cido Ctrico

Mtodo UV Para la determinacin de cido ctrico en alimentos y otros materiales Cat. No. 10 139 076 035 Test-Combinado para 3 x 12 determinaciones
Principio (Ref. A1) El cido ctrico (citrato) es convertido a oxaloacetato en la reaccin catalizada por la enzima Citrato Liasa (CL) (1). oxaloacetato + acetato (1) Citrato CL En presencia de la enzima L-malato deshidrogenasa (L-MDH) y de L-lactado deshidrogenasa (L-LDH), el oxaloacetato y su producto de decarboxilacin, piruvato, se reducen a L-malato y L-lactato respectivamente, por medio de nicotinamida-adenina dinucletido reducido (NADH) (2,3). (2) Oxaloacetato + NADH + H L-MDH (3) Piruvato + NADH + H
+ +

BOEHRINGER MANNHEIM / R-BIOPHARM Enzymatic BioAnalysis/Food Analysis

Para uso in vitro solamente Almacenar a 2-8 C

Esta traduccin en espaol has sido realizada por RBiopharm Latinoamrica con el objeto de ayudar a los usuarios a entender el procedimiento, pero no se actualizan regularmente por lo que no pueden remplazar las instrucciones en ingls. Las instrucciones de uso que son vlidas, son aquellas incluidas en cada kit en Alemn y en Ingls, dado que estn escritas e impresas por el fabricante (Roche). Refirase siempre a las instrucciones incluidas en cada kit.

Pipetear en la cubeta Solucin 1

Blanco 1,000 ml

Muestra 1,000 ml

Solucin de muestra* 0,200 ml agua bidestilada 2,000 ml 1,800 ml Mezclar**, leer las absorbancias de las soluciones (A1) luego de aprox. 5 min e iniciar la reaccin por la adicin de: Solucin 2 0,020 ml 0,020 ml Mezclar**, al finalizar la reaccin (aprox. 5 min) leer las absorbancias de las soluciones (A2).
*Enjuagar el tip de la pipeta con solucin de muestra antes de dispensar la solucin de muestra. ** Por ejemplo, con una esptula plstica por agitacin despus de cubrir la cubeta con Parafilm (marca registrada de la American Can Company, Greenwich, Ct., USA).

L-malato + NAD
+

L-LDH

L-lactato + NAD

La cantidad de NADH oxidado en las reacciones (2) y (3) es estequiomtrico con la cantidad de citrato El NADH se mide por medio de su absorbancia a 334, 340 365 nm. El test combinado contiene 1 Tres Botellas 1: cada una con 1,4 g de liofilizado conteniendo: Tampn glicil-glicina; pH 7.8, L-malato deshidrogenasa, aprox. 136 U; L-lactato deshidrogenasa, aprox. 280 U; NADH, aprox. 12 U 2 Tres Botellas 2: cada una con 50 mg de citrato liasa liofilizada, aprox. 12 U. 3 Botella 3: Solucin estndar de cido ctrico para control del ensayo (la medicin de la solucin estndar no es necesaria para el clculo de los resultados). Usar la solucin estndar sin diluir. (Fecha de vencimiento: ver etiqueta). Preparacin de las soluciones para 10 determinaciones 1. Disolver el contenido de una Botella 1 con 12 ml de agua bidestilada. 2. Disolver el contenido de una Botella 2 con 0.3 ml de agua bidestilada. Estabilidad de los reactivos Los contenidos de las Botellas 1 y 2 son estables a 2-8C (ver etiqueta). La solucin 1 es estable por 2 semanas a 2-8C por 4 semanas a 20 a -25C. Llevar la Solucin 1 a 20-25C antes de su uso. La solucin 2 es estable por 1 semanas a 2-8C por 4 semanas a 20 a -25C. Procedimiento 1 Longitud de onda : 2 Cubeta de vidrio : Temperatura: Volumen final: Leer contra aire Soluc. de muestra: 340 nm, Hg 365 nm Hg 334 nm 1.00 cm de paso de luz 20-25C 3.020 ml (sin cubeta en el paso de luz) contra agua 3 1-80 ug de cido ctrico/ensayo (en 0.200-2.000 ml de volumen de muestra

