TALLER ANALTICA CORPORACION TECNOLOGICA DE BOGOTA ANALISIS INSTRUMENTAL TALLER: CROMATOGRAFIA DE GASES a) Que es la velocidad lineal en CG?

Es la velocidad del gas que circula por la columna correlacionado con el gradiente de presin; se mide por la siguiente ecuacin: u= - (k/) (dP/ dz) u= velocidad lineal en un punto de la columna z=distancia a la entrada de la columna = viscosidad del gas dP= gradiente de presin de un elemento dz= longitud de columna k=constante de permeabilidad. Las respectivas integraciones de la ecuacin permiten obtener una que relaciona el valor de la presin con la posicin de la columna, otra que indica la velocidad media, la compresibilidad o factor de obstruccin Coeficiente de reparto (K) Propiedad termodinmica del sistema soluto-fase estacionaria-fase mvil independiente del proceso cromatogrfico. Concentracin de soluto en la fase estacionaria frente a concentracin de soluto en fase mvil a temperatura constante. Factor de capacidad (k) Depende de las propiedades termodinmicas del sistema (K) y adems es funcin de las caractersticas de la columna en particular. Probabilidad de encontrar una molcula determinada de soluto en la fase estacionaria o en la fase mvil Relacin frontal (Rf) La relacin frontal y el factor de capacidad son dos maneras de medir el mismo fenmeno. Representa la relacin entre las velocidades medias del soluto y la fase mvil en su recorrido por la columna. Tiempo muerto ( tm) Es el tiempo de retencin de una sustancia insoluble en la fase estacionaria (K=0).5 Volumen de retencin (VR)

Es el volumen de fase mvil necesario para transportar el soluto de un extremo a otro de la columna. Se denomina volumen de retencin neto al volumen verdadero y corregido, el cual se obtiene a partir de la ecuacin que involucra adems la compresibilidad del gas portador. El volumen de retencin especfico est delimitado por la temperatura. Retencin relativa (rx:p) Conservan las propiedades del coeficiente de reparto y son fciles de calcular, su manejo se dificulta al momento de elegir un patrn adecuado. Se utiliza para disminuir el efecto de errores, sobre todo, en el conocimiento del peso de la fase estacionaria en la columna. Resolucin Cada sustancia se desplaza a una velocidad caracterstica dada por el valor de su relacin frontal en dichas condiciones. Altura equivalente a una placa terica. Por tratarse de un mtodo donde se separa por elucin es mejor referirse a tiempo de elucin ms que a distancias recorridas. Eficacia Una columna ser ms eficaz mientras mayor sea el nmero de placas tericas que tenga. Para poder hacer comparaciones entre columnas es necesario establecer condiciones similares de trabajo. b) Qu relacin tiene en la CG, la presin de vapor o volatilidad de los analitos con la velocidad lineal con la que estos atraviesan la columna? La medida y control del flujo del gas es esencial para lograr una buena eficiencia de separacin de la columna y para el anlisis cualitativo de las mezclas. La eficiencia de una columna depende de la velocidad lineal del gas, al cual se puede determinar fcilmente cambiando la velocidad de flujo hasta lograr el mximo nmero de platos (mejor resolucin) Para el anlisis cualitativo de mezclas es esencial tener una velocidad de flujo constante y reproductible de forma que los tiempos de retencin tambin sean reproductibles. El primer sistema de control de flujo est representado por los reguladores de dos etapas conectados a los cilindros de gas , necesarios para reducir la presin del cilindro desde aprox. 2500 psi a un nivel de 20-60 psi. Para cromatografa gaseosa isoterma (temperatura del horno constante durante toda la corrida), la presin de entrada constante es suficiente para tener una velocidad de flujo constante, asumiendo que la columna produce una cada de presin constante.

c) Establezca las caractersticas de los analitos que se pueden analizar por CG y justifique su respuesta. La cromatografa de gases presenta limitaciones en los analitos. compuestos poco voltiles, generalmente los de peso molecular superior a 300 u.m.a. compuestos sensibles a una elevacin de la temperatura incluso moderada (determinados compuestos de inters biolgico) compuestos que se encuentran en forma inica (puesto que son en general poco voltiles) Por esta razn, la cromatografa de gases se emplea cuando los componentes de la mezcla problema son voltiles o semivoltiles y trmicamente estables a temperaturas de hasta 350-400C.

