Anotadas Biologia Molecular e Celular 2009-2010

Bibliografia: Essential Cell Biology e The Cell

Por: Gangue da Linha Ana Vagos Mata Ana Ferreira Lana Pedro Cmara Pestana

Janeiro de 2010

Prefcio

No princpio do ano quando nos foi dito que as aulas de BMC eram as nicas tericas a que valeria a pena ir, pensmos em anotar as aulas, e aqui esto as anotadas de todas as aulas de BMC, excepto as de Biomolculas, comuns Bioqumica.

importante revelar que fazer anotadas de BMC um passatempo nerd muito comum dos alunos de Medicina. Tem uma longa tradio e vem j dos tempos da velha Escola Hipocrtica, onde provavelmente um antepassado da professora Carmo (Carmutus), ainda mais alto do que ela, ensinava a magia da Biologia da Clula.

Estes apontamentos combinam todos os temas abordados na aula, com a matria existente no nosso livro da disciplina. No entanto, visto termos sido s 3 a anotar, tm algumas gralhas e incorreces que devem ser analisadas com esprito crtico. Assim, estando estas anotadas muito longe de serem a bblia simplificada de BMC, podero dar bastante jeito para o vosso estudo enquanto complemento, ou em casos de desenrasque, substituto ao livro. Fica a promessa de que no fim do ano iremos corrigir as gralhas e erros com mais detalhe (agora impossvel com o pouco tempo que dispomos).

Porque as dedicatrias se tornaram moda, gostaramos de dedicar esta obra imperfeita e lanada na forma de Sebenta pressa, ao Deus grego Baco, aquele que provavelmente vai zelar por ns nas Olimpadas da Medicina.

*Ah! E menina dos olhos do Joo Gramaa, ou para os mais monrquicos El Rey D. Juan Carlos I de Odivelas, Antnio para os amigos, porque ele j merece ser Feliz!

Aula 1

1- As molculas da clula
(Teoria dada em parceria com a cadeira de Bioqumica)

2- Genes, engenharia Gentica e medicamentos recombinantes O que um gene?

Estrutura/ Poro de DNA que codifica informao que vai ser traduzida em protenas, que iro desempenhar diversas funes no nosso organismo. RNA - Existem dois tipo de RNA: Mensageiro e de Transferncia. Cada um desses desempenha um importante papel na sntese proteica que s acontece graas a estruturas chamadas de ribossomas. *O RNA que traduzido directamente para as protenas o mRNA. O que uma doena Gentica? uma doena causada por uma alterao na informao contida no gene (Alterao/ Mutao - na base azotada, que altera o nucletido inteiro, ou ento parte do nucletido mantendo-se

inalterveis outros elementos constituintes do mesmo). Ex: Trissomia 21, leucemia, anemia falciforme, hemofilia, etc. H doenas genticas causadas por: - Alteraes nas sequncias de genes. - Alteraes nos cromossomas (ex trissomia 21- no h alterao na sequncia dos genes, mas sim nos cromossomas, neste caso existe um cromossoma a mais) O Que uma doena hereditria? - uma doena que se pode identificar atravs de histria clnica familiar. - Tem sempre de causa gentica - Cancro uma doena gentica de causa NO hereditria

O nico DNA que o indivduo adulto transmite descendncia o da linha germinal (clulas que vo originar o vulo e os espermatozides). Se ocorrer uma mutao nessas clulas, as clulas do indivduo filho iram consequentemente sofrer essa mesma mutao. Clula somtica Clula que no pertence linha germinal, quando sofre mutao, esta no transmitida descendncia (esta mais frequente cancro) * SIDA no hereditria mas sim transmitvel descendncia * H predisposio gentica para o cancro Doena de Gaucher Doena hereditria gentica Gene mutado glucocerebrosidase (inexistncia ou disfuncionalidade na enzima que degrada o glucocerebrosido e seus componentes, que neste caso um glicolpido). molcula composta por acares e por lpidos que existe na nossa clula, mais precisamente, na sua membrana.
* Glicolpido uma

Esta doena provocada pela inactivao da protena glucocerebrosidase.

LER CAPTULO 11 MEMBRANE STRUCTURE Estrutura Membranar: Membranas so das estruturas mais plsticas no nosso organismo. Autofagia o sistema de reciclagem das clulas. Quando este sistema de reciclagem falha a membrana deixa de ser degradada, passando-se a acumular a membrana velha nas clulas. O tratamento para esta falha no sistema de reciclagem passa por injectar a enzima que est em falta (a que vai degradar a membrana velha) Em termos prticos, a terapia gnica no conseguiu dar frutos, mas conseguiu fazer um by-pass, administrando aos doentes a enzima/molcula que est em falta.

Engenharia Gentica e DNA Surge como opo sintetize artificial de protenas. Em termos genricos, consiste: 1. Em cortar determinado gene do DNA humano que codifique a protena que queremos produzir. 2. Colar esse gene nas bactrias. 3. Multiplic-las de forma a transformarem-se em autnticas fbricas da protena que queremos produzir, podendo existir o risco de esta no ser perfeitamente igual protena original, existindo sempre o perigo de rejeio LER CAPTULO 5 Um pouco de histria: 1. Em 1943 descoberto o DNA enquanto material gentico 2. Fred Griffith, 1920 Verificou que havia 2 tipos de steptocoens (Um mau e um bom)

Situao experimental que o levou a essa concluso: - Se ele destrusse as clulas infectadas estas j no provocavam doena. - Se juntasse clulas mortas infectadas com clulas vivas no infectadas= encontrava ento uma nova estirpe (tornava-as patognicas). Tinha ento de descobrir o que nas clulas mortas as levou a infectar as clulas vivas? Qual a molcula capaz de transmitir informao hereditria?
Chegou-se assim descoberta do DNA (material gentico)

3. Watson e Crick = 1 modelo DNA 4. 1972 So descobertas as enzimas de restrio e a sua capacidade de cortar o DNA em zonas especificas.

Aula 2
Protena polmero de aminocidos Enzimas de restrio So enzimas que reconhecem e cortam determinadas sequncias de uma molcula estranha. Porque que h bactrias que podem resistir a ser transformadas por enzimas de restrio? Todas as bactrias possuem um sistema imunitrio, que por sua vez contm enzimas de restrio. As bactrias possuem tambm ligases, destacando-se entre elas a DNA ligase. Por esta razo o genoma da bactria est metilado, ou seja, protegido das enzimas de restrio * Cada enzima de restrio, restringe uma sequncia especfica. * Enzima de restrio quebra pontes fosfodister. Engenharia Gentica Exemplo mais comum: Eco RI: G/AATTC CTTAA/G G/ + CTTAA AATTC /G

Estas bases desemparelhadas so termodinamicamente pouco estveis encontrando-se os grupos qumicos procura do seu parceiro 1- Usa-se esta enzima para cortar molculas Humanas e molculas de bactria. 2- Deixam-se ambas as molculas prximas, de modo a ligarem-se por pontes de Hidrognio. 3- Insere-se DNA ligase. 4- Tem-se assim a molcula recombinante. Bactrias: Possuem apenas um cromossoma e plasmdeos (molculas circulares de DNA). Etapas da tcnica DNA recombinante: 1- Cortamos os plasmdeo e o DNA Humano com a mesma enzima de restrio. 2- Misturamo-los, e adicionamos-lhes DNA ligase (Adicionamos mais DNA humano que plasmdeos para garantir a ligao plasmdeo - DNA humano). 3- Forma-se o plasmdeo recombinante. 4- Introduzem-se o plasmdeos nas bactrias previamente tratadas com Clcio (Favorece a entrada de DNA na clula, j que transforma a membrana celular, tornando-a mais instvel).

5- Seleco das bactrias transformadas (com plasmdeo) e funcionais, por um antibitico (nos plasmdeos est presente um gene que confere resistncia a um antibitico especifico). Ampf - gene resistente ampicilina Ori origem da clula determinante de replicao Cultivar em meio Antibitico: * Seleccionam-se bactrias geneticamente iguais (clone) que derivam da mesma clula Bactrias sem plasmdeo morrem. Morrem todas as bactrias sem plasmdeo ainda que em segundas divises. Pode haver bactrias transformadas com plasmdeo (sem ser recombinante). Para se confirmar se as bactrias tm ou no plasmdeo recombinante, selecciona-se aleatoriamente uma colnia, e retiram-se dessa colnia bactrias. Reproduzem-nas em meio aquoso, e em seguida removem-se os respectivos plasmdeos para anlise. Separando-os por tamanhos (maiores recombinantes, menores normais) com recurso electroforese. Electroforese Separao de molculas por aplicao de um campo elctrico, as molculas vo-se deslocar do plo negativo, para o positivo a velocidades diferentes devido sua carga e tamanho. * DNA carregado negativamente devido aos grupos fosfatos. Assim basta corar as molculas de DNA e submete-las a um campo elctrico e analisamos o seu deslocamento. Esquema: Plasmdeo transcrito em mRNA Encontra principio de gene afasta cadeias de DNA, usando uma como molde Leva nucletidos do RNA a produzir a cadeia complementar 5-3, enquanto que cadeia molde antiparalela vai de 3-5 Promotor: sequncia de DNA que o RNA polimerase reconhece (Por encaixe molecular) +1 Denominao atribuda ao primeiro nucletido a ser transcrito.

-35 Polimerase encaixa no promotor - Decide onde e em que sentido comea a transcrio.

Aula 3
Como que o DNA humano transcrito a mRNA das bactrias? 1- Afastamento das cadeias de DNA 2- RNA polimerase escolhe uma das duas cadeias de DNA, baseada no promotor do gene (Para assim sintetizar a cadeia de RNA). * No est definido qual das cadeias serve de molde. 3- RNA polimerase tende a encontrar o promotor associado ao gene, e que vai ditar onde e em que sentido comea a transcrio. 4- A RNA polimerase vai ligar-se ento preferencialmente cadeia codificante, ficando centrada perpendicularmente mesma, bloqueando assim os nucletidos dessa cadeia, impedindo a sua transcrio (embebida pelo RNA polimerase a template fica no canal entre as subunidades do ribossoma e usada para sintetizar DNA. Genes Regra geral, so lidos apenas num sentido Excepo: Alguns genes so lidos nos dois sentidos (sentido inverso) Diferenas entre RNA polimerase dos Eucariticos e RNA polimerase Procariota As Protenas qus e associam RNA polimerase necessitam de factores de transio. Apenas reconhece o promotor eucariota. Apenas reconhece promotor procariota

Tcnicas usadas na recombinao gentica: -Usar promotor de um gene de bactria que inserimos num plasmdeo bacteriano. -A Regio a cortar no plasmdeo depende de onde se vai localizar o promotor

Explicao mais detalhada de algumas variaes na sntese proteica: -Extremidade 5 (ao 1 nucletido mRNA, junta-se uma guanina metilada) d-se a adio de um capuz (guanina metilada). -Extremidade 3 d-se a adio de resduos repetidos de Adenina (150-250) poli-A-tail * Esta adio contribui para a estabilidade da molcula. - Remoo dos intres do mRNA. Gene No so sequencias continuas na molcula de DNA, so um conjunto de intres e exes.

* Quanto mais pontes de Hidrognio houver na cadeia codificante, mais embebida ela estar.

* Existem agora no nosso DNA mais intres que exes Gene humano da Glucocerebrosidase: Recombinao gentica: 1- Purificao do RNA da glucocerebrosidase a partir duma clula humana. 2- Transcriptase reversa do mRNA maturado em cDNA (DNA funcional sem intres).

Aula 4
Ribossoma: -Comea a ler num stio especfico. -L um codo e vai buscar o respectivo aminocido. -Possui formas de determinar o que um codo quadro de leitura (Onde esse codo comea e onde se vai ligar) * O Ribossoma utiliza um sinal para ler o mRNA Funcionamento do Ribossoma: As duas unidades do ribossoma no esto sempre juntas A modificao na ext. 5 (cap-metilado) apenas reconhecida pela pequena subunidade do ribossoma. Iniciador tRNA Liga-se pequena subunidade do ribossoma por complementaridade fsica. (Impedindo deste modo a interaco com a subunidade maior do ribossoma, recorrendo-se para isso aos Factores.) J ligado, o ribossoma vai deslocar-se at encontrar um codo de iniciao complementar ao seu anti-codoQuebrando-se neste ponto o impedimento de ligao entre as subunidades do ribossoma. Os aminocidos prximos do ribossoma vo ser progressivamente ligados peptidicamente (1st step) e deslocando-se medida que novos aminocidos se vo ligando. A protena vai sendo sintetizada desde a ligao do ribossoma ao codo de iniciao AUG Ligam-se aminocidos entre si Chegando-se ao codo de finalizao (atrai a protena que faz que a sntese proteica termine), acaba a sntese proteica. * No Confundir codo finalizao com 3 Ribossomas procariotas: -Mais pequenos (70s unidade de sedimentao). -Sintetizam menos protenas. Ribossomas eucariotas: -Maiores e mais densos (80s). -Sintetizam mais protenas.

Os antibiticos servem para inibir selectivamente os ribossomas procariotas.

Ribossome blindingsites 5

AUG Protena

AUG Protena

AUG Protena

-No existe capuz de guanina metilada. -Bactrias usam sequncias parecidas com o promotor para indicar onde o ribossoma se deve ligar. - necessrio, fornecermos ns o sinal ao ribossoma procariota para iniciar a traduo de um RNA eucariota. Esquema: Promotor Procariota / Sequncia de DNA humano Vai ser transcrito pelo ribossoma. Existem poli-ribossomas quando os ribossomas esto associados s membranas do reticulo endoplasmtico Forma-se o R.E.R As clulas eucariotas possuem uma grande quantidade de R.E.R com membranas e ribossomas * O conjunto de protenas sintetizadas no polissoma fica no citosol. O que define para onde se vo encaminhar as protenas produzidas? Algumas protenas comeam a ser sintetizado por um ribossoma fora do reticulo endoplasmtico recebendo ento um sinal que ordena que a sua sntese seja feita dentro do R.E.R. (Lmen) Ou seja: As protenas solveis no citosol transportam um sinal (sequncia de aminocidos reconhecida pela partcula de reconhecimento do sinal) que vai bloquear o ribossoma. S o deixando retomar a traduo quando se libertar a partcula de reconhecimento do sinal, o que acontece quando esta se liga ao receptor do reticulo endoplasmtico, soltando-se assim o ribossoma para o R.E, ficando a protena prxima de um canal dentro do retculo. A partir deste ponto as protenas passam a ter dois destinos possveis, consoante os processos que sofrerem, podendo tornar-se ser enviadas para o exterior da clula, ou ento passarem a fazer parte da membrana celular, ou seja passam a ser transmembranares.

Protenas Transmembranares:

Algumas protenas possuem regies homofbicas que permitem o enrolamento em hlice ou folha , o que as vai translocar para o interior do R.E, mais precisamente para a sua membrana Seguem depois para o C. Golgi sempre transmembranarmente acabando por fim na membrana celular. Protenas em soluo no lmen que vo seguir para o exterior da clula:

Protena dentro do lmen membranas do C. Golgi tem tendncia para se fecharem sobre si prprias num meio aquoso as protenas so encaminhadas por vesculas at ao exterior da clula.

Aula 5 Protenas secretadas pela clula (vo para o exterior da clula): Exemplo: Eritropoetina estimula o fabrico de mais eritrcitos (funo de regulao)

Protenas sintetizadas associadas ao retculo C. Golgi Lisossoma Membrana Celular Protenas R.E.R: -Protenas secreo ex: Insulina que permite entrada de glicse -Protenas da membrana celular (sempre transmembranares) -Protenas dentro dos lisossomas digesto celular (possuem enzimas que degradam/reciclam todos os componente de uma clula (hidroliticos)) Superfcie do Reticulo Endoplasmtico onde se soltam as vesculas, onde nova membrana formada (sntese de membrana pelas protenas do R.E.R) Quando o nmero de vesculas transportando protenas que se vo fundir com a membrana celular (exocitose) maior, a sua superfcie tambm aumenta. Quando a membrana celular se envagina e envia algo para o interior da clula estamos perante um processo de endocitose, onde graas a uma protena auxiliar (Claterina) forma-se uma malha que puxa a membrana para o interior da clula. A Endocitose um processo complexo que se pode dividir em algumas etapas que visam segmentar e reciclar as molculas que vm do exterior, em molculas teis do interesse da clula. 1- Fuso do Endossoma 2- Digesto intracelular nos lisossomas por enzimas digestivas que provem de vesculas do aparelho de Golgi direccionadas. Principio Geral: Clula envia protenas para todos os stios: * As Protenas transmembranares tm como funo regular a exportao e importao de protenas -Membrana alvo reconhecida pela protena em trs etapas: 1- Adeso, 2Dockling (Acopolar) e 3- Fuso Depois dentro do reticulo ocorre a adio de acar s protenas (glicosilar protenas)

Exemplo concreto de disfunes nesta funo: Os eritrcitos tem tempo mdio de vida de 20 dias, sendo 90% removidos por macrfagos e 10% hemolisam em circulao. R.E so produzidos Eritrcitos que so maturados no c. Golgi Enviados atravs de vesculas para o exterior da clula. Bao: - um labirinto de capilares, onde os glbulos vermelhos andam devagarinho, sendo mais facilmente apanhados pelos macrfagos. Doena de Gaucher: Falta ou deficincia na enzima de Glucocerebrosidase Glico-portena lisossomal Os Glicolpidos distribuem-se assimetricamente e de uma forma no regular. O que vai resultar: Numa alterao ao nvel dos lisossomas, que vo ficar: -Com fragmentos de membrana no degradveis. -Maior volume. Os Macrfagos ficam pior pois no conseguem reciclar a membrana dos lisossomas. Emitindo assim os macrfagos certos sinais, como que a avisar que algo no se processa da maneira correcta inflamao aumento do bao e fgado, onde se encontram os macrfagos.

Aula 6 Genoma humano: -Tem 3x109 pares de bases - 25000 Genes poucos em relao quantidade de protenas. Percentagem de DNA nos exes = 1,5% Genes = Intres + Exes Dois tipos de Transposes: Mais de 20% ocupado por intres.

Retrotransposes:

Sem intres. Os Genes muitas vezes no so funcionais

A enzima transcriptase reversa no faz cpias perfeitas das molculas, ocorrendo com alguma frequncia mutaes, o que vai estar na origem de muitas doenas genticas, como por exemplo a Hemofilia e a Distrofia Muscular de Duchene

Hemofilia A e B: Alterao provocada pelo retrotransposo durante a transcriptase reversa que alterou o factor VIII, um dos factores essenciais para a coagulao do sangue. Mutao: Defeito de funo ainda que compatvel com a vida. 200 mil anos apareceram primeiros homens em frica. Quanto mais afastados esto os exes, mais fcil troc-los. Portanto os intres favorecem a troca de exes. Tipos de mutao: -Mutao com um gene -Mutao na regio regulamentar -Duplicao do gene Confere vantagem pois garante a sequncia original e uma 2 que pode ser alvo de experincias -Eliminao de um gene -Mistura de Exes troca de exes entre cadeias de genes diferentes -Transferncia horizontal -Crossing-over Recombinao de DNA mas desta vez no genoma.

Polimorfismo de um nico nucletido: Varia ao longo do genoma em determinadas regies. SNPs no provocam a doena mas alguns podem causar susceptibilidade a determinada doena ou a modificar a resposta a medicamentos.

Aula 7 LER CAPTULO 9 1- Ao comparar o genoma de duas pessoas encontra-se cerca de 0,1% de diferenas neste. Os SNPs (Single Nucleotide Polimorphism-ocorre quando o genoma ou sequencias de nucletidos conhecidas diferem em apenas um nico nucletido entre organismos da mesma espcie ou cromossomas de um mesmo indivduo) no provocam a doena, mas alguns podem causar susceptibilidade a determinadas doenas ou por exemplo modificar a resposta do indivduo a determinado medicamento. 2- Esto em curso projectos para que se possa sequenciar diferentes genomas. Tal poder ser vantajoso uma vez que poderemos correlacionar as alteraes no genoma dos diferetes indivduos e o seu percurso de sade. Este servio actualmente oferecido por vrias clnicas, existindo guidelines clnicas para que este possa ser LER CAPTULO 5 1. O genoma humano est contido no ncleo; a molcula de DNA apresenta cerca de 2m de comprimento e est contida num espao de aproximadamente 5 a 8 Micrmetros de dimetro (tamanho aproximado do ncleo da clula). Existe uma desproporo entre a quantidade linear de Dna e o espao onde este est contido- comparao entre uma bola de futebol (ncleo) e o comprimento da molcula (distncia da Terra Lua). Soluo: enrolamento do DNA (cromatina e cromossomas); consiste basicamente na associao do DNA a protenas. Esta condensao do DNA vai ser possvel em dois estadios diferentes: um na interfase e um outro na diviso celular (metafase/anafase), nestas ltimas nas quais a molcula se encontra no seu mais elevado grau de compactao. A molcula de DNA vo-se enrolar volta de histonas (dois tipos: so as molculas a amarelo na figura, envolta das quais o DNA se enrola formando os

nucleossomas e um outro tipo, as H1, que vm de fora e dobram o DNA em volta do nucleossoma). A- Molcula na presena de H1- o DNA enrola-se em volta dos nucleossomas B- 1 nvel de enrolamento- vse os nucleossomas, a molcula no est na presena de H1 (Ver imagem 5.25 do livro)Representa vrios tipos de compactao, descreveno o aumento progressivo do nvel de enrolamento da molcula de DNA. (Ver imagem 5.15 do livro)- Na interfase o genoma vai estar dividido em vrias molculas individuais de DNA (cromossomas-tm extremidades livres, ao contrrio do genoma bacteriano que consiste numa nica molcula de DNA circular - sem extremidades livres). Na diviso celular vai ocorrer cpia de cada uma dessas molculas, que ficam unidas pelo centrmero. Na interfase, os ncleos observados podem ou no ter a quantidade normal de DNA ou o seu dobro-depende se ja ocorreu replicao ou no)- conclui-se que os ncleos em interfase no so todos iguais em termos da quantidade de DNA que possuem. Na diviso celular a clula est preocupada em separar as molculas duplicadas e dividi-las igualmente pelas duas clulas-filhas. Essa separao dse por meio dos microtbulos (com origem nos centrmeros-isto nas clulas animais), formando ncleos clulas-filha com igual quantidade de DNA, caso no ocorra nenhum erro- os centrmeros so onde os microtbulos se vo ligar para que ocorra a separao das molculas de DNA.

