Mecanismos efetores da imunidade humoral A imunidade humoral mediada por anticorpos secretados e sua funo fisiolgica a defesa contra

ra microrganismos extracelulares e toxinas microbianas. O que contrasta com a imunidade mediada por clulas, que feita pelos linfcitos T e atua para erradicar microrganismos que infectam e vivem dentro das clulas do hospedeiro. Os microrganismos combatidos pela imunidade humoral: bactrias extracelulares, fungos e vrus alvos de anticorpos antes de infectarem as clulas ou aps serem liberados das clulas infectadas. Para isso o sistema humoral se utiliza dos fagcitos e de protenas do sistema do complemento. Os anticorpos so produzidos por linfcitos B e plasmocitos nos rgos linfoides e na medula ssea, mas eles desempenham suas funes efetoras em locais distantes daqueles nos quais foram produzidos. Vo do bao, linfonodos e medula ssea, via sangue, para qualquer lugar onde o antgeno esteja localizado. 1 exposio: ativao de linfcitos B naives e sua diferenciao e clulas produtoras de anticorpo e clulas de memoria. Exposio subsequente: ativao de clulas B de memoria e uma resposta do anticorpo maior e mais rpida O sistema imunolgico humoral especializado de tal modo que diferentes exposies a microrganismos ou antgenos estimulam a troca de clulas B para os istipos Ig que so melhores para combate-los. Os principais estmulos para essa troca de istipo durante o processo de ativao de clula B so as citocinas derivadas de clulas T auxiliares juntamente com o ligante de CD40 expresso nelas. Diferentes tipos de microrganismos estimulam o desenvolvimento de clulas T auxiliares, tais como os subconjuntos de Th1 e Th2 , que produzem diferentes tipos de citocinas que induzem a troca de clulas B para isotipos diferentes. Vrus e bactrias: estimulam Th1 e a produo de IgG dependentes de Th1 que se ligam aos fagcitos e clulas NK e ativam o complemento. Parasitas helmnticos: estimulam Th2 e a produo de IgE dependente de Th2 que ativa mastcitos e eosinfilos. Obs: eosinfilos so especialmente potentes na destruio de helmintos. Neutralizao de microrganismos e toxinas bacterianas: os anticorpos ligando-se a eles bloqueia a ligao deles com os receptores celulares e assim inibem ou neutralizam a infectividade deles. A neutralizao requer somente a regio de ligao do antgeno ao anticorpo podendo ser mediada por qualquer istipo na circulao e nas secrees mucosas. A maioria dos anticorpos neutralizantes do sangue composta pelo istipo IgG e nas mucosas, IgA. Os mais eficientes so os que possuem maior afinidade pelo seu antgeno, e os de alta afinidade so produzidos pelo processo de maturao por afinidade. Um dos mecanismos que microrganismos desenvolveram para escapar dos anticorpos mutao no seus receptores de superfcie que so reconhecidos por eles. Opsonizao e fagocitose: os anticorpos do istopo do IgG opsonisam microrganismos e promovem a sua fagocitose pela ligao aos receptores Fc nos fagcitos. Os fagcitos ingerem os microrganismos e expressam uma variedade de receptores de superfcie que se ligam diretamente aos microrganismos e podem ingeri-los mesmo sem anticorpo proporcionando um mecanismo da imunidade natural. Quando ocorre a imunidade humoral h a ligao dos receptores Fc da superfcie com os anticorpos IgG. Os receptores Fc dos leuccitos promovem a fagocitose de partculas opsonizadas e liberam sinais que estimulam as atividades microbicidas dos leuccitos. Deles, o mais importante para a fagocitose de partculas opsonizadas o Fcy. ADCC (citotoxidade mediada por clulas dependente de anticorpos): as clulas NK e os leuccitos se ligam a clulas recobertas por anticorpos por meio dos receptores Fc e destroem essas clulas. As clulas NK usam seus receptores FcyRIII para se ligar as clulas

recobertas por anticorpo. Esse receptor se liga a molculas de IgG agrupadas e por isso a IgG livre, circulante no plasma no ativa as clulas NK.