Determinar la diferencia de absorbancias (A1 A2) para el blanco y las muestras. Sustraer la diferencia de absorbancia del blanco de la diferencia de absorbancia de la muestra correspondiente. A = (A1 A2)muestra - (A1 A2)blanco Ocasionalmente se puede obtener un valor negativo de (A1-A2)blanco. Este valor debe sumarse al (A1 A2)muestra de acuerdo a la frmula de clculo. La diferencia de absorbancias medida debe, como regla, ser mayor a 0.100 unidades de absorbancia para obtener resultados suficientemente precisos (ver Instrucciones para el desarrollo del ensayo y Sensibilidad y Lmite de deteccin pto. 4). Si la diferencia de absorbancia de la muestra (A muestra) es mayor que 1.000 (medido a 340 nm, Hg 334 nm) 0.500 (medido a Hg 365 nm) respectivamente, la concentracin de cido ctrico en la solucin de muestra es muy alta. La solucin de muestra debe diluirse en dicho caso de acuerdo a la tabla de dilucin. Clculos De acuerdo a la ecuacin general del clculo de las concentraciones: V x MW c = ------------------------------ x A (g/l) x d x v x 1000 V = volumen final (ml) v = volumen de muestra (ml) MW = peso molecular de la sustancia a ensayar (g/mol) d = paso de luz (cm) = coeficiente de extincin del NADH a: -1 -1 340 nm = 6.3 (l x mmol x cm ) -1 -1 Hg 365 nm = 3.4 (l x mmol x cm ) -1 -1 Hg 334 nm = 6.18 (l x mmol x cm ) Corresponde para cido ctrico (calculado como cido anhidro): 3.020 x 192.1 2.900 c = ----------------------------------- x A = ------------ x A (g ctrico / l x 1.00 x 0.200 x 1000 de sol. de muestra) para cido ctrico (calculado como monohidrato): 3.020 x 210.1 3.173 c = ----------------------------------- x A = ---------- x A (g ctrico mono x 1.00 x 0.200 x 1000 hydrato/l sol. de muestra)

1 La absorcin mxima de NADH es a 340 nm. En espectrofotmetros las mediciones se toman a la mxima absorcin, si se utilizan fotmetros espectrales equipados con lmpara de vapor de mercurio, las mediciones se toman a 365 nm 334 nm. 2 Si se desea se pueden utilizar cubetas descartables en lugar de cubetas de vidrio. 3 Ver las instrucciones para el rendimiento del ensayo. 4 La nicotinamida-adenina dinucletido reducida, NADH-Na2, Cat. No. 127345, disponible en Roche Applied Science.

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Si la muestra se ha diluido durante la preparacin, los resultados deben multiplicarse por el factor de dilucin F. Cuando se analizan muestras slidas semislidas que se pesan para la preparacin de la muestra, los resultados se calculan a partir de la cantidad pesadas: c c. ctrico (g/l de sol. ) Contenido c. ctrico = ----------------------------------- x 100 (g / 100g) peso muestra en g/l sol. 1. Instrucciones para el funcionamiento del kit La cantidad de cido ctrico presente en el ensayo debe ser entre 1 ug y 80 ug. Para obtener una diferencia de absorbancias suficiente, la solucin de muestra debe diluirse para dar una concentracin de cido ctrico entre 0.04 y 0.4 g/l. Tabla de dilucin Cantidad estimada de cido ctrico por litro < 0.4 g 0.4-4.0 g 4.0-40 g > 40 g Dilucin con agua 1+9 1 + 99 1 + 999 Dilucin Factor F 1 10 100 1000

En la literatura se han publicado los siguientes datos: CV = 4.4 % n = 10 extracto de hgado de conejo CV = 1.3 % n = 10 vino 1.3) Jugo de fruta: r = 0.095 + 0.025 x (c cido ctrico en g/l) g/l R = 0.130 + 0.054 x (c cido ctrico en g/l) g/l Vino: cido ctrico < 400 mg/l cido ctrico >400 mg/l: r = 14 mg/l R = 39 mg/l r = 28 mg/l R = 65 mg/l 2.13,2.14)

(Ref.

(Ref.