d) Qu diferencia hay entre velocidad lineal y caudal?. Como se modifican estos valores con el dimetro interno de las columnas? Velocidad lineal es: Velocidad de una partcula transportada por una corriente en movimiento, que normalmente se expresa en centmetros por segundo. La determinacin de la velocidad lineal es un parmetro que se usa en la cromatografa de gases para mejorar en muchos casos su eficiencia. Velocidad caudal: Es la cantidad de fluido que pasa en una unidad de tiempo. Normalmente se identifica con el flujo volumtrico o volumen que pasa por un rea dada en la unidad de tiempo. Menos frecuentemente, se identifica con el flujo msico o masa que pasa por un rea dada en la unidad de tiempo. Los valores se modifican en las columnas dependiendo de dimetro y longitud. Dependiendo del dimetro ya que si el dimetro es muy pequeo la mitad del fluido pasara a travs de ella a diferencia si el dimetro es ms grande, esto se debe a que el agujero de la columna es muy pequeo y el fluido no pasa con la presin adecuada. Tambin varia segn la longitud de la columna, ya que si la columna es demasiado larga parte del fluido se quedara en el interior, por ello se debe tener una longitud de la columna adecuado para el analito a analizar

e) Enumero y de una breve explicacin de los factores que gobiernan las separacin de analitos en CG. Temperatura: La temperatura de la columna debe ser posible de cambiar a voluntad, en lo posible de forma programada. La programacin de temperatura variable puede usarse para mejorar la separacin, como los gradientes de solventes en HPLC. Una temperatura apenas arriba del promedio de los puntos de ebullicin de la muestra suele dar tiempos de elusin razonables (2-30 min). Para muestras con analitos de rango amplio de volatilidad casi siempre hay que usar temperatura programada. Detectores: Buena sensibilidad, Buena estabilidad y reproducibilidad, Respuesta lineal de varios ordenes de magnitud. Rango de temperaturas de 25C a 400C. Tiempo de retencin: Mientras que los tiempos de retencin son muy variables de acuerdo a la columna y temperaturas empleadas los indices de retencion son bastante independientes de las condiciones de la cromatografa. Esto permite que existan tablas de Indices de retencin para miles de compuestos que facilitan la identificacin de incognitas. Por supuesto, NO ES INFALIBLE ni es una prueba determinante de identidad qumica. Gas portador (Gas Carrier): El gas carrier suele ser He, H2 o N2 . Viene normalmente en un tubo a presin (150 atm) que se conecta con reguladoras de presin, vlvulas aguja (de caudal) y medidores de presin y de flujo. Se le suele poner un filtro con tamiz molecular para eliminar el agua y alguna impureza que el gas pueda tener. Cantidad de muestra Sistema de Inyeccin: la inyeccin debe ser rpida y ocupar lo menos posible en el inicio de la columna (como cuando se siembra en una capa bien fina en una columna separativa manual). Sistema de Inyeccin Split, Splittes. Velocidad Optima de la fase mvil: El control de la velocidad del gas portador a travs de la columna, se realiza por medio de vlvulas que suministan un caudal constante (Columnas Empaquetadas) o que mantienen constante la presin en cabeza de columna (Sistemas Capilares) Columnas: Las empaquetadas (partculas dentro de la columna como en HPLC) y las capilares o abiertas, que solo tienen fase estacionaria en la superficie interior.

f) Como se relaciona el nmero de platos tericos y el dimetro de la columna en CG. Las columnas capilares: Tienen un dimetro interior inferior a 1 mm (320-250 m) y una longitud de 5 a 50m. Suelen construirse con slice fundida que le dan gran resistencia fsica y flexibilidad. Alcanzan una eficacia hasta de 4.000 (platos tericos/m) Seusanpara muestras complejas. La fase estacionaria sedepositada sobre las paredes inter iores deltubocapilar. Las columnas semicapilares tienen un dimetro interior de 530 m que admiten cantidades de muestra similares a las columnas de relleno, y proporcionan mayor eficacia que stas. Entonces, entre mayor es el dimetro de la columna mayor ser el numero de platos tericos y por lo tanto mejor ser la eficacia de la columna, gracias a esto es posible separar mezclas mas complejas y solutos muy parecidos

g) Mediante un grafico ilustre como est conformado un cromatografo de gases.

