Definicin

Qu es un biorreactor? En su definicin ms simple, los biorreactores son recipientes en los cuales se llevan a cabo reacciones bioqumicas y/o bioprocesos, ya sea con enzimas, microor anismos o con clulas ve etales y animales, viables y no viables! "odas estas especies se conocen como biocatalizadores! #as reacciones bioqumicas se aprovec$an para la transformacin y produccin de sustancias biol icas y qumicas! #os bioprocesos se emplean para la transformacin de materia or nica con la ayuda de un biocatalizador, en sntesis qumica y para la conversin de material de desec$o a productos %tiles &recicla'e( o a efluentes que no son peli rosos para el ambiente &tratamiento de desec$os(! #a caracterstica ms importante de los bioprocesos es su elevado potencial sinttico para llevar a cabo complicadas reacciones qumicas en un solo paso! #a si uiente fi ura muestra distintas clases de biorreactores) Tipos de biorreactores

Bioprocesos industriales
El trmino fermentador, cuando se usa en el conte*to de la microbiolo a industrial, incluye cualquier proceso microbial a ran escala que se lleva a cabo ba'o condiciones aerbicas o anaerbicas! #os microbilo os emplean el trmino fermentacin de dos formas distintas! En el conte*to metablico, la fermentacin se refiere al crecimiento en ausencia de un receptor de electrones e*terno &por e'emplo, o* eno! +e $abla entonces de ,fermentacin, de az%cares para produccin de etanol(- mientras que en el conte*to de los bioprocesos industriales, se $abla de fermentacin cuando se refiere al crecimiento de randes cantidades de clulas! +e desea que los microor anismos usados industrialmente ten an las si uientes caractersticas) rpido crecimiento, estabilidad gentica, no sean txicos y/o patgenos para el ser humano y que posean un gran tamao, para que su remocin del fluido de cultivo sea sencilla.

#os procesos microbiol icos industriales pueden estar orientados para producir) biomasa en!imas espec"ficas, o, metabolitos.

E*isten dos tipos claramente definidos de bioprocesos)

#ultivos de superficie
+e usan principalmente cuando los micelios act%an como catalizadores! El micelio crece en bande'as que contienen una peque.a cantidad de medio de cultivo! / medida que el micelio crece, va formando una capa compacta! Este mtodo se us para la produccin de cido ctrico!

Este tipo de cultivo se usa muy poco en la produccin a ran escala y se prefiere en su lu ar, el cultivo sumer ido!

#ultivos sumergidos
En este tipo de procesos, los microor anismos se suspenden en un medio lquido! El e'emplo ms simple de un cultivo sumer ido consiste en un recipiente sin nin %n dispositivo de a itacin en el cual los microor anismos se establecen en el fondo y forman una capa compacta! Este es el arre lo clsico para todos los procesos de produccin de etanol! En este caso, puede presentarse movimiento del lquido debido a las burbu'as de di*ido de carbono que se forman y ascienden!

#os si uientes campos de aplicacin de los procesos bioqumicos y microbiol icos, poseen actualmente importancia industrial y econmica) $roduccin de prote"na unicelular %&#$, por sus siglas en ingls' a partir del metano, fracciones de aceite mineral, residuos agr"colas, etc. $roduccin de alimentos( levadura para panader"a, vinagre y bebidas alcohlicas, entre otros. $roductos farmacuticos( antibiticos, vitaminas, esteroides y sustancias qu"micas orgnicas como( cidos, aminocidos, solventes, polisacridos y sustancias para crecimiento. )ecuperacin microbiolgica de suelos contaminados. $roduccin de energ"a %hidrgeno, metano, etanol' y de materias primas por lixiviacin microbial de minerales. *so de microorganismos como catali!adores en reacciones orgnicas %biooxidacin, biorreduccin, biofosforilacin, etc.' y como fuentes de en!imas importantes %detergentes, industria de alimentos, medicina'

0n importante e'emplo de la aplicacin industrial de biocatalizadores, es el tratamiento de a uas residuales) En el tratamiento de a uas residuales, los microor anismos son importantes por dos razones! 1rimera, uno de los ob'etivos del tratamiento es la destruccin de todos los or anismos microbiales pat enos que estn presentes en el a ua! +e unda, la actividad microbial se emplea para o*idar la materia or nica presente a metano o di*ido de carbono!

E*isten tres pasos en el tratamiento! El tratamiento primario remueve fsicamente partculas slidas en una la una de sedimentacin por medio de mallas ! El tratamiento secundario utiliza microor anismos para reducir el nivel de materia or nica! #a materia or nica residual se cuantifica con base en la demanda bioqumica de o* eno &234(! El tratamiento terciario incluye procesos de remocin de nutrimentos inor nicos, tales como fosfatos y nitratos! #a mayora de las plantas de tratamiento utilizan %nicamente los tratamientos primario y secundario! El tratamiento secundario puede involucrar el uso de procesos aerbicos o anaerbicos! #as macromolculas se $idrolizan a monmeros solubles- stos se fermentan por una serie de bacterias a acetatos, $idr eno y di*ido de carbono! / su vez estas sustancias se convierten a metano por medio de microor anismos metano nicos! Tratamiento secundario de aguas de desecho

El tratamiento aerbico secundario se puede llevar a cabo bien sea en un filtro por oteo o en un proceso de lodos activados! En este %ltimo, se forman flculos microbiales en los cuales la materia or nica se o*ida o se adsorbe! Estos flculos sedimentan en un tanque apropiado y se conducen a un di estor de lodos en donde lo que queda del material or nico se convierte en productos aseosos!

Tratamiento de lodos activados

3iorreactores para la de radacin de combustibles en el suelo 5ecuperacin de a uas y suelos con el uso de biorreactores

Eleccin del reactor

#a eleccin preliminar de un reactor depende de varios factores, entre los cuales, se destacan) "ipo de microor anismos Estado metablico de esos microor anismos 6edio de cultivo 6odo de operacin +ustratos empleados Esterilidad y $ermeticidad 7alor de los productos deseados

Tipo y propiedades del biocatalizador

#as clulas empleadas en biorreactores pueden ser bacterias, levaduras, $on os, y clulas ve etales o animales! 8ada una de ellas difiere en las demandas que $acen al ambiente, sus necesidades nutricionales y los productos que forman!

$rocariotes
1oseen un tama.o entre 9,: ; <9 m y se encuentran como clulas individuales o como micelios! 8omo crecen rpidamente, tienen requerimientos especiales en relacin con una temperatura e intervalo de p= ptimos- y debe disponerse de un adecuado suplemento de nutrimentos en el reactor! >i ura <! #ianobacteria, microorganismo procariote t"pico

+ucariotes
8omo resultado de su comple'a estructura y un tama.o de ? ; @9 m, los microor anismos eucariotes son eneralmente ms difciles de controlar en el biorreactor que los microor anismos procariticos! 1articularmente, en el caso de la formacin inicial de micelios, se debe evitar cualquier tipo de esfuerzo mecnico! 1or esta razn, la ener a suministrada al fermentador por movimiento interno es frecuentemente desfavorable! >i ura :! #lula eucariote animal

#lulas vegetales
+on fr iles y relativamente randes &apro*! ?9 m(! 8recen lentamente, demandan un ran suplemento nutricional y en el caso de embriones somticos, un apropiado suministro de $ormonas para el crecimiento y la diferenciacin! 1or esta razn, los biorreactores para el cultivo de clulas ve etales son relativamente peque.os! El o* eno debe alimentarse con el uso de m%ltiples inyectores! 1uede resultar venta'oso emplear reactores con circulacin pneumtica interna y e*terna! >i ura @! #lula vegetal

#lulas animales
8omo resultado de su ran tama.o &?9 ; <99 m(, estructura comple'a &ver fi ura :(, y sensibilidad mecnica, el medio nutricional tiene que satisfacer randes demandas y el biorreactor debe cumplir con requerimientos especiales! #as clulas animales pueden da.arse cuando las burbu'as de aire estallan, coalescen o ascienden rpidamente a la superficie del lquido! 1ara tratar de prevenir el esfuerzo cortante que se ori ina por la formacin y el ascenso de las burbu'as durante la aireacin, se emplean filtros cilndricos concntricos, que retienen el material celular y permiten el paso del lquido, el cual se recircula permanentemente $asta que el o* eno y por consi uiente, las burbu'as que lo contienen, se a oten por completo! #a aireacin por medio de burbu'as libres a travs de tubos de silicona o poliuretano o la eneracin de un ran n%mero de peque.as burbu'as de aire, se emplea frecuentemente para tratar de prevenir el esfuerzo cortante que se ori ina por la formacin y el ascenso de las burbu'as!

#as medidas tomadas para cultivar clulas animales sin paredes celulares incluyen el uso de randes y lentos a itadores de rotacin, peque.as relaciones altura a dimetro del reactor, adicin de a entes de proteccin viscosos, y minimizacin de la cavitacin, flu'o de impacto y colisin de las partculas!

,rganismos con -./ recombinante

Estos cultivos contienen poblaciones con un n%mero variado de copias de un plsmido! 8lulas con un muy reducido n%mero de copias proliferan ms rpido que aquellas con un ran n%mero de copias! 1ara contrarrestar la proliferacin de or anismos de plsmido libre, el cultivo puede llevarse a cabo en presencia de antibiticos si se $a introducido previamente un en de resistencia a antibiticos! >i ura A! 0otograf"a de un plsmido obtenida por medio del microscopio electrnico

Estado metablico
En el cultivo de microor anismos aerobios, el medio de cultivo siempre debe contener o* eno disuelto suficiente para permitir que ocurran las reacciones bioqumicas en los or anismos! El o* eno es muy poco soluble en el medio de fermentacin y suplir este nutriente a los microor anismos es tcnicamente muy comple'o! #os dems componentes de la solucin nutriente son bastante solubles, o se pueden solubilizar fcilmente en a ua!

En procesos aerobios, se debe proporcionar al medio un adecuado y efectivo suministro de o* eno por dispersin y subsecuente mezcla, en todas las zonas del reactor! #os requerimientos tpicos de o* eno para al unos procesos aerobios se muestran en la si uiente tabla ) $armetro 8oncentracin sustrato, /l Tratamiento aerbico 0ermentacin de aguas de desecho aerbica del 9,9? ; 9,? :9 ; <?9 ? ; <99 :;C #ultivo de clulas de mam"feros < ; <9 <9B? ; < 9,99< ; 9,<

8oncentracin del : ; ? biocatalizador, /l 7elocidad especfica 9,? de consumo de o* eno, mmol/& $( 1otencia aireacin DE/m@ y para 9,9: ; 9,: mezcla,

9,? ; :,? industrial(

&Escala F 9,9<

9,? B <? &En plantas piloto( +i se conocen el tipo de or anismo y las fuentes de carbono y nitr eno, el requerimiento de o* eno de un cultivo aerbico se puede estimar a partir de la estequiometra de la respiracin microbial! /parte de la demanda lobal de o* eno de un cultivo aerobio, la eleccin de un biorreactor tambin depende de la concentracin crtica de o* eno en la fase lquida por deba'o de la cual la velocidad especfica de absorcin de o* eno desciende dramticamente y perturba el metabolismo celular! +in embar o, esta perturbacin puede tener un efecto venta'oso sobre la formacin de intermediarios metablicos, y estos productos se ori inan frecuentemente ba'o condiciones de li era limitacin en el suministro de o* eno! 1or esta razn, los reactores para procesos aerbicos son equipados con instrumentos de medida del o* eno en las fases lquida y aseosa! En los procesos anaerobios no se requiere dispersin aseosa puesto que estos procesos son lentos y el mezclado es menos crtico! +e debe controlar %nicamente el p= y la temperatura!

Propiedades fisicoqumicas del medio

#a eleccin, dise.o y modo de operacin de los biorreactores estn especialmente influidos por las propiedades fisicoqumicas descritas a continuacin!

+stado de agregacin del sustrato

#os sustratos gaseosos deben dispersarse en el medio lo ms $omo neamente posible para arantizar una adecuada velocidad de transferencia y absorcin- resulta venta'osa la dispersin por medio de platos perforados, dispositivos internos o a itadores m%ltiples, los cuales incrementan el rea de contacto entre las fases lquida y aseosa! 8on el fin de ase urar una transferencia de masa adecuada, debe procurarse un tiempo de residencia conveniente para las burbu'as y un incremento en la turbulencia, mediante el uso de deflectores y a itadores apropiados y con caractersticas especiales de impulsin! #as limitaciones locales del suministro de sustrato se evitan, mediante el empleo de diferentes puntos de alimentacin de as, distribuidos a lo lar o del reactor! En el caso de sustratos voltiles, la prdida por evaporacin debida a la aireacin puede reducirse con el uso de) &istemas condensadores, que devuelvan el sustrato voltil al medio de cultivo, o con aparatos multietapas, en los cuales el gas de una etapa entra en la siguiente, reduciendo la cantidad de voltil arrastrado por una disminucin progresiva en el gradiente de concentracin del volatil en el gas en cada etapa.

#os sustratos slidos deben suspenderse adecuadamente- los slidos pueden afectar el sello mecnico del e'e en los reactores de tanque a itado &en sistemas en los cuales el e'e de a itacin entra por el fondo del reactor(! Go deberan usarse tamices, platos perforados o re uladores abiertos, para evitar posibles obstrucciones!

