de NADPH, que puede medirse espectrofotomtricamente a 340 nm. Es el mtodo de referencia recomendado por las organizaciones internacionales. b) Mtodo de glucosa oxidasa y peroxidasa (GOD-POD): es el que se utiliza en esta prctica para medir los niveles de glucosa sangunea. Principio del Mtodo de Determinacin cuantitativa de glucosa IVD (Spinreact) La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidacin de glucosa a cido glucnico. El perxido de hidrogeno producido se detecta mediante un aceptor cromo gnico de oxgeno, fenol-ampirona en presencia de peroxidasa (POD): Reaccin: -D-Glucosa + O2+ H2O GOD H2O2+ Fenol + Ampirona POD Fundamento: En el mtodo GOD-POD, en un primer paso la glucosa oxidasa cataliza la oxidacin de la D-glucosa a cido Dglucnico con formacin de perxido de hidrgeno. ste es utilizado por la peroxidasa para oxidar a la 4 aminofenazona y al fenol, dando lugar a una quinonaimina coloreada. La intensidad de color ser proporcional a la concentracin de glucosa presente inicialmente. (En ocasiones se utilizan otros sustratos en lugar de 4-aminofenazona+fenol, tales como o-dianisidina, guayacol y ABTS.)Esquema de la reaccin: cido glucnico + H2O2 Quinona + H2O

PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo: Longitud de ondas 505nm (490-550) Temperatura 37C/15-25C2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada. Blanco 1 ml ------------------Patrn 1ml 10 l -------Muestra 1ml -----------10 l

RT Patrn-control Muestra

Mezclar e incubar 10 minutos a 37 C o 15-20 minutos temperatura ambiente (15-25C).5. Leer la absorbancia (A) del Patrn y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mnimo 30 minutos.

calculos Cm = (Am/Ap) X Cp =mg/dl de glucosa en la muestra