Terapia Gnica

1. Concepto: La terapia gnica es un tratamiento mdico que consiste en manipular la informacin gentica de clulas enfermas para corregir un defecto gentico o para dotar a las clulas de una nueva funcin que les permita superar una alteracin. Tcnica teraputica mediante la cual se inserta un gen funcional en las clulas de un paciente para corregir un defecto gentico causante de una patologa.

2. Factores: Tipo de herencia: En general, las enfermedades mendelianas, determinadas por la accin de un nico gen, son mejores candidatas que las enfermedades multifactoriales que, adems de depender de la accin conjunta de varios genes, estn influidas por factores ambientales. Una excepcin a este criterio general lo constituye el cncer que, pese a que puede ser catalogado como una enfermedad tpicamente multifactorial, ha sido objeto en los ltimos aos del mayor nmero de protocolos de terapia gnica. Patrn de herencia: Las enfermedades recesivas son mejores candidatas a ser tratadas mediante terapia gnica que las dominantes. En las primeras, debido a su carcter recesivo, podra ser suficiente aadir una copia del gen sano para recuperar el fenotipo normal, mientras que en las segundas esto no es suficiente en la mayora de los casos y sera necesario recurrir a algn tipo de modificacin dirigida del gen daado, lo que complica enormemente las posibilidades de intervencin. Naturaleza de la mutacin causante de la enfermedad: Por ejemplo, cuando la mutacin es de prdida de funcin, es decir, el gen afectado deja de producir la protena codificada por l o sta no es funcional, como es el caso de la mayora de enfermedades recesivas, el defecto podra ser corregido por terapia de aumento gnico, la ms sencilla de todas pues, en principio, bastara con la

introduccin de una copia normal del gen que produjese la protena funcional para que la correccin se llevase a efecto. Por el contrario, las mutaciones de ganancia de funcin, como la aparicin de una nueva protena mutante o de un producto txico, que son caractersticas de algunas dolencias dominantes, no pueden ser tratadas aadiendo genes normales y necesitaran de otras estrategias ms difciles de llevar a cabo, como el bloqueo especfico del gen mutado o la correccin dirigida de la mutacin. Control de la expresin gnica. Aquellos genes que no necesitan un excesivo control de su expresin, manteniendo un fenotipo funcional con niveles variables de producto gnico, son los ms fciles de tratar. Por el contrario, cuando la expresin gnica requiere un control estricto los problemas que se presentan son mucho mayores. Este ha sido el caso, por ejemplo, del tratamiento mediante terapia gnica de la enfermedad de los glbulos rojos talasemia. La expresin del gen de la -globina insertado requiere, para curar la enfermedad, un control exacto de su produccin, que debe ser igual al de la -globina. Esto es necesario para que las molculas de hemoglobina resultantes, formadas por dos cadenas proteicas de -globina y otras dos de -globina, desempeen su funcin con normalidad. Esta necesidad de control de la expresin gnica ha impedido hasta el momento la consecucin de progresos significativos en la aplicacin de la terapia gnica a esta enfermedad sangunea. Aplicabilidad de la terapia gnica es el tamao del ADN codificante del gen a insertar: Los genes con secuencias de pequeo tamao son siempre mejores candidatos, mientras que los genes con un ADN codificante de gran tamao pueden ser difciles de transferir al interior de las clulas debido a la dificultad de encontrar vectores adecuados. Por ltimo, la enfermedad ser ms fcilmente tratable si se manifiesta en un tejido cuyas clulas puedan ser extradas, cultivadas con facilidad in vitro, resistentes a la manipulacin y reintroducidas sin dificultad en el organismo. Adems, sera deseable que fuesen clulas de larga vida, a ser posible que permaneciesen durante toda la vida del paciente. Las clulas que ms se aproximan a estas condiciones tisulares son, sobre todo, las de la mdula sea, la piel y el hgado por lo que, en principio seran las mejores candidatas.