#omple1idad de los sustratos

#a esterilizacin por medio de temperatura de medios de cultivo comple'os &'arabe de maz, e*tracto de levadura, melazas, $arina de man o $idrolizado de almidn(, es posible %nicamente $asta un cierto rado de esterilidad , puesto que el medio puede verse afectado severamente por las condiciones de temperatura y tiempo! El efecto de los microor anismos residuales que puedan $aber sobrevivido a la esterilizacin, debe ser controlado y atenuado mediante) $rocesos rpidos, grandes cantidades de inculo, mantenimiento de la temperatura y el p2 ptimos y el uso de elevadas concentraciones de sustrato y producto.

El mtodo esco ido de aireacin, dispositivo de mezclado, eometra del reactor, dispositivos de alimentacin y control de la espuma, dependen de si el medio fomenta la coalescencia &aceite de soya, a ente antiespumante(, o la in$ibe &alco$oles, cidos or nicos(! +i se fomenta la coalescencia, se prefieren a itadores multiples o reactores de columna con mezcladores estticos!

)eolog"a del medio

#a viscosidad del medio determina) la velocidad de transferencia de ox"geno, el tiempo de me!clado, la energ"a de entrada, los patrones de flu1o, la formacin de burbu1as, el volumen de las burbu1as y la coalescencia de las mismas.

#os medios altamente viscosos estn asociados con elevadas concentraciones de sustrato, suspensiones, productos de alto peso molecular disueltos en el medio & oma *antana, celulosa, almidones(, presencia de micelio & $enicillium chrysogenum( y con medios $etero neos que contienen componentes conformadores de estructuras &coloides(- debe, adems, arantizarse la aireacin lobal de la mezcla y disponerse de fuentes de potencia suficiente para ello! #os a itadores m%ltiples con altas velocidades de a itacin o con elevadas relaciones dimetro del impulsor a dimetro del tanque, facilitan dic$a accin!

0ormacin de espuma
#a formacin de espuma puede influir decisivamente en la eleccin del reactor! #a espuma puede evitarse modificando la composicin del medio y controlando la lisis, el enve'ecimiento y la destruccin de las clulas causados por el esfuerzo mecnico entre ellas- si esto no es posible, la formacin de espuma debe reducirse con el uso de a entes antiespumantes, disminuyendo el p=, empleando rompedores mecnicos de espuma, inyectando vapor o usando reactores de tipo especial, como por e'emplo) reactores sumer idos de propulsin! #a formacin de espuma reduce el volumen efectivo de reaccin y produce sobreflu'o dentro de los filtros de as de desec$o- con la consecuente prdida del producto y la destruccin de las clulas dbiles!

Modos de operacin

El biorreactor puede operarse en una de las si uientes formas) 4peracin discontinua o por lotes &batc$(, 4peracin continua, o 7arios tipos de operaciones semicontinuas. En la si uente tabla, se resumen los al unas de las distintas formas de operacin de un reactor biol ico) 6odo de operacin $or lotes 8omentarios 8urva) tiempo concentracinB 3alance de masa en un reactor ideal

Hnoculacin y car a de todos los nutrimentos y sustratos al mismo tiempo y $asta consumo total

$or lotes alimentacin intermitente

con

7arios esquemas volumen ; tiempo y velocidades de alimentacin

$or lotes extendida

#a concentracin del sustrato &c&(, permanece constante

$or lotes repetida

2espus reaccin peque.a fermento para que para el proceso que $a ocurrido la en un lote, una cantidad del se saca del reactor sirva como inculo si uiente lote del

/ntes de estacionario)

estado

#ultivo continuo %quimiostato' 8on flu'os de entrada y de salida del medio de reaccin! El reactor se denomina quimiostato, en aquellos casos en los cuales la densidad celular y la concentracin permanecen En estado estacionario) constantes

/ntes de estacionario)

estado

En estado estacionario)

#ascada de reactores continuos de tanque agitado

8on o sin alimentaciones intermedias y recirculacin del medio de cultivo o del biocatalizador

)eactor continuo de tanque agitado con recirculacin de biocatali!ador

#ombinacin de reactores %)eactor continuo de tanque agitado y reactor de flu1o en pistn' El reactor continuo de tanque a itado sirve como un reactor de inoculacin, ya que la operacin en estado estacionario de un reactor de flu'o en pistn no es posible debido al desplazamiento del biocatalizador

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Operacin por lotes

+e caracteriza por la inoculacin de un medio de cultivo estril con microor anismos, por un perodo especfico de reaccin! 2urante este tiempo, se alteran las concentraciones de clulas, sustrato &fuente de carbono, sales, nutrimentos, vitaminas, etc!( y producto! 0na buena mezcla ase ura que no e*istan diferencias locales si nificativas en la composicin y en la temperatura de la mezcla de reaccin! 1or otra parte, la reaccin no es estacionaria! #as venta'as de una operacin por lotes son) 3a1o costo de inversin ya que no se emplean muchos dispositivos de control, 4ran flexibilidad puesto que el biorreactor se usa para la produccin de varias sustancias y especificaciones de producto, /ltos niveles de conversin como resultado de un per"odo de cultivo bien definido, 5enor riesgo de infecciones y mutacin celulares debido a los per"odos relativamente cortos de cultivo.

#as desventa'as de una operacin de este tipo son)

+l denominado tiempo muerto, 4ran desgaste de los instrumentos de medida debido a la frecuente esterili!acin, +nsuciamiento del reactor debido a la preparacin de numerosos subcultivos para inculo, /ltos costos de personal ya que es necesario un control adecuado y estricto del proceso no estacionario, lo que involucra personal y equipos apropiados, 4ran riesgo para el personal de servicio, al estar expuestos al posible contacto con algunos microorganismos patgenos o productos txicos.

El uso de un proceso por lotes se recomienda cuando) +stn involucradas pequeas cantidades de producto, +l reactor se utili!a para la produccin de varias sustancias, +xiste un alto riesgo de contaminacin, &e presenta un elevado riesgo de mutacin, 6a separacin del producto del medio de cultivo es discontinua.

Operacin continua
8aracterizada por el $ec$o que el medio de cultivo se alimenta continua y $omo neamente al biorreactor y debe ser constante, si se opera en estado estacionario- el medio a.adido puede ser estril o contener los microor anismos que se van a utilizar! #a mezcla reaccionante se e*trae del reactor tambin de forma continua! "odas las variables de reaccin y los parmetros de control permanecen

constantes a travs del tiempo- como resultado de lo anterior, se establece un estado estacionario en el reactor se uido por una productividad y una salida constantes! #as venta'as de la operacin continua son) Grandes posibilidades para la mecanizacin y la automatizacin Bajos costos Menor volumen del reactor, ya que no se presentan perodos de tiempo no productivos dedicados a la descarga, carga y esterilizacin La calidad del producto es constante puesto que las condiciones de operacin permanecen invariables Menor posibilidad de exposiciones peligrosas del personal de servicio a microorganismos patgenos o materiales txicos, debido a la mayor mecanizacin del proceso Menor desgaste y maltrato de los instrumentos en la esterilizacin.

#as desventa'as de la operacin continua son) poca versatilidad puesto que slo es posible e ectuar ligeros cambios en las variables de proceso !"omogeneidad, composicin del medio, concentracin de oxgeno, temperatura#, la calidad de las materias primas debe ser uni orme ya que las condiciones de operacin no pueden acondicionarse $cilmente, elevados costos de inversin, debidos principalmente a los equipos de control y automatizacin y a la esterilizacin continua del medio, la renovacin continua de sustratos slidos no solubles !como la paja# puede ser muy costosa, alto riesgo de contaminacin y de mutacin de los microorganismos debido a los largos perodos de cultivo.

8on base en las venta'as y desventa'as mencionadas anteriormente, la operacin continua se recomienda en aquellos procesos caracterizados por sus altas velocidades de produccin- para sustratos slidos solubles, aseosos o lquidos y cuando los microor anismos utilizados posean una elevada estabilidad a la mutacin!

Operacin semicontinua
1uede considerarse como una combinacin de las dos operaciones anteriormente descritas &por lotes y continua(! +e practican muc$as variaciones de este tipo de proceso! #a ms popular involucra iniciar el reactor como si se tratara de un proceso por lotes y cuando el sustrato que limita el crecimiento &por lo eneral la fuente de carbono( se consuma, se alimenta al reactor de una manera especfica &proceso por lotes con alimentacin(, o la concentracin del sustrato se mantiene constante por medio de cultivos extendidos! /dems, se practica frecuentemente la adicin pro ramada de sustrato para la produccin de metabolitos secundarios, en la cual, el crecimiento celular y la formacin de producto ocurren por lo eneral en fases separadas! #as venta'as de la operacin semicontinua son) /lto grado de flexibilidad 5todo de operacin semiestacionario, aun en el caso de microorganismos con ligero riesgo de mutacin e infeccin /ltos rendimientos, como resultado de un tiempo de cultivo bien definido %en la operacin semicontinua no se aaden ni se retiran clulas durante el per"odo de cultivo por esta ra!n el reactor opera por lotes siempre y cuando existan los microorganismos de inters', &e pueden optimar las condiciones ambientales de los microorganismos para me1orar la fase de crecimiento, la fase productiva y la edad del cultivo.

#as desventa'as de este proceso son) +l tiempo muerto 6os altos costos de operacin +l gran riesgo para el personal de servicio, de contacto con microorganismos patgenos o productos txicos +l mayor desgaste de los instrumentos por su esterili!acin ms frecuente.

#a operacin semicontinua se emplea a menudo, cuando no es posible practicar los mtodos continuos, por e'emplo) debido a la li era mutacin o infeccin del or anismo o cuando la operacin por lotes ofrece una ba'a productividad! /l i ual que los reactores por lotes, los reactores semicontinuos no son estacionarios!

Sustratos
#a eleccin del biorreactor se ve influida) por el grado de reduccin de un sustrato, esto es, por el contenido de oxgeno, por las velocidades de consumo de sustrato, especialmente absorcin de oxgeno, por la ormacin de producto y el incremento de su concentracin y por la in"ibicin o activacin del biocatalizador.

En el caso de sustratos con un alto rado de reduccin &ba'o contenido de o* eno(, la velocidad de entrada requerida de o* eno y la velocidad especfica de produccin de calor q7 &DI D B< sB<(, son ms altas que las de sustratos con un ba'o rado de reduccin- por ello tienen que emplearse reactores con buenos sistemas de remocin de calor, puesto que la temperatura de los procesos de fermentacin deben en lo posible, mantenerse en un valor constante ptimo! #as biorreacciones con un p= ptimo de difcil mantenimiento, deberan llevarse a cabo en reactores con una alta intensidad de mezcla y un tiempo corto de mezclado- adems, deben poseer un sistema de distribucin de alimentacin de los a entes de control de p= para prevenir las concentraciones locales de cidos o bases &a'uste de p=(! #os intermedios inestables o t*icos, o los productos finales pueden ser retirados de la mezcla de reaccin, por medio de una etapa inte rada de separacin &adsorcin, membranas, a entes de e*traccin, o absorbedores de as(

Esterilidad y hermeticidad

"odos los tipos comunes de reactores qumicos pueden usarse para fermentaciones estriles si sus filtros, sellos, vlvulas, tomamuestras, sensores y prensaestopas, satisfacen el dise.o y requerimientos tcnicos del material! #as si uientes son las principales e*i encias para una operacin estril) %orma geom&trica simple Mnimo n'mero de bridas y soldaduras (liminacin de puntos muertos )'mero adecuado y conveniente de entradas, salidas y v$lvulas esterilizables *onas del reactor que puedan ser esterilizadas por separado (levado coe iciente de seguridad en caso de sobrepresiones )'mero adecuado de boquillas de medicin y muestreo Mnima super icie rugosa +gitador con prensaestopa esterilizable

spectos econmicos y de se!uridad

+i se producen peque.as cantidades de un producto especial, el uso de un reactor de tanque a itado es venta'oso- para productos especiales de alta calidad, se puede seleccionar un reactor con dise.o especial! El escalamiento de un proceso es ms fcil, cuando se utilizan reactores de tanque a itado, columnas de burbu'eo o reactores con circulacin inducida! 2eben atenderse especialmente las normas de operacin y de se uridad para plantas industriales biotecnol icas- cada pas o rupo econmico dispone de sus propias normas en lo referente al mane'o de microor anismos pat enos, sustancias t*icas y carcino nicas, las cuales deben observarse sin reserva!

Principios de la creacin de modelos matem"ticos

#a modelizacin de procesos y sistemas en las in enieras de alimentos y bioqumica es un mtodo de traba'o com%n de la tecnolo a, tanto para la in eniera qumica y bioqumica como para la economa! #a teora de la modelizacin debe contener los mtodos e*actos para el conocimiento del fundamento de los procesos, con base en el anlisis y sntesis, as como tambin las uas para la aplicacin de los conocimientos cientficos no solamente en la pra*is in enieril sino, adems, en la investi acin e*perimental de las propiedades de los sistemas tcnicos! En eneral se puede decir que la biotecnolo a es posible entenderla como un todo, la cual se compone de unos componentes ele idos adecuadamente, entre los cuales es necesario distin uir los equipos, las operaciones y los procesos! #as corrientes de materia en el procedimiento de produccin son sometidos a diferentes operaciones tecnolgicas, las cuales se efect%an en los dispositivos correspondientes- dic$as operaciones son, por e'emplo) esterilizacin, evaporacin, iltracin, extraccin, ermentacin, etc.

