Germinacin y vigor de las semillas

Objetivo: Determinacin de la viabilidad y el vigor de granos de maz (Zea maz L.) sanos y envejecidos.

INTRODUCCIN La semilla que contiene al embrin como potencial de una nueva planta en miniatura, est estructural y fisiolgicamente equipada para su rol como unidad de dispersin y est bien provista con reservas alimentarias para sostener a la nueva plntula hasta que se pueda establecer como un autosuficiente organismo auttrofo. La germinacin incorpora los eventos que comienzan con la entrada de agua en la semilla quiescente y terminan con la elongacin del eje embrionario (expresado visiblemente con la penetracin de las estructuras que rodean al embrin por la radcula). (Bewley, 1997) Los factores que provocan el deterioro de las semillas son las condiciones climticas, la madurez de la semilla, el dao mecnico, el ambiente de almacenamiento (temperatura y humedad), y los genes. El deterioro de la semilla puede medirse de manera cuantitativa evaluando una muestra de la semilla segn diferentes criterios: La viabilidad de la semilla, que es la capacidad de la semilla de vivir, crecer y desarrollarse; germinacin de la semilla, que es la capacidad de la semilla de desarrollar plntulas normales en condiciones ptimas; y el vigor de la semilla, que son las propiedades de la semilla que determinan el potencial de emergencia uniforme y rpida, y el desarrollo de plntulas normales en diversas condiciones de campo. Las pruebas de germinacin de semilla siguen siendo el criterio ms importante y el ms aceptado internacionalmente para medir la viabilidad de la semilla. En las pruebas de germinacin de la semilla es necesario sembrar semillas en un substrato uniforme (toallas de papel enrolladas, etc) e incubarlas a temperatura ptima para que germinen. Despus de transcurrido el periodo de incubacin, se determina el nmero de plntulas normales, el nmero de plntulas anormales, y el nmero de semillas no germinadas. Las pruebas de vigor de la semilla se basan en la simulacin de las condiciones ambientales adversas durante el almacenamiento o la emergencia en campo, de aqu se derivan las pruebas en frio, prueba con envejecimiento acelerado y prueba de vigor con estrs complejo. En la prueba de viabilidad de la semilla con tetrazolio, en las clulas vivas, las enzimas de deshidrogenasa reducen la sal de tetrazolio incolora y forman un compuesto rojo insoluble llamado formazan. En consecuencia, las partes vivas de la semilla, de color rojo, pueden distinguirse de las partes muertas incoloras. Las pruebas de la germinacin y el vigor de la semilla pueden utilizarse: en programas de control de calidad; como indicadores de la vida til en almacenamiento; para evaluar los efectos de los tratamientos de semilla y otras operaciones importantes; para prevenir posibles problemas; para identificar lotes de semilla de buena calidad; para satisfacer las demandas del consumidor y para etiquetar las semillas.(Warham) Se utilizan los procedimientos de envejecimiento por estrs causado por altas temperaturas que se basan en la desnaturalizacin de protenas por efecto de la temperatura. El procedimiento de estrs salino (NH4Cl) se basa en el aumento de la permeabilidad de la testa y la acumulacin de niveles txicos de la sal dentro de la semilla. (Manual de prcticas de Fisiologa y bioqumica vegetal)

OBJETIVO GENERAL Determinar la viabilidad y el vigor de los granos de maz (Zea maiz L.) sanos y envejecidos. OBJETIVOS PARTICULARES Hacer una curva de germinacin de los granos de maz para determinar su viabilidad. Determinar el efecto del estrs por calor en la viabilidad de las semillas de maz. Determinar el efecto del estrs por salinidad en la viabilidad de las semillas de maz. Evaluar el vigor de un lote de granos de maz mediante la prueba de tetrazolio. Determinar el efecto del estrs por el calor en el vigor de granos de maz mediante la prueba de tetrazolio. Determinar el efecto del estrs por salinidad en el vigor de granos de maz mediante la prueba de tetrazolio.

