UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA FACULTADDECIENCIASYFILOSOFA

DEPARTAMENTOACADMICODECIENCIASCELULARESYMOLECULARES

LABORATORIODEFARMACOLOGIA

GUADEPRCTICAS
CURSO FarmacologaGeneral (FGI) (SegundoAoMedicina)

2013
LIMAPER

 Preparadopor: MSc.MaraSalasArruz Dr.AlfonsoZavaletaMartnezVargas MSc.WalterDelaCruzRamrez C.D.CarolZavaletaBoza Dr.EduardoHuamanEgoavil. LaboratoriodeFarmacologa Dpto.AcadmicodeCienciasCelularesyMoleculares FacultaddeCienciasyFilosofa UniversidadPeruanaCayetanoHeredia Agosto2013 UniversidadperuanaCayetanoHeredia Av.HonorioDelgado430,SanMartndePorras,Lima,Per. A.P.4314,Lima100,Per

 INTRODUCCION
La presente gua contiene la descripcin, objetivos y procedimientos de las prcticas del curso, las que han sido seleccionadas con el propsito de introducir al estudiante en el campo de la Farmacologa bsica y experimental ayudando de esta maneraacomprenderycomplementarlasexposicionestericas. Para cada prctica, el estudiante deber revisar anticipadamente los conceptos tericos correspondientes a partir de las preguntas propuestas para cada prctica, desarrollara la prctica y registrar sus resultados, procediendo luego a su anlisis, discusin e interpretacin de los resultados. Como producto de la prctica cada grupo preparar un informe, el que ser presentado en la Secretaria de la Seccin de Farmacologa dentro de las siguientes 72 horas de efectuada la prctica segn lo especificadoenelsyllabusdelcurso.

INDICE
Calculodedosisypreparacindesoluciones Prctica1 Experimento1:Curvadosisrespuestayantagonismocompetitivo 5 69 1011

Experimento 2: Antagonismo fisiolgico (Oxitcicos y tocolticos) en tero nogrvido Experimento 3: Antagonismo fisiolgico y competitivo en el msculo liso gstrico Prctica2

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Experimento:Antagonismocompetitivo(pilocarpinayatropina) Prctica3 Experimento:Discusindecasosclnicofarmacolgicos

Anexo 1: Tabla de soluciones fisiolgicas comnmente utilizadas en experimentosconrganosaislados Anexo 2: Tabla de submltiplos de unidades de masa del sistema internacionaldeunidades

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CALCULODEDOSISYPREPARACINDESOLUCIONES
Enlaexperimentacinfarmacolgicalasdosisseexpresan,generalmente,encantidad

defrmacoporkilogramodepesocorporaldelanimal.Ejemplo:10mg/kg,0,5mg/kg. Los frmacos que se utilizan en el laboratorio se encuentran, en la mayora de los

casos, disueltos en liquido (agua destilada, solucin fisiolgica, etc.), de manera que la concentracin del frmaco en el lquido se expresa en cantidad (mg, gramo, unidad, etc.) pormililitrodesolucin,obienenporcentajes.Ejemplo:5mg/mL,1g/2mL,100UI/mL. Para determinar la cantidad total de frmaco que hay que administrar a un

determinado animal, hay que conocer la dosis del frmaco y calcular el volumen en que debe estar contenida esa cantidad. Para facilitar el clculo se puede emplear la siguiente frmula: Dosis delfrmaco (mg/kg) Concentracindelfrmaco(mg/mL)

Volumen(mL)

Pesodelanimal(kg)

