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DESCALCIFICACIN

TECNOLOGIA MEDICA U.V.

Qu descalcificamos?

Tejido seo Muestras dentales Tejidos calcificados

Qu es la descalcificaci !
C" sis#e $%sica&e #e e la 'e&"ci de sales de calci" desde #e(id"s 'ic"s e es#"s c"&)" e #es * +ue s" l"s causa #es de la du'e,a * 'esis#e cia de s#"s- l" +ue i&)ide se' )'"cesad"s c"&" cual+uie' "#'" #e(id" )a'a c"'#e .is#"l/ic".

0id'"1ia)a#i#a
Es el )'i ci)al c"&)" e #e &i e'al de l"s #e(id"s calcificad"s. 2e&"ci &edia #e us" de %cid"s fue'#es #ales c"&" %c 3#'ic" " f'&ic" A/e #es +uela #es 4 EDTA 5 M#"d" elec#'"l3#ic"

Cuidad"s
0id'lisis de %cid"s ucleic"s 6'dida de ac#i7idad e ,i&%#ica Dis&i uci de la i &u "'eac#i7idad Descalcificaci i c"&)le#a Fi(aci )'"l" /ada Fi del )'"ces"

Recomendaciones

Fi(aci &%s la'/a La7ad" )'"l" /ad" 4 89 .'s. Mi 5 Ca&$i" dia'i" de la s"luci C" #'"l )e'&a e #e del )'"ces".

Calcificaciones patolgicas

a'#e'i"

Sarcoma de Ewing

El PAS-diastasa para glucgeno es necesario en los tumores de celular redondas, para distinguir el sarcoma de Ewing (PAS positivos) del neuroblastoma y del linfoma (en general, PAS negativos).

La impregnacin argntica para las fibras reticulares til para distinguir el sarcoma de Ewing del linfoma,

Tejido seo
Mara Eugenia Franco

tipo especializado de tejido conectivo Compuesto por:

Matriz orgnica (35%) Matriz inorgnica (65%)

Matriz orgnica (35%) Fibras de colgeno tipo I(90%) Matriz extracelular de naturaleza glicoproteica que proporcionan flexibilidad y resistencia al tejido

Pequea fraccin de la matriz orgnica del hueso:

MEC

glicosaminoglicanos: glicosaminoglicanos: condroitncondroitn-sulfato + queratnsulfato + cido hialurnico. hialurnico. proteoglicanos de pequeo tamao protenas (no colgenas) exclusivas del hueso: Osteocalcina Osteocalcina (2% de la matriz orgnica) Osteopontina Osteopontina Sialoprotena Sialoprotena sea (BSP).

comportamiento tintorial acidfilo. acidfilo. PAS + y dbil metacromasia

atriz inor!"nica

(65% del peso seco)

Principal elemento calcio, en forma de sales como el fosfato de calcio o hidroxiapatita. Estas sales, se observan al microscopio de luz como finos depsitos cristalinos.(sin teir) #os cristales de hidroxiapatita miden $ nm de espesor % hasta &' nm de lar!o, se depositan entre la matriz or!"nica.

Clulas del hueso Osteoblastos:responsables Osteoblastos:responsables de la formacin de tejido seo nuevo Osteocitos:osteoblastos steocitos:osteoblastos maduros y desarrollan una actividad menor Osteoclastos Osteoclastos: Osteoclastos: encargados de reabsorber o eliminar la materiasea. materiasea.

-ijacin

(ual)uier fijador, condicionado

al

estudio )ue se va%a a realizar Tiempo de fijado, *+ hrs. como m,nimo #avar los tejidos antes de colocarlos en el descalcificador uestras voluminosas se seccionan antes de fijar (se puede usar sierra) Piezas dentarias, se seccionan los "pices % .o se realizan orificios laterales

TECNICAS DE DESCALCIFICACION

Mtodos qumicos Mtodos fsicos: electrolticos ultrasonido Uso del microondas

Descalcificadores
Orgnicos Agentes cidos Inorgnicos

Frmico Actico Ctrico Clorhdrico Ntrico Sulfrico

Agentes quelantes

EDTA Ana Morse

Descalificadores Qumicos cidos


Actan como un exceso de H+ alterando el equilibrio inico de la hidroxiapatita:

Ca1 !"#$%&'!#H%(

medio )cido

1 Ca+(+&"#$*++ H(#

+a extraccin cont,nua de los iones Ca- fosfato e hidroxilo e.ita que la hidroxiapatita alcance el equilibrioproduci/ndose su disolucin0

Descalcificacin por agentes quelantes


Un agente quelante es un componente orgnico que es capaz de unirse a iones metlicos formando as un quelato Los quelatos son componentes muy estables y no se descomponen fcilmente para liberar el ion metlico cido etilendiamintetractico SAL DISODICA EDTA
[CH 2N(CH2COOH) CH2COONa]2

E !A Accin : quelacin de la hidro ia!atita a !H "#$ %rimera& '2 hora& e traccin de ca&i el ()* del calcio#
Se debe usar recipiente de plstico

VENTAJAS de EDTA

+,ita -ormacin de .ur.u/a& de CO2# La di-erencia con lo& de&calci-icadore& 0cido& e& que lo& ione& H1 no /ue2an un rol en la reaccin qu3mica A&e2ura la inte2ridad de la& e&tructura& intracelulare&#