MATERIALES Y MTODOS Se prepar una solucin de hipoclorito de sodio al 1.5% p/v, tomando una parte de blanqueador por tres partes de agua destilada, utilizndose blanqueador comercial con una concentracin de hipoclorito de sodio entre 5 y 6% p/v. Se seleccionaron 100 granos de maz Zea mays L cuyas condiciones a simple vista se percibieron buenas, se desinfectaron en solucin de hipoclorito de sodio 1.5% p/v durante 3 minutos. Posteriormente, se enjuagaron los granos de maz con suficiente agua destilada. Se separaron las semillas en 4 lotes de 25 semillas cada uno, uno de los cuales fue el lote testigo t(0), y a los otros tres se les aplic tratamientos de envejecimiento: T(1) Estrs por calor (tiempo corto), sumergiendo los granos en agua caliente a 70C durante 30 segundos, posteriormente se dejaron secar. T(2) Estrs por calor (tiempo largo), sumergiendo los granos en agua caliente a 70C durante 2 minutos, posteriormente se dejaron secar. T(3) Estrs salino, los granos se sumergieron en una solucin de NH4Cl al 4% p/v durante 1 hora a temperatura ambiente, posteriormente se lavaron y dejaron secar. Una vez secos, cada lote se dividi en dos partes; una de 15 granos que se sembraron en toallas absorbentes humedecidas, dejando en estufa a 25C; los 10 granos restantes de cada lote se cortaron longitudinalmente con navaja de costilla de tal forma que el corte dejara expuesto al embrin y partiera por la mitad al grano. Se colocaron una de las mitades de cada grano cortado en un tubo de ensayo por lote con suficiente solucin de tetrazolio para cubrirlas. Se envolvi el tubo con papel aluminio para no dejar que se expusiera a la luz. Se dejaron por 24 horas a temperatura de 4C. Los granos que se sembraron estuvieron en observacin a partir de las 16 horas posteriores al inicio de imbibicin, 22, 27, 38, 44, 49, 60, 66 y hasta alcanzar las 71 horas. En cada tiempo se cont el nmero de granos que germinaron, asimismo se midi el crecimiento de la radcula en los que ya haban germinado. Pasadas las 24 horas en granos con tetrazolio, se examinaron los granos evaluando si hubo cambio de color, y contando aquellos en los que hubo tincin y los que no hubo.

RESULTADOS Prueba de tetrazolio. Se seleccionaron 10 granos de maz de cada uno de los tratamientos (T0, T1, T2, T3). Se examin la superficie de corte de cada uno de ellos buscando algn cambio de color. Los resultados para cada lote se muestran a continuacin. Se determin el nmero de granos viables con la siguiente formula: Viabilidad (%) = (nmero de granos teidos en rojo / nmero total de granos) x 100
Tabla 1. Granos tetrazolio.

T0 8 viables 2 no viables Viabilidad = 80%

T1 7 viables 3 no viables Viabilidad = 70%

T2 4 viables 6 no viables Viabilidad = 40%

T3 3 viables 7 no viables Viabilidad = 30%

Curva de germinacin. Para determinar el porcentaje de germinacin en cada lote se realiz mediante la frmula: Germinacin (%) = (nmero de granos germinados / nmero total de granos) x 100
Tabla 2. Crecimiento de radculas a las 16, 22 y 27 horas.

Lote Radcula (mm) No. Granos germinados Germinacin (%)

T(0) 0 0%

T(1) 0 0%

T(2) 0 0%

T(3) 0 0%

Tabla 3. Crecimiento de radculas a las 38 horas.

Lote Radcula (mm)

T(0) 9 2 1 1

T(1) 1 1 1 11

T(2) 13

T(3) 5 2 4 11 6 3 6 40%

No. Granos germinados Germinacin (%)

4 26.6%

4 26.6%

1 6.6%

Tabla 4. Crecimiento de la radcula a las 44 horas.

Lote

T(0)

T(1)

T(2)

T(3)

Radcula (mm)

4 7 3 5 11 4 4 7 46.6%

5 8 3 4 13

12

4 9 5 4 10 3 10 7 46.6%

No. Granos germinados Germinacin (%)

5 33.3%

1 6.6%

Tabla 5. Crecimiento de radcula a las 49 horas.

Lote Radcula (mm)

T(0) 10 10 9 16 10 8 9 4 8 53.3%

T(1) 11 6 11 5 15 7 3 10 8 53.3%

T(2) 3 15 6 3

T(3) 10 15 20 5 10 14 9 12 7 9 60%

No. Granos germinados Germinacin (%)

4 26.6%

Tabla 6. Crecimiento de la radcula a las 66 horas.

