Estudo Da Hidrólise de Carboidratos em Meio Neutro, Utilizando Uma Mistura de Ésteres Derivados Do Óleo de Mamona.

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
INSTITUTO DE QUMICA DE SO CARLOS

Estudo da hidrlise de carboidratos em meio neutro, utilizando uma Estudo da hidrlise de carboidratos em meio neutro, utilizando uma Estudo da hidrlise de carboidratos em meio neutro, utilizando uma Estudo da hidrlise de carboidratos em meio neutro, utilizando uma
mistura de steres derivado mistura de steres derivado mistura de steres derivado mistura de steres derivados ss s do leo de mamona. do leo de mamona. do leo de mamona. do leo de mamona.

Juliana Ribeiro Gabriel Juliana Ribeiro Gabriel Juliana Ribeiro Gabriel Juliana Ribeiro Gabriel

Tese apresentada ao Instituto de Qumica de
So Carlos, da Universidade de So Paulo,
para a obteno do ttulo de Doutor em
Cincias (Qumica Analtica).

Orientador: Prof. Dr. Gilberto Orivaldo Chierice Orientador: Prof. Dr. Gilberto Orivaldo Chierice Orientador: Prof. Dr. Gilberto Orivaldo Chierice Orientador: Prof. Dr. Gilberto Orivaldo Chierice

So Carlos
2009

Dedicatria Dedicatria Dedicatria Dedicatria

A Deus: A Deus: A Deus: A Deus:

Mas se Deus as flores e as rvores
E os montes e sol e o luar,
Ento acredito nele,
Ento acredito nele a toda a hora,
E a minha vida toda uma orao e uma missa,
E uma comunho com os olhos e pelos ouvidos.

Alberto Caeiro, heternimo de Fernando Pessoa

Aos meus pais, Aos meus pais, Aos meus pais, Aos meus pais, Jos Lzaro e Ana Maria: Jos Lzaro e Ana Maria: Jos Lzaro e Ana Maria: Jos Lzaro e Ana Maria:

que me ensinaram a ver nas pequenas coisas de cada dia o verdadeiro
significado de felicidade, amizade e amor.

Aos meus irmos, Paulo Henrique e Mariana: Aos meus irmos, Paulo Henrique e Mariana: Aos meus irmos, Paulo Henrique e Mariana: Aos meus irmos, Paulo Henrique e Mariana:

nossa eterna unio, em todos os momentos, no importando a distncia.

A minha tia, Maria Catharina: A minha tia, Maria Catharina: A minha tia, Maria Catharina: A minha tia, Maria Catharina:

por todo apoio que recebi e por sempre desejar sucesso em meus estudos.

Ao Gustavo: Ao Gustavo: Ao Gustavo: Ao Gustavo:

pois sempre esteve ao meu lado, com um sorriso no rosto, e me ensinou a
nunca desistir.

Agradecimentos Agradecimentos Agradecimentos Agradecimentos

Ao Prof. Dr. Gilberto Orivaldo Chierice, por confiar a mim um trabalho to
importante, por ter me recebido de portas abertas, por contribuir com meu crescimento
profissional e pessoal; pois foi com a liberdade que eu tive dentro do laboratrio que pude
entender o valor da responsabilidade. Obrigada!
Ao Prof. Dr. der Tadeu Gomes Cavalheiro, agradeo pela confiana ao deixar em
minhas mos o uso de um equipamento que foi de grande importncia para a realizao desse
trabalho;
Ao Prof. Dr. Artur de Jesus Motheo e ao Prof. Dr. Fernando Mauro Lanas, por
cederem espao em seus laboratrios para a realizao das minhas primeiras anlises;
Ao Prof. Dr. George Jackson de Moraes Rocha (USP-Lorena), por fornecer as amostras
e por auxiliar no mtodo de identificao da celulose;
A todos do laboratrio 14, aos que j foram embora e aos que vo ficar: Puff, Mrcio,
J, Sandra, Carol, Graziela, Royal (G), Rafael, Toni, Avar, Tia Lu, Lucinia, Roberta, Ana
Paula, Gilbert, Isabel, rica, Pardal, Jnia, Ivana, Milena, Priscila, Tio Lu, Seu Glimaldo, Gisele,
Mari (credo!), Marly, Toninho e Salvador.
Aos meus queridos amigos da vida toda: Rita, Amanda e Felipe, que fizeram dos meus
dias de trabalho, dias especiais.
Aos meus ICs, Erik e Gabriel, pela amizade e pela confiana; minha maior alegria foi
ter vocs trabalhando ao meu lado;
A minha amiga Gabi, que me ajudou a comear e entender esse trabalho;
Ao Douglas, Geoff e Sandra, do Laboratrio de Eletroqumica Interfacial, por toda a
ajuda e amizade;
A Elaine e a Odete do Laboratrio de Cromatografia (Croma) pela ajuda prestada;
Aos amigos que fiz no Instituto de Qumica de So Carlos: Milena, Alessandra,
Carlinhos, Erlon, Josy (do tempo do colegial), Tlio, Morcego e Tortuguita;
Aos amigos da graduao, Angerson, Daniel, Paula, Samantha, Las, Thais, Renata, Ju
Cothy e Carol, pois mesmo longe ainda mantemos contato.
As secretrias da ps-graduao, Andria e Slvia pela grande ajuda em todos os
momentos;
A todos do Instituto de Qumica de So Carlos, que de forma direta ou indireta
contriburam para a realizao deste trabalho;
A CAPES pela bolsa concedida.

Sede como os pssaros que, ao pousarem um instante sobre os ramos muito leves,
sentem-nos ceder, mas cantam! Eles sabem que possuem asas.

Victor Hugo

Sumrio Sumrio Sumrio Sumrio
Lista Lista Lista Lista de Figuras de Figuras de Figuras de Figuras
Lista de Tabelas Lista de Tabelas Lista de Tabelas Lista de Tabelas
Resumo Resumo Resumo Resumo
Abstract Abstract Abstract Abstract

Introduo Introduo Introduo Introduo 1 11 12 22 2

1. Carboidratos 13
1.1. A glicose 15
1.2. A frutose 16
1.3. Dissacardeos 17
1.3.1. A sacarose 17
1.4. Polissacardeos 19
1.4.1. A celulose 20
1.5. A importncia dos carboidratos 22
2. Mtodos para a identificao de acares 24
2.1. Espectroscopia de ultravioleta/visvel 24
2.2. Cromatografia lquida de alta eficincia 26
3. Fora inica 29
4. leo de mamona 32

Objetivos Objetivos Objetivos Objetivos 36 36 36 36

Procedimento experimental Procedimento experimental Procedimento experimental Procedimento experimental 38 38 38 38

1. Preparo das solues 39
1.1. Diluies da mistura de steres derivados do leo de mamona 39
1.2. Solues de sacarose para as anlises cromatogrficas 39
1.3. Solues de celulose para as anlises espectrofotomtricas 40
1.4. Solues de sacarose e cloreto de sdio (NaCl) para as anlises
espectrofotomtricas 40

1.5. Reagente de DNS 41
2. Anlise cromatogrfica 42
2.1. Quantificao dos produtos de hidrlise da sacarose 42
2.2. Verificao da etapa intermediria da reao de hidrlise 43
3. Anlise espectrofotomtrica 44
3.1. Hidrlise da celulose 44
3.2. Hidrlise das solues de sacarose com NaCl 45

Resultados e Discusso Resultados e Discusso Resultados e Discusso Resultados e Discusso 47 47 47 47

1. Anlise cromatogrfica 48
1.1. Quantificao dos produtos de hidrlise da sacarose 48
1.2. Verificao da etapa intermediria da reao 53
2. Anlise espectrofotomtrica 56
2.1. Hidrlise da celulose 56
2.1.1. Estudo cintico da decomposio da celulose 62
2.2. Hidrlise das solues de sacarose com NaCl 64
2.2.1. Clculo da constante de equilbrio das reaes de hidrlise da
sacarose e NaCl 68

Concluses e sugestes para trabalhos futuros Concluses e sugestes para trabalhos futuros Concluses e sugestes para trabalhos futuros Concluses e sugestes para trabalhos futuros 72 72 72 72

Referncias bibliogrficas Referncias bibliogrficas Referncias bibliogrficas Referncias bibliogrficas 76 76 76 76

Lista de Figuras Lista de Figuras Lista de Figuras Lista de Figuras

Figura 1: Figura 1: Figura 1: Figura 1: Projees de Fischer para as D-aldoses at 6 tomos de carbono.................14

Figura 2: Figura 2: Figura 2: Figura 2: Formao do hemiacetal...15

Figura 3: Figura 3: Figura 3: Figura 3: Estrutura qumica da D-glicose....................................................................15

Figura 4: Figura 4: Figura 4: Figura 4: Estrutura qumica da D-frutose....................................................................16

Figura 5: Figura 5: Figura 5: Figura 5: Estrutura qumica da sacarose.....................................................................18

Figur Figur Figur Figura 6: a 6: a 6: a 6: Mecanismo de hidrlise da sacarose em meio cido....................................19

Figura 7: Figura 7: Figura 7: Figura 7: Estrutura qumica da celulose.....................................................................20

Figura 8: Figura 8: Figura 8: Figura 8: Mecanismo de hidrlise da celulose em meio cido....................................21

Figura 9: Figura 9: Figura 9: Figura 9: Importncia da glicose em processos biolgicos..........................................23

Figura 10: Figura 10: Figura 10: Figura 10: Estrutura qumica dos antgenos A, B e H..................................................24

Fi Fi Fi Figura 11: gura 11: gura 11: gura 11: Estrutura qumica do triglicerdeo do cido ricinolico...............................32

Figura 12: Figura 12: Figura 12: Figura 12: Transesterificao do leo de mamona com glicis...................................33

Figura 13 Figura 13 Figura 13 Figura 13: :: : Grfico da curva analtica da sacarose.......................................................48

Figura 14 Figura 14 Figura 14 Figura 14: :: : Cromatogramas com os valores correspondentes concentrao de
sacarose: a) 0,1 mol L
-1
e b) 0,085 mol L
-1
..................................................................50

Figura 15 Figura 15 Figura 15 Figura 15: :: : Cromatograma correspondente ao oitavo dia de reao da sacarose com a
mistura de steres......................................................................................................51

Figura 16 Figura 16 Figura 16 Figura 16: :: : Grfico correspondente ao dcimo terceiro dia de reao da sacarose com a
mistura de steres.....................................................................................................52

Figura 17 Figura 17 Figura 17 Figura 17: :: : Tempos de reteno correspondentes : ster 0,1%, glicose, frutose e
sacarose....................................................................................................................53

Figura 18 Figura 18 Figura 18 Figura 18: :: : Comparao entre a soluo de ster 0,1% e a soluo de sacarose
preparada com ster 0,1%........................................................................................54

Figura 1 Figura 1 Figura 1 Figura 19 99 9: :: : Comparao entre os tempos de reteno das solues de ster 0,1%,
sacarose e ster (t
0
) e sacarose e ster (t
9
)..................................................................55

Figura 20 Figura 20 Figura 20 Figura 20: :: : Comparao entre o padro de glicose e a soluo de sacarose com ster
0,1% no nono dia de reao....................................................................................56

Figura 21 Figura 21 Figura 21 Figura 21: :: : Grfico da curva analtica da glicose.........................................................57

Figura 22 Figura 22 Figura 22 Figura 22: :: : Espectro eletrnico correspondente reao de hidrlise da celulose com a
mistura de steres 0,1% (primeiro dia de reao)......................................................58

Figura 23 Figura 23 Figura 23 Figura 23: :: : Espectros correspondentes ao primeiro (t
0
) e ao oitavo dia (t
8
) de reao da
celulose com a mistura de steres 0,1%.....................................................................59

