7 Actividad antioxidante de murdago europeo ( Viscum album ) Simona Ioana Vicas1 , Dumitrita Rugina !

"armen Socaciu 1#niversidad de $radea, %acultad de &rotecci'n del (edio Ambiente , $radea #niversidad de "iencias Agr)colas ! (edicina Veterinaria , Departamento de *u)mica ! +io,u)mica , "lu- . /apoca, Rumania 1 0 introducci'n (urdago europeo ( Viscum album 10 ) es una , planta 2emi . par3sitas de 2o-a perenne, ,ue normalmente se encuentran ,ue crece en una variedad de 3rboles , especialmente pinos, 3lamos , man4anos , 3rboles locus etc Aun,ue 2a! muc2as variedades de murdago , inclu!endo el americano ( serotinum &2orandendron o &2orandendron 5lavescens ) , la "omisi'n 6uropea ( Viscum album 10 ) ! el coreano ( Viscum album 10 coloratum ) , la obra m3s investigaci'n se 2a 2ec2o sobre el murdago europeo0 7radicionalmente , el gnero Viscum , se 2a colocado en su propio Viscaceae 5amilia, pero recientes investigaci'n gentica por A&8 II ( 6l 8rupo de A&8 , 99: ) el sistema muestra este 5amilia para ser colocado correctamente dentro de la 5amilia Santalaceae ( 5ig0 1 ) 0 0 5igura 1 0 "lasi5icaci'n cient)5ica de las especies Viscum album ( seg;n el sistema A&8 II) 0 %ilo< (agnoliop2!ta "lase< (agnoliopsida $rden < Santalales %amilia< $piliaceae %amilia< Santalaceae %amilia< (isodendraceae %amilia< $lacaceae %amilia< 1orant2aceae 8nero < Viscum Viscum album < 6specie ===0intec2open0com 1os 5ito,u)micos como nutracuticos . 6n5o,ues globales a su papel en la nutrici'n ! la salud 11> 1as di5erentes especies de Viscum son capaces de parasitar un gran n;mero de especies 2usped 0 A partir de una revisi'n de la literatura , +arne! et al0 , 1??@ , identi5ic' AB especies 2uspedes de Viscum album ( ?> gneros ! AA 5amilias ) 0 &or V0 album ssp 0 3lbum de 1?9 an5itriones se 2an identi5icado , para V0 3lbum ssp 0 abieties 19 2osts , ! V0 album ssp 0 Se conocen austriacum 1> an5itriones ( Cuber , 99A ) 0 6l gnero Viscum son arbustos leDosos 2emi . par3sitas con ramas de 1B a @9 cm de largo, ,ue crecer en di5erentes 3rboles 2ospederos 0 (urdago tienden a 5ormar una 5orma globular (%ig0 , a), ,ue puede

llegar a m3s de 1 m de di3metro0 6l 5olla-e es dicot'mica o verticillatel! rami5icando , con pares opuestos de las 2o-as verdes ( %ig0 , c ! d ) ,ue reali4an alguna 5otos)ntesis ( m)nimo en algunas especies , en particular V0 nudum ) , pero con la planta de elaboraci'n de su mineral ! las necesidades de agua del 3rbol 2usped0 1as 2o-as est3n estrec2amente obovadas ( 5ig0 , b ) , approximatell! tres o cuatro veces m3s largo ,ue anc2o 0 6l color de las 2o-as son de color verde oscuro, ! presenta tres distintas las venas ! las dos venas menos distintas ,ue corren paralelas a la margen de la 2o-a (%ig0 , b ) 0 De -oven 2o-as , las venas son visibles en ambos lados , mientras ,ue en las 2o-as m3s vie-as ,ue se observan principalmente en el in5erior ( +Essing , 999 ) 0 V0 album es dioica , es decir, parte de las plantas es de sexo 5emenino , ! el otro parte es masculina0 1as 5lores son mu! reducidos ! color poco visible , de color amarillo verdoso , ! 1.: mm de di3metro ( 5ig0 , c ) 0 6l 5ruto es una ba!a , blanco, en la madure4 , ,ue contiene una semilla incrustado en el -ugo mu! pega-oso (%ig0 , e) 0 0 5igura 0 Viscum album mor5olog)a 0 un 0 Imagen de Viscum album creciente en el 3lamo ( &opulus nigra ) , b0 Aspecto de la licencia F c 0 1a 5lor del murdago F d0 7allo rami5icado F correo 0 berr! Adulto ,ue contiene una semilla ( Vicas et al0 , 99?a ) 0 6n los ;ltimos aDos , antioxidantes derivados de recursos naturales , principalmente a partir de plantas , 2an sido intensivamente usado para prevenir daDos oxidativos 0 1os antioxidantes naturales tiene tambin algunos venta-as con respecto a los sintticos , ,ue se obtienen 53cilmente ! econ'micamente ! tienen poca o e5ectos secundarios insigni5icantes 0 ab cde ===0intec2open0com Actividad antioxidante de murdago europeo ( Viscum album ) 117 1os extractos acuosos de la murdago europeo 2an sido ampliamente utili4ado durante dcadas como tratamiento alternativo ! la terapia ad!uvante del c3ncer , particularmente en Alemania , Austria ! Sui4a 0 1os extractos de murdago europeos se utili4an en una terapia ad!uvante del c3ncer debido a su inmunoestimulante ! al mismo tiempo propiedades citot'xicas 0 6stos e5ectos son por lo general m3s pruebas de los extractos enteros ,ue para las lectinas de murdago ! puri5icada viscotoxinas solos ( 6ggensc2=iler et al0 , 997)0

