IMUNOLOGIA CL CLNICA

RESPOSTA IMUNE DIAGNSTICO concluso dados clnicos, epidemiolgicos e laboratoriais Gerais imunol imunolgicos anlise patolgica (tecidos e rgos) imagem (ultra-sonografia, raio-X, RM e TC) TESTES IMUNOLGICOS Apenas dois elementos (Ag e Ac) Mtodo para visualizao do complexo Ag-Ac
Adelaide J. Vaz ajvaz@usp.br

INATA Mediadores solveis: citocinas e complemento Inflamao Eventos celulares: fagocitose e clulas NK ADAPTATIVA Humoral (Ig/Ac) LB (Pz) Celular (citotoxicidade, hipersensibilidade) LTCD4+, LTCD8+

Caractersticas resposta inespecfica imediata

Caractersticas resposta espec especfica memria imunolgica self x nonself

ANT ANTGENOS
Substncias reconhecidas com estranhas (non-self) pelo organismo imunogenicidade: capacidade de induzir RI especfica antigenicidade: capacidade de interagir com o Ac ou LT

ANT ANTGENOS
NATUREZA QUMICA DOS Ag Inorgnicas (metais)

Determinante antignico: menor poro da

molcula antignica (incluindo o EPTOPO) responsvel pela interao com o stio combinatrio da Ig/Ac ou com receptores de Ag em LT e LB Haptenos No so imungenos, exceto quando acoplados a protenas ou clulas. Exemplo metais e drogas

protenas*
lipdeos carbohidratos cidos nucleicos

CLASSIFICA CLASSIFICAO Natural (bruto) purificado recombinante sint sinttico

Antgenos Recombinantes
Tecnologia de DNA recombinante

Clonagem molecular
plasmdeo

DNA
RESTRIO E LIGAO

obter e combinar genes de variadas fontes clonar e expressar genes em diferentes hospedeiros (bactrias, fungos, vegetais,....) de fcil manuteno e expanso produo de grandes quantidades de protenas recombinantes Finalidades: diagnstica, teraputica e de preveno (vacinas)
GM Cooper.The Cell (2000) DNA cromossomico

Plasmdeo recombinante
TRANSFORMAO (em E. coli) Bactria Geneticamente modificada

Antibitico (seleo de clones)

Clones

Protena Purificar

IMUNOGLOBULINAS
grupo heterogneo de protenas com atividade de Ac (liga-se especificamente ao Ag)
~ 20% das protenas plasmticas Migrao eletrofortica lenta nas zonas e -globulinas 1) 2) 3) 4) 5) 6)

Resposta Imune Humoral - Ac

Neutralizar toxinas Inibe aderncia patgeno Opsonina (fagocitose) para M Fixa Complemento (inflamao) Liga-se a NK Imunocomplexos so retidos em bao e fgado

Resposta Imune Humoral - Ac

IgG (memria ) atravessa a placenta (IgG1, IgG3, IgG4). Fixa complemento. Liga (Fc) a M e NK resposta secundria (memria) IgA (defesa mucosas) dmero elevada concentrao nas secrees, saliva, colostro e leite IgM (fase aguda/recente) - pentmero anticorpo da resposta primria. Fixa complemento IgE (alergia tipo I / anafiltica liga-se a receptores especficos de mastcitos aumentada em alergias do tipo I e parasitoses IgD receptor de Ag nos LB aparece em LB maduros (aps a IgM)

Ig NA INFNCIA Hipogamaglobulinemia transitria da infncia IgG

Perfil Sorolgico na Rubola Congnita

IgG materna 0 6 12 Idade (meses)

Janela imunolgica versus Memria Imunolgica

ANTICORPOS MONOCLONAIS

ANTICORPOS MONOCLONAIS

Testes Imunol Imunolgicos com Monoclonais

MARCADORES IMUNOL IMUNOLGICOS (LABORATORIAIS)

deteco de Ac (circulantes e em lquidos cavitrios) deteco de Ag circulantes
Determinao de protenas (hormnios, drogas, marcadores tumorais)

APLICA APLICAO DOS TESTES IMUNOL IMUNOLGICOS

I Infeces: Diagnstico x status Imune Epidemiologia Imunohematologia, HLA Pesquisa e Dosagem de Protenas plasmticas, Hormnios, Drogas marcadores de Inflamao (protenas de fase aguda) marcadores tumorais Doenas Imunolgicas Alergias, auto-imunidades, imunodeficincias,

avaliao da imunidade celular: imunofenotipagem, blastognese, fagocitose, produo de citocinas