h) Enumero que clase de Fase Mvil (gas portador) y sus caractersticas se utilizan en CG. El gas portador debe ser un gas inerte, para prevenir su reaccin con el analito o la columna. Generalmente se emplean gases como el helio, argn, nitrgeno, hidrgeno o dixido de carbono, y la eleccin de este gas en ocasiones depende del tipo de detector empleado. El almacenaje del gas puede ser en balas normales o empleando un generador, especialmente en el caso del nitrgeno y del hidrgeno. Luego tenemos un sistema de manmetros y reguladores de flujo para garantizar un flujo estable y un sistema de deshidratacin del gas, como puede ser un tamiz molecular. Generalmente la regulacin de la presin se hace a dos niveles: un primer manmetro se sita a la salida de la bala o generador del gas y el otro a la entrada del cromatgrafo, donde se regula el flujo. Las presiones de entrada varan entre 10 y 25 psi, lo que da lugar a caudales de 25 a 150 mL/min en columnas de relleno y de 1 a 25 mL/min en columnas capilares. Para comprobar el caudal se puede utilizar un rotmetro o un simple medidor de pompas de jabn, el cual da una medida muy exacta del caudal volumtrico que entra a la columna. La pureza de los gases es sumamente importante, se requieren niveles 4.5 o mayores es decir 99.995 % de pureza. Sin embargo, debido al cuidado que se debe tener con la fase activa de la columna, se hace completamente necesario la instalacin de trampas a la entrada del Gas carrier, estas trampas obviamente tienen una capacidad limitada, pero son importantsimas al momento de usar el Cromatografo. Estas trampas evitan el ingreso de Hidrocarburos, agua, CO entre otros. CARACTERISTICAS El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una matriz adecuada para el detector. Un gas portador debe reunir ciertas condiciones: -Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria) -Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa -Fcilmente disponible y puro -Econmico -Adecuado al detector a utilizar

i) Como se expresa la pureza de un gas portador y que clases hay? La pureza del gas portador se determina con frecuencia por el detector, aunque el nivel de sensibilidad necesaria tambin puede jugar un papel significativo. Normalmente, se utilizan grados de pureza de 99,995% o superior. Los grados de pureza ms comunes requeridos por los instrumentos modernos para la mayora de las sensibilidades son 5,0 grados o 99,999% puro, significado que hay un total de 10 ppm de impurezas en el gas portador que podran afectar los resultados.

Los grados de pureza ms altos de uso comn son 6,0 grados, pero la necesidad de la deteccin a niveles muy bajos en algunas aplicaciones forenses y del medio ambiente ha conducido a la necesidad de gases portadores a 7,0 grado de pureza y ahora estos estn disponibles comercialmente. Los nombres comerciales de purezas tpicos incluyen "grado cero", "ultra-alta pureza (UHP) Grado", "4.5 grado" y "5,0 grado."

j) Qu diferencia hay entre un sistema de cromatografa de gases por isoterma y por gradiente de temperatura (rampa de temperatura) La temperatura ptima se determina teniendo en cuenta la resolucin necesaria y el deseo de reducir el tiempo de separacin. Para lograr resultados ptimos, la separacin se verifica a temperatura constante (separacin isotrmica) o con programacin de aumento de temperatura. El aumento de temperatura en el curso de la separacin se llama gradiente de temperatura. En cromatografa de gases un gradiente de elucin implica un gradiente de temperatura. El gradiente puede tener diversas formas. Hay rampas lineales de temperatura o se puede proceder por diversas rampas o mesetas. Este aumento de temperatura permite analizar con puntos de ebullicin y caractersticas muy variables en periodos ms breves. Observe que el gradiente de temperatura es una variacin de temperatura con el tiempo, dT/dt; no es un gradiente de temperatura a lo largo de la columna. La temperatura ms alta en el curso de la separacin no slo depende de la descomposicin de la muestra que se mencion con anterioridad, sino que tambin hay que tener la estabilidad y la presin de vapor de las fases estacionarias lquidas.

11. Qu ventaja en cuanto a la resolucin existe entre los dos sistemas anteriores

Isoterma: cuando el flujo y la presin son constantes, promueven una elucin ms rpida de componentes de alto peso molecular en temperaturas bajas con mejor resolucin. La habilidad para correrlo a la temperatura bajas significativamente la degradacin termal y mejora la longevidad de la columna. Gradiente de temperatura: permite analizar con puntos de ebullicin y caractersticas muy variables en periodos breves. A mayor selectividad mejor resolucin. A mayor numero de platos tericos mejor separacin.