#a sucesin de operaciones que pueden ima inarse como parte e*clusiva del procedimiento de produccin, se le suele denominar tambin proceso- as, por e'emplo, se $abla del proceso de produccin de aceite a partir de semillas de al odn! Es del todo %til $acer la distincin entre los conceptos de operacin y proceso fsico y proceso qumico respectivamente- por estos %ltimos se entender todo aquello que se %n nuestra ima inacin acontece en las operaciones- en la mencionada produccin de aceite de semillas de al odn se realizan procesos elementales de transporte de materia, en los cuales el aceite se e*trae de la fase slida y se entre a al torrente lquido! En relacin con la solucin matemtica de tareas tecnol icas en la teora de la modelizacin, as como tambin en la teora de la in eniera qumica sur e en todo momento el concepto de sistema!

En eneral se entiende por sistema un con'unto de entes, cuya interaccin produce la aparicin de nuevas cualidades inte rativas, no in$erentes a los entes individuales que constituyen el sistema- el ne*o entre los elementos constitutivos del sistema es tan ntimo y cardinal, que la modificacin de uno de ellos enera la modificacin de los dems y con frecuencia la de todo el sistema! #a e*istencia de una interaccin tan estrec$a del ne*o or nico de los componentes, es el fundamento por el cual en la interaccin con el entorno del sistema, ste %ltimo aparece siempre como un todo %nico dotado de definicin cualitativa! El sistema, en consecuencia, es una formacin en la cual las cone*iones internas de los componentes entre s prevalecen sobre el movimiento interno de esos componentes y sobre las influencias e*trnsecas en ellos- el sistema incide activamente sobre sus componentes, los transforma de acuerdo con su propia naturaleza y de a$ que los entes iniciales sufran cambios visibles, es decir, pierden al unas propiedades que posean antes de inte rarse al sistema y adquieren propiedades nuevas! /l formarse el sistema, con frecuencia se en endran componentes nuevos que antes careca! 8ibernticamente, el sistema no representa meramente la simple unin de las componentes del sistema sino una verdadera red de transformacin de la informacin- las propiedades internas del sistema se caracterizan por) Aspectos componentes, Aspectos estructurales: los ms estables y condicin para cambios cuantitativos dentro de l y premisas indispensables para su ulterior desarrollo, Aspectos funcionales y, Aspectos integrativos

+e $ace necesario distin uir en los sistemas, su estructura y su comportamiento orientado a los fines! #a estructura encierra el n%mero y la caracterstica de los subsistemas, as como tambin las relaciones recprocas de aquellos en el sistema- la representacin de la estructura puede ser mediante un dia rama de flu'o o de 6ason o mediante un dia rama de bloques! El actual desarrollo de la tcnica conlleva a los denominados sistemas tcnicos comple'os randes! +e entiende por sistema rande no solo por el n%mero de los elementos que lo constituyen) aparatura, instrumentacin etc!, sino tambin se %n el n%mero de ma nitudes de entrada y de salida que caracterizan su operacin y del n%mero de relaciones entre estas ma nitudes! #a comple'idad del sistema se aprecia tambin se %n la comple'idad de las relaciones entre las ma nitudes participantes en el mencionado sistema! 2e acuerdo con las tendencias actuales la teora de la tcnica qumica es desarrollar)

La teora de los enmenos sicos y qumicos, las operaciones, los procesos y los sistemas grandes complejos,

y con base en estas teoras) +veriguar los cambios de potencia, de productos y de costos para un amplio cambio de los valores de las variables y par$metros de los subsistemas del sistema estudiado, sin su medicin en los respectivos equipos industriales correspondientes, esta tarea tiene sentido cuando la manu actura tan solo se est$ proyectando. -u objetivo puede ser el an$lisis econmico, la optimizacin y el conocer las propiedades del sistema para condiciones extremas. La investigacin de las propiedades din$micas de los subsistemas de sistemas qumicos y biotecnolgicos y suministrar los undamentos para la regulacin y control autom$ticos de la produccin mediante la ayuda del ordenador o computadora o al menos para mejorar su regulacin. Mediante la modelizacin matem$tica del sistema, identi icar aquellos valores altantes de los par$metros tecnolgicos de los equipos necesarios para su dise.o y de los cuales no se tiene documentacin t&cnica alguna disponible. (l empe.o por lograr soluciones exactas a estas tareas trae consigo un incremento del trabajo cienti icot&cnico, el cual exige conocimientos amplios y pro undos tanto de las ciencias b$sicas/ matem$tica, sica, qumica, biologa y isicoqumica, como de la teora de la modelizacin matem$tica, de optimizacin, de la regulacin y control, de economa y de bioingeniera.

#lasificacin de los Modelos

#os modelos se pueden clasificar se %n diferentes puntos de vista, mas sin embar o, la e*periencia ense.a que todos los posibles modelos, en primera instancia, se pueden obtener mediante) 6a apro*imacin e*perimental) modelos experimentales y,

6a apro*imacin terica) la cual no se puede apoyar en la experimentacin y exige una representacin diferente de los procesos %de cualquier "ndole' con el fin de estudiar su comportamiento dinmico, para lo cual, muy a menudo, se da preferencia a los modelos matemticos.

#in$tica de los procesos bioqumicos y microbiol!icos

#a actividad cataltica es una importante propiedad de numerosos materiales biol icos denominados en eneral como biocatalizadores, los cuales incluyen clulas completas, partes de clulas y enzimas! Jstos intervienen en las reacciones qumicas que ocurren usualmente en los or anismos vivos! #os temas contemplados en este captulo son) 8oeficientes estequiomtricos 8oeficientes de rendimiento 5eacciones catalizadas por enzimas 1rocesos microbiol icos 3iocatalizadores inmovilizados

#oeficientes estequiom$tricos

#os procesos y sus estequiometras, se a rupan y e*presan en forma de balances de materia con el fin de describir la cintica de las reacciones microbiol icas! #a si uiente ecuacin e*presa el crecimiento de biomasa y el crecimiento de biomasa asociado a la formacin de producto)

#as reacciones de crecimiento independiente se e*presan por)

#os trminos 8&i y 8$i son los coeficientes estequiomtricos normalizados con respecto a una unidad de masa de 9)

2onde, :9/&i e :$/&i, son los coeficientes de rendimiento de biomasa y de producto en el sustrato ,i,, respectivamente!

8oeficientes estequiomtricos 2eterminacin de coeficientes estequiomtricos

#oeficientes de rendimiento
El concepto de rendimiento es un aspecto importante en la evaluacin econmica del potencial de un sustrato or nico para la produccin de biomasa o la formacin de subproductos! #a definicin de coeficiente de rendimiento utilizada por 6onod, de naturaleza

macroscpica, $a sido modificada para cuantificar rendimientos en clulas, en subproductos e inclusive en ener a! El coeficiente de rendimiento :i/1 se define como)

Este coeficiente se determina e*perimentalmente se %n el lado derec$o de la ecuacin anterior! El consumo de sustrato para metabolismo microbial end eno se obtiene de la relacin lineal)

2onde, %:9/&'real es el coeficiente de rendimiento verdadero y m& es el coeficiente end eno de mantenimiento! :9/& es funcin de la concentracin de sustrato, de las condiciones de reaccin, y del perodo de cultivo! El coeficiente efectivo de rendimiento :$/&, ef se define como)

eneralmente

+ustituyendo r9 por 9 y r$ por q$9 en la ecuacin anterior, se tiene)

2efinicin matemtica de rendimiento

%eacciones catalizadas por enzimas

#as enzimas son protenas elaboradas por las clulas a partir de aminocidos! 8ada enzima es una molcula especializada que cataliza %nicamente un tipo especfico de reaccin qumica! En fracciones de se undo, se catalizan numerosas secuencias de reacciones enzimticas con un rendimiento del cien por cien sin formacin de subproductos! #as enzimas catalizan los millares de reacciones qumicas, conocidas colectivamente como metabolismo intermediario de las clulas! 0uncionamiento de una en!ima

El poder cataltico de las enzimas $a sido e*plotado por los $umanos durante miles de a.os! El producto final se forma por un n%mero de pasos de reaccin que son catalizados por un sistema de enzimas especfico! El sistema enzimtico est localizado eneralmente dentro de la clula viviente &microor anismo, clula ve etal o animal(! #a actividad cataltica de la clula completa o parte de ella, se emplea de la misma forma que la de las enzimas aisladas! El rado de especifidad de una enzima con respecto a la reaccin catalizada o a la funcin de los reactivos, depende de su funcin biol ica! El sitio activo de una enzima es una re in tridimensional formada por unos pocos aminocidos, orientados en la direccin apropiada para permanecer biol icamente activos y li arse con el respectivo sustrato! /%n no se $an aclarado completamente los mecanismos de enlace y la accin cataltica en el sitio activo, pero el concepto bsico de formacin de un comple'o enzima ; sustrato es el fundamento de las ecuaciones de velocidad de muc$as reacciones enzimticas! &itio activo de una en!ima

/l unas enzimas necesitan un componente qumico inor nico para su actividad denominado cofactor, o una molcula or nica comple'a, llamada coenzima- al unas requieren cofactor y coenzima! >recuentemente el cofactor est li ado con la porcin proteica de la enzima, en cuyo caso recibe el nombre de rupo prosttico! 8iertas enzimas e*isten en formas m%ltiples, llamadas isoenzimas- su forma cambia durante el desarrollo del or anismo y se %n el te'ido del cual $acen parte! #as enzimas re uladoras o alostricas son estimuladas o in$ibidas por la unin con al una molcula, el efector o modulador, eneralmente un producto metablico, cuya concentracin en la clula es crtica! 1ara la modelizacin de reacciones o administracin de procesos, se prefiere el uso de enzimas sencillas purificadas, pero en al unos casos esta simplificacin conlleva a dificultades prcticas &estabilidad primaria de la enzima y costos de purificacin(! 1or esta razn, el

uso de clulas completas o partes de ellas que contienen un sistema apropiado de enzimas, puede ser venta'oso especialmente cuando se involucran reacciones comple'as! 1or otro lado, los problemas concernientes a la biomasa residual y al tratamiento de a uas de desec$o involucrados en la produccin de enzimas a ran escala, as como los costos de la separacin y purificacin de la enzima, pueden volverse pro$ibitivos! #a ba'a actividad especfica de las clulas completas y una selectividad potencialmente ba'a son frecuentemente compensadas por el ba'o costo y la simplicidad de uso! +s extremadamente complicado el modelamiento matemtico de la capacidad metablica de los microorganismos para la determinacin cuantitativa de la proliferacin, crecimiento, formacin de producto, mantenimiento celular y enve1ecimiento. $or otra parte el tratamiento cintico de las reacciones con en!imas es relativamente simple.

&elocidad inicial de una reaccin catalizada por enzimas

0n e*perimento tpico para medir la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima pura consiste en mezclar las soluciones de sustrato y de la enzima apropiada en un recipiente bien a itado y ba'o condiciones isotrmicas con una solucin amorti uadora &buffer( de p=! #a concentracin de sustrato y de producto se re istra en diversos momentos mediante tcnicas espectrofotomtricas, manomtricas, polarimtricas, con electrodos y mtodos de muestreo y anlisis! #a variacin inicial de la concentracin de sustrato, o de producto, con respecto al tiempo, puede calcularse a partir de la ecuacin)

2onde, c$, c& concentracin de producto y de sustrato respectivamente- t es el tiempo de reaccin y es la velocidad inicial de reaccin! 1ara t K 9, c$ K c$; y c& K c&; El n%mero de recambio, &.(, de una enzima, es el n%mero de molculas de sustrato transformadas por unidad de tiempo por una molcula de enzima, o por cada centro cataltico, cuando la enzima es el factor limitativo de la velocidad!

'nfluencia de los factores ambientales

En la clula se forman continuamente centenares de enzimas que funcionan coordinadamente para formar productos en la proporcin correcta y aprovec$ar los nutrimentos disponibles sin desperdiciarlos! #a estructura de una enzima depende de numerosos enlaces dbiles no covalentes, por lo cual la enzima tiende a perder su conformacin o desnaturalizarse! #a actividad especfica de una enzima puede verse afectada por factores ambientales tales como el p=, la temperatura, los esfuerzos cortantes, la intensidad inica del medio y el estado de la enzima en el reactor &es decir si est en solucin o inmovilizada sobre un soporte(! Estos factores deben tenerse en cuenta en el dise.o de reactores para la conversin de sustrato en productos %tiles!

p2
E*iste un valor ptimo de p= para el cual la actividad enzimtica es m*ima! #a influencia del p= se debe a los rupos ionizables presentes en el sitio activo de la enzima, los que pueden tener una car a positiva o ne ativa, de acuerdo con el p= del medio, pero el sitio activo debe estar en la forma inica adecuada para tener actividad cataltica!