3. Objetivos: A pesar de que en un principio fue una tcnica planteada para tratar enfermedades genticas hereditarias, en la actualidad se propone para casi cualquier enfermedad, siendo un mecanismo de lo ms prometedor. Entre los objetivos que persigue la terapia gnica podemos citar: Tratar de complementar o sustituir un gen defectuoso introduciendo otra copia normal de ste en las clulas. Inhibir o bloquear el funcionamiento de aquellos genes cuya intervencin contribuye al desarrollo de la enfermedad (por ejemplo, los oncogenes). Introducir material gentico que permita a la clula sintetizar una protena que tenga un efecto teraputico nuevo (por ejemplo, introducir en las clulas copia de un gen que obstaculice la replicacin de un virus). 4. Tipos: En clulas somticas: Consiste en la alteracin de genes de clulas no germinales es decir somticas humanas para tratar un trastorno concreto, en donde se extraen clulas del paciente que se manipulan fuera del cuerpo recibiendo el nombre de (terapia ex vivo) o en algunos casos tambin son tratada dentro del propio cuerpo La modificacin gentica no puede transmitirse a la descendencia. Las clulas madres de la medula sea son ideales debido a que son ms accesibles y tienen una vida prolongada en el cuerpo; tambin se utilizaron clulas como fibroblastos cutneos, clulas musculares, hepticas y linfocitos pero estos tienen la desventaja de que su vida es relativamente corta requiriendo as tratamientos repetidos TG de sustitucin: Este mtodo es especialmente adecuado para corregir las mutaciones de prdida de funcin que resultan en un producto gnico no funcional o ausente; la insercin de un gen normal proporciona el producto ausente. Hay numerosas tcnicas para introducir genes en las clulas, pero los virus, que han desarrollado de manera natural inteligentes estrategias para insertar sus genes en las clulas, son los vectores de la terapia gnica. VECTORES VIRICOS Los retrovirus son una forma de virus con RNA, pueden insertar copias de sus genomas en los ncleos de las clulas husped despus de retrotranscribir su RNA vrico a DNA bicatenario. La insercin de DNA extrao en una clula husped a travs de un vector vrico se denomina transduccin.

Se emplean tcnicas de DNA recombinante para crear retrovirus con replicacin deficiente en los cuales los tres genes codificantes de protenas retrovricas son reemplazados por una copia normal de un gen humano y un elemento activador. Los retrovirus modificados se incuban con las clulas somticas del paciente de manera que eL retrovirus transluce el gen humano normal en el DNA de las clulas husped. Aunque los retrovirus ofrecen la ventaja de una integracin estable y eficiente en el genoma, tambin presentan inconvenientes especficos. Al integrase preferentemente cerca de las secuencias activadoras, el retrovirus podra situarse cerca de el protooncogn, activarlo y causar un tumor. VECTORES ADENOVIRICOS Debido a la incapacidad de la mayora de los retrovirus de trasducir clulas que no se dividen, se han explorado otros sistemas de transferencia que no presentan esa limitacin. Un importante ejemplo es el ADENOVIRUS, un virus con DNA bicatenario que se emplea con frecuencia en los preparados de vacunas. No se integran en el DNA de la clula husped, lo que ofrece la ventaja de que no activaran un protooncogen ni alteraran el genoma de cualquier otro modo. Sin embargo, la falta de integracin tambin es un inconveniente, porque los adenovirus terminaran por inactivase. Dado que normalmente slo se elimina parte del genoma del adenovirus, muchas veces el vector provoca respuesta inmunitaria. Este problema aumenta con la introduccin repetida del adenovirus, que estimula una mayor respuesta inmunitaria ala protena extraa. VECTORES VIRICOS ADENOASOCIADOS. Son un tipo de parvovirus que necesita la presencia de adenovirus para su replicacin normal. Al igual que los adenovirus, stos se pueden transducir clulas que no se dividen. Son capaces de mantener una expresin teraputica. Estos vectores, pueden aceptar un inserto de DNA de solo unas 4,5 Kb. Debido a sus numerosas propiedades tiles, los AAV se han convertido en un vector mucho ms popular en terapia gnica en los ltimos aos. VECTORES LENTIVIRICOS. Los virus lentiviricos son complejos virus con RNA que, a diferencia de los retrovirus simples, pueden transducir las clulas que no se dividen a travs de poros de membrana nuclear. Al igual que otros retrovirus, los lentivirus pueden integrase de manera estable en el genoma y acepatar insertos de un tamao razonable. VECTORES NO VIRICOS. Uno de los ms estudiados es el liposoma, un cuerpo graso que pueden aceptar grandes insertos de DNA. A veces los liposomas se fusionan con las clulas, permitiendo que el inserto de DNA se introduzca en la clula. Dado que el liposoma