Di5erentes preparados de murdago est3n disponibles para el tratamiento del c3ncer 0 Abnobaviscum G , Helixor , Iscador G , Iscucin G ! Isorel G se 5abrican de acuerdo a antropos'5ica mtodos , otros preparados de murdago inclu!en "e5aleItin G , 6urixor G ! 1eItinol G 0 Iscador 5ue propuesto por primera ve4 para el tratamiento de c3ncer en 1? 9 , por Rudol5 Steiner , &2D , ( 1@>1.1? B ) , 5undador de la Sociedad para la Investigaci'n del "3ncer, en Arles2eim , Sui4a e introducido en el tratamiento del c3ncer 2umano tan pronto como 1? 1 0 1as preparaciones antropos'5icas est3n disponibles de di5erentes 3rboles 2ospederos como el roble , man4ana , pino ! otros0 &rocedimiento de recolecci'n es estandari4ada , ! los -ugos de verano e invierno cosec2as se me4clan entre s) 0 6l total extracto de los extractos de murdago se considera esencial para la plena e5icacia ! concentraci'n de sus compuestos se garanti4a a travs de la estandari4aci'n de procesos ( 2ttp<JJ=issensc2a5t0mistelt2erapie 0 de J . murdago en el tratamiento del c3ncer) 0 6l murdago puede biosinteti4ar sus compuestos , pero puede tomar algunos nutrientes del 3rboles 2ospederos 0 Se 2a sugerido ,ue los compuestos 5armacol'gicamente activos pueden pasar desde los 3rboles de acogida a las plantas par3sitas ( Apertura ! Sc2iet4el 0 , 1???)0 1os principales ingredientes de los extracto de Viscum album son sus tres prote)nas inactivadoras de ribosomas o lectinas ( lectinas de murdago , (1 ) (1. 1 , (1 . ! (1. : ( Ha-to et al0 , 99B ) , la glicoprote)na uni'n con D . galactosa ! / . acetil.D . galactosamina , viscotoxinas (V7 ) ( #rec2 et al 0, 99> ) , as) como , oligo. ! polisac3ridos , alcaloides ( K2=a-a et al 0 , 1?@9 ) 0 6l 5lavonoide patrones de V0 album de varios 2osts se investigan por +ecIer ! 6xner ( 1?@9 ) 0 ellos ,uercetina identi5icado ! una serie de teres met)licos de ,uercetina , ,ue puede ser asumido para ser acumulado sobre la super5icie de la planta 0 6l material epicuticular del 3lbum contiene V0 pre5eriblemente el 5lavonoles ,uercetina ! sus derivados met)licos , de ve4 en cuando tambin el 5lavonoles Iaemp5erol ! algunos de sus derivados met)licos , ! rara ve4 la 5lavanona naringenina ( Haas et al0 , 99: ) 0 Se 2a sugerido ,ue los compuestos 5armacol'gicamente activos pueden pasar desde el 2ost 3rboles a las plantas par3sitas ( Apertura ! Sc2iet4el 0 , 1???)0 6n los ;ltimos aDos , los estudios de investigaci'n se 2an centrado en la actividad antioxidante de murdago ( $na! . #car et al 99> F 0 1eu et al , 99> F 0 Lao et al , 99> F 0 0 0 S2i et al , 99> F Vicas et al , 99?b 0 F "2oud2ar! et al0 , 919 ) 0

(uc2os extractos de plantas ex2iben propiedades antioxidantes e5icientes debido a sus 5itoconstitu!entes , tales como compuestos 5en'licos , especialmente los 3cidos 5en'licos ! 5lavonoides ( A,il et al , 99> F 0 (iliausIas et al0 , 99A ) ! los carotenoides ( Sta2l ! Sies , 99: ) 0 &ara evaluar la capacidad antioxidante de extractos de plantas, muc2as de mtodos in vitro ,ue 2an desarrollado 0 D&&H ( , . di5enil . 1 . picril2idra4il ) , $RA" ( absorci'n de radicales de ox)geno capacidad) , la capacidad antioxidante 7rolox e,uivalente ( 76A" ) ! 5rrico reductor capacidad ( %RA& ) son algunos de los mtodos m3s populares ,ue se 2an utili4ado (Mu et al0 , 99A ) 0 la venta-as ! desventa-as de estos mtodos se 2an discutido completamente en varios ===0intec2open0com 1os 5ito,u)micos como nutracuticos . 6n5o,ues globales a su papel en la nutrici'n ! la salud 11@ Revisiones ( "ao ! &rior, 1??@ F %ranIel ! (e!er, 999 F &rior ! "ao, 1??? F S3nc2e4. (oreno , 99 ) 0 6l ob-etivo de los estudios de investigaci'n se centran , el primero , sobre el cribado de compuestos bioactivos ( 3cidos 5en'licos ! 5lavonoides) a partir de 2o-as ! tallos de V0 album ,ue est3n creciendo en di5erentes 3rboles 2ospederos , ! la segunda se evalu' la actividad antioxidante de las 2o-as de V0 album N ! tallos0 0 H&1" 2uellas de compuestos bioactivos a partir de Viscum album &ara el an3lisis de los compuestos bioactivos, 2o-as ! tallos de V0album se recogieron en -ulio de 99? , de cinco 3rboles 2ospederos di5erentes situados en la regi'n +orod . 82eg2ie , al noroeste de Rumania pa)s0 1a precipitaci'n media anual es de B99 a 799 mm J an 0 6l m)nimo anual de media ! temperaturas m3ximas 5ueron . 0:9" ! :B9" , respectivamente ( promedio 9 .aDo ) 0 la media la temperatura anual del aire es de ?, 9" 0 1a 4ona est3 abierta al oeste, la masa de aire 5recuentes est3 orientada al oeste de la circulaci'n , el transporte areo oce3nico , 5r)o ! 2;medo 0 Viento media plurianual velocidad es A,1 m J seg 0 1as muestras de murdago 2an sido cosec2adas al mismo aproximada altura , los 3rboles de donde se 2a cosec2ado con el mismo suelo ( suelo marr'n ) ! condiciones clim3ticas 0 1os 3rboles de acogida se encuentran en semi . sombra a la 4ona de sol ( Vicas et al0 , 919 ) 0 1os materiales vegetales 5ueron eti,uetados de acuerdo a los 3rboles 2ospedantes , as)< Acer campestre (VAA ) , (allus domestica ( VA( ) , %raxinus excelsior ( VA% ) , &opulus nigra ( VA& ) ! Robinia pseudoacacia