Lote Radcula (mm)

T(0) 29 27 12 27 17 7 28 3 26 8

T(1) 18 14 25 15 31 29 27 15 16 25

T(2) 11 5 25 14 26 21 9 13 20

T(3) 21 39 11 18 29 6 24 9 15 25 3 31 12 80%

No. Granos germinados Germinacin (%)

10 66.6%

10 66.6%

9 60%

Tabla 7.Crecimiento de la radcula a las 71 horas

Lote Radcula (mm)

T(0) 6

T(1) 21

T(2) 12

T(3) 31

29 35 28 7 19 8 30 6 6 30

12 26 15 23 27 24 11 19 3 26 11 12 80%

1 8 26 12 29 22 13 16

26 6 16 1 10 10 24 19 30 21 39 24 13 86.6%

No. Granos germinados Germinacin (%)

11 73.3%

9 60%

Cuadro 1. Porcentaje de germinacin para cuatro lotes de granos de maz (Zea Mays L.)

Tiempo (Horas) 16 22 27 38 44 49 66 71

Lote T(0) Germinacin (%) 0 0 0 26.6 46.6 53.3 66.6 73.3

Lote T(1) Germinacin (%) 0 0 0 26.6 33.3 53.3 66.6 80

Lote T(2) Germinacin (%) 0 0 0 6.6 6.6 26.6 60 60

Lote T(3) Germinacin (%) 0 0 0 40 46.6 60 80 86.6

En la grfica curva de germinacin acumulada se puede ver que, segn el registro tomado, a las 38 horas en todos los lotes existan seales de germinacin visibles a simple vista con la protursin de la radcula a partir del embrin. El lote T(3) present el mayor porcentaje de semillas germinadas en este tiempo con un 40%, seguido con un 26.6% de lote T(0) y T(1), el lote cuyo porcentaje de germinacin fue ms bajo es T(2) con 6.6%. Asimismo se puede observar que tanto T(0) como T(3) alcanzaron el 50% de granos germinados en un tiempo medio de 45 horas, lote T(1) a las 47.5 horas y el lote T(2) lo alcanz cerca de las 60 horas. En el ltimo conteo, a las 71 horas, T(3) alcanz el mximo porcentaje de granos germinados con un 86%, T(1) con 80%, T(0) con un 73.3% y finalmente T(2) con un 60%.

100 90 80 70

Germinacin (%)

60 50 40 30 20 10 0 -10 0 10 20 30 40 50 60 70 80 Lote T(0) Lote T(1) Lote T(2) Lote T(3)

Tiempo (horas)

. Figura 1. Curva de germinacin acumulada en cuatro lotes de granos de maz (Zea Mays L.)

Cuadro 2. Velocidad de crecimiento de la radcula

Lote T(0) Tiempo (Horas) 16 22 27 38 44 49 66 71

Lote T(1)

Lote T(2)

Lote T(3)

Promedio de crecimiento de radculas (mm) 0 0 0 3.25 5.4 9.5 18 18.3 0 0 0 1 6.6 8.5 21.5 16.1 0 0 0 13 12 6.7 16 15.4 0 0 0 5.1 6.4 11.3 21 19.7

En la grfica de velocidad de crecimiento de la radcula se observa que para el lote T(2) existe un promedio de aumento en la longitud de las radculas importante con 13mm en el intervalo de 27 a 38 horas, mientras que en los otros lotes el crecimiento fue de 5.1mm, 3.25mm y 1mm en T(3), T(0) y T(1) . Presentndose importantes oscilaciones posteriores en el promedio de crecimiento, y alcanzando al final T(3) 19.7mm, T(0) 18.3mm, T(1) 16.1mm y T(2) 15.4 mm a las 71 horas.

25 20 15 Lote T(0) 10 5 0 0 -5 10 20 30 40 50 60 70 80 Lote T(1) Lote T(2) Lote T(3)

Longitud de radculas (mm)

Tiempo (horas)

Cuadro 2. Velocidad de crecimiento de radcula en cuatro lotes de granos de maz (Zea Mays L.).