7. Interferencias / fuentes de error Si la solucin de muestra contiene cido pirvico libre, todo el NADH se ha consumido previo a la medicin de A1. En dicho caso se recomienda agregar mas NADH a la muestra (ej. 0.100 ml de 4 solucin de NADH, 5 mg/ml) ,y utilizar menos agua destilada. 8. Reconocimiento de interferencia durante el procedimiento del ensayo 8.1 Si la conversin de cido ctrico se ha completado en el tiempo estipulado en Procedimiento, se puede concluir, en general, que no han ocurrido interferencias. 8.2 Al completarse la reaccin, la determinacin puede reiniciarse con el agregado de cido ctrico citrato de sodio (cualitativa cuantitativamente): si la absorbancia se altera posteriormente al agregado del material estndar, esto tambin es una indicacin que no ha ocurrido interferencia. 8.3 Se pueden reconocer errores del operador interferencia en la determinacin por la presencia de sustancias contenidas en la muestra, realizando una doble determinacin utilizando dos volmenes diferentes de muestra (ej. 0.100 ml y 0.200 ml): las diferencias en las mediciones de las absorbancias deben ser proporcionales a los volmenes de muestra utilizados. Cuando se analizan muestras slidas, se recomienda que se pesen diferentes cantidades (ej. 1g y 2g) en recipientes de 100 ml. Las diferencias de absorbancias medidas y los pesos de la muestra utilizados deben ser proporcionales para volmenes idnticos. 8.4 Se pueden reconocer posibles interferencias causadas por sustancias contenidas en la muestra utilizando un estndar interno como control: adems de las determinaciones de la muestra, el blanco y el estndar, se lleva a cabo otra determinacin con la muestra y el control juntos en el mismo ensayo. La recuperacin se puede calcular de la diferencia de absorbancias medidas. 8.5 Posibles prdidas durante la determinacin se puede reconocer por medio de ensayos de recuperacin: la muestra debe prepararse y analizarse con y sin el agregado de material estndar. Dicha adicin debe recuperarse cuantitativamente dentro del rango del error del mtodo. 9. Riesgo de los reactivos Los reactivos utilizados en la determinacin de cido ctrico no son materiales riesgosos de acuerdo a las Regulaciones de Sustancias Peligrosas, las Leyes Qumicas la Regulacin 67/548/EEC de la CEE y subsecuentes Guas de alteraciones, suplementos y adaptaciones. An as, deben cumplirse todas las medidas de seguridad generales que se aplican a todas las sustancias qumicas. Luego de su utilizacin, los reactivos deben desecharse con el descarte del laboratorio, pero deben observarse siempre las regulaciones locales. El material de empaque puede desecharse en recipientes destinados al reciclado. 10. Informacin general sobre la preparacin de muestra Al llevar a cabo el ensayo: Usar muestras lquidas lmpidas, incoloras y prcticamente neutras directamente luego de diluirlas de acuerdo a la tabla de dilucin, y usar un volumen hasta 2.000 ml. Filtrar soluciones turbias; Desgasear muestras que contengan dixido de carbono (ej. por filtracin); Ajustar muestras cidas a un pH aproximado de 8 por el agregado de una solucin de hidrxido de sodio de potasio; Ajustar muestras cidas y levemente coloreadas a un pH aproximado de 8 por el agregado de una solucin de hidrxido de sodio de potasio y posterior incubacin durante 15 min; Tratar las muestras altamente coloreadas que se usan sin diluir en grandes volmenes con polivinilpolipirrolidona (PVPP) con poliamida, (ej. 1 g/100 ml); Moler homogeneizar las muestras slidas semislidas, extraer con agua disolver en agua y filtrar si es necesario; Desproteinizar muestras que contengan protenas con cido perclrico;