(VAR ) para 5acilitar su identi5icaci'n 0 #n e-emplar de muestra de las plantas se deposit' en la Herbario de la %acultad de &rotecci'n Ambiental de la #niversidad de $radea 0 1as 2o-as ! tallos de V0 album de di5erentes 3rboles 2ospederos se secan r3pidamente, en un 2orno a ?99 O " , durante A@ 2oras , con el 5in de evitar la degradaci'n en4im3tica ( (arI2am , 1?@ ) 0 6l secado material vegetal se almacen' en una bolsa de pl3stico sellada para an3lisis por H&1" 0 Despus de pesar a cabo una porci'n del material secado ( aproximadamente 1 g ) , la extracci'n se llev' a cabo con etanol 79 P ( 1<19 , = J v ) 0 1a me4cla se agit' durante A 2oras en la oscuridad , ! luego 5ue se centri5uga durante B minutos , a :999 rpm 0 Se elimin' el etanol de la 5racci'n sobrenadante usando un evaporador rotatorio 0 Adem3s, el extracto acuoso se someti' a 2idr'lisis 3cida ( H"l 1 / ) durante 2oras , a @99" 0 1as agliconas se extra-eron : veces con acetato de etilo por agitaci'n continua ! despus se centri5ug' a B999 rpm , durante B minutos 0 6l disolvente 5ue eliminado por lavado de las muestras con nitr'geno 0 6l residuo resultante despus de la evaporaci'n 5ue disuelto en agua ultrapura ( :99 l ), se 5iltr' A7RAV6S 5iltros de 9,AB micras ( (illex .18 , (illipore ) , ! se someti' a an3lisis por H&1" 0 #n sistema S2imad4u de H&1" e,uipado con una bomba binaria 1" 9A7 , un desgasi5icador , un S&D( 9A detector de matri4 de diodos ( S2imad4u "orp0 , K!oto, Qap'n ) ! un 7( Supelcosil 1" . 1@ columna , BRm , B cm se utili4' ( Sigma . Aldric2 "o ) x A,> mm 0 1a eluci'n en gradiente 5ue reali4ado con 5ase m'vil A, compuesta por metanol < 3cido actico < bidestilada agua ( 19< <@@ v J v J v ) ! la 5ase m'vil + , ,ue comprende metanol < 3cido actico < doble agua destilada ( ?9<:<7 v J v J v ) , a una velocidad de 5lu-o de 1,9 ml J min 0 7odos los disolventes 5ueron grado H&1" disolventes , se 5iltr' a travs de una membrana de 9,AB micras ( (illipore , 660##0 ) ! se desgasi5ic' en una baDo ultras'nico antes de su uso 0 1os cromatogramas se monitori4aron a @9 nm ! :>9 nm 0 la Se utili4aron los siguientes patrones puros para cuanti5icar los compuestos bioactivos presentes en las 2o-as ! tallos de murdago < 3cido betul)nico , 3cido g3lico , 3cido protocat,uico , 3cido gent)sico , ===0intec2open0com Actividad antioxidante de murdago europeo ( Viscum album ) 11? 3cido clorognico , 3cido p .$H , 3cido ca5eico , 3cido sir)ngico , 3cido salic)lico , p. cum3rico

3cido , 3cido 5er;lico , 3cido sin3pico , el 3cido trans . cin3mico , naringenina , ,uercetina, Iaemp5erol ! 3cido rosmar)nico 0 1a cuanti5icaci'n se reali4' por comparaci'n con las curvas de calibraci'n con patrones puros , en el rango de 9,A@ a B99,9 g J ml 0 1os coe5icientes de regresi'n de calibraci'n curvas oscil' entre 9,?@1 ! 9,???? 0 Integraci'n ! an3lisis de datos se reali4aron utili4ando So5t=are de origen 709 0 1os datos cuantitativos acerca de la composici'n de compuestos 5en'licos de los extractos de murdago son se muestra en la 7ab0 1 0 Se identi5icaron ! cuanti5icaron 17 compuestos a partir de muestras de murdago ( 7ab0 1 ) , inclu!endo un pentac)clico triterpenos (3cido betul)nico ) , 1 3cidos 5en'licos ( 3cido g3lico , 3cido protocat,uico , gent)sico 3cido , 3cido clorognico , 3cido p .$H , 3cido ca5eico , 3cido sir)ngico , 3cido salic)lico , 3cido p . cum3rico , 3cido 5er;lico , 3cido sin3pico , ! 3cido trans . cin3mico ) ! A poli5enoles ( naringenina , ,uercetina, Iaemp5erol ! 3cido rosmar)nico ) 0 1a 5igura 0 : presenta el producto ,u)mico estructura de los compuestos bioactivos investig' 0 6stos compuestos 5ueron identi5icados de acuerdo con su tiempo de retenci'n ! la espectral caracter)sticas de sus picos en comparaci'n con los est3ndares , as) como por adici'n de la muestra con las normas individuales 0 1os compuestos 5en'licos se encuentran por lo general en la naturale4a en 5orma de steres ! raramente como gluc'sidos o en 5orma libre 0 &or lo tanto , era necesaria la 2idr'lisis para su identi5icaci'n ! determinaci'n cuantitativa 0 1os 5lavonoides tambin est3n presentes en las plantas en 5orma de gluc'sidos 0 "ada 5lavonoide se puede producir en una planta en varias combinaciones de glicos)dicos 0 &or esta ra4'n , 2idr'lisis se utili4a para liberar las agliconas , ,ue 5ueron investigados adicionalmente mediante H&1" 0 6l an3lisis por H&1" cuantitativo de V0 3lbum mostr' un ma!or contenido de compuestos bioactivos en las 2o-as en comparaci'n con tallos ( 7ab0 1 ) 0 6n el caso de las 2o-as de V0 album organi4ada por Acer campestre ( VAA ) , siete 3cidos 5en'licos ! tres poli5enoles 5ueron identi5icadas , mientras ,ue en el tallo de murdago ,ue s'lo encontr' un 3cido 5en'lico (3cido trans . cin3mico ) 0 6l 3cido ca5eico 5ue el compuesto dominante ( 1:,>1 mg J g de materia seca ) en las 2o-as de murdago0 Kamp2erol ! 3cido rosmar)nico se presenta en ambos , 2o-as ! tallos , mientras ,ue la ,uercetina 5ue identi5icado s'lo en las 2o-as 0