Figura 24 Figura 24 Figura 24 Figura 24: :: : Comparao dos valores de absorbncia do primeiro (t
0
), oitavo (t
8
) e
nono dia (t
9
) da reao da celulose com a mistura de steres 0,1%...........................60

Figura 25: Figura 25: Figura 25: Figura 25: Trigsimo dia de reao da celulose (t
30
) com a mistura de steres em
relao ao primeiro (t
0
), oitavo (t
8
) e nono (t
9
) dias..................................................60

Figura 26: Figura 26: Figura 26: Figura 26: Mudana de colorao de diferentes solues com o reagente de DNS: 1)
gua destilada; 2) celulose e ster 0,1% (t
0
); 3) celulose e ster 0,1% (t
30
) e 4) soluo
padro de glicose......................................................................................................61

Figura 27: Figura 27: Figura 27: Figura 27: Grfico dos valores de 1/[celulose] versus tempo, para a verificao de uma
reao de segunda ordem.........................................................................................63

Figura 28: Figura 28: Figura 28: Figura 28: Grfico correspondente aos valores de absorbncia em 485 nm, indicando
a formao de glicose e frutose a partir de diferentes solues de sacarose e NaCl....65

Figura 29: Figura 29: Figura 29: Figura 29: Grfico correspondente as concentraes de glicose e frutose (mol L
-1
) pelos
respectivos valores de fora inica ()......................................................................66

Figura 30: Figura 30: Figura 30: Figura 30: Grfico correspondente as concentraes de acares redutores (mol L
-1
) e
constantes de equilbrio K em funo dos valores de fora inica ().......................68

Figura 31: Figura 31: Figura 31: Figura 31: Valores das constantes de equilbrio, K e K, com relao aos valores de
fora inica ().........................................................................................................70

Lista d Lista d Lista d Lista de Tabelas e Tabelas e Tabelas e Tabelas

Tabela 1 Tabela 1 Tabela 1 Tabela 1 - -- - Valores de fora inica (mol L
-1
) para cada soluo de sacarose..................41
Tabela 2 Tabela 2 Tabela 2 Tabela 2 - -- - Concentrao (mol L
-1
) dos acares com relao ao tempo de hidrlise
(dias)........................................................................................................................53

Tabela 3 Tabela 3 Tabela 3 Tabela 3 Concentrao de celulose em soluo e o tempo de decomposio.........62
Tabela 4 Tabela 4 Tabela 4 Tabela 4 - -- - Concentrao de glicose e frutose em g L
-1
e em mol L
-1
............................66
Tabela 5 Tabela 5 Tabela 5 Tabela 5 Valores de constantes de equilbrio experimentais (K) e os respectivos
valores de constantes de equilbrio termodinmicas (K)............................................69

Tabela 6 Tabela 6 Tabela 6 Tabela 6 Valores das constantes de equilbrio (K) e energias livre (G)..................71

Resumo

A sacarose o dissacardeo mais abundante na natureza, encontrado na forma
pura. formada pela ligao da hidroxila do C
1
da -D-glicose com a hidroxila do C
2
da -D-
frutose. Sua hidrlise em meio cido produz 1 mol de glicose e 1 mol de frutose. O
mecanismo envolve a presena de um intermedirio, que corresponde etapa lenta da
reao de hidrlise. A sacarose foi hidrolisada em meio neutro, utilizando-se uma mistura
de steres derivados do leo de mamona, produzida pelo Laboratrio de Qumica
Analtica e Tecnologia de Polmeros (GQATP). O mecanismo da hidrlise em meio neutro,
se assemelhou com o mecanismo da hidrlise cida, apresentando tambm um complexo
aquoso, que determinou a velocidade da reao.
Uma soluo de sacarose 0,1 mol L
-1
foi hidrolisada pela mistura de steres dando
como produtos finais 0,019 mol L
-1
de glicose e 0,017 mol L
-1
de frutose. Verificou-se que a
produo dos monossacardeos foi possvel depois do oitavo dia de reao.
Solues de sacarose com diferentes concentraes de cloreto de sdio (NaCl)
tambm foram hidrolisadas, uma vez que este estudo foi importante para se observar a
influncia da fora inica na velocidade da reao de decomposio. Uma soluo de
sacarose 10
-3
mol L
-1
, que apresenta fora inica igual a 5,0 x 10
-4
mol L
-1
, ao reagir com a
mistura de steres, apresentou uma quantidade igual a 9,99 x 10
-4
mol L
-1
de acares
redutores formados, ou seja, 99% de sacarose foi hidrolisada. Mesmo com uma maior
velocidade de reao, ainda houve a formao de um complexo aquoso, pois a reao
no foi instantnea. Com valores de foras inicas maiores, houve uma menor produo
de glicose e frutose.
J a celulose um polissacardeo composto de molculas de D-glicose, unidas por
ligaes glicosdicas -1,4, sendo o principal material estrutural das plantas. O mecanismo
da hidrlise da celulose em meio cido assemelha-se hidrlise cida da sacarose, em
que, antes de se chegar aos produtos finais da reao, ocorre a formao de um
complexo intermedirio. A celulose tambm foi hidrolisada em meio neutro utilizando-se
a mistura de steres, e foi possvel observar a presena de um complexo aquoso, antes de
se chegar aos produtos finais de sua decomposio, ou seja, celobiose e/ou glicose.
Partindo-se de uma soluo 0,2 g L
-1
de celulose, chegou-se a formao de 0,14 g L
-1
de
acares redutores. Isso corresponde a 70% de celulose hidrolisada. Com relao ao
estudo cintico de decomposio da celulose, comprova-se que se trata de uma reao
de segunda ordem, e que o tempo de meia-vida da celulose na mistura de steres de
15,29 dias. Como no se sabe a proporo da mistura de steres que reage com a
celulose, tanto o tempo de meia-vida quanto a lei de velocidade, foram calculadas
somente com relao celulose.

Abstract

Sucrose is the most abundant disaccharide in nature, found in pure form. It is
formed by binding the C
1
hydroxyl of the -D-glucose with the hydroxyl of the C
2
of -D-
fructose. Hydrolysis in acid produces 1 mol of glucose and 1 mol of fructose. The
mechanism involves the presence of an intermediary, which is the slow step of the
hydrolysis reaction. Sucrose was hydrolyzed in neutral, using a mixture of esters derived
from castor oil, produced by the Laboratory of Analytical Chemistry and Technology of
Polymers (GQATP). The mechanism of hydrolysis in neutral medium, resembled the
mechanism of acid hydrolysis, and also provides an aqueous complex, which determined
the rate of reaction.
A solution of sucrose 0,1 mol L
-1
was hydrolyzed by the mixture of esters giving as
final products 0,019 mol L
-1
glucose and 0,017 mol L
-1
of fructose. It was found that the
production of monosaccharides was possible after the eighth day of reaction.
Sucrose solutions with different concentrations of sodium chloride (NaCl) were also
hydrolysed, since this study was important to observe the influence of ionic strength on
reaction rate of decomposition. A sucrose solution 10
-3
mol L
-1
, which represents the ionic
strength equal to 5,0 x 10
-4
mol L-1 and reacted with a mixture of esters, showed a count
of 9,99 x 10
-4
mol L
-1
of reducing sugars formed, ie, 99% sucrose was hydrolyzed. Even
with a higher speed of reaction, there was still the formation of an aqueous complex,
because the reaction was not instantaneous. With values higher ionic strengths, there
was a lower production of glucose and fructose.
Since cellulose is a polysaccharide composed of molecules of D-glucose, linked by
glycosidic -1,4, and the main structural material of plants. The mechanism of hydrolysis
of cellulose in an acid similar to the acid hydrolysis of sucrose, in which, before reaching
the final products of the reaction causes the formation of an intermediate complex.
Cellulose was also hydrolyzed in neutral solution using a mixture of esters, and we
observed the presence of an aqueous complex, before we get to the final products of
decomposition, ie, cellobiose and/or glucose. Starting from a solution of 0,2 g L
-1
of
cellulose, it was the formation of 0,14 g L
-1
of sugars. This corresponds to 70% of
hydrolyzed cellulose. Regarding the kinetics of decomposition of cellulose, we find that it
is a second-order reaction, and that the half-life of the mixture of cellulose esters is 15,29
days. As we do not know the proportion of mixed esters which reacts with the cellulose,
both the half-life as the rate law, were calculated only with respect to cellulose.

Introduo

Introduo Introduo Introduo Introduo

13

1. 1. 1. 1. Carboidratos Carboidratos Carboidratos Carboidratos

Carboidratos so compostos que ocorrem em todos os organismos vivos, sendo
essenciais para a vida. O acar da cana, o amido e a celulose so todos constitudos
de carboidratos. O termo deriva do fato de a glicose, o primeiro carboidrato a ser
purificado, possuir forma molecular C
6
H
12
O
6
. Originalmente se pensava que ela era
formada por carbono hidratado [C
6
(H
2
O)
6
], e o termo perdurou at os dias de hoje
1
.
O termo glicdeo tambm pode ser usado para designar os carboidratos
2
.
Nos vegetais e em alguns animais, os carboidratos so constituintes importantes
dos tecidos de suporte
3
. Toda a energia consumida nos sistemas biolgicos procede
da energia luminosa que transformada mediante os processos de fotossntese
3, 4
. Os
carboidratos, quando ingeridos, so metabolizados proporcionando grande
quantidade de energia, ou so estocados na forma de glicognio
1
.
Os carboidratos tambm podem ser denominados sacardeos, palavra de
origem latina (saccharum, acar). Os mais simples so chamados monossacardeos,
que significa um acar. Estruturalmente os monossacardeos so aldedos ou cetonas
poliidroxiladas, de modo que se subdividem em aldoses e cetoses
1, 5
. A terminao ose
indica que o composto um carboidrato, e os prefixos ald e cet designam a natureza
da carbonila (aldedo e cetona, respectivamente). O nmero de tomos de carbono
dos monossacardeos indicado pelos prefixos tri, tetra, penta, hexa, etc. Por
exemplo, a glicose uma aldoexose e a frutose uma cetoexose
5
.
A Figura 1 mostra as frmulas de projees de Fischer das D-aldoses at 6
tomos de carbono.

14

Figura 1: Figura 1: Figura 1: Figura 1: Projees de Fischer para as D-aldoses at seis tomos de carbono.

Apesar das estruturas acclicas, mostradas anteriormente estarem corretas, elas
no descrevem os monossacardeos de uma maneira precisa.
Aldedos e cetonas reagem com alcois formando hemiacetais e hemicetais,
respectivamente. O grupo hidroxila em C
5
da glicose (Figura 2), e de outras pentoses e
hexoses, pode se aproximar facilmente do carbono da carbonila a uma distncia que
permite a formao de uma ligao, podendo ocorrer a ciclizao, formando um
hemiacetal cclico.


15

Figura 2: Figura 2: Figura 2: Figura 2: Formao do hemiacetal.

O C
1
, que era aquiral na estrutura acclica, se torna quiral na estrutura cclica. O
novo centro quiral chamado de centro anomrico centro anomrico centro anomrico centro anomrico e se localiza sempre no C
1
das
aldoses (Figura 3). As configuraes do carbono anomrico ( ou ) podem ser
definidas de forma mais facilmente evidenciada nas frmulas de projeo de Haworth.
Para os acares da srie D, o OH do carbono anomrico est para baixo no ismero
e est para cima no ismero
2
.

Figura 3: Figura 3: Figura 3: Figura 3: Estrutura qumica da D-glicose.