Si la medida de la diferencia de absorbancias (A) es muy pequea (ej. < 0.100), debe prepararse nuevamente la solucin de muestra (pesar mas cantidad de muestra diluir menos la muestra) el volumen de muestra que se pipetea en la cubeta puede aumentarse hasta 2.000 ml. El volumen de agua agregada debe, en ese caso, disminuirse para obtener el mismo volumen final en el ensayo para la muestra y el blanco. El nuevo volumen de muestra v debe tomarse en cuenta en los clculos. 2. Informacin tcnica 2.1. Al hacer los clculos, debe indicarse claramente si los resultados se van a dar como cido ctrico (masa molar 192.1 g/l), cido ctrico monohidrato (masa molar 210.1) como citrato (masa molar 189.1 g/l). (En las determinaciones enzimticas, se mide el in citrato). 2.2. Al evaluar los resultados analticos, debe tomarse en cuenta que en la determinacin acidimtrica del cido total calculado como cido ctrico se miden protones y en la determinacin enzimtica se mide el ion citrato. Por lo tanto no se pueden comparar ambos resultados directamente. 3. Especificidad (Ref. 1) El mtodo es especfico para cido ctrico. Al analizar cido ctrico monohidrato comercial, se obtienen resultados de > 100% si el agua de cristalizacin se pierde durante el almacenamiento y los resultados se calculan con el peso molecular del cido ctrico monohidrato (210.1). 4. Sensibilidad y lmite de deteccin (Ref. 1.4) La mnima diferencia en absorbancia para el procedimiento es de 0.005 unidades de absorbancia. Este valor corresponde, con un mximo volumen de v = 2.000 ml y medido a 340 nm, a una concentracin de cido ctrico de 0.25 g/l de solucin de muestra (si se utiliza un v = 0.200 ml, esto corresponde a 2.5 mg/l por litro de solucin de muestra). El lmite de deteccin de 0.5 mg/l deriva de la diferencia de absorbancia de 0.010 (medida a 340 nm) y un mximo de volumen de muestra de v = 2.000 ml. 5. Linealidad La linealidad de la determinacin es desde aproximadamente 1 ug de cido ctrico/ensayo (0.5 mg de cido ctrico /l de solucin de muestra, volumen de muestra v = 2.000 ml) hasta 80 ug de cido ctrico /ensayo (0.4 g de cido ctrico /l de solucin de muestra, volumen de muestra v = 0.200 ml). 6. Precisin En una determinacin por duplicado de una solucin de muestra, se puede obtener una diferencia de 0.005 a 0.010 unidades de absorbancia. Con un volumen de muestra de v = 0.200 ml y medido a 340 nm, esto corresponde a una concentracin de cido ctrico de 3-5 mg/l. (Si la muestra se diluye durante la preparacin de la misma, el resultado se debe multiplicar por el factor de dilucin F. Si la muestra se pesa para su preparacin, ej. usando 1 g muestra/100 ml = 10 g/l, se puede obtener una diferencia de 0.03-0.05g/100 g).

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Extraer muestras que contengan grasa con agua caliente (la temperatura de extraccin debe ser mayor que el punto de fusin de la grasa involucrada). Enfriar para permitir que la grasa se separe, colocar el recipiente en bao de hielo por 15 min y filtrar; Nota importante No puede utilizarse la clarificacin de Carrez en la preparacin de la muestra para la determinacin de cido ctrico debido a la baja tasa de recuperacin (absorcin de cido ctrico)

Si se desea determinar, adems de cido ctrico libre, cido ctrico esterificado, ej. steres ctricos de polifenoles antocianos, los steres debern convertirse en cido libre por hidrlisis alcalina. Proceder como se detalla en Vinos. Determinacin de cido ctrico en margarina, aceite comestible y ungentos Pesar aproximadamente 5 g de muestra homogeneizada en un recipiente de agitacin, agregar 70 ml de agua destilada y mientras se agita vigorosamente sobre un agitador trmico, llevar a ebullicin. Transferir la fase acuosa con pipeta en un recipiente graduado de 100 ml. Repetir la extraccin con aprox. 20 ml de agua destilada. Permitir que baje la temperatura a 20-25 C y llevar a volumen con agua destilada. Colocar el recipiente durante 15 min en bao de hielo en el refrigerador. Filtrar a travs de filtro de papel. De acuerdo a la concentracin de cido ctrico esperada, usar el filtrado puro diluido para el ensayo. Determinacin de steres de cido ctrico (ej. steres glicridos de cido ctrico, agentes emulsionantes) El cido ctrico que est unido a steres mono y diglicridos de cido ctrico respectivamente, puede determinarse en presencia de cido ctrico libre (citrato) si la muestra se extrae con cloroformo y los steres son subsecuentemente saponificados con hidrxido de potasio. En ese caso proceder: Hervir las muestras bien desmenuzadas y homogeneizadas que contienen hasta aprox. 120 mg de ster monoglicrido de cido ctrico (ej. ster mono-oleilcitril glicrido, PM aprox. 550) hasta aprox. 170 mg de ster diglicrido de cido ctrico (ej. ster dioleilcitril glicrido, PM aprox. 810) con 50 ml de cloroformo en recipiente redondo con condensador con reflujo por aprox. 2 horas. Filtrar y lavar con cloroformo. Evaporar el cloroformo en evaporador rotatorio. Hervir el residuo seco con 25 ml de hidrxido de potasio metanlico (1 M) durante 10 min. en condensador de reflujo. Enfriar hasta 20-25 C y neutralizar o acidificar levemente con aprox. 5 ml de cido clorhdrico (5 M). Transferir la solucin cuantitativamente a un recipiente graduado de 100 ml, llevar a volumen con agua, y filtrar. Usar la solucin clara para el ensayo. Para la determinacin del contenido se debe tener en cuenta el peso molecular del glicrido. 12. Otras aplicaciones El mtodo puede ser utilizado para los anlisis de papel, cosmticos, detergentes (Ref. 3.6), medicamentos, as como el anlisis de muestras biolgicas con fines de investigacin. Para detalles del muestreo, tratamiento y estabilidad de la muestra ver Re. 1.3 y 1.5. Determinacin de cido ctrico en muestras de fermentacin y en medio de cultivo de clulas Colocar la muestra (luego de centrifugar si es necesario) en un bao de agua a 80C por 15 min para detener las reacciones enzimticas. Centrifugar y utilizar el sobrenadante (diluido de acuerdo a la tabla de dilucin si es necesario) para el ensayo. Alternativamente se puede desproteinizar con cido perclrico. Ver los ejemplos mencionados anteriormente. Homogeneizar medio gelatinoso de agar con agua y proseguir el tratamiento como se ha descrito.