6l murdago organi4ada por %raxinus excelsior ( VA% ) contiene nueve 3cidos 5en'licos , ! dos 5lavonoides 0 "romatogramas de H&1" de 3cidos 5en'licos de 2o-as ! tallos de Viscum album organi4ada por %raxinus excelsior se presentan en la 5igura 0 A 0 1a concentraci'n de 3cido para. cum3rico en la muestra VA% 5ue de 1,@ mg J g de materia seca , pero no lo 2emos identi5icado en otras murdago extractos 0 Se encontr' ,ue el 3cido ca5eico tener los valores 2igest tanto en 2o-as ( 1:,?@ mg J g de peso seco materia ) ! tallos ( 1B,@> g J g de materia seca ) 0 Kaemp5erol tambin estaba presente tanto en las 2o-as ( 7,:9 g J g de materia seca ) ! tallos ( :,>> g J g de materia seca ) , mientras ,ue la ,uercetina estaba presente s'lo en 2o-as ( >,9B g J g de materia seca ) 0 6n el caso de V0 album obtenida de &opulus nigra ( VA& ), 3cido 5errulic era un compuesto dominante en el con-unto de 3cidos 5en'licos tanto en 2o-as ( 11,B mg J g de materia seca ) ! en los tallos ( >,1A g J g de peso seco materia) 0 Scido salic)lico tambin estaba presente en las 2o-as de VA& ( @,A g J g de materia seca ) ! los v3stagos ( ,: g J g de materia seca ) , mientras ,ue en las otras muestras de murdago ,ue s'lo se detect' en 2o-as 0 6l cromatograma H&1" de murdago organi4ada por (allus domestica ( VA( ) mostr' siete 3cidos 5en'licos en las 2o-as0 6l 3cido betul)nico s'lo estaba presente en este murdago, tanto en 2o-as ( 1,@7 g J g de materia seca ) ! tallos ( ,9B g J g de materia seca ) 0 7ambin , como en el murdago organi4ada por &0 ===0intec2open0com 1os 5ito,u)micos como nutracuticos . 6n5o,ues globales a su papel en la nutrici'n ! la salud 1 9 "$(& 0 /$ 0 +I$A"7IV6 "$(&#6S7$S VAA Acer campestre VA% %raxinus 6xcelsior VA& &opulus nigra VA( (allus domestica VAR Robinia pseudocacia 2o-as tallos 2o-as tallos 2o-as tallos 2o-as tallos 2o-as tallos

pentac!clic triterpeno 1 0 Scido betul)nico nd nd nd ,:B T 9,9: nd nd 1,@7 T 9, 9 09B T 9,9B nd nd 1os 3cidos 5en'licos 0 Scido g3lico nd nd nd nd nd nd nd nd :?,?: T 9,A nd : 0 protocat,uico 3cido nd nd B,9> T 9,9: :0@7 T 9,91 0B@ T 9,91 90AB T 9,91 A019 T 9,: nd nd ,91 T 9, A 0 8ent)sico 3cido nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd B 0 6l 3cido clorognico A079 T 9,91 nd ,7A T 9,9 10 7 T 9, nd nd nd nd nd nd > 0 para. $H ben4oico 3cido 1901> T 9,1 nd 190@1 T 9,9 nd 1, B T 9,9 nd 1,9 T 9,11 nd nd nd 7 0 Scido ca5eico 1:0>1 T 9,9A nd 1:0?@ T 9,91 1B0@>

T 9,9: nd B,:A T 909: >0:? T 9, : >0@1 T 9,99A nd nd @ 0 Sir)ngico 3cido nd nd 1,11 T 9,9A 1 01: T 9,91 nd nd nd 1,: T 9,9 nd nd ? 0 Scido salic)lico >079 T 9,9: nd ,79 T 9,9: nd @0A T 9,91 0: T 9,9B 10@9 T 9,91 nd nd nd 19 0 para. cum3rico 3cido nd nd 1,@ T 9,991 nd nd nd nd nd nd nd 11 0 6l 3cido 5er;lico 70B@ T 9,991 nd @,?? T 9,9 @09> T 9,9 110B T 9,1 >01A T 9,11 70@1 T 9,91 >0@@ T 9,91 ?0?: T 9,91 nd 1 0 Scido sin3pico B0A1 T 9,:

nd 1 0:B T 9,91 A0@ T 9,9A 7017 T 9,: nd ,11 T 9,9 101: T 9,91 1?0: T 9,91 nd 1: 0 7rans . cin3mico 3cido B0A1 T 9,9A 10 : T 9,9: nd :,97 T 9,9B nd nd nd nd nd nd 1os 5lavonoides 1A 0 /aringenina nd nd nd nd nd nd nd nd nd nd 1B 0 1a ,uercetina 90?: T 9,91 nd >,9B T 9,9 nd :, B T 9,91 nd 9,:> T 9,9 nd 7,?9 T 9,91 nd 1> 0 Kamp2erol 07A T 9,91 :0: T 9 0 991 70:9 T 9,91 :0>> T 9,91 nd nd nd nd 7,B@ T 9,91 >0:@ T 9,91 poli5enoles 17 0 6l 3cido rosmar)nico 10?A T 9,99