12. Como est conformada una columna para CG. Est formada por un tubo, que puede ser de diversos materiales (preferiblemente inertes), dentro del cual se encuentra la fase estacionaria. Esta puede ser un slido activo (cromatografa gas solido), o con mayor frecuencia un lquido depositado sobre las partculas de un slido portador (columnas empaquetadas o de relleno) o sobre las propias paredes del tubo (columnas tubulares abiertas). COLUMNAS EMPAQUETADAS: Las columnas empaquetadas consisten, en un tubo (normalmente de vidrio o acero inoxidable) con un dimetro interno que vara entre4 2 y 5 mm y de longitud que oscila entre 1 y 15 m, arrollado de una forma adecuada para poderse introducir en el interior del horno del cromatgrafo. En el interior del tubo, se dispone la fase estacionaria bajo la forma de un lquido soportado sobre un material adecuado finamente pulverizado; el dimetro de las partculas del relleno debe ser, al menos, 10 veces inferior al dimetro del tubo, con el fin de conseguir una buena uniformidad en su distribucin. El relleno, se encuentra confinado en el interior del tubo por medio de tapones de algn material poroso (generalmente lana de vidrio o lana de cuarzo). COLUMNAS TUBULARES ABIERTAS Conocidas normalmente como columnas capilares. Formada por un tubo (normalmente de vidrio o slice fundida) de un dimetro comprendido entre 0.2 y 0.8 mm, en cuya pared interna se dispone la fase estacionaria. Segn sea la forma en que se dispone la fase estacionaria sobre la pared del tubo, se distinguen bsicamente dos tipos de columnas. 13. Establezca las diferencias entre una columna empaquetada y una columna capilar para CG En GC se emplean dos tipos de columnas: las empaquetadas o de relleno y las tubulares abiertas o capilares. Estas ltimas son ms comunes en la actualidad (2005) debido a su mayor

rapidez y eficiencia. La longitud de estas columnas es variable, de 2 a 60 metros, y estn construidas en acero inoxidable, vidrio, slice fundida o tefln. Debido a su longitud y a la necesidad de ser introducidas en un horno, las columnas suelen enrollarse en una forma helicoidal con longitudes de 10 a 30 cm, dependiendo del tamao del horno. A. COLUMNA EMPAQUETADA O DE RELLENO: La fase liquida est retenida en un slido inerte (Soporte). Dimetro interior entre 2 y 4 mm Longitud de hasta 2 a 3m Eficiencia de 1000 2000 platos tericos Para muestras poco complejas, 10 componentes La columna esta rellena de un material slido (soporte), finamente dividido y homogneo, recubierto por una capa de F.E. lquida. Enrollada en forma helicoidal, para poder ser instalada en el horno termostatizado. B. COLUMNA CAPILAR: La fase estacionaria se fija sobre las paredes interiores del capilar Dimetro interior menor 1mm Longitudes de 5 50m Eficiencia hasta 4000 platos tericos Para muestras complejas La fase estacionaria se deposita sobre las paredes interiores del capilar 14. Establezca los diferentes tipos y sus caractersticas para columnas empaquetadas

Las caractersticas de los rellenos o columnas empaquetdas son: -Deben ser qumicamente inertes. - Deben tener una cierta resistencia mecnica elevada. - Deben permitir el paso adecuado de las dos corrientes. - Deben permitir un buen contacto entre las dos fases. - Deben ser de costes bajos, es decir, econmicos. La mayora de los rellenos son hechos de material barato, inerte y ligero. 15. Establezca los diferentes tipos y sus caractersticas para columnas capilares a. Columnas capilares rellenas

Se distinguen de las columnas clsicas de relleno por el dimetro interno del tubo, no excede un milmetro. Adems, la relacin entre los dimetros del tubo y de la partcula de relleno es del orden de tres a cinco veces. Esto hace que sea un relleno ms irregular y una permeabilidad del orden de diez veces superior. Longitud de 10-50 m. Dimetro interno de 1 mm. Tamao de la partcula de relleno de 3 a 5 veces Capacidad de carga pequea Relacin de fases grande Permeabilidad mayor que las clsicas Al ser mayor la permeabilidad puede construirse columnas ms largas (10-50 m). Este tipo de columnas no est comercializado, debido a lo difcil de introducir un soporte en un tubo capilar metlico de esa longitud. Por el contrario, es ms sencillo cuando se trata de tubos de vidrio. Se rellena un tubo Prex con el soporte elegido antes de estirarlo, entonces al capilar resultante contiene ya el soporte en su interior. La fase estacionaria se introduce de manera similar a las columnas capilares abiertas. b. Columnas capilares de capa porosa En este caso el soporte es depositado en la pared interior del tubo, despus es recubierto por la fase estacionaria y la parte central del capilar permanece vaca. Longitud de 25-200 m Dimetro interno de 0.1-0.5 mm Tamao de la partcula de relleno vara entre el de un soporte clsico y las partculas de carbono producidas por la pirolisis de una sustancia orgnica. Permeabilidad valores mximos (al igual que las capilares abiertas) El procedimiento depender de la naturaleza de la columna y del soporte. Columna metlica: se prepara una suspensin del soporte, se llena la columna con la suspensin, se cierra un extremo y se evapora el agente dispersante quedando as adheridos a la pared del capilar. Columna de vidrio: similar al de columnas capilares rellenas. La diferencia consiste en introducir una varilla de acero inoxidable un el tubo de vidrio y situar el soporte entre ambos. Despus se procede al estirado manteniendo fija la varilla. c. Columnas capilares abiertas