11. Ejemplos de aplicacin Determinacin de cido ctrico en jugos de fruta, refrescos, t y bebidas similares Remover turbidez por filtracin y diluir la muestra hasta obtener una concentracin de cido ctrico entre 0.04 y 0.4 g/l. La solucin diluida se puede utilizar para el ensayo an si es coloreada. Solo jugos intensamente coloreados deben decolorarse cuando se utilizan puros en el ensayo debido a su bajo contenido en cido ctrico. En dichos casos proceder como sigue: Mezclar 10 ml de jugo con 0.1 g de poliamida polivinilpolipirrolidona (PVPP), agitar por 1 min y filtrar. Usar la solucin clara levemente coloreada para el ensayo, neutralizar si es necesario. Determinacin de cido ctrico en vino Vinos levemente coloreados pueden utilizarse directamente para el ensayo luego de una dilucin de acuerdo a la tabla de dilucin. Vinos altamente coloreados deben decolorarse cuando se utilizan puros para la determinacin, sobre todo cuando se aumenta el volumen debido a su baja concentracin de cido ctrico: Mezclar 10 ml de vino con 0.1 g de poliamida polivinilpolipirrolidona (PVPP), agitar por 1 min y filtrar. Usar la solucin clara levemente coloreada para el ensayo. Determinacin de steres de cido ctrico en vino Calentar 20 ml de muestra y 6 ml de hidrxido de potasio alcohlico (aprox. 2 M; metanol etanol) por 10 min en un condensador de reflujo mientras se agita; enfriar a 20-25 C y neutralizar con cido sulfrico (2 M). Transferir cuantitativamente a un recipiente graduado de 50 ml y llevar a volumen con agua destilada. Utilizar la solucin obtenida directamente en el ensayo luego de una dilucin, si es necesario (= cido ctrico total, que el la suma del cido ctrico libre y el esterificado). Determinacin de cido ctrico en cerveza Para la remocin de cido carbnico, agitar aproximadamente 5-10 ml de cerveza durante 1 min con agitador de vidrio filtrar. La muestra libre de CO2 se utiliza para el ensayo sin posterior dilucin. Determinacin de cido ctrico en pan, productos crnicos, queso, vegetales y productos de fruta Moler aprox. 20-50g de material de muestra (usar por ej. mortero u homogeneizador). Pesar 10g de muestra bien mezclada en recipiente de homogeneizacin y agregar 50 ml de cido perclrico (1 M); homogeneizar por 2 min (hasta 10 min). Se permite un calentamiento hasta 35 C. Centrifugar el homogenato. Ajustar 20 ml del sobrenadante a pH 8-10 con aprox. 4 ml (medir el volumen de OHK necesario) de solucin de hidrxido de potasio (5 M). Colocar la solucin en el refrigerador por 15 min para que precipite cuantitativamente del perclorato de potasio formado, filtrar, y descartar los primeros ml. Usar el filtrado directamente en el ensayo luego de su dilucin de acuerdo a la tabla de dilucin. Para el clculo del contenido (en g/100 g) de acuerdo a la frmula ya mencionada (ver Clculos), se necesita la cantidad de muestra utilizada para preparar la solucin. Si se utiliza la preparacin de muestra recin descripta y, considerando la cantidad de agua de la muestra, el peso de la muestra se calcula de acuerdo a la siguiente frmula: A x 1000 x d Peso muestra = ----------------------------- (g/l de solucin de muestra) (b + a x w) x (d + e) Donde: a = muestra pesada en g b = volumen de cido perclrico en ml d = volumen de sobrenadante para ajustar pH e = volumen de KOH para ajustar pH a 8-10 en ml w = contenido de agua de la muestra (%p/p) / 100 1000 = factor para g expresado en mg (La gravedad especfica de agua de la muestra a 20-25 C es aprox. 1 g/ml. Puede despreciarse para el clculo).

