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Bioqumica

EXTRACO E SEPARAO DE PIGMENTOS DE PLANTAS

Instituto Politcnico De Santarm Escola Superior Agrria De Santarm

Engenharia Alimentar Lus Lrias Andr Cruz Eugnio Guedes Paulo Rodrigues Joo Simes 2835 7114 3249 2851 2646

Bioqumica Relatrio do 3 Trabalho Prtico Extraco e separao de pigmentos de plantas

ndice

Resumo ................................................... 2 Objectivo................................................ 2 Introduo terica....................................... 3 Reagentes................................................ 4 Material e equipamento................................... 4 Procedimento experimental................................ 5 Resultados............................................... 7 Discusso de resultados.................................. 8 Concluses............................................... 8 Webliografia............................................. 9 Anexos .................................................. 10

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Resumo Com este trabalho, procurou-se analisar os processos de extraco e separao de pigmentos de plantas. Para tal, utilizou-se a cromatografia em camada fina (TLC - thin layer chromatography), aps o desenvolvimento do cromatograma calcularam-se os RF respectivos para cada pigmento encontrado, com o intuito de se poder identificar cada um deles. A planta utilizada foi a Malva, j que a sua elevada esponjosidade facilita a obteno do extracto essencial a todo este processo.

Objectivo Atravs da cromatografia em camada fina (TLC - thin layer chromatography), extrair e separar pigmentos de plantas e por ltimo, determinar os RF respectivos.

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Bioqumica Relatrio do 3 Trabalho Prtico Extraco e separao de pigmentos de plantas Introduo terica A cromatografia serve, de um modo geral, para separar e identificar os diversos componentes de uma mistura de substncias. Todas as tcnicas de cromatografia seguem o mesmo princpio: possuem uma fase estacionria (pode ser slida ou um lquido sobre um slido) e uma fase mvel (um lquido ou um gs). O fluxo da fase mvel atravs da fase estacionria transporta os componentes da fase estacionria consigo, separando-os atravs da diferena entre o comportamento na fase mvel e na fase estacionria. A interaco dos componentes da mistura com estas duas fases influenciada por diferentes foras inter-moleculares: inica, bipolar, apolar, e especficos efeitos de afinidade e solubilidade. Neste trabalho, a tcnica cromatrogrfica utilizada foi a cromatografia em camada fina que se caracteriza por utilizar como suporte para a fase mvel se deslocar uma placa que pode ser de vidro, metal ou plstico revestida por um slido absorvente (slica gel, neste caso). A slica gel uma forma de dixido de silcio (slica). Os tomos de silcio so unidos atravs de tomos de oxignio numa estrutura gigante covalente. No entanto, na superfcie da slica gel, os tomos de silcio esto ligados a grupos OH, assim, na superfcie da slica gel temos ligaes Si-OH, em vez de ligaes Si-O-Si. A superfcie da slica gel muito polar e, por causa dos grupos OH, pode formar ligaes de hidrognio com alguns compostos, bem como provocar a disperso das foras Van der Waals e das interaces dipolo-dipolo. Quando nesta placa colocada uma pequena quantidade da substncia a ser analisada, sendo depois a placa colocada numa tina com um solvente apropriado de modo a que apenas a extremidade de placa esteja em contacto com o solvente (fase mvel). Esta fase mvel sobe pela placa por capilaridade e arrasta mais as substncias menos absorvidas do que as mais absorvidas, separando-as. O factor de reteno, ou Rf, definido como a distncia percorrida pelo composto ao longo da placa a dividir pela distncia percorrida pelo solvente. Como o factor de reteno de um composto demasiado afectado por diversos factores (solvente, absorvente, espessura da placa, quantidade de substncia colocada na placa, temperatura), s se deve considerar como uma constante de uma experincia para outra se esses factores tambm forem constantes. Como bastante difcil manter constantes estes factores, normalmente consideram-se Rfs relativos a um padro ou comparam-se Rfs observados na mesma placa ao mesmo tempo.

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Parte experimental

Reagentes

Acetona; ter de petrleo; ter dietlico; areia; folhas de malva.

Material e equipamento

Placas de cromatografia, Ref. 105715 DC Silicagel 60 F254; tina de cromatografia; micropipeta; almofariz; erlenmeyer; funil; papel de filtro; provetas.

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Bioqumica Relatrio do 3 Trabalho Prtico Extraco e separao de pigmentos de plantas Procedimento Experimental A aula foi iniciada com uma interveno terica, por parte da Professora Dr. Antonieta Santana, sobre o mtodo que se iria utilizar, a cromatografia em camada fina (TLC - thin layer chromatography) e tambm sobre o procedimento experimental em si. Posto isto, iniciamos a preparao da tina de cromatografia, com o auxlio de uma proveta de 50 ml, colocamos Fig.1: Preparao da Tina de cromatografia em camada fina. 20 ml de ter de petrleo, 5 ml de acetona e 2,5 ml de ter dietlico1 (vide Fig.1) dentro da tina, tapando a mesma de seguida para que a soluo no evaporasse. Seguidamente colocamos 3 folhas de Malva num almofariz e juntamos-lhe uma grama de areia para que auxiliasse no processo de moagem, foi ainda adicionado cerca de 15 ml de acetona (vide Fig.2), isto, para que se pudesse criar o extracto de malva necessrio. Filtramos o mesmo para um erlenmeyer, com o auxlio de um papel de filtro e um funil, para que o extracto no evaporasse, selamos logo de imediato o erlenmeyer, recorrendo a uma pelcula , aguardamos assim que todos os grupos terminassem de preparar os seus extractos. Durante a espera, traamos numa placa de cromatografia a cerca de 1 cm da base, com a ajuda Fig.3: Aplicao do de um lpis e uma rgua, uma linha extracto na placa de cromatografia. paralela mesma. Marcamos de seguida na mesma linha o ponto de aplicao do extracto. Pipetamos recorrendo a uma micropipeta (vide
Fig.2: Preparao do extracto de malva, atravs da moagem de folhas com areia e acetona
1 Embora as quantidades apropriadas fossem 40 ml de ter de petrleo, 10 ml de acetona e 5 ml de ter dietlico, estas foram reduzidas a metade j que a tina j continha alguma desta soluo.