PRACTICA1
EXPERIMENTO1 Curvadosisrespuestayantagonismocompetitivo 1. Materialesyfrmacos Equipodediseccin Acetilcolinaal1/10,1/100,1/1000,1/10000,1/100000,1/1000000 Atropinaal1/100000 SolucinTyrode Sistemaderganosaislados(Preparacinisomtrica,Kimgrafo) 2. Animales:Rataadultamachoohembra. 3. Metodologa SistemaderganosAislados:PreparacinIsotnica: Consta de un bao, un registrador y un sistema de recirculacin de agua con un termostato segn se indica en la Figura 1. El bao es de aproximadamente 50 mL decapacidadytienedoblecapa,ensuinteriorsecolocalasolucinfisiolgicayla capa externa est conectada al sistema de recirculacin de agua conectada a un termostatoafindemantenerunatemperaturaconstanteparaelrgano. Diseccin: a. Sacrificar larata mediante dislocacin cervical. Luegoconayuda delequipo de diseccin cortar y abrir el abdomen, localizar el intestino delgado (leon) (Ver Figura2). b. Lavar la luz intestinal del rgano a baja presin con una jeringa de 23cc conteniendosolucinTyrodeysepararaproximadamente3cmdelleon. c. Montar el rgano con cuidado de no presionarlo ni estirarlo, en el bao del sistemaderganosaisladospreviamenteacondicionadoa30Censolucinde RingerTyrode(Figura1). d. Registrar las condiciones bsales (lnea de base, amplitud de las contracciones espontneas).

 Montajedelrgano(leon): El rgano diseccionado es atado en dos extremos, uno de ellos a un punto fijo mediante una pesa y el otro dejando aproximadamente 15 cm de hilo a una palanca registradora, de modo que cuando el rgano se contrae la palanca se desplazahaciaarribaycuandoserelajalapalancasedeslizahaciaabajo AgonistasyAntagonistas: a. Instilar en el bao dosis crecientes logartmicas, acumulativas de ACETILCOLINA a partir de la solucin 1/1000000. Luego de instilar cada dosis observar y registrar la amplitud de la contraccin aproximadamente 30 segundos y dejar correr el papel registrador un centmetro. Terminado el experimento lavar el rgano por lo menos 2 veces mediante el cambio de la solucinRingerTyrodedelbao. b. Previa instilacin de 0.1 mL de lasolucin de ATROPINA al 1/100000 repetir el ensayo anterior empleando las mismas dosis de ACETILCOLINA empleadas en elexperimentoanterior. Preparar las grficas Log dosisrespuesta de ambos experimentos e interpretar los resultadosobtenidos. Tabla 1. Respuesta en milmetros y porcentaje de respuesta segn dosis, antes y despusdeantagonista. Dosis progresivas Basal 1/1000000 1/100000 1/10000 1/1000 1/100 1/10 Antes Respuesta(mm) %derespuesta Despus Respuesta(mm) %derespuesta

 4. Cuestionariopreprctica: Definalostrminosagonistayantagonista. Describalosdiversostiposdeantagonismodefrmacosqueexisten. Definayestablezcalasdiferenciasentreeficaciaypotenciadeunfrmaco. 5. Cuestionariopostprctica: Describaloqueesunagonistainversoyunagonistaparcial. Expliqueporquelaatropinaescatalogadocomoantagonistacompetitivo. Explique de que manera la atropina afecta la relacin dosisrespuesta de la acetilcolinasobreelmsculolisointestinal.

Figura1:Montajedelrganoaisladoenelsistemaderganosaislados

 Figura2:ubicacindelleonenlarata

 EXPERIMENTO2 Antagonismofisiolgico(Oxitcicosytocolticos)enteronogrvido

1. Materialesyfrmacos Equipodediseccin Adrenalinaal1/10000 Ergonovina0.2mg/mL Papaverina2% Oxitocina5UI/mL SolucinJalon Sistemaderganosaislados(Preparacinisomtrica,Kimgrafo) 2. Animales:Unarataadultahembra. 3. Metodologa Sacrificarelanimalenestadodeestromediantedislocacincervical.Luegoconayuda delequipodediseccincortar,abrirelabdomenysepararlasramasuterinas.

