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ANALISIS MICROBIOLOGICO

CENTRO INTEGRADO DE FORMACIN PROFESIONAL AVILS Anlisis de: E.COLI

1CFGS LABORATORIO DE ANLISIS Y CONTROL DE CALIDAD CURSO 2 1!"2 1#

Nombre: Iaki Ruiz Domn uez Fe!"a #e$ an%$i&i&: '()*+),*'-

1. ANALIS MICROBIOLGICO..................................................................................3 1.1. ESCHERECHIA COLI. ....................................................................................3 Escherichia coli O157:H7....................................................................................3 Pa o!e"ia.........................................................................................................# $ir%le"cia.......................................................................................................# I"&eccio"es %ri"arias........................................................................................# 'ra a(ie" o......................................................................................................# Clasi&icaci)"......................................................................................................# *. 'OMA +E M,ES'RA...........................................................................................5 3. MA'ERIALES ,'ILI-A+OS...................................................................................5 #. ME+IOS............................................................................................................ 5. PROCE+IMIEN'OS.............................................................................................7 .. CRONOGRAMA.................................................................................................1/ 7. Res%l a0os......................................................................................................11 7.1. Res%l a0os e" el cal0o 0e 1ilis 2er0e 3Sie(1ra4..............................................11 7.*. Res%l a0os e" el cal0o 0e 1ilis 2er0e 3Resie(1ra4...........................................1* E" los %1os 3514: 3 ',BOS SON POSI'I$OS 3+es6re"0i(ie" o 0e !as e" la ca(6a"a 0%rha( 7 %r1i0e84..............................................................................................1* E" los %1os 35*4: 3 ',BOS SON POSI'I$OS 3+es6re"0i(ie" o 0e !as e" la ca(6a"a 0%rha( 7 %r1i0e84..............................................................................................1* E" los %1os 3534 * ',BOS SON POSI'I$OS 3+es6re"0i(ie" o 0e !as e" la ca(6a"a 0%rha( 7 %r1i0e84..............................................................................................1* 7.3. I" er6re aci)" 0e res%l a0os........................................................................1* Los res%l a0os ha" si0o 6osi i2os e" c%a" o a la sie(1ra9 7a :%e "os ha" sali0o al 6ie 0e ; %1os 6osi i2os co" (<s 0e %" ercio 0e !as e" ca(6a"a a0:%iere %"a 6osi i2i0a0 a"al= ica re(arca1le 6or lo a" o "os ha" sali0o ; %1os 0e >9 (ira0o e" a1la 0e NMP "os ha" sali0o 1.1// !er(e"es 6or (L 0e (%es ra a%":%e es e 2alor es a6ro?i(a0o9 es %" res%l a0o 6osi i2o. Rese(1ra"0o e" BGBL 0%ra" e >*h a @ a(1ie" e 33/AC4 7a :%e 6or "ecesarie0a0es 0e a!e"0a 3 %2o :%e es ar >*h a @ a(1ie" e4 al rese(1rar ras >.h e" los %1os rese(1ra0os "os ha" sali0o el (is(o "B(ero 0e %1os ;9 :%e e" la resie(1ra el (is(o "B(ero 7 los (is(os. Al 6re6arar a!ar e i"c%1ar "os ha" 0a0o res 6lacas co" creci(ie" o 6o e"cial 7a :%e ha1ia ca(1ios 0e color 0o"0e ha1ia creci(ie" o a%":%e "o ha1=a %" 2er0e (e <lico carac er=s ico 0el E.Coli 7a :%e la e(6era %ra i0eal 6ara E.Coli es ##95A 7 0os lec %ra al 6ri(er 7 se!%"0o 0=a. Al ha1er i"c%1a0o (<s 7 (e"or e(6era %ra "o "os ha 0a0o E.Coli "os ha 0a0o E" ero1ac er=a :%e (as o (e"os ha 0e es ar a 31A 6ara :%e se 6ro0%8ca s% creci(ie" o. 'res 6lacas "os ha" sali0o 1ie" 7 las 0e(<s co" cier o creci(ie" o rela i2a(e" e i"&erior. He(os hecho %"a ira API :%e "o he(os hecho 6ara es a 6rac ica si"o 6ara a6re"0er 6ara la 6ro?i(a 2e8. ,sa"0o &ichas ira a6i 7 0e(<s.........................................................................................1* 7.#. Gr%6o 0e ra1aCo........................................................................................1* 7.5. Se!%i(ie" o 0el A"<lisis..............................................................................13 ;. ANEDO II........................................................................................................1# ME o0o 0e (%es reo.........................................................................................1# 'a1la..............................................................................................................1. 0e 0a os NMP..................................................................................................1. ;.1. Nor(a i2a:................................................................................................1; ;.*. Bi1lio!ra&=a................................................................................................1;