Temperatura
#a temperatura, en el intervalo adecuado, favorece inicialmente la activacin de la enzima- pero cuando es demasiado alta, la inactiva o desnaturaliza! / medida que la temperatura aumenta, tambin aumentan la velocidad de reaccin y la frecuencia de las colisiones entre molculas de enzima y sustrato! Esta velocidad alcanza un m*imo a la temperatura ptima para la actividad de cada enzima en particular! 0n incremento adicional de temperatura reduce radualmente la velocidad de la reaccin catalizada debido a la ruptura de los enlaces dentro de la molcula de enzima! #os avances en biolo a molecular estn diri idos $acia la modificacin de la estructura de la enzima con el propsito de conservar su actividad dentro de un intervalo ms amplio de temperatura y de p=, y as aumentar su campo de aplicacin! Leneralmente, la influencia de la temperatura sobre la activacin o inactivacin de un sistema enzimtico, puede describirse mediante la ecuacin de /rr$enius)

2onde, +/ es la ener a de activacin, ) es la constante de los constante de velocidad!

ases, T la temperatura absoluta, / es el factor de frecuencia y < la

Modelos cin$ticos de las reacciones catalizadas por enzimas

2entro de los principales modelos cinticos enzimticos estn) 6ic$aelis 6enten 3ri s B =aldane

5eaccin enzimtica reversible Hn$ibicin competitiva Hn$ibicin por sustrato Hnactivacin &desnaturalizacin enzimtica(

Modelo de Michaelis ( Menten

6ic$aelis y 6enten $icieron importantes contribuciones a la deduccin de las ecuaciones de velocidad de la reaccin irreversible

1.

para la cual se plantean los si uientes mecanismos

2. 3. 4.
2onde &, $, +& y + indican el sustrato, el producto, el comple'o enzima ; sustrato y la enzima, respectivamente! #a ecuacin anterior supone que cada molcula de enzima acomoda slo una molcula de sustrato, aunque $ay molculas de enzimas con varios sitios activos disponibles para li arse con m%ltiples molculas de sustrato! +i se supone que la ecuacin : est en equilibrio, o en otras palabras, que el equilibrio se lo ra rpidamente si se compara con la menor velocidad de la reaccin &ecuacin <(, la velocidad de la reaccin es

5.
2onde c&, c$, c+&, representan la concentracin molar de sustrato, de producto y de comple'o enzima ; sustrato respectivamente- r& es la velocidad de consumo de sustrato- r$ es la velocidad de formacin de producto! #a ecuacin de balance de materia de la enzima es

6.
2onde c+;, c+, c+&, representan la concentracin molar de la enzima car ada al reactor, de enzima libre, y del comple'o enzima ; sustrato, respectivamente! +i la ecuacin anterior se divide por c+; , se obtiene

7.
8on) f+ K c+/c+; , f+& K c+&/c+; - representan la fraccin de la enzima total presente en forma libre y la fraccin de comple'o enzima ; sustrato, respectivamente! 2espus de reemplazar f+& en la ecuacin ?, se obtiene

8.
/dems, si en la reaccin : se supone que el comple'o est en equilibrio con los componentes libres se obtiene

9. 1 .
2onde <& es la constante de disociacin del comple'o enzima ; sustrato! +i la velocidad de formacin de producto est controlada por la velocidad <=, entonces <= FF <> y <& K ?5, donde ?5 es la constante de 6ic$aelis ; 6enten! +i la fraccin f+& de la ecuacin <9 se reemplaza en la ecuacin C se obtiene)

11.
2onde @5 es la m*ima velocidad de reaccin y se define como)

12.
En la ecuacin << conocida como ecuacin de 6ic$aelis ; 6enten, @5 es la velocidad m*ima o velocidad limitante y ?5 es la constante de 6ic$aelis! 1uede observarse que ?5 es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad de la reaccin es la mitad del valor m*imo! El valor de ?5 vara ampliamente de acuerdo con la fuente de la enzima! 8uando la concentracin del sustrato es alta, c& MM ?5, la velocidad de la reaccin enzimtica es prcticamente i ual a la m*ima velocidad y es independiente de un incremento de c&)

13.
+i c& FF ?5, la velocidad de la reaccin, r, es muy sensible a los cambios de concentracin del sustrato)

14.

Modelo de Bri!!s ( )aldane

El modelo propuesto por 3ri s y =aldane &<N:?(, aplicable al comple'o intermedio, +&, es vlido para reacciones en un sistema cerrado, siempre que c&; MM c+;! #a reaccin + ! 1, no alcanza el equilibrio si la velocidad de descomposicin del comple'o +&, $asta producto y enzima libre, es rpida, comparada con la velocidad de disociacin de +&, $asta + O &! En un sistema con una concentracin inicial de sustrato muc$o mayor que la concentracin inicial de enzima, puede aplicarse la apro*imacin de estado cuasi ; estable, d&c+&(/dt K 9, al comple'o intermedio! #as ecuaciones de balance de masa, aplicables al sustrato + y al comple'o +&, en el modelo propuesto por 3ri s y =aldane son)

1. 2.
#as ecuaciones anteriores son ecuaciones diferenciales simultneas y ordinarias con dos inc nitas c+ y c+&! #as condiciones iniciales apropiadas para resolver el sistema son) t K 9- c& K c&;- c+& K 9! Estas ecuaciones no pueden resolverse analticamente, pero con la ayuda de un computador es posible calcular las concentraciones de +, &, +& y $, como funciones del tiempo! En una clula viva las concentraciones de sustrato y de enzima son del mismo orden, y no se aplica la apro*imacin de estado cuasi ; estable! +i en la ecuacin :! se reemplaza d& c+&(/dt K 9, y se eliminan c+ y c& mediante la ecuacin c+; K c+ O&c+&(, se obtiene &3ailey y 4llis, <NCP()

3.

1uesto que, @5 K <=c+; - ?5, la constante de 6ic$aelis, es)

4.
2onde <& es la constante de disociacin del comple'o enzima ; sustrato! En la deduccin de la ecuacin de 6ic$aelis ; 6enten, la constante de 6ic$aelis, ?5! es i ual a la constante de disociacin, ?5 K <& K <>/<A, mientras que en la deduccin de la ecuacin de 3ri s ; =aldane, ?5 K &<> O <=(/<A! Estos valores de ?5 coinciden si <> MM <=, lo cual si nifica que la etapa de liberacin de producto es ms lenta que la etapa de disociacin del comple'o enzima ; sustrato!

+i se reemplazan <=c+; y ?5 en la ecuacin @ se obtiene la ecuacin de 6ic$aelis ; 6enten, cuando esta ecuacin se inte ra entre & t K 9c& K c&;( y &t K t- c& K c&(, se obtiene)

5.
2onde t es el tiempo requerido para alcanzar una concentracin determinada de sustrato!

Modelo para una reaccin enzim"tica re*ersible

El modelo considerado para una reaccin enzimtica reversible, del tipo de 6ic$aelis ; 6enten, se fundamenta en las si uientes ecuaciones

1. 2. 3. 4.
#a velocidad de esta reaccin es

5.

8uando se aplica la apro*imacin de estado pseudoestable al comple'o enzima ; sustrato, se tiene

6.
#a ecuacin de balance de materia para la enzima, es

7.
Q, de acuerdo con las dos ecuaciones anteriores

8.
>inalmente,

9.

1 .

2onde, @5 K <=c+;

11. 12. 13.

#a ecuacin <9 es la e*presin de la velocidad de una reaccin enzimtica reversible!

Modelo de inhibicin competiti*a

#a in$ibicin es un mecanismo fundamental de re ulacin qumica de la actividad enzimtica! En el caso de in$ibicin competitiva, el in$ibidor y la molcula de sustrato compiten por el mismo sitio activo de la enzima! El in$ibidor, que puede ser una especie inerte, un producto de la reaccin o el mismo sustrato, se une con la enzima, en el sitio activo, formando un comple'o no reactivo! El modelo de in$ibicin competitiva se fundamenta en las si uientes ecuaciones)

1. 2. 3.
2onde, &, +, +&, B, +B y $ representan el sustrato, la enzima, el comple'o enzima ; sustrato, el in$ibidor, el comple'o enzima ; in$ibidor y el producto, respectivamente- ?&, ?B son las constantes de disociacin de los comple'os enzima ; sustrato y enzima ; in$ibidor, respectivamente!

#a ecuacin de balance de materia de la enzima es)

4.
2onde, c+;, c+, c+B, c+&, son las concentraciones de enzima inicial, de enzima libre de la enzima en el comple'o enzima ; in$ibidor y de la enzima en el comple'o enzima ; sustrato, respectivamente! +i la ecuacin anterior se divide por c+;, se obtiene)

5.
2onde fE K cE/cE9, fEH K cEH/cE9, fE+ K cE+/cE9 2e la ecuacin anterior)

6.
+i las reacciones que conducen a la formacin de los comple'os +B y +&, estn en equilibrio, la velocidad de la reaccin, en condiciones estables, es)

7.

2onde, c&, cB son la concentracin molar de sustrato e in$ibidor, respectivamente! 2e la suma de las dos %ltimas e*presiones se obtiene)

8. 9. 1 .

11.

+i f+& de la ecuacin anterior se reemplaza en la ecuacin de la velocidad de reaccin, ecuacin R, se obtiene)

12.

13.

2onde, @5 K <c+; - ?5# es la constante de 6ic$aelis, modificada para in$ibicin competitiva! El efecto de la in$ibicin competitiva es aumentar el valor de la constante aparente de 6ic$aelis, sin alterar el valor de la velocidad m*ima, @5, de la reaccin!

Modelo de inhibicin por sustrato

#a in$ibicin por sustrato es uno de los mecanismos comunes de re ulacin de la actividad enzimtica de la clula! Leneralmente a ba'as concentraciones, la unin de una molcula de sustrato con la enzima en uno de sus sitios activos, aparentemente aumenta la afinidad de la enzima por otras molculas de sustrato, incrementndose la velocidad de la reaccin catalizada $asta alcanzar una m*ima concentracin de sustrato! 8uando se sobrepasa esta concentracin crtica, disminuye la velocidad de la reaccin! En al unos casos el e*ceso de sustrato influye sobre la presin osmtica y la consi uiente des$idratacin de la clula! El modelo de in$ibicin por sustrato considerado, se fundamenta en las si uientes reacciones

1. 2. 3.
2onde, &, +, +&, &+&, $ representan respectivamente el sustrato, la enzima, el comple'o enzima ; sustrato, el comple'o sustrato ; enzima ; sustrato, y el producto- <A y <> son las constantes de disociacin del comple'o enzima ; sustrato y del comple'o sustrato ; enzima ; sustrato, respectivamente! #a ecuacin de balance de materia de la enzima es

4.
2onde, c+;, c+, c+&, c&+& son las concentraciones inicial de enzima, de enzima libre, de enzima en el comple'o enzima ; sustrato, y de enzima en el comple'o sustrato ; enzima ; sustrato, respectivamente! +i la ecuacin A se divide por c+;, se obtiene

5.
2onde f+ K c+/c+; f+& K c+&/c+; f&+& K c&+&/c+; En el equilibrio

6.
1or consi uiente

7. 8.
#a ecuacin correspondiente a la velocidad de la reaccin, en condiciones estables, es

9. 1 .

#os parmetros de esta ecuacin pueden calcularse a partir de datos e*perimentales! #a constante < se obtiene de la pendiente de la curva r contra c+;! /ndreSs &<NPC(, e*presa la ecuacin anterior en funcin de la velocidad m*ima de la reaccin & @5 K <c+;( y de la constante de in$ibicin por sustrato ?B)

11.

2onde, ?B K <>- ?5 es la constante de 6ic$aelis! 2icDens$eets et al! &<NRR(, simplifican la ecuacin de /ndreSs para el caso de in$ibicin a elevadas concentraciones de sustrato)

12.
#a representacin rfica de </r contra c&, corresponde a una recta cuya pendiente es </&?B@5( y cuyo intercepto es </@5! #a concentracin crtica de sustrato c&, crit, en el modelo de in$ibicin por sustrato, se alcanza en el punto correspondiente a d r/dc& K 9! 1or esta razn, de la ecuacin <9

13.
1ara dr/dc& K 9, se tiene que c& K c&, crit- y <A/c>& K </<>! 1or lo tanto)

14.

'nacti*acin +desnaturalizacin, de enzimas

#a mayor parte de la literatura sobre cintica de enzimas se dedica a la informacin sobre la velocidad inicial de reaccin y el anlisis de la actividad enzimtica! +in embar o, en al unas aplicaciones y confi uraciones de proceso, una propiedad crtica es la velocidad a la cual la actividad enzimtica declina! Esto es especialmente cierto cuando se considera el uso de enzimas a ran escala en un reactor de flu'o continuo! #as enzimas se pueden inactivar &desnaturalizar( principalmente por envenenamiento, contaminacin microbial, sedimentacin y desnaturalizacin qumica! Esta prdida de actividad se describe frecuentemente por la ecuacin de velocidad de primer orden

1.
2onde c+ es la concentracin de la enzima y <d la constante de inactivacin! #a relacin entre la actividad enzimtica y la temperatura tiene un m*imo debido a los efectos de la desnaturalizacin! 1uede asumirse un equilibrio entre la enzima activa y la enzima desnaturalizada &inactiva(

2.

8on constante de equilibrio

3.
8on base en las ecuaciones anteriores se tiene que

4.
2onde, c+; es la concentracin inicial de enzima! #a velocidad m*ima de reaccin del comple'o activado est dada por

5.
2onde 2/ es la entalpa de activacin! #a constante de equilibrio esta dada por

6.

2onde &;d es la entropa de inactivacin! #as ecuaciones A a P proveen la si uiente relacin entre la m*ima velocidad de reaccin rmax con la temperatura)

7.

Esta ecuacin describe el pico m*imo de temperatura observado en todas las reacciones con enzimas!