(ver imagem 5.16)- Os cromossomas bacterianos no possuem telmeros uma vez que a sua molcula de DNA circular. Caritipo- cromossomas ordenados- para a que olhmos para ver se h alterao/mutao; possibilidade de corar os diferentes cromossomas- coram de acordo com a afinidade do corante para o cromossoma e seu tamanho. O caritipo dos Hmanos constitudo por 22 pares de cromossomas autossmicos e um par de cromossomas sexuais (1par- 1 vem cromossoma vem da me e outro vem do pai-cromossomas homlogos). Exemplo de doenas com origem no processo de separao, que no ocorreu de forma equitativa para as clulas-filhaTrissomia 21 (ocorre no 21 par). Identificao dos cromossomas num caritipo pelo modo como estes coram e seu tamanho no permite uma fcil diferenciao entre os diferentes pares de cromossomas homlogos. (ver imaem 5.10 e 4.24) Podemos ento arranjar marcas para demarcar regies com sequncias conhecidas dos cromossomas Hibridao In-Situ (vamos fazer molculas hbridas molculas de DNA recombinante). Para hibridar 2 molculas diferentes de DNA... 1- aquecemos para desnaturar a cadeia (quebra das pontes de Hidrognio que ligam a dupla cadeia de DNA entre si) 2-Tiramos proveito de sequncias de DNA qu conhecemos de determinado cromossoma, ligando essa sequncia conhecida a uma molcula com capacidade de fluorescncia- flurocromo (ou seja, se he incidirmosuma determinada radiao ela emite uma outra radiao). Diferentes sequncias vo-se ligar a diferentes flurocromos que emitem em diferentes radiaes.

Aula 8
Captulo 6

BLOCO IV- A ORIGEM DA VARIAO GENTICA

Preservar informao gentica define a espcieEquilbrio Gerar variao que nos

permite evoluir Causas dessas variaes: Por cada vez que a clula se divide necessrio que haja uma replicao do material gentico inevitavelmente, pelo processo no ser 100% eficiente, alguns erros sero introduzidos. Mecanismos de Replicao do DNA

Na replicao do DNA, as pontes de hidrognio que ligam nucletidos complementares das duas cadeias antiparalelas vo ser quebradas (quebra das pontes de hidrognio ocorre no por aumento de temperatura, j que a temperatura da clula mantm-se), por enzimascadeias separam-se.

Replicao DNA polimerase Transcrio RNA polimerase A DNA polimerase vai reconhecer umas sequncias especficas de nucletidos origens de replicao afastando ento as duas cadeias de DNA que vo servir de templates (quebra das pontes de hidrognio), criando-se assim espao para que sejam sintetizadas as novas cadeias de DNA.

Clula Procaritica

Clula Eucaritica Tem vrias origens de replicao (molcula muito grande) A molcula assim replicada ao mesmo tempo em vrios pontos (torna mais rpida a replicao!)

Tem um nico cromossoma, circular Tem s uma origem de replicao

Fotografia por microscpio electrnico pe em evidncia vrias origens de replicao

Vo existir vrias origens de replicao ao longo da cadeia, a partir das quais o DNA vai ser sintetizado nos dois sentidos (na verdade sempre de 53 mas pelas setas somos iludidos do contrrio cadeias novas vo-se ligar) Forquilha de replicaozona entre a cadeia (hlice ) antiga (que ainda est ligada) e as cadeias separadas (2 novas cadeias) a replicar (cadeias template).
Ligao fosfodister que dita que o crescimento das cadeias tem de se dar de 5para 3

NOTA: a Replicao no ocorre ao mesmo tempo em todo o cromossomavai depender do grau de compactao do cromossoma/ DNA A replicao, ou seja, sntese de novas cadeias d-se em sentidos opostos, pois so antipararelas, no entanto, como o crescimento de cada cadeia de DNA nova a partir da cadeia molde se d de 5para 3, (devido ao facto do grupo fosfato do novo nucletido se ir ligar ao grupo OH do nucletido que j l se encontra, por meio da energia proveniente da desfosforilao de um Desoxirribonuclesido trifosfato), a cadeia lagging tem de ir crescendo aos poucos, medida que a cadeia leading vai abrindo caminho.

Designa-se de leading strand (cadeia lder). a cadeia nova que cresce de forma Contnua. Criando assim espao para que a outra cadeia filha seja tambm sintetizada Empurra zona da forquilha para a frente

Cadeia no-lder (lagging strand- cadeia que fica espera) medida que a outra cadeia avana, esta vai tendo espao para poder crescer, crescendo assim de uma forma Descontnua.

...Mas na lagging strand, a DNA polimerase no consegue por ela prpria sintetizar a cadeia nova a partir de uma cadeia molde. DNA Primase (RNA polimerase) esta enzima vai sintetizar 10 nucletidos (primers de RNA) a partir da cadeia molde. A DNA polimerase na lagging strand precisa sempre de se inserir num hbrido para iniciar a replicao. O primer da lagging strand inicia-se no 1 nucletido junto da forquilha. Leading strand empurra forquilha, definindo qual o 1 nucletido livre.

A replicao um processo que envolve muito mais protenas para alm da DNA polimerase (ler paginas 208..) Sliding Camp ajuda a DNA polimerase, mantendo-a ligada ao DNA (permite uma maior eficincia do processo de replicao). Clamp Loader fixa a Sliding Camp DNA Polimerase (esta protena pode activar-se ou desactivar-se mediante as circunstncias). DNA helicase enzima que separa a dupla hlice, libertando as duas cadeias uma da outra.

Blind proteinscobrem a cadeia molde da lagging strand, espera que venha o primer, se ligue e se inicie a replicao. Single-strand binding proteins ligam-se s cadeias de DNA expostas pela helicase prevenindo o rearranjo em dupla hlice das mesma

Aula 9

BLOCO IV- A ORIGEM DA VARIAO GENTICA

Variao genticaDiversidadeMelhor adaptaoEvoluo Mas a evoluo gentica nem sempre benfica... A sntese/replicao de DNA ocorre de 5para 3 como as cadeias so antiparalelas, a sntese das cadeias-filhas vai ocorrer em sentidos opostos nas duas novas cadeias. Na replicao: A Cadeia lagging template com DNA polimerase espera enquanto a cadeia lder (leading strand template) vai sendo replicada. medida que a cadeia sintetizada a partir da molde da cadeia lder, vai crescendo, vai abrindo espao permitindo o posterior crescimento da cadeia lagging. Durante o tempo que a cadeia lagging template teve esperar para ser replicada para que a cadeia lder abrisse caminho; Surgiram ento nesta cadeia mais nucletidos desemparelhados. Vo ser reconhecidos pela RNA polimerase (DNA Primase), que vai fabricar primers Os Primers vo ser reconhecidos pela DNA polimerase, que vai sintetizar mais nucletidos contribuindo assim para a formao do fragmento de Okazaki (cadeia lagging). Mas, ento o que acontece no fim da cadeia? (quando por exemplo no temos nucletidos desemparelhados suficientas para que na lagging strand se ligue um primer e que haja sntese de nucletidos complementares desses e assim a nova cadeia sintetizada fique menor que a sua template, neste caso a lagging strand) Como j foi dito, na cadeia lagging template nem sempre h espao para que se ligue um primer e sejam sintetizados novos nucletidos. Ento, quando DNA polimerase chega aos telmeros (sequncias de DNA no final dos cromossomas) vai haver perda de nucletidos da cadeia lagging template, j que no vo haver nucletidos complementares na nova cadeia sintetizada. NOTA: Sempre que uma clula se divide perde informao gentica, na ponta (telmeros) dos seus cromossomas.

Como que a nossa evoluo contornou este problema?

A Natureza evoluiu de maneira a que se vamos perder nucletidos, ento vamos colocar sequncias repetidas a mais nos telmeros. Para que, deste modo, no se perca informao importante, sem se alterar assim as caractersticas dos cromossomas. Funo da telomerase Enzima transporta associada a si um molde de RNA (enzima capaz de sintetizar uma nova cadeia, traz um primer ligado a si) Ou seja, aos telmeros dos cromossomas, -lhes adicionado iguais sequncias, cpias do mesmo molde (sequncia do primer que a telomerase carrega consigo)

A enzima telomerase vai ento acrescentar sequncias repetidas de material gentico no codificante, indo posteriormente a DNA polimerase vai replicar tudo isso. Assim a informao que se perde em cada replicao ser regra geral, informao no codificante. A cadeia lder ir depois tambm perder nucletidos para ficar do mesmo tamanho que a cadeia lagging, sendo o objectivo que essas perdas sejam de sequncias no importantes. No entanto, as telomerases no estao sempre activas nas nossas clulas. Estas s esto na sua fase activa no embrio e na linha germinal (as clulas da linha germinal esto constantemente a dividir-se, dando origem aos progenitores dos ocitos e dos espermatozides); esto inactivas nas clulas somticas. Comparando o comprimento dos telmeros de um indivduo novo e de um indivduo idoso, os do indivduo idoso sero mais curtos dos que os do outro - as clulas do indivduo novo tm ainda um maior nmero de possibilidade de se dividir comparando com as clulas do indivduo adulto- senescncia celular (quanto mais idade, menos vezes a clula se divide). Os telmeros, ao atingirem um tamanho crticoas clulas param/deixam de se dividir esta a razo pela qual, por exemplo, as clulas, em cultura, da pele de um recm-

nascido (fibroblasto) se dividem cerca de 80-90 vezes, enquanto as de um indivduo com 70 anos, dividem-se cerca de 20 a 30 vezes. No caso do cancro, as clulas cancergenas tm de ter telomerase activa para se conseguirem dividir/proliferar descontroladamenteestas clulas reactivam a telomerase. J as bactrias resolveram este problema da perda de informao durante a replicao de DNA possuindo o seu material gentico numa forma circular, sem ser necessrio a adio de telomerase. Repara co de DNA durante a replicao: Proofreading: Os poucos erros cometidos pela polimerase so prejudiciais uma vez que sempre que a clula se dividir, e houver ento replicao de DNA, esses erros sero perpetuados. (ver tabela 6.1 do livro) Como se pode observar na figura ao lado, a DNA polimerase abraa as duas cadeias (a molde e a que est a ser sintetizada) Como que se descobre se h nucletidos que esto mal emparelhados? medida a distncia entre os nucletidos - Distncia certa, encaixe perfeito - Distncia errada (nucletidos ligeiramente afastados), encaixe imperfeitoe a, a polimerase manda fora o nucletido que no encaixou perfeitamente

Em sntese: O sistema previne erros da polimerasereparao de erros do DNAComo? Polimerase mede as distncias entre os nucletidos nas duplas cadeiasquando a distncia maior, o nucletido no encaixa perfeitamente. A a DNA polimerase (nuclease-tipo) junta novos nucletidos e verifica se nucletido novo perfeito para o encaixe validao (Proofreading) Mismatch:

Mas por muitos poucos erros que a DNA polimerase faa, eles perpetuariam-se para as prximas geraes. Ento, o DNA possui ainda outro mecanismo que repara erros no DNA durante a replicao: o Mecanismo Mismatch Vai medir a distncia entre os nucletidos que esto nas cadeias de dupla hlice Vai haver ento um grupo de protenas que capaz de remover a cadeia de DNA sintetizada onde ocorreu este erro (DNA mismatch- remove cerca de 100 nucletidosregio cortada para refazer a cadeia bem de novo), e sintetiza essa parte da cadeia novamente, agora sem erros. Esta sntese feita por uma outra DNA polimerase.

Sistema de reparao do DNA Actua nos erros que podem ocorrer no DNA por diversos factores, como por exemplo radiao ionizante, poluentes, etc, ao longo da vida de uma clula. Envolve trs passos: 1-Exciso; 2 Nova sntese; 3ligao Existem ainda mecanismos para reparar quebras em simultneo nas duas cadeias de DNA: - Nonhomologous end-joining to repair double-strand breaks. - Homologous Recombination

Aula 10

A. Variaes Genticas B. Vrus A. Variaes Genticas

Ao longo da vida de uma clula, o seu genoma sofre alteraes devido a, essencialmente, trs diferentes factores: 1- Alteraes qumicas espontneas 2- Erros na replicao 3- Alteraes qumicas no DNA introduzidas por exposio a factores do meio ambiente 1. Todas as molculas de DNA tm uma instabilidade prpria, inerente sua constituio qumica. Como consequncia, podem surgir alteraes nas caractersticas do DNA.

Como se v na figura acima, podem desaparecer algumas ligaes covalentes, perdendo-se a base do nucletido. Neste caso especfico, uma guanina perde a sua base azotada. Sabe-se tambm que tal processo pode ocorrer em adeninas.

Noutros casos tambm se pode perder um grupo do nucletido. Um desses processos toma o nome de desaminao, exemplificado na imagem acima, em que uma citosina desaminada perde o seu grupo amina por ruptura de ligaes, passando de

citosina a uracilo o que, do ponto de vista gentico, poder ter algumas implicaes funcionais dado que so dois nucletidos totalmente diferentes.

2. Os erros na replicao podem advir de erros no corrigidos nem pela DNA polimerase (proofreading) nem pelo DNA Mismatch Repair. Assim, em casos de modificaes no corrigidas, figura abaixo, no momento da replicao surgiro duas novas duplas cadeias, sendo que uma possuir a mutao e a outra no. Neste caso especfico vemos uma citosina desaminada (que originou um uracilo) levando a que uma das novas duplas cadeias contenha a mutao relativa desaminao da citosina, emparelhando-se ainda com o nucletido correspondente, sendo este diferente do que figurava na cadeia no mutada. Podemos ver que o par de bases correcto seria C-G, enquanto que a cadeia mutada possui U-A.

3. Um dos factores mutagnicos conhecidos a Radiao Ultra Violeta. A incidncia desta radiao sobre as clulas da pele, por exemplo, faz com que se estabeleam ligaes covalentes entre timinas adjacentes. (figura abaixo)

Sabe-se que o fumo do cigarro tambm altera ligaes qumicas das molculas e entre molculas, sendo portanto um agente mutagnico.

Porm, se estamos to expostos a tantos factores adversos, se ocorrem tantos erros nas ligaes e estruturas das biomolculas constituintes do nosso organismo, por que razo no sofremos mais cancros? Porque temos um eficaz sistema de reparao constitudo por um conjunto de protenas. Este sistema detecta falhas de complementaridade causadas pelos trs tpicos do incio. Esta falha de complementaridade, na prtica, traduz-se num aumento da distncia entre os nucletidos mal emparelhados. Todavia, de vez em quando algumas alteraes escapam ao sistema, no sendo ento corrigidas e dando origem a mutaes permanentes, problemticas ou no. O mais frequente que as alteraes que o genoma sofre no surtam qualquer efeito negativo no funcionamento do organismo, j que a maioria do nosso genoma no responsvel pela codificao de protenas. Assim, uma mutao que seja problemtica aquela que incide sobre uma sequncia codificante. Resta s referir que existem mutaes em sequncias codificantes que no representam qualquer problemtica funcional, sendo contudo uma situao muito mais rara, visto dever-se somente a algumas propriedades do cdigo gentico: redundncia e pouca especificidade do ltimo nucletido de um codo (matria de 11 ano). H contudo casos de mutaes que induzem doenas (neste caso, alterao de um nucletido traduz-se em anemia falsiforme):

Sabe-se ainda que doenas genticas, associadas a erros que escapam reparao e que esto nas clulas da linha germinal, so passadas descendncia. Tomam ento a classificao de doenas hereditrias. As alteraes graves nas clulas somticas (todas as clulas menos as sexuais) no so transmitidas descendncia, sendo que essas alteraes se traduzem quase sempre no surgimento de cancro. Sabemos que a incidncia de cancro aumenta com a idade devido a:

- quanto mais vezes as clulas se replicam, maior a probabilidade de ocorrerem erros na replicao - estarmos mais tempo expostos a factores mutagnicos Estes dois parmetros levam a uma acumulao sucessiva de erros, alteraes. O aumento da incidncia de cancro com o aumento da idade traduzido por uma curva deste tipo:

Por que razo a curva exponencial? Porque as clulas cancergenas progridem e multiplicam-se no de uma forma controlada como as clulas no cncergenas, mas sim de uma forma exponencial. Para que uma clula passe a ser cancergena tem que atingir o chamado limite crtico: momento a partir do qual foram acumuladas as mutaes suficientes para que uma clula normal adquira caractersticas prprias de um cancro, entre elas a sua multiplicao descontrolada. Caso existam mutaes no gene que codifica o sistema de DNA Repair (proofreading + mismatch) aumentada a probabilidade de se fixarem mutaes no genoma erros que surgiram e no foram reparados atingindo-se mais facilmente o limite crtico e, portanto, aumentando a probabilidade de incidncia de cancro. Se tal mutao ocorrer numa clula da linha germinativa o descendente ter uma taxa de mutaes superior de um indivduo normal e, assim, uma maior probabilidade de sofrer cancro. (caso de cancro hereditrio)

B.Vrus (caso especfico do vrus HIV)

As protenas da superfcie da membrana conferem especificidade ao vrus. As protenas intracelulares so a Transcriptase Reversa e uma Protease. Esta ltima indispensvel fase final da formao de um novo vrus. Todas as restantes protenas de que o vrus necessita para a sua proliferao vai busc-las clula hospedeira, razo pela qual o vrus precisa de um hospedeiro para sobreviver. A medicina tem caminhado no sentido de evitar infeces virais. J se conceberam alguns inibidores: - capazes de esconder as protenas da superfcie do vrus, impedindo-o de ser reconhecido pela clula hospedeira - capazes de inibir a fuso do vrus com a membrana da clula hospedeira - inibidores da Transcriptase Reversa - inibidores da Protease (a que torna os vrus virulentos, pois intervm na sua maturao)

Exemplo especfico de um inibidor da proliferao do vrus HIV: AZT (anlogo da timina, no sendo 100% igual)

A alterao (N3 em vez de OH) vai impedir ou travar a elongao de uma cadeia replicada ou transcrita, j que no possvel estabelecer-se uma ligao entre a extremidade N3 e o nucletido seguinte. Contudo, a introduo do AZT pode afectar o funcionamento das outras clulas saudveis do organismo. Apesar disso, ao contrrio da T. Reversa que parece preferir o AZT timina a DNA polimerase no se deixa enganar pelo AZT.

Assim trava-se a proliferao da infeco, j que no se forma cDNA.

Mutabilidade dos Vrus Ao contrrio da DNA polimerase, que evoluiu no sentido de no cometer erros na replicao (um erro em cada 107 nucletidos transcritos), a T. Reversa evoluiu no sentido oposto: um erro em cada 105 nucletidos transcritos. Genoma do HIV: 104 nucletidos HIV replica-se 109 a 1010 vezes por dia. Ou seja, todos os nucletidos do genoma podem ser mutados cerca de 104 vezes por dia. esta caracterstica que confere uma grande mutabilidade aos vrus, sendo tambm ela que resulta no acumular de mutaes que lhes permitem resistir aos factores adversos do exterior.

Aula 11

A. Alteraes no genoma B. Leses nas duplas cadeias e respectiva reparao

A. Alteraes no genoma
Como j foi dito anteriormente, as cpias feitas pela Transcriptase Reversa tm muito mais erros que as copias feitas pela DNA polimerase. Quais as consequncias das mutaes nos vrus? As mutaes no geral do origem a organismos viveis e a organismos no viveis. Como os vrus tm um genoma muito compacto ou minimalista, como dizem os apontamentos do Pedro, o seu genoma codifica essencialmente as protenas indispensveis sua sobrevivncia. portanto um genoma onde abundam substancialmente as regies codificantes, ou seja, associadas produo de protenas. Por esta razo, as inmeras mutaes que o genoma dos vrus sofre tm como consequncia o surgimento de muitos vrus no viveis que acabam por morrer e nunca proliferar. Para contrabalanar esta perda enorme, os vrus multiplicam-se imenso para que, por oposio aos muitos vrus que no so viveis, surjam uns, ainda que poucos, capazes de proliferar. Por oposio, como as nossas clulas no se dividem muito ns no nos podemos dar ao luxo de sofrer tantas mutaes.

No meio das muitas mutaes que os vrus sofrem, muito provvel que surjam mutaes que conferem resistncia a alguns medicamentos (ateno que a probabilidade de essas mutaes ocorrerem no aumenta nem diminui na presena do dito medicamento, puro acaso. A presena do medicamento s influencia a seleco positiva dos vrus resistentes, bem como a seleco negativa dos vrus no resistentes). Por esta razo muito frequente que hoje em dia se usem cocktails de drogas no tratamento de infeces virais, j que muito menos provvel que surja uma variante do vrus resistente a todas as drogas simultaneamente. Porm, uma maior virulncia no tem que estar associada unicamente resistncia a determinado medicamento: caso uma pessoa no esteja a ser medicada e caso continue infectada, isso significa que o vrus em questo est mais virulento, j que tem resistido aco do sistema imunitrio.

Sabe-se ainda que alguns metabolitos celulares, como o oxignio reactivo, so produtos qumicos que podem atacar o nosso DNA. (por isso que h quem tome os anti-oxidantes).

Esta frase introduz o tema que se segue:

B. Leses nas duplas cadeias e respectiva reparao

As leses ou quebras nas duplas cadeias de DNA so particularmente perigosas porque no deixam qualquer poro de template intacta para que possa ocorrer uma correcta reparao. Como se se deixassem duas cadeias por reparar o risco de fragmentao de cromossomas seria altssimo, existem (pelo menos) dois tipos de reparao que podem entrar em aco numa situao deste tipo.

Reparao Rpida Consiste na simples unio das duas cadeias, novamente. Porm, o corte provocado pela leso representa um ponto de entrada para nucleases, o que resulta na eliminao e perda de certas quantidades de material gentico (deleces). Assim, quando as duas cadeias de DNA voltam a ser unidas, no ter sido respeitada a fidelidade da informao gentica previamente contida nessa cadeia. Assim se v na imagem abaixo. ESSENTIAL 6-27

Recombinao Homloga ou Crossing-over Este processo consiste na troca de material gentico entre cromossomas homlogos (cromossomas que codificam as mesmas caractersticas tendo contudo provenincias diferentes: materna e paterna). Como o nosso genoma apresenta muitas sequncias repetidas ao longo de todos os nossos cromossomas, grande parte do nosso genoma homlogo entre si, pelo que possvel recorrer recombinao homloga para a reparao de leses nas duplas cadeias. Este processo est representado na imagem seguinte:

Essencialmente, aps a leso na dupla cadeia, umas nucleases encarregam-se da digesto das extremidades do corte de cada uma das cadeias simples.