1.1 1.1 1.1 1.1. A glicose . A glicose . A glicose . A glicose

A glicose (Figura 3) extremamente solvel em gua. A adio de cido actico
a esta soluo responsvel pela precipitao lenta dos cristais
6, 7
. A glicose a

16

principal fonte de energia para a maioria dos organismos e o monmero primrio
bsico dos polissacardeos mais abundantes, tais como amido e celulose
5
.
Tambm conhecida como dextrose ou acar do sangue, possui peso molecurar
igual a 180,16 e ponto de fuso 146 C. Um grama de glicose dissolve-se
aproximadamente em 1 mL de gua
7
.

1 11 1.2. A frutose .2. A frutose .2. A frutose .2. A frutose

A frutose (Figura 4) , biologicamente, a cetose mais importante. encontrada
junto com a glicose e a sacarose em muitas frutas. O mel uma mistura de glicose e
frutose, alm de ser um intermedirio importante na fotossntese
2, 7
. conhecida
tambm como levulose ou acar das frutas. Ocorre em grande quantidade nas frutas,
no mel e no smen bovino e humano. extremamente solvel em gua
7
.

Figura 4: Figura 4: Figura 4: Figura 4: Estrutura qumica da D-frutose.


17

1.3 1.3 1.3 1.3. Dissacardeos . Dissacardeos . Dissacardeos . Dissacardeos

A combinao de dois monossacardeos resulta nos dissacardeos, a combinao
de trs forma um trissacardeo, e assim por diante
1
. Esses acares so denominados
oligossacardeos e geralmente apresentam a frmula C
n
H
2n
O
n
, onde n varia
principalmente de 3 a 8
2
. Quando a unio de dois monossacardeos formada entre
o centro anomrico de uma unidade e a hidroxila de outra, o dissacardeo redutor, e
dando positivo frente ao teste de Fehling ou ao teste de Tollens
2, 8
.Quando a unio
glicosdica formada por ambos os centros anomricos, o dissacardeo no
redutor
8
.

1.3 1.3 1.3 1.3.1. A sacarose .1. A sacarose .1. A sacarose .1. A sacarose

O dissacardeo mais conhecido e o mais importante da classe de acares no
redutores a sacarose, que produzida comercialmente a partir da cana de acar ou
da beterraba
8
. o composto orgnico mais abundante na forma pura. Apresenta-se
na forma de cristais, blocos, ou em p. Possui sabor adocicado; um grama se dissolve
e, 0,5 mL de gua. Seu peso molecular de 342,30 e resistente decomposio
bacteriana a altas temperaturas
7
.

18

A sacarose (Figura 5) formada pela ligao da hidroxila do C
1
da -D-glicose
com a hidroxila do C
2
da -D-frutose. No processo de formao, ocorre a eliminao
de uma molcula de gua.

Figura 5: Figura 5: Figura 5: Figura 5: Estrutura qumica da sacarose.

A sacarose dextrgira, apresentando rotao especfica igual a + 66,5.
Quando ela hidrolisada, obtm-se uma mistura com quantidade iguais de glicose (+
52,5) e frutose (- 92), cuja rotao especfica aproximadamente -20. Em virtude
da direo de rotao do plano da luz polarizada, essa mistura conhecida como
acar invertido. O acar invertido o principal constituinte do mel, que hidrolisam
a sacarose presente no nctar por meio de enzimas existentes em seu organismo,
Como o acar invertido mais doce que a sacarose, e tem menor tendncia a se
cristalizar, largamente utilizado na indstria de alimentos na produo de sorvetes,
balas, etc
1, 7
.
A sacarose, em soluo aquosa, pode ser hidrolisada por cidos. O mecanismo
envolve a presena de um intermedirio, formado pela protonao do oxignio da
ligao glicosdica, evoluindo lentamente para a formao de um carbnion, que por
sua vez, sofre uma substituio por uma molcula de gua
*
(Figura 6)
6
.

*
EDWARD, J. T.; Chem Ind. London. P. 1102, 1955.

19

Figura 6: Figura 6: Figura 6: Figura 6: Mecanismo de hidrlise da sacarose em meio cido.

1.4. 1.4. 1.4. 1.4. Polissacardeos Polissacardeos Polissacardeos Polissacardeos

Os polissacardeos so carboidratos de alto peso molecular, variando entre
dezenas de milhares a milhes. So geralmente insolveis na maioria dos solventes, e
mesmo quando puros, so constitudos de molculas de variados comprimentos de
cadeias e pesos moleculares. Alguns polissacardeos, como o amido e a celulose do
apenas um nico monossacardeo quando hidrolisados. Outros como a goma arbica,
so formados por muitos tipos de monossacardeos. A quitina um polissacardeo
responsvel pela formao do exoesqueleto dos crustceos e dos insetos. A dextrana
por sua vez, usada como dispersante de plasma sanguneo, e a algina, est presente
nas paredes celulares de algas
2
.
Os polissacardeos so encontrados em plantas, animais e microorganismos, nos
quais cumprem diversas funes. A celulose e a quitina, por exemplo, so
polissacardeos estruturais, j o amido e o glicognio so polissacardeos de reserva de

20

energia. Os polissacardeos de paredes celulares bacterianas conferem s mesmas,
especificidade imunolgica
8
.

1.4 1.4 1.4 1.4.1. A celulose .1. A celulose .1. A celulose .1. A celulose

A celulose um polmero de alto peso molecular, composta de molculas de D-
glicose, unidas por ligaes glicosdicas -1,4 (Figura 7). A celulose nativa composta
por mais de 10.000 molculas de D-glicose anidra. Isso significa que o peso molecular
da celulose nativa prximo de 1,5 milhes
9
.
o principal material estrutural das plantas, e o ingrediente principal do
algodo, madeira, linho, palha e folhas de milho. A celulose insolvel em gua
podendo, entretanto, ser hidrolisada
2
.

Figura 7: Figura 7: Figura 7: Figura 7: Estrutura qumica da celulose.

Quando a celulose hidrolisada em meio cido, as ligaes glicosdicas -1,4
so rompidas, dando origem s molculas de glicose. Com a utilizao de cido
concentrado, ocorre a formao, primeiramente, de um complexo cido, onde a

21

estrutura cristalina da celulose destruda, e finalmente chega-se a unidade
fundamental do polissacardeo, ou seja, D-glicose.
O mecanismo da hidrlise cida mostrado na Figura 8. Primeiramente, ocorre
a rpida protonao do oxignio da ligao glicosdica, formando um complexo
intermedirio entre o prton e o oxignio glicosdico. Posteriormente, ocorre
lentamente a quebra da ligao glicosdica, seguida da adio de gua. Pode ocorrer
tambm, a protonao do oxignio que se encontra na molcula cclica, ou de ambos
os oxignios, tanto o cclico quanto o da ligao glicosdica, simultaneamente
9
.

Figura 8: Figura 8: Figura 8: Figura 8: Mecanismo de hidrlise da celulose em meio cido.

22

1.5. 1.5. 1.5. 1.5. A importncia dos carboidratos A importncia dos carboidratos A importncia dos carboidratos A importncia dos carboidratos

A fotossntese, realizada pelas plantas, um processo no qual o dixodo de
carbono reage com a gua sob ao de luz, resultando na formao da glicose. A
glicose, uma vez formada, polimeriza-se, formando amido e celulose
1, 4
.

6 12 6 2 2 2
6 6 6 O H C O O H CO
luz
+ + (1)

Por outro lado, os carboidratos so reconvertidos em CO
2
, durante o processo
de respirao, combusto e decomposio
2
. Estes processos fornecem a principal
fonte de energia para o trabalho da clula (Figura 9).


23

aminocidos ciclo do cido ctrico CO
2
+ H
2
O
acetil-CoA gorduras, esterides
cido - 3 - fosfoglicrico
GLICOSE
fosfopentoses
nucleotdeos, coenzimas
cidos nucleicos
fotossnte
glicosdeos
amino acares
cidos glicurnicos

Figura 9: Figura 9: Figura 9: Figura 9: Importncia da glicose em processos biolgicos.

Os aminoacares so aldoses ou cetoses onde um grupo OH est substitudo
por um grupo amino
2
. Um dos mais comuns a N-acetil-glicosamina, componente da
parede celular de bactrias Gram negativas, combinada com cidos graxos
8
.
Os antgenos de grupos sanguneos correspondem a dois tipos de trissacardeos,
denominados A e B, e a um dissacardeo denominado H (Figura 10). Nota-se que os
acares A e B so formados, respectivamente, pela adio de uma molcula de N-
acetilgalactosamina e uma molcula de galactose no dissacardeo H
6
.

24

Figura 10: Figura 10: Figura 10: Figura 10: Estrutura qumica dos antgenos A, B e H.

2. 2. 2. 2. Mtodos para a identificao de acares Mtodos para a identificao de acares Mtodos para a identificao de acares Mtodos para a identificao de acares

2.1. Espectroscopia molecular na regio do 2.1. Espectroscopia molecular na regio do 2.1. Espectroscopia molecular na regio do 2.1. Espectroscopia molecular na regio do ultravioleta/v ultravioleta/v ultravioleta/v ultravioleta/visvel isvel isvel isvel

A espectroscopia molecular baseada na radiao ultravioleta/visvel
comumente utilizada na identificao e determinao de muitos compostos orgnicos
e inorgnicos. usada principalmente na anlise quantitativa e o principal mtodo
aplicado em laboratrios qumicos
10
.
Quando uma radiao contnua passa atravs de um material transparente,
uma parte dela absorvida. A radiao residual, por sua vez, produz um espectro
chamado espectro de absoro. Como resultado, tomos ou molculas passam de um
estado de baixa energia (estado fundamental) para um estado de energia mais alta
(estado excitado). A radiao que absorvida tem exatamente o mesmo valor da
diferena de energia entre o estado excitado e o estado fundamental.

25

Como a molcula absorve energia, um eltron promovido de um orbital
ocupado para um orbital no ocupado de energia potencial maior. Para a maioria das
molculas, os orbitais moleculares de energia mais baixa so os orbitais ,
correspondentes s ligaes . Os orbitais antiligantes (* e *) so os orbitais de
maior energia.
Nas molculas, a absoro ultravioleta, geralmente ocorre em um extenso
intervalo de comprimentos de onda, pois as molculas possuem muitos estados
excitados de vibrao e rotao temperatura ambiente. Observa-se, portanto, num
espectro de UV, uma larga banda de absoro em um comprimento de onda
correspondente maior parte das transies. Quanto maior o nmero de molculas
capazes de absorver luz em um dado comprimento de onda, maior ser a extenso de
absoro da luz. Seguindo essa idia, chega-se expresso emprica, conhecida como
Lei de Beer Lei de Beer Lei de Beer Lei de Beer- -- -Lambert Lambert Lambert Lambert:
cl
I
I
= =
0
log
(2)

O termo log (I
0
/I) conhecido como absorbncia e pode ser representado por
A. A absortividade molar () uma propriedade da molcula que sofre uma transio
eletrnica e no depende de parmetros envolvidos no preparo da soluo. O termo
c corresponde concentrao molar do soluto e l representa o tamanho da cela (cm)
que contm a amostra
11
.
Usa-se a tcnica de espectroscopia de UV/Vis para a anlise de carboidratos,
quando estes reagem com o reagente de DNS
12
. Este mtodo baseia-se na reduo do
cido 3,5 dinitro-saliclico a cido 3-amino-5-nitrosaliclico ao mesmo tempo em que

26

o grupo aldedo do acar oxidado a grupo carboxlico, com o desenvolvimento de
colorao avermelhada, lida espectrofotometricamente em 600 nm
13
.
A formao de um complexo de colorao azul entre uma soluo de iodo e as
ligaes -1,4 do amido tambm pode ser analisada espectroscopicamente num
comprimento de onda de 570 nm
14, 15
. Amostras de amido tambm podem ser
analisadas por espectroscopia, utilizando-se fenol e cido sulfrico com a finalidade de
degradar a -amilose e sua banda de absoro ser observada em 490 nm
16
.