Procesos microbiol!icos
#os procesos fermentativos pueden considerarse como reacciones catalticas) las clulas y las enzimas promueven la reaccin, pero no son consumidas por ella! #a velocidad de una reaccin bioqumica se limita eneralmente por un slo nutriente con los dems a.adidos en e*ceso! En fermentaciones aerbicas, el nutriente limitante es usualmente el o* eno- mientras que en las anaerbicas, el limitante puede ser cualquiera! 8ul es la forma de la ecuacin de velocidad de reaccin que pueda usarse para modelar biorreactores? ! Go e*iste una ecuacin universal que pueda predecir satisfactoriamente la cintica de todas las fermentaciones, ya que el metabolismo de los or anismos

vivos es muy comple'o y su conocimiento es limitado! En su lu ar, el dise.ador, con base en su e*periencia y en la investi acin de laboratorio, deber ele ir entre varios modelos!

#recimiento de biomasa en un culti*o por lotes

/ continuacin, se discuten los si uientes temas) 2ensidad de la biomasa Etapas del crecimiento microbial 7elocidad especfica de crecimiento 7elocidad de crecimiento Hnfluencia de factores ambientales sobre la velocidad de crecimiento

Densidad de la biomasa
#a masa de una muestra se e*presa como biomasa seca, esto es, la masa residual que se obtiene despus de someter la muestra a un procedimiento estandarizado de secado, por la dificultad tcnica para remover el a ua ad$erida a la superficie de un biomaterial, sin retirarle tambin al a ua interior! #a densidad de un biomaterial es la cantidad de biomasa seca presente por unidad de volumen de material $%medo! Leneralmente, el a ua constituye apro*imadamente el C9T del a ua total y la densidad verdadera de un biomaterial, es decir, la masa total por unidad de volumen de biomaterial $%medo, es similar a la del a ua! 1or consi uiente, la densidad de un biomaterial es apro*imadamente i ual a :99 D /m@ y su volumen especfico es apro*imadamente i ual a 9,99? m @/D , &>redericDson y =u, <NCN(!

#recimiento microbial

1ara la obtencin de datos confiables, la evaluacin del crecimiento microbial requiere la normalizacin de mtodos e*perimentales! En un cultivo por lotes, despus de proveer las sustancias nutritivas al fermentador y suministrar los materiales y la ener a requeridos para la sntesis de biomasa, se inocula el medio con una cantidad determinada de clulas viables con lo que el cultivo se desarrolla sin intercambio de materiales con los alrededores, e*cepto por la transferencia de ases tales como aire, di*ido de carbono e $idr eno! El desarrollo de un cultivo por lotes ba'o condiciones fisicoqumicas adecuadas en un sustrato simple y $omo neo & c&i(, libre de radientes de concentracin y de sustancias in$ibitorias, donde las clulas se reproducen a intervalos re ulares, puede representarse mediante una curva tpica, en la cual se observan las diferentes etapas representativas de los cambios de la biomasa & 9( y de su ambiente! #urva de crecimiento microbial

El perodo de latencia &lag( &/(, es el perodo de adaptacin de la clula a los cambios de su ambiente fisicoqumico! 1uede ser el tiempo requerido para desactivar un in$ibidor presente en el medio, o el tiempo de erminacin de un inculo de esporas! En el perodo de crecimiento acelerado &3(, la velocidad aumenta desde cero $asta un valor m*imo! En el perodo de crecimiento e*ponencial &8(, las clulas se reproducen, en un medio sin limitacin de sustancias nutritivas, a la m*ima velocidad compatible con el con'unto de condiciones e*istentes!

En el perodo de desaceleracin &2(, la velocidad disminuye al limitarse la disponibilidad de sustancias nutritivas! El perodo estacionario &E( se produce cuando se a ota una sustancia nutritiva! El perodo de muerte o decaimiento &>( ocurre en aquellos cultivos, en condiciones de inanicin, por la formacin de enzimas autolticas! En al unos cultivos puede apreciarse un perodo de crecimiento crptico, producido por las sustancias nutritivas liberadas por el citoplasma de las clulas lisadas!

8intica del crecimiento

&elocidad especfica de crecimiento

En los procesos de fermentacin los microor anismos desarrollan su actividad vital en medios de elevada comple'idad! El a ente responsable de la transformacin es una clula viva que asimila diversos materiales, se reproduce y produce otras sustancias, al unas de inters econmico! 0no de los aspectos ms importantes del estudio de la cintica de estos procesos es la seleccin de los mtodos analticos se uros para evaluar confiablemente las sustancias consumidas y producidas por el microor anismo y la variacin de su concentracin con el tiempo! #a concentracin de clulas en el medio constituye una medida adecuada de la concentracin del sistema enzimtico responsable de la transformacin! 1or esta razn las velocidades crecimiento, consumo de sustrato y de formacin de producto, eneralmente se e*presan como velocidades especficas referidas a la concentracin de clulas activas! 7elocidad especfica de crecimiento

7elocidad especfica de consumo de sustrato

7elocidad especfica de formacin de producto

&elocidad de crecimiento
#a dependencia de la velocidad de crecimiento de las variables de estado puede describirse por)

1.
Leneralmente un cultivo por lotes se inicia con un inculo de elevada actividad, en el perodo e*ponencial de crecimiento, con el propsito de minimizar el tiempo total de operacin! El medio de cultivo del inculo usualmente tiene una composicin similar a la del medio de fermentacin a escala industrial y la relacin entre los vol%menes de inculo y nuevo medio vara entre 9,9? y 9,9<! En el perodo de latencia ocurren procesos re uladores intracelulares- su descripcin se realiza %nicamente con el empleo de modelos no estructurados 'unto con ecuaciones del tipo &c&, c$(, por e'emplo, con un trmino de retraso anlo o a las tcnicas de control usadas en procesos de control o considerando precursores enzimticos en los procesos de formacin

2.

/l finalizar el perodo de latencia los microor anismos estn adaptados a su medio ambiente y la poblacin celular crece $asta alcanzar la fase de muerte, etapa que eneralmente puede e*presarse mediante el si uiente modelo

3.
2onde, <d es la velocidad especfica de muerte celular y metabolismo end eno! 1ara un cultivo en la fase e*ponencial de crecimiento, MM <d- y & B <d( , en la ecuacin @! El valor de , constante durante el perodo de crecimiento e*ponencial, corresponde al valor de la pendiente de la curva de crecimiento en esta etapa

4.
#a inte racin de la ecuacin anterior con &9 K 9;- t K tlag(- &9 K 9- t K t(, proporciona

5.
2onde, tlag es la duracin de la fase de adaptacin- 9; es la concentracin de la biomasa al final del perodo de latencia! +i la velocidad de crecimiento se caracteriza por el n%mero de clulas, en lu ar de la masa celular, la ecuacin anterior se convierte en)

6.
2onde, .; es la concentracin de la biomasa al final del perodo de latencia & t K tlag(- . es el n%mero de clulas o de microor anismos viables en el tiempo t K t #a ecuacin P e*presa el crecimiento e*ponencial de la biomasa cuando la concentracin de sustancias y las condiciones fisicoqumicas del medio de crecimiento permanecen constantes! En un cultivo por lotes los microor anismos modifican continuamente estas condiciones y afectan la concentracin de biomasa!

'nfluencia de al!unas condiciones ambientales sobre la *elocidad especfica de crecimiento

Temperatura
#a temperatura afecta la velocidad de las reacciones celulares, la naturaleza del metabolismo, los requerimientos nutricionales y ener ticos y la composicin de la biomasa! Leneralmente los microor anismos crecen en un intervalo de temperatura ambiente entre :? y @9U8, aunque e*isten microor anismos que se desarrollan a temperaturas inferiores a 9U8 y otros a temperaturas superiores a N@U8! El requisito fundamental es la presencia de a ua lquida! En la /ntrtida e*isten bacterias que se reproducen a RU8, pero que se desarrollan a mayor rapidez a temperaturas entre :9 y @9U8, &1elczar, <NRR(! En la si uiente tabla se presenta una clasificacin de los microor anismos en funcin de la dependencia de la velocidad de crecimiento con la temperatura!

"emperatura &U8( 4rupo Termfilos 5esfilos $sicrfilos obligados $sicrfilos facultativos 5"nimo A9 ; A? <9 ; <? B? ; ? B? ; ? Cptimo ?? ; R? @9 ; A? <? ; <C :? ; @9 5ximo P9 ; C9 @? ; AR <N ; :: @9 ; @?

+nerg"a de activacin

En el intervalo adecuado de temperatura, se estimula inicialmente el crecimiento de los microor anismos! 8uando es demasiado alta, los destruye! #a ecuacin de /rr$enius constituye una $iptesis apropiada para describir el efecto de la temperatura sobre el crecimiento)

2onde, +0 es la velocidad efectiva de crecimiento que es i ual a la velocidad de sntesis menos la velocidad de muerte- /, /- son los factores de frecuencia- +/ es la ener a de activacin para el crecimiento, y es la ener a necesaria para llevar las molculas a un estado ener tico en el cual puedan reaccionar- +- es la ener a de activacin para la muerte trmica- ) es la constante de los ases, y T la temperatura absoluta! #a aplicacin de la ecuacin de /rr$enius a un proceso microbiol ico es un procedimiento cintico formal! +in embar o, la comple'idad del crecimiento microbial, entendido como una secuencia de reacciones, permite prever desviaciones de este comportamiento!

p2
En muc$os procesos de fermentacin aerobia y anaerobia, el p= del medio de cultivo cambia como respuesta a la actividad microbial) se enera =O durante la demanda de G=AO- se consume =O, en el metabolismo de G4@B y en la utilizacin de aminocidos como fuente de carbono! Estos cambios muestran la necesidad de determinar y controlar el p= de un cultivo, usualmente mediante la adicin de cido clor$drico o cido sulf%rico, y una de las bases) $idr*ido de sodio, de potasio o de amonio- al medio! +e prefiere el amonaco aseoso en lu ar del $idr*ido de amonio, por la posibilidad de contaminacin de ste con esporas bacterianas! #a concentracin del ion $idr eno puede afectar en ran mdeida el crecimiento celular y, si el p= no est re ulado, se debe considerar como un factor in$ibitorio!

>actores que influyen en la velocidad de crecimiento

#recimiento de biomasa en un culti*o continuo

0na poblacin microbial puede mantenerse en un estado de crecimiento e*ponencial por un ran perodo de tiempo en un sistema de cultivo continuo! El medio de cultivo estril se suple continuamente desde un tanque de reserva! +i el medio fresco entra al tanque en donde crecen los microor anismos a una velocidad constante, la densidad microbial tambin permanece constante! #os microor anismos crecen lo suficientemente rpido como para reemplazar a los que salen del recipiente en el flu'o de salida! +i la velocidad de flu'o &0( se incrementa, el microor anismo crecer a mayor velocidad, pero no puede crecer ms rpido que a la m*ima velocidad e*ponencial en un cultivo por lotes! +i @ es el volumen del tanque de crecimiento, la relacin 0/@ K -, se denomina velocidad de dilucin! +i la velocidad de produccin de biomasa a lo lar o del crecimiento es i ual a la velocidad de prdida de clulas en el flu'o de salida, se dice que se alcanza el estado estacionario! En trminos matemticos, la velocidad de produccin de biomasa se describe como

#a velocidad de prdida de clulas en el flu'o de salida es

+i ambas velocidades son i uales, K -! /s, en estado estacionario, la constante de la velocidad de crecimiento i uala la velocidad de dilucin -! #as clulas se e*pulsan tan pronto como la velocidad de dilucin e*cede la m*ima velocidad de crecimiento max, ! Qa que es alta la afinidad de los microor anismos a sus sutratos, stos crecern a la m*ima velocidad a muy ba'as concentraciones de sustrato! 1or esto, sobre un amplio intervalo de velocidades de dilucin, la concentracin de sustrato en el tanque de crecimiento es prcticamente cero, y la densidad microbial es proporcional a la concentracin de sustrato en el medio de cultivo fresco! El sistema de cultivo continuo descrito anteriormente se llama quimiostato y al contrario que el cultivo por lotes, ste es un sistema abierto! #as condiciones ambientales permanecen constantes durante el tiempo de operacin! El sistema se acomoda para varios propsitos, tales como la seleccin de mutantes, mediciones de crecimiento, optimizacin de las condiciones de crecimiento, estudio de cultivos mezclados, y produccin de clulas de composicin y propiedades constantes!

Modelos cin$ticos no estructurados

>redricDson, et al, clasifican los modelos de crecimiento de una poblacin microbial en estructurados y no estructurados! El modelo estructurado considera al unos aspectos bsicos de la estructura celular e identifica una o dos especies qumicas claves dentro de la clula, quizs aquellas que pueden e*traerse a escala comercial, y a rupa los dems componentes de la clula en una o dos clases enerales tales como protenas y lpidos! +in embar o, para muc$os propsitos tecnol icos es suficiente un modelo no estructurado, donde el microor anismo o la clula se considera como un componente simple, eneralmente con una composicin qumica fi'a! #os modelos se re ados consideran la poblacin celular como una coleccin $etero nea de entidades discretas, en tanto que en un modelo no se re ado, el comportamiento de la poblacin celular se apro*ima al de una clula promedio!