Tambin conocidas como columnas Golay, quien fue el primero en utilizarla (Golay, 1958). La fase estacionaria va depositada en la pared interior del tubo que acta como soporte. Longitud hasta 200 m, los ms utilizados varan entre 50-100 m Dimetro interno 0.1-0.5 mm Capacidad de carga muy pequea Relacin de fases es la ms alta Debido a la pequea cantidad de fase estacionaria por unidad de longitud de la columna tiene una capacidad de carga muy pequea. Necesita detectores ms sensibles. La naturaleza del tubo y el procedimiento seguido para su limpieza son de gran importancia en este tipo de columnas, ya que la pared del mismo sirve como soporte y su capacidad de retencin del solvente influir notablemente en la uniformidad de la pelcula formada. Uno de los mtodos consiste en llenar el tubo con una disolucin diluida de la fase estacionaria en un disolvente voltil, cerrar un extremo e introducirla en una estufa con una temperatura superior al punto de ebullicin del solvente, la fase quedar depositada sobre la pared del capilar.

16. Establezca los diferentes tipos de fases estacionarias y sus caractersticas para CG Hidrocarburos: referencia como fases estacionarias utilizndose con este fin el escualano. Presenta el inconveniente de tener una temperatura mxima de trabajo muy y baja, por lo que es ocasiones se ha propuesto su substitucin por el apiezon MH o por el hidrocarburo de Kovats o apolano 87. Su principal inconveniente de este tipo de fases estacionarias es su facilidad de oxidacin, que lleva normalmente a una alteracin de sus caractersticas de retencin y, en casos extremos, a un elevado sangrado por fragmentacin de las cadenas hidrocarbonadas. Polisiloxanos: o siliconas, son con mucho, el grupo de fases estacionarias de ms amplia utilizacin debido a su elevada estabilidad trmica y a la posibilidad de modificar qumicamente la estructura de base para obtener fases con diferentes polaridades y selectividades. Las grandes posibilidades de variacin estructural que tiene estos compuestos hacen que sea posible obtener fases estacionarias enormemente selectivas. En este sentido, los fenil, cianopropil y trifluoropropil Polisiloxanos presenta muy buenas caractersticas de selectividad. Polifenilsteres: son fases estacionarias moderadamente polares, qumicamente bien caracterizada y de utilidad para realizar muchas separaciones. Volatilidad es extremadamente baja dado su pequeo peso molecular.

Polisteres: son moderadamente polares. Columnas preparadas con este tipo de fases presenta el problema de su escasa estabilidad ya que los polisteres son fcilmente hidrolizables, puedes reaccionar con algunos componentes de las muestras y son muy sensibles a la oxidacin. Polietilenglicoles: muy utilices para la separacin de compuestos polares y con posibilidades de formacin de enlaces de hidrogeno. El factor fundamental que marca las caractersticas de retencin de este tipo de fases es la concentracin de grupos hidroxilos, y en mucho menor grado, el peso molecular promedio de la fase. Fases estacionarias ligadas: ofrecen temperaturas de utilizacin ms elevadas que las fases convencionales, teniendo adems un menos nivel de sangrado a temperatura elevadas; por otra parte dado que las fases de este tipo son prcticamente insolubles, son mucho menos afectadas que las fases normales por la inyeccin de elevados volmenes de disolvente. Una ventaja es que las columnas contaminadas por estos componentes no voltiles de las muestras pueden ser5 regeneradas mediante un lavado con disolventes adecuados.