2.2. Cromatografia lquida de alta eficincia 2.2. Cromatografia lquida de alta eficincia 2.2. Cromatografia lquida de alta eficincia 2.2. Cromatografia lquida de alta eficincia

A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de
uma mistura, realizada pela distribuio destes componentes entre duas fases. Uma das
fases permanece estacionria enquanto a outra se move atravs dela. Durante a
passagem da fase mvel pela fase estacionria, os componentes da mistura so
distribudos entre as duas fases, de tal forma que cada componente seletivamente
retido pela fase estacionria, resultando em migraes diferenciais destes
componentes
17
. Os mecanismos de separao utilizados em cromatografia lquida so:
- Adsoro;
- Partio (fase normal e fase reversa);
- Troca inica;
- Excluso por tamanho.

27

Esses mecanismos esto associados a processos qumicos e fsicos que atuam
durante a separao. Dentre as principais foras qumicas atuantes entre o analito e a
fase estacionria destacam-se as foras inicas, ligaes de hidrognio, interaes do
tipo dipolo-dipolo, dipolo-dipolo induzido e dipolo induzido-dipolo induzido (foras
de disperso).
O mecanismo de adsoro utilizado principalmente na separao de
compostos polares. As fases estacionrias mais empregadas so a slica e a alumina. A
slica possui uma superfcie ligeiramente cida, que permite a reteno de compostos
bsicos, enquanto que a superfcie bsica da alumina apropriada para a adsoro de
compostos de carter cido.
O mecanismo de partio surgiu para evitar problemas de adsoro irreversvel
que podem ocorrer na utilizao de slica, alumina e outras fases polares na anlise de
compostos altamente polares. No mecanismo de partio usa-se o termo fase normal
para descrever o modo cromatogrfico no qual a fase estacionria mais polar que a
fase mvel (similar ao que ocorre em adsoro). De forma anloga, quando a fase
estacionria menos polar que a fase mvel, o termo empregado fase reversa.
A troca inica , geralmente, empregada em cromatografia para o isolamento
de analitos de carter cido ou bsico presentes em solues aquosas. Os compostos
bsicos so usualmente retidos por intermdio de uma fase slida, consistindo em um
trocador de ctions, aprisionado estrutura bsica da slica, enquanto os compostos
cidos so retidos por trocadores de nions. Desta forma, ocorrer uma forte atrao
entre o analito e o trocador de ons de carga oposta. Os principais fatores que
influenciam uma separao envolvendo troca inica so: pH, seletividade do contra-
on, fora inica, solvente e fluxo.

28

A excluso por tamanho tem sido utilizada para eliminar da amostra compostos
indesejveis, por intermdio de um mecanismo fsico de separao, similar a uma
filtrao. A fase estacionria formada por um polmero, cujo tamanho dos poros
bem controlado, de forma a permitir a entrada de molculas pequenas do analito e
excluir as maiores indesejveis
18
.
Devido ao grande emprego da cromatografia, essa tcnica muito utilizada na
anlise de acares, principalmente os oligossacardeos.
A cromatografia em papel, por exemplo, foi utilizada para a identificao de
acares na gelia real. Uma pequena amostra do xarope de gelia real foi colocada
em um papel cromatogrfico, e os componentes foram separados por partio,
durante 33 horas pelos solventes: piridina, acetato de etila e gua
19
.
J a cromatografia em camada delgada foi utilizada para a identificao de
rafinose, maltose e sacarose em extratos vegetais
20
, e na identificao de
oligossacardeos e maltodextrinas em fluidos biolgicos e leite humano
21
.
Na cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC) empregam-se pequenas
colunas fechadas e reutilizveis e uma fase mvel que eluda sob altas presses. Ela
tem a capacidade de realizar separaes e anlises quantitativas de uma grande
quantidade de compostos presentes em vrios tipos de amostras, em escala de tempo
de poucos minutos, com alta resoluo, eficincia e sensibilidade
17
. No caso das
anlises de carboidratos, a coluna amino a mais utilizada e com ela, a fase mvel
acetonitrila: gua, geralmente na proporo 80: 20 (v:v), e o detector de ndice de
refrao
22, 23, 24, 25
. Esse mtodo vlido para determinao de acares em sucos de
frutas
26
, rafinose
27, 28
e grande parte dos monossacardeos, dentre os principais: xilose,
frutose e glicose
29
.

29

Polissacardeos como o amido, podem ser separados e identificados por
cromatografia de excluso por tamanho. Pode-se separar, por exmplo, a amilose, a
amilopectina (dois componentes do amido)
5
, assim como a dextrana e o
glicognio
30
.

3. 3. 3. 3. Fora inica Fora inica Fora inica Fora inica

A fora inica, , uma medida da concentrao total de ons em soluo.
Quanto mais carregado for um on, maior ser sua participao no clculo da fora
inica.

= + + =
i
i i
z c z c z c
2 2
2 2
2
1 1
2
1
) (
2
1
K
(3)

Onde c
i
a concentrao da i-sima espcie e z
i
a sua carga. A soma se aplica
a todos os ons em soluo.
O NaCl conhecido como um eletrlito 1:1 porque o ction e o nion possuem
carga igual a 1. Para os eletrlitos 1:1, a fora inica igual molaridade
(concentrao molar). Para qualquer outra estequiometria (como o eletrlito 2:1,
Na
2
SO
4
), a fora inica maior que a molaridade.
Para se considerar o efeito da fora inica nas reaes qumicas, as
concentraes so substitudas por atividades:


30

[ ]
C C
C =
(4)

Onde A
c
a atividade da espcie C, [C] a concentrao de C e
c
o
coeficiente de atividade de C. A atividade da espcie C a sua concentrao
multiplicada pelo seu coeficiente de atividade. O coeficiente de atividade mede o
desvio do comportamento ideal. Portanto, a forma correta da constante de equilbrio
:

[ ] [ ]
[ ] [ ]
b
B
b
a
A
a
d
D
d
c
C
c
b
B
a
A
d
D
c
C
D C

=

=
(5)

A equao 5 leva em conta o efeito da fora inica no equilbrio qumico, pois
os coeficientes de atividade dependem da fora inica
31
. De acordo com a Lei Limite
de Debye-Hckel, para um eletrlito A
m
B
n
, o coeficiente de atividade determinado
pela carga e pela fora inica total da soluo:

n m
nZ mZ
B A
+
+
=

2 2
5 , 0 log
(6)

Na prtica, a constante de equilbrio determinada experimentalmente em
termos de concentrao:

b a
d c
B A
D C
K
] [ ] [
] [ ] [
' =
(7)

31

Substituindo os valores de concentrao por K na equao 5, tem-se:

b
B
a
A
d
D
c
C
K K

' =
(8)

Pode-se distinguir K, dado em termos de atividades (tambm chamado de
constante de equilbrio termodinmica), e K, dado em termos de concentrao. Se o
valor da constante de atividade , se aproximar da unidade, em infinitas diluies,
extrapola-se o valor experimental de K para diferentes foras inicas e obtm-se o
valor de K, o qual atinge seu valor limite em diluies infinitas
32
.
Uma estimativa da magnitude do efeito de um sal pode ser obtida pela teoria
de Debye-Hckel. Sabendo-se que:

K pK log = (9)
' log ' K pK = (10)

Pode-se reescrever a equao 8:

B A D C
b a d c pK pK log log log log ' + + =
(11)


32

4. 4. 4. 4. leo de mamona leo de mamona leo de mamona leo de mamona

A mamona (Ricinus communis L.), pertence famlia Euphorbiaceae, que
engloba vasto nmero de tipos de plantas nativas da regio tropical. uma planta de
hbito arbustivo, com diversas coloraes de caule, folhas e racemos (cachos),
podendo ou no possuir cera no caule e pecolo. Os frutos, em geral, possuem
espinhos e, em alguns casos, so inermes. As sementes apresentam-se com diferentes
tamanhos, formatos e grande variabilidade de colorao
33
.
O leo de mamona, tambm conhecido como leo de rcino e
internacionalmente conhecido como castor oil, pode ser utilizado em rotas de sntese
para uma grande quantidade de produtos, com aplicao na rea de cosmticos,
lubrificantes, polmeros, alm de poder ser um substituto do petrleo na sntese de
vrios produtos. Na medicina popular, seu uso acontece a longo tempo. Possui
caractersticas qumicas atpicas comparadas a maioria dos leos vegetais, pois alm da
presena do triglicerdeo do cido ricinoleico, que um cido graxo hidroxilado
pouco freqente nos leos vegetais, este est presente em 89,5% da sua composio
(Figura 11).

Figura 11: Figura 11: Figura 11: Figura 11: Estrutura qumica do triglicerdeo do cido ricinolico.


33

A presena acentuada de um nico tipo de cido graxo na composio dos
triglicerdeos uma caracterstica marcante do leo de mamona
34, 35
.
O leo de mamona pode ser transesterificado com compostos poliidroxilados
como a glicerina, trimetilolpropano, trietanolamina, dietanolamina, etc. (Figura 12)
36
.

Figura Figura Figura Figura 12: 12: 12: 12: Transesterificao do leo de mamona com glicis.


34

Dessa forma, o leo de mamona pode dar origem a diversos tipos de steres,
como:
- steres secundrios, resultantes da esterificao da hidroxila livre do carbono
12, com cidos graxos e outros cidos orgnicos, especialmente o actico;
- steres primrios, resultantes da esterificao de carboxilas terminais na
molcula do cido ricinolico com outros alcois;
- steres duplos, por reao da hidroxila livre e da carbonila terminal;
- Inter-steres, resultantes da esterificao da hidroxila livre com carboxilas da
mesma ou de outras molculas de cido ricinolico;
- Mono e diglicerdeos, resultantes da reao parcial do leo ou cidos graxos
do mesmo com poliis, especialmente com glicerol
37
.

Em alguns estudos realizados com a mistura de steres derivados do leo de
mamona, pode-se comprovar sua capacidade antimicrobiana. Em endodontia, foram
testados e comparados quatro agentes antimicrobianos, tais como: hidrxido de clcio
(Ca(OH)
2
), digluconato de clorexidina, paramonoclorofenol canforado e a mistura de
steres derivados do leo de mamona. Os testes foram realizados em colnias de
Prevotella migrescens, Fusobacterium nucleatum, Clostridium perfringens e Bacterides
fragilis. De acordo com os resultados obtidos, a mistura de steres foi o segundo
melhor agente antimicrobiano utilizado em menor concentrao, sendo que o
primeiro foi a clorexidina
38
. Estudos semelhantes utilizando tanto o gluconato de
clorexidina e o a mistura de steres em gel, mostraram resultados positivos com
relao assepsia do canal radicular, em comparao com o uso do hipoclorito de
sdio 1% que comumente utilizado
39
.

35

A atividade antimicrobiana da mistura de steres tambm foi comprovada nos
organismos anaerbicos streptococci e S. mutans, em comparao com o hipoclorito
de sdio e a papana em gel. A mistura de steres, para esse caso, mostrou-se mais
eficiente, sendo que a papana em gel no mostrou resultados confiveis para os
microorganismos estudados
40, 41
.
Com relao a estudos realizados com a bactria Escherichia coli, a mistura de
steres foi responsvel pela severa inibio no crescimento das culturas sem diluio da
sua concentrao. Porm, quando altamente diludo (1: 1.000.000), a bactria E. coli
apresentou crescimento, porm com uma diminuio significante com relao ao
controle
42
.
Verificou-se, tambm, o efeito microbiosttico da mistura de steres em culturas
da bactria Cndida albicans, onde foi observada a diminuio do nmero de clulas,
atingindo 90% de inibio de clulas e brotos vivos
43
.
O efeito cicatrizante da mistura de steres tambm j foi comprovado, uma vez
que o mesmo atua em diversas fases do processo, como por exemplo, aumentando a
permeabilidade da membrana celular, e no processo de mitose
44
.