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1$ ANALIS %ICROBIOL&GICO
1.1. ESCHERECHIA COLI.

La Escherichia coli (pronunciado /eske'rikia 'koli/), tambin conocida por la abreviacin de su nombre, E. coli, es quiz s el or!anismo procariota m s estudiado por el ser humano. "e trata de una enterobacteria que se encuentra !eneralmente en los intestinos animales, # por ende en las a!uas ne!ras, pero se lo puede encontrar en todos lados, dado que es un or!anismo ubicuo. $ue descrita por primera vez en %&&' por (heodore von Escherich, bacterilo!o alem n, quien la denomin )acterium coli. *osteriormente la ta+onom,a le ad-udic el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor. Esta # otras bacterias son necesarias para el .uncionamiento correcto del proceso di!estivo, adem s de producir las vitaminas ) # /. Es un bacilo que reacciona ne!ativamente a la tincin de 0ram (!ramne!ativo), es anaerobio .acultativo, mvil por .la!elos peritricos (que rodean su cuerpo), no .orma esporas, es capaz de .ermentar la !lucosa # la lactosa # su prueba de 12314 es 5566. Es una bacteria utilizada .recuentemente en e+perimentos de !entica # biolo!,a molecular. La Escherichia coli, en su h bitat natural, vive en los intestinos de la ma#or parte de los mam,.eros sanos. Es el principal or!anismo anaerobio .acultativo del sistema di!estivo. En individuos sanos, es decir, si la bacteria no adquiere elementos !enticos que codi.ican .actores virulentos, la bacteria act7a como un comensal .ormando parte de la .lora intestinal # a#udando as, a la absorcin de nutrientes. En humanos, la Escherichia coli coloniza el tracto !astrointestinal de un neonato adhirindose a las mucosidades del intestino !rueso en el plazo de 8& horas despus de la primera comida. Escherichia coli O157:H7 9rt,culo principal: Escherichia coli ;%'<:=< La Escherichia coli ;%'<:=< es una de las cientos de cepas de la Escherichia coli. 9unque la ma#or,a de las cepas son inocuas # viven en los intestinos de los seres humanos # animales saludables, esta cepa produce una potente to+ina # puede ocasionar en.ermedades !raves como el s,ndrome urmico hemol,tico. La Escherichia coli ;%'<:=< .ue reconocida inicialmente como causa de en.ermedad en %>&? durante un brote de diarrea a!uda con san!re en EE. @@. "e determin que el brote se deb,a a hambur!uesas contaminadas. Aesde entonces, la ma#or,a de las in.ecciones han provenido de comer carne de vacuno picada insu.icientemente cocinada. El escritor Bobin 4ook escribi una novela sobre el tema titulada (o+ina. En %>>C, cerca de "eattle se produ-o un brote a causa de esta bacteria, que se encontr en botellas de zumo de manzana de la marca ;dDalla 1nc.. 2uchas personas, entre ellas bebs # niEos, murieron despus de tomar este zumo. La bacteria entr en las botellas porque las manzanas que se e+primieron conten,an e+crementos de venados de la zona # no hubo nin!7n tipo de pasteurizacin. "e di.erencia de las otras Escherichia coli en que no .ermenta el sorbitol, no crece a 88 F4 # no produce G6 !lucoronidasa. La combinacin de letras # n7meros en el nombre de la bacteria se re.iere a los marcadores anti!nicos espec,.icos que se encuentran en su super.icie # la distin!ue de otros tipos de Escherichia coli: El ant,!eno som tico ;, proveniente del lipopolisac rido de la pared celularH El ant,!eno .la!elar =, compuesto por <' polisac ridos.