Com o auxlio de enzimas, uma das cadeias simples invade um par de homlogos formando pares de bases com a sua cadeia complementar. criado um branch point, local onde uma das cadeias quebradas se cruza com a cadeia molde sua homloga. A cadeia de DNA quebrada reparada pela repair DNA polimerase, usando o critrio de complementaridade de bases. Enquanto decorre a elongao, o branch point migra ao longo da cadeia. Por fim, a sntese de novo DNA continua, terminando na ligao das duas cadeias quebradas formando uma dupla cadeia intacta, deixando tambm intacta a cadeia que lhe serviu de molde. Atravs deste processo no h risco de perda de informao gentica!

Porm, o crossing-over tambm pode estar na origem de erros que levam ao aparecimento de doenas genticas. (relembrar a imagem do caritipo humano onde havia um cromossoma que tinha um bocado a mais, pertencente a um outro que estava notoriamente pequeno demais!)

Aula 12

Imunologia
A. B. C. D.
As imunoglobulinas Paradoxo de Landsteiner e Teoria da Seleco Clonal Como que se atinge tamanha diversidade? Caso Clnico

A. Imunoglobulinas
Os milhes de anticorpos que possumos diferem muito entre si. Possuem uma regio constante (base do Y) e duas regies variveis (braos do Y).

So estas regies variveis que conferem especificidade aos anticorpos, ou seja, permitem que certo anticorpo se associe a certo antignio, diminuindo os efeitos negativos desses agentes estranhos.

Estas regies variveis perduram em anticorpos que, depois da infeco, se mantm no nosso organismo. Isto possibilita a to importante memria imunitria que, por sua vez, permite que se d uma resposta imunitria mais rpida e eficiente no momento do contacto com um antignio ao qual o organismo j reagira.

Uma molcula de regio varivel tem sempre duas cadeias, sendo que um anticorpo tem sempre duas regies variveis. Receptores de clulas T Regies variveis: alfa e beta ou gama e delta

Imunoglobulinas

Receptores de clulas B

Regies variveis: cadeia pesada e cadeia leve

Os anticorpos tanto podem circular livremente no plasma, depois de segregados, como podem estar associados s membranas dos linfcitos T e B, tal como est esquematizado acima, funcionando como receptores de antignios.

B. Paradoxo de Landsteiner e Teoria da Seleco Clonal

A partir de experincias em coelhos, Landsteiner apercebeu-se de uma caracterstica muito importante do Sistema Imunitrio (S.I.). Ao sujeitar os coelhos ao contacto com molculas sintetizadas em laboratrio, que no existissem na natureza, podiam observar-se reaces imunolgicas. Ou seja, o coelho reagia a todos e quaisquer agentes estranhos, ainda que nunca tivesse estado na sua presena anteriormente.

Estendendo estes conhecimentos aos restantes seres vivos (mamferos, se no me engano) pde concluir-se que o S.I., ao contrrio de muitos outros sistemas funcionais, tem um domnio de competncia molecular universal, completo, open-ended. O S.I., na sua condio natural, reage perante tudo o que estranho e que entra em contacto com o organismo.

Agora torna-se necessrio enquadrar a dinmica do nosso S.I. numa perspectiva Darwinista:

Quando somos infectados por um novo vrus ou por uma nova bactria, por exemplo, no so produzidos anticorpos de raiz contra essa ameaa. Pelo contrrio, so seleccionados os anticorpos j existentes que se revelam capazes de combater os efeitos nefastos do antignio. Ou seja, so seleccionados positivamente os anticorpos aptos para lutar contra a nova ameaa e seleccionados negativamente aqueles que, naquele momento, so inteis.

Com isto se conclui que o S.I. beneficia de uma grande diversidade!

Nota: nunca associar a dinmica do sistema imunitrio a uma perspectiva Lamarckista. O nosso S.I. no se adapta s ameaas do exterior que entram em contacto com o organismo. (lei do uso e do desuso)

Nota-se ento que toda esta diversidade de anticorpos, capazes de desempenhar uma resposta imunitria pronta e eficiente, consiste numa estratgia de sobrevivncia. A maioria dos agentes patognicos multiplica-se a uma velocidade incrvel, podendo atingir ciclos de duplicao de 20 minutos. Caso fosse preciso, para cada nova ameaa, desencadear um processo de produo de anticorpos adequados desde a sua raiz, essa seria a causa da nossa extino.

Assim, temos que a Teoria da Seleco Clonal aquela que diz que, a cada momento, temos linfcitos (portadores de anticorpos, os receptores membranares) no nosso organismo a serem seleccionados e consequentemente activados, consoante contribuam ou no para a defesa do organismo perante a ameaa sentida nesse momento.

A diversidade no finalista como soluo do desconhecido.

C. Como que se atinge tamanha diversidade?

O nosso genoma composto por menos de 105 e so necessrios 1012 diferentes tipos de receptores de clulas B e T. (VRMs: variable region molecules, ou seja, protenas de regies variveis) O splicing permite muitas combinaes, mas ainda assim no suficiente para explicar uma diversidade 7 potncias acima da ordem de grandeza do nosso genoma.

Como que to poucos genes produzem tantas protenas de regies variveis?

Os nossos genes que codificam clulas B e T so capazes de pegar em fragmentos de genes e recombin-los.

A totalidade da mensagem gentica est fragmentada e pode ser recombinada, dando origem a 106 possibilidades de variaes.

A isto chama-se recombinao somtica, capacidade de clulas no sexuais procederem a uma recombinao gentica que est na origem de uma grande quantidade de possveis variaes, no envolvendo os processos comuns de recombinao: meiose, crossing over.
RAG RAG

A, B, C, D, E e F so fragmentos de genes.

Gene propriamente dito, depois de recombinao somtica.

Tal como esta recombinao poderiam ter surgido muitas outras. No esquecer que este exemplo tem seis fragmentos; no nosso genoma encontramos muitos muitos mais. Desta forma, nos seis diferentes locus onde h recombinao somtica (cadeia pesada, cadeia leve, cadeia alfa, gama, beta e delta) o genoma de uma clula B ou T modificado, ficando diferente de qualquer outra clula B ou T.

Depois deste corte e costura os genes ficam funcionais. Para que tal acontea, unem-se trs diferentes tipos de fragmentos que formam uma unidade denominada VDJ. Os fragmentos que a constituem so um promotor, um peptide leader e um enhancer.

Mas como que garantimos que este rearranjo s ocorre nestas clulas e no atinge as restantes clulas do nosso organismo?

Este rearranjo especfico mediado por umas certas enzimas, umas endonucleases, de nome RAG-1 e RAG-2, que esto presentes apenas nas clulas B e T. Sabendo ento que cada um dos fragmentos possui um local de restrio para uma enzima, torna-se fcil compreender que eles sero ento clivados e posteriormente unidos de forma a criar o gene funcional.

Os fragmentos de DNA que no so usados para a compilao de certo gene so rejeitados e excludos sob a forma de uma molcula circular. Esta molcula, por se assemelhar a um plasmdeo (corpo estranho num organismo eucariota) prontamente degradada. Por esta razo, a recombinao de cada clula irreversvel.

Nota: Ns recebemos, dos nossos progenitores, os fragmentos gnicos ainda por recombinar. A recombinao d-se depois ao nvel do novo indivduo.

Contudo, tnhamos visto que a recombinao somtica responsvel por apenas 10 6 das variaes necessrias. O resto das variaes necessrias (para perfazer as 1012 variaes) deve-se incluso de nucletidos entre os fragmentos de DNA, entre os fragmentos VDJ. Entre as zonas de juno dos fragmentos so colocados nucletidos, aleatoriamente, atravs da interveno da enzima TdT.

VDJ

nucletidos

VDJ

TdT

TdT

Este processo aumenta imenso a diversidade e variedade de regies variveis produzidas, aumentando tambm a especificidade das mesmas.

Para que o gene seja funcional, convm que os nucletidos adicionados se arranjem em grupos de trs, pois de outro modo no podero ser lidos correctamente nem sintetizam protenas funcionais.

Porm, convm ter em mente que o mais frequente no nosso sistema imunitrio a morte das clulas B e T, por no se adaptarem ou por no preencherem os requisitos necessrios. Resta dizer que apenas 5% das clulas produzidas tm as condies necessrias para sobreviverem e serem teis ao organismo. Isto d-nos uma pequena ideia da quantidade de clulas B e T que, no total, so criadas.

Sistematizando,

Origem da Diversidade: 1. Diversidade de combinao (1 protena codificada por 5 segmentos gnicos) 2. Diversidade de combinao (10-100 verses de cada gene) 3. Diversidade de junes (adio de nucletidos s zonas de juno)

D. Caso Clnico

Um beb de um ms de idade, filho de primos direitos ou seja, com maior propenso para homozigotias recessivas responsveis por patologias surge com inflamaes na pele, conjuntivite, pus nos olhos e orelhas.

Depois de feitos os exames necessrias, apura-se que est infectado com Estafilococus e Cndida albicans. Atravs de anlises ao sangue observam-se valores muito baixos de certas imunoglobulinas (IgG), bem como apenas 6% de Linfcitos, sendo que se detectou uma total ausncia de clulas B.

Pde concluir-se que se tratava de um problema imunolgico.

Testou-se a eficincia da enzima RAG e apenas 20% da eficcia pde ser verificada. Concluiuse ento que o beb teria uma mutao no gene codificante da enzima RAG, o que teria como consequncia a sntese de uma enzima no funcional. Por esta razo no eram feitos os rearranjos entre fragmentos, no sendo produzidos linfcitos activos.

Para solucionar o problema, o beb necessitou se um transplante de medula ssea, j que a partir da medula se obtm todos os precursores hematopoiticos.

Nota: a partir de uma clula estaminal hematopoitica da medula gera-se um Sistema Imunitrio completo, tal como est representado abaixo.

Aula 13

Desenvolvimento de Clulas B
Como que as clulas B se diferenciam? Iniciam a sua vida como precursores hematopoiticos, seguindo-se depois uma quantidade de processos que as fazem tomar a classificao de clulas B.

As clulas B esto directamente ligadas a um tipo de imunidade especfica, a imunidade mediada por anticorpos. Estas clulas, depois de activadas, diferenciam-se e tornam-se plasmcitos, capazes de produzir anticorpos especficos para certo antignio.

Sabemos ento que a alterao do reportrio da protena, a expresso gnica que passa pelas alteraes irreversveis no fentipo celular, ou seja, o aparecimento de marcadores de superfcie, fazem de uma clula B uma clula totalmente diferente de qualquer outra.

Esses receptores de superfcie fazem a transmisso de informao at ao ncleo da clula, sendo portanto factores de transcrio, os quais desempenham um papel decisivo nas cascadas de fosforilao que permitem a transduo de sinais.

Falando agora mais concretamente da maturao das clulas B:

Toda a maturao decorre na medula. Como que a clula B produz os anticorpos?

O estado natural da clula B (e da clula T) o repouso. Os receptores da clula B ficam superfcie e espera da chegada de antignios.

No momento em que h uma alterao conformacional da molcula, por ligao do antignio ao receptor, inicia-se uma cascata de fosforilao e transmitida a informao de activao da clula. Temos ento uma clula B activada.

Neste momento o mRNA da protena que codifica os receptores de superfcie deixa de ter o endereo para a membrana passando a ter o endereo para o exterior. A clula B transforma-se numa fbrica de produo de anticorpos.

Mas como que geramos as clulas B? Como j foi dito antes, a partir de precursores hematopoiticos. Esses precursores vo sofrendo diferentes processos de diferenciao, agrupando-se em quatro diferentes fases: - f. hematopoitica - f. pr-B - f. pr-B -B

Fase hematopoitica A clula ainda pluripontente, no sendo portanto diferenciada nem possuindo ainda rearranjos VDJ.

Fase pr-B: Iniciaram-se os rearranjos na cadeia pesada. Falta-lhe adquirir um receptor completo (cadeia pesada + cadeia leve).

Fase pr-B: Acabam os rearranjos na cadeia pesada. A protena surge superfcie da clula. (ter em ateno que a imunoglobulina que acaba de surgir superfcie da clula s tem uma cadeia e no duas; assunto tratado mais frente)

Fase B: Do-se os rearranjos na cadeia leve e d-se por finda a diferenciao da clula B antes da activao. (depois da activao ocorrem outros processos de diferenciao)

Ento se na fase pr-B a protena vem para a superfcie, apesar de estar numa forma instvel, como que a natureza resolve este problema?

VprB 5

Temos genes no nosso genoma que codificam as protenas VprB e 5, as quais tm afinidade para dimerizar com a cadeia pesada, conferindo estabilidade estrutural ao receptor membranar. Assim ele pode ser enviado para a membrana e aguardar a chegada da cadeia leve. este receptor que envia sinais ao ncleo da clula e que a faz progredir na sua evoluo e especializao.

Mas por que razo que, evolutivamente, se preferiu que a clula tenha primeiro uma molcula incompleta na sua superfcie e no logo as duas perfeitamente estveis? Optando por esta estratgia a cadeia leve s surge se a cadeia pesada emitir sinais e se estiver perfeita, de acordo com as necessidades da clula. Este processo permite uma melhor gesto energtica, pois no existir dispndio de energia para criar uma cadeia leve se a pesada no estiver ok.

Isto constitui ento um checkpoint, um ponto de verificao do processo de diferenciao da clula B. S se possuir cadeia pesada que prossegue, sendo que depois s continua o processo se possuir cadeia leve tambm. Caso um dos dois processos no se verifique a clula morre por apoptose.

Sabemos que o mais frequente, j que apenas 5% do total de clulas que iniciam diferenciao chegam a clulas B.

Caso Clnico:

Alteraes no enzima BTK. BTK (tirosina cinase) uma cinase que traduz os sinais do pr-BCR e BCR. Por alteraes no enzima deixa de ocorrer transmio de sinal para o ncleo da clula, logo, no h maturao das clulas B.

Indicadores clnicos: nveis muito baixos de anticorpos no sangue.

Esta doena toma o nome de Agamalobulinemia e uma doena recessiva ligada ao cromossoma X. raro encontrar mulheres doentes, pois para que tal acontea elas tm que ser homozigticas recessivas. Isto significa que o seu pai seria fenotipicamente doente, estando ento a transmitir conscientemente a doena descendncia.

Mudanas ao nvel do genoma S nas clulas B e S depois de activao

1. Hipermutao Somtica 2. Mudana de Classe

1. Hipermutao somtica

Baseia-se em mutaes nos nucletidos ao nvel das regies variveis e decide a que antignio se liga o receptor. Tem como principal objectivo o aperfeioamento da resposta imunitria, a maturao da afinidade. Desta forma possvel o receptor tornar-se cada vez mais homlogo, mais afim do antignio, tendo ainda em conta que quanto mais afim do antignio o receptor estiver, mais fortemente o sinal transmitido para o interior da clula, maior a proliferao da clula B, maior a eficincia e eficcia da resposta imunitria.

Estas mutaes so introduzidas por um enzima, a AID. Sendo que estas mutaes no tm objectivo, so aleatrias, s persistem as que so seleccionadas positivamente. Dentro da diversidade h sempre a seleco do que mais eficaz.

2. Mudana de Classe

Esta mudana d-se ao nvel das regies constantes e decide o que que o anticorpo faz com o antignio. Existem 5 diferentes tipos de regies constantes, sendo que cada uma tem uma funo distinta.

Retira-se a poro de gene que no interessa, fazendo este looping. Desta forma ir-se-o juntar aos fragmentos VDJ (a cinzento) os fragmentos gnicos que codificam o tipo de imunoglobulina pretendida
Legenda das cores do esquema:

IgM IgD

IgG3

IgG1

IgG2b

Ig2a

IgE

IgA

Assim temos os segmentos de regio varivel junto dos segmentos de regio constante.

Caso Clnico:
Ratinho knockout sem enzima AID. Revelou na sua circulao apenas anticorpos IgM, todos iguais. Sofria ento de Sndrome Hiper IgM, provocada por uma mutao no cromossoma 12, dando origem a uma doena autossmica recessiva

Daqui se concluiu que a AID contribui tambm para a mudana de classe, na medida em que retira grupos amina, aplicando-se neste caso remoo dos fragmentos gnicos que codificam outros tipos de Ig das quais a clula no necessita. Neste caso patolgico o ratinho s apresentava IgM pois com a ausncia de AID funcional o looping no era feito e o fragmento gnico que ficava adjacente aos fragmentos VDJ era o fragmento respeitante IgM. Soube-se ento que antes da mudana de classe todas as imunoglobulinas esto preparadas para serem IgMs.

Nota: Existem vrias protenas que esto na superfcie das clulas B que tm correspondncia com as diferentes fases do desenvolvimento celular. Assim, fazendo uma anlise das protenas de superfcie de certa clula consegue determinar-se qual a fase de evoluo em que est.

Aula 14 Mdulo I - Imunologia 20 de Novembro

Clulas T constituem a pea central na Imunidade Celular (ou mediada por clulas). Existem 2 tipos de clulas T: -Clulas T helpers: Tm como funo matar outras clulas. -Clulas T citotxicas: Tm como funo, secretar citosinas para interagirem com os Macrfagos ou para ajudarem as clulas B a produzir anticorpos.

As Clulas T tm um receptor especfico que as torna T. (alfa+beta ou delta+gama), existindo 4 lcus genticos para o receptor da clula. As clulas T possuem fragmentos VDJ e ainda o processo de recombinao somtica como acontece nas clulas B. As clulas T maturam no timo e no na medula, porque a medula no d os sinais necessrios para que os precursores hematopoiticos se transformem em clulas T.

Esquema: Inter-leucina 7 Recebida pelos receptores IL-7 (R) dos precursores Determina que as clulas, assim marcadas, vo ser linfcitos T. Funo do Complexo Clula-Receptor

O complexo clula-receptor completado por molculas (CD3-marcador essencial) que do para o interior da clula e que so ricos em citosina ou tirosina, o que permite a fosforilao. a que se inicia a Cascata de Fosforilao, responsvel pela transmisso de um sinal para o interior da clula. Foxn1 Factor de transcrio para as clulas epiteliais O que se verifica na ausncia de Foxn1? Sem este factor as clulas ficam bloqueadas na diferenciao celular. Uma pessoa que sofra uma mutao neste gene no ter protena funcional para formar o epitlio do timo, nem da pele, pelo que no h plo nestes doentes. No existindo timo, consequentementeo doente no possuir clulas T.

Saudvel

Doente

Doena resultante de mutao do gene que codifica Foxn1 SCID: severe combined imune deficiency: Na posio 792 do gene Foxn1 h um codo STOP (TGA) em vez de um CGA. Devido presena do codo stop, a transcrio interrompida e portanto deixa de se formar protena funcional isto se o doente for homozigtico para a mutao. Se for heterozigtico, tendo s um alelo bom consegue ter timo mesma. A quantidade de protena produzida por um alelo saudvel, apesar de inferior quando na presena de dois aleos saudveis, suficiente para a vida de um ser humano. Terapia para estes casos:
*Como o problema no tem que ver com a medula, um transplante da mesma no iria solucionar o problema.

necessrio um transplante de timo. Para que o transplante seja bem sucedido preciso: Em 1 lugar, arranjar um orgo compatvel total ou parcialmente com o dador; Em 2 lugar, colocar o rgo em cultura num meio que elimina as clulas T l existentes, a fim de que as clulas do enxerto no rejeitem o hospedeiro; Em 3 e ltimo lugar, realiza-se um transplante de timo e implanta-se o epitlio do timo na coxa por ser uma zona de fcil acesso mais do que cavidade torcica e por ser muito irrigada.

Resultados: As CD4 progridem bem, as CD8 nem por isso, mas ainda assim um sucesso.
*As CD8 no recuperam pois necessitam de sinais especfios vindos do prprio organismo do timo, isto nesta situao s poderia hipoteticamente acontecer caso o timo do dador fosse 100% compativel com o organismo do receptor, algo que nunca se verifica.

Importncia do Timo: Maturao das clulas T Pr T Pr T T Final (Muito semelhante com a maturao das clulas B)

A importncia da Inter-leucina 7: A protena Inter-leucina 7 (IL 7) um factor de crescimento das clulas T. O gene que a codifica est presente no cromossoma X. Esta hormona produzida pelas clulas epiteliais. A IL 7 serve como j vimos, para transmitir sinais muito importantes aos precursores hematopoiticos que tm o receptor especfico (IL 7 (R)). X-linked Severe combined Imunodeficiency Na ausncia de receptores de IL7, existe um bloqueio na diferenciao das clulas T. Terapia para clulas que no apresentem os receptores IL-7 (R): Se os precursores hematopoiticos no tiverem os receptores, j podemos, desta vez, usar transplante de medula ssea para solucionar o problema. Fases de Maturao clulas T: Pr TCR:

Pr TCR: 1 Checkpoint Do-se rearranjos assncronos (no so simultneos nem sincronizados) 1 fase Ocorre a formao da primeira cadeia, convencionalmente a cadeia beta, como resultado destes rearranjos. Temos assim, ento um homodmero. Os homodmeros no so muito estveis, portanto para lhes conferir estabilidade e verificar se a cadeia beta se formou em condies junta-se-lhes uma protena, de seu nome pTalfa (P de pr, T de TCR, alfa de cadeia alfa), que se vai ligar superficie cadeia beta. Se a cadeia beta estiver bem, a protena envia sinais para o ncleo da clula para gerar cadeia alfa o concluir TCR. Neste ponto, tal como na medula, a maioria das clulas esto condenadas morte. O processo aleatrio, ou seja, no produz uma grande quantidade funcional, pois produz todas

as combinaes possveis, ocorrendo portanto muitos erros. Mas s desta forma, que se torna eficaz. Cobrindo todas as possibilidades numa 1 fase, e submetendo-se seleco natural numa 2 fase, torna-se possvel produzir conjuntos de clulas T que melhor se vo adequar aos nossos problemas e necessidades. Por outro lado, estas modificaes aleatrias tornam desnecessrio a existncia de um genoma exageradamente grande e de um corpo muito maior para o armazenar. TCR Final: 2 Checkpoint

Ligao MHC (protena que apresenta fragmentos antignicos s clulas efectoras da resposta imunitria) As molculas de MHC so carregadas no retculo endoplasmtico e pem nas superfcies das clulas, pequenas amostras de todo o seu contedo (marcadores), para que as cellas T reconheam quais so as cellas infectadas. Caso contrrio, as clulas T teriam que entrar na clula para saber se ela estava infectada ou no e, a, mat-la-am necessariamente.