Objetivos

Objetivos Objetivos Objetivos Objetivos

37

Este trabalho teve como objetivos:
Estudar a decomposio da sacarose em meio neutro utilizando uma mistura de
steres derivados do leo de mamona, a fim de quantificar os produtos oriundos da
hidrlise, ou seja, glicose e frutose, e verificar tambm, a etapa intermediria dessa
reao de hidrlise, que consiste na formao de um complexo aquoso, cuja formao
considerada a etapa lenta da hidrlise;
Estudar a decomposio da sacarose em meio neutro, porm com a alterao
da fora inica do meio, utilizando NaCl como eletrlito, podendo, dessa maneira,
calcular as constantes de equilbrio da reao de hidrlise e a energia livre de Gibbs,
com a finalidade de observar se a reao espontnea para a formao dos produtos;
Verificar, se ocorre, a decomposio da celulose utilizando-se a mistura de
steres, e a formao de acares redutores, provenientes dessa reao de hidrlise. A
partir desse estudo, pode-se observar tambm, a cintica de decomposio do
polissacardeo em questo, calculando-se o tempo de meia-vida e a lei de velocidade.

Procedimento
experimental

Procedimento experimental Procedimento experimental Procedimento experimental Procedimento experimental
39
1. Preparo das solues 1. Preparo das solues 1. Preparo das solues 1. Preparo das solues

1.1. Diluies da mistura de steres derivados do leo de mamona 1.1. Diluies da mistura de steres derivados do leo de mamona 1.1. Diluies da mistura de steres derivados do leo de mamona 1.1. Diluies da mistura de steres derivados do leo de mamona

Todas as diluies da mistura de steres foram realizadas a partir de uma
soluo concentrada. As concentraes obtidas aps as diluies e utilizadas nas
hidrlises dos oligossacardeos foram: 1%, 0,2% e 0,1% (v/v). Nesse trabalho,
entretanto, foram apresentados os resultados obtidos com a mistura de steres na
diluio 0,1% (v/v).

1.2. Solues de sacarose 1.2. Solues de sacarose 1.2. Solues de sacarose 1.2. Solues de sacarose para as anlises para as anlises para as anlises para as anlises cromatogrfica cromatogrfica cromatogrfica cromatogrficas ss s

Inicialmente, foram preparadas solues de sacarose (Synth) com concentrao
igual a 10 g/L. Em seguida, o ster diludo foi adicionado essas solues para a
realizao dos testes qualitativos e as anlises cromatogrficas
37
.
No entanto, esse procedimento, apesar de vlido, tem carter qualitativo, e
com o objetivo de quantificar os produtos da hidrlise dos oligossacardeos, foram
necessrias algumas alteraes.
Preparou-se, portanto, uma soluo de sacarose de concentrao igual a 0,1
mol L
-1
, a qual foi denominada soluo padro. Em seguida, foi preparada outra
40
soluo de sacarose 0,1 mol L
-1
, porm utilizando-se o ster diludo na proporo
0,1%, com a finalidade de se observar a decomposio da sacarose em glicose e
frutose e comparar a quantidade de sacarose hidrolisada com a soluo padro.
As solues de sacarose 0,1 mol L
-1
foram utilizadas para anlise cromatogrfica
em coluna amino (NH
2
) e detector de ndice de refrao. Para as anlises utilizando-se
a coluna C
18
e detector de UV, a concentrao das solues de sacarose foi de 10
-3
mol
L
-1
, devido ao fato desse ltimo detector possuir maior sensibilidade.

1.3 1.3 1.3 1.3. .. . Solues de Solues de Solues de Solues de celulose celulose celulose celulose para as a para as a para as a para as anlise nlise nlise nlises ss s espectrofotomtrica espectrofotomtrica espectrofotomtrica espectrofotomtricas ss s

O preparo das solues para anlise espectrofotomtrica foi o mesmo das
solues preparadas para a anlise cromatogrfica, porm utilizando-se uma
concentrao igual a 0,2 g/L. Foi utilizado o padro de celulose (Sigmacell type 100).
As mesmas solues foram utilizadas para a realizao do estudo da cintica de
decomposio da celulose.

1. 1. 1. 1.4. Solu 4. Solu 4. Solu 4. Solues de sacarose e cloreto de sdio (NaCl) es de sacarose e cloreto de sdio (NaCl) es de sacarose e cloreto de sdio (NaCl) es de sacarose e cloreto de sdio (NaCl) para as anlises para as anlises para as anlises para as anlises
espectrofotomtricas espectrofotomtricas espectrofotomtricas espectrofotomtricas

41
Foram preparadas sete solues de sacarose (Synth) e NaCl (J. T. Baker)
utilizando a mistura de steres 0,1%. A concentrao de sacarose manteve-se fixa para
todas as solues, correspondendo a um valor de 10
-3
mol L
-1
. J, a concentrao de
NaCl foi variada para cada soluo. Como o NaCl um eletrlito 1:1, sua
concentrao, em mol L
-1
, equivale ao valor da fora inica. A Tabela 1 mostra os
valores das foras inicas para cada soluo de sacarose (numeradas de 1 a 7).

Tabela 1 Tabela 1 Tabela 1 Tabela 1 - -- - Valores de fora inica (mol L
-1
) para cada soluo de sacarose.
Soluo de sacarose 10 Soluo de sacarose 10 Soluo de sacarose 10 Soluo de sacarose 10
- -- -3 33 3

( (( (mol L mol L mol L mol L
- -- -1 11 1
) )) )
Fora inica Fora inica Fora inica Fora inica ( (( () )) ) do NaCl do NaCl do NaCl do NaCl
(mol L (mol L (mol L (mol L
- -- -
) )) )
1
2
3
4
5
6
7
0
1,0 x 10
-4

5,0 x 10
-4

1,0 x 10
-3

2,0 x 10
-3

5,0 x 10
-3

1,0 x 10
-2

1.5 1.5 1.5 1.5. Reagente DNS . Reagente DNS . Reagente DNS . Reagente DNS

Em 1L de gua destilada, adicionou-se 10,6 g de cido 3,5-dinitrosaliclico
(Vetec), 19,8 g de hidrxido de sdio (Nuclear) e 306 g de tartarato de sdio e
potssio (Reagen). Aps a dissoluo dos reagentes citados, adicionou-se 7,6 mL de
42
fenol (Vetec) e 8,3 g de metabissulfito de sdio (Merck). Para a utilizao do fenol, o
mesmo foi aquecido 50 C.

2. Anlise cromatogrfica 2. Anlise cromatogrfica 2. Anlise cromatogrfica 2. Anlise cromatogrfica

2.1 2.1 2.1 2.1. . . . Quantificao do Quantificao do Quantificao do Quantificao dos ss s produtos de h produtos de h produtos de h produtos de hidrlise da sacarose idrlise da sacarose idrlise da sacarose idrlise da sacarose

O procedimento descrito a seguir foi realizado a fim de se obter os produtos
oriundos da decomposio da sacarose, ou seja, glicose e frutose. Utilizou-se o
cromatgrafo Waters (510 HPLC pump, 717 Autosampler, 410 Differential
Refractometer). Como fase estacionria, foi utilizada a coluna amino (Techsphere NH
2

25 mm x 4,6 mm x 5 m) e como fase mvel uma mistura de acetonitrila
(Mallinckodt): gua 85:15 (v/v). O fluxo foi de 1mL/min
45, 46, 47
. O volume injetado
foi de 10 L, e o tempo total de cada anlise foi de 30 minutos. A temperatura do
forno foi ajustada em 30 C e a presso do sistema manteve-se constante em 750 psi.
Primeiramente foi injetada uma soluo aquosa de sacarose 0,8 mol L
-1
e a
mesma foi diluda em mais cinco solues de concentrao 0,5 mol L
-1
, 0,3 mol L
-1
, 0,1
mol L
-1
, 0,05 mol L
-1
e 0,02 mol L
-1
, respectivamente. Dessa maneira, obteve-se a curva
analtica da sacarose.
43
Em seguida, injetou-se a soluo de sacarose 0,1 mol L
-1
preparada em ster
0,1%. Esta foi injetada imediatamente aps o seu preparo e, assim, pode-se
determinar o tempo inicial (t
0
) da reao da sacarose com o ster 0,1%.
Essa mesma soluo foi analisada durante um perodo de 15 dias para observar
o tempo de decomposio da sacarose e a respectiva produo de glicose e frutose.

2.2 2.2 2.2 2.2. . . . Verificao da e Verificao da e Verificao da e Verificao da etapa intermediria da reao de hidrlise tapa intermediria da reao de hidrlise tapa intermediria da reao de hidrlise tapa intermediria da reao de hidrlise

O procedimento descrito a seguir foi realizado com a finalidade de se observar
a presena da etapa intermediria da reao de decomposio da sacarose, uma vez
que esse intermedirio no pode ser detectvel utilizando-se o detector de ndice de
refrao na anlise cromatogrfica
37
.
Utilizou-se o cromatgrafo Shimadzu (Detector SPD-10 A, SCL-10 A, Bomba LC-
64 D). Como fase estacionria, fez-se uso da coluna C
18

(Supelcosil LC-18 15 cm x 4,6
mm x 5 m) e como fase mvel uma mistura de gua: acetonitrila (Mallinckrodt)
80:20 (v/v) previamente desaerada
48, 49
. O fluxo foi de 0,5mL/min. O volume
injetado foi de 20 L e o tempo total de cada anlise foi de 10 minutos. O estudo foi
realizado no comprimento de onda igual a 274 nm.
Primeiramente, foi injetada gua destilada para verificar seu tempo de reteno
nas condies acima citadas. Logo em seguida, injetou-se a soluo de ster diludo
0,1% tambm com a finalidade de se observar seu tempo de reteno.
44
Posteriormente, injetou-se uma soluo de sacarose, glicose (Synth) e frutose
(Synth), todas de concentrao igual a 10
-3
mol L
-1
.
Finalmente, injetou-se uma soluo de sacarose preparada em ster 0,1%. Esta
foi injetada imediatamente aps o seu preparo e, assim, determinou-se o tempo inicial
(t
0
) da reao. Essa mesma soluo foi analisada num perodo de 30 dias para se
observar a formao do intermedirio da reao de hidrlise.

3. Anlise espectrofotomtrica 3. Anlise espectrofotomtrica 3. Anlise espectrofotomtrica 3. Anlise espectrofotomtrica

3.1 3.1 3.1 3.1. Hidrlise da celulose . Hidrlise da celulose . Hidrlise da celulose . Hidrlise da celulose

Para a anlise da decomposio da celulose, utilizou-se o mtodo de
determinao de acares redutores com o uso do reagente de DNS
12
.
Primeiramente, preparou-se, em triplicata, solues de glicose (Synth) de
concentraes iguais a 0,08, 0,10, 0,20, 0,30, 0,40 e 0,50 g L
-1
respectivamente. Para
1,0 mL de cada soluo, adicionou-se 1 mL do reagente de DNS num tubo de ensaio.
As solues de glicose + DNS de cor amarela foram aquecidas em gua fervente por
exatos 5 minutos e logo aps resfriadas. Adicionou-se 10 mL de gua destilada em
cada tubo e essa soluo resultante, que passou a ter colorao marrom, foi analisada
espectrofotometricamente num equipamento Shimadzu Multispec - 1501 abrangendo
45
uma faixa de 470 a 700 nm. A banda de absoro correspondente glicose situou-se
prximo a 520 nm.
Aps a anlise das seis solues de glicose, obteve-se a curva analtica das
concentraes de glicose com relao ao valor da absorbncia.
Posteriormente, o mesmo procedimento foi utilizado para a anlise de uma
soluo de celulose em ster 0,1%, tambm preparada em triplicata, e de
concentrao igual a 0,2 g/L. Essa soluo foi analisada num perodo de 30 dias com a
finalidade de se observar a presena de glicose, oriunda da hidrlise da celulose, e
tambm, para observar o comportamento da cintica de decomposio da celulose.