1,@1 nd 1, 7 T 9,91 90@ T 9, 09 T 9,991 101 T 9,91 109@ T 9,9 nd nd Scidos 5en'licos totales B:0B7 10 : B?0B> A?09@ :90? 1A0 : :0 : 1>01A >?01@ 091 Ho-as de relaci'n de J tallos de 3cido 5en'lico A:0B1<1 1, <1 , < 1 10A<1 :A0A<1 Scido 5en'lico total ( 2o-as U tallo ) BA0@9 19@0>A AB01B :?0:7 7101? 5lavonoides totales ( 2o-as U tallo ) >0?? 17091 :0 B 90:> 10@> 7abla 1 0 6l an3lisis cuantitativo por H&1" de aglicones bioactivos de compuestos 5en'licos ( mg J g de materia seca V) de las 2o-as ! tallos de V0 album cosec2ado de di5erentes e-rcitos, en -ulio de 99? ( Vicas et al0 , 911a ) 0 ===0intec2open0com Actividad antioxidante de murdago europeo ( Viscum album ) 1 1 nigra , 3cido 5er;lico 5ue el principal compuesto de 2o-as ! tallos ( 7,@1 mg J g de materia seca , ! Asunto >,@@ mg J g de peso seco , respectivamente ) de las muestras de VA( 0 0 5igura : 0 "ompuestos bioactivos investigaron en las 2o-as ! el tallo de V0album 0 6l compuesto principal de V0 album organi4ada por Robinia pseudoacacia (VAR ) 5ue el 3cido g3lico ( :?,?: mg J g de materia seca ) , ,ue no se 2a encontrado en las otras muestras estudiadas 0 /o se detect' 3cido gent)sico en ninguna muestra ni naringenina , mientras ,ue la ,uercetina 5ue identi5icado s'lo en los tallos 0 0 5igura A 0 "romatogramas de H&1" , utili4ado para 2uellas digitales ! evaluar cuantitativamente los 3cidos 5en'licos a partir de 2o-as ! tallos de V0album cosec2adas a partir de %raxinus excelsior ( VA% ) ( Vicas et al 0 , 911a ) 0 H$ "H : "H :

"H : "H : "H : "$$H "H : H " 6l 3cido betul)nico ( 1 ) "$$H $2io $2io H$ 6l 3cido g3lico ( ) $2io $2io "$$H Scido protocat,uico ( : ) H$ $2io "$$H Scido 8ent)sico ( A ) $2io $2io " $$ " H$ H$ $ H$ $H 6l 3cido clorognico ( B ) "$$H $2io 3cido para. 2idroxi ( > ) " $ $2io $2io $2io Scido ca5eico ( 7 ) $2io $ " $2io "H :

$ $"H : Scido sir)ngico ( @ ) $2io $ " $2io 6l 3cido salic)lico ( ? ) 3cido p . cum3rico ( 19 ) $2io $ " $2io $2io $ " H : "$ $2io 6l 3cido 5er;lico ( 11 ) $2io $ " H : "$ $2io $"H : Scido sin3pico ( 1 ) $2io $ " 3cido trans . cin3mico ( 1: ) $ $ H$ $2io $2io /aringenina ( 1A ) $2io $2io $2io $2io $ $ H$ 1a ,uercetina ( 1B )

H$ $ $ $2io $2io $2io Kamp2erol ( 1> ) H$ H$ "$$H $ " $ $2io $2io 6l 3cido rosmar)nico ( 17 ) 9 A > @ 19 1 1A 1> 1@ 9 9 19999 9999 :9999 A9999 B9999 >9999 79999 mAu 7iempo (min ) de-a VA% : 7 @ 11 1 B> ? 19 9 A > @ 19 1 1A 1> 1@ 9 9 19999 9999 :9999 A9999 B9999 >9999 79999 VA% madre m#A 7imp ( min ) : B

7@ 111 : . 3cido protocat,uico B . 3cido clorognico > . ben4oico para. $H 7 . 3cido ca5eico @ . 3cido sir)ngico ? . 6l 3cido salic)lico 19 . 3cido p .cum3rico 11 . 3cido 5er;lico 1 . Scido sin3pico ===0intec2open0com 1os 5ito,u)micos como nutracuticos . 6n5o,ues globales a su papel en la nutrici'n ! la salud 1 1os 3cidos 5en'licos representan la principal 5racci'n de compuestos bioactivos en todas V0 album 0 #n alto Se observ' variabilidad de las raciones de 3cido 5en'licos entre las 2o-as ! los tallos0 (ientras ,ue , VAA VAR ! ten)a grandes proporciones ( ! A:0B1<1 :A0A1<1 , respectivamente) se observaron los )ndices m3s ba-os en el caso de VA% ! VA( ( 10 1<1 ! 10AA<1 , respectivamente ) 0 6n nuestro estudio, el murdago organi4ada por %raxinus excelsior ( VA% ) result' ser el m3s rico 3cidos 5en'licos ( 19@,>A g J g de materia seca ) , seguido de VAR ( 71,1? mg J g de materia seca ) , VAA ( BA,@9 mg J g de materia seca ) , VA& ( AB,1B g J g de materia seca ) ! de VA( ( :?,:7 mg J g de materia seca ) 0 1os poli5enoles totales de las 2o-as ! tallos de V0 3lbum disminu!eron en el siguiente orden < VAR VA% VAA VA& VA( 0 1uc4Iie=ic4 et al 0 ( 991 ) , anali4aron los 3cidos 5en'licos presentes en las plantas de murdago alo-ados por seis e-rcitos di5erentes 0 6ncontraron ,ue en el murdago organi4ada por (allus domestica , el principal compuesto es 3cido rosmar)nico ( 17,A@ mg P ) , mientras ,ue en el murdago organi4ada por &opulus nigra , el componente predominante 5ue el 3cido clorognico ( 1 ,:A mg P)0 "ondrat et al0 , ( 99? ) investigaron tambin nueve plantas 5aner'gamas ( incluida la europea murdago ) por su contenido en 5lavonoides ! la actividad antioxidante0 *uercetina ! Iaemp5erol se encontraron concentraciones a ser mu! ba-a en los extractos de murdago ( 9, 9 mmol J g de materia seca , ! 9,1> mmol J g de materia seca , respectivamente ) 0 /uestro estudio revel' ,ue la naringenina 5lavanona no estaba presente en todas las variedades de Viscum 3lbum investig' 0 6ste resultado est3 de acuerdo con el estudio de Haas et al 0 , ( 99: ) ,ue no lo 2icieron

