Artigo Original

Efeito do Symphytum ofcinale na consolidao de fraturas de rdio e ulna de ratos

Symphytum ofcinale effect on the consolidation of radio and ulna fractures in rats
Fabio Lucas Rodrigues1, Rodrigo Luiz Vetorazzi1, Cleber Furlan1 Resumo
Introduo: o estudo da consolidao ssea e dos diversos fatores capazes de estimular o processo de reparo sseo envolve muitas pesquisas na literatura. Objetivo: testar o efeito do Symphytum ofcinale na consolidao de fraturas de rdio e ulna em ratos. Mtodo: os autores avaliaram 34 ratos da linhagem Wistar, nos quais foi realizada fratura manual dos ossos do antebrao direito sob anestesia. Os ratos foram divididos aleatoriamente em dois grupos. O grupo experimento recebeu duas gotas da substncia Symphytum ofcinale e o grupo controle recebeu duas gotas de soro siolgico 0,9%, administradas em ambos na frequncia de trs vezes ao dia pelo mtodo da gavagem. Aps o sacrifcio, aos 14 e 28 dias de tratamento, foi realizada disseco dos rdios e das ulnas. Os ossos foram radiografados e submetidos leitura da densitometria ptica radiogrca. Resultados: foram observadas diferenas na formao do calo sseo ulnar em relao ao radial, independentemente do grupo estudado na comparao entre o grupo controle e experimento. Concluses: a formao do calo sseo ulnar apresentou maior densidade ssea em relao ao calo radial, independentemente do grupo estudado, e a substncia Symphytum ofcinale, em doses homeopticas, no se mostrou estimulante da consolidao de fraturas em antebraos de ratos da raa Wistar. Palavras-chave: Consolidao da fratura; confrei; ratos; calo sseo.

Abstract
Introduction: there are several studies in medical literature covering the subject of bones consolidation, as well as the several stimulating factors related to it. Objective: to test the effect of Symphytum ofcinale in bone consolidation of radio and ulna fractures in rats. Method: the authors describe a survey conducted over a sample of 34 rats of Wistar lineage, randomly divided in two different groups, on which a manual procedure to cause the fractures in the bones of the right forearm was conducted with anesthesia. The rats of the experimental group were given two drops of a substance known as Symphytum ofcinale and the rats of the control group were given two drops of physiologic saline, 0.9%. For those two groups, the drugs were given three times per day by gavage. After the sacrice of the rats, a series of dissections of the radio and the ulna bones was conducted. All bones were submitted to X-rays and to optical densitometry radiographic devices. Results: a difference in the bone callus formation of ulna was observed when compared to the bone callus formation of radio, regardless of the groups. Conclusions: the bone callus formation of the ulna presented more bone density in relation to radio callus, independently to the studied group and Symphytum ofcinale, in homeopathic doses, did not stimulate the bone fractures consolidation in forearms of Wistar rats lineage. Keywords: Fracture healing; comfrey; rats; bony callus. Recebido: 26/6/2009 Modicado: 26/9/2009 Aprovado: 18/1/2010

Trabalho realizado na Faculdade de Medicina do ABC (FMABC), Santo Andr (SP), Brasil. 1 Disciplina de Ortopedia e Traumatologia da Faculdade de Medicina do ABC (FMABC), Santo Andr (SP), Brasil Endereo para correspondncia: Fbio Lucas Rodrigues Avenida Lauro Gomes, 2000 Vila Sacadura Cabral CEP 09060-870 Santo Andr (SP) E-mail: fabiolucas@gmail.com

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Symphytum ofcinale na consolidao de fraturas

Introduo
A consolidao ssea assunto de grande interesse cientfico. Na prtica mdica, existe um crescente nmero de cirurgias ortopdicas com utilizao de implantes para fixao interna de fraturas, alcanando a marca de dois milhes ao ano nos Estados Unidos .
1