Aula 15

1 Aula sobre Citoesqueleto

A. Introduo ao Citoesqueleto B. Filamentos de Actina

A. Introduo ao Citoesqueleto
O citoesqueleto define-se como um conjunto de estruturas filamentosas, de natureza proteica, formando uma rede dinmica altamente complexa e interdependente. Sabemos ento que o citoesqueleto muito dinmico, imagem que contraria a ideia associada a um esqueleto normal, embora tenha uma funo estrutural.

O citoesqueleto ento constitudo por trs diferentes tipos de filamentos: - Filamentos de actina - Filamentos intermdios - Microtbulos

Filamentos de Actina: So os filamentos mais finos com uma dimenso de cerca de 7 nanmetros. Tem principais funes nas clulas epiteliais e em clulas migratrias. Estes filamentos esto envolvidos na gerao de fora e na mudana da forma das clulas, bem como no movimento celular.

Filamentos Intermdios: Apresentam espessura mdia. Esto normalmente distribudos por toda a clula, tanto em clulas migratrias como em clulas epiteliais. Esto fortemente envolvidos na resistncia celular e na elasticidade celular.

Microtbulos: Tm maior espessura que ambos os anteriores e formam um tubo, tal como o nome indica. Organizam-se a partir do centro organizador do microtbulo at s extremidades da clula. Fortemente ligados ao transporte intracelular.

B. Filamentos de Actina
Os filamentos de actina esto espalhados por toda a clula, localizando-se contudo em diferentes locais consoante a funcionalidade da clula ou fase do ciclo celular. Nas clulas epiteliais os filamentos tendem a localizar-se na zona apical da clula, em microvilosidades (microvilli) (A); noutras clulas estes filamentos podem conjugar-se em feixes contrcteis que, em conjunto, actua como se fossem msculos da clula (B); no caso de clulas migratrias, os filamentos de actina podem estar na origem de protuses dinmicas na extremidade lder da clula, a extremidade no sentido do movimento (C); por fim, os filamentos podem localizar-se no anel contrctil de uma clula em diviso (D);

Os filamentos de actina so constitudos por monmeros de actina, como se deduz do nome, monmeros esses que se dispem em hlice enrolada. Cada filamento possui uma extremidade positiva e uma negativa, extremidades estas que podem ser detectadas atravs de tcnicas de microscopia electrnica.

O filamento cresce por adio de monmeros de actina extremidade positiva do filamento. O que consome mais energia, sob a forma de ATP, activar a reaco de formao de dmeros e trmeros, sendo que a continuao do crescimento do filamento implica um menor gasto energtico.

Associada adio de monmeros extremidade positiva do filamento, est a dissociao de monmeros da extremidade negativa. Este mecanismo, cclico, adopta o nome de Treadmilling.

Podemos ento observar aqui um ciclo: Um monmero de actina associado a uma molcula de ATP liga-se extremidade + do filamento. Para que o monmero se junte ao filamento d-se a hidrlise do ATP, ou seja, liberta-se um fosfato inorgnico (Pi) e os monmeros constituintes do filamento passam a estar associados a molculas de ADP. Quando um monmero se dissocia da extremidade fosforilado e o ADP passa a ATP, o que permite que esse monmero se volte a ligar a um filamento.

Porm, para que os monmeros de actina disponveis no citosol no estejam sempre a polimerizar em filamentos de actina, existem algumas enzimas que regulam e controlam este processo. So elas a timosina (thymosin) e a profilina (profilin). Sabemos que se ligam aos monmeros de actina, impedindo que estes se liguem a filamentos, assegurando a estabilidade do filamento. A aco destas enzimas permite adormecer o filamento, ou seja, regular ou mesmo estagnar o seu crescimento, se isso for conveniente para a clula.

Quando os filamentos de actina so necessrios, outras protenas so chamadas para promover a sua ligao. So ento as actin-binding proteins.

Existem protenas que: - sequestram monmeros, como j foi explicado. (A) - catalisam a nucleao de pequenos filamentos (B) - cortam os filamentos e portanto (C)
Os filamentos ficam mais curtos e h destruio do citoesqueleto

Ou

- bloqueiam as extremidades, no h associao de novos monmeros (D) - se enrolam volta dos filamentos (E) - desempenham o papel de motores associados aos filamentos (miosinas, p. ex.) constituindo estruturas contrcteis, tal como nas clulas musculares. (F) - ligam filamentos paralelos em microvilosidades, por exemplo. (G)

Estas protenas ligam os filamentos entre si e camada de citoplasma adjacente membrana citoplasmtica (cell cortex).

Existe ainda um outro tipo de protenas as forminas e as ARPs (actin-related proteins) que controlam o processamento dos filamentos de actina na frente de migrao de uma clula migratria.

A migrao celular divide-se em trs passos essenciais: 1.A clula cria protuses na direco da migrao. (A) 2.Estas protuses aderem superfcie sobre a qual a clula se est a deslocar, criando pontos de ancoragem (B)

3.A clula arrastada para a frente pela traco exercida pelos pontos de ancoragem sob o resto da clula.

B, C

Este ciclo repete-se vezes sem conta para que a clula se movimente por distncias considerveis.

As protuses podem ser constitudas por dois tipos diferentes de estruturas: filopodios e lamelipodios.

Sabe-se que ambos so gerados pelo rpido crescimento de filamentos de actina. Porm, o seu crescimento est associado a diferentes tipos de protenas.

Lamelipodios: Os Complexos ARPs encarregam-se de se associarem aos filamentos de actina activando a polimerizao de novos filamentos a partir de

outros j existentes, fazendo com que o crescimento dos filamentos se d no sentido de serem acrescentadas novas ramificaes. Com a interveno de outras actin-binding proteins os filamentos esto constantemente a ser formados na frente de migrao e dissociados na parte de trs da clula, permitindo a sua migrao.

Filopodios: Estas estruturas dependem da interveno de uma protena, a formina. Os dmeros desta protena ligam-se s extremidades positivas dos filamentos, mudando a sua conformao e permitindo a associao de novos monmeros, formando filamentos de actina lineares sem ramificaes (ver penltima imagem). Desta forma, o crescimento dos filamentos muitssimo mais rpido.

Quando lamelipodios e filopodios contactam com uma superfcie activado um mecanismo de adeso, potenciado por protenas transmembranares chamadas integrinas. Estas protenas ligam os filamentos de actina membrana e por sua vez s molculas da matriz extracelular que envolve as clulas. Por outro lado, podem tambm ligar-se superfcie da clula vizinha sobre a qual a clula se est a movimentar. A ancoragem feita entre as integrinas e os filamentos de actina assenta sobre as propriedades das miosinas, que iro ser descritas em seguida.

Notas: Cofilina uma protena pertencente famlia ADF/Cofilina. Pode substituir o ATP nos monmeros de actina e que tambm podem cortar os filamentos de actina. Fimbrina uma protena que permite a ligao entre filamentos e que, portanto, aumenta a resistncia estrutural do citoesqueleto. Caderina uma protena que permite a ligao do citoesqueleto s junes de adeso.

Miosinas

Todas as protenas motoras que se associam actina pertencem famlia das miosinas. Assim, as miosinas so protenas motoras e deslocam-se ao longo de um filamento de actina.
(Existe a miosina-I e a miosina-II. O prof

nesta aula, pelo menos, falou s da miosina-I. dessa que eu vou falar a seguir, mas no Essential est muito mais aprofundado.)

A miosina-I tem uma zona globular e uma cauda. A zona globular consegue associarse e dissociar-se de um filamento de actina graas a um motor de hidrlise de ATP. So as sucessivas associaes e dissociaes que permitem o movimento da miosina ao longo do filamento. A cauda pode variar, dependendo dos diferentes tipos de miosina-I, sendo ela que decide qual o tipo de vescula que ser arrastado ao longo do filamento de miosina (B). Para alm disto, a cauda pode tambm ligar-se membrana celular e provocar a mudana de forma da clula, puxando a membrana (C). Se a miosina estiver fixa tambm pode puxar o filamento de actina (C).

Sinais extracelulares que regulam o comportamento da actina em geral

Miosinas, protenas de ligao actina, ARPs so protenas responsveis pela localizao, organizao e comportamento dos filamentos de actina. Contudo, estas protenas actuam sob sinais extracelulares que surgem como tentativa de rearranjo do citoesqueleto em resposta ao meio envolvente.

Estes sinais so detectados por receptores membranares, sendo que so depois traduzidos em GTP-binding proteins muito semelhantes entre si, pertencentes famlia de protenas Rho. (B) esta activao teve como consequncia a sntese rpida de feixes contrcteis e lineares, sem ramificaes. (C) a activao de Rac aumenta a formao de filamentos de actina, levando ao

surgimento de lamelipodios. (D) a activao de Cdc42 estimula a protuso de muitos e longos filopodios, contornando toda a periferia da clula.

A rede de protenas Rho processa sinais vindos do exterior, tais como concentraes de nutrientes, factores de crescimento, contactos com clulas vizinhas. Esses sinais, conforme a informao intracelular (estado de nutrio da clula, tamanho e prontido para diviso celular), levam a sejam produzidos sinais que regulam a forma do citoesqueleto de actina. Uma das principais expresses destes sinais a contraco muscular, que ser falada na aula seguinte.

Aula 16

CITOSQUELETO A. Filamentos de Actina

Contraco Muscular Provm da interaco entre filamentos de actina e filamentos de miosina II. A miosina II um dos subtipos de protenas que se ligam aos filamentos de actina; estas molculas tm duas cabeas ATPases uma grande cauda. Cada molcula de miosina II um dmero de duas molculas de miosina ligadas pelas suas caudas.

Num filamento de miosina II as molculas de miosina II esto ligadas pelas suas caudas, com as suas cabeas a serem projectadas para os lados, formando uma molcula bipolar. como uma seta de dois cumes, com as duas cabeas da seta a apontarem em diferentes direces.- um conjunto de filamentos de miosina II est orientado para um lado e o outro para o lado oposto, fazendo com que ambos se movimentem em direces contrrias.

Esta estrutura capaz de gerar fora- p.e., anel contrctil aquando da diviso celular (citocinese), contraco muscular, etc.

As fibras muscuclares so constitudas por grandes clulas individuais provenientes da fuso de muitas pequenas clulas; enquanto que o ncleo destas clulas se localiza muito perto da superfcie, abaixo da membrana plasmtica, o seu citoplasma composto por miofrilhaslongos filamentos horizontais constitudos por pequenas unidades contrcteis, os sarcmeros.

O msculo possui ento um componente contrctil, as suas (feixes de) fibras musculares, cujas estruturas principais que as compem so os sarcmerosestruturas organizadas de filamentos de actina (esto ancoradas pelas suas extremidades positivas numa estrutura chamada de Disco Z) e filamentos de miosina II (na regio central- zona central onde s existem as caudas das molculas de miosina II, chamamos de Linha M).

A contraco do msculo causada pelo encolhimento simultneo dos sarcmeros. Como que tal possvel? Graas ao deslizamento dos dois tipos de filamentos um sobre o outro, no havendo nunca um encurtamento destas duas estruturas.

O que acontece que quando um msculo estimulado a contrair, as cabeas de miosina comeam a andar ao longo dos filamentos de actina, por passos cclicos.

Em cada ciclo, a cabea de miosina liga-se a uma molcula de actina e hidrolisa o seu ATP. Isto causa uma srie de mudanas conformacionais na molcula de miosina, levando a que esta seja impulsionada na direco da extremidade positiva do filamento de actina. A molcula de miosina tem menor afinidade para o ADP do qe para o ATP, ou seja depois de hidrolisado o ATP esta perde afinidade para a molcula de actina qual se ligou, levando a que a cabea de miosina se ligue actina mais frente (que tem ATP), e assim em diante. D-se assim uma aproximao dos filamentos de actina, os discos z aproximam-se, o que se traduz na contraco muscular. B.

Microtbulos

Os microtbulos so heterodmeros altamente dinmicos e com um crucial papel organizacional na clula; so molculas que

podem ser relativamente longas e rgidas, assemelhando-se a tubos ocos, constitudos por protenas, que se podem polimerizar (crescer) numa regio e despolimerizar (desagregar-se) noutra, rapidamente. Nas clulas animas, estas molculas desenvolvem-se a partir de uma pequena estrutura chamada de centrossoma. Formam estruturas, aliando-se a outras protenas, que permitem o transporte de organelos e vesculas para diferentes regies da clula, formam o fuso mittico aquando da mitose e meiose, o que permite que os cromossomas sejam segregados igualmente para as clulas-filhas, e podem formar ainda estruturas permanentes que se extendem da superfcie de clulas eucaritas,

possibilitando a sua propulso ou ainda o retirar de fludo da superfcie celular.

Os microtbulos so um dos trs tipos de filamentos proteicos componentes do citosqueleto das nossas clulas, cuja subunidade estrututal a tubulina - os microtbulos so portanto um heterodmero de tubulina.

Cada subunidade constituda por duas protenas globulares similares, a -tubulina e a -tubulina, unidas por ligaes nocovalentes.

Os dmeros de tubulina agregam-se linear e alternadamente e -tubulina, tambm por ligaes no-covalentes, formando os protofilamentos.

Cada protofilamento tem uma polaridade estrutural, com a tubulina exposta numa extremidade e a -tubulina exposta na extremidade oposta, originado uma polaridade direccional intrnseca molcula.

Um microtbulo ento constitudo por 13 protofilamentos unidos paralelamente, originado uma estrutura em forma de tubo oco. Como os protofilamentos esto dispostos na mesma direo, isso confere uma certa polaridade microtbulo como ao um

todo. A extremidade da -tubulina negativa e a da tubulina positiva.

A polaridade do microtbulo deve-se o facto da molcula possuir uma direco definida, sendo as suas duas extremidades quimicamente diferentes e

comportando-se de maneiras distintas.

a partir dos centrossomas que se formam e crescem a maioria dos microtbulos existentes nas clulas, sendo que este complexo controla o n de microtbulos formados e a sua orientao no citoplasma.

Nos centrossomas podemos encontrar uma matriz proteica, e ainda centenas de estruturas em forma de anel, formadas por -tubulina, a partir das quais se vo desenvolver os microtbulos (extremidade negativa est ento ligada a a este complexo estvel) e com a qual vai ficar ligada a sua extremidade negativa-o microtbulo vai ento crescer na sua extremidade positiva, que se direcciona para o exterior do centrossoma.

Nos centrossomas das clulas eucaritas animais observa-se tambm ainda a existncia de um par de centrolos- curtas estruturas cilndricas compostas por 9 tripletes de microtbulos. A sua funo permance ainda um mistrio, uma vez no tm qualquer papel na formao dos microtbulos (os anis de -tubulina so suficientes) e tambm devido ao facto das clulas vegetais no possurem este organelo celular Os microtbulos podem-se ainda formar a partir do corpo basal, ao qual esto ligados, formando os clios. A polimerizao do microtbulo a partir de uma estrutura j existente muito mais fcil do que se comeasse a formar o microtbulo a partir das juno de dmeros de -tubulina e tubulina. No entanto, verifica-se que tal polimerizao espontnea possvel de ocorrer na clula quando as concentraes de -tubulina e -tubulina livres so bastante elevadas. Acontece que nas nossas cllulas esta concentrao no suficiente para que se d este primeiro passo na polimerizao dos microtbulos. Os microtbulos possuem um comportamento designado de instabilidade dinmica - to depressa se esto a formar pela adio de novos dmeros de e -tubulina na sua extremidade livre (a positiva), como de repente se comeam a despolimerizar, encolhendo rapidamente e podendo at desaparecer para mais tarde e vir a formar um outro microtbulo a partir do mesmo anel de -tubulina.

Este comportamento provm da capacidade das molculas de tubulina hidrolisarem GTP. Os dmeros de tubulina livres possuem ligados a si uma molcula de GTP, a qual tm a capacidade de hidrolisar logo aps se ligarem a um outro dmero de tubulina- os dmeros de tubulina associados a GTP tm maior afinidade para se ligarem a outros dmeros que outros cuja molcula de GTP tenha sido hidrolisada (porntanto, outros dmeros que estejam agora ligados a GDP). Quando as molculas de tubulina so adicionadas a uma velocidade maior do que a molcula de GTP ao qual est ligada hidrolisada (sim, porque esta molcula acaba sempre por ser hidrolisada), o microtbulo cresce- a cadeia est a ser polimerizada.

Por outro lado, pode acontecer que a tubulina presente na extremidade da cadeia

hidrolise a molcula de GTP antes que a esta se ligue outra tubulina, ficando a extremidade do protofilamento composta por tubulina GDP. A menor afinidade das tubulinas para o GDP vai provocar uma reaco de despolimerizao em cadeia; como o resto microtbulo era j composto por GDP tubulina-depois de ligadas as tubulinas hidrolisaram o seu GTP a GDP, isto levou a que o protofilamento de despolimerizasse (as tubulinas naturalmente hidrolisam o GTP a GDP, o que dita se o protofilamento vai crescer (polimerizao) ou diminuir (despolimerizao) o facto da nova tubulina se ligar tubulina da extremidade do protofilamento antes que esta hidrolise o seu GTP; caso esta hidrolise o seu GTP, passando a GDP, antes de uma nova tubulina se ligar a si, a menor afinidade das tubulinas livres existentes para a tubulina composta por GDP levam a que o protofilamento no s no cresa, como se desencadeie uma reao de despolimerizao espontnea do protofilamento). Funcionalidades dos Microtbulos A dinmica dos microtbulos dentro da clula pode ser modificada de acordo com as necessidades da clula.

Por exemplo, numa clula diferenciada e altamente especializada, com uma estrutura fixa, a instabilidade dinmica dos microtbulos suprimida pr protenas que se ligam a esta molcula estabilizando-a, passando esta estrutura a manter a organizao da clula; j durante a mitose, a polimerizao e despolimerizao dos microtbulos d-se com maior frequncia que numa clula que no esteja nesta fase. importante referir que a polarizao da clula reflexo dos arranjos dos microtbulos polarizados no seu interior -isto vai ajudar a posicionar os organelos celulares nos seus devidos lugares e vai permirtir o transporte de vesculas e de organelos ao longo dos microtbulos. Por exemplo, nos axnios das clulas nervosas, os esto com a sua na

microtbulos orientados extremidade

positiva

direco do axnio, permite o transporte de vesculas e complexos proteicos para os seus terminais, que so produzidos no corpo ceular desta clula, mas necessrios na extremidade do seu axnio. Os materiais transportados ao longo dos microtbulos movemse a uma velocidade de cerca de 10 cm por dia-apesar de parecer muito lento, caso este transporte se desse por difuso ao longo da clula, seria bastante mais demorado, levando anos ou mesmo nunca chegando a atingir a extremidade do axnio. Estes movimentos dependem da actuao de protenas acessrias, que se ligam tanto ao microtbulo como ao material a ser transportado. As protenas motoras usam a energia proveniente da hidrlise de ATP para se moverem, ao longo de filamentos de actina ou dos microtbulos, numa nica direco. Foram identificadas bastantes destas protenas, que diferem na direco em que deslocam, a carga que transportam, e o tipo de filamento sobre o qual se deslocam.

Para os microtbulos temos duas protenas: as dinenas, que se movem na direco da extremidade negativa do microtbulo (em direco ao centrossoma) e as cinesinas, que se movem na direco positiva do do

microtbulo

(afastando-se

centrossoma). Estas duas protenas so ambas constitudas por duas cebas

globulares,

s quais se liga o ATP e consequentemente se ligar ao microtbulo, e uma cauda, que se liga a uma vescula ou um organelo que ser ento transportado.

As cabeas globulares das cinesinas e das dinenas so enzimas com actividade ATPase - esta reaco providenciar a energia necessria sua movimentao, atravs de um ciclo de mudanas conformacionaisdas protenas levando a um ciclo de liga-solta-liga da protena ao microtbulo-movimento saltatrio.

Durante a mistose, os microtbulos vo possuir a importante funo de segregar os

cromossomas para as clulas-filha. Como dito anteriormente, a instabilidade dinmica dos microtbulos vai aumentar com o incio da

mitose, graas em parte fosforilaao de protenas assoociadas aos microtbulos e que lhe conferem alguma estabilidade, pela M-Cdk.

Assim, os microtbulos vo crescer a partir dos dois centrossomas, em todas as direces, explorando o interior da clula. Isto pode levar a que haja interao provenientes entre de

microtbulos centrossomas

diferentes,

conferindo-lhes alguma estabilidade, ou seja, prevenindo a sua despolimerizao- a partir deste momento os centrossomas passam a designar-se de plos mitticos tudo isto constitundo assim a base do fuso mittico.

Durante a profase, protenas designadas de cinetocoros criam a ligao entre os microtbulos e os cromossomas (mais precisamente aos seus centrmeros), aos quais passam a estar ligados. Os cromossomas sero mais tarde puxados em diferentes direces, pela despolimerizao dos microtbulos aos quais estos ligados. Existem ainda microtbulos que cerscem na direo da membrana plasmtica, qual se acabam por ligar conferindo estabilidade a todo o processo.

A associao de certas protenas protenas aos microtbulos possibilitando a confere-lhes formao de estabilidade, estruturas

estruturas rgidas polarizadas, como os clios e os flagelos.

Os clios so estruturas que se assemelham a cabelos, com cerca

de 0.25 micrmetros de dimetro e que se extendem da membrana plasmtica de muitas clulas, e crescem a partir do corpo basal, localizado no citoplasma-srve de centro organizador do clio. Os clios so usados para locomoo, obteno de alimento por alguns protozorios, etc.

Os flagelos, internamente so muito parecidos aos clios, no entanto so bastante mais compridospor exemplo, a cauda dos espermatozides. Estes permitem o

movimento/deslocaao de toda a clula e no apenas a gerao de uma corrente que permita o movimento da clula, como acontece com os clios.

Estes microtbulos, ao contrrio dos existentes no citoplasma, so formados Por 9 dupletos de microtubulos em redor de um par de microtbulos simples. O movimento dos microtbulos possvel graas interao deste com protenas: enquanto umas permitem, por exemplo, a ligao de

microtbulos entre si(protenas a vermelho protenas estruturais- do estrutura), outras geram a fora necessria ao movimento

(protenas a azul - protenas motoras-geram movimento).

Por exemplo, a protena motora dinena ciliar est ligada pela sua cauda a um

microtbulo,enquato que as suas duas cabeas globulares esto ligadas a um microtbulo adjacente. Ao gerar fora, e por os microtbulos estarem todos conectados entre si, isto vai fazer com que se d um movimento conjunto de todos os clios.