encontrar naringenina en todas las subespecies de V0 album anali4ados, pero se encontraron con ,ue , raramente, en epicuticular ceras, en V0 cruciatum 0 7ambin encontraron 5lavonoles ( ,uercetina ! Iaemp5erol en ocasiones , -unto con algunos de sus derivados met)licos ) en el material epicuticular de V0 3lbum0 : 0 1a actividad antioxidante de Viscum album 1os compuestos 5en'licos 2an atra)do el inters de muc2os investigadores , !a ,ue son poderosos antioxidantes ! puede proteger el cuerpo 2umano contra el estrs oxidativo0 la actividad antioxidante de los compuestos 5en'licos se debe principalmente a sus propiedades redox 0 6l presente estudio pregunt' una variedad de ensa!os in vitro , basado en la capacidad para secuestrar libre radicales 0 Sobre la base de las reacciones ,u)micas implicadas , ma!or capacidad antioxidante puede ser divididos en dos categor)as< i) trans5erencia de 3tomos de 2idr'geno ( HA7) ! ii ) trans5erencia de un solo electr'n (S67 ) Reacci'n . ensa!o basado 0 S$(+R6R$ procedimientos basados miden la capacidad de una cl3sica antioxidante para eliminar los radicales libres mediante la donaci'n de 2idr'geno ( mtodo $RA") < W X U AH Y XH U A W , donde AH Z cual,uier donante H (todo basado en S67 detecta la capacidad de un antioxidante potencial de trans5erir un electr'n a reducir una especie , inclu!endo metales , carbonilos, ! los radicales ( mtodo 76A" ) < W X U AH Y X U AH W U AH W U U H $ [ A W U H:$ U X. U H:$ U Y XH U H $ ( ( III ) U AH Y AH U U ( ( II ) ===0intec2open0com Actividad antioxidante de murdago europeo ( Viscum album ) 1 : &ara la determinaci'n de la actividad antioxidante del extracto de murdago a travs de di5erentes mtodos , 2emos utili4ado las 2o-as ! tallos 5rescos ( g ) ,ue se 2omogenei4aron con 19 ml de agua destilada , o con 19 ml de etanol al ?@P utili4ando un 2omogenei4ador #ltra 7urax , durante 1 minuto 0 6sta me4cla 5ue se centri5ug' ( 19 999 rpm , a A9 O " , durante 19 minutos ) ! los sobrenadantes se 5iltraron a travs de un papel de 5iltro 0 6l 5iltrado se utili4' para las mediciones de la actividad ! el total de antioxidantes 5enoles contenidos0 :01 in2ibici'n de D&&H de los extractos de murdago #n mtodo r3pido , simple ! econ'mico para medir la capacidad antioxidante de los extractos de plantas implica el uso de los radicales libres , , .di5enil . 1 . picril2idracilo ( D&&H ) 0 D&&H es ampliamente utili4ado para probar la capacidad de los compuestos para actuar como captadores de radicales libres o los donantes de 2idr'geno ,

! para evaluar la actividad antioxidante de los extractos 0 1a reacci'n implica un cambio de color desde el violeta al amarillo ( %ig0 B) ,ue pueden controlarse 53cilmente utili4ando un espectro5ot'metro a B1B nm 0 1a actividad secuestrante de radicales libres D&&H se determin' utili4ando el mtodo propuesto por (arca . Milliams et al 0 , ( 1??B ) 0 1a reacci'n se reali4' en 1 placa de pocillos 0 #n volumen de 99 muestra l! 1,A ml soluci'n D&&H ( @9 () se aDadieron a cada pocillo de la microplaca 0 la disminuci'n de la absorbancia de la soluci'n resultante se monitori4' a B1B nm durante :9 min 0 6l porcenta-e de captaci'n e5ecto de di5erentes extractos de los radicales D&&H , 5ue calculado usando la siguiente ecuaci'n < D&&H e5ecto de barrido ( P ) Z \ ( A9 . #n s ) x 199 ] J A9 ( 1 ) "uando, A9 es la absorbancia del blanco , ! como es la absorbancia de las muestras a B1B nm 0 5igura B 0 1a estructura del radical D&&H ! su reducci'n por un antioxidante 0 1a actividad antioxidante comparativo de V0album 2o-as organi4ada por di5erentes 3rboles 2ospederos , evaluado por el mtodo de D&&H se muestra signi5icativamente di5erencias ( p ^ 9,991 ) con respecto a D&&H e5ecto de barrido ( P ) de los extractos acuosos ! etanol en las 2o-as ! tallos ( Vicas et al0 , 911a ) 0 1os resultados mostraron ,ue D&&H e5ecto de barrido de los extractos acuosos de 2o-as de murdago vari' entre 11,A? P , en el caso de murdago ,ue crece en Robinia pseudoacacia ( VAR ),a , P en el caso de VA( ( murdago crece en (allus domestica) 0 D&&H Superior ===0intec2open0com 1os 5ito,u)micos como nutracuticos . 6n5o,ues globales a su papel en la nutrici'n ! la salud 1 A /o se observ' e5ecto de barrido en los extractos de etanol , con valores ,ue van desde 77,1? P ( VA% ) al B9,A7 P ( VAA ) 0 6l D&&H barrido de e5ecto de los extractos de murdago tallos 5ue menor ,ue la de la 2o-a de extractos 0 /o 2a! actividad antioxidante se detect' en extractos acuosos de VA% ! VA( tallos 0 6n todas las muestras , extractos madre tienen actividad antioxidante m3s ba-a ,ue la 2o-a correspondiente extractos , tambin en el caso de los extractos de etanol 0 Resultados similares 5ueron obtenidos por $na! . #_ar et al0 , ( 99> ) , ,ue investig' el antioxidante la actividad de extractos de metanol de V0album cultiva en di5erentes 3rboles de acogida 0 Sus resultados mostraron