Modelos cin$ticos no estructurados para el crecimiento de biomasa

#os modelos cinticos para el crecimiento de biomasa se formulan teniendo en cuenta las distintas etapas del crecimiento microbial, y la influencia de la composicin del medio y la concentracin de biomasa sobre la velocidad especfica de crecimiento) Hnfluencia de la composicin del medio sobre la velocidad especfica de crecimiento Hnfluencia de la concentracin de biomasa sobre la velocidad especfica de crecimiento) 6odelo de 6eyrat$ 1erodo de adaptacin del crecimiento) 6odelo de =ins$elSood >ase estacionaria del crecimiento) 6odelo de #a 6otta >ase de muerte microbial

'nfluencia de la composicin del medio sobre la *elocidad especfica de crecimiento

Entre los modelos cinticos que tienen en cuenta la influencia del medio sobre la velocidad especfica de crecimiento, se encuentran) 6onod

6oser 8ontois y >u'imoto "eissier VonaD Var i y +$uler

Modelo de Monod
6onod &<NA:(, estudi el efecto de la composicin de un medio de cultivo libre de sustancias in$ibitorias sobre la velocidad especfica de crecimiento! #as ecuaciones bsicas que describen la interaccin entre el crecimiento de los microor anismos y el sustrato limitante del crecimiento son)

2onde ?& es la constante de saturacin, que es la concentracin de sustrato para la cual la velocidad especfica de crecimiento es la mitad del valor m*imo! En la tabla si uiente se presentan los valores de la constante de saturacin, ?& , correspondientes al crecimiento de al unos microor anismos en diversos sustratos! #os valores relativamente altos de ?& de la lucosa indican que este sustrato es una de las

fuentes de carbono y ener a ,preferidas, por muc$os microor anismos! +in embar o, para otros microor anismos e*isten me'ores sustratos que la lucosa! @alores de la constante de saturacin para algunos microorganismos

4r anismo +scherichia /spergillus #andida &accharomyces ?lebsiella #andida /spergillus #ryptococcus

+ustrato Llucosa Llucosa Llicerol Llucosa 2i*ido de carbono 4* eno /r inina "iamina

Vs, &m /l( P,C!<9B: ?,9 A,? :?,9 9,A A,?!<9B< ?,9!<9B< <,A!<9BR

/l unas limitaciones para varios sustratos o componentes del medio de cultivo se describen por)

2onde c&i representa la concentracin de los nutrimentos limitantes y cei la concentracin de los componentes promotores del crecimiento! En el caso de medios con m%ltiples fuentes de carbono, una vez se a ota un sustrato, la clula adapta sus ,rutas metablicas,, catalizadas por enzimas, a la si uiente fuente de carbono y, despus de un nuevo perodo de adaptacin se reinicia el crecimiento! Este fenmeno se conoce como crecimiento diau*ico!

6odelo de 6onod

Modelo de Moser
8on el propsito de lo rar la representacin de los datos e*perimentales con un mayor rado de a'uste, diferentes investi adores $an propuesto otros modelos como alternativa a la cintica de 6onod! #as ecuaciones presentadas a continuacin corresponden a modelos cinticos no estructurados, considerados como una buena apro*imacin cuando la composicin celular es independiente del tiempo, cuando el crecimiento es balanceado o cuando la composicin celular no es importante a escala industrial! El modelo propuesto por 6oser &<N?C(, se e*presa mediante la ecuacin)

2onde n es una constante emprica! #a e*presin lo artmica de la ecuacin anterior es %til en la evaluacin de los parmetros n y ?& del modelo)

Modelo de #ontois y -u.imoto

El modelo propuesto por 8ontois, &<N?N( y >u'imoto, &<NP@(, se aplica en sistemas donde prevalecen altas concentraciones de biomasa cuyo crecimiento se acompa.a por la produccin de metabolitos o in$ibidores t*icos)

Modelo de Teissier
#a ecuacin que e*presa el modelo propuesto por "eissier &<N@P(, es

Modelo de /ona0
El modelo propuesto por VonaD &<NRA(, se e*presa mediante la ecuacin

2onde, < K </& max?&(- p es una constante emprica! VonaD demostr que esta ecuacin se convierte en la ecuacin de 6onod para p K :, y en la ecuacin de "eissier para p K <!

Modelo de /ar!i y Shuler

El modelo propuesto por Var i y +$uler &<NRN(, es una eneralizacin de los modelos presentados anteriormente

En la tabla si uiente se presentan los valores de las constantes V, m y p correspondientes a cada modelo!

5odelo 6onod 6oser "eissier 8ontois VonaD

? </V+ n/&V+(</n </V+ </&V+W( D

m 9 <B</n 9 9 p

p : <O</n < : p

ma*

'nfluencia de la concentracin de biomasa sobre la *elocidad especfica de crecimiento1 Modelo de Meyrath

6eyrat$ &<NR@(, considera la influencia de la concentracin de biomasa sobre la velocidad especfica de crecimiento como una consecuencia de la limitacin por sustrato! +i en un medio de crecimiento se mantienen constantes las condiciones fisicoqumicas y la

concentracin de nutrimentos, la velocidad especfica de crecimiento es apro*imadamente i ual a su valor m*imo, microor anismos formados modifican continuamente las condiciones del medio y alteran la concentracin de biomasa!

max

! #os

2onde, c&; es la concentracin inicial del sustrato limitante!

Perodo de adaptacin1 Modelo de )inshel2ood

El perodo de adaptacin de la clula a los cambios de su ambiente fisicoqumico, conocido tambin como perodo de latencia &la (, puede calcularse por el mtodo de =ins$elSood &<NA@(

2onde, tlag es el perodo de adaptacin- 9; es la concentracin de la biomasa en t K tlag- y 9 es la concentracin de la biomasa en la fase e*ponencial en t K t!

-ase estacionaria1 Modelo de 3a Motta

#a 6otta &<NRP(, utiliz la ecuacin lo stica de Vendall &<NAN( para cuantificar el crecimiento de biomasa en los cultivos continuos despus de un perodo prolon adode fermentacin, como en el caso de al unos procesos de tratamiento biol ico de a uas residuales y de al unos procesos de produccin de antibiticos, donde la formacin de producto ocurre despus de cesar el crecimiento)

2onde 95 es la concentracin de biomasa en la fase estacionaria!

-ase de muerte microbial

#a cintica para esta parte del crecimiento microbial, est representada por dos modelos) 8$iu 6oser y +teiner

Modelo de #hiu
#a importancia de la fase de muerte microbial es directamente proporcional al tiempo de residencia en los procesos con perodos prolon ados de retencin como en el caso del tratamiento biol ico de a uas residuales! #as ecuaciones que describen este modelo, empleado e*itosamente en el proceso de lodos activados, se %n 8$iu, et al!, &<NR:( son)

2onde r& es la velocidad de consumo de sustrato- r9 es la velocidad de crecimiento de biomasa- :9/& rendimiento del sustrato en clulasm es la velocidad especfica de crecimiento- 9 es la concentracin de biomasa- y <d es la velocidad especfica de muerte celular y metabolismo end eno!

Modelo de Moser y Steiner

#a aplicacin del modelo de 6onod puede conducir a valores falsos, e inclusive ne ativos de ?&, cuando se i nora el valor de la constante <-! 6oser y +teiner &<NR?(, presentan la si uiente ecuacin para modelar la fase de muerte microbial)

Metabolismo end!eno
#a disminucin de la masa lobal de clulas en los procesos con perodos prolon ados de retencin obedece a dos factores independientes) la muerte celular y el metabolismo end eno

2onde <d es la velocidad especfica de muerte celular y metabolismo end eno- <;d es la verdadera velocidad de muerte- y ?+ es la velocidad especfica de metabolismo end eno!

#as constantes de velocidad, <;d y ?+ eneralmente son evaluadas por el mtodo recomendado por +inclair y "opiSala &<NR9(, a partir de la representacin rfica de la si uiente ecuacin, que se a'usta a una lnea recta

2onde & es la velocidad especfica de consumo de sustrato- m& es el coeficiente de mantenimiento basado en el sustrato- es la velocidad especfica de crecimiento de biomasa- %:9/&'real es el coeficiente de rendimiento verdadero de sustrato en biomasa! +l coeficiente de rendimiento verdadero de sustrato en biomasa se evalDa a partir del valor de la pendiente. +l valor de la velocidad verdadera de muerte, < ;d, es el correspondiente al intercepto con el e1e de abscisas. +l valor del coeficiente de mantenimiento es el correspondiente al intercepto con el e1e de ordenadas. +l valor de la velocidad espec"fica de metabolismo endgeno, ?+, se calcula a partir del intercepto con el e1e de ordenadas

Modelos cin$ticos no estructurados para la inhibicin del crecimiento

#a in$ibicin del crecimiento de un microor anismo puede presentarse por) El consumo de sustrato #a formacin de producto 5epresin catablica

'nhibicin por consumo de sustrato

En el presente apartado, se tratar) El efecto de la fuente de carbono El efecto de la fuente de nitr eno Q se presentan los si uientes modelos cinticos de in$ibicin del crecimiento por consumo de sustrato) /ndreSs "sen y Eaymann EdSards

Efecto de la fuente de carbono

#os valores de la constante de saturacin, ?&, para diversas fuentes de carbono, varan entre < y <9 m /l! Estos valores si nifican que las clulas crecen a su m*ima velocidad cuando la concentracin de la fuente de carbono e*cede <9 ?&, es decir, entre <9 y <99 m /l! 1ara todos los nutrimentos $ay un valor de la concentracin que al sobrepasarse ori ina una disminucin de la velocidad de crecimiento! Este efecto, conocido como in$ibicin por sustrato puede presentarse en el caso de carbo$idratos alrededor de los ?9 /l, aunque eneralmente, solo se manifiesta entre <99 y <?9 /l! 0sualmente un incremento de la concentracin de sustrato influye sobre la presin osmtica y causa una des$idratacin parcial de la clula! 4tros sustratos como el fenol, el tolueno o el butanol, e*traen componentes de la clula y deterioran la membrana celular cuando su concentracin es de unos pocos ramos por litro!

En la in$ibicin competitiva la sustancia in$ibitoria compite con el sustrato limitante del crecimiento! En la in$ibicin no competitiva, la sustancia in$ibitoria reacciona o se combina con la biomasa sin afectar su afinidad por el sustrato! 4tros modelos de in$ibicin incluyen caractersticas tanto de la in$ibicin competitiva como de la no ; competitiva!

Efecto de la fuente de nitr!eno

#os microor anismos metabolizan prcticamente todas las formas or nicas e inor nicas del nitr eno para proveer las protenas intracelulares, los cidos nucleicos, y las protenas que conforman la pared celular! El nitr eno constituye $asta el <:T en peso en base seca, de las bacterias, y el <9T del peso de los $on os! #os valores de la constante de saturacin, ?&, para los aminocidos, varan entre 9,99@ y 9,: m /l, y para amonaco entre 9,< y < m /l! Estos valores de ?& demuestran la capacidad de los microor anismos para crecer a su m*ima velocidad con muy ba'as concentraciones de nitr eno! Leneralmente la concentracin de los compuestos nitro enados en el ambiente es ba'a, y aquellos microor anismos capaces de crecer a estas concentraciones tienen una apreciable venta'a competitiva! >recuentemente, cuando se provee demasiado nitr eno, se ori inan problemas por in$ibicin por sustrato! El amonaco causa in$ibicin a concentraciones superiores a @ ; ? /l! /l a otarse la fuente de carbono en un medio de cultivo en presencia de aminocidos, los microor anismos consumen el esqueleto carbonado de los aminocidos y se acumula amonaco! 8uando se utilizan nitratos como fuente de nitr eno, son parcialmente reducidos $asta G4 :, sustancia que puede ser t*ica para las clulas!

Modelo de ndre2s
/ndreSs &<NR<(, recomienda la si uiente ecuacin para la in$ibicin por sustrato de un cultivo en un reactor de mezcla completa

45

2onde, , max son la velocidad especfica y especfica m*ima de crecimiento- ?& es la constante de saturacin- ?B& es la constante de in$ibicin por sustrato- y c& es la concentracin del sustrato!

EdSards, &<NR9(, confronta la ecuacin < y las deducidas por otros investi adores, &GoacD, <NPC- /iba et al!, <NPC- Qano et al!, <NPPEebb, <NP@(, con datos e*perimentales y deduce que todas estas ecuaciones conducen a resultados similares! El valor de la concentracin del sustrato, correspondiente a
ma*

, se obtiene a partir de la ecuacin <

2.
2e donde) c& K &?&?B&(</: Q al reemplazar la concentracin de sustrato c&, en la ecuacin <

3.

Modelo de Tsen! y 6aymann

En al unos casos, el patrn de la in$ibicin por sustrato difiere del e*presado por la ecuacin de /ndreSs y demuestra un decrecimiento lineal de la velocidad especfica de crecimiento, ! "sen y Eaymann, presentan la si uiente ecuacin, vlida para concentraciones de sustrato mayores a un valor crtico, c&#

Modelo de Ed2ards
+i el sustrato in$ibe el crecimiento a elevadas concentraciones, como es el caso de al unas aplicaciones industriales, se puede usar el modelo de EdSards

'nhibicin por formacin de producto

#os modelos cinticos de in$ibicin por producto presentados por diferentes investi adores a'ustan los datos e*perimentales de acuerdo con el patrn especfico de comportamiento de cada proceso! El decrecimiento de la velocidad especfica, , puede ser lineal, e*ponencial, por etapas, etc!, y, eneralmente el cambio de una cepa o la modificacin de las condiciones e*perimentales alteran los resultados! 6odelo de =olzber 6odelo de L$ose y "ya i 6odelo de IerusalimsDy 6odelo de 3azua y EilDie

Modelo de )olzber!

=olzber et al!, &<NPR(, presentan un modelo cintico vlido en aquellos casos donde la velocidad especfica de crecimiento, , decrece linealmente)

2onde, max es la velocidad especfica m*ima de crecimiento, evaluada con c$ K 9- c$ es la concentracin del producto- ?A y ?> son constantes cinticas!