O Sistema do complemento Esse sistema consiste em protenas sricas e de superfcie celular que interagem umas com as outras e com outras molculas do sistema imunolgico de uma maneira altamente regulada para gerar produtos que eliminem os microrganismos. So protenas plasmticas normalmente inativas, pois so ativadas sob condies particulares para gerar produtos que medeiam varias funes efetoras. Essa ativao envolve a protelise sequencial de protenas (zimognios) para gerarem complexos enzimticos recm-agrupados com atividade proteoltica. Como as protenas do complemento s se tornam ativas de forma estvel depois que so ligadas aos microrganismos e aos anticorpos, as funes biolgicas do sistema do complemento so limitadas s superfcies das clulas microbianas ou a locais de anticorpos ligados antgenos e, assim, no ocorrem no sangue. A ativao do complemento inibida por protenas reguladoras que esto presentes nas clulas do hospedeiro normal e ausente nos microrganismos. Vias da ativao do complemento A via clssica ativada por certos istipos de anticorpos ligados a antgenos, a via alternativa ativada na superfcie das clulas microbianas na ausncia de anticorpos e a via da lectina ativada por uma lectina plasmtica que se liga a resduos de manose nos microrganismos. Todas essas vias resultam na gerao de complexos enzimticos que so capazes de clivar a protena mais abundante do complemento, a C3. As vias alternativa e da lectina so mecanismos efetores da imunidade inata, e a via clssica da imunidade humoral. O evento central na ativao do complemento a protelise da protena C3 do complemento para gerar produtos biologicamente ativos. A ativao do complemento depende da gerao de dois complexos proteolticos, a convertase C3 que cliva o C3 em dois fragmentos proteolticos denominados C3a e C3b, e a convertase C5, que cliva o C5 em C5a e C5b. (Obs: a o menor e b o maior) o C3b se liga covalentemente superfcie da clula microbiana ou s molculas de anticorpo no local da ativao do complemento. Todas as funes biolgicas do complemento so dependentes da clivagem proteoltica de C3. Por exemplo, a ativao do complemento promove a fagocitose porque os leuccitos e certas populaes de macrfagos fixados expressam receptores para C3b. A prpria C5 convertase se agrega depois da gerao precedente de C3b e contribui para a inflamao (C5a) como para a formao de poros nas membranas dos alvos microbianos. As vias de ativao diferem no modo como o C3b produzido, mas obedecem a uma sequencia comum de reaes aps a clivagem de C5. A via alternativa Essa via resulta na protelise de C3 e na ligao estvel de seu produto de quebra C3b s superfcies microbianas, sem um papel para o anticorpo. A protena C3 contm um domnio tioster. Quando ela clivada, a protena C3b se altera conformacionalmente e o domnio tioster se abre expondo a ponte tioster reativa previamente oculta. Normalmente, a C3 clivada numa taxa lenta para gerar C3b (C3tickover). Essa pequena quantidade de C3b se liga covalentemente superfcie das clulas, incluindo microrganismos. Se essas ligaes no so formadas o C3b permanece na fase fluida, e sua ligao tioster exposta e reativa rapidamente hidrolisada e torna a protena inativa. Com isso, o complemento no ativado. Quando o C3 sofre sua muito dramtica alterao conformacional ps-clivagem, causando a expulso do domnio tioster, um local de ligao para a protena plasmtica