El !rupo de ries!o comprende pr cticamente a todas las personas, inmunocompetentes o no. Los niEos menores de ' aEos de edad con problemas de alimentacin, as, como los ancianos son los m s susceptibles de su.rir complicaciones !raves.

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Patogenia La Escherichia coli puede causar in.ecciones intestinales # e+tra intestinales !eneralmente !raves, tales como in.ecciones del aparato e+cretor, v,as urinarias, cistitis, menin!itis, peritonitis, mastitis, septicemia # neumon,a 0ram6ne!ativa. Virulencia La Escherichia coli est dividida por sus propiedades virulentas, pudiendo causar diarrea en humanos # otros animales. ;tras cepas causan diarreas hemorr !icas por virtud de su a!resividad, pato!enicidad # to+icidad. En muchos pa,ses #a hubo casos de muerte por esta bacteria. 0eneralmente le pasa a niEos entre % aEo # & aEos. 4ausado !eneralmente por la contaminacin de alimentos, # posterior mala coccin de los mismos, es decir, a temperaturas internas # e+ternas menores de <I F4. Infecciones urinarias 9rt,culo principal: 1n.eccin urinaria "on m s comunes en mu-eres por la corta lon!itud de la uretra (?' a 'I mm, o bien % a ? pul!adas) en comparacin con los hombres (unos %' cm, o unas < pul!adas). Entre los ancianos, las in.ecciones urinarias tienden a ser de la misma proporcin entre hombres # mu-eres. Aebido a que la bacteria invariablemente entra al tracto urinario por la uretra (una in.eccin ascendente), los malos h bitos sanitarios pueden predisponer a una in.eccin, sin embar!o, otros .actores cobran importancia, como el embarazo, hipertro.ia beni!na o mali!na de prstata, # en muchos casos el evento iniciante de la in.eccin es desconocido. 9unque las in.ecciones ascendentes son las causantes de in.ecciones del tracto urinario ba-o # cistitis, no es necesariamente esta la causa de in.ecciones superiores como la pielone.ritis, que puede tener ori!en hemat!eno. rata!iento El uso de antibiticos es poco e.icaz # casi no se prescribe. *ara la diarrea se su!iere el consumo de abundante l,quido # evitar la deshidratacin. 4uando una persona presenta diarrea no debe ir a traba-ar o asistir a lu!ares p7blicos para evitar el conta!io masivo. En al!unas patolo!,as como la pielone.ritis ha# que considerar el uso de al!una ce.alosporina endovenosa. Clasificaci"n

2icro!ra.,a electrnica, de ba-a temperatura, de un c7mulo de bacterias E. coli ampliado %I.III veces. 4ada cilindro redondeado es un individuo. "e distin!uen seis cepas se!7n su capacidad pat!ena, 6tambin se les puede llamar virotipos6: Escherichia coli enteropato!nica (E4E*), enteroto+i!nica (E4E(), enteroinvasiva (E4E1), enterohemorr !ica (E4E=), enteroa!re!ativa (E4E9) # de adherencia di.usa (E49A).

