SEMANA 6 Todas las funciones de las organelas que existen en las clulas son para su buen funcionamiento, para

que mantengan la homeostasis. Los lisosomas son las organelas que se encargan de destruir y reciclar los compuestos celulares que las clulas ya no requieren. No hay sntesis, sino solamente degradacin. Es bsicamente el chatarrero de la clula. Se realizan diferentes funciones, hidrolisis de diferentes compuestos que llegan. Entonces la clula tiene caractersticas especiales, cules son esas caractersticas que tiene el lisosoma que hace que sea el centro donde diferentes compuestos llegan para que sean degradados? Son organelas de membrana con mltiples funciones y estn presentes en todas las clulas de los mamferos Su medio ambiente interno es acido que va de un PH de 4.5 a 5.5, o sea un margen de un grado de PH Contiene varias hidrolasas acidas, son como un lugar donde se coloca acido en donde estas molculas son quebradas Degrada sustancias intracelulares en exceso muy viejas e innecesarias

Se encargan de la degradacin de organelas dentro del citoplasma tanto como material extra celular. Todo este material se convierte en monmeros activos que son reciclados intracelularmente. Entonces si llega una protena, va a quebrar completamente a esa molcula y generar amino cidos que probablemente puede llegar a usar la clula. Igual si llegan cidos nucleicos va a degradar sus componentes para que luego la clula los pueda usar. Entonces cmo son estos lisosomas? Son organelas que tienen una batera de enzima degradante. El PH del citosol es maso menos 7.2 y el PH interno del lisosoma alrededor de 5. El tamao es entre 0.2 a 0.5 micrmetros. Las plantas y los hongos contienen la mayor parte de las organelas encontradas en la clula animal pero no poseen lisosoma, en lugar contienen una vacuola grande que favorece a muchas funciones del lisosoma. Entonces los lisosomas son exclusivos del reino animal. Cmo es esta organela que le permite tener hoy una integridad de membrana a pesar de que est con un contenido bastante acido? De dnde viene el cido? Hay una bomba de protones impulsada por el ATP para que ingresen dentro de la clula estos protones y se mantenga un PH acido. Entonces hay un gasto energtico en el mantenimiento del PH para que esas enzimas o hidrolasas que contiene el lisosoma puedan permanecer a ese PH estable. Los lisosomas hacen dos procesos en el trfico intracelular (de las molculas hacia los lisosomas) Endocitosis: De protenas encelo receptoras de membranas unida ligando producir endosomas tempranos o sea la incorporacin de sustancias dentro de la clula se dan a travs de endosomas. Estos endosomas van a tener receptores especiales para cada tipo de molcula que valla a ingresar a la clula.

Heterofagocitosis: Otro medio de incorporacin pero de material ms grande y abundante. Estos seran los dos mtodos que tienen los lisosomas para incorporar dentro de su sistema y para hidrolizar a las molculas que ingresan. Pero vamos a ver como es la produccin de estas enzimas protolticas o de cualquier otra molcula que van a ingresar al lisosoma. El lisosoma no produce estas enzimas, ellas provienen de la sntesis del retculo endoplasmtico. Ellas van a parar al aparto de Golgi pero tienen que tener caractersticas especiales para que sean incorporadas por el aparato de Golgi hacia el interior y luego ser transferidas hacia el lisosoma. Estructura de sesta donde ellas van a ser incorporados, para esto las enzimas hidroliticas tiene que incorporar una molecula de manosa fostfato, sin la manosa fosfato estas sestas del aparato de Golgi no las van a poder recibir. Entonces se incorporta la manosa fosfato en la enzima y luego ingresa por el lado SIS del aparato de Golgi y fluye hacia el lado TRANS del a. de Golgi. Ah es donde son captadas estas canastitas que se llaman CLATRINAS que tienen los receptores de MANOSA FOSFATO es por eso que pueden adherirlos. Una vez que a incorporado esta clatrina dentro de esa vescula, lo elimina hacia el exterior donde se va a separarla estructura de clatrina que es lo hace las canastitas y que eran para reciclarse nuevamente y entrar al aparato de Golgi y ser utilizada nuevamente Luego esta protena que esta con la manosa fosfato la pierde y puede ingresar al sistema de degradacin. Entonces se ha visto de cierta manera la biognesis de los lisosomas Los lisosomas como ya se dijo a travs de exocitosis. El aparato de Golgi su lado trans estalla matando las protenas hidrolticas. Los cuerpos que entran por endocitosis son incorporados a un componente llamado endosoma temprano que es una formacin membranosa que va a tener ya cierta cantidad de las enzimas hidrolticas. Por otro lado, por el Heterofagocitosis que es la otra forma en que ingresan tambin los compuestos para ser degradados, tamien van a ser atacados por estas enzimas en unas formaciones vesiculares llamados heterofagosomas. Luego, este endosoma temprano va a madurar y se van a ir incorporando muchas mas enzimas igual en lso heterofagosomas, luego se van a juntar con los lisosomas que tambin son proveidos de enzimas pero tambin hay un sistema de incorporacin de moleculas a travs de la autofagia. La autofagia significa comerse a s mismo, como es que la clula puede comerse a s misma. Entonces est relacionado con la degradacin de compuestos o estructuras que la clula misma produce por eso es autofagocitosis. Y tiene todo un mecanismo por el cual se forman o incorporan estas formaciones