Figura3:Ubicacindelasramasuterinasenlarata

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 Montar una de las ramas uterinas con cuidado de no presionarla ni estirarla en el bao de rganos aislados previamente acondicionado a 30C en solucin Jalon. Registrar las condiciones basales (lnea de base, amplitud y frecuencia de las contraccionesespontneas) Despus de un periodo de estabilizacin de 5 minutos, instilar 0.1mL de una solucin de ADRENALINA al 1/10000, ERGONOVINA de 0.2mg/mL, PAPAVERINA al 2% y OXITOCINAde5UI/mL(despusdelainstilacindecadafrmacodebeesperarquese produzca la respuesta mxima y lavar dos veces el segmento uterino antes de instilar elsiguiente). Midalaamplituddelasrespuestasyanoteeltipoderespuestaparacadafrmaco. Graficareinterpretarlosresultadosobtenidos. Tabla2.Antagonismofisiolgico:oxitcicosytocolticos Frmacoydosis Tipoderespuesta 4. Cuestionariopreprctica: Definalostrminosagonistayantagonista. Describalosdiversostiposdeantagonismodefrmacosqueexisten. Definayestablezcalasdiferenciasentreeficaciaypotenciadeunfrmaco. 5. Cuestionariopostprctica: Describaloqueesunagonistainversoyunagonistaparcial. Qu efectos produce la ergonovina y la oxitocina en el tero grvido y cual es su aplicacinclnica? Porqulosefectosdelaoxitocinasondiferentesenterogrvidoynogrvido? Amplitud(mm) Tono

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 EXPERIMENTO3 Antagonismofisiolgicoycompetitivoenelmsculolisogstrico 1. Materialesyfrmacos Equipodediseccin SolucindeRingerSapo Cnuladevidrio AzuldeEvans 02ligaduras 01jeringadetuberculina 01aguja27x 03jeringasde2cc Soporte Acetilcolinaal1% Adrenalina0.1% Atropinaal1% 2. Animales:Unsapo. 3. Metodologa Abrir la cavidad abdominal y observar las contracciones peristlticas espontneas aloslargodeltractoestomacal.Denoexistirprovocarlosconestmulomecnicos. Aislar el estmago y extirparlo cortando por encima del cardias y por debajo del ploro.Luego,vaciarelcontenidodelestmagoyligarpordebajodelploro. Insertelacnuladevidrioatravsdelcardiasyfjelomedianteunaligadura. Carguen la jeringa de tuberculina con la solucin de Ringer a 30C coloreada con Azul de Evans e inserta la aguja N 27x1/2 angulada a 90 para luego inyectar el preparado introduciendo la aguja entre la cnula de vidrio y mucosa del cardias, procurando que la solucin coloreada se deposite en el estmago en cantidad suficientehastaalcanzar2cmvisiblesenlacnuladevidrio.

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 Fijelapreparacinenunsoporte. Aplique aproximadamente 5 gotas de cada una de las sustancias sobre la pared del estmago en el orden estricto que a continuacin se detalla: Acetilcolina 1%, Adrenalina 0,1%, Acetilcolina 1%, Atropina 1%, Acetilcolina 1%; observando los efectos producidos, anotando los tiempos de aparicin y graficando las alteraciones. Tener cuidado que entre cada sustancia aplicada se debe de lavar la preparacin con la solucin de Ringer a 30C, antes de continuar con la siguiente sustancia. Registrelosresultadosobtenidosconcadaunadelasdrogas. Tabla3.Antagonismofisiolgicoycompetitivo enelmsculolisogstrico Frmaco Tiempodelatencia (segundos) Acetilcolina1% Adrenalina0.1% Acetilcolina1% Atropina1% Acetilcolina1% 4. Cuestionariopreprctica: Definalostrminosagonistayantagonista. Describalosdiversostiposdeantagonismodefrmacosqueexisten. Definayestablezcalasdiferenciasentreeficaciaypotenciadeunfrmaco. 5. Cuestionariopostprctica: Describaloqueesunagonistainversoyunagonistaparcial. Expliqueporquelaatropinaescatalogadocomoantagonistacompetitivo. Explique de que manera la adrenalina afecta los efectos de la acetilcolina sobre el msculolisointestinal. Respuesta(mm) Comentario