Referencias
1.1 Gruber, W. & Mllering, H. (1966) Citrat-Lyase und Bestimmung von Citrat, Biochemische Zeitschrift 346, 85-88 1.2 Mllering, H. & Gruber, W. (1966) Determination of citrate with citrate lyase, Anal. Biochem. 17, 369-376 1.3 Dagley, St. (1974) in Methoden der enzymatischen Analyse (Bergmeyer, H. U., Hrsg.) 3. Aufl., Bd. 2, S. 1607-1611; Verlag Chemie Weinheim and (1974) in Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H. U., ed.) 2nd ed., vol. 3, pp. 1562-1565, Verlag Chemie, Weinheim/ Academic Press, Inc., New York and London 1.4 Mllering, H. (1985) in Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H. U., ed.) 3rd ed., vol. VII, pp. 2-12; Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach/Florida, Basel 1.5 Passonneau, J. V. & Brown, J. G. (1974) in Methoden der enzymatischen Analyse (Bergmeyer, H. U., Hrsg.) 3. Aufl. Bd. 2, S. 1613-1614, Verlag Chemie Weinheim and (1974) in Methods of Enzymatic Analysis (Bergmeyer, H.U., ed.) 2nd ed., vol. 3, p. 1568, Verlag Chemie, Weinheim/Academic Press, Inc., New York and London 2.1 Bundesverband der Deutschen Feinkostindustrie e.V. Bonn; Analysenmethoden: Bestimmung von Citronensure in Tomatenmark, IV/41 (Dezember 1979) 2.2 Norme Franaise Homologue NF V 76-104 (Octobre 1980) Jus de Fruits et Jus de Lgumes, Dtermination de la Teneur en Acides Carboxyliques 2.3 Amtliche Sammlung von Untersuchungsverfahren nach 35 LMBG; Untersuchung von Lebensmitteln: Bestimmung von Citronensure (Citrat) in Fleischerzeugnissen, 07.00-13 (November 1981); Bestimmung von Citronensure (Citrat) in Wurstwaren, 08.00-15 (November 1981); Bestimmung von Citronensure in Tomatenmark, 26.11.03-5 (Mai 1983); Bestimmung von Citronensure in