17. Cul es el principio fisicoqumico que determina la eleccin de una fase estacionaria en CG Que columna voy a utilizar si es: (empaquetadas o de relleno ) y (tubulares abiertas o capilares) Para la eleccin de una fase estacionaria se deben de tener las siguientes consideraciones: Baja volatilidad a la temperatura de la columna. Se sugiere que su punto de ebullicin sea, |al menos, 100 C mayor que la mxima temperatura de trabajo. Estabilidad trmica a la temperatura de la columna. Inercia qumica, ya que, salvo casos especiales, no deber reaccionar qumicamente con los componentes de la muestra. Los lmites de temperatura del lquido elegido, considerando su viscosidad y volatilidad. Un descenso en la temperatura de la columna aumenta el tiempo de retencin de los solutos y en ocasiones puede mejorar las separaciones. Pero cuando la viscosidad de la fase estacionaria se hace demasiado alta, o se alcanza el punto de fusin, generalmente la eficacia de la columna baja enormemente.

La fuerza de interaccin soluto-solvente que han de influir en los coeficientes de actividad de los componentes de la mezcla. La eleccin de la fase se hace teniendo en cuenta la polaridad de los solutos a separar y de su tiempo de retencin en la fase a medida que su polaridad aumenta. La eleccin de la fase estacionaria depender no solo de la presencia de polaridad dentro de los solutos, sino ms bien de una visin de conjunto de la mezcla compleja que se desee separar. Puesto que el grado de separacin de dos sustancias depende de sus respectivos coeficientes de reparto en la fase estacionaria, cada mezcla particular debe tener, al menos tericamente, una fase que efecte la separacin mejor que las dems. Dependiendo del tipo de material es la temperatura mxima a la que se puede trabajar. Las fases se pueden clasificar en: No polares: para separar sustancias pocas o nada polares. El ms utilizado son las gomas de silicona OV-1, OV-101 o SE-30, para trabajar hasta ms de 300C donde se consiguen eficacias de columna extraordinarias. Con carcter ligeramente polar: utilizacin general, buena selectividad para mezclas mixtas. Sebacato de dietil (2 etil hexilo), aceite de silicona, gomas de silicona. De polaridad media o alta: no aptos para hidrocarburos no aromticos. Aceite de Ucon LB-550X, polifenil ter, Carbowax 1 540, succinato de butanodiol. Columnas con fase mixta: para resolucin de separaciones parciales con dos o ms lquidos. Posibilidad de separar hasta 50 sustancias mezclando dos, tres y cuatro lquidos para formar la columna final.

19. Enumere los diferentes tipos de detectores que se utilizan en CG

Detectores Detector de conductividad trmica Detector de ionizacin de llama Detector de captura electrnica Detector de nitrgeno - fosforo Detector fotomtrico de llama Detector de fotoionizacin Detector de conductividad electroltica

20. Explique cmo est conformado, como funciona, las caractersticas y el tipo de

analitos para el que se utiliza, cada uno de los siguientes detectores

TDC

FID

ECD

21. Mediante un grafico explique cmo es el sistema de inyeccin de un cromatografo de gases

Sistema de inyeccin de la muestra: Con el fin de tener una alta eficiencia de la columna se requiere que la muestra sea de un tamao adecuado y que se introduzca como un tapon de vapor; la inyeccin lenta o muestras demasiado grandes causan dispersin de las bandas y una mala resolucin. Las micro jeringas calibradas, como las que se ilustran en la figura 27.3, se utilizan para inyectar muestras liquidas, a travs de un diafragma de goma de silicn, en una cmara caliente especial para la muestra que se ubica en la cabeza de la columna. La cmara de la muestra (figura 27.4) est casi siempre a unos 50C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil de la muestra. En el caso de las columnas analticas rellenas ordinarias, el tamao de la muestra vara desde unas pocas dcimas de micro litro a 20 L. Las columnas capilares requieren muestras menores por un factor de 100 o ms. En estos casos se emplea un sistema divisor de la muestra que permite entregar una pequea fraccin conocida (1:50 a 1:500) de la muestra inyectada y el resto se desecha. Los cromatografos de gases comerciales con columnas capilares estn equipados con dichos divisores; tambin permiten la inyeccin sin divisin para mejorar la sensibilidad o para usarse con columnas empacadas. En el caso de entradas sin divisin, la vlvula de purga cierra la inyeccin y permanece cerrada de 30 a 60 segundos. Durante este tiempo, el vapor de la muestra solo puede avanzar por la columna. Al abrirse la vlvula de purga, cualquier vapor remanente sale con rapidez. En la cromatografa de gases con capilares tambin hay inyectores en la columna, con las cuales la muestra entera se inyecta en la columna como lquido que luego se vaporiza al programar la temperatura de la columna o de la entrada. En este caso, el analito se separa del solvente por efectos trmicos y del mismo solvente.