3.2. Hidrlise das solues de sacarose com NaCl 3.2. Hidrlise das solues de sacarose com NaCl 3.2. Hidrlise das solues de sacarose com NaCl 3.2. Hidrlise das solues de sacarose com NaCl

Para a anlise das sete solues de sacarose com NaCl, tambm foi utilizado o
mtodo de determinao de acares redutores utilizando o reagente de DNS
12
.
Para 1 mL de cada soluo de sacarose 10
-3
mol L
-1
com a respectiva
concentrao de NaCl, foi adicionado 1 mL do reagente de DNS em um tubo de
ensaio. As solues de sacarose - NaCl + DNS de cor amarela foram aquecidas em
gua fervente por exatos 5 minutos e logo aps resfriadas. Adicionou-se 10 mL de
gua destilada em cada tubo e essas solues resultantes, que passaram a ter colorao
laranja, foram analisadas espectrofotometricamente no mesmo equipamento
Shimadzu Multispec - 1501 abrangendo uma faixa de 470 a 700 nm. Todas as solues
46
foram analisadas num perodo de 60 dias, para observar a presena de acares
redutores, nesse caso, glicose e frutose.
Esse experimento foi realizado com a finalidade de se obter uma quantidade
maior de glicose e frutose a partir da decomposio da sacarose, e para isso, foi
necessria a alterao da fora inica do meio reacional. Foi utilizado o NaCl por ser
um eletrlito 1:1, e com isso, facilitando os clculos e por ser de baixo custo.

Resultados e
discusso

Resultados e Discusso Resultados e Discusso Resultados e Discusso Resultados e Discusso

48
1. 1. 1. 1. Anlise Cromatogrfica Anlise Cromatogrfica Anlise Cromatogrfica Anlise Cromatogrfica

1.1. 1.1. 1.1. 1.1. Quantifi Quantifi Quantifi Quantificao dos produtos de cao dos produtos de cao dos produtos de cao dos produtos de hidrlise as sacarose hidrlise as sacarose hidrlise as sacarose hidrlise as sacarose

A curva analtica mostrada abaixo (Figura 13) foi obtida preparando-se cinco
solues a partir de uma soluo estoque de sacarose de concentrao 0,8 mol L
-1
. A
curva dada pela concentrao de sacarose (mol L
-1
) pela rea do pico
correspondente sacarose (cm
2
). O valor da rea varia conforme o aumento da
concentrao de sacarose (0,02 a 0,8 mol L
-1
).

0,0 0,2 0,4 0,6 0,8
0
5
10
15
20
25
30
35
40
A -100696,28947 375904,76277
B 4,503E7 924061,12114
------------------------------------------------------------
R SD N P
------------------------------------------------------------
0,99916 634009,64176 6 <0.0001
r
e
a

(
c
m

2
)

x

1
0

6
[sac] (mol L
-1
)

Figura 13 Figura 13 Figura 13 Figura 13: :: : Grfico da curva analtica da sacarose.


49
O limite de deteco (LD) e o limite de quantificao (LQ) so mostrados
abaixo:
B
xDP
LD
3 , 3
=
(12)

B
xDP
LQ
10
=
(13)

Onde DP = desvio padro e B = coeficiente angular da reta Y = A + BX.
No caso da curva analtica da Figura 13, LD e LQ so iguais a 0,0465 mol L
-1
e
0,1471 mol L
-1
, respectivamente, uma vez que o valor de A foi de -1,00696 x 10
5
, o
valor de B foi de 4,503 x 10
7
e o desvio padro apresentou valor igual a 6,3401 x 10
4

com R = 0,99916.
Ao se injetar uma soluo de sacarose preparada com a mistura de steres de
concentrao igual a 0,1 mol L
-1
, notou-se uma pequena diminuio do valor do
potencial (mV), com relao ao valor obtido correspondente soluo padro de
sacarose de igual concentrao (Figura 14).


50

Figura 14 Figura 14 Figura 14 Figura 14: :: : Cromatogramas com os valores correspondentes concentrao de sacarose: a) 0,1 mol L
-1
e
b) 0,085 mol L
-1
.

O valor do potencial antes de sacarose ser hidrolisada era de 73,18 mV. Logo
no incio da reao da sacarose com a mistura de steres, o valor obtido foi de 62,25
mV. Houve uma diminuio de 14,93% do valor. Isso, conseqentemente,
corresponde a uma diminuio da concentrao de sacarose, logo aps a mesma ter
sido preparada com a mistura de steres. Desse modo, pode-se afirmar que a
concentrao inicial de sacarose na mistura de steres, que era igual a 0,1 mol L
-1
, passa
a ter um valor igual a 0,085 mol L
-1
.
Mesmo com a diminuio da concentrao de sacarose, no se pode notar no
primeiro dia de reao, a formao de glicose e frutose. Isso, portanto, mostra indcios
de que a reao de hidrlise da sacarose em meio neutro apresenta uma etapa
intermediria antes da formao dos produtos, semelhante hidrlise em meio
cido
6
.

51
A mesma soluo de sacarose com a mistura de steres foi analisada num
perodo de 15 dias, e somente aps o oitavo dia de reao, observou-se os picos
correspondentes frutose, e glicose, respectivamente (Figura 15).

5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
P
o
t
e
n
c
i
a
l

(
m
V
)
Tempo (min)

Figura 15 Figura 15 Figura 15 Figura 15: :: : Cromatograma correspondente ao oitavo dia de reao da sacarose com a mistura de steres.

Sabendo-se que o valor de sacarose, antes da formao de glicose e frutose era
de 0,085 mol L
-1
, o valor obtido para sua concentrao aps a formao dos
monossacardeos foi igual a 0,078 mol L
-1
. Isso corresponde a uma diminuio da
concentrao de 8,24%, com relao concentrao antes da formao de glicose e
frutose. Os valores encontrados para as concentraes de glicose e frutose, foram
ambas iguais a 0,012 mol L
-1
no oitavo dia de reao. Isso est de acordo com a
estequiometria da reao, onde 1 mol de sacarose, produz 1 mol de glicose e 1 mol de
frutose
2
.

52
Durante os dias que se procedeu a reao, houve aumento da concentrao de
glicose e frutose (Figura 16) e o valor encontrado da concentrao foi de 0,019 mol L
-1

e 0,017 mol L
-1
, respectivamente.

5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
P
o
t
e
n
c
i
a
l

(
m
V
)
Tempo (min)

Figura 16 Figura 16 Figura 16 Figura 16: :: : Grfico correspondente ao dcimo terceiro dia de reao da sacarose com a mistura de
steres.

Com esses resultados, observa-se que a reao de hidrlise se faz sem a quebra
dos anis glicosdicos da sacarose, pois ocorre a formao dos seus respectivos
monossacardeos, frutose e glicose.
A Tabela 2 mostra os resultados obtidos de acordo com o tempo de hidrlise,
resumindo o que foi descrito anteriormente.


53
Tabela 2 Tabela 2 Tabela 2 Tabela 2 - -- - Concentrao (mol L
-1
) dos acares com relao ao tempo de hidrlise (dias)
Concentrao (mol L Concentrao (mol L Concentrao (mol L Concentrao (mol L
- -- -1 11 1
) )) )
Tempo (dias) Tempo (dias) Tempo (dias) Tempo (dias) Sacarose Sacarose Sacarose Sacarose Glicose Glicose Glicose Glicose Frutose Frutose Frutose Frutose
1 0,085 0 0
8 0,078 0,012 0,012
13 0,074 0,019 0,017

1.2. Verificao Verificao Verificao Verificao da etapa intermediria da reao da etapa intermediria da reao da etapa intermediria da reao da etapa intermediria da reao

Para comprovar que a reao da hidrlise da sacarose em meio neutro possui
um intermedirio, verificou-se primeiramente o tempo de reteno da mistura de
steres 0,1%, e dos padres de sacarose, glicose e frutose. O grfico correspondente a
esses tempos de reteno, so mostrados na Figura 17.
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0
-400
-200
0
200
400
600
800
1000
P
o
t
e
n
c
i
a
l

(
m
V
)
Tempo de reteno (min)
ster 0,1%
Glicose
Frutose
Sacarose

Figura 17 Figura 17 Figura 17 Figura 17: :: : Tempos de reteno correspondentes : ster 0,1%, glicose, frutose e sacarose.

54
A partir do comportamento de cada padro visto na Figura 17, pode observar
as diferenas ocorridas quando se analisa uma soluo de sacarose preparada com a
mistura de steres. Logo aps o preparo da soluo, a mesma foi injetada e
comparada com a soluo de ster 0,1% (Figura 18).

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0
-400
-200
0
200
400
600
800
1000
P
o
t
e
n
c
i
a
l

(
m
V
)
ster 1:1000
sacarose e ster (t
0
)

Figura 18 Figura 18 Figura 18 Figura 18: :: : Comparao entre a soluo de ster 0,1% e a soluo de sacarose preparada com ster
0,1%.

Nota-se no incio da reao de hidrlise (tempo t
0
) que ocorre um aumento
nos picos correspondentes aos picos de ster 0,1%, entre 1,5 e 2,5 minutos. Como
visto anteriormente, no se observa a formao de glicose e frutose. Pode-se dizer que
esse aumento se deve a formao de um complexo aquoso, formado pela sacarose e
pela mistura de steres ligada ligao glicosdica. Esse tempo de reteno
permaneceu o mesmo at o oitavo dia de reao, o mesmo tempo visto
anteriormente para o incio da formao de glicose e frutose. A partir do nono dia de
reao, o tempo de reteno da soluo de sacarose preparada com a mistura de

55
steres, difere-se tanto do tempo de reteno do ster 0,1% quanto do tempo de
reteno do primeiro dia de reao (Figura 19).

0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0
-400
-200
0
200
400
600
800
1000
P
o
t
e
n
c
i
a
l

(
m
V
)
ster 0,1%
Sacarose e ster (t
0
)
Sacarose e ster (t
9
)

Figura 19 Figura 19 Figura 19 Figura 19: :: : Comparao entre os tempos de reteno das solues de ster 0,1%, sacarose e ster (t0) e
sacarose e ster (t9).

O grfico correspondente ao nono dia de reao comprova que houve a
formao de glicose. possvel observar essa afirmao, comparando-se o grfico do
padro de glicose, com o grfico do nono dia de reao (Figura 20).


56
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0
-400
-200
0
200
400
600
800
1000
P
o
t
e
n
c
i
a
l

(
m
V
)
Glicose
Sacarose e ster (t
9
)

Figura 20 Figura 20 Figura 20 Figura 20: :: : Comparao entre o padro de glicose e a soluo de sacarose com ster 0,1% no nono dia
de reao.

Esse experimento, assim como seus resultados, apesar de terem um carter
qualitativo, soa de grande importncia, pois se verifica a formao de um complexo,
antes da formao de glicose e frutose. A formao da frutose, no foi observada
durante a reao de hidrlise, porm houve a formao da mesma como mostrado no
item 1.1.. Conseqentemente, pode-se afirmar que no h a quebra do anel
glicosdico, mas somente da ligao glicosdica.