DISCUSIN Para hacer la comparacin en esta discusin, se recurri al texto de Bewley en su captulo referente a la medicin de la germinacin de semillas. Para T(0), en el intervalo de incio de protursin de radcula a las 27 horas y hasta las 44 horas, se nota un crecimiento lento de las radculas alcanzando un promedio de 5.4mm en el momento en que el 50% de las semillas del lote ya haban germinado. De ah la cantidad de semillas que germinan sigue aumentando pero lentamente llegando a alcanzar un 73.3% de semillas germinadas al final del experimento, mientras que el promedio de longitud aument un poco ms llegando a los 18mm. Se puede decir que las semillas seleccionadas para el lote testigo se desarrollaron de manera ms o menos uniforme presentando una velocidad de crecimiento o vigor no muy destacable en comparacin con los lotes T(1) y T(3). Para T(2), se puede notar la poca uniformidad en la germinacin y vigor de las semillas; a las 38 horas hubo un porcentaje bajo de semillas germinadas (6.6%) mientras que su crecimiento fue en comparacin con los dems lotes muy rpido llegando al promedio de los 13 mm. Otro desfase del mismo lote ocurri a las 49 horas en el que el porcentaje de semillas germinadas alcanza el 26.6% pero el promedio de crecimiento baja a 6.7 mm un retroceso en la velocidad de prcticamente la mitad, pudiendo darse esta diferencia por la existencia en el mismo lote de dos conjuntos de semillas con distinto vigor o que el tratamiento de temperatura caus el desfase entre una parte de la poblacin y otra al disminuir su vigor. El 50% de semillas germinadas lo alcanza 15 horas ms tarde que el resto de los lotes lo que tambin puede indicar la perdida de vigor. En la prueba con tetrazolio result un porcentaje de viabilidad de 40% lo que refuerza las afirmaciones anteriores. Para T(3) se puede ver la presencia de dos conjuntos de semillas con comportamiento similar en cuanto a momento de germinacin a las 38, 49 y 66 horas alcanzando en estos tiempos, picos en su comportamiento que ms que formar una curva sigmoidal,

reflejan tres momentos que se corresponden en cuanto al tamao alcanzado en la radcula.

CONCLUSIN Con base en la observacin de los resultados para el lote T(2), se concluy que el tratamiento que tuvo mayor influencia en la determinacin del vigor en el crecimiento de las semillas de maz Zea maz L., fue el tratamiento con alta temperatura por periodo relativamente largo (70 C por 2 minutos). El tratamiento con cloruro de amonio al 4% no provoc aparentemente modificaciones negativas o de inhibicin del vigor en las semillas, basndose nicamente en las observaciones del experimento de germinacin, el vigor que present este lote super a los otros, cosa que contrast significativamente con el resultado de la prueba de tetrazolio en la que se registr una viabilidad del 30% para este lote. Se concluye en este sentido, que es necesario realizar otra experiencia con NH4Cl para contrastar este resultado.

REFERENCIAS Araujo, JC y Bergemann, I. (1993). Armazenamento de sementes In: Sementes Florestais Tropicais. Associacao Brasileira de Tecnologia de Sementes Floestais. Brasil. pp 333-373 Bewley, J.D. (1997). Seed germination and dormancy. The Plant Cell. Vol. 9 p. 10551066. Bewley, J.O. (1994). Seeds. Physiology of development and germination. 2nd edition. Plenum Press. New York. pp 1-5.

Garca, Breijo Francisco Jos. (2006). Introduccin al funcionamiento de las plantas. Editorial Universidad Politcnica de Valencia. Espaa. pp. 163, 166, 167. Manual de prcticas Fisiologa y bioqumica vegetal. UAM-I. 13-I. Moreno, M. Ernesto. (1984). Anlisis fsico y biolgico de semillas agrcolas. Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Mxico. pp 169, 170. Niembro, A. (1990). La composicin qumica de las semillas y su efecto en su conservacin. In: Memorias Seminario Taller sobre Investigaciones en Semillas forestales Tripicales. CONIF. Serie Documentacin 18, Bogot, Colombia. pp, 111118. Popinigis, F. (1977). Fisiologia da Semente. Brasilia. Agiplan. p 289.

Warham, E.J., Butler, L.D., et al. Ensayos para la semilla de maz y trigo. Manual de laboratorio, CIMMYT, Mxico.