intracelulares para ser fagocitadas, entonces vamos a ver como es la biognesis de estos compuestos que van a ser fagocitados. La autofagia es un esquema de degradacin lisosomal esencial en la sobrevivencia, diferenciacin, desarrollo y homeostasis celular. Entonces, si la celula tiene compuestos que no le sirven o que pueden ser patgenos, los autofagocitan para mantener la homeostasis. La autofagia tiene un rol de adaptacin para proteger a los organismos contra diversos patgenos, estos incluyen infecciones, cncer, enfermedades cardiacas, degenerativas y envejecimiento. Entonces cules son los estadios para la formacin de estos autofagosomas? Primero es la elongacin de las vesculas nucleares luego la elongacin de estas estas vesculas y la fusin de una doble membrana (o sea el autofagosoma que es una doble membrana, como las membranas de las mitocondrias) con la formacin del autolisosoma El rol principal de este mecanismo homeosttico es asegurar la sobrevivencia celular en condiciones adversas. Estas incluyen ausencia de nutrientes, ausencia del factor de crecimiento, acumulacin de proteinas toxicas y fallas de los organelos (ejem. Mitocondria o infecciones por patgenos) Aqu est como la celula autofagia, como se forma, cual es el proceso de formacin de las vesculas que van a contener los compuestos que van a ser autofagados. Entonces tenemos una membrana aislada de procedencia desconocida. Se forma como un tipo II y es donde se van a ir incorporando las diferentes estructuras o molculas que la clula necesita destruir, por ejem. se ve una mitocondria. Esa doble membrana va creciendo y luego se va a cerrar, una vez que cierre aqu van a recibir tambin las diferentes enzimas/protenas que van a realizar el proceso de fagocitosis a travs de la red de trans Golgi van a llegar a estos autofagosomas, entonces esta membrana cerrada con el contenido que va a ser fagocitado se llama AUTOFAGOSOMA. Este autofagosoma ya con un poco de los productos de la trans Golgi se va a juntar con el lisosoma y ah se va a completar la degradacin por diferentes enzimas entonces estamos viendo que es diferente a la endocitosis o a la proxitosis externa? Aqu simplemente se van a formar compuestos o estructuras vesiculares de doble membrana que van a integrar a los compuestos que van a ser degradados. Aqu tenemos una vista para ver como es el aspecto celular, molecular y fisiolgico de la autofagia. Lo que est al centro es simplemente la formacin de la vesicula, la elogancion y el inicio de la accin de algunas enzimas para luego unirse con los lisosomas y completar la desturccion de las moleculas. Todos son productos de la celula. Este proceso tiene activadores e inhibidores, entonces en los inhibidores hay uno que se llama Tolquinasa? por que tiene fosforo, que es lo que hace? Como inhibe? Fuente a factores de crecimiento como la insulina que ingresa esta de complejo va a ser inactivado por otro tipo de enzima llamado T134 tambein hay activadores que constituyen un grupo de diferentes tipos de protenas que van a participar inhibiendo a nivel de cualquiera de los procesos ya sea formacin de vescula o elongacin de ella o cuando ya se est cerrando la doble membrana. Entonces la regulacin de la induccin de la o sea de las

que van a participar induciendo la formacin de la vescula son este grupo de protenas/enzimas, se llaman ATG, pero son diferentes tienen diferentes nmeros. Estas van a activar la nucleacin de las vesculas. Hay otro grupo de enzimas que va a participar activando la elongacin, estos son por ejemplo en los mamferos es dado por la protena llamado LC3 LC2, entonces cuando hay por ejemplo necesidad, las ATG comienzan a degradar protena (momento de hambre celular o starvation) entonces se promueve la degradacin de protenas para poder liberar amino cidos a nivel celular. Cules son las funciones de esta autofagia? La provisin de nutrientes durante el catabolismo (fusin homeosttica) La generacin de ATP cuando hay hambre celular Las seales de remocin de clulas autopicas La adaptacin al stress Degradacin de protenas mal conformadas Remocin de organelas que estn muertas Estabilidad del genoma