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PRACTICA2
EXPERIMENTO Antagonismocompetitivo(pilocarpinayatropina) 1. Materialesyfrmacos Atropina0.5mg/mL Pilocarpina20mg/mL(gotasoftalmicas) Pentobarbital65mg/mL Jeringasdescartablesde1mL Balanza Catterintravenoso 2. Animales:Conejoalbinode23kgdepesocorporalaproximadamente. 3. Metodologa: Cateterizarlavenamarginaldelaorejadelconejoconuncatterintravenoso(IV). Administrar25mg/kgdePENTOBARBITALporvaIV. Una vez que se encuentre anestesiado el conejo, administrar 5 mg/kg de PILOCARPINA por va IV y dejar al animal sobre una superficie alta con la cabeza hacia abajo para evitar que aspire las secreciones salivales. Una vez que se evidencien todas las manifestaciones colinrgicas muscarnicas antagonizar los efectoscon0.25mg/kgdeATROPINAporvaIV. La administracin de ATROPINA se realiza lentamente y si es necesario se puede repetirlasdosishastarevertirtodoslosefectoscolinrgicos. El animal debe quedar en observacinpor lo menos mediahora o hastaquesalga delestadoanestsico. Todoslosefectosdebenseranotadosenlatablaadjunta.

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 Tabla4:Antagonismocompetitivo:pilocarpinayatropina Parmetro Frecuenciacardiaca Frecuenciarespiratoria Tamaodepupila Salivacin Basal Pilocarpina Pilocarpina+Atropina

Secreciones

Movimientosintestinales Miccin Defecacin

*Segradaencruces(+)dependiendodelaintensidad 4. Cuestionariopreprctica: Describalosdiferentestiposdereceptorescolinrgicosqueexisten. Describa y explique losefectos de la atropina y dela pilocarpinaas como losusos teraputicosdeestosdosfrmacos. 5. Cuestionariopostprctica: DescribalasmanifestacionesqueproducelaadministracindePilocarpina. Explique por qu fue necesario administrar pentobarbital al conejo antes de empezareltrabajoconfrmacoscolinrgicos.

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PRACTICA3 DISCUSIONDECASOSCLINICOFARMACOLOGICOS
CASOCLINICO1 Mujer primigesta de 26 aos edad con 24 semanas de gestacin que presenta edema en miembrosinferioreseincrementosignificativodepesodehasta10kilosdesdeeliniciode la gestacin, acude por presentar cefalea, malestar general y fatiga. Se le realizan exmenes encontrando hipoalbuminemia severa de 1.8 mg/mL, hemoglobina de 7mg/dL; adems la paciente presenta incremento de la frecuencia urinaria sobre todo en las noches y su presin arterial es de 150/90 mm de Hg. Al realizarle exmenes de rutina, se encuentra sedimento urinario patolgico, presencia de protenas y bacterias abundantes, por lo que se diagnostica una bacteriuria asintomtica, sin embargo a los tres das de recibir tratamiento presenta dolor en zona del bajo vientre y contracciones uterinas espaciadas, acompaadas de hipertensin y poliuria; se le diagnostica infeccin de tracto urinarioyamenazadepartoprematuro,porloqueseiniciamedicacin. Parmetrosfarmacocinticosatenerencuenta: Barreras:placentaria. Cambiodevolumendedistribucin(retencinhdrica) Hipoproteinemiayanemia Interaccionesmedicamentosas Cuestionariopreprctica: QumedicamentosdebernemplearseparalaITU? Qumedicamentosdebernemplearseparalaamenazadepartoprematuro? Sernalasdosisusualesodeberemoscorregirlas? Deberemosrestringirloslquidosoincrementarlasdosis? Qu enfermedad pudiera agravar el problema y por lo que debemos realizar el monitoreoenestapaciente?