Modelo de 7hose y Tya!i

L$ose y "ya i &<NRN(, presentan un modelo para evaluar la in$ibicin del crecimiento de levadura por etanol)

2onde, c es la concentracin media del producto- c$, max es la m*ima concentracin de producto a la cual las clulas aun son viables!

Modelo de 8erusalims0y
El modelo propuesto por IerusalimsDy &<NPR(, es uno de los modelos utilizados con mayor frecuencia en la evaluacin de los resultados de la cintica de in$ibicin por producto en cultivos discontinuos

2onde, ?B$ es la constante de in$ibicin por producto!

Modelo de Bazua y 6il0e

3azua y EilDe &<NRR(, a'ustaron los datos e*perimentales obtenidos en la cintica de in$ibicin del crecimiento de levadura por etanol en cultivo continuo, mediante la si uiente ecuacin)

2onde, max es la velocidad especfica m*ima de crecimiento- c$, # es la concentracin media del producto en cultivo continuo- la velocidad especfica de crecimiento observada a la concentracin c$, #!

$, #

es

%epresin catablica
0n cultivo de microor anismos en un medio compuesto por diversas fuentes de carbono utiliza selectivamente aquella que le permite una mayor velocidad de crecimiento y reprime catablicamente los nutrimentos menos %tiles! #a represin catablica es un fenmeno importante en al unas fermentaciones industriales como en la produccin de levaduras y de al unos antibiticos, y cuando $ay crecimiento diau*ico y formacin de metabolitos secundarios! 6oser &<NCC(, recomienda el si uiente modelo de represin catablica)

2onde, ri es la velocidad de formacin o de consumo del componente i- c& es la concentracin del sustrato- y ?) es la constante de represin!

5odelos cinticos no estructurados para la formacin de producto

Gormalmente los microor anismos convierten la fuente de carbono en biomasa y producen solo la mnima cantidad de metabolitos esenciales y posiblemente peque.simas cantidades de metabolitos secundarios o no esenciales! #a optimizacin de la productividad de un proceso para la obtencin de metabolitos secundarios usualmente incluye la interferencia de los mecanismos de re ulacin metablica del microor anismo para convertirlo en sobreproductor del compuesto deseado, adems de ensayos con microor anismos mutados en diferentes condiciones ambientales! 8lasificacin de los productos 6odelos cinticos

#lasificacin de los productos microbiales

#os microor anismos utilizan el sustrato en la sntesis de nuevo material celular y de productos e*tracelulares, para obtener la ener a requerida por las reacciones de sntesis y recirculacin de materiales, y para mantener las sustancias dentro de la clula en un nivel de concentracin eneralmente diferente de la concentracin de estas mismas sustancias en el ambiente! 6a energ"a que impulsa los procesos celulares es la energ"a qu"mica del /T$ o de sustancias similares, obtenida mediante la oxidacin del sustrato por el ox"geno molecular hasta #, > y agua, proceso conocido como fosforilacin o*idativa. ,tro proceso de obtencin de energ"a es la fosforilacin al nivel de sustrato mediante la degradacin de ste hasta productos ms simples como etanol, cido lctico, cido c"trico, #,> y agua. +stos productos excretados por la clula, mediante fosforilacin al nivel de sustrato, son conocidos como productos del tipo <. 6os productos del tipo :, son compuestos extracelulares tales como exoen!imas, polisacridos y metabolitos especiales. 6as exoen!imas degradan las molculas del sustrato demasiado grandes para atravesar la pared celular. 6os polisacridos como la celulosa y el almidn, cumplen funciones estructurales en la agregacin de clulas y como reserva de alimentos. 6os metabolitos especiales como los antibiticos, evitan la competencia de otros microorganismos.

+n algunos casos donde el medio contiene un exceso de fuente de carbono y cantidades limitadas de otros sustratos como nitrgeno o magnesio, pueden obtenerse productos del tipo @. +stos productos, como el glicgeno y las grasas, actDan como depsitos de energ"a y pueden ser almacenados o excretados por la clula. 6os productos del tipo A, son los constituyentes celulares tales como el nDcleo, los cromosomas, el citoplasma, el lisosoma y las membranas celulares.

Laden &<N?N(, distin ue cuatro tipos de formacin de producto de acuerdo con la relacin cuantitativa entre la cantidad de producto y el crecimiento de biomasa! "ipo 9) 6as clulas en reposo utili!an pequeas cantidades de sustrato para su propio metabolismo y funcionan como transportadores de en!imas. #omo e1emplos pueden mencionarse la transformacin de esteroides y la s"ntesis de vitamina + por &accharomyces cerevisiae. "ipo <) 6a formacin de producto est asociada directamente con el crecimiento. +s el caso de los metabolitos primarios en los cuales la formacin del producto est asociada con el metabolismo de energ"a. #omo e1emplos pueden mencionarse la produccin de etanol, cido lctico, acetona, cido actico y cido glucnico, y el tratamiento biolgico de aguas residuales. "ipo :) 6a formacin del producto no se relaciona con el crecimiento, y por esto no est relacionado con el metabolismo primario %por e1emplo, la produccin de penicilina, estreptomicina y cido glutmico'. "ipo @) 2ay una relacin parcial entre el crecimiento y la formacin de producto y por consiguiente una relacin indirecta con el metabolismo de energ"a. #omo e1emplos pueden mencionarse la produccin de cido c"trico y la de algunos aminocidos.

Modelos cin$ticos para la formacin de producto

"eniendo en cuenta la anterior clasificacin de los productos microbiales, los modelos cinticos para la formacin de producto se formulan para) 8lulas en reposo >ormacin de producto asociada al crecimiento microbial >ormacin de producto no asociada al crecimiento microbial

>ormacin de producto parcialmente asociada al crecimiento

8intica de la formacin de producto

-ormacin de producto en c$lulas en reposo

0n modelo apropiado para representar este tipo de productos es)

8on

2onde, a es la actividad especfica y 9 la concentracin de la biomasa en reposo!

-ormacin de producto asociada al crecimiento microbial

/l unas de las ecuaciones que describen la formacin de producto asociada al crecimiento microbial son)

2onde, r$, r9, r& son las velocidades de formacin de producto, crecimiento de biomasa y consumo de sustrato respectivamente- 9, c$, c& son las concentraciones de clulas, producto y sustrato respectivamente- , son las velocidades especficas de crecimiento de biomasa y formacin de producto respectivamente! #a si uiente ecuacin relaciona los factores de rendimiento de las tres ecuaciones anteriores)

2onde, :$/& es el rendimiento de sustrato en producto- :9/& es el rendimiento del sustrato en clulas- e :$/9 el rendimiento de biomasa en producto! 6oser &<NCC(, presenta la si uiente ecuacin, tipo 6onod, para la formacin de producto asociada al crecimiento)

2onde, r$ es la velocidad de formacin de producto-

max

es la velocidad especfica m*ima de formacin de producto!

-ormacin de producto no asociada al crecimiento microbial

Leneralmente, la cuantificacin de la formacin de producto no asociada al crecimiento es una labor difcil! En este caso se puede establecer un perodo de maduracin tE entre la formacin de la clula y la produccin)

En al unos casos el si uiente modelo a'usta los datos obtenidos e*perimentalmente &6oser, <NCC()

2onde, r$ es la velocidad de formacin de producto- 9 es la concentracin de biomasa- ?$ es la constante de velocidad para la formacin de producto!

-ormacin de producto parcialmente asociada al crecimiento microbial

+e puede establecer un trmino para el crecimiento asociado y otro para el crecimiento independiente, para la formacin de producto)

1.

2.

2onde y son constantes, m$ es el coeficiente de mantenimiento, y el tercer trmino en la ecuacin : tiene en cuenta la descomposicin del producto &por e'emplo, la formacin de antibiticos(! +i la formacin de producto comienza en una fase de transicin del crecimiento, entonces)

3.
El tipo de formacin de producto puede entenderse rficamente representando c1 K f&t( y K f& ( )epresentacin de c1 F f%t'

)epresentacin de F f% '

El modelo propuesto por #uedeDin y 1iret &<N?N(, para la fermentacin del cido lctico, es un modelo para la formacin de producto parcialmente asociado al crecimiento)

4.
8on ?$ como constante de velocidad de formacin de producto!

Modelos estructurados
#a dinmica del crecimiento celular y de la formacin de producto, y la interaccin entre la cintica del crecimiento y las condiciones en el reactor, no pueden describirse por modelos basados en biomasa $omo nea distribuida uniformemente sin correcciones empricas!

#os si uientes factores se tienen en cuenta con el nimo de modelizar clulas y sus propiedades) edad, tama.o y estructura bioqumica ; fisiol ica &por e'emplo, material entico, protenas, /T$, /-.(! 2ebido al ran n%mero de parmetros adicionales que no son fcilmente determinados por medio de la e*perimentacin, los modelos estructurados $an encontrado poca aplicacin en la in eniera de bioprocesos! En situaciones en las cuales la composicin de la poblacin celular cambia si nificativamente y este cambio afecta la cintica, se usa un modelo estructurado! 8omo no resulta prctico formular balances de materia para cada componente celular, se seleccionan cuidadosamente las variables principales y los procesos de mayor inters en una aplicacin particular cuando se formula un modelo cintico de este tipo &necesariamente una apro*imacin(! #as variables que se emplean en los modelos estructurados son tpicamente las concentraciones msica & x1( o molar &c1( por unidad de volumen de biofase! 1ara un reactor a itado, el balance de materia para el componente ' es

2onde, c, densidad msica celular &masa de clulas/unidad de volumen celular(- rfA, velocidad molar de formacin del componente 1 Xmoles 1 &tiempo(B< &unidad de volumen de clulas( B<Y- x masa de clulas a.adidas al reactor por flu'o&tiempo( B<- @), volumen del cultivo9, concentracin de la masa celular &masa celular/unidad de volumen de cultivo(- c1, moles de 1/unidad de volumen celular! En el %ltimo trmino de la ecuacin anterior, se asume que cualquier clula a.adida &por e'emplo, por recirculacin( o removida del reactor, tiene el mismo estado que la poblacin celular dentro del reactor! /sumiendo que la densidad celular c y el volumen del cultivo @) permanecen invariables, la ecuacin anterior se e*presa de la si uiente forma despus de llevar a cabo la diferenciacin que se indica

1ara un reactor por lotes, x es cero, y el trmino dentro del parntesis del lado derec$o de la ecuacin anterior, es simplemente la velocidad especfica de crecimiento , obtenindose)

#a interpretacin fsica del trmino rfA es clara- el trmino B c1 representa la reduccin en la concentracin debida a la dilucin del crecimiento de la poblacin celular!

Determinacin de los par"metros usados en los modelos cin$ticos de los procesos microbiol!icos
#a cintica de las reacciones bioqumicas y microbiol icas se estudia usualmente en fermentadores de tanque a itado por lotes o continuos, siendo lo ms importante la caracterizacin microbiol ica del or anismo o la enzima &actividad, etc!(! +e encuentran las si uientes diferencias entre las mediciones cinticas realizadas en biorreactores por lotes y continuos) 6a actividad celular es funcin de los gradientes locales dependientes del tiempo en el reactor. 6as en!imas y las clulas estn su1etas al enve1ecimiento, el cual depende del sistema del reactor y, en el caso de los microorganismos, no puede separarse fcilmente de la cintica del crecimiento y del metabolismo. #iertos procesos metablicos no ocurren en cultivos por lotes. Bmportantes efectos industriales tales como el crecimiento diu*ico, %esto es, desintegracin estrictamente secuencial de componentes' o el crecimiento autodiu*ico %desintegracin de productos primarios en el caso de deficiencia de sustrato' son dif"ciles de identificar en fermentadores continuos. #omo la operacin en estado estacionario en el quimiostato tiene a1ustadas las condiciones, no es posible discernir la adaptacin de las fases.

1or todo lo anterior, las investi aciones de laboratorio deberan llevarse a cabo en el mismo tipo de reactor y con el mismo modo de operacin tal como en la planta industrial final! #a informacin obtenida del reactor de tanque a itado por lotes puede aplicarse a reactores tubulares!

0na vez recopilada la informacin e*perimental, se emplean los si uientes mtodos para la determinacin de los parmetros cinticos) 6todo inte ral de anlisis 6todo diferencial de anlisis

M$todo inte!ral de an"lisis

#a aplicacin de mtodos inte rales est restrin ida al uso de ecuaciones cinticas del tipo 6onod porque se obtienen soluciones muy comple'as para c& K f&t( a%n con coeficiente de rendimiento :9/& constante! El mtodo inte ral de anlisis del modelo de 6onod, propuesto por 4n &<NC@(, se fundamenta en un al oritmo de b%squeda unidimensional y en un procedimiento de a'uste por mnimos cuadrados! El punto de partida del mtodo es la si uiente ecuacin, obtenida mediante inte racin de la ecuacin del factor de rendimiento de biomasa en sustrato

1.
2onde, 9;, c&;, son las concentraciones iniciales de biomasa y sustrato limitativo del crecimiento, respectivamente! +i la ecuacin anterior se sustituye en la ecuacin de la velocidad especfica de crecimiento de biomasa se obtiene

2.

3.

4. 5.

6. 7. 8. 9.
#a ecuacin ? deducida por Lates y 6arlar &<NPC(, indica una relacin relacin lineal entre los trminos &</ t(ln&c&/c&;( y &</t(ln&< O ad(! Lates y 6arlar, su ieren un procedimiento basado en la representacin rfica de estos trminos para diferentes valores supuestos del parmetro a! #os valores de a, b y c, asociados con la me'or lnea recta obtenida, son seleccionados como los me'ores estimativos y son los utilizados en la evaluacin de max, ?& y :9/&, a partir de las ecuaciones ?, P y R

1 . 11.