Ana "orse
Es el mejor mtodo para usar en rutina, (con excepciones) Se prepara mezclando cido Frmico al 45% y Citrato de Na al 20% a partes iguales en el momento de usar El cido frmico disuelve el calcio liberndolo y el Citrato acta como quelante capturndolo

Uso del microondas: Acelera Acelera el proceso de desmineralizacin disminuyendo el tiempo en 3 o 4 veces La temperatura debe fijarse en 37 a 42 C Se recomienda el uso de microondas de laboratorio. Precaucin con los vapores txicos que se liberan al calentar el descalcificador

0escalcificacin por ultrasonido


/e basa en el uso de sonicador )ue emite ondas de sonido las )ue destru%en las estructuras como fosfato de calcio, fosfato de ma!nesio % carbonato de calcio

4tili5a corriente elctrica la que acelera el !roce&o de de&calci-icacin de la& &olucione& 0cida&6 7a que lo& ione& de calcio 7 otro& minerale& al &er remo,ido& !or la &olucin de&calci-icadora6 &on de&!la5ado& hacia lo& !olo& de la celda elctrica utili5ada#

Descalcificador electroltico

%ara com!ro.ar el trmino de la de&calci-icacin 8 9ec0nicamente !ro.ando &u dure5a con lo& dedo&6 u&ar una a2u/a 6 .i&tur3 o cualquier elemento cortante

Pruebas radiogrficas.

Prueba qumica: Se basa en que el oxalato de Ca es insoluble en H2O y soluciones acuosas alcalinas Ca2++ C2O42- + H2O CaC2O4. H2O

Se toman 5 ml de descalcificador usado (3 a 12 hrs. de uso) y se agrega hidrxido de amonio (N4OH) concentrado, mezclar. Agregar 5 ml de Oxalato de Amonio (NH4)2C2O4 x H2O acuoso a saturacin , agitar y esperar 15 a 30. Si hay opacidad la descalcificacin est incompleta , si es transparente el proceso de descalcificacin ha terminado Esta tcnica sirve tambin para EDTA

Despus de descalcificar con cidos, se recomienda pasar los cortes por Sulfato de Sodio al 5% para neutralizar !n todos los casos se recomienda la"ar profusamente en a#ua antes de comenzar la inclusi$n

IMPORTANTE: Cuando la muestra incluye tejido seo y tejido tumoral blando, es preciso separar un fragmento de tejido blando y tratarlo sin descalcificacin.

H-E

H-E

VAN GIESON

MASSON

VIMENTINA

ALFAALFA- ACTINA
DESCALCIFICACION con ANA MORSE

VIMENTINA

S-100

DESCALCIFICACION con ACIDO NITRICO

mellas microcalcificaciones

%ara lo& te/ido& que &e cortan &in decalci-icar &e u&a como medio de inclu&in:

Acr3lico :e&ina

9todo de inclu&in !ara corte con na,a/a (;#9# %3a Ca&telli 4# Catlica)
Na,a/a : acero &<!er duro con una cara !lana (ti!o D) alemana 9todo de inclu&in: 9e5cla de metilmetacrilato de&e&ta.ili5ado con una me5cla de NaCl 7 Na OH6 e&ta.ili5ado con Hidroquinona De&hidratacin en Alcohol = Acetona ():()6 > cam.io& (' d3a 7 ?) Im!re2nacin 9etilmetacrilato1 %la&toid N (alemania) @ cam.io& ( ' d3a) %olimeri5ar en e&tu-a a @"A (' d3a !ara otro) (molde -ra&co de !l0&tico6 el que -inalmente &e rom!e 7 queda el molde)

El hueso se estudia sin descalcificar #ara estudiar los efectos #ro$ocados #or el tratamiento con !etraciclina Se #uede calcular la edad con el estudio de los osteones En dientes% Caries de esmalte !raslucide& radicular Interaccin de materiales E!C'''''''''''

!e(idos que se #ueden estudiar sin descalcificar% Cresta ilaca )ie&as dentarias *uesos com#actos E!C

12/06/2013

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Tinciones
;ricrmico de 9a&&on H=+ ;am.in &e !uede e&tudiar &in tincin con !olari5acin

Utilidades
%aciente& con di0li&i& De!&ito de aluminio

sin decalcificar

Hue&o normal &in decalci-icar

90quina !ara te/ido& duro&

PROBLEMAS

La zona de corte en descalcificador o en cido acetilsaliclico (aspirina) y luego se intenta el corte nuevamente CONSEJOS

DATOS UTILES PARA CORTAR HUESO


1. Buena fijacin ( tiempo) con lavado posterior 2. Buena descalcificacin con lavado posterior 3. Cuidar los tiempos de deshidratacin y aclaramiento, aclaramiento, reemplazar el primer xilol por Acetato de Butilo (esto sirve para todas las muestras) 4. Cuidar tiempo de inclusin y temperatura de la parafina 5. Enfriar bien los moldes en el refrigerador 6. Cortar enfriando con hielo (hecho con amonaco al 2%) y estirar en el agua de a 42 C 7. Si el hueso presenta dificultades se puede calentar con el dedo o echarle aliento. 8. ANIMO!! Y si an no se puede , se guarda en el freeser hasta el otro da . EN FIN MAANA SER OTRO DA