2. Anlise espectrofotomtrica 2. Anlise espectrofotomtrica 2. Anlise espectrofotomtrica 2. Anlise espectrofotomtrica

2.1. Hidrlise da celulose 2.1. Hidrlise da celulose 2.1. Hidrlise da celulose 2.1. Hidrlise da celulose


57
A Figura 21 mostra a curva analtica da sacarose, que mostra a concentrao de
glicose (g L
-1
) com relao absorbncia. O grfico mostra que quanto mais
concentrada a soluo, que por sua vez reagiu com a soluo de DNS, maior o valor
da absorbncia. Os valores de concentrao variam de 0,08 a 0,5 g L
-1
.

0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
A -0,11058 0,00411
B 1,72274 0,01319
------------------------------------------------------------
R SD N P
------------------------------------------------------------
0,99972 1,53369 6 <0.0001
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a
concentrao (g L
-1
)

Figura 21 Figura 21 Figura 21 Figura 21: :: : Grfico da curva analtica da glicose.

De acordo com as equaes 12 e 13, obteve-se os valores de LD e LQ, iguais a
2,94 g L
-1
e 8,91 g L
-1
, respectivamente, uma vez que o valor de A foi igual a - 0,11058
e o valor de B foi igual a 1,72274. O desvio padro (DP) apresentou valor de 1,53369
e R igual a 0,99972.
A soluo de celulose, de concentrao 0,2 g L
-1
foi analisada durante um
perodo de 30 dias. Logo no incio da reao, ou seja, aps o seu preparo, a soluo
foi analisada espectrofotometricamente, e como ocorreu com a hidrlise da sacarose,
no se observou a formao de glicose (Figura 22). Portanto, a hidrlise da celulose

58
em meio neutro, tambm gera um complexo intermedirio, semelhante a sua reao
em meio cido.

480 500 520 540 560 580 600
-0,02
0,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a
Comprimento de onda (nm)

Figura 22 Figura 22 Figura 22 Figura 22: :: : Espectro eletrnico correspondente reao de hidrlise da celulose com a mistura de
steres 0,1% (primeiro dia de reao).

A soluo s foi apresentar mudanas, tanto na cor ao reagir com o reagente
de DNS quanto no valor da absorbncia, a partir do oitavo dia de reao. A soluo,
que na ausncia de acares redutores, possui colorao amarela, passou a ter
colorao laranja. O valor da absorbncia aumentou, com relao ao valor obtido no
primeiro dia de reao (Figura 23).


59
480 500 520 540 560 580 600
-0,02
0,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
Celulose e ster (t
0
)
Celulose e ster (t
8
)
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a

Figur Figur Figur Figura 23 a 23 a 23 a 23: :: : Espectros correspondentes ao primeiro (t0) e ao oitavo dia (t8) de reao da celulose com a
mistura de steres 0,1%.

O valor da absorbncia, em 520 nm que no incio da reao era de 0,043,
passou para 0,048 no oitavo dia de reao. Mesmo essa mudana sendo muito
pequena, os grficos mostram indcios de que a celulose est sendo hidrolisada pela
mistura de steres em acares redutores. Utilizando a tcnica espectrofotomtrica,
no se sabe se o acar redutor formado a glicose, ou se a celulose est sendo
decomposta em celobiose, que um dissacardeo formado por duas molculas de
glicose unidas por uma ligao -1,4
1, 2, 3, 8
.
Um aumento maior do valor da absorbncia se d no nono dia de reao
(Figura 24). Esse valor corresponde a 0,070 e equivale a um valor de 0,11 g L
-1
de
acares redutores formados.


60
480 500 520 540 560 580 600
-0,02
0,00
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
Celulose e ster (t
0
)
Celulose e ster (t
8
)
Celulose e ster (t
9
)
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a

Figura Figura Figura Figura 24 24 24 24: :: : Comparao dos valores de absorbncia do primeiro (t0), oitavo (t8) e nono dia (t9) da
reao da celulose com a mistura de steres 0,1%

No dcimo segundo dia da reao, a absorbncia apresentou o seu valor
mximo e assim permaneceu at o trigsimo dia (Figura 25). Esse valor foi igual a
0,134 correspondendo, portanto a um valor de 0,14 g L
-1
de acares redutores.

480 500 520 540 560 580 600
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a
Celulose e ster (t
0
)
Celulose e ster (t
8
)
Celulose e ster (t
9
)
Celulose e ster (t
30
)

Figura 25 Figura 25 Figura 25 Figura 25: :: : Trigsimo dia de reao da celulose (t30) com a mistura de steres em relao ao primeiro
(t0), oitavo (t8) e nono (t9) dias.

61
Pode-se dizer que, partindo de uma soluo de 0,2 g L
-1
de celulose, chegou-se
a formao de 0,14 g L
-1
de acares redutores (celobiose e/ou glicose), ou seja, 63%
da celulose foi hidrolisada em 30 dias.
A Figura 26 destaca as mudanas nas coloraes de diferentes solues aps a
reao com o reagente DNS. Nota-se que, na presena de acares redutores, as
solues apresentam colorao mais escura. As solues foram numeradas de 1 a 4,
indicando respectivamente: 1) gua destilada; 2) Celulose (0,2 g L
-1
) e ster 0,1% (t
0
);
3) Celulose (0,2 g L
-1
) e ster 0,1% (t
30
); 4) Padro de glicose.

Figura 26: Figura 26: Figura 26: Figura 26: Mudana de colorao de diferentes solues com o reagente de DNS: 1) gua destilada; 2)
celulose e ster 0,1% (t0); 3) celulose e ster 0,1% (t30) e 4) soluo padro de glicose.


62
2.1.1. Estudo cintico da decomposio da celulose 2.1.1. Estudo cintico da decomposio da celulose 2.1.1. Estudo cintico da decomposio da celulose 2.1.1. Estudo cintico da decomposio da celulose

Para o estudo cintico, construiu-se a Tabela 3 relacionando a concentrao de
celulose em soluo (g L
-1
) e o respectivo tempo de decomposio (dias). Esses valores
foram calculados com base na curva da Figura 27.

Tabela 3 Tabela 3 Tabela 3 Tabela 3 Concentrao de celulose em soluo e o tempo de decomposio.
Concentrao de Concentrao de Concentrao de Concentrao de
celulose (g L celulose (g L celulose (g L celulose (g L
- -- -1 11 1
) )) )
Tempo (dias) Tempo (dias) Tempo (dias) Tempo (dias)
0,158
0,152
0,13
0,066
1
8
9
30

Supondo a hidrlise da celulose como sendo uma reao de segunda ordem,
uma vez que as anlises espectrofotomtricas indicam a presena de um intermedirio
na reao, tambm chamado de complexo aquoso, construiu-se um grfico de
1/[celulose] versus t (tempo) e fez-se uma irterpolao linear (Figura 27)
50
.


63
0 5 10 15 20 25 30
6
8
10
12
14
16
A 5,01376 0,7926
B 0,32698 0,04901
------------------------------------------------------------
R SD N P
------------------------------------------------------------
0,97826 1,06259 4 0,02174
------------------------------------------------------------
1

/

[
c
e
l
u
l
o
s
e
]
Tempo (dias)

Figura 27: Figura 27: Figura 27: Figura 27: Grfico dos valores de 1/[celulose] versus tempo, para a verificao de uma reao de
segunda ordem.

Como no se sabe como a concentrao da mistura de steres est relacionada
com a concentrao de celulose, fez-se o grfico acima somente levando em
considerao a concentrao de celulose em g L
-1
. Logo, assume-se que a expresso da
lei de velocidade para essa reao :

[ ]
2
celulose k v =
(14)

Onde v a velocidade da reao, nesse caso dada em g L
-1
dia
-1
, k a constante
de velocidade e [celulose] a concentrao da celulose em g L
-1
.
Na interpolao linear, onde a equao da reta dada por Y = A + BX, B o
coeficiente angular da reta, e no caso do estudo cintico, assume o valor de k, o qual
corresponde a um valor de 0,327 g L
-1
dia
-1
. Tendo o valor de k, e a concentrao

64
inicial de celulose, pode-se obter a o tempo de meia-vida (t
1/2
) da reao de hidrlise.
Assumindo a lei de velocidade dada pela equao 2.1., o valor de t
1/2
dado por:

[ ]
0
2 / 1
1
celulose k
t =
(15)

Uma vez que a concentrao inicial de celulose de 0,2 g L
-1
, o valor de t
1/2

igual a 15,29 dias. Como a celulose se decompe por uma reao de segunda ordem,
a mesma pode ainda existir durante longos perodos em concentraes muito baixas,
pois o valor da meia-vida aumenta medida que a celulose fica mais diluda.

2.2 2.2 2.2 2.2. . . . Hidrlise das solues de sacarose com NaCl Hidrlise das solues de sacarose com NaCl Hidrlise das solues de sacarose com NaCl Hidrlise das solues de sacarose com NaCl

O grfico da Figura 28 mostra os valores de absorbncia em 485 nm, que
correspondem as solues de sacarose e NaCl hidrolisadas pela mistura de steres
0,1%. As bandas observadas indicam a presena de acares redutores, nesse caso,
glicose e frutose, para diferentes valores de fora inica.


65
480 490 500 510 520 530 540 550
-0,20
-0,15
-0,10
-0,05
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
0,30
A
b
s
o
r
b
n
c
i
a
Valores de fora inica ( ) em mol L
-1
0
1,0 x 10
-4
5,0 x 10
-4
1,0 x 10
-3
2,0 x 10
-3
5,0 x 10
-3
1,0 x 10
-2

Figura 28 Figura 28 Figura 28 Figura 28: :: : Grfico correspondente aos valores de absorbncia em 485 nm, indicando a formao de
glicose e frutose a partir de diferentes solues de sacarose e NaCl.

Tomando-se os valores de absorbncia da Figura 28 e comparando com os
valores de concentrao de glicose (g L
-1
), apresentados na curva analtica da Figura 21,
sabe-se a quantidade de acares redutores (g L
-1
) que foram formados a partir da
reao de sacarose e NaCl com a mistura de steres. Sabendo-se que um mol de
glicose e um mol de frutose possuem peso molecular de 180,16 g
7
, a Tabela 4 mostra
os valores de concentrao de glicose e frutose, em g L
-1
, e seus respectivos valores em
mol L
-1
.


66
Tabela 4 Tabela 4 Tabela 4 Tabela 4 - -- - Concentrao de glicose e frutose em g L
-1
e em mol L
-1

Concentrao de glicose e frutose Concentrao de glicose e frutose Concentrao de glicose e frutose Concentrao de glicose e frutose
(g L (g L (g L (g L
- -- -1 11 1
) )) )
Concentrao de glicose e frutose Concentrao de glicose e frutose Concentrao de glicose e frutose Concentrao de glicose e frutose
(mol L (mol L (mol L (mol L
- -- -1 11 1
) )) )
0,120
0,175
0,180
0,128
0,058
0,054
0,056
6,66 x 10
-4
9,71 x 10
-4
9,99 x 10
-4
7,10 x 10
-4
3,22 x 10
-4
3,0 x 10
-4
3,11 x 10
-4

A Figura 29, portanto, mostra as foras inicas das sete solues de sacarose
com NaCl e as respectivas concentraes de glicose e frutose (mol L
-1
), obtidas da
hidrlise de cada soluo.

0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
1,1
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

d
e

a
c
a
r
e
s

r
e
d
u
t
o
r
e
s

(

1
0
-
3
m
o
l

L
-
1
)
fora inica ()

Figura 29 Figura 29 Figura 29 Figura 29: :: : Grfico correspondente as concentraes de glicose e frutose (mol L
-1
) pelos respectivos
valores de fora inica ().