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Escherichia coli entero#atog$nica %ECEP& Esta cepa causa diarrea en humanos, cone-os, perros # caballos, al i!ual que la enteroto+i!nica, pero la etiolo!,a # los mecanismos moleculares de colonizacin son di.erentes. 4arece de .imbrias # no produce las to+inas "( # L(, pero utilizan la prote,na intimina, una adhesina, para adherirse a las clulas intestinales. Este virotipo posee una serie de .actores de virulencia que son similares a los que se encuentran en "hi!ella, como la to+ina shi!a. La adherencia a la mucosa intestinal causa una reordenacin de la actina en la clula hospedante, que induce una de.ormacin si!ni.icativa. Estas bacterias son moderadamente invasivas: penetran en las clulas hospedadoras provocando una respuesta in.lamatoria. La causa principal de diarrea en los a.ectados por esta cepa son se!uramente los cambios provocados en la estructura de las clulas intestinales. Escherichia coli enteroto'ig$nica %ECE & "e parece mucho a 3ibrio cholerae, se adhiere a la mucosa del intestino del!ado, no la invade, # elabora to+inas que producen diarrea. Jo ha# cambios histol!icos en las clulas de la mucosa # mu# poca in.lamacin. *roduce diarrea no san!uinolenta en niEos # adultos, sobre todo en pa,ses en v,as de desarrollo, aunque los desarrollados tambin se ven a.ectados. Emplea varias to+inas, inclu#endo la enteroto+ina resistente al calor # la enteroto+ina termol bil. Escherichia coli enteroin(asi(a %ECEI& Es inmvil, no .ermenta la lactosa. 1nvade el epitelio intestinal causando diarrea san!uinolenta en niEos # adultos. Libera el calcio en !randes cantidades impidiendo la solidi.icacin sea, produciendo artritis # en al!unos casos arterioesclerosis. Es una de las E. coli que causa m s daEo debido a la invasin que produce en el epitelio intestinal. Escherichia coli enterohe!orr)gica o (eroto'ig$nica %ECEH& La convencin internacional de nomenclatura de pat!enos ha recomendado el uso de "(E4 ("hi!a (o+in Escherichia coli) para este !rupo, debido a que estas bacterias producen una to+ina citot+ica para clulas 3ero de cultivo de similaridad estructural a la to+ina producida por "hi!ella d#senteriae. Las "(E4 producen veroto+inas que act7an en el colon. "us s,ntomas son: primero colitis hemorr !ica, lue!o s,ndrome urmico hemol,tico (lo anterior m s a.eccin del riEn, posible entrada en coma # muerte), # por 7ltimo, p7rpura trombocitopnica trombtica (lo de antes m s a.eccin del sistema nervioso central). Esta cepa no .ermenta el sorbitol # posee un .a!o, donde se encuentran codi.icadas las veroto+inas, tambin llamadas K(o+inas "hi!aK, no posee una .imbria .ormadora de mechones, en vez de esto posee una .imbria polar lar!a que usa para adherencia.

2$ TO%A DE %UESTRA La .oma #e mue&.ra &e "a rea$iza#o #e /urn #e !aba$$o& #e Luar!a 0A&.uria&1 !$ %ATERIALES UTILI'ADOS P$a!a& Pe.ri 0-21 A&a& #e Siembra Amari$$a& Pi/e.a& Pa&.eur Pi/e.a& e&.eri$iza#a& 3a&o& #e /re!i/i.a#o& #e '** mL e&.eri$iza#o -2 Ma.raz Er$enme4er #e ,5* mL 67*8' e Ga&a&

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Pa/e$ #e A$ba$ Cu!"ari$$a& 52 3ari$$a& a i.a#ora& Cam/ana& Dur"am '(2 Gra#i$$a& Tubo& #e En&a4o Tira& API ,*E Li9ui#o API ,*E

#$ %EDIOS Para '( .ubo& #e en&a4o !on !am/ana Dur"am: 0,* .ubo& /or &i a!a&o1 ' .ubo #e en&a4o $$e:a '* mL /or .an.o /ara ,* .ubo& ne!e&i.amo& ,** mL:

A ar Le:ine:

Para - /$a!a& Pe.ri e.i9ue.a#a&:

DILUYENTE A ua #e Pe/.ona ;P

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+ .ubo& #e en&a4o <n .ubo #e en&a4o $$e:a '* mL /or .an.o + .ubo& ne!e&i.amo& = -* mL a/ro2> a/ro2>

($

)ROCEDI%IENTOS

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Incubar 24/48h

INCUBAR DURANTE 24/48h en estu ! t"!s h!#e" "e$$en!%& !$'e&$&s %e t("!s API )&n !*u! + t("! )&n $(,u(%& -.s s(e-#"!