En el trabajo cuantitativo se pueden obtener tamaos de muestra ms reproducibles tanto en el caso de lquidos como en el de gases con una vlvula de muestreo de gas como la que se observa en la figura 27.5. Con estos dispositivos, los tamaos de la muestra pueden reproducirse con menos de 0.5% de error relativo. Estn disponibles auto inyectores con bandejas automticas de muestreo para la mayora de los cromatografos de gases. Con estos se puede mejorar en gran medida la precisin del volumen inyectado en comparacin con la inyeccin manual con jeringa.

22. Qu tipo de jeringas se utilizan para inyectar la muestra en CG y que condicin de temperatura se debe manejar en ellas La microjeringa es el dispositivo para la introduccin de muestra ms comn y consiste en un cilindro de vidrio calibrado con mbolo interior metlico usado para dispensar un volumen seleccionado de muestra por desplazamiento a travs de una aguja. Inyeccin manual con jeringa

INYECCIN SIMPLE: tras varias admisiones y expulsiones de muestra para llenar la aguja y eliminar el aire, se toma el volumen deseado segn la barra calibrada accionando el mbolo hasta completar la inyeccin y sacando inmediatamente la aguja del inyector caliente. La aguja, que estaba llena antes de la inyeccin, queda llena despus de la inyeccin y el volumen introducido es el comprendido entre marcas del cilindro que es el calibrado verdadero, sin contar el volumen del interior de la aguja. Esta manipulacin de la jeringa conlleva ciertos errores experimentales especialmente relacionados con la alta temperatura del inyector como se aprecia en la tcnica de inyeccin denominada con AGUJA LLENA y que permite la mnima introduccin de muestra con carcter analtico. PROCEDIMIENTO DE INYECCIN PARA OBTENER UNA MXIMA EXACTITUD CUANTITATIVA CON INYECTOR CALIENTE Admisin de un volumen de aire. Admisin del volumen deseado de muestra (entre marcas del cilindro calibrado). Sustitucin de la aguja por una limpia.

Introduccin de la aguja en el inyector para su calentamiento. Inyeccin rpida. Permanencia de la aguja en el inyector unos segundos para evaporacin de su contenido. En ocasiones, el introducir cierta cantidad de disolvente en la jeringa antes de la muestra ayuda a empujarla por lavado en la inyeccin. Influencia de los parmetros operacionales en la exactitud volumtrica de las microjeringas: velocidad de inyeccin viscosidad muestra diseo (volumen muerto) temperatura tcnica de inyeccin adaptacin mbolo-cilindro estado-desgaste de la jeringa

23. Que es un inyector para columnas capilares y qu funcin cumple en un cromatografo de

gases La inyeccin de muestra es un apartado crtico, ya que se debe inyectar una cantidad adecuada, y debe introducirse de tal forma (como un "tapn de vapor") que sea rpida para evitar el ensanchamiento de las bandas de salida; este efecto se da con cantidades elevadas de analito. El mtodo ms utilizado emplea una microjeringa (de capacidades de varios microlitros) para introducir el analito en una cmara de vaporizacin instantnea. Esta cmara est a 50 C por encima del punto de ebullicin del componente menos voltil, y est sellada por una junta de goma de silicona septa o septum. Inyector de muestra para un GC Si es necesaria una reproducibilidad del tamao de muestra inyectado se puede usar una vlvula de seis vas o vlvula de inyeccin, donde la cantidad a inyectar es constante y determinada por el tamao del bucle de dicha vlvula. Un muestreador automtico para emplear la tcnica de Espacio de Cabeza o Head Space para GC (accesorio). Si la columna empleada es rellena, el volumen a inyectar ser de unos 20 L, y en el caso de las columnas capilares dicha cantidad es menor, de 1 L, y dependiendo del tipo de columna capilar (ya que existen columnas con distinto dimetro interno) es que si se utiliza todo el volumen de muestra inyectado. Para obtener menor cantidad de volumen, se utiliza un divisor de flujo (la inyeccin se conoce como modo "Split") a la entrada de la columna que desecha parte del analito introducido. Si se utiliza todo el volumen de muestra la inyeccin es de tipo "Splitless". El modo Splitless, se emple ms para determinar pequeas cantidades o trazas (determinaciones ambientales). Si se inyecta 1 microlitro de solvente, por ejemplo agua al pasar a la fase vapor su volumen se multiplicar por mil. Es decir, un microlitro de agua pasara a ser 1 mL de agua en gas,

