UNIVERSIDAD POLITCNICA DEL VALLE DE TOLUCA Ingeniera en Biotecnologa REPORTE DE PRCTICA INDETIFICACIN DE TIPOS DE INHIBICIN BACTERIANA

Presentan:

Daz Hernndez Alfonso Alam Hernndez Aparicio Ruth Alejandra Hernndez Pea Ana Patricia Nava Conzuelo Juan Miguel

Materia: Microbiologa Aplicada Facilitador: QFB. Ricardo Rodrguez Hernndez

1. OBJETIVOS

Identificacin de halos inhibidores en una cepa de Escherichia coli Caracterizacin del cultivo bacteriano sobre los siguientes sustratos: agar XLD, agar TSA, agar Verde Brillante, agar SB Clasificacin de los tipos de inhibidores bacterianos empleados

2. MATERIAL

El material requerido para la prctica es el siguiente Mechero Fisher Asa bacteriolgica Cajas de Petri Incubadora Frascos de cultivo en anaerobiosis Micropipeta

3. MTODO

Se procede de la siguiente manera 1. Se enciende el mechero Fisher, el rea de trabajo no debe exceder ms all de los 20 centmetros a partir de la flama. 2. Se esteriliza el asa bacteriolgica mediante calor seco y se enfra dentro del medio de cultivo. 3. Se abre el medio de cultivo que contiene el inculo y se toma una pequea muestra procurando no contaminar el medio. 4. Se procede a inocular la muestra en el sustrato elegido y se sella la caja para evitar contaminacin. 5. Se incuba a 37C +/- 2C durante 24 horas 6. Se aaden los inhibidores mediante una micro-pipeta

4. RESULTADOS

EQUIPO 1
Crecimiento e inhibicin de E.coli bajo condiciones anaerbicas Medio Mc Conkey XLD AVB SB TSA n/a Benzal 1 n/a n/a n/a Benzal 2 n/a n/a n/a Ampicilina 2 cm 3 cm n/a Ceftriaxona 3 cm 3 cm 4 cm

No hubo crecimiento n/a

Observaciones: El Benzal (Cloruro de Benzalconio) no genero ningn halo de inhibicin en el cultivo. Por otro lado la ampicilina y la ceftriaxona generaron un halo de inhibicin promedio de 2.5 cm y 3.3 cm respectivamente. La ceftriaxona es un antibitico de amplio espectro de la clase cefalosporinas mientras que la ampicilina es un derivado semi-sinttico de la penicilina. Ambos antibiticos son beta-lactmicos ( contienen un anillo -lactmico en su estructura molecular) e inhiben la sntesis de petidoglicanos en la pared celular bacteriana. Sin embargo, en el caso de las cefalosporinas de tercera generacin, estas tienen una mayor estabilidad ante las Beta-lactamasas (enzima de resistencia a las penicilinas) y las bacterias anaerobias. Esta es la razn que explica el mayor halo de inhibicin que se presenta con el uso de ceftriaxona.

EQUIPO 2
Medio de cultivo TSA Mac Conkey VB XLD SB Benzal de laboratorio 2cm 2.5cm N/A N/A 1cm Benzal comercial 1.5cm 2.5cm N/A N/A N/A Ceftriaxona 5cm 5cm N/A 3cm N/A Ampicilina 3cm 2.5cm N/A 3cm N/A

*Agar Verde Brillante: Sin Crecimiento

Observaciones: El Benzal (Cloruro de Benzalconio) es un bactericida, inhibidor de actividad viral y tambin funciona como fungicida. Su mecanismo de accin ocurre gracias a la des-naturalizacin de las protenas celulares esenciales y la ruptura de la membrana celular. Este compuesto es txico y corrosivo. Observamos que en ambos casos (Benzal comercial y de laboratorio) el halo de inhibicin promedio es de 1.9 +/- 0.2 cm, por lo que se deduce que ambos poseen la misma eficacia.

EQUIPO 3
Medio de cultivo TSA SB AVB BP XLD Crecimiento Si No Si Si Si

Reactivos e inhibicin Medio de cultivo TSA SB AVB EMB XLD Microdyn no N/A No No No Cloro Si N/A Si Si S Jabn No N/A No No No Etanol Si Si Si Si Si

Longitud del Halo de inhibicin (cm) Medio de cultivo TSA SB AVB EMB XLD Microdyn N/A N/A N/A N/A N/A Cloro 1 N/A 1 2 * Jabn N/A N/A N/A N/A N/A Etanol 0.8 N/A 0.9 0.8 0.6

Observaciones: El Cloro y el etanol son compuestos txicos debido a la des-naturalizacin de las protenas en ambos casos. El cloro es un compuesto altamente reactivo con el agua o compuestos nitrogenados formando cloro-aminas. El etanol por otro lado no es eficaz para la eliminacin de endoesporas y virus sin envoltura, el alcohol tambin disuelve lpidos dentro de su mecanismo de accin, sin embargo la desnaturalizacin requiere de agua por lo cual se eficacia se ve reducida cuando se inocula en forma pura (Tortora et al., 2007) . Esta es la razn por la cual el halo de inhibicin del cloro supera al del etanol en forma pura. Por otro lado vemos la inefectividad del Microdyn y el Jabn, este ltimo, al tener componentes liposolubles provocan que la grasa se disuelva, rompiendo las membranas de las bacterias, sin embargo es evidente que no sucede as. En el caso del Microdyn no est claro su mecanismo de accin puesto que no hay informacin confiable disponible sobre este producto.