,ue el murdago organi4ada por Robinia pseudocacia (VAR ) ex2ibi' la in2ibici'n 7:,AA P de D&&H ! murdago organi4ado por Acer campestre (VAA ) present' in2ibici'n B?,B P de D&&H 0 1a ligera di5erencias entre nuestros resultados ! los de ellos pueden ser asignados al disolvente utili4ado para la extracci'n ! J o a 5actores ambientales 0 S2arma ! +2at ( 919 ) , mostraron ,ue los per5iles de absorbancia de D&&H 5ueron m3s altas en un soluci'n de metanol tamponado , seguido de soluciones de metanol ! etanol 0 superior absorbancia de soluciones de metanol implica me-ores soluciones sensibilidad vis .`. vis de etanol de D&&H 0 Romano et al 0 , ( 99? ) investigaron la e5icacia de proceso de ultra5iltraci'n en el antioxidante actividad del extracto acuoso de V0 album 0 1os valores obtenidos por el ensa!o de D&&H variaron entre el >>, P ! la in2ibici'n de D&&H @@, P para extractos concentrados de murdago 0 la coe5iciente de correlaci'n entre los datos de la in2ibici'n de D&&H ! el contenido de prote)na total 5ue de 9,?A , lo ,ue sugiere ,ue , adem3s de los compuestos 5en'licos de los extractos de Viscum , tienen un viscolectins gran contribuci'n a la actividad de captaci'n de radicales 0 $tro traba-o de investigaci'n ( $lu=aseun ! 8ani!u , 99@ ) investig' las propiedades antioxidantes de extractos de metanol de V0 album aisladas de cacao ! nueces de 3rboles en el sur occidental parte de /igeria0 1a capacidad de captaci'n de cada extracto de metanol contra D&&H sigui' un patr'n dependiente de la dosis ( 9.19 mg J ml ) 0 1a capacidad de captaci'n de radicales libres del 3lbum V0 extracto del 3rbol del cacao tiene un me-or rendimiento ,ue el de anacardo , un 2ec2o ,ue est3 en acuerdo con el contenido de 5enoles totales de los dos extractos ( 1@ mg J 199 g, ! 1>9 mg J 199 g, respectivamente ) 0 &apuc et al0 , 919 , investigar los radicales libres basureros actividad del extracto de etanol a partir de murdago0 1a actividad de eliminaci'n calculada para V0 3lbum en P de in2ibici'n 5ue del 7, P0 "uando las actividades del mismo tipo de los extractos de murdago , recogidas de la misma 3rbol 2usped , pero en di5erentes estaciones del aDo , se compararon usando el ensa!o de D&&H , se encontr' ,ue el actividad antioxidante 5ue , en general , ma!or en primavera ( Vicas et al 0 , 99@ ) 0 1os valores obtenidos en ma!o de 99@ el ensa!o D&&H vari' de in2ibici'n de D&&H A , P para V0 album creciente

en Robinia pseudocacia (VAR ) para la in2ibici'n de D&&H 17,A P para V0 album ,ue crece en &opulus nigra ( VA& ) 0 6n -ulio, los extractos VAR mostraron la ma!or capacidad para secuestrar libre radicales ( A>,?1 P ) , pero los extractos de VAA ! VA& perdieron su actividad antioxidante 0 la di5erencias pueden explicarse por los di5erentes 5actores ambientales ( temperatura , agua , irradiaci'n , etc ) 0 ===0intec2open0com Actividad antioxidante de murdago europeo ( Viscum album ) 1 B 1a actividad antioxidante del extracto de 3lbum V0 de Robinia pseudoacacia tiene la m3s alta , especialmente en el caso del mtodo de D&&H ( 11,A? T 9,9A P para VAR de-a extractos acuosos la cosec2a en -ulio , 7>,>9 T 9,9 P para los extractos de 2o-as VAR etanol cosec2a de diciembre) ! esto tambin est3 de acuerdo con el contenido de 5enoles totales ( Vicas et al0 , 911b ) 0 :0 (todo de $RA" 6l mtodo $RA" mide la in2ibici'n antioxidante de oxidaciones inducidas por radicales peroxilo , ! por lo tanto re5le-a la cadena de romper cl3sica actividad antioxidante radical por 3tomo de 2idr'geno trans5erir 0 6l ensa!o $RA" se reali4' esencialmente como se describe por Huang et al 0 , ( 99 ) 0 la volumen de 1B9 l de soluci'n de traba-o de la 5luoresce)na de sodio ( A x 19.: m( ) se aDadi' a B muestras l , en un lugar bien microplaca 1 0 1a placa se de-' e,uilibrar mediante la incubaci'n se durante un m)nimo de :9 minutos en el S!nerg! a H7 (ulti . Detecci'n 1ector de (icroplacas ( +io7eI Instruments, MinoosIi , V7 ) a :7 b "0 1a reacci'n se inici' mediante la adici'n de B l de , N .a4o.bis ( . amidino . propano) soluci'n de diclor2idrato de ( AA&H ) ( 1B: m() ! la entonces 5luorescencia se controla cinticamente con los datos tomados cada minuto , a A@B nm , 9 nm 5iltro de paso de banda de excitaci'n , ! unos B @ nm, 9 nm 5iltro de paso de banda de emisi'n 0 Valores $RA" son calculado como se describe por "ao ! &rior ( 1??? ) 0 6l 3rea ba-o la curva ( A#") ! la /et A#" de los est3ndares ! las muestras se determin' a travs de las ecuaciones ! : respectivamente 0 A#" 9,B c d R J R1 e c d R: J R1 e c d RA J R1 d e c 90B Rn J R1 e ( ) /et A#" A#"sample . A#"blanI ( : ) "uando el valor R1 . 5luorescencia a la iniciaci'n de la reacci'n ! Rn . valor de 5luorescencia despus de :9 min 0 1a curva est3ndar se obtuvo mediante el tra4ado de la Red A#" de di5erentes 7rolox