Os ratos foram anestesiados pela injeo intraperitoneal de soluo composta de cetamina, na dose de 40 mg/kg, e de xilazina, na dose de 5 mg/kg de peso corporal, diludas em 1 mL de soluo salina. Aps anestesia adequada, foi provocada, manualmente, por um nico pesquisador, fratura do antebrao direito dos animais, na regio diafisria, utilizando-se trs pontos de apoio. As fraturas no foram imobilizadas e os animais permaneceram sem restries motoras dentro de suas gaiolas. Aps a fratura, os animais foram aleatoriamente divididos em dois grupos: controle e experimento. O grupo controle constituiu-se de 17 ratos, aos quais foram administradas duas gotas de soluo fisiolgica a 0,9%, via oral, pelo mtodo da gavagem, trs vezes ao dia. O grupo experimento foi constitudo por 17 animais, os quais receberam duas gotas de Symphytum officinale na potncia de 6CH, pelo mesmo mtodo e frequncia do grupo anterior. Os ratos foram medicados do dia da fratura at a eutansia. Esse procedimento realizou-se em dois momentos distintos, que subdividiram cada grupo em dois: aps duas semanas do incio do experimento (14 dias), em nove animais de cada grupo e, no final da quarta semana (28 dias), em oito animais, tambm de ambos os grupos. A eutansia dos animais ocorreu com administrao de dose anestsica de barbitrico, finalizando com dose letal de cloreto de potssio. As patas dianteiras direitas foram dissecadas, retirando-se todo invlucro de partes moles do rdio e da ulna. Os antebraos foram submetidos avaliao da densitometria ptica radiogrfica (DOR), e o avaliador no sabia qual grupo estava examinando. Os ossos de cada grupo (controle e experimento, com 14 e 28 dias), j dissecados, foram dispostos em posio anteroposterior em um chassi radiogrfico, ao redor de uma escala de alumnio padro, e numerados na imagem radiogrfica (Figura 1). Esse procedimento foi realizado separadamente para cada grupo, totalizando-se quatro radiografias. Estas foram realizadas no mesmo aparelho, mesma distncia da ampola de raios X (um metro), pelo mesmo tcnico em Radiologia e com a mesma tcnica radiogrfica (42 kv x 1,25 mAs). As radiografias foram digitalizadas e analisadas por software de processamento e anlise de imagem ImageLab. No total, realizaram-se trs anlises do rdio e da ulna separados, e a mdia foi utilizada para obteno dos resultados. Estatisticamente, os valores mdios das leituras foram submetidos ao teste de Mann-Whitney, para comparao entre os dois grupos formados, e ao teste dos Postos Sinalizados de Wilcoxon, para comparao entre os dois momentos de observao. Adotamos nvel de significncia de 5% ( = 0,05), assinalando com asterisco (*) os valores significantes (p < 0,05). Esta pesquisa foi aprovada pela Comisso de tica do Instituto de Cincias Avanadas e Otorrinolaringologia (ICAO) de So Paulo (SP), sob o processo 018/2006.

O modelo experimental em ratos de grande valia para sua realizao no que se refere reprodutibilidade e padronizao da fratura a ser pesquisada2. consenso que vrios fatores atuam no processo de resposta do osso ao trauma, incluindo o uso de frmacos3,4. Os corticosteroides, anticoagulantes, tiouracil e as vitaminas A e D, em altas doses, so destacados como contribuintes para o retardo da consolidao. Esteroides anabolizantes, hialuronidase, sulfato de condroitina, hormnio do crescimento, insulina, calcitonina, hormnios tiroidianos, vitaminas A e D em doses padro3 e medicamentos homeopticos, como o Symphytum officinale, agem estimulando a consolidao de fraturas sseas5-7. A Homeopatia, do grego homeos pathos, que significa semelhante doena, e que foi desenvolvida no sculo 18 pelo mdico alemo Frederico Samuel Hahnemann, fundamenta-se no princpio bsico da Lei dos Semelhantes. Toda substncia capaz de provocar um quadro mrbido pode ser usada como medicamento para tratar um indivduo doente que tenha um quadro semelhante5,7. Portanto, nessas condies, para ter efeito medicamentoso, uma substncia deve ser diluda e dinamizada. Para obteno da dinamizao, normalmente os farmacuticos utilizam, entre outras tcnicas, as chamadas Centesimal Hahnemanniana (CH) e Fluxo Contnuo (FC), que so as mais comuns7. O Symphytum officinale uma planta da famlia Borragincea, popularmente conhecida como Confrei5,6,8, contendo em sua composio altas doses de alcaloides pirrolizidnicos5,8, alm de alantona, tanino e esteroides5. Essa substncia, quando usada na sua forma natural e no diluda, provoca dores sseas do peristeo e das articulaes e retarda a consolidao ssea, aumentando a sensibilidade em relao dor. Por isso, denominada em homeopatia como medicamento especfico ortopdico sendo indicada aps traumatismo e fratura, pois diminui a dor e estimula a osteognese7. A Medicina Veterinria utiliza-se dos mesmos princpios e medicamentos usados em humanos9,10. Efeitos nocivos para os animais, como a hepatotoxicidade, so relatados na literatura apenas quanto ao uso das razes e folhas verdes do Confrei na dieta dos ratos8. Na Alemanha, produtos derivados do Confrei so utilizados desde 1920 para fins medicinais .
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Dessa maneira, o objetivo verificar o efeito estimulante do Symphytum officinale na consolidao ssea e avaliar a evoluo natural da consolidao de fraturas de rdio e ulna em ratos.