Aula 17 Componentes do Citoesqueleto: -Microtbulos -Filamentos Intermdios -Filamentos de Actina

Filamentos Intermdios: Tm como principal funo conferir resistncia estrutural clula e dot-la de elasticidade. Existem vrios tipos de filamentos intermdios, pois cada um constitudo por diferentes polmeros. Podemos observar nesta imagem a funo dos filamentos intermdios nas clulas:

Diferentes Categorias de Filamentos Intermdios:

* As lminas nucleares revestem a parte interna da membrana nuclear, conferindo resistncia e estrutura ao ncleo. Todos os componentes do citoesqueleto se encontram ligados entre si, o que confere unidade clula. As molcula ligam-se a diferentes tipos de componentes do citoesqueleto, ou por vezes, simultaneamente a vrios tipos, exemplo:

Muitas vezes, o citoesqueleto serve para ligar clulas umas s outras, como veremos mais adiante. Epitlios e Junes Celulares Epitlios so organizaes celulares, ou seja, folhas multicelulares. Tipos de Epitlios:

Constituio de um Epitlio celular simples:

Classificao das Junes do Epitlio celular:

Junes de Ocluso: Tm como funo selar o epitlio celular, assim se colocarmos molculas no lmen, elas no conseguem passar atravs do epitlio. Junes de Adeso: Localizam-se mais perto da zona apical, e resultam da ligao de filamentos de actina de uma clula a um complexo de cadrinas que por sua vez est ligada a uma protena de outra clula. Este tipo de junes, confere folha epitelial a capacidade de desenvolver tenso e assim alterar a sua forma de diversas formas. Muito disto se deve ao potencial de contraco das actinas. Desmossomas: Funcionam como um subtipo das junes de adeso, s que estas se do entre filamentos intermdios e complexos de cadrinas, e vo contribuir sobretudo para a elasticidade dos tecidos formados. Junes Comunicantes ou junes de Hiato: No esto relacionadas com o citoesqueleto, so sim, complexos proteicos com poros que permitem a passagem de pequenos ies aquasolveis e molculas do citosol. Existem assim molculas que so passadas do citosol de uma clula para o de outra. Estas junes so de extrema importncia pois permitem a comunicao entre diferentes clulas. Hemidesmossomas: So junes, onde os filamentos intermdios se encontram ligados s integrinas (molculas transmembranares) no interior da clula, ligando-se estas extracelularmente lmina basal. Esta ligao filamentos intermdio, neste caso keratina, lmina basal confere estrutura e elasticidade ao tecido.

Adeses Focais: So espcies de Hemidesmossomas, s que em vez de filamentos intermdios, encontramos filamentos de actina ligados a integrinas. Casos Clnicos e Patologias relacionadas com esta temtica: Sindroma dos Cartagineses: uma rara, cilioptica, doena autossmica recessiva, onde existe uma deficiente funo dos clios, principalmente ao nvel da funo respiratria. Esta deficiente funo dos clios consequncia de uma mutao nos genes que codificam a parte motora dos clios.

Clio - formado por uma membrana que protege uma matriz de nove microtbulos que rodeia um ncleo central de dois microtbulos. Esto presentes nas clulas eucariticas com movimento.
Os Clios desempenham ainda um papel importante no desenvolvimento embrionrio, j que, nessa altura, definem o conjunto de estruturas (clulas, tecidos, rgos) que se vo localizar direita ou esquerda no nosso organismo. Os clios so idnticos aos flagelos, sendo estes ltimos fundamentais para o movimento dos espermatozides. Consequncias: -Crnica obstruo pulmonar. -Crnica infeco nos seios nasais. -rgos invertidos (Situs inversus) -Espermatozides sem mobilidade. Epidermlise Bulhosa: uma doena rara hereditria da pele, que desencadeada devido a uma mutao no gene que codifica a keratina (um dos tipos de filamentos intermdios). Gera-se assim uma keratina mutante, em que a sua elasticidade muito inferior normal desse tipo de filamentos intermdios. Consequncias: -A Degradao da Epiderme com o tempo. -Hipersensibilidade da pele, cada vez que lesada forma logo enormes bolhas. Existem muitas substncias para manipular o citoesqueleto, a principal talvez o Taxol, que muito utilizado como terapia contra o cancro, j que estabiliza os microtbulos, tornando assim a diviso celular mais difcil (menos rpida e menos frequente).

Existem bactrias que se multiplicam nas clulas e que utilizam muitas vezes o citoesqueleto para se movimentarem no interior das clulas. Mais concretamente, utilizam a actina da clula para se empurrarem a si prprias, conseguindo estas bactrias produzirem atravs de complexos proteicos a sua prpria actina. Microtubule-specific drugs: Action Taxol binds and stabilizes microtubules Colchicine, colcemid binds subunits and prevents polymerization Vinblastine, vincristine binds subunits and prevents polymerization Astinc-specif drugs Action Phalloidin binds and stabilizes filaments Cytochasalin caps filament plus end Latrunculin binds subunits and prevents polymerization

Aula 18

BLOCO VII Relao Fentipo-Gentipo Testes Genticos

As DLS- Doenas Lisossomais De Sobrecarga- partilham um mecanismo patognico comum: uma alterao gentica que condiciona uma deficincia numa ou mais enzimas lisossomais especficas, resultando assim numa diminuio / ausncia da actividade enzimtica, que se traduz na acumulao progressiva do substrato respectivo. A doena de Gaucher uma delas.

A Doena de Gaucher resulta de uma alterao gentica, hereditria (autossmicarecessiva), que condiciona uma deficincia funcional da actividade enzimtica da bglucocerebrosidase que se estima afectar cerca de um em cada 100.000 indivduos. Esta deficincia leva acumulao de glucocerebrosdeos (glicolpido derivado de membranas celulares fagocitadas em macrfagos) nos lisossomas dos macrfagos provocando a formao de clulas com caractersticas

particulares, designadas por clulas de Gaucher- no doente no ocorre o processo de autofagia para
Figura 1- Clula de Gaucher

renovao da membrana vo-se acumulando molculas da membrana no interior dos lisossomas

dos macrfagos.
Nos sinais e sintomas, as principais caractersticas observadas so um aumento do volume do fgado (hepatoglia) e do bao (esplenoglia) (inflamaes), anemia, diminuio do nmero de plaquetas e doenas sseas.

Os macrfagos- clulas de grandes dimenses do tecido conjuntivo, ricas em lisossomas que fagocitam elementos estranhos ao organismo- actuam sobre agentes patognicos, clulas velhas ou ainda sobre clulas estranhas ao organismo ou defeituosas. O seu mau funcionamento pode levar a inflamaes, tal como se observa na doena descrita anteriormente.

Existem ento cerca de 40 doenas lisossomais.

Enquanto que o seu fentipo geral para todas elas - mau funcionamento dos lisossomas, o seu gentipo vai variar- dependendo dos genes codificantes de hidrolases que so afectados, assim variar o substracto- no caso da doena de Gaucher, uma mutao na enzima glucocerebrosidase afecta a degradao dos glucocerebrosdeos, que se vo

consequentemente acumular nos lisossomas dos macrfagos. Nota: dentro dos lisossomas h enzimas hidrolases, tais como as proteases, lipases, e nucleases. As hidrolases so enzimas que funcionam somente a pH baixo- proteco para a clula, uma vez que estas no coseguem actuar no citoplasma j que o pH a existente diferente do seu ptimo- no conseguem actuar noutras zonas do organismo.

H ento enzimas capazes de degradar todas as moleculas da clula, sendo que cada uma delas codificada por um gene diferente.

Que mutaes podem ento estar na origem das diferentes doenas lisossomais? As doenas lisossomais possuem um mesmo fentipo- o que varia o que se acumula dentro do lisossoma (mutaes em diferentes genes causam um mesmo fentipo- 1 sintoma, origem gentica diversificada). Uma mutao num gene de hidrolase vai sempre dar uma doena lisossomal. O que difere de uma mutao para outra o substracto que se acumula nos lisossomas.

H 40 doenas lisossomais, ento s h 40 genes diferentes?- No necessriamente. Para que a doena se manifeste, a mutao tem de ocorrer num gene funcional. Se essa mutao for compatvel com a vida, ser transmitida s geraes vindouras, se no for compatvel com a vida- o indivduo morre/no chega a nascer.

Mas no so s mutaes nas enzimas que podem provocar doenas lisossomais..

Como que as diferentes protenas existentes nas nossas clulas sabem para que compartimentos celulares se devem dirigir? Existem nas nossas clulas mecanismos que fazem com que as protenas a sintetizadas sigam para locais especficos na prpria clula.

Existem ribossomas livres no citosol e acoplados ao Retculo Endoplasmtico (Retculo Endoplasmtico Rugoso). Um mRNA traduzido num ribossoma livre no citosol produz uma protena que fica no citosol.

Um mRNA traduzido num ribossoma acoplado ao retculo endoplasmtico origina uma protena que tem um dos vrios destinos: ou se destina ao exterior da clula ( encaminhada para as vias de exocitose para ser secretada) , ou ser transmembranar (destina-se a membranas da clula), ou ainda pode destinar-se aos lisossomas -o que faz o mRNA ir para o retculo a presena de um sinal que insere a protena no lmen do retculo (depois do retculo passa para o aparelho de golgi atravs de uma

vescula. no golgi que decidido o seu destino).

Existe ento uma necessidade de separar as protenas .

Designamos de sinais aquilo que dita para onde iro as protenas. So as protenas em si que possuem este sinal, que pode ser uma sequencia de a.a. ou de glcidos ligados protena.

Estes sinais so reconhecidos pelos receptores; eles vo reconhecer essa caracterstica estrutural que diferencia as diferentes protenas de acordo com o local onde se destinam sinal determina a localizao da protena.

1 receptor reconhece ligando do receptor Ou 1 receptor reconhece carga (o que transportado)

Os receptores tm que se concentrar numa zona da membrana que vai dar origem vescula (devido aco da clatrina). S assim que o processo rentvel e a vescula contm o mximo nmero possvel de protenas.

A clatrina uma molcula (protena) que se liga membrana- atravs das adaptinas- e que tem a propriedade de formar uma rede - ao se encaixarem umas nas outras, as molculas de clatrina vo repuxar a membrana e formar uma vescula.

O truque de todo este processo consiste em ligar as molculas de clatrina aos receptores da carga/ligando, atravs de uma outra molcula, as adaptinas (so molculas adaptadoras das clatrinas aos receptores), razo pela qual este processo to especfico. A clatrina puxa ento as vesculas pela ligao que se estabelece com os receptores, que esto ligados s enzimas lisossomais, sendo que estas ficam dentro da vescula ; os receptores que reconhecem as enzimas (ligandos/carga) e no o contrrio.

Na imagem ao lado podemos observar o aspecto de um repuxamento de membranas- o arredondamento das vesculas na sua formo deve-se aos 3 dedos que constituem as molculas de clatrina; quando juntas formam esta espcie de rede que recobre a vescula Prformada. (fig. 10.36-The Cell).

sinal,

que

reconhecido

pelos

receptores que se por intermdio das comum a todas as losossomais conjunto fosfato na posio 6). e de (uma

vo ligar clatrina adaptinas, enzimas constitudo por um glcidos- manose-6manose fosforilada

Ou seja, o sinal presente nas protenas que vo para os lisossomas uma manose-6-fosfato- o que permite s enzimas lisossomais que sejam reconhecidas pelos receptores da membrana que formar os lisossomas.

Quando uma protena entra em contacto com o lmen do RE, de acordo com a sua composio em a.a., pode receber um grupo de oligossacardeos, transformando-se numa glicoprotena. Estes glcidos adicionados protena vo sofrendo modificaes por parte de enzimas ao longo do seu trajecto no aparelho de Golgi posteriormente - essas enzimas modificam parte glicdica da glicoprotena.

Ento, afinal que mutaes se podem traduzir num mesmo fentipo de doena lisossomal? Alguns cenrios possveis: 1. mutao ao nvel da enzima lisossomal (ex Doena de Gaucher) 2. Mutao num gene que no permita que as enzimas lissossomais sejam sinalizadas e portanto que no sejam transportadas para os lisossomas (ex mutao ocorre num gene que codifica a adio da manose-6-fosfato-deixava de haver enzimas nos lisossomas e os substratos acumular-se-iam na clula) 3. Mutao no receptor

Se ocorresse uma mutao na clatrina... NO seria doena lisossomal! A clatrina no fuciona s no transporte de enzimas lisossomais, mas sim entra em vrios transportes intracelulares. Se uma mutao ocorresse na molcula de clatrina, o organismo teria outras falhas ao nvel dos sistemas das clulas e os sintomas no seriam os mesmos que os de uma doena lissossomal (teria outros sinais que no s os de doena lisossomal)!

Aula 19

Endocitose e Receptores Membranares

Como j foi visto em aulas anteriores, existe todo um mecanismo de seleco do alvo das vesculas e das protenas l contidas. Uma protena que entre no lmen do Retculo Endoplasmtico seguir depois para o Complexo de Golgi, onde se decidir o seu destino: lisossomas, membrana plasmtica ou meio extracelular.

Porm, estes mecanismos no so infalveis: por vezes, algumas protenas que tinham como destino os lisossomas acabam por ser secretadas pela clula para o meio extracelular, por exemplo. Por outro lado, e pelas mesmas razes, como alguns receptores prprios dos lisossomas podem ficar erradamente na membrana citoplasmtica, acaba por ocorrer o retorno das protenas lisossomais ao interior da clula, visto que os receptores as captam. Por esta razo que se pode dizer que no assim to crtico que o sistema descrito no seja infalvel.

Os receptores de membrana, tanto os da membrana plasmtica como os das membranas das vesculas, reconhecem um conjunto de acares associado ao seu ligando. (Esse conjunto tambm pode ser de aminocidos.) ento atravs da ligao dessa pequena sequncia que se d a ligao a um receptor especfico. Ao receptor liga-se uma adaptina que, por sua vez, se liga s molculas de clatrina.

adaptina receptor

clatrina

cadeia de acares

protena

membrana

As vesculas de clatrina, depois de soltas da membrana, perdem a clatrina e ficam naked vesicles, ou seja, a vescula fica com uma membrana fosfolipdica simples.

Depois de discutido o processo de formao de uma vescula, atentemos agora no seu destino:

O destino de uma vescula decidido por protenas que marcam a sua superfcie. Essas protenas subdividem-se em dois tipos: as Rab e as SNARE. Tomemos por exemplo uma vescula que tem na sua superfcie protenas SNARE. Na membrana alvo dessa vescula estaro protenas t-SNARE (t de target), as quais sero complementares das protenas SNARE das vesculas.

Ao entrarem em contacto as duas SNARES, elas enrolam-se uma volta da outra, prendendo a vescula junto membrana o que permite a fuso das duas bicamadas fosfolipdicas.

Para as protenas Rab o processo algo diferente, sendo que as protenas complementares na membrana alvo tomam o nome de protenas de ancoragem.

Via de Endocitose
As vias de endocitose terminam nos lisossomas, j que numa endocitose entram para o interior da clula molculas vindas do exterior e que, como tal, tm que ser degradadas para que as clula as possa utilizar ou excretar, caso sejam prejudiciais clula.

Nota: No esquecer que por cada vescula endocitada h uma que foi exocitada; s assim que se mantm o tamanho da membrana plasmtica.

Como j vimos existem receptores na membrana plasmtica que desempenham um papel fundamental nos processos de endocitose. Tomemos o exemplo concreto do colesterol.

Colesterol:

Tem como principais funes as de manter a fluidez e estabilidade da membrana. Para alm disto a partir do colesterol que se d a sntese de cidos biliares e de vrias hormonas (as hormonas esterides). Delas so exemplos a testosterona, a progesterona, o estradiol, cortisol e aldosterona. O colesterol, nas concentraes adequadas, to essencial ao bom funcionamento do nosso organismo que ns at desenvolvemos mecanismos metablicos para produzir colesterol. Em tese, no precisaramos de incluir colesterol na nossa dieta. Sabe-se ainda que um adulto saudvel sintetiza cerca de 1 grama de colesterol e consome cerca de 0,3 gramas por dia.

Temos ento que o colesterol uma molcula insolvel, pelo que tem que ser revestido por molculas anfipticas (com regies hidrofbicas e hidroflicas) para que possa

circular na corrente sangunea. A configurao da molcula passa por muitas molculas de colesterol revestidas por uma camada de fosfolpidos.

Esta adaptao do nosso organismo soluciona o problema da solubilidade do colesterol no sangue. Contudo, no resolve a captao destas molculas pelas nossas clulas. preciso ento ter uma protena na camada fosfolipdica para que o colesterol seja reconhecido por receptores especficos da membrana da clula. Isto regula a frequncia e quantidade de colesterol que entra para a clula ou que fica em circulao. O conjunto do colesterol com a camada de fosfolpidos toma o nome de lipoprotena, doravante LDL.

Nas clulas que precisam de colesterol h ento receptores que reconhecem a parte proteica de LDL. A esses receptores esto associadas adaptinas (no meio intracelular) s quais se ligam as molculas de clatrina que, tal como nos processos de exocitose, puxa a membrana de forma a dar origem a uma vescula, desta vez endoctica. Nota: o ligando, o que se liga ao receptor membranar, a parte proteica da LDL (a apoprotena, ver imagem acima).

J no interior da clula a vescula endocitada funde-se, com a participao de protenas SNARE ou Rab, com um pr-lisossoma, formando um endossoma. No pr-lisossoma d-se uma baixa de pH, o que leva a que a ligao fraca e transitria do receptor ao ligando seja quebrada. Como esta ligao no covalente, uma diminuio do pH suficiente para a quebrar. Este processo permite um reaproveitamento dos receptores, que podem ser reenviados para a membrana evitando que o organismo tenha que produzir quantidades desnecessrias. Se os receptores no fossem desacoplados dos seus ligandos e

entrassem em contacto com as hidrolases dos lisossomas seriam imediatamente degradados, representando um desperdcio de matria essencial para a clula.

Devido a este processo, o que vai entrar em contacto com o lisossoma apenas e s a vescula que s contm LDL. J no lisossoma, os fosfolpidos que envolvem o colesterol so degradados e o colesterol livre consegue atravessar a membrana e passar para o citosol.

Este colesterol livre exerce uma aco de inibio sobre uma enzima de grade importncia: HMG-CoA trata-se da 1 enzima que actua na cadeia da biossntese de colesterol. O seu substracto o acetil-CoA. Como a funo da HMG-CoA produzir colesterol, percebe-se facilmente que na presena de colesterol livre a sua actividade seja inibida. Este um controlo essencial para quando ingerimos colesterol, de forma a que no haja colesterol em excesso na circulao sangunea.

Tudo isto porque colesterol em excesso em circulao tem tendncia a acumular-se e a depositar-se nas artrias, levando a ateroesclerose em particular ou a doenas coronrias em geral. O acumular de ateromas nas artrias faz com que estas fiquem, no limite, completamente obstrudas, impedindo a circulao a partir de determinado local, provocando isqumia nas clulas a jusante da obstruo. Uma consequncia tpica destes casos o enfarte do miocrdio.

E se o receptor membranar que tem especificidade para as LDL sofrer mutaes?

Se o receptor estiver mutado certamente no se ir estabelecer a ligao receptorligando. Isto ter como consequncia directa que o colesterol em circulao no ser endocitado. Se o colesterol no for endocitado, no existir colesterol livre no citosol para que a HMG seja inibida. Logo, no s a pessoa no consegue remover as LDL da corrente sangunea como o organismo se encarrega de produzir mais LDL e de as secretar.

Esta doena tem o nome de Hipercolestrolmia Familiar, uma doena autossmica recessiva, que pode levar ao aparecimento de doenas coronrias prematuras. uma doena no muito rara, presente desde a infncia pois que gentica. Por vezes o diagnstico no feito atempadamente j que no hbito controlar os nveis de colesterol de uma criana. A teraputica passa pela toma de estatinas, umas molculas inibidoras da HMG-CoA, o que restabelece, dentro do possvel e em conjunto com uma dieta adequada, a concentrao de colesterol na corrente sangunea. Ao inibir-se a aco da HMG o nosso organismo no produzir colesterol, ou seja, o colesterol em circulao ser somente o que for ingerido.

Aula 20

Bloco Fentipo-Gentipo: Testes Genticos

Como se pode observar, s certas molculas podem atravessar a membrana celular (por difuso) como so exemplo: as pequenas molculas apolares, as pequenas molculas polares sem carga. Para outras, como os ies e molculas carregados, a membrana impenetrvel, ou por vezes, a sua entrada s se daria muito lentamente por difuso, assim recorre-se a protenas transportadoras para enviar estas molculas para o interior da clula. Testes genticos servem para diagnosticar mutaes que provocam determinados sintomas.

Canais inicos portes de entrada de um io para dentro e para fora da clula, ou esto abertos ou fechados. de realar que cada io possui o seu prprio canal. Ao contrrio dos transportadores, os canais no conseguem direccionar o fluxo de ies num s sentido. Transportadores decidem para que lado/sentido so enviados os ies, utilizando como se v na imagem o transporte activo.

Fibrose qustica Doena gentica autossmica recessiva (exige portanto a presena dos dois alelos mutados), mais frequente na populao caucasiana (1 em cada 25 pessoas portador, ou seja, 1 criana em cada 2500 nascimentos sofre de fibrose qustica). D-se devido mutao no gene que codifica a protena transportadora (canal inico) de cloro (fica inactivada). * Normalmente existe mais sdio fora das clulas e mais potssio no interior das mesmas, porque para alm dos canais, h transportadores activos que, com gasto de energia, levam Na para o exterior da clula e K para o seu interior, contra o gradiente de concentrao. Gradiente Electroqumico Diferena de concentraes de determinados ies intra e extracelularmente, que vai determinar qual o sentido do seu movimento (Hiper-Hipo). Como os canais de cloro esto associados aos canais de sdio, o seu no funcionamento vai inibir o funcionamento dos canais de sdio (que normalmente esto fechados, passando assim a ficar abertos), o que conduzir a uma acumulao excessiva de sdio no interior da clula em consequncia da abertura dos canais de sdio. Esquema consequencial: Mutao gene que codifica canais Cl (existentes na membrana celular) Canais Cl vo actuar sobre os Canais de Sdio Abertura dos Canais de Sdio Entra mais sdio para a clula por difuso (pois existe mais no exterior) Aumento Presso Osmtica Entrada de gua na clula (turgidez) Menos gua na matriz extracelular * Nas clulas no provocada lise, pois estas tm vrios mecanismos para resistir lise celular. Funcionamento da Bomba Sdio-Potssio:

1- Na+ liga-se Bomba. 2- Fosforilao da Bomba. 3- A Fosforilao leva a uma alterao de conformao e o Na+ libertado para o meio extracelular. 4- Liga-se o K+ Bomba. 5- Desfosforilao da Bomba.