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Bioqumica Relatrio do 3 Trabalho Prtico Extraco e separao de pigmentos de plantas Fig.3), trs gotas de extracto, deixando que cada aplicao secasse antes da aplicao da subsequente. Depois da terceira pipetagem aplicada e seca, a Professora Dr. Fernanda Pires colocou as placas dentro da tina de cromatografia (vide Fig.4), aps este passo, tivemos que aguardar cerca de 45 minutos, para que os cromatogramas desenvolvessem (vide Fig.5). Passados os 45 minutos, retiramos a placa da tina e marcamos de imediato a frente do solvente, seguida de uma medio da mesma marca e da distncia percorrida por cada pigmento. Isto com vista a calcular e registar os valores de RF de cada pigmento.

Fig.4: Colocao da placa dentro da Tina, pela Professora Dr. Fernanda Pires.

Fig.5: Incio do desenvolvimento, onde j visvel uma deslocao dos pigmentos. A placa apresenta 3 pontos, que dizem respeito a 3 grupos diferentes, da esquerda para a direita, grupo 1;2 e 3.

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Bioqumica Relatrio do 3 Trabalho Prtico Extraco e separao de pigmentos de plantas Resultados Distncia percorrida pelo composto Rf = Distncia percorrida pelo solvente

DS=12,30cm D1=12,30cm D2=4,65cm D3=2,40cm D4=2,15cm D5=1,90cm D6=1,70cm D7=1,10cm D8=0,65cm D9=0,40cm Rf 1=12,30/12,30=1 Rf 2=4,65/12,30=0,38 Rf 3=2,40/12,30=0,20 Rf 4=2,15/12,30=0,17 Rf 5=1,90/12,30=0,15 Rf 6=1,70/12,30=0,14 Rf 7=1,10/12,30=0,09 Rf 8=0,65/12,30=0,05 Rf 9=0,40/12,30=0,03

Rf 1: -caroteno2 Rf 2: Clorofila B3 Rf 3: Xantofilas4

Cor do pigmento Amarelo-laranja Verde Amarelo profundo

Pigmento -caroteno Clorofila b Xantofilas

Valor de Rf 1 0,38 0,20

2 3 4

Determinado atravs do Rf respectivo; Determinado atravs da comparao da sua cor com valores tabelados. Idem.

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Bioqumica Relatrio do 3 Trabalho Prtico Extraco e separao de pigmentos de plantas Discusso de Resultados

Os resultados obtidos vo de encontro ao que a preparao terica para este relatrio nos tinha dado a conhecer: uns pigmentos sobem mais que outros ao longo da placa de cromatografia, de acordo com a estrutura de cada um e com as ligaes que estabelecem com a fase estacionria. No entanto, obtivemos alguns valores demasiado prximos uns dos outros, o que nos leva a crer que, algumas das manchas por ns identificadas e marcadas na placa, podem ser do mesmo pigmento, mas que aquando da marcao ainda no tinham cessado o seu desenvolvimentos, o que originou uma diferenciao imperfeita que nos induziu em erro. Sendo assim, s conseguimos determinar um dos pigmentos atravs do seu respectivo RF, tendo sido os seguintes determinados atravs da sua cor.

Concluses As concluses a que pudemos chegar com este trabalho foi de que o mtodo escolhido (cromatografia em placa fina) relativamente simples de executar e no demasiado dispendioso, - embora as placas no seja econmicas - com o qual se podem obter resultados precisos e vlidos se forem mantidas as condies e forem respeitados os tempos ideais. Neste caso o desenvolvimento do cromatograma provavelmente no deve ter chegado ao fim, j que os resultados obtidos no foram manchas de pigmentos bem definidas, mas sim como que um arrastar de pequenas manchas que nos poder induzir em erro. No entanto, recorrendo a colorao dos pigmentos, foi-nos possvel determinar que estariam presentes 3 tipos de pigmentos, so eles o -caroteno5; a Clorofila B6 e 7 Xantofilas .

5 6 7

Determinado atravs do Rf respectivo; Determinado atravs da comparao da sua cor com valores tabelados; Idem.

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Webliografia

en.wikipedia.org/wiki/Thin_layer_chromatography,

orgchem.colorado.edu/hndbksupport/TLC/TLCrf.html,

www.chemguide.co.uk/analysis/chromatography/thinlayer.html

www-saps.plantsci.cam.ac.uk/worksheets/scotland/tlc.html,

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Anexos

Fig.5: Processo de desenvolvimento do cromatograma.

Tabela de Identificao de Pigmentos


Cor do pigmento Amarelo-laranja Cinzento Azul, verde Verde Amarelo profundo Pigmento caroteno Um produto de decomposio Clorofila a Clorofila b Valor de Rf 0,96 0,70 0,58 0,48 0,44

Xantofilas

Retirado de http://wwwsaps.plantsci.cam.ac.uk/worksheets/scotland/tlc.htm

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