carece de pptidos, n provoca una repuesta inmunitaria. Su inconveniente principal es que no tiene la eficacia de transferencia de los virus: la mayora de liposomas se degradan en el citoplasma y la mayor parte de los que no se degradan son incapaces de introducirse en el ncleo. TG para enfermedades no hereditarias: Alrededor de las dos terceras partes de los protocolos de terapia gnica estn en marcha actualmente se refiere a canceres no hereditarios y aproximadamente el 10% al sndrome de la INMUNODEFICIENCIA ADQUIRIDA (SIDA) , por ejemplo el gen inhibidor tumoral TP53, el cual se encuentra inactivo en la mitad de todos lo canceres aproximadamente, este se ha insertado en tumores pulmonares en un intento por detener la progresin tumoral. Algunos de estos tumores escapan a la deteccin por el sistema inmunitario desechando las molculas de superficie celular que son reconocidas por las clulas T. Los liposomas que contiene ADN que codifica la molcula coestimuladora B7 se ha introducido en clulas de melanoma maligno, lo cual ha llevado a la expresin de B7 en la superficie celular y a la posterior destruccin de la clula por clulas T cito txicas; en algunos casas se ha llegado a provocar la regresin del melanoma. Se estn formulando diversos mtodos de terapia gnica para combatir el VIH, la mayora de estos intentos se dirigen a detener la replicacin del virus o a prevenir su extensin. Una mutacin dominante negativa introducida en clulas T infectadas por el VIH produce una protena que interfiere en las protenas producidas por el VIH, bloqueando su accin normal. Tambin hay en marcha ensayos para reducir la expresin de CCR5, un correceptor de quimiocinas utilizado por el VIH para introducirse en las clulas del sistema inmunitario.

En la lnea germinal: La terapia en la lnea germinal en clulas somticas consiste en la aliteracin nicamente de clulas somticas especficas y, por lo tanto en principio s muy similar a muchos otros tipos d intervenciones mdicas. En cambio, la terapia en la lnea germinal implica alteracin de todas las clulas del cuerpo, incluyendo las que originan los gametos. Este tipo de terapia gnica no solo afectara al paciente, sino tambin a sus descendientes. Aunque en principio la terapia en la lnea germinal es posible en los humanos presenta problemas significativos. En primer lugar, normalmente los embriones inyectados mueren y algunos desarrollan tumores y malformaciones. En segundo lugar, aun en un trastorno autosmico dominante; la mitad de los embriones producidos por un progenitor heterocigoto son genticamente normales. Por ltimo, la alteracin permanente del legado gentico humano plantea numerosos interrogantes ticos.