Mtodo
Foram utilizados 34 rattus novergicus albinus, da linhagem Wistar, machos, adultos, pesando 274 46 g, mantidos em ambiente controlado, recebendo gua e rao padro ad libitum.

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Rodrigues FL, Vetorazzi RL, Furlan C

Resultados e discusso
Na Tabela I, encontram-se os resultados referentes comparao da mdia da densidade do calo sseo formado no grupo experimento em relao ao controle, em que no se encontra diferena significativa entre esses grupos. Nas Tabelas II e III observam-se as mdias da densidade do calo sseo ulnar e radial, comparadas entre os dois momentos da observao (14 e 28 dias), dos grupos experimento e controle, respectivamente. Em ambos os grupos, observamos maior densidade na ulna com 28 dias, quando comparada com 14 dias, fato que no se repetiu no rdio. O ortopedista depara-se cada vez mais frequentemente, em sua prtica diria, com fraturas consequentes de traumas de alta energia, como automobilsticos e por projtil de arma de fogo. Essas leses tm maior dificuldade de consolidao, devido ao comprometimento vascular dos fragmentos sseos. Pesquisas sobre substncias ou mtodos que estimulem a consolidao so usuais e importantes. Apesar da extensa publicao experimental sobre consolidao das fraturas, no foi encontrada produo intelectual avaliando exclusivamente o uso do Symphytum officinale e sua relao com o estmulo da consolidao das fraturas, embora essa citao seja dada como verdadeira nos livros-texto homeopticos7. Para tal estudo, utilizaram-se ratos Wistar (rattus novergicus albinus), machos, adultos, determinados pela sua grande ocorrncia na literatura2,3,11-15 e pela facilidade de avaliao em quantidade, baixo custo relativo, facilidade no manuseio e possibilidade de simular, em seus ossos, fraturas de ossos humanos .
11

B
Figura 1 (A) Esquema da disposio das peas na avaliao radiogrca; (B) Fotograa da radiograa obtida nos espcimes estudados. Tabela I Comparao dos grupos experimento e controle com o resultado do teste de Mann-Whitney
Varivel r14 u14 r28 u28 Grupo Experimento Controle Experimento Controle Experimento Controle Experimento Controle n 9 9 9 9 7 8 7 8 Mdia Desvio padro Signicncia (p) 2,71 2,54 2,69 2,73 2,43 2,50 2,23 2,09 0,33 0,50 0,25 0,31 0,17 0,28 0,16 0,12 0,565 0,930 0,817 0,183