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Tomatenketchup und vergleichbaren Erzeugnissen, 52.01.01-5 (November 1983); Bestimmung von Citronensure (Citrat) in Fruchtsften, 31.00-14 (November 1984); Enzymatische Bestimmung des Gehaltes an Citronensure (Citrat) in Frucht- und Gemsesften, L 31.00-14 (Januar 1997); Bestimmung des Gehaltes an Citronensure (Citrat) in Gemsesften, spektralphotometrische Bestimmung von NADH, 26.26-12 (Januar 1997) 2.4 Schweizerisches Lebensmittelbuch, Kapitel 61B (Enzymatische Bestimmungen)/3.1 (1981), Kapitel 2A (Milchmischgetrnke)/18 (1980), Kapitel 2B (Sauermilchprodukte)/ 15 (1980), Kapitel 4 (Milchdauerwaren)/10.3 (1993), Kapitel 28A (Frucht- und Gemsesfte u.a.)/7.5 (1988), Kapitel 30 (Wein)/36 (1967), Kapitel 2.8 Henniger, G. & Mascaro, L. (1985) Enzymatic-ultraviolet determination of citric acid in wine, J. Assoc. Off. Anal. Chem. 68, 1024-1027 2.9 Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists (1990), 15th ed., vol. 2, p. 746 (985.11) 2.10 Deutsche Norm DIN 10325 (Januar 1986) Bestimmung des Citronensuregehaltes in Schmelzkse (Enzymatisches Verfahren) 2.11 Nederlandse Norm NEN 2851 (1e druk, september 1987) Vruchtesappen: Bepaling van het citronenzuurgehalte; Enzymatische methode (Fruits juices Determination of the citric acid content - Enzymatic method) 2.12 RSK-Values, The Complete Manual, Guide Values and Ranges of Specific Numbers for Fruit Juices and Nectars, Including the Revised Methods of Analysis (1987), 1st ed., Verlag Flssiges Obst/Liquid Fruit, D-56370 Eschborn, pp. 97-100 2.13 Recueil des mthodes internationales d'analyse des vins et des mots, Complment no 1 l'dition officielle de juin 1990, OFFICE INTERNATIONAL DE LA VIGNE ET DU VIN, S. 187-189 2.14 Amtsblatt der Europischen Gemeinschaften L 272 (3. Oktober 1990), Rechtsvorvorschriften: Verordnung (EWG) Nr. 2676/90 der Kommission vom 17. September 1990 zur Festlegung gemeinsamer Analysenmethoden fr den Weinsektor (S. 94-96); Official Journal of the European Communities L 272 (3 October 1990), Legislation: Commission Regulation (EEC) No 2676/90 of 17 September 1990 determining Community methods for the analysis of wines (pp. 94-96) 2.15 International Dairy Federation, Provisional Standard 34C (1992) Cheese & Processed Cheese products, Determination of Citric Acid Content (Enzymatic Method) 2.16 Verband Deutscher Landwirtschaftlicher Untersuchungsund Forschungsanstalten, VDLUFA (1993) Enzymatische Bestimmung des Citronensuregehaltes in Kse und Schmelzkse, Methodenbuch Band VI, C8.7 2.17 Deutsche Norm DIN EN 1137 (Dez. 1994) Frucht- und Gemsesfte; Enzymatische Bestimmung des Gehaltes an Citronensure (Citrat); Spektralphotometrische Bestimmung von NADH (Fruit and vegetable juices; Enzymatic determination of citric acid (citrate) content; NADH spectrometric method) 2.18 European Standard EN 1137 (Dec . 1994) Fruit and vegetable juices, Enzymatic determination of citric acid (citrate) content by the NADH spectrometric method 2.19 Deutsche Norm DIN 10259 (Juni 1998) Material zur Herstellung von Umhllungen fr Zigarettenfilter, Zigaretten und andere Tabakerzeugnisse, Bestimmung des Citratgehaltes 2.20 International Standard ISO 2963 (Mrz 1997) Cheese and processed cheese products - Determination of citric acid content - Enzymatic method 2.21 Standard der Russischen Fderation / Standard of the Russian Federation / Gosstandart Rossii GOST R 51129-98 (1998) Fruit and vegetable juices. Method for determination of citric acid (citrate)