EQUIPO 4 (resultados sometidos a Anaerobiosis)

Medio de cultivo EMB TSA AVB XLD SB Crecimiento Si Si Si No No

Inhibicin de acuerdo a los reactivos. Reactivos Medios De cultivo EMB TSA AVB XLD SB No No No No No Si No No No No Si Si Si No No Si Si Si No No Jabn p/ manos Etanol (96%) Cloro Microdin

Halo de inhibicin formado en las placas (mm).

Reactivos Medios de cultivo EMB TSA AVB XLD SB . 8 20 14 9 7 12 8 Jabn p/ manos Etanol (96%) Cloro Microdin

Sin resultados por inhibicin completa en medios XLD y SB Nota: En el medio SB hubo un crecimiento parcial de lo que posiblemente fue Salmonella typhimurium.

Observaciones: En este ensayo puede observarse la eficacia del microdyn, a diferencia del caso anterior. En estos cultivos puede verse que el microdyn forma halos de inhibicin promedio de 0.9 cm (pequeos en comparacin con los que exhiben otro tipo de inhibidores). No queda claro cual es el mecanismo de accin de este compuesto, pues no fue posible ubicar informacin confiable sobre su composicin.

EQUIPO 5
Agar TSA Caractersticas Se sembro E.coli, por estriado masivo y agregamos 50 L de benzal. Se sembro E.coli, por estriado masivo y agregamos 50 L de benzal. Se sembro E.coli, por estriado masivo y agregamos 50 L de benzal. Resultados 24hrs despus de la siembra, el halo de inhibicin fue de 3.5 cm de dimetro 24hrs despus de la siembra, el halo de inhibicin fue de 2.5 cm de dimetro 24hrs despus de la siembra, el halo de inhibicin fue de 2.3 cm de dimetro 24hrs despus de la siembra, percibimos que el medio favoreci la inhibicin del microorganismo, pero no en su totalidad, porque lograron crecer pocas colonias del mismo.

AVB

XLD

SB

Se sembro E.coli, por estriado masivo y agregamos 50 L de benzal.

El Benzal (Cloruro de Benzalconio) es un bactericida, inhibidor de actividad viral y tambin funciona como fungicida. Su mecanismo de accin ocurre gracias a la des-naturalizacin de las protenas celulares esenciales y la ruptura de la membrana celular. Este compuesto es txico y corrosivo. Observamos que en ambos casos (Benzal comercial y de laboratorio) el halo de inhibicin promedio es de 2.7 cm, por lo que se deduce que ambos poseen la misma eficacia.

EQUIPO 6
* Cepa inoculada: Escherichia coli, sembrado masivo, inoculada con 50 microlitros de Benzal #1 (azul) como inhibidor. Agar SB TSA TSA XLD VB Caractersticas Colonias pequeas, de forma puntiforme, color blanco Colonias con formas fusiformes, color crema Colonias amarillentas, de forma fusiforme Colonias blancas, forma circular Colonia de forma puntiforme, de color blanco-rosado Resultados (halo de inhibicin en cm) 3 cm 2.4 cm 4.7 cm 4.3 cm 3.5 cm

Observaciones: El Benzal (Cloruro de Benzalconio) es un bactericida, inhibidor de actividad viral y tambin funciona como fungicida. Su mecanismo de accin ocurre gracias a la des-naturalizacin de las protenas celulares esenciales y la ruptura de la membrana celular. Este compuesto es txico y corrosivo. Observamos que en ambos casos (Benzal comercial y de laboratorio) el halo de inhibicin promedio es de 3.58 +/- 0.2 cm, por lo que se deduce que ambos poseen la misma eficacia.

EQUIPO 7
Medio de cultivo TSA SB AVB BP XLD Crecimiento parcial en el medio Crecimiento inhibido Crecimiento y fermentacin en el medio Sin crecimiento Poco crecimiento y fermentacin

EQUIPO 8
Agar TSA XLD BS BP AVB moderado amarillo Crecimiento Crecimiento bueno Crecimiento bueno Inhibicin parcial Color blanco amarillo verde Contaminacin* Otros

Condiciones de crecimiento: incubada a 37

*posible contaminacin de Staphylococcus epidermis ya que presenta poco crecimiento de colonias, puntiformes de gris a negras y sin halos.

Observaciones: El inserto nos indica que el Agar XLD (XILOSE-LYSINE-DESOXIXOLATE) es un medio selectivo y diferencial conteniendo un extracto de levadura como fuente de nutrientes, e inhibe bacterias gram positivas El inserto nos indica que el Agar BS (SILFITO DE BISMUTO) la peptona el extracto de carne y la dextrosa proporcionan los nutrientes para el crecimiento del microorganismo. Es un medio selectivo y diferencial.

5. REFERENCIAS

Atlas, M. R. y Bartha, R. (2002). Ecologa microbiana y Microbiologa ambiental. 4 ed. Pearson Addison Wesley.

Brock, D. T. y Madigan, T. M. Microbiologa. ed. Prentice Hall.

Madigan, M. T., Martinko, J. M. y Parker, J. (2004). Brock. Biologa de los microorganismos. 10 a ed. Prentice Hall.

Prescott, L. M., Harley, J. P. y Klein, D. A. (2005). Microbiologa. 5a ed. McGraw-Hill Interamericana.

Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case, Introduccin a la microbiologa, 7ma edicin, 2007,