1as concentraciones contra su concentraci'n ( >, B a 199 m() 0 Valores $RA" de muestras se entonces calcula autom3ticamente utili4ando (icroso5t 6xcel para interpolar /et A#" de la muestra valores en contra de la curva est3ndar de 7rolox 0 1os valores obtenidos mediante ensa!os de $RA" variaban de 19,7: T 1,?9 m( e,uivalentes de 7rolox J g materia 5resca para el extracto de 2o-a de etanol VA& , a 1,B T 1, B m( e,uivalentes de 7rolox J g 5resca cuesti'n ,ue el extracto acuoso madre VA( 0 De acuerdo con los resultados obtenidos en el $RA" ensa!o , no 2ubo di5erencias signi5icativas entre la capacidad antioxidante de las 2o-as ! tallos para todas las variantes de murdago investigados , a excepci'n de los extractos de 2o-as acuosas de VAA vs VA( ( p ^ 9,91 ) , ! para los extractos acuosos madre de VAA vs VA( ( p ^ 9,9B ) 0 6l m3s alto valores se registran en el caso de extracto de 2o-a acuosa VAA ( B,A? m( 7rolox e,uivalentes J g de materia 5resca ) ! extracto de 2o-a de etanol VA& ( 19,7: m( 7rolox e,uivalentes J g materia 5resca ) ( Vicas et al0 911a ) 0 :0: (todo de 76A" 6l 76A" es un mtodo espectro5otomtrico , ampliamente utili4ado para la evaluaci'n de los antioxidantes actividad de diversas sustancias 0 6ste mtodo mide la capacidad de los compuestos para barrer la , N . a4ino . bis ( 3cido : . etilben4otia4olina . > . sul5'nico ) ( A+7S ) cati'n radical en relaci'n con 7rolox 0 1os A+7S a4ul J verde U radical crom'5oro se produce a travs de la reacci'n ===0intec2open0com 1os 5ito,u)micos como nutracuticos . 6n5o,ues globales a su papel en la nutrici'n ! la salud 1 > entre A+7S ! persul5ato de potasio 0 6n la presencia de un antioxidante los A+7S U cambios radicales de a4ul J verde a incoloro, dependiendo de la capacidad antioxidante de la compuesto, su concentraci'n ! la duraci'n de la reacci'n 0 A+7S se disolvi' en agua destilada a una concentraci'n de 7 m( 0 A+7S U se produce por reacci'n de stocI A+7S soluci'n con persul5ato pot3sico ,AB m( ! permitiendo ,ue la me4cla repose , en la oscuridad , a temperatura ambiente durante 1 .1> 2 antes de su uso 0 A+7S soluci'n madre se dilu!' con etanol en a 5in de obtener una absorbancia de 9,79 T 9,9 a 7:A nm 0 Despus de la adici'n de 17 l de extracto de 179 l de A+7S U diluidas , la interacci'n entre los antioxidantes ! los A+7S W U 5ue monitoreado espectro5otomtricamente a 7:A nm ( Arnao et al 0 991 ) 0 Se expresaron los resultados en m( 7rolox e,uivalentes J g de materia 5resca0 Sobre la base de la investigaci'n llevada a cabo , se 2a encontrado ,ue todos los extractos de murdago ( acuosa o

etanol , 2o-a o tallo) tienen la capacidad de captaci'n de cationes radicales A+7S U 0 De acuerdo con la los resultados obtenidos con los ensa!os de 76A" , 2ubo di5erencias signi5icativas (p ^ 9,991 ) entre todas los extractos investigados ( Vicas et al0 911a ) 0 6l nivel m3s alto de los radicales 5ue barrido detectado en extractos de agua ! extractos de etanol tuvo el nivel m3s ba-o de desactivaci'n 0 acuoso extractos de 2o-a ! tallo de murdago ,ue crecen en Acer campestre (VAA ) registraron el ma!or Valores 76A" ( >7@07 T 9099 m( e,uivalentes materia 5resca 7rolox J g ! B77,?A T 9,91 m( e,uivalente materia 7rolox J g 5resco , respectivamente ) , mientras ,ue para el etanol extrae el m3s alto nivel de captaci'n de cationes radicales A+7S U se registr' en las 2o-as de VA% ( A>109? T 9011 m( 7rolox e,uivalente materia J g 5resco) ! se deriva de VA& ( :9>0>@ T 9091 m( e,uivalente materia 5resca 7rolox J g)0 &odemos suponer ,ue los extractos de agua tuvieron la ma!or actividad antioxidante , !a ,ue contienen m3s compuestos bioactivos con la capacidad de los barrido de cationes radicales A+7S U , en comparaci'n con los extractos de etanol ( Vicas et al 0 911a ) 0 :0A (todo de %olin. "iocalteu "ontenido 5en'lico total se determin' por el mtodo de %olin . "iocalteu ( Singleton et al 0 , 1??? ) 0 6xtracto de murdago ( : l ) se me4cl' con 10@17 l de agua destilada , 11B l de %olin. "iocalteu ( diluci'n 1<19 , v J v ) ! :AB l de soluci'n de /a "$: al 1B P , ! la me4cla se incub' a temperatura ambiente , en la oscuridad , durante 2oras 0 1a absorbancia se midi' a 7>B nm utili4ando un espectro5ot'metro ( +io7eI Sinergia ) 0

signi5icativo 0

===0intec2open0com 1 7

70 despus

0 5igura > 0 comple-a 0

antioxidante ===0intec2open0com 1 @

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0 5igura @ 0 al0 , 99?b ) 0 resultados similares ===0intec2open0com 1:9

&or lo tanto ,

posible 0 A 0 conclusi'n

la 5enoles 0

B 0 reconocimiento > 0 Re5erencias

===0intec2open0com 1:1

( 1??@ ) 0 Revista 6uropea

g ed 0

Vol0 0

Vol0 0 ===0intec2open0com

1:

( 99> ) 0 comparativo ( 1?@ ) 0 Academic &ress0 ( 99A ) 0

3lbum0 An3lisis de los

>1 , &ol 0 7ec2nol0 ( 919 ) 0 ===0intec2open0com 1:: ( 99> ) 0

( 1??? ) 0 ( 919 ) 0 Revista Internacional Vol0 0

Antioxidantes biol'gico

6stado 0 ===0intec2open0com 1:A ( 99> ) 0 :>:

===0intec2open0com

===0intec2open0com

#na gran parte 5ito,u)micos 0 lo aplicaciones industriales 0 "'mo 2acer re5erencia