PESQUISA DE ANTICORPOS elucidar processos patol patolgicos diferenciar a fase da doen doena/infec a/infeco diagnosticar doen doena/infec a/infeco selecionar doadores de sangue/tecidos/ de rgos

MTODOS PARA DIAGN DIAGNSTICO IMUNOL IMUNOLGICO

INTERA INTERAO AgAg-Ac in vitro

ka Ag + Ac CARACTERSTICAS
Especificidade: ~ Resposta imune - o stio combinatrio da Ig liga-se ao determinante antignico (eptopo) Reversibilidade: a ligao entre Ag e Ac reversvel (foras no-covalentes) Afinidade: uma interao estvel (afinidade/avidez), intensidade da interao, complementariedade entre eptopo (Ag) e stio combinatrio (Ac).

INTERA INTERAO AgAg-Ac in vitro

especfica, estvel (afinidade), reversvel Formao do Imunocomplexo ka Ag + Ac AgAc TEORIA DA CHAVE-FECHADURA

Ka = [AgAc] / [Ag][Ac] AgAc

imunocomplexo

AFINIDADE > afinidade > complementaridade (nmero de interaes) Avidez: somatria das afinidades (soro policlonal)

IMUNOPRECIPITA IMUNOPRECIPITAO
Quantificam os IC insolveis formados pela interao Ag-Ac

Curva de precipitao (e aglutinao)

excesso de Ac zona de equivalncia excesso de Ag

Ac

Ac

Ac

REAO CRUZADA a interao de um Ac com um Ag (heterlogo) que no aquele que induziu sua formao (homlogo)

IMUNODIFUSO RADIAL SIMPLES

Simples um dos componentes fixados ao suporte Bidimensional radial

IMUNOELETRO FORESE

1965 Mancini: difuso em placa (halo) Concentrao: proporcional rea emprego: quantificao de Ig e protenas (ug/dL)

Emprego 1. Avalia Avaliao (estudo) estudo) de prote protenas 2. Caracteriza Caracterizao de Ig de mielomas

TESTES DE AGLUTINA AGLUTINAO

NEFELOMETRIA e TURBIDIMETRIA: interao Ag-Ac (malha) deteco dos imunocomplexos imunoprecipitao ou aglutinao Sensibilidade - g/dL Desvio da luz laser medida a 70o, Medida da turvao a 280-340nm, ao final de tempo de incubao e branco da amostra. cintica da formao dos imunocomplexos teste para verificar zona de excesso de Ag.
Forma Formao de agregados vsveis. veis. Ig bivalente quanto fun funo de Ac. Ant Antgenos multivalentes mais sensvel que a precipitao (amplificao da reao) Fatores interferentes: Classe de Ig, pH, meio protico e inico tempo, agitao e temperatura

Direta clulas com determinantes antignicos naturais na superfcie Indireta partculas inertes (clulas ou sintticas) adsorvidas com Ag ou Ac

AGLUTINA AGLUTINAO DIRETA

utiliza partculas antignicas naturais na forma ntegra ou fragmentada. emprego: identificao antgenos e anticorpos eritrocitrios sanguneos, sorotipagem de bactrias

AGLUTINA AGLUTINAO INDIRETA

utiliza antgenos solveis adsorvidos na superfcie de partculas inertes

HEMAGLUTINA o) HEMAGLUTINAO (microaglutina (microaglutina o)

MICROAGLUTINA MICROAGLUTINAO INDIRETA

amplamente utilizada em microplacas de fundo em V Dificuldades: reprodutibilidade dos lotes, manual. Menor sensibilidade que EIE

hemcia + acido tnico alterao da carga da membrana adsoro de Ag proticos e glicoproticos

MICROAGLUTINA MICROAGLUTINAO EM GEL

FLOCULA FLOCULAO
VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) RPR (Rapid Plasm Reagin) suporte: cristais de colesterol, carvo Ag: cardiolipina emprego: pesquisa de reaginas

floculao
Ac da amostra

Reao positiva
Visualizar em Microsc Microscpio 10x

Suspenso antignica: cardiolipina emulsionada em cristais colesterol estabilizada em lecitina