Embora sejam frequentes os estudos com a utilizao das fraturas nos membros inferiores dos ratos2-4,12-15, preferimos realiz-las no antebrao, fato no encontrado previamente na literatura. O menor apoio desse membro na marcha, teoricamente, em caso de fratura, resulta em diminuio da dor e da deformidade. Outra vantagem a possibilidade de avaliar a consolidao de dois ossos longos num mesmo experimento. A fratura fechada do rdio e da ulna pela tcnica manual dos trs pontos de apoio foi escolhida devido fcil realizao, reprodutibilidade e pela obteno de trao transverso. A fratura produzida pelo mtodo invasivo (osteotomia cruenta) tem complicaes relatadas na literatura: aumento do risco de infeco, deiscncia na sutura e maior ndice de leso em tecidos moles2,3,11. Optou-se pela no fixao das fraturas com fio de Kirschner, baseando-se na ocorrncia de diversas complicaes, como infeco, mortes per-operatrias, cominuio da fratura na tentativa de passagem do fio, migrao do fio e influncia do material de sntese na formao do calo2,11-14. A estabilizao das fraturas por mtodos no invasivos, como gesso ou bandagens, tambm no foi realizada devido ocorrncia de sndrome compartimental e destruio da imobilizao pelos prprios animais
2,12,13

r14: rdio aps 14 dias; r28: rdio aps 28 dias; u14: ulna aps 14 dias; u28: ulna aps 28 dias; n: nmero de animais; p: signicncia.

Tabela II Grupo Experimento com o resultado do teste dos postos sinalizados de Wilcoxon
Par de variveis r14 r28 u14 u28 Mdia 2,71 2,43 2,76 2,23 n 7 7 7 7 Desvio padro 0,34 0,17 0,23 0,16 Signicncia (p) 0,176 0,018*

r14: rdio aps 14 dias; r28: rdio aps 28 dias; u14: ulna aps14 dias; u28: ulna aps 28 dias; n: nmero de animais; p: signicncia.

Tabela III Grupo controle com o resultado do teste dos postos sinalizados de Wilcoxon
Par de variveis r14 r28 u14 u28 Mdia 2,48 2,50 2,74 2,09 n 8 8 8 8 Desvio padro 0,50 0,28 0,33 0,12 Signicncia (p) 0,779 0,012*

. A ampla descrio de modelos que no empregam imobi-

lizao e a observao feita por diversos pesquisadores de que a con-

r14: rdio aps 14 dias; r28: rdio aps 28 dias; u14: ulna aps 14 dias; u28: ulna aps 28 dias; n: nmero de animais; p: signicncia.

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solidao ssea obtida sem uso de qualquer estabilizao, abonam a opo dos autores pelo tratamento supracitado ram baseadas em dados da literatura .
5 2,14-16

dos livros-texto de que a filosofia homeoptica melhora a dor e estimula a consolidao em fraturas sseas. Em relao verificao de possveis diferenas entre os dois momentos da observao (14 e 28 dias), constatamos significncia estatstica (p < 0,05) na avaliao da densidade do calo sseo ulnar aos 28 dias, tanto no grupo controle quanto no experimento, quando comparados aos valores encontrados aos 14 dias. A mesma avaliao foi realizada no rdio, porm no encontramos diferena estatisticamente significante (Tabelas II e III) que mostre a tendncia desse osso evoluir para pseudartrose. Assim, conclumos que a formao do calo sseo ulnar apresenta maior densidade ssea na evoluo da consolidao diferente do rdio, que no evoluiu, independentemente do grupo estudado e que a substncia Symphytum officinale, em doses homeopticas, no se mostrou estimulante da consolidao de fraturas em antebraos de ratos da raa Wistar.

A potncia da substncia, a dose administrada e a frequncia foA densitometria ptica um dos mtodos utilizados para medir a densidade mineral dos ossos, por meio de imagens radiogrficas digitalizadas, comparando os tons de cinza dos calos formados com os tons de uma escala de alumnio, fornecendo a medida em milmetros de alumnio (mmAl), alm de apresentar alta sensibilidade, reprodutibilidade e baixo custo
17,18

. Utilizamos essa tcnica por ser objetiva para a obteno

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dos resultados, diferindo de outros estudos que empregam metodologia subjetiva, como avaliao visual de radiografias . Desconsideramos duas amostras do grupo controle com 28 dias de seguimento, devido sobreposio das extremidades fraturadas do rdio que poderiam levar a um erro de leitura de densitometria ptica. O resultado estatstico da DOR nos grupos controle e experimento apresentaram diferenas no significantes quanto densidade do calo sseo formado, demonstrando que a substncia pesquisada no estimula a consolidao das fraturas nos antebraos dos ratos (TabelaI). Acreditamos que novos estudos com medicamentos homeopticos devam ser realizados, com intuito de comprovar a impresso clnica e

Agradecimentos
Agradecemos ao professor Doutor Carlo Milani e Doutora Caterina Muremoto pelo apoio realizao desta pesquisa.