chamado fator B tambm exposto na protena C3b que agora covalentemente preso superfcie de uma clula microbiana ou hospedeira. O fator B clivado por uma serina plasmtica, o fator D que libera um fragmento menor, o Ba e um maior o Bb que permanece ligado ao C3b. Esse complexo C3bBaBb a convertase C3 da via alternativa e funciona para clivar mais molculas de C3 formando assim uma sequencia de amplificao. Algumas molculas C3b geradas pela convertase C3 da via alternativa se ligam convertase em si. Isso resulta na formao de um complexo que contem uma porcao Bb e duas molculas de C3b, o qual funciona como a convertase C5 da via alternativa, para clivar C5 e iniciar as etapas tardias da ativao do complemento. Via clssica iniciada pela ligao da protena do complemento C1 aos domnios CH2 da IgG ou aos domins CH3 das molculas de Igm que se ligaram ao antgeno. Dos anticorpos IgG, IgG3 e IgG1 so os ativadores mais eficientes do que as outras subclasses. A C1 um complexo multimrico proteico grande formado por subunidades C1q, C1r e C1s; a C1q se liga ao anticorpo e C1r e C1s so proteases. Cada regio Fc da Ig possui um nico local de ligao com a C1q, e cada molcula C1q deve se ligar a duas cadeias pesadas de Ig para ser ativada; isso explica porque os anticorpos ligados aos antgenos, e no os livres, podem iniciar a via clssica do complemento. Mltiplas molculas de IgG devem ser reunidas proximamente para que o C1q possa se ligar, j com a IgM diferente, apenas um antgeno ligado a ele permite que o C1q se ligue sua regio Fc. Sendo assim IgM um anticorpo mais eficiente na ligao ao complemento. A ligao do C1q s regies Fc da IgG ou IgM leva a ativao da enzima C1r, a qual cliva e ativa a C1s. A C1s cliva a C4 para gerar C4b (o C4 homlogo ao C3 e o C4b possui uma ponte tioster interna como em C3b que forma ligaes covalentes com o complexo antgeno anticorpo e com a superfcie adjacente da clula a qual o anticorpo est ligado). A prxima protena, C2, ento se complexa com o C4b ligado superfcie celular, e clivada por uma molcula C1s vizinha para gerar um fragmento C2b solvel e um maior C2a que permanece associado ao C4b. O complexo resultante C4b2b a convertase C3 da via clssica que se liga e cliva C3 proteoliticamente (a ligao ao C3 mediada pelo C4b e a protelise pelo C2b). Com isso, C3 clivado gerando C3b e C3a. C3b depositado, pode se ligar ao fator B e gerar mais convertase C3 pela via alternativa tambm! Resumindo: C3 na via alternativa homlogo ao C4 e o fator B homlogo ao C2. Algumas das molculas C3b geradas pela convertase C3 da via clssica se ligam convertase (como na via alternativa) e formam um complexo C4b2b3b que funciona como a convertase C5 da via clssica que cliva C5 e inicia as ultimas etapas do complemento. Via da lectina A ativao do complemento feita na ausncia da ligao de anticorpo pela ligao de polissacardeos microbianos a lectinas circulantes, como a MBL. Essas lectinas se assemelham estruturalmente C1q. A MBL se liga a resduos de manose nos polissacardeos e tambm se liga a serinas proteases associadas a MBL (MASPs), como MASP1, MASP2 e MASP3. Oligmeros de mais alta ordem da MBL se associam tipicamente a MASP-2 e MASP-3. Estas duas proteases formam um complexo tetramrico similar quele formado por C1r e C1s, e MASP-2 cliva C4 e C2. As demais etapas desta via so as mesmas da via clssica. Etapas tardias da ativao do complemento As convertases C5 iniciam a formao dos ltimos componentes do sistema do complemento que culmina na formao do complexo de ataque membrana (MAC).

O C5 clivado em C5a e C5b. o C5b permanece ligado s protenas do complemento depositadas na superfcie celular. Os demais componentes C6, C7, C8 e C9 so componentes estruturais sem atividade enzimtica. O C5b mantem uma conformao transitria capaz de ligar as protenas seguintes C6 e C7. O complexo resultante C5b,6,7 hidrofbico e se insere na camada lipdica e se torna um receptor de alta afinidade para C8. O C8 se liga ao complexo e forma um heterodmero, C5b,6,7,8. Esse complexo C5b,6,7,8 possui uma capacidade limitada de lizar clulas. A ligao do componente final, a protena srica C9 forma um MAC completamente ativado. Ele forma poros na membrana permitindo a livre entrada de agua e ons o que resulta em edema osmtico e ruptura da superfcie das clulas em que o MAC est depositado. Receptores das protenas do complemento Muitas das atividades biolgicas do complemento so mediadas pela ligacao de fragmentos do complemento a receptores de membrana expressos em vrios tipos celulares. CR1: receptor de complemento tipo 1que funciona principalmente para promover a fagocitose de partculas recobertas por C3b e C4b e a eliminao de complexos imunes da circulao. Expresso em neutrfilos, moncitos, eosinfilos e linfcitos T e B. Os fagcitos usam esse receptor para se ligar e internalizar partculas opsonizadas com o C3b e C4b; o que ativa mecanismos microbicidas nos fagcitos. CR2: estimula as respostas imunes humorais por acentuar a ativao da clula B pelos antgenos e por promover a captao dos complexos antgeno-anticorpo nos centros germinativos. Presente nos linfcitos B, clulas dendrticas foliculares e algumas clulas epiteliais. Liga-se especificamente aos produtos de clivagem de C3 (C3d, C3dg e iC3b). CR3/Mac-1: integrina que funciona como um receptor para o fragmento iC3b gerado por protelise de C3. Expresso em neutrfilos, fagcitos mononucleares, mastcitos e clulas NK. Nos neutrfilos e moncitos promove a fagocitose de microrganismos opsonizados com iC3b; alm disso, reconhece bactrias diretamente para fagocitose pela ligao a algumas molculas microbianas desconhecidas. SIGN-R1: lectina tipo da superfcie celular dos macrfagos que reconhece polissacardeos pneumoccicos e tambm se liga ao C1q. Regulao da ativao do complemento A ativao da casacata do complemento e a estabilidade das protenas ativas do complemento so firmemente reguladas para evitar a ativao do complemento em clulas normais do hospedeiro e para limitar a durao da ativcao com complemento mesmo em clulas microbianas e complexos antgeno-anticorpo. A regulao do complemento mediada por varias protenas circulantes e de membrana celular. Muitas dessas protenas, bem como varias protenas das vias clssica e alternativa, pertencem a uma famlia chamada reguladores da atividade do complemento RCA. Diferentes mecanismos reguladores inibem a formao das convertases C3 nas etapas iniciais da ativao do complemento, quebram e inativam as convertases C3 e C5 e inibem a formao de MAC nas etapas tardias da via do complemento. Via clssica 1. Inibidor de C1 (C1 INH): liga-se ao C1r ou C1s. a C1 INH clivada e se torna covalentemente ligada a C1r e C1s e como resultado ocorre a dissociao do tetrmero C1r e C1s de C1q paralisando a ativao pela via clssica. Com isso, evita-se o acumulo de C1r e C1s enzimaticamente ativos no plasma e limita o tempo de atividade deles. 2. Inibidor da C3 convertase (C4b2b) A reunio dos componentes das convertases C3 e C5 inibida pela ligacao de protenas reguladoras a C3b e C4b depositadas nas superfcies celulares. A C3b depositada na superfcie