IDENTIFICACION MEDIANTE TABLAS DE IDENTIFICACIN Y FINALIZACION DE LA PRCTICA

FIN

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6.

CRONOGRAMA
MEDIOS DE C<LTI3O C<LTI3O % 9@(; 4L93E ? LE4(@B9 PREPARACIN DISTRI?<CION SIEM?RA INC<?AR 9utoclavar ?I minutos a %?%N4 L ;(B;" Esterilizar pipetas en estu.a # desechar materiales como pueden ser matraces.

A19 %

8ImL de M* %IImL de )0)L m s campanas Aurham por tubo

DIA ,

Pre/aro /i/e.a& !on a ua #e e&.an9ue /ara &embrar en ;P 'mL>

Po&.erior a $a &iembra "a o nue:e nue:o& .ubo& #e ?G?L !on !am/ana Dur"am>

Siembra #e 'mL #e mue&.ra en .ubo #e en&a4o ')'* De$ .ubo ')'* a $o& .ubo& ')'** 4 ')'*** :o4 #i$u4en#o !on #i&.in.a& /i/e.a& e&.eri$iza#a& en e&.u@a> De&/ue& &iembro en $o& A .ubo& #e ?G?L #e menor a ma4or !on!en.ra!iBn> RESIEM?RA: Re&iembro !on a&a& #e &iembra #e $o& ( .ubo& /o&i.i:o& a $o& nue:o& ( .ubo& ne!e&ario& #e ?G?L>

In!ubamo& a e&.u@a a +'CC !on $e!.ura a ,-)-("

Au.o!$a:ar A nue:o& .ubo& #e ?G?L !on !am/ana& Dur"am #uran.e ,* minu.o& a ','CC

De&e!"o re&i#uo& 0e$ a ua #e /e/.ona e& un re&i#uo 9ue "a #e au.o!$a:ar&e 4 #e&e!"ar&e en e&.e mi&mo #a1 4 $o& re&.an.e& me#ian.e au.o!$a:e 4 e$imina!iBn>

DIA +

Pre/aro A ar Le:ine en un ma.raz er$enme4er8 $o me.o a$ au.o!$a:e8 $o !a$ien.o en bombona> Pre/aro A .ubo& #e ?G?L !on !am/ana /ara #e&/uD& #e .Eambien.e /or &i a!a&o>

Incu*o a estufa +urante ,horas a te!#eratura estan+ar los tu*os rese!*ra+os

Au.o!$a:o re&i#uo& #e ?G?L>

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DIA -

Lo #i$u4o en /$a!a& e&.Dri$e& me#ian.e me!"ero ?un!"en8 e&.eri$izo 4 nombro $a& /$a!a& /e.ri 4 e&/ero a 9ue &o$i#i@i9ue e$ A ar>

Re&iembro en $a& /$a!a& $o& .ubo& 9ue me "a4an &a$i#o /o&i.i:o& #e $a re&iembra .ra& "aber e&.a#o a .E amb AF" 0no e>!o$i & en.eroba!.1

Au.o!$a:o re&i#uo& .a$e& !omo .ubo& #e ?G?L 9ue no "a4an &a$i#o>

Dia 5

Pre/aro .ira API 4 /ara@ina en !an.i#a# /ara $o& ru/o&> Ca$ien.o me#ian.e me!"ero 4 u&o /i/e.a& Pa&.eur8 e!"o Para@ina en GL<8ADI8<RE G GL< en .ira a/i>

Di&.ribu4o $a& /$a!a& /e.ri 4 e$ a&a #e &iembra /ara e$ $i9ui#o u.i$iza#o #e .ira& API8 #i&.ribu4o $a /ara@ina me#ian.e $a /i/e.a en $a .ira API>

