TINCIN DE GRAM-HUCKER

Principio La tincin de Gram-Hucker es la coloracin ms utilizada en microbiologa para diferenciar bacterias Gram positivas de Gram negativas segn la retencin que presenta al colorante. Los microorganismos teidos con el primer colorante (Violeta Cristal) son los denominados Gram-positivos. Los microorganismos teidos con el colorante de contraste (Safranina O) son los Gram-negativos. El Kit para tincin de Gram-Hucker (en gotero) se compone de todos los reactivos que intervienen en esta tincin. Material Muestras biolgicas (esputos, pus, clulas bacterianas cultivadas). Reactivos Cdigo 256649 251622 251086 251002 Descripcin Kit para tincin de Gram-Hucker (en gotero) DC (*) Safranina O (C.I. 50240) DC (*) Etanol Absoluto DC (*) Aceite de Inmersin DC (*)

Componentes del Kit Cdigo 251803 251774 252531 252532 Descripcin Alcohol-Acetona 7:3 DC (*) Lquido de Lugol DC (*) Safranina O solucin segn Gram-Hucker DC (*) Violeta Cristal Oxalato solucin segn Gram-Hucker DC (*)

Todos estos componentes tambin pueden adquirirse por separado. Preparacin de soluciones Si se emplea Safranina O (C.I. 50240) debe prepararse la solucin segn Gram-Hucker como se indica a continuacin: Safranina O Etanol Absoluto Agua (c.s.p)
(*)

0,25 g 10 ml 100 ml

VERSION: 3

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Procedimiento 1. Fijar el frotis microbiano por calor con cuidado de no quemar la preparacin. Hacer pases cortos controlando la temperatura del portaobjetos por contacto dorso mano. 2. Cubrir la preparacin con Violeta Cristal Oxalato solucin Gram-Hucker durante 1 minuto. 3. Lavar el exceso de colorante suavemente con agua corriente. 4. Cubrir la preparacin con Lquido de Lugol durante 1 minuto. 5. Volver a lavar con agua. 6. Decolorar, gota a gota y no ms de 1 minuto con Alcohol-Acetona 7:3. 7. Lavar de nuevo con agua. 8. Cubrir la preparacin con Safranina O solucin segn Gram-Hucker durante 1 minuto. 9. Lavar con agua. 10. Dejar secar. 11. Observar al microscopio con objetivo de inmersin. Resultado Bacterias Gram-positivas Bacterias Gram-negativas Nota tcnica El color del envase gotero, puede alterarse con el tiempo. No afecta a la tincin. El microscopio usado debera corresponder a los requisitos de un laboratorio de diagnstico clnico. Si se utiliza un aparato automtico de tincin, deben tenerse en cuenta las instrucciones de empleo del fabricante del aparato y del software. Preparacin de las muestras Todas las muestras deben tratarse de acuerdo con el estado de la tecnologa. Todas las muestras deben estar rotuladas inequvocamente. Diagnstico Los diagnsticos debern ser establecidos solamente por personas autorizadas y cualificadas. Cada aplicacin debera implicar controles adecuados para descartar resultados errneos. Almacenamiento La solucin de tincin debe almacenarse a temperatura entre +15 y + 25C.. Caducidad El producto almacenado a la temperatura indicada y en envase bien cerrado, es utilizable hasta la fecha de caducidad indicada en el envase. Azul-violeta Rojo-rosado

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Notas sobre el empleo Para evitar errores, la tincin ha de ser realizada por personal especializado. Solamente para uso profesional. Deben cumplirse las directivas nacionales sobre seguridad en el trabajo y aseguramiento de la calidad. Indicaciones para la eliminacin de residuos Las soluciones usadas y las soluciones caducadas deben eliminarse como desecho peligroso, debindose cumplir las directivas locales de eliminacin de residuos. Si se presentan ms preguntas acerca de la eliminacin, stas podrn ser tramitadas a travs de E-Mail: central@panreac.com Dentro de la UE tienen validez las prescripciones basadas en la Directiva 67/548/CEE del Consejo relativa a la aproximacin de las disposiciones legales, reglamentarias y administrativas en materia de clasificacin, embalaje y etiquetado de sustancias peligrosas, en la correspondiente versin vigente. Clasificacin de sustancias peligrosas Tener en cuenta la clasificacin de sustancias peligrosas en la etiqueta y las indicaciones en la ficha de datos de seguridad. Fabricante Panreac Qumica S.L.U. an ITW Company C/Garraf, 2 Polgono Pla de la Bruguera E-08211 Castellar del Valls (Barcelona) Espaa Tel. (+34) 937 489 400 Fax (+34) 937 489 401

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