das clulas normais est ligada por varias protenas de membrana como MCP, CR1, DAF ou fator H. Assim como o C4b ligado pelo DAF, CR1 e C4BP. Pela ligao a C3b ou C4b, essas protenas inibem competitivamente ligao de outros componentes da convertase C3, tais como Bb da via alternativa e C2b da via clssica, bloqueando assim a progresso adicional da cascata do complemento. O fator H inibe a ligao de apenas Bb a C3b e assim, um regulador da via alternativa, mas no da via clssica. Desse modo, tais reguladores do complemento inibem seletivamente a ativao do complemento em clulas do hospedeiro e permitem que a ativao do complemento prossiga em microrganismos. A C3b associada clula proteoliticamente degradada por uma serina protease plasmtica chamada fator I, a qual ativa apenas na presena de protenas reguladoras. MCP, fator H, C4BP e CR1 servem como co-fatores para a clivagem de C3b (e C4b) mediada pelo fator I. a) Inibidor da formao/dissociao liga-se ao C4b C4BP protena de ligao ao C4 CR1 receptor do complemento 1 DAF fator acelerador da degradao b) Clivagem do C4b Fator I. Co-fatores: C4BP, CR1, MCP (protena co-fator de membrana) Complexo de ataque membrana CD59 (protectina): inibe a ligao do C9 ao C5b-8 Protena S: liga-se ao complexo C5b-7 solvel prevenindo a insero em membranas celulares prximas aos stios onde est havendo ativao do complemento.

Funes do complemento Opsonizao e fagocitose: os microrganismos nos quais o complemento est ativado pela via alternativa ou clssica se tornam recobertos com C3b, iC3b ou C4b e so fagocitados pela ligao destas protenas a receptores especficos nos macrfagos e neutrfilos. C3b e iC3b atuam como opsoninas que se ligam aos receptores dos neutrfilos e macrfagos. C3b e C4b se ligam ao Cr1 e iC3b se liga ao Mac-1. A fagocitose mediada por Ceb e iC3b um importante mecanismo de defesa contra infeces da imunidade natural e adquirida. Exemplo: bactrias com capsulas ricas em polissacardeos como o pneumococos e o meningococos mediada inteiramente pela imunidade humoral; alm dos macrfagos da zona marginal que expressam SIGN-R1 que pode se ligar a polissacardeos capsulares e ativar a via clssica independente de anticorpo. Estimulao das respostas inflamatrias: os fragmentos proteolticos C5a, C4a e C3a induzem a inflamao aguda pela ativao dos mastcitos e neutrfilos. Todos os trs peptdeos se ligam aos mastcitos e induzem a desgranulao deles com a liberao de mediadores vasoativos, como a histamina. O C5a o mais potente mediador da desgranulao. Citlise mediada pelo complemento: a lise mediada pelo MAC. A maioria dos patgenos desenvolveu paredes celulares ou capsulas espessas que impedem o acesso do MAC s suas membranas celulares. Solubilizao de complexos imunes: se esses complexos imunes se acumularem no sangue, podem se depositar na parede dos vasos e levar a reaes inflamatrias que destroem o tecido circundante. A ativao do complemento bloqueia a interao Fc-Fc de Ig promovendo assim a dissoluo dos complexos imunes.