Entonces aqu estamos viendo cuales seran las funciones principales y como estas se controla. Entonces hay un aspecto que promueve la autofagia y otras protenas que van a inhibir Hay diferentes tipos de protenas que hacen esto, aqu estamos poniendo el ejemplo de algunas que son las ms divulgadas. Aqu es el mismo proceso de forma ms esquemtica, cuando hay una autofagia pero rodeadas por las chaperonas que son las que se encargan de descartar a las protenas que la celula no usa y las van a introducir a los lisosomas. Y la micro autofagia que con compuestos ms pequeos, pero aqu estamos viendo que al autofagia va a ser promovida para que se hagan las vesculas y se promueva la destruccin de estos compuestos. Aqu est la lista de compuestos que pueden promover la autofagia. Cules son las alteraciones en los diferentes estadios de la autofagia, que van a tener diferentes consecuencias? Cuando se incrementa el rango de la autofagia, puede suceder por el stress, pero tambin para proteger a celula de elementos dainos son autofagados, etc. Cuandose reduce la autofagia? Cuando hay neurodegeneracion y van a disminuir la destrucion y puede producir neurodegeneracione spor esos compuestos que no estan siendo destruidos, envejecimiento y la degeneracin del musculo cardiaco. Y cuando decrece esta frecuencia de la formacin de las autofagosomas entonces van a producirse degeneracin de tejijos en el envejecimiento en la estabilidad del genoma. Estas son las consecuencias fisiologias que se mostraran alterando la frecuencia de autofagia.

Se tiene en la calidad de la protena, autofagia con toda la autofagia, con toda la calidad de la protena y neurodegeneracion. Ustedes saben cundo se habla del Parkinson o del Alzheimer, siempre estn relacionados con la acumulacin de protenas que no han sido degradadas. La Autofagia en la Inmunidad innata y en la inmunidad adaptativa, cuando hay inmunidad innata entre un organismo extrao/patgeno (chenofabia) se va a comenzar a formar una endocitosis y se incorpora a ese autofagosoma que est en formacin y luego vienen los lisosomas y lo degradadn pero si entra un virus el virus dentro de autofagosoma de puede replicar y esta replicacin puede ser copiada por las TR7 (proteinas del sis inmunlogico) y entrar a formar un tipo de inmunoglobulina (el fife?) Otra forma seran las clases de antgenos que seran mediadas por chapeonas. Aqu tambin se autofaga y se forma unos pptidos que tambin estimulara la degradacion por tipo de chaperonas Aqu en la lista del microscopio electrnico de los lisosomas, est ms resaltado. Lisosomas puntos blancos para ver el tamao dentro de una celula. La clula tiene otra forma tambin de degradar compuestos y entre ellas estan la degradacion de protenas intracelulares por el sistema coteosoma ubiquitin. Ya han escuchado hablar de las ubiquitinas, son moleculas pequeas proteinas. Enronces en la degradacion de proteina estan las caractericas de las proteinas intracelulares y los mecanismos bioqumicos. La sintesis es un sistema que pertenece al orden cero (tema de reaccin de orden cero) por que la sintesis por mas que ustedes le entreguen sustrato tiene un lmite por que las enzimas tienen un sitio activo y solo llegan a copar esos sitios activos. Pasado eso por ms que el sustrato incremente no habr mas sintesis esto se le llama sistema de orden cero. Siempre con gasto de ATP. Sistema de primer orden, hay una alta produccin de sustrato pero este ser degradado, hay entrada como salida de producto. A ese sistema de primer orden involucra a la degradacin de las protenas celulares por el sistema SPU? Entonces hablando un poco mas sobre la degradacin intracelular de protenas, es un proceso altamente regulado, la velocidad de allegacion de proteinas incrementa o disminuye bajo ciertas condiciones tanto fisiolgicas como patolgicas, por ejemplo cuando hay una fiebre, que sucede? Siempre habr un desgasto mayor de protenas. La degradacin de protenas intracelular es un proceso regulado entonces regula eventos celulares controlando los niveles de las protenas mas importantes. Las protenas no se producen por que si, simplemente hay un nivel que las protenas van a ser controladas. Como es que se controlan? Como es este sistema SPU? Bueno aqu solamente para indicarles la importancia clnica, todas estas degradaciones de protenas estn involucradas con enfermedades degenerativas como el alzheimer que se forma por la acumulacin del beta miloi? Del tau, parkinson, ALS, etc. Entonces todo esto por que hay acumulacin. Proteinas con tiempo de vida media pueden cambiar sus concentraciones con mayor rapidez que aquellas con tiempo de vida larga.