5. Procedimiento: El procedimiento estndar ms utilizado de terapia gnica sigue, de modo muy esquemtico, los siguientes pasos: 1) Identificacin, aislamiento y amplificacin del gen que va a ser utilizado para el tratamiento 2) Extraccin y cultivo in vitro de las clulas del tejido del paciente a tratar 3) Transferencia del gen teraputico al interior de las clulas mediante un vector. El gen transferido debe llevar alguna secuencia promotora que permita su expresin y debe ir acompaado tambin de algn marcador que permita identificar las clulas a las que se ha incorporado el gen, por ejemplo, un gen de resistencia a algn frmaco. De esta manera al ser expuesto el cultivo al frmaco en cuestin, nicamente sobrevivirn aquellas clulas resistentes, es decir, las que hayan incorporado el gen de resistencia y el gen teraputico asociado al mismo. A continuacin se transfieren las clulas seleccionadas con el gen incorporado al paciente a la espera de que ejerzan su funcin fisiolgica normal lo que conllevara la eliminacin de la patologa. 6. Clulas diana: Las clulas diana se seleccionan en funcin del tipo de tejido en el que deba expresarse el gen introducido, y deben ser adems clulas con una vida media larga. Debido a la experiencia en transplante de mdula sea, una de las dianas celulares ms trabajadas son las clulas madre hematopoyticas. Otras dianas celulares con las que se ha trabajado son: Linfocitos: son clulas de larga vida media y fcil acceso. Constituyen un blanco para terapias ex vivo de melanomas e inmunodeficiencias. Epitelio respiratorio: son clulas de divisin muy lenta y en ellas no es posible la transferencia ex vivo, pero s su transformacin mediante adenovirus y lipoplexes(liposomas catinicos) Hepatocitos: su transformacin es posible tanto ex vivo como in vivo. Fibroblastos drmicos: son clulas de fcil acceso y cultivo, y pueden transformarse tanto ex vivo como in vivo, pero suelen tener efectos transitorios. Clulas musculares: pueden transformarse mediante inyeccin in vivo de ADN y tambin mediante adenovirus, pero con un xito muy limitado en este ltimo caso.

7. Enfermedades tratadas con Terapia Gnica: Son numerosas las enfermedades objeto de la terapia gnica, a continuacin mencionaremos algunas: Deficiencia de adenosina desaminasa (inmuno deficiencia combinada grave) Se debe a un trastorno autosmico recesivo. Su deficiencia origina una disfuncin intensa en las clulas T y B, que provoca la muerte de los pacientes antes de los dos aos de edad por infeccin masiva. Se comenz a estudiar su tratamiento por terapia gnica para una

mutacin en el gen adenosina desaminasa. De los nios se aslan linfocitos T, a los que se les introduce un gen ADA normal usando un vector retroviral, y son devueltos a los pacientes. Estuvieron recibiendo clulas con genes corregidos cada uno o dos meses durante un ao, y como resultado fueron capaces de iniciar una respuesta inmunitaria y disminuir el nmero de infecciones. Hemofilia La TG est resultando tambin eficaz en casos de hemofilia A y B donde se encuentran alterados los factores coagulantes VIII y IX, respectivamente. En ellas se han realizado aproximaciones utilizando el transgn de estos factores y vectores retroviales, adenovirus, virus adenoasociados y ADN desnudo administrados por vas comunes como la subcutnea, intramuscular, intraheptica, intraperitoneal, o intravenosa. Los vectores actan como un liberador de los factores a las clulas musculares del paciente, donde producirn continuamente este factor. Lo cual reducir los episodios de hemorragias espontneas y la necesaria infusin de estas protenas en los pacientes de este tipo de hemofilia. Distrofia muscular Duchenne Investigadores han usado TG para proteger msculos respiratorios vitales en ratones con la enfermedad, debido a que la mayor causa de muerte en la DMD es el deterioro del diafragma. La nueva investigacin ha demostrado por primera vez cmo el diafragma puede ser rescatado por medio de la inyeccin intravenosa con el gen de la distrofina, que es defectuoso en las personas con DMD. Despus del tratamiento, el msculo del diafragma del ratn mostr una expresin estable del gen de la distrofina durante seis meses. 8. Desventajas y Ventajas VENTAJAS DESVENTAJAS

Habra que suponer que no hay peligro de La respuesta inmune: Los genes inyectados co rechazo del trasplante porque el rgano del n un virus pueden desencadenar una ADN coincide exactamente con el ADN del respuesta inmune contra el virus. paciente. Problemas con vectores virales -una vez en el El paciente no tendra que esperar hasta interior del paciente, el vector viral podra que un donante no emparentado muera recuperar su capacidad de causar para obtener un trasplante. enfermedad. Existe el potencial para curar, o al menos tratar, Trastornos Multignicos - El material gentico ciertas enfermedades y trastornos que no puede no entrar en el lugar correcto, o en otro pueden ser manejados de manera efectiva lugar en vez del ADN de la clula. el da de hoy. (como la degeneracin de neuronas, clulas seas, mdula, etc.)