Referncias
1. Darouiche RO. Treatment of infections associated with surgical implants. N Engl J Med. 2004;350(14):1422-9. Castro PCF, Hoshino A, Brito RB, Dias Jnior LB, Brito JAF, Barros RSM et al. Estudo do processo de consolidao ssea em ratos tratados com acetaminofen: avaliaes radiogrca e histolgica. Rev. bras. ortop. 2005;40(10):614-20. Giordano M, Tamanini A, Giordano-Neto V, Apfel MIR, Elias N, Graa R et al. Inuncia da enoxaparina na consolidao das fraturas: estudo experimental em ratos. Rev. bras. ortop. 1999;34(3):208-13. Beck A, Krischak G, Sorg T, Augat P, Farker K, Merkel U et al. Inuence of diclofenac (group of nonsteroidal anti-inammatory drugs) on fracture healing. Arch Orthop Trauma Surg. 2003;123(7):327-32. Balducci-Roslindo E, Silvrio KG, Malagoli DM. Processo de reparo em feridas de extrao dentria em camundongos tratados com o complexo Symphytum ofcinale e Calendula ofcinalis. Rev Odontol Univ So Paulo. 1999;13(2):181-7. Koll R, Buhr M, Dieter R, Pabst H, Predel HG, Petrowicz O et al. Efcacy and tolerance of a comfrey root extract (Extr. Rad. Symphyti) in the treatment of ankle distorsions: results of a multicenter, randomized, placebo-controlled, double-blind study. Phytomedicine. 2004;11(6):470-7. Cairo N. Guia de medicina homeoptica. 22a ed. Teixeira; So Paulo: 1986. Hirono I, Mori H, Haga M. Carcinogenic activity of Symphytum ofcinale. J. Natl Cancer Inst. 1978;61(3):865-9. Wolff HG. Tratando o gato pela homeopatia. So Paulo: Andrei;1986. 11. Jackson RW, Reed CA, Israel JA, Abou-Keer FK, Garside H. Production of a standard experimental fracture. Can J Surg. 1970;13(4):415-20. 12. Camargo-Jnior JNJ. Estudo experimental comparativo da morfologia e da dinmica da populao celular de reparao de fraturas de ossos longos tratadas com e sem osteossntese intramedular. Tese (Doutorado) USP, So Paulo: 1972. 13. Utvg SE, Grundnes O, Rindal DB, Reikers O. Inuence of extensive muscle injury on fracture healing in rat tibia. J Orthop Trauma. 2003;17(6):430-5. 14. Guarniero R, Cinagava MY, Santana PJ, Batista MA, Oliveira LAA, Rodrigues CJ et al. Inuncia do componente proteico na consolidao de fraturas: trabalho experimental em ratos. Acta ortop. bras. 2003;11(4);206-10. 15. Giordano V, Knackfuss IG, Gomes RC, Giordano M, Mendona RG, Coutynho F. Inuncia do laser de baixa energia no processo de consolidao de fratura de tbia: estudo experimental em ratos. Rev. bras ortop. 2001; 36(5):174-8. 16. Oztuna V, Ersz G, Ayan I, Eskandari MM, Uuz K, Kuyurtar F. Head injuryassociated bone fractures induce bacterial translocation: an experimental study. J Orthop Trauma. 2004;18(2):92-5. 17. Muramoto C. Estabelecimento de valores de densidade mineral ssea (DMO) das regies metasria e diasria do rdio em ces da raa Poodle por meio da densitometria ptica radiogrca. Mestrado (Dissertao) Universidade de So Paulo, So Paulo, 2003. 18. Talbott SM, Cifuentes M, Dunn MG, Shapses SA. Energy restriction reduces bone density and biomechanical properties in aged female rats. J Nutr. 2001;131(9):2382-7.

2.

3.

4.

5.

6.

7. 8.

9.

10. Wolff HG. Tratando o co pela homeopatia. So Paulo: Andrei; 1986.

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