67
Observa-se na Figura 29 que numa fora inica correspondente a zero, ou seja,
na soluo de sacarose e ster 0,1%, de concentrao 10
-3
mol L
-1
onde no foi
adicionado o NaCl, a concentrao de acares redutores formados, foi de 6,66 x 10
-4

mol L
-1
. Quando se adiciona NaCl a uma soluo de mesma concentrao, nota-se que
o valor obtido de acares redutores aumenta, at chegar a um valor mximo, que
corresponde a uma fora inica igual a 5,0 x 10
-4
mol L
-1
. Nesse ponto, a concentrao
de acares redutores formados foi igual a 9,99 x 10
-4
mol L
-1
. Isso indica que,
partindo-se de uma soluo 10
-3
mol L
-1
de sacarose, essa foi 99% hidrolisada. Devido
ao longo tempo de hidrlise (dois meses), conclui-se que ainda h a formao de um
complexo aquoso antes mesmo da decomposio da sacarose, porm esse complexo
mais facilmente desfeito no valor de fora inica descrito.
No entanto, medida que uma quantidade maior de NaCl adicionada (fora
inica maior), uma menor quantidade de glicose e frutose formada. Pode-se supor
que quantidades acima de 5,0 x 10
-4
mol de NaCl impedem a mistura de steres de
realizar a decomposio da sacarose. Com isso, duas hipteses podem ser levantadas:
a primeira, de que determinada quantidade de sal impede a formao do complexo
aquoso, e a segunda, de que h a formao de um complexo aquoso, porm, aps
esta etapa, no h a formao de acares redutores.


68
2.2.1. Clculo da constante de equ 2.2.1. Clculo da constante de equ 2.2.1. Clculo da constante de equ 2.2.1. Clculo da constante de equilbrio das reaes de hidrlise da sacarose e NaCl ilbrio das reaes de hidrlise da sacarose e NaCl ilbrio das reaes de hidrlise da sacarose e NaCl ilbrio das reaes de hidrlise da sacarose e NaCl

A partir dos valores de concentrao de glicose e frutose (mol L
-1
), possvel
calcular as constantes de equilbrio (K), pela equao 7. Esses valores so mostrados
no grfico abaixo (Figura 30), que mostra as concentraes de acares redutores (mol
L
-1
) e as constantes de equilbrio K, em funo da fora inica. Esse grfico equivale ao
grfico apresentando anteriormente na Figura 29, porm, adicionando-se os valores
de K.
0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
1,1
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
1,1
C
o
n
s
t
a
n
t
e

d
e

e
q
u
i
l
b
r
i
o

K
'

(
1
0
-
1

m
o
l

L
-
1
)
C
o
n
c
e
n
t
r
a
o

d
e

a
c
a
r
e
s

r
e
d
u
t
o
r
e
s

(

1
0
-
3
m
o
l

L
-
1
)
fora inica ()

Figura 30 Figura 30 Figura 30 Figura 30: :: : Grfico correspondente as concentraes de acares redutores (mol L
-1
) e constantes
de equilbrio K em funo dos valores de fora inica ().

Tendo-se os valores de K, obtm-se os valores de K, que so as constantes de
equilbrio termodinmicas, que levam em considerao os coeficientes de atividade
dos ons Na
+
e Cl
-
em soluo. Em diluies infinitas, onde a fora inica igual a
zero, o valor do coeficiente de atividade () igual a 1, como mostra a equao 6.
Conseqentemente, o valor da constante de equilbrio K (calculado

69
experimentalmente) igual ao valor da constante de equilbrio termodinmica K
(equao 8).
Os valores de K, calculados utilizando-se a equao 11, so mostrados na Tabela
5, comparados com os valores experimentais de K.

Tabela 5 Tabela 5 Tabela 5 Tabela 5 Valores de constantes de equilbrio experimentais (K) e os respectivos valores de constantes
de equilbrio termodinmicas (K).

K (mol L K (mol L K (mol L K (mol L
- -- -1 11 1
) )) ) K (mol L K (mol L K (mol L K (mol L
- -- -1 11 1
) )) )
6,66 x 10
-1
9,71 x 10
-1
9,99 x 10
-1
7,10 x 10
-1
3,22 x 10
-1
3,0 x 10
-1
3,11 x 10
-1
6,60 x 10
-1
9,48 x 10
-1
9,50 x 10
-1
6,59 x 10
-1
2,91 x 10
-1
2,55 x 10
-1
2,47 x 10
-1

A seguir, apresentado um grfico das constantes de equilbrio, K e K, em
funo da fora inica (Figura 31).


70
0,000 0,002 0,004 0,006 0,008 0,010
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
1,0
1,1
C
o
n
s
t
a
n
t
e

d
e

e
q
u
i
l
b
r
i
o

(
1
0
-
1

m
o
l

L
-
1
)
Fora inica ()
K' (experimental)
K (termodinmico)

Figura 31 Figura 31 Figura 31 Figura 31: :: : Valores das constantes de equilbrio, K e K, com relao aos valores de fora inica ().

Para avaliar a espontaneidade da reao, utilizou-se a funo denominada
energia livre, a qual inclui tanto a energia, quanto a entropia do sistema. Para que a
reao ocorra, a energia livre do sistema deve diminuir. Para reaes qumicas
temperatura e presso constantes, a funo energia livre que atinge um mnimo no
equilbrio denominada energia livre de Gib energia livre de Gib energia livre de Gib energia livre de Gibbs bs bs bs
51, 52
. No caso de um equilbrio, onde
todas as espcies esto em soluo, pode-se escrever:

b
B
a
A
d
D
c
C
RT G

= ln
(16)

Substituindo-se os valores de atividade por K, tem-se:

= ln RT G (17)


71
Com essas informaes, e com os valores das constantes de equilbrio calculadas
anteriormente, pode-se obter os valores das energias livre de Gibbs para a reao de
hidrlise da sacarose em meio neutro, admitindo R (constante dos gases) como 8,3144
J mol
-1
K
-1
, e T como 298 K (25
o
C).
A Tabela 6 relaciona os valores das constantes de equilbrio termodinmicas e
os valores calculados das energias livres.

Tabela 6 Tabela 6 Tabela 6 Tabela 6 Valores das constantes de equilbrio (K) e energias livres (G).
Constante de equilbrio (K) (mol L Constante de equilbrio (K) (mol L Constante de equilbrio (K) (mol L Constante de equilbrio (K) (mol L
- -- -1 11 1
) )) ) Energia livre de Gibbs (G) (J) Energia livre de Gibbs (G) (J) Energia livre de Gibbs (G) (J) Energia livre de Gibbs (G) (J)
6,60 x 10
-1
9,48 x 10
-1
9,50 x 10
-1
6,60 x 10
-1
2,91 x 10
-1
2,55 x 10
-1
2,47 x 10
-1
1.029,51
132,31
127,09
1.029,51
3.058,54
3.385,74
3.464,72

Os valores em destaque na Tabela 6 indicam o ponto em que a constante de
equilbrio apresentou seu valor mais alto, e conseqentemente, o valor da energia
livre foi o mais baixo. Como visto anteriormente, esse valor de K se d quando a
fora inica da soluo de sacarose e NaCl em ster 0,1% foi de 5,0x 10
-4
mol L
-1
.
Sabe-se que a presena de acares redutores nessa soluo est em maior quantidade,

72
ou seja, a reao mais favorvel no sentido da formao dos produtos. Portanto, o
valor da energia livre menor.
No presente estudo, nota-se que os valores de G so sempre positivos, e
ento, os valores de K so sempre menores que 1. Isso significa que em todos os casos,
ainda h certa quantidade de reagentes no equilbrio
52
.

Concluses e sugestes
para trabalhos futuros

Concluses e sugestes para trabalhos futuros Concluses e sugestes para trabalhos futuros Concluses e sugestes para trabalhos futuros Concluses e sugestes para trabalhos futuros

73
Conclui-se, a partir deste trabalho, que os produtos de hidrlise da sacarose
foram quantificados, respeitando-se a estequiometria da reao qumica, onde 1 mol
de sacarose produz 1 mol de glicose e 1 mol de frutose. O mecanismo da reao
mostrou-se de acordo com a literatura
6
, pois ocorre a formao de um complexo que
define a velocidade da reao de hidrlise, sendo portanto, uma reao de segunda
ordem, pois h a formao de um intermedirio.
A estabilidade do complexo aquoso se d em oito dias de reao, aps esse
perodo, ocorre a formao dos produtos finais. Esse tempo independente do
tamanho do acar e do tipo da ligao glicosdica, pois a sacarose um dissacardeo
de ligao -1,2 e a celulose um polissacardeo de ligao -1,4.
Com relao cintica de decomposio da celulose, alm da verificao da
ordem da reao, pode-se calcular o tempo de meia-vida, e conclui-se que metade da
concentrao da celulose foi hidrolisada em 15,29 dias. No se sabe em qual
proporo a mistura de steres reage com a celulose, uma vez que, conhecendo-se
essa interao, tanto a lei de velocidade, como o tempo de meia-vida podem ser
diferentes do que os valores calculados. Esse trabalho, portanto, faz uma hiptese com
relao ao estudo cintico.
Na anlise das solues de sacarose com NaCl, pode-se comprovar que a fora
inica do meio reacional interfere na formao de glicose e frutose. Porm, ainda
houve a formao de um complexo aquoso antes da formao dos acares redutores,
uma vez que a reao de hidrlise, mesmo com a adio de sal, no foi instantnea.
Se uma grande quantidade de NaCl for adicionada, entretanto, esta vai interferir na
decomposio da sacarose, pois a formao de glicose e frutose tende a diminuir.
Nesse caso, tambm se trabalha com hipteses de que no h formao de um

74
complexo aquoso, devido s interaes entre o sal e o ster, ou ento, existe a
formao de um intermedirio, porm o mesmo no se desfaz e no ocorre a
formao de acares redutores.
Como sugestes para trabalhos futuros, pode-se realizar o estudo de hidrlise
em meio neutro utilizando-se outros acares, como por exemplo, a N-acetil-
glicosamina e o cido N-acetil murmico, ambos os acares constituintes da parede
celular de bactrias Gram-negativas.
Um polissacardeo, tambm de grande interesse, a dextrana, responsvel pelo
entupimento de dutos na indstria sucroalcooleira, reduzindo a porcentagem do
etanol produzido. Como sugesto, pode-se realizar o estudo da decomposio da
dextrana utilizando-se a mistura de steres derivados do leo de mamona, e observar
se ocorre a hidrlise.
A rafinose, um trissacardeo presente em diversos alimentos, como feijo, soja e
leguminosas em geral, apresenta os monossacardeos galactose, glicose e frutose. A
galactose e a glicose esto unidas por uma ligao -1,6. O cido clordrico presente
no estmago no capaz de hidrolisar essa ligao, uma vez que ela decomposta
apenas por bactrias presentes no intestino, causando mal estar e desconforto
abdominal
22, 53
. Como sugesto de trabalho futuro, pode-se realizar o estudo da
rafinose utilizando a mistura de steres e comprovar se a ligao -1,6 pode ser
desfeita.
Outros estudos podem ser realizados, reagindo a celulose nativa diretamente
com a mistura de steres e observar se h a mudanas na textura e na massa das
amostras. Alm da celulose, pode-se realizar o estudo com o amido, importante
polissacardeo de reserva energtica.

75
Pode-se tambm, realizar o estudo de hidrlise de carboidratos em meio
neutro, utilizando-se diretamente, alimentos ricos em acares, como as frutas e
observar mudanas significativas, tanto no gosto quanto no amadurecimento das
mesmas.

Referncias
bibliogrficas

Referncias bibliogrficas Referncias bibliogrficas Referncias bibliogrficas Referncias bibliogrficas

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