El rol fisiolgico de la degradacin intercelular hepatina? Control de calidad Proceso de antgenos Regulacin de funciones celulares Adaptacin de estados fisiolgicos y patolgicos Mecanismos bioqumicos en la degradacin intracelular de protenas: Las clulas tienen diversos sistemas para la degradacin de protenas y el que estamos hablando ahora que es el sistema ubiquitin protiosoma, el sistema lisosomal y las captasas (relacionados con la apoptosis que es la muerte celular) El modelo ubiquitin protiosoma para la degradacin intracelular de protenas tiene dos fases: Primero modificiacion del sustrato por ubiquitin y la segunda que es la degradacin del sustrato por el sustrato. Al hablar de ubiquitin hablamos de ubicacin, ah tenemos una estructura de una molecula de ubiquitin, son protenas bastante pequeas. Es una molecula proteica que esta involucrada en la degradacin de protenas en el sistema SPU (Sistema Proteosoma Ubiquitin). La ubiquitina es una protena conformada de 76 amino acidos, de peso molecular de 8000, altamente conservado y altamente distribuido. Tiene un terminal de glicina que tiene expuesto su lado carboxlico, se ve una colita, esto es el terminal de glicina que sirve para pegarse a las enzimas activadoras esas enzimas son diversas y hacen que se pueda incorporar esas ubiquitinas a las protenas que van a ser degradadas le dara una conformacin especial y que solamente asi lo podr reconocer el proteosoma. Diversos organismos que contienen ubiquitina. Los procariontes no contienen ubiquitina. Al comienzo si dijeron que haban ubiquitinas por que estaban trabajando con bacterias pero despus se dieron cuenta que el caldo que estaban usando era de levaduras y que las levaduras le haban dado las ubiquitinas a las bacterias. Las ubiquitinas trabajan, se ligan a las enzimas que aparecen ah con dif nmeros. Primero se uno a la enx\zima 1 que es la activadora. Esta enzima se la pasa a la enzima 2 y esta se junta con la enzima 3 y van a ligar otras ubiquitnas mas al sustrato. Como se ve aqu el sustrato esta en rojo y el lado extremo azul. Ese sustrato que tiene un extremo azul con nombre de degron sirve para identificar la seal para saber la protena que va ser degradada (esto le da especificidad). No cualquier protena ser degradada, solo la que encaja en el lugar de reconocimiento del proteosoma. Aqu tenemos el proteosoma que es protenas en hlice y que estn hechos por 4 helices de una forma apiada. Helices alfa, protenas alfa tienen el sitio activo para degradar a las protenas que estn en el centro (se llaman P20, las dos) las otras protenas son beta y estn al extremo del tubo y son las que reconocen a las protienas que ingresan, lo captan por ese exteme y pueden atravesar como un tubo