6- A bomba regressa conformao original e larga o io K+ para o interior da clula. Quando uma soluo perde gua, aumenta o seu grau de viscosidade. Existem zonas do nosso corpo que ficam mais sensveis falta de gua no espao extracelular, nomeadamente as vias respiratrias. Mecanismo da doena nos pulmes: Sabemos que as nossas vias respiratrias esto cheias de muco que, por sua vez ajuda a purificar/filtrar o ar que respiramos. Ao longo de toda a via respiratria, os clios (que se movimentam todos do no mesmo sentido) provocam uma corrente constante de muco desde os bronquolos ao nosso nariz e boca. Se o muco ficar mais viscoso, deixa de ser expelido para o exterior porque os clios no o conseguem mover. Deixa assim de desempenhar a sua funo de limpeza e purificao. Ficamos ento com um ptimo meio de cultura para todo o tipo de microrganismos. Isto leva a muitas e graves infeces respiratrias. Em situaes mais avanadas da doena, a acumulao de secrees tal, que existe uma quase total obstruo das vias respiratrias impedindo o ar de chegar aos pulmes. Mecanismo da doena ao nvel do pncreas: H um outro rgo cujo funcionamento tambm depende da fluidez dos fluidos que por l passam, o pncreas (rgo responsvel pela produo de insulina). O suco pancretico produzido no pncreas e libertado no duodeno. Leva com ele enzimas importantes para a degradao e absoro de gorduras. Se o suco pancretico ficar mais espesso, no drena para o duodeno, fica antes acumulado nos canais pancreticos, d-se assim uma menor degradao e absoro de gorduras e consequentemente de vitaminas lipossolveis, tais como vitaminas A, D, E e K. Carncia de vitamina A implica diminuio da viso nocturna. Carncia de vitamina D leva a problemas de ossos (raquitismo). Carncia de vitamina E leva a alteraes da pele. Carncia de vitamina K (factor de coagulao) potencia aparecimento de hemorragias. Sintomas: -Infeces respiratrias graves. -Secrees espessas. -Muco nas vias respiratrias. -Diminuio de gua no lquido extracelular. Os Cuidados so Paliativos, no curam a doena, apenas diminuem a sua expresso. Antibiticos para combater a infeco. Fisioterapia para ajudar a expelir o muco. Que tipo de mutao que inactiva os canais de cloro?

Mutao ao nvel da estrutura da protena, que vai conduzir alterao da sua conformao. Os canais de Cloro localizam-se na membrana celular e alm desta, existem tambm nas membranas dos lisossomas. Funcionamento de um lisossoma: O Lisossoma possui o pH do seu meio cido, pois possui transportadores de H+ para o seu interior. Esse pH cido dos lisossomas especfico para o tipo de enzimas que possuem, pois s funcionam a pHs cidos. Esta condio, funciona como mecanismo de proteco e segurana, pois impede em caso de rebentamento de um lisossoma que as suas enzimas comecem a degradar tudo o que lhes aparecer frente.

Mutaes que poderiam resultar em consequncias semelhantes s da fibrose qustica: Se a protena do canal de sdio tiver uma mutao na parte hidrofbica no ir ficar transmembranar (alterao da sua conformao), tambm ir resultar em problemas como os da fibrose qustica, apesar de no caso da fibrose qustica a mutao gentica ser diferente. Existe ainda a hiptese de ocorrer uma mutao no centro activo da protena e por esse motivo determinado canal ficar fechado (alterao conformacional). O que acontece no caso da fibrose qustica? Devido a uma mutao na protena (Canal de Cloro), a sua conformao alterada (apesar desta alterao de conformao no significar perda de funo), no conseguindo esta sair do Retculo Endoplasmtico. Esta alterao na sua estrutura (ficou mal-enrolada) vai desencadear por parte do retculo a produo de uma protena de correco, protena de chaperone, que vai actuar sobre a protena defeituosa deixando-a apenas seguir para o Aparelho de Golgi quando estiver com a conformao adequada. Nos doentes com fibrose qustica as protenas nunca chegam a adquirir a conformao normal, ficando portanto retidas nas chaperones. Assim a doena resulta no da inactivao da protena, mas da impossibilidade total do seu funcionamento, no chega a ter oportunidade de funcionar, pois nem sequer chega membrana, fica antes retida no retculo.

As mutaes que ainda hoje se verificam aconteceram por acaso mas perpetuaram-se at aos dias de hoje.

Aula 21

BLOCO VII Relao Fentipo-Gentipo Testes Genticos 1. Fibrose Qustica/Cstica

Esta uma doena autossmica-recessiva.

A partir do momento em que sabemos a causa gentica da doena, podemos olhar para o nosso genoma e aferir se somos portadores da mutao que provoca a doena. Por exemplo, ao decidirem ter um filho, antes de ocorrer a gravidez, os progenitores podem fazer um despite da doena.

Imaginemos agora que a um casal deu positivo para Fibrose Cstica, ou seja, so ambos portadores da mutao.

Cabe ao mdico inform-los sobre tudo o que possvel de ocorrer no futuro, no entanto a deciso no sua, e deve dar espao ao casal para que possam tomar a deciso por eles mesmos.

O casal tem ento algumas hipteses por onde enveredar; Pode ento: a) Decidir no procriar b) Arriscar e testar posteriormente se o feto portador da doena (sendo que o feto tem probabilidade de 1 em 4 de vir a ser doente); sendo doente o casal pode optar por deixar nascer a criana ou abortar c) Fazer um Diagnstico Pr-Implantatrio

Este procedimento j se faz em muitos centros e tem tido bons resultados.

Consiste ento em... a) Fazer o teste gentico ao nvel do ovo j fecundado ? No. Para fazer o teste

necessrio destruir a clula para testar o genoma, e ir-se-ia ento destruir o zigoto.
b)

Fazer fertilizao in vitro ? (Pouco eficaz- So necessrios muitos vulos para que se

consiga que um seja fertilizado.)

Aps fecundao, o ovo comea-se a dividir, ainda in vitro, at chegar a um blastocisto. Retira-se-lhe ento uma clula e testa-se essa clula (est comprovado que no vai lesar ou interferir com o futuro embrio, a dita remoo).

Embries livres da doena so implantados...e que fazer aos embries cujo teste deu positivo?

Deciso tica- h quem equicompare, o facto de se deitar fora os embries cujo teste deu positivo, a uma interrupo voluntria da gravidez. Tal deciso diz apenas respeito ao casal, e como (futuros) mdicos no podemos interferir nessa tomada de deciso.

Com a possibilidade de fazer este tipo de diagnstico, surge ento uma questo: a longo prazo, poderamos erradicar as doenas genticas? Teoricamente, possuimos meios para poder limpar os genes mutados, no entanto, na prtica supe-se que tal no seria possvel. Existe actualmente na nossa sociedade uma srie de questes ticas que tm de ser tomadas a nvel individual; Tome-se por exemplo o caso de uma mulher com cancro que deseja engravidar. Sabe-se que a radioterapia destri os gmetas, logo se iniciasse imediantamente o tratamento corria riscos de no conseguir engravidar. Antes de iniciar o tratamento, sugerem-lhe a hiptese de fazer fertilizao in vitro e procederse de seguida ao congelamento dos embries ou antes de congelar os seus vulos (sendo que clinicamente est comprovado ser mais vivel o congelamento dos embries). Que fazer ao embries que no decidir implantar? E caso os progenitores no estejam mais juntos, a quem pertencem os embries?..

H que ter em conta que cada sociedade se rege pelas suas prprias regras, e que existem casos em que se uma pessoa quiser tomar uma deciso que no aceite/permitida na sua sociedade, pode-se deslocar a um outro pas e fazer a escolha que individualmente tomou (ex. EUA so dos pases mais liberais quanto tomada deste tipo de decises).

Captulo 19- Sex and Genetics

A maioria dos organismos procariotas reproduzem-se por replicao do seu material gentico, e consequentemente as duas clulas filhas que da se originam possuem material gentico igual entre si e igual clula que lhes deu origem- so cpias/clones do organismo original. Este tipo de reproduo no induz variabilidade gentica.

A evoluo deu preferncia variabilidade a partir da altura em que , algures, os microorganismos usaram genoma de 2 indivduas para proriar (sem sexo no se induz variabilidade).

Na nossa reproduo, usa-se genomas de 2 indvduos diferentes. de notar ainda que existe uma grande assimetria no nmero de gmetas (1 vulo, centenas de espermatozides, e apenas 1 entra).

A maior parte do nosso corpo formado por clulas somticas- so clulas diplides, em que para cada gene temos duas cpias (cromossomas homlogos). Os organismos diplides tm ento, para se reproduzir, de recorrer a um processo de reduo do material gentico- meiosereduz o n de cromossomas para metade, de forma a que as clulas que participam na reproduo sejam haplides. A fecundao, em que o material gentico dos dois progenitores se funde, origina um ovo ou zigoto- clula diplide. Esta clula vai-se dividir por sucessivas mitoses, levado ao crescimento do embrio, e acabando por originar um indivduo adulto.

Este indivduo possui dois tipos de clulas. Clulas somticas- nascem e morrem com o indivdo, e no passam para a descendncia (por exemplo, mutaes que ocorram nos genoma das clulas somticas no passam para o genoma da descendncia) e clulas da linha germinativa- so as nicas clulas do nosso organismo que se dividem por meiose, originando clulas haplides-originam os gmetas- (mutaes que ocorram no genoma das clulas da linha germinativa vo passar para a descendncia).

Os humanos possuem 46 cromossomas, cada cromossoma uma molcula de DNA. Temos 23 pares de cromossomas homlogos, em que 22 so pares autossmicos e 1 heterossmico ( o nico par de cromossomas que diferenciam dos restantes dependendo do sexo do indivduo).

Os gmetas, clulas haplides, so originados por meiose; a fertilizao origina uma clula diplide, com 2 cromossomas, um cpia da me e outro cpia do pai.

A variabilidade introduzida no se fica pela pela mistura de cromossomas dos prgenitoresfenmeno de crossing-over- troca de partes de cromossomas entre o cromossoma que veio da me e o cromossoma que veio do pai (num mesmo progenitor, para formao dos seus gmetas) ocorre na meiose para formao dos gmetas (vulo ou espermatozides).

Ao longo de um cromossoma, temos vrios genes.

posio ocupada por um dado gene damos o nome de locus (plural: loci). Dois alelos so duas formas diferentes de um mesmo gene (ex um gene F existe sob vrias formas (sem mutaes)- formas variantes; um gene F seu alelo).

Podemos ento dizer que um alelo uma forma alternativa de um gene.

Est

comprovado

que

quanto

mais

afastados estiverem dois genes um do outro, maior ser a probabilidade de esses dois genes trocarem, ocorrendo

recombinao no cromossoma por troca entre esses dois genes - crossing over.

No

quadro

acima esto

expostos

dois

processos de diviso celular: a meiose e a mitose, onde se podem observar as

diferenas e semelhanas entre ambos. Na meiose, 1 clula diplide vai originar 4 clulas haplides. Neste processo podem ocorrer alguns danos, na separao dos cromossomas por exemplo. Teremos por exemplo um gmeta com 2 cromossomas 21. Um vulo que resulte ento da fecundao

desse vulo, ter 3 cromossomas 21- Trissomia 21.

Designamos ento de aneuploidia existncia de clulas, tanto da linha geminativa como clula somticas, que possuem cromossomas a mais ou em falta.

Aula 22

Doenas Hereditrias

Noo de diploidia: Em cada clula somtica do nosso organismo sabemos que temos, para cada gene, uma cpia proveniente do pai e uma cpia proveniente da me. Assim, sabemos que as nossas clulas somticas so diploides. Para cada locus temos um gene que codifica uma caracterstica, sendo que cada gene pode ter formas variantes, os alelos. importante retr que esses alelos tanto podem ser variantes polimrficas benignas, como genes mutantes que levem ao aparecimento de doenas.

Pegando novamente na noo de diploidia, torna-se fcil partir para outras definies: Homozigotia e Heterozigotia. Quando um indivduo possui dois alelos diferentes para um mesmo gene, diz-se que Heterozigtico para o alelo X, por exemplo; Por oposio, quando um indivduo possui dois alelos iguais para um mesmo gene, este Homozigtico para o alelo Y, por exemplo.

Como j foi estudado, as doenas hereditrias podem ser Autossmicas (nos autossomas), Heterossmicas ou ligadas ao sexo (nos cromossomas sexuais), Dominantes ou Recessivas.

Se tivermos a pergunta Esta doena autossmica ou ligada ao sexo?, sabemos que ela pode ser respondida atravs de outra pergunta: A doena manifesta-se igualmente em ambos os sexos?

Caso a dvida seja Esta doena dominante ou recessiva?, devemos perguntar se os progenitores da descendncia afectada tambm manifestam a doena.

Nota: O 1 sinal de que estamos na presena de uma doena hereditria a histria familiar.

Esquema:

Manifesta-se em ambos os sexos?

Filhos doentes e pais sos?

SIM

NO

SIM

NO

Autossmica

Ligada ao sexo

Recessiva de certeza

Dominante ou recessiva

Mas do ponto de vista molecular o que que est na origem das doenas dominantes ou recessivas? Recessiva: Por exemplo, uma mutao faz perder a funo de uma protena, num alelo. O outro alelo ainda garante alguma produo de enzima, logo, o indivduo afectado vive com menos quantidade de protena mas sobrevive, pois o alelo normal assegura a produo e expresso necessria.

Neste caso a protena mutada no interfere com a protena normal, apenas se regista uma perda de funo. Uma perda de funo est sempre associada a uma doena recessiva, j que essa alterao no se sobrepe normalidade.

J por outro lado, numa doena dominante: Uma protena ganha nova funo ou fica mais activa do que na sua forma normal. Basta que exista um alelo com essa mutao para que a nova actividade se manifeste, interferindo com a actividade manifestada pelo alelo normal. Neste caso, a expresso da mutao sobrepe-se expresso do alelo normal, representando um ganho de funo. Neste tipo de situaes basta a presena de um alelo para essa alterao se fazer sentir, razo pela qual estas mutaes esto na origem de doenas dominantes.

Mdulo VIII
Homem e Mulher: Diferenas genticas

Sabemos que, a partir das diferentes contribuies de cada gmeta na fecundao, homens e mulheres tm capacidades diferentes de transmitir genes descendncia. Por exemplo, a transmisso de mitocndrias para a descendncia assegurada apenas pela me (por razes que iro ser discutidas na aula seguinte).

Diferena entre cromossoma X e Y:

Se numa fecundao tudo correr bem, ou seja, dois gmetas haplides se fundirem e formarem um ovo diplide tudo indica que o desenvolvimento do novo ser no

apresentar problemas. Porm, existem situaes em que tal no acontece: por razes alheias fecundao o zigoto apresenta um nmero errado de cromossomas no seu genoma total. Esta condio denomina-se aneuploidia. Assim, aneuploidia representa uma situao de erro

no nmero de cromossomas do zigoto, tanto para mais como para menos. Veremos em seguida alguns exemplos. Estas alteraes numricas devem-se fuso de gmetas cuja quantidade gentica que transportavam j no era a certa. Isto pode acontecer por falhas de diviso ao nvel das diferentes fases da meiose: uma no disjuno de cromossomas homlogos (na anafase I) ou uma no disjuno de cromatdios (na anafase II).

Sabemos ento que um ovo sem cromossoma sexual, fundindo-se com um espermatozide normal, dar origem a um zigoto 0X ou 0Y, conforme a informao transmitida pelo pai.

Existem ainda outros sndromas conhecidos:

S. Turner (45, X): , claro, um caso de aneuploidia onde o zigoto apenas recebe um cromossoma sexual, o X.

S. Klinefelter (47, XXY): novamente um caso de aneuploidia sendo que, desta vez, o zigoto ter recebido mais cromossomas do que os necessrios.

Nota: As aneuploidias no so erros numricos apenas ao nvel dos cromossomas sexuais; um caso de trissomia 21 tambm uma aneuploidia.

Vejamos agora as seguintes frases:

A presena de um nico cromossoma X torna a pessoa homem. FALSO

Ter em conta o sndroma de Turner.

A presena de um cromossoma Y torna a pessoa homem. VERDADEIRO

Ter em conta os casos normais de XY e o sndroma de Klinefelter. (sendo que homem=testculos. Ahahah)

A presena de dois cromossomas X torna a pessoa mulher. FALSO

Ter em conta sndroma de Klinefelter.

A ausncia de Y torna a pessoa mulher. VERDADEIRO

Ter em conta a normalidade XX e o sndroma de Turner.

portanto a presena do cromossoma Y que define o sexo, pois que o cromossoma Y que possui os genes encarregues do desenvolvimento dos testculos.

J sabemos que o cromossoma X apresenta grandes diferenas do cromossoma Y. Porm, essas diferenas so to grandes (e iro ser discutidas depois) que um embrio Y0 pura e simplesmente invivel. A monossomia do cromossoma sexual, apresentando apenas um Y, no compatvel com a vida.
Cromossoma X: possui cerca de 2500 genes.

Cromossoma Y: possui cerca de 70 genes.

No ento difcil de analisar e reparar que uma mulher (XX) ter muito mais genes que um homem (XY). Portanto, em teoria, a quantidade de protena produzida na mulher tambm ser muito superior, o que se traduzir por uma grande diferena de quantidade de protena expressada entre os sexos. Ateno que isto apenas teoria!

Na verdade o que acontece que, nas mulheres, uma das cpias do X silenciada, de forma a alcanar-se o mesmo nmero de genes activos no homem e na mulher.
Nos mamferos, uma das cpias do X silenciada. (nas fmeas, obviamente)

Nas moscas a produo de protena amplificada a partir do cromossoma X nos indivduos do sexo masculino. Assim tambm se consegue igualar a quantidade de protena expressada em ambos os sexos, sendo que desta feita por excesso e no por defeito, como nos mamferos.

Um caso diferente o dos aneldios. Estes seres so hermafroditas, o que faz com que algumas clulas tenham gentipo prprio de um macho e outras de uma fmea. Assim, as clulas fmeas (XX) reduzem para metade a produo de protena em cada um dos cromossomas X, igualando-se s clulas macho cujo gentipo XY.

Agora, a grande questo: Como que se faz esta inibio? Ao 10 dia da embriognese cada uma das clulas que j constitui o embrio ir sofrer uma inactivao de um dos cromossomas X. Este processo totalmente ao acaso, sendo que em algumas clulas o cromossoma X materno que fica activo e noutras o cromossoma X paterno. O cromossoma inactivado sofre uma compactao, o que impede que a RNA polimerase se lhe ligue. Isto justifica o facto do cromossoma X inactivo no ser transcrito. Ateno que este processo S ocorre nas mulheres.

Percebe-se ento que a partir desse dia cada uma das clulas descendentes ir ter apenas um ou outro cromossoma X activo.
Por isso se diz que as mulheres apresentam um mosaico gentico, ou seja, algumas clulas expressam um cromossoma e outras expressam outro. Esta diferente expresso gentica pode ser visualizada com as tcnicas certas de imunomarcao. Num teste desses torna-se fcil perceber que as mulheres no so geneticamente homogneas no que toca expresso do cromossoma X.

Doenas ligadas ao sexo

Daltonismo: deficincia de protena na retina ( na retina que transformado o impulso luminoso em impulso nervoso)

Existem dois tipos de protena na retina: uma que sensvel aos estmulos luminosos no geral, permitindo-nos ver a preto e branco e a protena que nos

permite ter viso nocturna; outras protenas que so sensveis a comprimentos de onda especficos, sendo que a afeco surge mais comummente nas que distinguem o verde do vermelho.
Hemofilia: Alterao no factor VIII, um factor de coagulao. Distrofia muscular de Duchenne: as pessoas no tm mobilidade Atrasos mentais Calvice

Estas doenas manifestam-se essencialmente nos homens, estando associadas a perdas de funo proteica. Tero ento um comportamento recessivo.

Porm, depois de estarmos a par da inibio da expresso de um dos cromossomas X nas clulas da mulher, poder uma mulher portadora de uma doena das acima mencionadas ser completamente assintomtica?

No fundo uma questo de sorte e de probabilidades. Se a mulher portadora porque um dos seus cromossomas X possui o alelo mutado para certa doena. Em teoria, metade das clulas da mulher portadora teriam o cromossoma com o alelo mutado activo, enquanto que a outra metade teria o cromossoma saudvel activo. Mas isto uma questo de estatstica.

Tomemos um exemplo concreto de uma patologia ao nvel do fgado, cuja origem est numa mutao do cromossoma X. So 10 as clulas que do origem ao fgado; depois da inactivao dos cromossomas X das 10 clulas, estatisticamente existiriam 5 clulas com o cromossoma mutado activo e outras 5 com o cromossoma normal activo. Mas, se por acaso, 8 das 10 clulas que originam o fgado tiverem o alelo mutado activo, a mulher no ser completamente assintomtica.

Isto faz-nos ver que a expresso de uma doena ligada ao sexo, numa mulher, no tem s que ver com a natureza da doena (recessiva ou dominante) nem com a sua homo ou heterozigotia para essa doena. O acaso da inactivao de uns ou outros cromossomas X em todas as clulas , por si s, um factor determinante.

Aula 23

Bloco VIII
A Mitocndria serve essencialmente para gerar energia atravs da Fosforilao Oxidativa. The Cell 10-1 parte 1 A mitocndria possui no seu interior cristas que permitem aumentar a rea onde se realiza a fosforilao oxidativa. Existindo assim, um maior rendimento deste conjunto de reaces. O nmero de mitocndrias varia de tipo de clula para tipo de clula, consoante seja necessria mais ou menos funo respiratria. Clulas Somticas: 5000-10.000 mitocndrias Ocito Maduro: 200.000 mitocndrias Espermatozide: 50-75 mitocndrias Cada mitocndria pode ter vrias molculas de DNA mitocondrial (2 a 10 molculas). O genoma mitocondrial circular, relativamente pequeno e no tem intres e existe uma quase ausncia de regies no codificantes. Nas mitocndrias, os nucleides so molculas muito condensadas. The Cell 10-2 DNA mitocondrial DNA Nuclear 46 DNA nuclear: -46 molculas de DNA diplide por cada clula somtica. DNA mitocondrial: -cadeia circular. -possuem apenas 16 Kb . -poucas regies no codificantes. -possuem genes que codificam 13 polipptidos da cadeia respiratria. -No possuem genes que codifiquem RNA polimerase que servem para a replicao.