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 CASOCLINICO2 Paciente adulto mayor de 75 aos que sufre deshidratacin aguda por diarreas coleriformes que ocasiona necrosis tubular aguda e insuficiencia renal aguda, el paciente adems es diabtico y obeso, recibe hipoglicemiantes orales y cido acetilsaliclico por los factores de riesgo que presenta. En aproximadamente 5 das retorna con dolor pre cordial que se irradia al brazo, se le diagnostica sndrome coronario agudo e insuficiencia cardaca congestiva. Se indica restriccin hdrica y la alimentacin es mediante dieta hipoglicmicasevera(paradiabticos). Parmetrosfarmacocinticosatenerencuenta: Correccindedosisrenal Incrementodeaguacorporaltotal Obesidad Interaccionesmedicamentosasconantidiabticosorales Cuestionariopreprctica: Sedebecorregirladosisdelosmedicamentos? Estamosfrenteaunsndromemetablico,quedebemoshacer? Porlaobesidadlaresistenciaalainsulinaesmayor? Qumedicamentospodrasafectarsusriones?

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 CASOCLINICO3 Paciente varn de 42 aos, alcohlico, ha recibido psicoterapia sin resultados; con antecedentedeTBCpulmonarhace3aos,porlosexmenescomoradiografas,pruebas de sensibilidad como PPD, se determina que el paciente sufre de TBC pulmonar en tratamiento por multidrogo resistencia. Se le realizan una serie de exmenes, donde adems de comprobar la recidiva de TBC, se encuentra anormalidad en el perfil bioqumico de las pruebas hepticas, por lo que se decide tratamiento con drogas menos hepatotxicas, pese a ello el paciente presenta signos de Pelagra, estas manifestaciones se acrecientan cuando el paciente presenta diarreas con presencia de alimentos no digeridos,seencuentraunpacientedesnutridopormalabsorcinintestinal. Parmetrosfarmacocinticosatenerencuenta: Inmunosupresin Mltiplesdrogas Desnutricin Insuficienciaheptica. Cuestionariopreprctica: CuleselagentecausaldelaTBCycmosecontagia? Qu es la Pelagra, cuales son sus principales caractersticas y con que frmaco se trata? AquesedenominaTBCmultidrogoresistente(TBCMDR)? Cules son los medicamentos que se emplean en el tratamiento de la Tuberculosis pulmonar? QueeselPPD?SeproduceenelPer? Qu medicamentos debemos emplear en este paciente, cual es el esquema del MINSA? Comopodemosmejorarladesnutricincrnicareagudizada? Elgradodeinmunosupresindeberegistrarse,seemplearnmedicamentos Debemoscorregirladosisdelosmedicamentos?Porqu?

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 ANEXO1 TABLADESOLUCIONESFISIOLGICASCOMNMENTEUTILIZADASENEXPERIMENTOS CONRGANOSAISLADOS [Gramos(g)paraunlitrodesolucin] Sales NaCL KCl Mg.8O4.7H2O NaH2PO4 NaHCO3 Glucosa CaCl2(1molar) Gas Utilidad SolucindeRinger Tyrode 8.00 0.20 0.26 0.05 1.00 1.00 2ml Oxigenooaire Intestino Locke 9.00 0.42 . . 0.50 1.00 1.2ml Oxigeno Msculo cardiaco Sapo 6.50 0.14 . 0.005 0.40 2.00 1.2ml Aire Tejidode batracio Jalon 9.00 0.42 . . 0.50 0.50 0.3ml Oxigeno+CO2al5% teroderata

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 ANEXO2 TABLADESUBMULTIPLOSDEUNIDADESDEMASADELSISTEMAINTERNACIONALDE UNIDADES NOMBRE Gramo Miligramo Microgramo Nanogramo Picogramo Femtogramo Attogramo g/ml 1/100 1/1000 1/10000 1/100000 1/1000000 mg/ml 10 1 0.1 0.01 0.001 ug/ml 10000 1000 100 10 1 SIMBOLO g mg ug ng pg fg ag 1 0.001 0.000001 0.000000001 0.000000000001 0.000000000000001 0.000000000000000001 g Exponentede10 1 3 6 9 12 15 18

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