hacia el interior de la molecula del proteosoma. Entonces que es un proteosoma? Es un compuesto hecho por 4 moleculas en aspa hlices, dos alfa (al centro) y dos betas (al extremo). Entonces, ya tenemos a la protena que ha sido marcada, ubiquitinada y tiene que pasar por el tubito que es el proteosoma. Primero ser reconocido por los hlices beta (P19) que estn a los extremos y luego ser degradado por la porcion alfa (P20). La protena sufre protelisis con perdida de ATP. Se ha gastado dos ATP , uno al comienzo para activar a la ubiquitna (ubiquitinar) y la seugnda para poder entrar al sis proteosomico y sea degradado en diferentes pptidos y aa mientras que las ubiquitinas, solas como mono ubiquitines, salen para que sean utilizados por la celula. Para esa degradacin de protena por ubiquitina hay sistemas celulares que activan y otras que inhiben entonces el conocimiento de esas activadores o inhibidores a producido al mercado reconocer nuevos sistemas de inhibicin por ejemplo o de activacin y por eso tenemos el BELCADE que sirve para el tratamiento del cncer. La apeptosis, que es un sistema de degradacin intracelular, esta relacionado con la muerte celular programada, no hay lesin del medio de donde esta clula, sola se va reduciendo para luego ser tratada por los macrfagos o por lisosomas pero no sufre. La apeptosis es un mecanismo de la celula para dar forma. Durante el desarrollo del sistema neurolgico mueren muchas clulas hasta llegar a la madurez con un nmero mucho ms pequeo de neuronas. Existen dos formas de morir Uno por apoptosis y la otra es por necrosis cuando hay lesin. Cuando hay lesin es una forma de sufrir por que esa muerte celular se hincha, se llena de liquido, etc, Afecta a todo el medio de la celula, en cambio la apoptosis no, nada se ve afectado, solo la celula. La muerte celular ocurre cuando es necesario eliminar clulas por que son dainas para el organismo o tambin cuando hay infecciones. No todo es crecimiento para llegar a la maduracin (ejemplo de la cola cada del renacuajo). En el ciclo menstrual es lo mas evidente. Cuando las clulas sufren dao por quemaduras siempre se origina la necrosis (leer diapos). Siempre hay inflamacin. La diferencia entre la apoptosis y la necrosis es que la apoptosis gasta ATP, cuya energa es utilizada para la activacin de una enzima llamada CASPASAS, cuya activacin es en cascadas y producen los efectos que se pueden ver en la celula. Existen dos bases para la iniciacin de la apoptosis: Seales internas, implicadas en la membrana mitocondrial, retculo endoplasmtico y la envoltura nuclear. Se trata de un balance entre protenas BCL2 Y BAC?

y seales externas, compromete al FAS y el resultado del factor de necrosis tumular son receptores expuestos a la superficie de la celula que al ser estimulado produce activacin de la caspasa 8 y se inicia el proceso de muerte celular, esto se da cuando hay necrosis. La apoptosis es silenciosa y los productos son recogidos por los macrfagos que van a fagocitarlos y destruirlos. Parte molecular (leer diapos) Ellos descubrieron que este nematodo durante su desarrollo tenia 1090 celulas de las cuales 131 fueron destruidas. Y esta destruccin estaba dada por genes que el llamo SED 4 Y SED 3 que inducian entonces la apoptosis. El SED 9 inhibia la apoptosis entonces ellos vieron que estaban involucradas protenas que iban a inhibir e inducir la apoptosis. Como es que actan estas capasas para poder llegar a una formacin apoptica. Aqu esta involucrado el citocromo C, el citocromo C se encuentra en las membranas de las mitocondrias. Este Citro C puede salir al medio ambiente celular cuando la mitrocondria llega a envejecerse o por otro medio se pierde esa barrera de la memebrna y entonces puede salir el Citocromo C. Hay un molecula que se llama BCL, reguladda por citoquiminas y hormonas, que son los guardianes de los citrocromos,pero pueden ser alteradas y se produce la liberacin del Citocromo C , que se junta con una protena llamada APAF 1 factor de formacin de la apoptosis, se junta y luega activa a las caspasas se llaman asi por que son protenas que tienen gran cantidad de cistena y acido glutmico en su sitio activo. Ah se pega el citocromo C y APAF, y este complejo va a estimular la actividad de la caspasas, son protenas no activas, se tienen que desprender de una parte de los extremos para poder ser activas, entonces esa funcin tiene el completo citrocomo C apaf. Una vez que se activo una caspasa entonces va a entrar a activar a otra caspasa como la numero 8 y todas entran a conformar el centro que se llama apoptosoma, el cual induce para que otras molculas de caspasas sean activadas. La activacin de las caspasas da a realizar el proceso de la muerte celular. Por ejemplo que en la celula el ADN es daado el P53 uque es un gen estimula la activacion de la caspasa, cuando esa caspasa se activa viene el catabolismo del citoesqueleto celular por lo tanto se quiebra toda la membtrana celular y tambien el ADN entonces inhibe la presencia de las ADNasas y viene la muerte celular. Hay otros inhibidores de la actividad de caspasas como por ejemplo los linfocitos citoliticos CTL que presentan ligandofas que se ligan al DC178 para indicar la muerte celular (pero en la superficie) como en el caso de una celula infectada por un virus. Cuando no hay apoptosis o una difcil activacin de la caspasa se ve afectado el sistema autoinmune y viene la enfermedad del cncer. El exceso de apoptosis produce enfermedades neurodegenerativas. Las caspasas tambin se activan por un sistema SMACK y son luego en el apoptosoma activados para poder degnerar a los compuestos de la celula. En la foto del cerebro de un raton se ve como la caspasa 3, 9 y cuando participo solo el APAF 1 mutante.