Esta ausncia de polimerases no mtDNA exige que muitas subunidades, protenas necessrias replicao, expresso e OXPHOs, sejam codificadas por genes nucleares, sendo estas protenas, transferidas do ncleo ao longo da evoluo. Os complexos da membrana da mitocndria tm subunidades codificadas por DNA mitocondrial e por DNA nuclear. Hiptese Endossimbitica: A Hiptese Endossimbitica (incorporao de microrganismos) explica o aparecimento das mitocndrias a partir da endocitose de bactrias com grande capacidade respiratria por parte de outras baterias anaerbias, num mecanismo em tudo muito semelhante endocitose. Esta teoria apoiada por alguns argumentos: -DNA mitocondrial apresenta-se na forma circular (Genoma circular) -Origem discreta de replicao -Dupla membrana -Similaridade de genes (mtDNA e alfa-proteobactrias)

Proteona mitocondrial: i) Protena codificando DNA mt e sintetizada na mitocndria. ii) Protenas codificadas por genes nucleares, traduzidas em ribossomas no citosol.

Esquema 1:

Protena precursora ainda em formato linear transporta um sinal reconhecimento do sinal pelo receptor alinhamento dos canais a protena passa directamente para o lmen da mitocndria retirada a sequncia sinalizadora.

Herana Uniparental Materna Hereditariedade de DNA mitocondrial

Na fecundao s o ocito contribui com o citoplasma, onde esto as mitocndrias. O espermatozide contribui apenas com o ncleo, apesar de, por vezes, poder haver alguma segregao de mitocndrias paternas, s que a existir so logo prontamente destrudas (destruio activa). The Cell 14-42 Caractersticas do DNA mitocondrial, e da maneira como transmitido descendncia: -Sistema haplide e no recombinante que passado em bloco descendncia (linhagem materna). -Elevada taxa de mutao em resultado da ausncia de histonas protectoras e de mecanismos de reparao do DNA mitocondrial.

A maior mutao de DNA mitocondrial comparativamente com o DNA nuclear poderia ser comprovada com a seguinte experincia: Retirar de um indivduo em determinado momento da sua vida, e num local especfico, DNA nuclear e DNA mitocondrial, e analis-lo. Anos depois, voltar a recolher as mesmas amostras de DNA do stio em questo, comparando o nmero de mutaes no DNA nuclear, com o nmero de mutaes no DNA mitocondrial. Assim, irio-se observar mais mutaes no DNA mitocondrial, do que no nuclear, j que este possui um vasto leque de mecanismos de reparao e correco de DNA. -Este organelo (mitocndria) sofre muita aco de stress oxidativo. Tendo esses radicais de oxignio aco mutagnica. (maior metabolismo mais ROs) Aplicaes do conhecimento das mitocndrias Anlise de indivduos relacionados por via materna: -Anlise de Parentesco Associao de mutaes particulares a um grupo de indivduos. -Identificao Individual (Embora de valor limitado em casos forenses) Situao exemplo: Crime: Mulher e filho de 4 anos assassinados Suspeito: Ex-namorado da mulher Prova: Cabelo encontrado no local do crime Recorre-se anlise de mtDNA por se tratar de uma amostra reduzida (Esta tcnica usando mtDNA permite recuperar mltiplas cpias) Compara-se ento o mtDNA prova com o mtDNA do suspeito, resultando desta comparao uma probabilidade de aquele mtDNA ser o mesmo que o do Suspeito. Nesta comparao, atende-se possibilidade de existir o exacto perfil da amostra no resto da populao. Notas a reter: -Na maior parte das vezes estes testes so inconclusivos. - raro ter resultado inequvoco. Existem vrias Doenas mitocndriais Conceito de Eva mitocondrial: mulher da qual todos ns descendemos (sentido lato). Em termos mais especficos, pensa-se que toda a populao actual possui uma mitocndria descendente de um grupo restrito de mulheres nossas ancestrais (200.00 anos) Este facto constitui um grande sucesso evolucionista da nossa histria, estando como bvio, relacionado com a Histria Demogrfica da Humanidade.

* Nota: No necessrio que o DNA mitocondrial provenha da primeira mulher no planeta, pois vrios ramos de seres humanos (exemplo: Homem de Neandertal) no sobreviveram evoluo natural, terminando a algumas linhagens de mtDNA. Existe um paradoxo semelhante para o cromossoma Y Ado Y

Aula 24

Bloco IX - DOS GENES AO ORGANISMO

As clulas estaminais, clulas indiferenciadas e totipotentes, provm do ovo. As clulas hematopoiticas, tm origem na medula espinhal, e so as clulas precussoras de todas as clulas do sangue, tais como os linfcitos- as clulas precussoras dos linfcitos so os linfoblastos. Por exemplo, j os neurnios, so clulas nervosas que provm dos neuroblastostodas estas clulas tm uma clula ancestral apenas- o ovo. Ento, como que a partir de um ovo se chega a um organismo multicelular e com clulas to diferentes (que realizam diferentes funes e se localizam em diferentes partes do nosso organismo)? Todas as clulas de um mesmo organismo tiveram origem numa clula ancestral comum (ovo), e portanto possuem todas o mesmo material gentico (os mesmos genes). Em diferentes clulas, uns genes esto activos e outros esto silenciados, resultando numa expresso gnica diferencial para diferentes tipos de clulas-diferenciao celular (mas ateno: no h perda de material gentico)- o que diferencia duas clulas diferentes so os genes que esto activos/silenciados. Esta noo foi comprovada graas a experincias feitas no campo da clonagem . Como se pode observar na imagem abaixo, foram retiradas clulas da pele de um sapo adulto, s quais foi retirado o seu ncleo. Paralelamente, a um ocito, foi destrudo o seu ncleo por exposio a radiao UV, e foi nele injectado o ncleo retirado de uma clula da pele do organismo adulto (no houve fertilizao- ocito- tem ncleo haplide, ao contrrio das clulas da pele do organismo adulta que tm clulas diplides), dando origem a um indivduo adulto.

A clonagem acima descrita designa-se de clonagem por transferncia de ncleos; um exemplo muito conhecido o da ovelha Dolly. Foi ento possvel compreender que o ncleo de uma clula somtica dentro de um ocito dar origem a um novo organismo. Tal s possvel se o material gentico do ncleo transferido esteja intacto. O ovo (uma clula apenas) d origem a um organismo adulto (10 12 clulas). Ao longo do desenvolvimento embrionrio, ocorrem os processos de diviso e diferenciao celular. PELE: O estrato crneo (poro da epiderme que est em contacto com o ar) constitudo por clulas mortas (queratinizado), que esto constantemente a ser renovadas.

Ento, de onde surgem as novas clulas? Quais as clulas que se dividem para dar origem a essas novas clulas? Estas surgem da diviso celular das clulas da juno dermo-epidrmica, e vo como que migrando, por constante remoo das clulas mais exteriores, indo renovar a epiderme.

Na epiderme, existem umas clulas designadas de clulas de langerhans, que tm como funo produzir respostas imunitrias no epitlio da pele. As clulas mais abundantes no tecido conjuntivo so os fibroblastos; de entre as suas funes temos a produo de fibras de colagnio e matriz extracelular.

INTESTINO: Epitlio Simples, constitudo por clulas vivas (absoro de nutrientes)- vilosidades intestinais.

No caso do epitlio intestinal, as clulas esto constantemene a

sofrer foras mecnicas devido passagem do bolo alimentar, e por isso, descamam. Esto constantemente a ser

renovadas - ento necessria a produo de novas clulas.

As clulas que se vo dividir para dar origem a novas clulas tm de estar em zonas mais protegidas do epitlio se o epitlio as perdesse, no se conseguiria renovar e acabaria por morrer. Assim, no nosso organismo, as clulas que se vo dividir para dar origem a novas clulas esto em zonas mais protegidas (no caso do epitlio intestinal- criptas, e no caso do epitlio da pele- juno dermo-epidrmica). As clulas somticas ao longo de toda a sua vida tm a capacidade de se reproduzir. Quando o fazem, do origem a uma clula estaminal e a uma clula em diferenciao.

No incio do desenvolvimento embrionrio, todas as clulas so iguais-clulas estaminais embrionrias so pluripotentes, pois tm a capacidade de dar origem a clulas que se vo diferenciar em tipos muito distintos de clulas.

Nos rgos, h um tipo de clulas estaminais mais especficas, que daro origem a um tipo alargado de clulas. Ex:.Clulas hematopiticas: clulas percurssoras de clulas do sangue; nascem na medula ssea.

Porqu das Medicina?

a clulas

importncia estaminais em

Prende-se com a em por termos exemplo

sua utilizao mdicos, para reposio de

clulas patologicamente destrudas.

A utilizao das clulas estaminais em medicina baseia-se num princpio muito promissor (estas podem dar origem a uma qualquer clula do organismo), no entanto, hoje em dia ainda no possvel controlar to especificamente a diferenciao dessas clulas - problema.

A verdade que conseguimos reproduzir clulas diferenciadas..mas passar de uma clula diferenciada a um tecido, um excerto de pele,um excerto de msculo cardaco (quando por exemplo ocorre enfarte do miocrdio), ainda no foi possvel.

CLONAGEM: actualamente feita clonagem em Humanos.

...mas, cuidado!

Relativamente a este conceito, preciso ter conta a distino entre clonagem teraputica e clonagem reprodutiva.

Na clonagem reprodutiva os embries so implatados numa fmea da espcie em causa e do origem a um ser vivo. Por exemplo, a ovelha Dolly foi o primeiro mamfero a ser clonado. Este tipo de clonagem est j muito disseminado.

Actualmente, a clonagem humana possvel, e permitida apenas para fins teraputicos, no reprodutivos. Esta regida por estrictas regras e comisses de tica.

Caso Clnico: LEUCEMIA A leucema uma doena designada como um cancro do sangue. O tratamento desta doena passa por sesses de quimioterapia e radioterapia, que vo incidir sobre o local onde as clulas cancerosas so produzidas- clulas hematopiticas, produzidas na medula ssea. Como as clulas cancerosas so clulas produzidas na medula ssea (por clulas hematopoiticas), o tratamento vai atacar estas clulas, destrundo-as. Da a razo de ser necessrio um transplante de medula ssea (o tratamento que faz ser necessrio que seja realizado um transplante, e no a prpria doena).

CURIOSIDADES

Cordo Umbilical- Actualamente muitos so os casais que fazem criopreservao das clulas estaminais contidas no cordo umbilical dos seus filhos. Vantagem: So clulas do prprio indivduo, e o seu prprio sangue. Esta pode ser uma alternativa ao transplante de medula ssea, que o tratameto por assim dizer, mais comum nos cancros do sangue. Mas, se a utilizao de clulas estaminais na medicina ainda no conseguiu atingir os seus potenciais propsitos, porque que os pais, que tm dinheiro para o fazer, optam por preservar os cordes umbilicais dos seus filhotes? A resposta reside no facto de haver esperana de que a medicina de investigao l chegue! Em economia da Sade, no prioritria a criao de bancos de clulas estaminais pblicos, uma vez que h uma alternativa de tratamento- transplante de medula ssea.

Aula 25

Bloco IX - Dos genes ao Organismo

2 aula 7 de Janeiro 2010

Da aula anterior devemos relembrar que podemos usar o potencial e propriedades das clulas estaminais para reparar tecidos mortos. Contudo, apesar dos estudos j feitos ainda estamos muito limitados nesta rea do conhecimento. Essencialmente, h que tentar perceber o que que ao nvel dos genes responsvel por induzir a diferenciao das clulas estaminais.

Esta e as prximas aulas centrar-se-o nos Captulos 8, 16 e 20.

Colocam-se ento algumas questes: Como que a partir de uma sequncia de DNA conseguimos regular um gene? Como que essa regulao se processa? Ser que um gene, na presena de certa sequncia de DNA, ser expresso?

Expresso de um gene: transcrio do gene, traduo e consequente produo de protena activa. (muitas das vezes que um gene no expresso a protena produzida inactiva)

Sabemos ento que a regulao da expresso do DNA pode ocorrer a vrios nveis. Tomemos como referncia a seguinte figura:

Temos 6 momentos diferentes de possvel regulao. Vejamos:

1 Controlo de transcrio, ou seja, se o DNA ser transcrito ou no, como e com que frequncia. Caso seja transcrito ento teremos um RNA precursor.

2 Diferentes formas de processamento do RNA levam a que este possa sofrer mutaes e portanto ficar invivel ou, por outro lado, ser processado de forma a, depois, poder sofrer traduo.

3 Controlo de transporte e localizao do mRNA permite que sejam decididos que mRNA sero transportados do ncleo para o citosol.

4 Degradao selectiva de certos mRNA impede que todos os mRNA dem origem protenas. Nota: o tempo de vida do mRNA pode ser controlado. uma das bases deste tipo de regulao.

5 Seleco de quais mRNA sero traduzidos impede que todos os mRNA cheguem aos ribossomas, ou seja o acesso aos ribossomas pode ser controlado.

6 Controlo da actividade da protena, ou seja, activar ou inactivar as protenas produzidas, consoante as necessidades. Um dos tipos mais frequentes de activao a fosforilao.

1 Fase: Controlo de Transcrio

Relembrar que a RNA polimerase que faz a transcrio do DNA; esta enzima reconhece uma sequncia de DNA (o promotor) antes da sequncia codificante, local onde se liga para iniciar a transcrio. Porm, os promotores no actuam sozinhos: existem outras sequncias nucleotdicas que regulam a aco da polimerase.

Antes de aprofundar este tema, fiquemos com a definio de um novo conceito: Opero: Conjunto de genes regulados pelo mesmo promotor, sendo que a sua actividade conjunta, quando expressos, se dirige para um mesmo fim.

Tem-se como exemplo o conjunto de genes de E a A, os quais so transcritos como uma nica molcula de mRNA, permitindo que a sua expresso intergnica seja coordenada, levando produo de triptofano.

Este tipo de organizao e transcrio gnica muito frequente nas bactrias. Contudo, se nos apresentassem um fragmento de DNA exactamente deste tamanho, mas eucariota, no estariam l presentes 5 genes como no caso da bactria.

Isto deve-se ao facto de entre os genes eucariotas existirem muito DNA intergene que no tem gene, razo pela qual se diz que o genoma eucariota, por oposio ao procariota, no to compacto. Para alm disto, sabe-se tambm que dentro dos prprios genes existem sequncias no codificantes: isto faz com que, para alm de os genes serem mais espaados, sejam tambm maiores. Temos ento um genoma mais disperso que os procariotas.

No difcil de compreender que os seres multicelulares tm que recorrer ao controlo da expresso gnica para se poderem formar (cada tipo de clulas tem caractersticas prprias que advm do controlo da expresso gnica). Porm, num ser unicelular, como a bactria, necessrio que exista regulao dos genes? Claro que sim. partida poderamos pensar que no, pois no h diferenciao celular. Contudo, qualquer clula tem que responder aos estmulos do ambiente ligando ou desligando alguns genes, sendo que tal no mais que controlar a expresso gnica. Por exemplo, uma bactria capaz de produzir a enzima BETA-galactosidase que, por sua vez, degrada a lactose em galactose e glucose. Este um mecanismo importante para qualquer organismo, pois a galactose no uma fonte de energia metablica que possa ser directamente utilizada; requer portanto uma degradao prvia.

Ora, num meio onde haja glucose a bactria no ir gastar energia para produzir BETAgalactosidase, uma vez que j tem glucose que possa ser consumida. As bactrias tm ento um mecanismo de inibio ou activao de certos genes, prprio para solucionar as situaes como a acima descrita.

Esse mecanismo baseia-se na presena ou ausncia de certa substncia. Essa substncia inibir ou activar um repressor que, quando activo inibe a transcrio de certos genes. Voltemos ao exemplo da Lactose:

Promotor

Operador

Genes Estruturais

Protena inibidora

Lactose

Promotor: sequncia reconhecida pela RNA polimerase

Operador: sequncia reconhecida por uma protena que impede o avano da RNA polimerase. Genes Estruturais: quando activos produzem BETA-galactosidase Protena Inibidora: quando na sua forma activa liga-se ao operador

Quando no existe lactose no meio, a protena inibidora encontra-se activa e portanto liga-se ao operador. Assim, apesar da RNA polimerase estar ligada ao promotor, ela no se consegue movimentar para a frente e a transcrio no progride., o que impede um gasto desnecessrio na produo da enzima que degrada a galactose. transcrio no ocorre

Promotor RNA polimerase

Operador

Genes Estruturais

Protena inibidora

Por outro lado, quando a lactose est presente no nosso organismo, ela associa-se protena inibidora, o agente repressor, e muda-lhe a sua conformao. Com a conformao mudada a protena deixa de ser capaz de se ligar ao gene operador, permitindo que a transcrio decorra e que seja sintetizada a BETA-galactosidase, de forma a degradar a galactose presente. transcrio ocorre

Promotor RNA polimerase

Operador

Genes Estruturais

Protena inibidora Lactose

Notas: O conceito genes estruturais no foi usado em aula; eu lembro-me dele das aulas do 11 e 12 em Biologia. Existem substratos que, quando presentes, tm a aco contrria da lactose, podendo inibir a transcrio de certos genes ao activarem o repressor.

Resumindo, estamos a falar de interruptores da transcrio gnica: o repressor estar ou no ligado ao operador condiciona a transcrio. Este conceito existe amplificado nas nossas clulas.

Para cada gene nosso haver um operador (sequncia reguladora de transcrio), que poder estar muito longe do promotor, como se pode ver na figura. Porm, como o nosso DNA flexvel e no circular, essa distncia no representa um problema.

A RNA polimerase, nos eucariotas, precisa de vrias protenas auxiliares para que possa funcionar: os factores de transcrio. Estas protenas esto sempre presentes para auxiliar a transcrio.

Existe ainda o mediador: complexo proteico ao qual se ligam os factores de transcrio, os operadores, e os agentes reguladores, sendo que a sua funo realizar o interface entre todos eles. que como se ouvisse cada uma das opinies de cada um dos factores de regulao.

Nos eucariotas a transcrio no regulada apenas por uma protena mas sim por vrias.

Ter em ateno que assim que a transcrio comea a RNA polimerase segue o sentido da transcrio e o mediador, os factores e os reguladores ficampara trs, no acompanham a polimerase.

Mais uma vez, no esquecer que cada gene tem vrias sequncias reguladoras, (por oposio aos factores de transcrio, que so sempre os mesmos), sendo que esse efeito combinatorial das vrias protenas que regula a transcrio.

Pode ento dizer-se que a transcrio ocorre somente mediante a aprovao de cada uma das protenas controladoras.

Nota: TATA box o promotor eucariota, por definio.

Porm, o controlo da expresso dos genes tambm pode ocorrer a outro nvel: a compactao do DNA.

Se o DNA estiver demasiado compacto a RNA polimerase no consegue ligar-se nem progredir ao longo da cadeia, ou seja, no ocorre transcrio.

Muitas protenas regulam ento o nvel de compactao dos nucleossomas (nvel organizacional do DNA, composto por cadeia de DNA enrolada em histonas). Esta regulao passa pela alterao dos grupos qumicos das histonas para compactar mais ou menos as histonas, consoante os casos.

Assim, o controlo da expresso gnica tem como base: - protenas reguladoras + factores de transcrio + mediador - modificao das histonas / compactao dos nucleossomas Existem protenas que podem desempenhar uma das funes ou ambas.

Uma clula tem um certo destino consoante a aco de um factor de transcrio ou outro.

Consoante a protena (ou complexos proteicos) activa/os, a clula vai ter um conjunto de caractersticas morfolgicas, estruturais e funcionais diferente de outras clulas com outras protenas activas.

Esta seleco de protenas activas ocorre tanto durante a vida embrionria, originando a diferenciao celular, por exemplo, como durante a vida adulta, como resposta a estmulos do ambiente.

Vejamos este segundo aspecto:

Como que ocorre uma resposta transcricional a um estmulo do ambiente? Temos duas formas: - molculas sinalizadores que, por serem grandes e hidroflicas, so apanhadas por receptores de membrana (insulina, por exemplo, e protenas no geral) - molculas pequenas e hidrofbicas que penetram na membrana e so reconhecidas por receptores intracelulares, tanto no citoplasma como no ncleo. (esterides, por exemplo. Derivados do colesterol no geral)

A molcula que entra na clula recebida e reconhecida por um receptor, cuja conformao mudada no momento da ligao, passando a poder ligar-se sequncia de DNA que ir transcrever uma determinada protena necessria. Esse receptor mais o sinal funcionam como um factor de transcrio e, portanto, um agente regulador.

No caso dos receptores de superfcie, existe uma ligao entre o receptor e o sinal, levando a uma mudana de conformao do receptor, tornando-o activo. Esta mudana de conformao desencadeia sinais em protenas no interior da clula. A mensagem passada atravs de actividade cinsica, ou seja a capacidade de fosforilar outras protenas, activando-as. Um importante mediador desta actividade o AMP cclico, produzido pela adenilciclase. A protena cinase activada pelo AMP cclico, sendo que quando a cinase chega ao ncleo activa os factores de transcrio alvo. Mas como que um sinal do exterior pode alterar a compactao dos nucleossomas?

As histonas so protenas que contm muito de um aminocido, a lisina (K). Este aminocido, polar e de carga positiva, confere s histonas a propriedade de ter carga positiva (pela presena de grupos NH3+ da lisina). Acontece que o DNA (polar, carga negativa) quando prximo de histonas (situao dos nucleossomas) desenvolve uma atraco (devido presena

de cargas opostas). Porm, numa situao de transcrio do DNA este ambiente no nada favorvel actuao da RNA polimerase.

Existe ento um mecanismo que despolariza as histonas. Ao juntar-se um grupo acetilo a uma lisina, a sua carga altera-se, ou seja, uma lisina acetilada deixa de ser to atrada pelo DNA e, portanto, o DNA descompacta. A enzima que se encarrega da transferncia do grupo acetilo a Histona Acetil Transferase.
Depois desta reaco h ento um ambiente mais favorvel actuao da RNA polimerase.