como el volumen del puerto de inyeccin es limitado, se emplean split pulsado u otras configuraciones para garantizar el ingreso adecuado de las muestras. En caso de muestras slidas, simplemente se introducen en forma de disolucin, ya que en la cmara de vaporizacin instantnea el disolvente se pierde en la corriente de purga y no interfiere en la elucin. Segn las curvas de Van Demter (HEPT vs. Velocidad Lineal), el mejor gas a usar en la columna cromatogrfica como portador de los analitos es el hidrgeno, sin embargo dada su peligrosidad, es ms usado como gas de encendido en el detector FID, junto con el aire. Luego vienen, respectivamente, helio y nitrgeno. El gas hidrgeno es el mejor carrier y los flujos que manejan los cromatgrafos no son peligrosos, adems a la salida de estos generalmente existen restrictores de llama que evitan la propagacin de un posible incendio. Se puede recomendar el uso de hidrgeno debido a, primero por su bajo precio respecto a los otros gases y por la resolucin de los picos que se muestran en los cromatogramas

24: Qu tipo de tcnicas de inyeccin de muestra hay en CG Las tcnicas ms comunes para la inyeccin de muestra en cromatografia de gases son: Inyeccin directa o en columna. Inyeccin en columna capilar( split, splitless). Inyeccin de muestra de cabeza gaseosa (headspace). Disorcin trmica, purga y trampa. Pirlisis.

25. Explique detalladamente en qu consiste el sistema de inyeccin:

a. b. c. d.

Inyeccin con Split Inyeccin sin Split Inyeccin on column Inyeccin con Head Space

Inyeccin en columnas capilares. Es necesaria una reduccin del volumen de la muestra cuando se trabaja con columnas capilares. Esto se logra mediante un inyector divisor (inyeccin en split) , donde generalmente se inyecta una muestra de 1 L pero slo entra al capilar 0.01 L; el resto es desechado. Esta tcnica impide la sobrecarga de la columna, pero desperdicia una porcin significativa de la muestra, Cuando se realizan anlisis en cantidades pequeas de muestra con algunos componentes en concentraciones del orden de milsimos de parte por milln, se introducira muy poco material en la columna si para estas muestras se utiliza el divisor. Para ellas se requiere de solvente o inyeccin sin

divisin (inyector en splitless). La muestra completa, incluyendo el disolvente, se inyecta en la columna tubular abierta, a travs de un vaporizador instantneo caliente. Se evita un coleo pronunciado del disolvente abriendo hacia la atmsfera el puerto de inyeccin despus de algn tiempo (quiz unos 30s), cuando la mayor parte del disolvente, y esencialmente toda la muestra, entraron en la columna. El tiempo apropiado antes de esa descarga es crtico; si es demasiado corto se produce la prdida de los componentes de la muestra, mientras que si es demasiado largo se produce un pico del disolvente ms grande del necesario, que puede sepultar algunos de los picos de interes. Inyeccin en columna: El modo estndar, adecuado para aproximadamente 95% de las aplicaciones de las columnas empacadas (o empaquetadas), es la inyeccin directa o en columna. La muestra es inyectada con una jeringa hipodrmica a travs de un sptum de goma (o hule) de silicona autosellante, a un alineador de vidrio (glass insert) contenido en un bloque metlico, donde es vaporizada y barrida hacia la columna. El bloque se calienta a una temperatura que se fija en un valor suficientemente alto para convertir prcticamente en forma instantnea la muestra lquida en vapor. La cantidad de muestra inyectada es del orden de L para lquidos y algo superior para gases Muestreo de la cabeza gaseosa. Ms all del anlisis convencional de gases y lquidos de baja viscosidad por CG (cromatografa de gases), algunos casos se manejan ms eficazmente con muestreo de la cabeza gaseosa (vapor sobrenadante, o headspace). Esto es vlido cuando slo interesa el vapor sobre la muestra, como en el caso de los perfumes o los productos alimenticios; con los constituyentes orgnicos voltiles de muestras, como la orina, la respiracin del hombre y muestras ambientales; cuando la muestra es un lquido que normalmente requerira de algn tratamiento antes de la inyeccin, como la sangre, aguas residuales o agua potable, Los picos de los disolventes son mucho ms pequeos de lo que seran al inyectar la muestra lquida tal cual. El muestreo de la cabeza gaseosa puede efectuarse sobre muestras con cualquier matriz, siempre y cuando el coeficiente de reparto permita que exista una cantidad suficiente del analito en la fase gaseosa.