30A (Wein aus Trauben)/6.4 (1993), Kapitel 34 (Grungsessig)/4.5 (1994), Kapitel 34A (Essig und essighnliche Erzeugnisse)/21 (1970) 2.5 Gombocz, E., Hellwig, E., Vojir, F. & Petuely, F. (1981) Deutsche LebensmittelRundschau 77, 4-5 2.6 Brautechnische Analysenmethoden, Band III, S. 565-568 (1982), Methodensammlung der Mitteleuropischen Brautechnischen Analysenkommission (MEBAK) 2.7 International Federation of Fruit Juice Producers (IFU, Methods of Analysis, no. 22- 1985); contained in "Code of Practice for Evaluation of Fruit and Vegetable Juices" (1996) edited by Association of the Industry of Juices and Nectars from Fruits and Vegetables of the European Economic Community (A.I.J.N.) 2.22 Standard der Russischen Fderation / Standard of the Russian Federation / Gosstandart Rossii GOST R 51257-99 (1999) Processed cheese. Method for determination of citric acid content 3.1 Mayer, K. & Pause, G. (1965) Eine enzymatische Citronensure-Bestimmung, Mitt. Geb. Lebensmittelunters. Hyg. 56, 454-458 3.2 Mayer, K. & Pause, G. (1969) Enzymatische Zitronensurebestimmung an gerbund farbstoffreichen Weinen, Lebensm.-Wiss. Technol. 2, 143 3.3 Bsching, L. (1968) Methode zur enz. Bestimmung von Citronensure und Brenztraubensure in Zuckerfabrikationsprodukten, Zucker 21, 531-535 3.4 Schiweck, H. & Bsching, L. (1971) Citronensure- und Raffinosegehalt in Zuckerrbenwurzelkrpern und -blttern whrend des Wachstums und Fllung der Citronensure whrend der Saftreinigung, ZUCKER 24, 249-253 3.5 Piendl, A. (1974) Citrat im Bier, Brauwissenschaft 27, 250-257 und 305-311 3.6 Taraborelli, J. A. & Upton, R. P. (1975) Enzymatic Determination of Citrate in Detergent Products, J. Am. Oil Chem. Soc. 52, 248-251 3.7 Gerstenberg, H. (1978) Nachweis von Teigsuerungsmitteln in Brot aufgrund des Zitronensuregehalts, Lebensm. Chemie u. gerichtl. Chemie 32, 125-126 3.8 Seppi, A. & Sperandio, A. (1983) L'acido citrico nei vini, determinazione con metodo enzimatico e con metodo chimico ufficiale, La Rivista della Societa Italiana di Scienza dell' Alimentazione 12, 479-482 3.9 Lagemann, M., Anders, D., Graef, V. & Bdeker, R.H. (1985) Einflu von Kakao auf die Ausscheidung von Oxalat, Citrat, Magnesium und Calcium im Urin bei Kindern, Monatsschr. Kinderheilkd. 133, 754-759 3.10 Klopper, W. J., Angelino, S.A.G.F., Tuning, B. & Vermeire, H.A. (1986) Organic acids and glycerol in beer, J. Inst. Brew. 92, 225-228 3.11 Talpay, B. (1988) Inhaltsstoffe des Honigs - Citronensure (Citrat), Deutsche Lebensmittel- Rundschau 84, 41-44 3.12 Schlimme, E., Lorenzen, P. Chr., Martin, D. & Thormhlen, K. (1996) Analytical differentiation of butter types by specific compositional parameters of the aqueous butter phase, Milchwissenschaft 51, 139-143 3.13 Saalfeld, U. & Freund, W. (1999) Charakterisierung pulverisierter Sauerteige und Mglichkeiten ihrer qualitativen Bestimmung im Brot - Teil 1: Suregehalt und Abbauvermgen fr L-Malat und Citrat, Deutsche Lebensmittel-Rundschau 95, 209219

Solucin control de cido ctrico del ensayo (Botella 3)

Concentracin *: ver etiqueta de la botella La Solucin control de cido ctrico es una solucin acuosa estabilizada de cido ctrico. Sirve como control del ensayo enzimtico para la determinacin de cido ctrico en alimentos y otros materiales. Aplicacin: 1. Adicin de la solucin control de cido ctrico al ensayo: La solucin control se utiliza en el ensayo en el lugar de la solucin de muestra. 2. Reiniciar la reaccin, cuantitativamente: Luego de finalizada la reaccin con la solucin de muestra y luego de leda A2 agregue 0.100 ml de solucin control del ensayo. Lea la absorbancia A3 al finalizar la reaccin (aprox. 10 min.). Calcular la concentracin a partir de la diferencia (A2-A3) de acuerdo a la frmula general para el clculo de la concentracin. Debe tomarse en cuenta el cambio de volumen. Los resultados obtenidos, casi no difieren de la concentracin que figura en la etiqueta porque la dilucin de la mezcla del ensayo por el agregado de la solucin control es insignificante. 3. Estndar interno: La solucin control del ensayo puede utilizarse como estndar interno para controlar el correcto funcionamiento del ensayo (errores groseros) y para ver si la solucin de muestra est libre de sustancias interferentes. Pipetear dentro Blanco Muestra Estndar Muestra + de la cubeta estndar Solucin 1 1.000 ml 1.000 ml 1.000 ml 1.000 ml Solucin 0.200 ml 0.100 ml muestra 0.200 ml 0.100 ml Control ensayo 2.000 ml 1.800 ml 1.800 ml 1.800 ml Agua destilada Mezclar, leer las absorbancias de las soluciones (A1) luego de aprox. 5 min. Continuar como se describe en el esquema de pipeteo bajo del Procedimiento. Seguir las instrucciones dadas en Instrucciones para el desarrollo del ensayo y en los pi de pgina. La recuperacin del estndar se calcula de acuerdo a la siguiente frmula: 2 x A muestra + estndar - A muestra recuperacin = ----------------------------------------------- x 100 (%) A estndar

* Determinada como cido ctrico anhidro

2013-10

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