In!ubo ,-)-(" #e $e!.ura a .Cambien.e /ara /o&.erior $e!.ura>

Au.o!$a:o /$a!a& /e.ri u.i$iza#a& en bo$&a !onHun.a a$ au.o!$a:e ,*min a ',*CC

Dia F

FINALIIACION DE PRACTICA MEDIANTE 3ALORACION DE TIRAS API

Au.o!$a:ar .ira& API8 4 #em%& u&a#o>

*$

Res+l,-d.s

7.1. Resulta+os en el cal+o +e *ilis (er+e %Sie!*ra& En los tubos (6%): L (@);" ";J *;"1(13;" (Aesprendimiento de !as en la campana durham # turbidez) En los tubos (6?): L (@);" ";J *;"1(13;" (Aesprendimiento de !as en la campana durham # turbidez) En los tubos (6L) ? (@);" ";J *;"1(13;" (Aesprendimiento de !as en la campana durham # turbidez) ?u&!amo& en $a .ab$a #e nJmero m%& /robab$e: El /es+l,-d. .0,enid. es de: 1$1 12/3enes"3L

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7... Resulta+os en el cal+o +e *ilis (er+e %Resie!*ra& En $o& .ubo& 07'1: + T<?OS SON POSITI3OS 0De&/ren#imien.o #e a& en $a !am/ana #ur"am 4 .urbi#ez1 En $o& .ubo& 07,1: + T<?OS SON POSITI3OS 0De&/ren#imien.o #e a& en $a !am/ana #ur"am 4 .urbi#ez1 En $o& .ubo& 07+1 , T<?OS SON POSITI3OS 0De&/ren#imien.o #e a& en $a !am/ana #ur"am 4 .urbi#ez1 Me "a re&u$.a#o e&a /o&i.i:i#a# aJn "abien#o re:i&a#o 9ue mnimo un .er!io #e $a !am/ana "a4a .eni#o .ra& $a in!uba!iBn #i!"o minimo #e .er!io #e a& #a#o> ?u&!amo& en $a .ab$a #e nJmero m%& /robab$e: El /es+l,-d. .0,enid. es de: 1$1 0Can.i#a# $B i!a 4 a!e/.ab$e1 12/3enes"3L

7./.

Inter#retaci"n +e resulta+os

Lo& re&u$.a#o& "an &i#o /o&i.i:o& en !uan.o a $a &iembra8 4a 9ue no& "an &a$i#o a$ /ie #e ( .ubo& /o&i.i:o& !on m%& #e un .er!io #e a& en !am/ana a#9uiere una /o&i.i:i#a# ana$.i!a remar!ab$e /or $o .an.o no& "an &a$i#o ( .ubo& #e A8 mira#o en .ab$a #e N%) n.s 4-n s-lid. 1$1 1e/3enes 5./ 3L #e mue&.ra aun9ue e&.e :a$or e& a/ro2ima#o8 e& un re&u$.a#o /o&i.i:o> Re&embran#o en ?G?L #uran.e A," a .E ambien.e 0+*CC1 4a 9ue /or ne!e&arie#a#e& #e a en#a 0.u:o 9ue e&.ar A," a .E ambien.e1 a$ re&embrar .ra& AF" en $o& .ubo& re&embra#o& no& "an &a$i#o e$ mi&mo nJmero #e .ubo& (8 9ue en $a re&iembra e$ mi&mo nJmero 4 $o& mi&mo&> A$ /re/arar a ar e in!ubar no& "an #a#o .re& /$a!a& !on !re!imien.o /o.en!ia$ 4a 9ue "abia !ambio& #e !o$or #on#e "abia !re!imien.o aun9ue no "aba un :er#e me.%$i!o !ara!.er&.i!o #e$ E>Co$i 4a 9ue $a .em/era.ura i#ea$ /ara E>Co$i e& --85C 4 #o& $e!.ura a$ /rimer 4 &e un#o #a> A$ "aber in!uba#o m%& 4 menor .em/era.ura no no& "a #a#o E>Co$i no& "a #a#o En.eroba!.era 9ue ma& o meno& "a #e e&.ar a +'C /ara 9ue &e /ro#uz!a &u !re!imien.o> Tre& /$a!a& no& "an &a$i#o bien 4 $a& #em%& !on !ier.o !re!imien.o re$a.i:amen.e in@erior> Kemo& "e!"o una .ira API 9ue no "emo& "e!"o /ara e&.a /ra!.i!a &ino /ara a/ren#er /ara $a /ro2ima :ez> <&an#o @i!"a& .ira a/i 4 #em%&>

7.4.