Por outro lado, a Histona Acetilase retira os grupos acetilo das histonas. Nesta situao as histonas precipitam sobre o DNA e dificultam a actividade da polimerase, pois uma cadeia de DNA compactada no permite que a polimerase corra sobre ela. A regulao deste mecanismo d-se atravs de um sinal que entra na clula e que se liga a um receptor. Este receptor ir ligar-se ao DNA, sendo que esta ligao atrai a acetil transferase e, assim, d-se a transferncia de grupos acetil e consequente transcrio.

Aula 26

Bloco IX 3 Aula, 8 de janeiro de 2010

Na aula anterior foi estudado o primeiro mecanismo de regulao da expresso gentica: a transcrio do DNA. Hoje falaremos do segundo nvel de regulao: o processamento e splicing. Esta aula aborda contedos do captulo 7, 8 e 20.

Nos procariotas no h intres, o seu genoma mais compacto. Nos eucariotas as sequncias codificantes (exes) esto intercaladas e interrompidas por sequncias no codificantes, os intres.

De gene para gene, o tamanho dos intres sempre varivel, porm, o que sempre comum que os intres so sempre maiores que os exes. Para que o mRNA passe de mRNA precursor a mRNA funcional necessrio que lhe sejam removidas as sequncias intragnicas no codificantes, mais uma vez, os intres. Estas sequncias so removidas atravs de um processo denominado splicing, o que significa cortar e unir as pontas, como est expresso na figura abaixo.

Este processo levado a cabo por uma mquina: o spliceossoma. Existem sequncias nucleotdicas que codificam o incio/fim dos intres/exes.

Ou seja, todos os intres e exes comeam e acabam com certas sequncias de DNA, passveis de serem reconhecidas, funcionando portanto como sinalizadores. Dado que estas sequncias so reconhecidas por sequncias de RNA complementares existentes no nucleossoma, este mecanismo de reconhecimento assemelha-se ao emparelhamento codo/anti-codo prprio da traduo. Estas sequncias de RNA presentes no nucleossoma so de um tipo especfico de RNA: o Usn RNA. U por ser rico em uracilo, S de small e N de nuclear, j que este processo ocorre ainda antes de o mRNA migrar para o citosol. a associao de cada um destes Usn RNA a vrias protenas que constitui o spliceossoma. Se a remoo de intres se desse sempre da mesma forma, sempre os mesmo intres a serem removidos, no teramos a diversidade que temos. H ento que introduzir o novo conceito de splicing alternativo.
Num gene, os exes encontram-se intercalados por intres. Os intres podem ser removidos isoladamente ou podem arrastar exes consigo, dando origem a diferentes mRNA e, portanto, a diferente sntese proteica. Vejamos:

Intro 1

Exo 1

Intro 2

Exo 2

Intro 3

Exo 3

Exo 1

Exo 2

Exo 3

Se intro 1 + intro 2 + intro 3 forem removidos

Se intro 1 + intro 2 + exo 2 + intro 3 forem removidos

Pode haver ento sequncias de exes que sejam reconhecidas como intres e que, por isso, sejam removidas. Mas como que o splicing regulado? Sabemos que existe um diferente padro de escolha de splicing consoante o tipo de clula onde o RNA transcrito, pois as funes necessrias so tambm diferentes. Assim, o splicing alternativo, ao escolher combinaes alternativas de exes, um processo fisiolgico, donde um mesmo conjunto de exes no DNA pode dar origem a vrias combinaes de exes no RNA.

Caso esta escolha de exes apresente anomalias, estaremos na presena de doenas causadas por mutaes nas sequncias que codificam o fim ou o incio de exes/intres. A isto chama-se splicing patolgico. Voltando ao splicing alternativo, resta dizer que uma grande fonte de diversidade das clulas: se a transcrio selectiva j engloba diversidade, ento a mistura e novas combinaes daquilo que foi transcrito s exponencia a diversidade. Voltando questo j colocada mas ainda no respondida: como que o splicing regulado? Tal como a RNA polimerase no actua sozinha, o spliceossoma tambm no. Existem protenas reguladoras que conseguem reconhecer sequncias prprias de cada intro ou exo. Essas protenas determinam a especificidade da aco do spliceossoma. Como em diferentes clulas esto presentes diferentes protenas reguladoras (msculo cardaco diferente de msculo liso, por exemplo) o splicing regulado e ocorre em funo da das necessidades da clula em questo.

Aula 27

Captulo 18 e 16- Diviso Celular

Um organismo tem origem numa nica clula. Por diviso celular, essa clula vai-se dividir at dar origem totalidade de clulas que do origem a um organismo adulto. Mesmo assim, a diviso celular nunca pra (ex clulas sangue, da pele, etc.). O processo comea com uma clula diplide. Ocorre duplicao do seu material gentico e posteriormente uma diviso equatitativa do DNA (mitose)- fase durante a qual ocorre separao dos cromossomas duplicados. Fase G1 e G2 - Gap, ou seja, intervalo. So pontos de controle deste processo. A fase G1 ocorre entre a mitose e a fase S, e a fase G2, ocorre entre fase S e a mitose. Fase S - sntese- fase durane a qual ocorre duplicao do material gentico. Fase M - mitose+citocinese - fase durante a qual ocorre separao do material separao das duas novas clulas. gentico duplicado e

Fase G0 - Subfase da Fase G1, durante a qual a clula est em pausa.

Mesmo as clulas procaritas, como as leveduras, seguem este percurso encontram os bloqueios na estrada- e o futuro da clula depender do que a se passar. Exemplo de quando uma clula pode ficar pausada em G0- quando, por exemplo no caso das bactrias, as condies do meio no so propcias sua sobrevivncia, esta no se vai dividir.

Impe-se ento uma questo: se todos os rgos se estivessem constantemente a dividir, o rgo/tecido no seria estvel. ento necessrio que todas as clulas decidam criteriosamente de prosseguem com a diviso celular ou no.

O cancro uma doena que ocorre devido existncia de falhas no processo de controle da dviso celular.

As clulas humanas esto programadas para no proliferar na ausncia de sinais especficos entrar em diviso celular um processo activo (as nossas clulas precisam de receber esses sinasi para se dividirem).

Exemplo: Ferida na pele, que atinge a derme.

. Clulas pluripotentes, localizadas na interface entre a derme e a epiderme comeam-se a dividir (para reparar tecido em falta).

. Vai haver estimulao de fibroblastos. Estas clulas tm funo de produzir matriz extracelular e fibras de colagnio, e vo ser estimuladas a tal, para repararem o tecido conjuntivo danificado. . Como a ferida atingiu a derme, houve uma rotura nos vasos sanguneos. Vai haver uma estimulao para que se d a agregao das plaquetas (sempre que h uma quebra da continuidade de um tecido,de um vaso, as plaquetas estendem as suas fibras e coagulam).

As plaquetas so fragmentos de umas grandes clulas designadas de megacaricitos (localizam-se na medula ssea, junto das clulas precurssoras das clulas do sangue). Vo-se agregar nas regies lesadas da parede do vaso sanguneo, coagulado atravs da polimerizao do fibrinognio (uma protena plasmtica), que origina as redes de fibrina que aglomeram as plaquetas em torno da leso. As plaquetas vo tambm libertar um sinal que estimula as clulas do epitlio e os fibroblastos (a dividem-se e estes ltimos produzem fibras de colagnio e matriz extracelular); primeiramente comea-se a formar uma nova camada de epitlio.

REVISO RECEPTOLOGIA O sinal DE libertado pelas plaquetas designa-se de factor de crescimento (em ingls: PDGF- factor de crescimento derivado das plaquetas, neste caso). Molcula hidroflica fica no meio extracelular e liga-se a receptores na membrana celular

SINAL

Molcula hidrofbica entra dentro da clula liga-se a receptores intracelulares

O sinal que sai das plaquetas designa-se de factor de crescimento derivado das plaquetas (PDGF). Cada factor de crescimento tem um receptor prprio.

Pode-se colocar a questo: Como identificar clulas que respondem ao factor de crescimento x? Uma clula responder a um factor de crescimento x se tiver um receptor especfico na sua membrana para esse sinal.

O factor de crescimento derivado das plaquetas uma molcula hidroflica (no consegue atravessar as membranas celulares) e vai-se ligar ento a um receptor especfico localizado na membrana celular da clula-alvo- todos os factores de crescimento so pptidos. A ligao do factor de crescimento derivado das plaquetas ao seu receptor especfico vai activar o domnio tirosina-cinase (Nota: cinase uma molcula que tem a capacidade de fosforilar). Este domnio, como o nome indica, vai fosforilar as tirosinas que se encontram no prprio receptor membranar. O receptor, fosforilado, interage com outras protenas sinalizadoras ( e com funo cinsica, na sua maioria)- cascata de activao cinsica. Podemos observar na figura a existncia da protena RAS- codificada pelo gene RAS. Esta protena est presente em muitas clulas, e uma dita protena normal. Esta um componente essencial na via da cascata induzida pelo sinal (factor de crescimento). Uma mutao nesta protena pode levar a / favorecer o aparecimento de um cancro. Designase de protoncogene (protena normal) por isso mesmo: esta s favorece o aparecimento do cancro se estiver mutada (passando-se a designar de oncogene). Se no estiver, uma protena normal, exercendo a sua normal funo. (Professora Carmo sugeriu ver-mos associao das protenas membrana) A protena RAS est ligada a GDP (estado inactivo). Outro passo no processo de transmisso do sinal a passagem da RAS sua forma activa, pela transformao do GDP em GTP.

A activao da protena RAS vai desencadear uma cascata de reaces. Importante saber que no fim, essas reaces levam activao do gene que vai produzir a protena ciclina. H vrios tipos de ciclinas. Cada ciclina activa outra cinase, uma cinase dependente de ciclina (CdK), no tempo apropriado, que por sua vez vai fosforilar reaces que controlam o ciclo celular. As ciclinas por si s no tm nenhuma funo enzimtica, mas estas tm de se ligar s protinas cinases do ciclo celular para que estas ltimas possam ficar activas- estas protenas cinases dependentes da ciclina so designadas de CdKs. A variao das concentraes de ciclina ao longo do ciclo celular, ajudam a guiar a activao dos complexos enzimticos que por sua vez vo desencadeiam vrios eventos no ciclo celular.

A quantidade de protena ciclina que produzimos durante o ciclo celular numa clula vai variando: a sua concentrao aumenta ao longo da interfase, atingindo o seu pico na mitose, decrescendo acentuadamente aps a mitose, sempre assim ciclicamente.

Ciclina M - baixa depois da mitose; a sua funo criar protenas necessrias mitose. Ciclina S a sua presena faz passar de G1 para fase S - esta ciclina vai activar genes que sintetizam DNA polimerase; a baixa de ciclina S marca o fim da fase S. Vemos que ento necessria e to importante no s a sntese de ciclinas, mas tambm a sua destruio. O destruidor mais comum o lisossoma, que degrada produtos endocitados ou produtos autofgicos que se encontrem dentro de um vacolo autofgico que se une ao lisossoma. (processo de autofagia: degradao dos prprios

componentes da clula)

MAS.. o que destri as protenas no o lisossoma, mas sim o proteossoma.

Como se pode observar na imagem 18.5, a ciclina sofre diminuies da sua concentrao abruptas. A que se deve tal acontecimento? Existem na clula complexos enzimticos especficos e cadeias de ubiquitina (molculas sinalizadoras) apropriados para cada ciclina. As ubiquitinas ligam-se s ciclinas, direccionandoas para o proteossoma para serem destrudas- as ciclinas so umas das protenas degradadas no proteossoma. (proteossoma: corta protenas em a.a.; cilindro=centro activo (entrada controlada)

Em resumo, a ciclina, ao ser ubiquitilada, direccionada para o proteossoma onde vai ser destruda. A sua destruio vai implicar consequentemente a inactivao da CdK correspondente, o que vai ter outras repercusses a nvel do ciclo celular.

Aula 28

Ciclo Celular e regulao

As clulas normais no se dividem a no ser que recebam sinais para o fazer. Alteraes neste mecanismo de controlo esto na origem dos cancros. Existem vrios (2 aqui apresentados) mecanismos de controlo da proliferao Celular:

Regulao atravs da protena RTK Os factores de crescimento so pptidos reconhecidos por receptores que desencadeiam um conjunto de fosforilaes sucessivas. A protena RTK activada, sendo esta responsvel por activar a protena Ras. O Gene Ras codifica a protena Ras que essencial na activao de outros genes atravs de fosforilaes sucessivas. Via de activao de ciclina Para activar o complexo Cdk ciclina necessrio por um lado que a protena seja fosforilada num local especfico, e por outro que seja desfosforilada noutros dois stios, sendo estas aces realizadas por cinases. A ciclina, como vemos abaixo, cclica, sendo produzida e degrada, existindo vrios tipos de ciclina, cada um associado a diferentes fases da mitose.

A Funo do complexo Ciclina S-CdK fosforilar a protena Rb inactivando-a, permitindo que esta mude a sua conformao, desligando-se do regulador de transcrio que inibia, passando este (regulador de transcrio) agora a estar activo. Assim, fica livre para activar os genes necessrios para a proliferao celular (Activao da DNA polimerase, iniciando-se a replicao do DNA). So passos de regulao, como este, que definem os timings da diviso e replicao de uma clula.

Aps a transcrio dos genes para a replicao de DNA, a ciclina degradada. * A protena Rb aparece muitas vezes mutada em cancros. Ciclina Mittica (Ciclina-M) agora acumulada, sendo fundamental, tal como a Ciclina-S, neste caso para os fenmenos mitticos.

Protena Ras O gene que codifica esta protena um proto-oncogene (gene responsvel pelo controlo da diviso celular). Como tal, muito perigoso quando mutado, pois pode ficar bloqueado na forma activa (oncogene), ficando a protena Ras sempre ligada ao GTP, estando constantemente a estimular a clula para se replicar (Enviar sinais para a clula entrar na fase S).

No entanto, uma mutao numa destas vias de regulao da proliferao celular no forosamente causadora de cancro, pois temos outras vias a enviar os sinais adequados para a clula se replicar ou dividir. Assim, por exemplo, em caso de mutao no proto-oncogene Ras, onde esse passa a oncogene, apesar de enviar sinais para a clula se replicar, esta no obedece pois as cinases no vo activar o complexo M-cdK. Mutao no gene Rb O gene Rb pode ser inactivo por factores de crescimento como j vimos atrs, mas pode acontecer tambm a sua inactivao por mutaes. Sendo o gene Rb no seu estado normal um Supressor de Tumores, muito perigoso que este seja mutado no sentido de ficar inactivo, perdendo as suas funes de regulao. Este tipo de mutaes, como as nos proto-oncogenes est na gnese de inmeros cancros. Mutaes muito perigosas que esto na origem do Cancro: Mutao que activa os proto-oncogenes (oncogenes); Mutao que inactiva os supressores tumorais;

Regulao celular pela p53 (Mecanismo de controlo de qualidade do DNA) A clula quando se encontra na fase G1, s avana para a fase S quando no apresenta leses (mutaes) no seu DNA e quando recebe os sinais exteriores adequados. Causas das mutaes: Radicais livres, erros na replicao, radiao ionizante, qumicos, etc. A protena p53 serve, em traos gerais, para detectar se h algum problema com o DNA da clula. A p53 tem um tempo de vida muito curto Os Mecanismos de Reparao do DNA verificam se este se encontra em condies, atravs da medio de distncias entre as duas cadeias da dupla hlice. O local onde h uma maior distncia entre as duas cadeias onde se encontra o nucletido alterado. Mecanismo de aco da p53

So esses prprios Mecanismos de Reparao de DNA que vo contribuir para a activao da protena p53, tornando-se esta estvel A protena p53 estvel liga-se ao gene p21 A partir desse gene produzida uma protena que vai inibir o complexo G1/S-Cdk e S-Cdk (j formadas, esquema abaixo). Esquema muito simples: Factor de crescimento Forma-se Ciclina Complexo Cdk protena S. Como actua a ciclina de Fase S? * Rever mitose (Etapas e Acontecimentos) A cromatina compactada possibilita por um lado que o DNA seja mais fcil de dividir, por outro, que este no consiga ser transcrita pois encontra-se empacotado e associado a histonas. Principais alteraes na fase Mittica: -Formao do Fuso Acromtico: O Fuso Acromtico tem como principal funo puxar os cromossomas. Esquema: Centrolos Centrossomas Fuso Acromtico (Microtbulos) -Condensao do DNA: As condensinas formam um anel volta do DNA ajudando a enrollo atravs da juno das fibras de cromatina.

O Complexo Ciclina M-Cdk fosforila protenas Desagregao do invlucro nuclear (Membrana Nuclear e Lmina nuclear) * Esta desagregao reversvel e d-se em Profase para os Microtbulos entrarem em contacto com o DNA.

D-se depois a inactivao do Complexo Ciclina M-cdK, votando-se assim a juntar as peas. Centrmero Zona de DNA. Cinetocor Zona placa proteica de Microtbulos.

Mtodo de colorao aqui utilizado: -Imunofluorescncia - Centrmero (mais propriamente o cinetocor) foi reconhecido por um anticorpo marcado com fluorescncia. -No caso do DNA utilizada a tcnica de hibridao in situ, usou-se para isso uma zona para a regio de DNA em causa.

Aula 29

Para cada clula chega o momento de morrer

Existem duas formas de morte celular: Necrose Apoptose Necrose: Morte celular no programada (no fisiolgica), abrupta que pode resultar de: Leso traumtica (mecnica, queimadura, etc.) Apoptose: Morte celular por Suicdio ou por morte celular programada (Como o cair das folhas no Outono) Exemplo de leso que provoca morte celular: Enfarte do miocrdio Clulas do miocrdio morrem por asfixia (Necrose) Posteriormente morrem outras por apoptose. Linfcitos Normais Mecanismos Apoptticos Fragmentao do ncleo e do citoplasma da clula, duma forma programada e sequencial. As clulas em apoptose vo ser reconhecidas pelo processo de limpeza do organismo, os macrfagos, que as iro fagocitar. Os componentes reciclados vo servir para fazer novas clulas graas interveno dos lisossomas. Estamos assim a falar de uma morte esperada, programada, desejada e limpa para as clulas. Mecanismos Necrticos: D-se o rebentamento da clula, com a consequente libertao de todo o seu contedo intracelular (citoplasma, organelos, enzimas, etc.) para o meio extracelular, gerando assim um mau estar nas clulas vizinhas. A Resposta Inflamatria * resultado, entre outros motivos, da deteco de clulas em necrose atravs da alterao do meio extracelular em volta dessas clulas

* Calor, Rubor, Edema, Sensibilidade e Dor (aumento da [] de glbulos brancos na regio em

causa, maior afluxo sanguneo e consequentemente aumento da temperatura).

A) Necrose B) e C) Apoptose

Fosfatidilserina passa para a superfcie Por dia num indivduo adulto morrem 50-70 mil milhes de clulas por apoptose. Num ano a destruio de clulas equivale massa total do nosso corpo.

Quando ocorre apoptose? Desenvolvimento embrionrio (mo e p so inicialmente uma massa completa onde vo ser desenhados os dedos devido morte de algumas clulas por apoptose); Menstruao (Destruio do endomtrio); Destruio das clulas do Sistema Imune; Destruio de clula afectadas por vrus; Destruio de clulas com alteraes no DNA;

O Mecanismo Apopttico regulado pelas protenas intracelulares da famlia da Bcl2 Dentro desta famlia de protenas existem protenas que activam e outras que inibem as prscaspases, destacando-se a Bak e a Bax como iremos ver mais frente. Estas protenas indicam clula quando devem ou no entrar em apoptose. Antes de mais, as Caspases so Proteases suicidas. Encontram-se geralmente na forma inactiva (proenzima inactiva Pr-Caspase). A sua activao d-se atravs de um sinal que lhes indica que devero entrar em apoptose, clivando-as. Uma caspase activa ter a capacidade de activar outras molculas de caspase, dando-se assim a clivagem de vrios componentes da clula. Mitose Fragmentao temporria e reversvel da Lmina nuclear, da qual faz parte o invlucro nuclear, atravs da fosforilao das lminas nucleares. Apoptose Fragmentao definitiva e da Lmina nuclear, atravs da aco das caspases que cortam irreversivelmente as lminas nucleares

Tipo de sinal que activa as caspases: Em caso de leso do DNA, esta detectada pelo sistema de reparao do DNA que mede a distncia entre as cadeias, enviando um sinal, que se o DNA no for reparada a tempo, levar a clula a entrar em apoptose. Esquema: Leso Maquinaria de Reparao do DNA consegue corrigir bem o DNA, desaparecendo o sinal de alerta. Ou Leso Maquinaria de Reparao de DNA no consegue reparar o DNA, o sinal mantm-se activo Bloqueio na passagem de G1 a S (clula fica em G0) como o sinal continua a ser emitido so activadas as protenas na Parede da mitocndria (Bax e/ou Bak) Abertura da membrana atravs de Canais Sada do Citrocrmio C Activao do Apoptossoma (Complexo 6) Activao das prs-caspases a caspases.

A protena p53 muito importante nos mecanismos de controlo de erros no DNA, sendo portanto de vital importncia clnica, pois a sua alterao pode implicar o aumento da susceptibilidade ao aparecimento de cancros, visto ser esta protena um Supressor Tumoral. Alteraes nesta protena podem provocar que as clulas possam estar permanentemente a adquirir mutaes sem que estas sejam corrigidas, ou que a clula mutada entre em apoptose.

Esquema dos mecanismos de activao e de aco da p53:

Clulas de um organismo multicelular Cada clula s sobrevive se for necessrio e divide-se apenas quando preciso originar outra clula, este conceito de necessidade advm dos estmulos enviados pelo nosso organismo a cada uma das clulas que o constituem. Assim, temos simultaneamente clulas a dividirem-se e a morrerem duma forma programada (apoptose). A clula depende de sinais externos (por exemplo factores de sobrevivncia) Activam a transcrio do Bcl-2 Mantm as prs-caspases inactivas No h apoptose * Sinal de leso de DNA sobrepe-se ao sinal das Bl2. Caso clnico relacionado: Mutao no gene que codifica a protena Bcl2 nos linfcitos Existncia de um excesso de linfcitos, visto no morrerem naturalmente por apoptose. Esta acumulao progressiva de linfcitos leva ao aparecimento de cancros, principalmente no sangue, causados por esta inibio da apoptose.

Sinais extracelulares recebidos pelas clulas: - Factores de Crescimento - Mitognicos - Factores de crescimento