Grupo de trabajo

0ru#o 12!ero /: 2iriam Be!odesebes 1Eaki Buiz "andra 0arc,a 4armen 3alverde

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7.5.

Segui!iento +el An)lisis

Ke rea$iza#o $o& !%$!u$o& /ara mez!$a #e$ A ua #e Pe/.ona ;P !on mue&.ra #e /urn #e !aba$$o 9ue &e in.ro#u!ir%> Ka o #i$u!ione& #e!ima$e& a /ar.ir #e una mez!$a #e a ua #e&.i$a#a 4 '8*, #e ;P #e bo.e #e $abora.orio 4a 9ue "emo& "e!"o re $a #e .re& /ara !a$!u$ar$o /ara -*mL8 "a!emo& #i$u!ione& #e!ima$e& #e ;P en + .ubo&8 #e ')'*8 ')'**8 ')'***>En es,e d6- 17 -de3s 4e84. 4e84. 9 ,+0.s de BGBL ne8esi,e 4-8e/ 1 3L /or $o .an.o "i!e re $a #e .re& 4 /e&D - #e Ca$#o ?G?L 4 $o "omo enei!e8 in.ro#uHe A !am/ana& Dur"am en #i!"o& .ubo& #e ?G?L /ara /o&.erior ana$i&i&> In.ro#uHe a$ au.o!$a:e #uran.e a/ro2ima#amen.e '57,*min a ','CC 4 me.o a ne:era "a&.a e$ #a , #e$ /ro!e&o #e mi!robio$o a> El +3a . &e "a re!ibi#o $a mue&.ra #e /urn &iembro #i!"a mue&.ra en e$ .ubo ini!ia$ #e ')'* aa#o ' mL 4 "omo eneizo !on a i.a#or8 /ara "omo eneizar $o& AmL an.eriormen.e aa#i#o& #e ;P !on #i!"o mL aa#i#o #e mue&.ra !on.amina#a #e a ua e&.an!a#a #e$ .ubo ')'* "e /i/e.ea#o a$ .ubo ')'** o.ro mL 4 a& !on e$ .ubo ')'*** #e ;P8 !a#a @a&e "a &i#o !on #i&.in.a /i/e.a e&.eri$iza#a&> Con $a mi&ma 4 nue:a /i/e.a #e&#e $a menor a $a ma4or &iembro !on /i/e.a #e&#e $a ')'*** a $o& .re& .ubo& #e ?G?L !orre&/on#ien.e& en ra#i$$a8 e&.eri$izan#o> A& !on&e!u.i:amen.e "a&.a @ina$izar $o& A .ubo& #e ?G?L 6 !am/ana> In.ro#uz!o a E&.u@a a +'CC 4a 9ue e& una en.eroba!.eria8 ,-)-(" rea$izo $e!.ura1 En el +3a /7 "e &a!a#o #e e&.u@a #e in!uba!iBn $o& A .ubo& #e ?G?L 4 "e :i&.o 9ue "an &a$i#o ( .ubo& /o&i.i:o& 4a 9ue "an &ur i#o bomba& #e a& en $a& !am/ana& Dur"am> La& e&.eri$izo !on me!"ero& ?un!"en u.i$izo a&a& #e &iembra &iembro #e !a#a .ubo a $o& nue:o& .ubo& #e ?G?L 9ue "e "e!"o #e ?G?L !on !am/ana nue:o&8 u.i$izo $a& a&a& #e &iembra 4 :o4 re&embran#o> 0Para re&embrar &iem/re a&a& #e &iembra e&.Dri$e&1 Lo& .ubo& 9ue me "an &a$i#o La!.o&a /o&i.i:o& "an &i#o + .ubo& #e ')'*8 + #e ')'** 4 , #e ')'***8 "e rea$iza#o una ob&er:a!iBn #e $a .ab$a #e Numero M%& Probab$e 4 me "a #a#o !omo !on!$u&iBn o re&u$.a#o un .o.a$ #e '>'** Drmene& /or mL8 $o !ua$ "a &i#o un re&u$.a#o re$a.i:amen.e bueno> In.ro#uz!o a E&.u@a #uran.e AF" a .E ambien.e #e +'CC #ebi#o a im/o&ibi$i#a# #e a en#a> El # d6- Pre/aro an.eriormen.e e$ A ar Le:ine $o !a$ien.o en bombona 4 $o me.i a au.o!$a:e en un ma.raz Er$enme4er bien .a/a#o !on /a/e$ A$ba$ 4 a&a 4 #e$ au.o!$a:e a Ne:era8 mar!a#o& 4 !on !e$o en un mon.Bn a/i$a#o> Au.o!$a:e 4 #e&e!"o re&i#uo&> Lo #i$u4o en /$a!a& e&.Dri$e& me#ian.e me!"ero ?un!"en8 e&.eri$izo 4 nombro $a& /$a!a& /e.ri 4 e&/ero a 9ue &o$i#i@i9ue e$ A ar> Re&iembro en $a& /$a!a& $o& .ubo& 9ue me "a4an &a$i#o /o&i.i:o& #e $a re&iembra .ra& "aber e&.a#o a .E amb AF" 0no e>!o$i & en.eroba!.1 &iembra en A ar Le:ine !on $o& .ubo& re&embra#o& 9ue me "an &a$i#o $o& mi&mo& ( .ubo& + #e $a ')'* + #e $a ')'** 4 , #e $a ')'***> Al ( d6una :ez &embra#o en /$a!a& /e.ri :eo 9ue me "an &a$i#o .re& /$a!a& bien 4 $a& #em%& ma$> Tomo e&a& /$a!a& 4 $e& rea$izo $a .ira API a $a 9ue meHor "a4a 9ue#a#o .a$ !omo en $a @o.o ra@a bien &embra#a 4 !on !re!imien.o 0e$ m%& abun#an.e1 #i$u4o #e /$a!a en $i9ui#o API !$a:e /re/aro .ira API 4 miro .ab$a& #e i#en.i@i!a!iBn 4 uiBn> An,es de ell. es5e/. -l d6- : $o in!ubo a ,-)-(" 4a "abien#o "e!"o $o an.erior> D6- :: Pre/aro /ara@ina $a #i&.ribu4o en 0L45 A6I5 4RE 7 0L4 %!irar ane'o guia +e uso APIS& con #i#eta Pasteur A$ in&.an.e 4a rea$izo @i!"a #e #i!"a ba!.eria 4 ano.o &u /o&i.i:i#a# .ra& &u in!uba!iBn e$ !ambio #e !o$or ro&%!eo 9ue .ena $a /$a!a e$e i#a /ara #i$uir !on $i9ui#o API a !o$ore& 9ue "a4a !ambia#o>> IRA API .8e

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>.1. 1or!ati(a: Dire!.i:a A'),L')CEE &obre e$ .ra.amien.o #e $a& a ua& re&i#ua$e& urbana&> Rea$ De!re.o7Le4 '')'AA58 #e$ ,( #e Di!iembre8 /or e$ 9ue &e e&.ab$e!en $a& norma& a/$i!ab$e& a$ .ra.amien.o #e $a& a ua& re&i#ua$e& urbana&> >... ;i*liograf3a Libro: Mi!robio$o a a$imen.aria 0!on&u$.a en au$a1 "../:))MMM>&a$u#> ob>m2)uni#a#e&)!#i)nom)*(A&&a'->".m$ "../:))e&>Miki/e#ia>or )Miki)E&!"eri!"iaN!o$i

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R,DACCI-N: No.bre: Fec/a:


Referencia: 222170101.doc 2014

0ALIDACI-N: No.bre: Fec/a:

A$ROBACI-N: No.bre: Fec/a:


Fecha de creacin: Monday, 31 de March de

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