12.
#os parmetros cinticos de la ecuacin de 6onod, max y ?&, no pueden estimarse con la misma facilidad que los de 6ic$aelis ; 6enten en una reaccin enzimtica! En el caso de una reaccin enzimtica, la velocidad inicial se mide en funcin de la concentracin de sustrato a partir de una serie de ensayos por lotes! En un cultivo de microor anismos la velocidad inicial de una reaccin siempre es cero por la necesidad de una fase de adaptacin durante la cual no se aplica la ecuacin de 6onod! 2e acuerdo con 4n &<NC@(, el coeficiente de correlacin ), describe el coeficiente ) corresponde a la relacin lineal e*presada en la ecuacin ?, es rado de a'uste de una lnea recta! 1or consi uiente el

13.

2onde)

14. 15.

2onde, . es el n%mero de datos analizados- x, abscisas- y, ordenadas En las tres ecuaciones anteriores se conocen todos los trminos, e*cepto el parmetro a! #a funcin ob'etivo es minimizar &B ):(! Esta funcin ob'etivo es unimodal para a M 9, es decir, slo tiene un valor ptimo local i ual al ptimo lobal!

M$todo diferencial de an"lisis

El mtodo diferencial demuestra ser %til para la estimacin de parmetros de modelos cinticos! Est basado en la linealizacin rfica de las relaciones r K f&c +( y K f&c+(- a partir de un con'unto de datos e*perimentales de las concentraciones de biomasa y de sustrato en funcin del tiempo en un cultivo por lotes! #os valores de los parmetros max y ?& se obtienen a partir de las si uientes relaciones lineales, deducidas de la ecuacin de 6onod, una vez conocidos los valores de la velocidad de crecimiento de biomasa r9 y de la velocidad de consumo de sustrato r&)

6ineali!acin de 6ineGeaver H 3ur<

#a representacin rfica de </ contra </c&, en el caso de microor anismos que se comportan de acuerdo con el modelo de 6onod, corresponde a una lnea recta, cuyo intercepto es </ max y cuya pendiente es ?&/ max! #a evaluacin de max y ?& por este mtodo de linealizacin depende de las mediciones realizadas a ba'as concentraciones de sustrato! +i se considera que el valor de </ tiende al infinito a medida que la concentracin de sustrato disminuye, los puntos correspondientes a estos valores afectan la pendiente y el intercepto!

6ineali!acin de 6angmuir

#a representacin rfica de c&/ contra c&, en el caso de microor anismos que se comportan de acuerdo con el modelo de 6onod, corresponde a una lnea recta, cuyo intercepto es ?&/ max y cuya pendiente es </ max!

6ineali!acin de +adie H 2ofstee(

#a representacin rfica de contra /c&, en el caso de microor anismos que se comportan de acuerdo con el modelo de 6onod, corresponde a una lnea recta, cuyo intercepto es max y cuya pendiente es B?&! #a principal limitacin del mtodo diferencial de anlisis en la determinacin de parmetros cinticos es la dificultad para la realizacin de ensayos en un reactor continuo de tanque a itado en donde e*iste la posibilidad de mantener un medio ambiente estable para los microor anismos!

Biocatalizadores inmo*ilizados
#os biocatalizadores inmovilizados son enzimas, clulas, u or anelos &o combinaciones de ellos(, los cuales se encuentran en un estado que permite su reutilizacin! #os materiales biol icamente activos se inmovilizan, principalmente, para permitir su uso continuo o repetido en un ambiente controlado &por e'emplo, en un biorreactor(! #a inmovilizacin de una enzima sobre un soporte puede estabilizar su estructura terciaria y prolon ar su vida %til! #as enzimas pueden retenerse en un reactor por) enlaces a las superficies de tipo covalente, inico o de adsorcin- por entrecruzamiento- atrapamiento en eles y polmeros- inclusin en micelas- o retencin por medio de sistemas de membrana! #os mtodos empleados para retener clulas completas en un reactor son) la inmovilizacin en eles y polmeros- atrapamiento en slidos porosos o lec$os de partculas- formacin de biopelculas y flculos- y la utilizacin de sistemas de membrana! En los procesos continuos, debe centrarse la atencin en las prdidas de enzima, especialmente cuando la pared celular se $a permeabilizado para facilitar el transporte de sustrato y de producto y la matriz de soporte no retiene la enzima! #a mayora de las tcnicas y los principios que se aplican a la inmovilizacin enzimtica, son aplicables a la inmovilizacin de clulas! En efecto, desde el punto de vista de la in eniera, e*iste poca razn para distin uir entre los dos tipos de biocatalizadores! #a aplicacin de biopelculas o de microor anismos que se inmovilizan naturalmente por su $abilidad para formar flculos no tiene contraparte en la tecnolo a de enzimas, pero estn implcitos los mismos principios de difusin y reaccin! 3a'o condiciones naturales, los microor anismos tienden a crecer en a re ados li ados a superficies slidas o formando pelculas &biopelculas( sobre una ran variedad de materiales! Estudios realizados sobre poblaciones microbiales en los ros, muestran que muy

pocos microor anismos e*isten libres en suspensin- en lu ar de esto, tienden a permanecer asociados a superficies slidas &por e'emplo, a partculas de arena(!

spectos histricos
El uso de los biocatalizadores inmovilizados est estrec$amente relacionado con el desarrollo de la civilizacin $umana! #a elaboracin de vina re fue uno de los primeros procesos industriales en emplear clulas inmovilizadas) las soluciones alco$licas se $acan fluir lentamente a travs de lar os recipientes empacados con pedacitos de madera, y las pelculas microbianas que se desarrollaban en stos convertan el etanol en cido actico &proceso ,5pido,, inventado en <C:@(! #os primeros intentos para inmovilizar enzimas datan de <N<P, cuando Gelson y Lriffin mostraron que la invertasa inmovilizada conservaba su actividad! 0na visin eneral del desarrollo $istrico de esta tecnolo a se muestra en la si uiente tabla) /o <C:@ 3iocatali!ador, suceso proceso o #omentarios

1roduccin de vina re a partir de soluciones alco$licas usando una biopelcula formada en pedazos de madera, &proceso ,5pido( +e adsorbe invertasa carbn ve etal Hnsolubilizacin de ureasa Hnmovilizacin de protenas fisiol icamente activas +e enlaza alb%mina a un derivado de diazonio de la A ; aminobenzilcelulosa Hnmovilizacin carbo*ipeptidasa, de diastasa, en

<N<P <NAC <NAN <N?<

<N?@

pepsina y ribonucleasa <NPN 5esolucin ptica continua de 1rimer proceso industrial que 2, # ; aminocidos por emplea un biocatalizador aminoacilasa inmovilizada inmovilizado 1rimera 8onferencia Hn eniera Enzimtica =enniDer, GeS =amps$ire de +e establece la definicin de en enzimas inmovilizadas

<NR<

<NR:

Hsomerizacin de lucosa a fructosa empleando lucosa isomerasa inmovilizada 1roduccin de cido # ; 1rimer uso industrial de las asprtico por medio de clulas microbiales +scherichia coli inmovilizada inmovilizadas &aspartasa( /dsorcin de mitocondrias de 1rimera inmovilizacin de clulas $epticas de ratas partculas sub ; celulares sobre esferas de vidrio alquilsilanizadas Hnmovilizacin de clulas 1rimera inmovilizacin ve etales &5orinda, clulas ve etales #atharanthus, -igitalis( por el mtodo del al inato de calcio 1orciones de ri.n de cerdo 1rimera inmovilizacin se inmovilizan en la clulas animales membrana de un electrodo de amonio por deteccin aminocida #orynebacterium inmoviliza en poliacrilamida spp. el de

<NR@

<NR?

<NRN

<NRN

de

<NCR

se 1rimer proceso reportado de de produccin industrial de una para sustancia qumica por medio

produccin de acrilamida

de clulas inmovilizadas

#onceptos b"sicos
En lo sucesivo, los biocatalizadores &enzimas, clulas, partes de clulas u or anelos( disueltos en una solucin acuosa amorti uadora &buffer(, se referirn como solubles! #os trminos inmovilizado, fi'o o insolubilizado, indican biocatalizadores que se encuentran unidos a un soporte! El material al cual se unen las enzimas y las clulas, se denomina soporte o matriz! El a ente que permite la unin enzima ; soporte se llama a ente de entrecruzamiento, a ente bifuncional o activador de soporte!

'nmo*ilizacin de enzimas
#a definicin inicial de biocatalizadores inmovilizados incluye enzimas que estn) 5odificadas en una forma insoluble en agua. )etenidas por una membrana de ultrafiltracin dentro de un reactor, o +nla!adas a otra macromolcula que restringe su movilidad.

Go e*iste un mtodo universal y perfecto de inmovilizacin! 8ada uso final requiere la evaluacin de cada paso de acuerdo con criterios tales como el propsito de la inmovilizacin, actividad, estabilidad, simplicidad y factibilidad econmica!

Soportes para inmo*ilizacin enzim"tica

#os componentes ms importantes de un sistema de inmovilizacin enzimtica son) la enzima, el soporte, y el modo de interaccin de la enzima con el soporte! El soporte puede ser una membrana, un slido insoluble en a ua o una matriz polimrica! El soporte debe tener las si uientes propiedades) 4ran rea superficial y elevada permeabilidad 4rupos funcionales suficientes para atrapar la en!ima ba1o condiciones que no la desnaturalicen #arcter hidrof"lico

Bnsoluble en agua +stabilidad trmica y qu"mica )esistencia mecnica /lta rigide! y part"culas con forma apropiada )esistencia al ataque microbial #apacidad de regeneracin &eguridad toxicolgica $recio ba1o y 1ustificable

#os soportes se pueden clasificar con base en su morfolo a &poroso, no poroso, o tipo el( o en su composicin qumica! #os soportes usados ms ampliamente se muestran en la si uiente tabla! 5atrices orgnicas 1olmeros naturales 1olisacridos 8elulosa /lmidn 2e*trano / ar y a arosa /l inato 5atrices inorgnicas 6inerales /rcillas de atapul ita 3entonita 1iedra pme*

8arra enina Quitina y quitosano 1rotenas 8ol eno Lelatina /lb%mina +eda 8arbones &carbn activado(

1olmeros sintticos 1oliestireno 1oliacrilatos y polimetacrilatos 1oliacrilamida =idro*ialquil metacrilatos Llucidil metacrilatos 1olmeros de an$drido maleico 1olmeros vinlicos y allicos 1oliamidas

6ateriales sintticos 7idrio no poroso 7idrio de poro controlado Z*idos metlicos de poro controlado 6etales

M$todos para enzimas insolubles

Entre los mtodos de inmovilizacin para enzimas insolubles se encuentran) 0nin a un soporte Entrecruzamiento 8opolimerizacin enzimtica /trapamiento

9nin al soporte
#as enzimas son randes molculas de protena con rupos qumicamente reactivos, rupos inicos y rupos $idroflicos, los cuales pueden participar en los procesos de inmovilizacin ya sea por) adsorcin fsica, enlaces inicos, enlaces con quelatos, enlaces bioespecficos, o, enlaces covalentes!

dsorcin fsica

En la adsorcin fsica, la enzima se ad$iere a la superficie de un soporte que no est especializado para uniones covalentes! El enlace se lo ra por interacciones fsicas tales como las fuerzas de van der Eaals, puentes de $idr eno, o efectos $idroflicos ; $idrofbicos! En ausencia de reaccin qumica, prcticamente no ocurren cambios en la conformacin de la enzima y la prdida de actividad asociada es mnima! +in embar o, las fuerzas de unin entre la enzima y el soporte son eneralmente dbiles, y puede presentarse el desprendimiento de la enzima en los sistemas de flu'o! #os cambios en los parmetros operacionales tales como, p=, fuerza inica o temperatura pueden incrementar el desprendimiento dramticamente! #os adsorbentes com%nmente empleados son) al%mina, carbn activado, tierra de diatomceas, vidrio e $idro*iapatita!

Enlaces inicos
El enlace inico se establece como una forma sencilla de inmovilizacin de enzimas! #as interacciones inicas son muc$o ms fuertes que las de la adsorcin fsica! +in embar o, la estabilidad de las uniones se afecta por cambios en el p=, o en la fuerza inica! 1ueden utilizarse como soportes, resinas comerciales de intercambio aninico y catinico!

Enlaces con quelatos

#as propiedades quelantes de un metal de transicin como el titanio o el zirconio, se emplean para acoplar enzimas a un material or nico &por e'emplo, celulosa o cido al nico( o a uno inor nico como el vidrio! Este mtodo lo us Govais en <NR<, y lo desarrollaron posteriormente Vennedy et al!

Enlaces bioespecficos
#as interacciones bioespecficas entre las enzimas y otras especies moleculares &por e'emplo, lectinas o anticuerpos( tambin se utilizan para inmovilizar! #as lectinas tales como la concanavalina / XAA;>IJKAJ;Y, son licoprotenas, principalmente de ori en ve etal, que enlazan fuertemente residuos especficos de un carbo$idrato! 1or e'emplo, una enzima que contiene un carbo$idrato &# ; ascorbato o*idasa( puede unirse especficamente al soporte comercial 8oncanavalina / ; +efarosa! El mismo mtodo se $a usado para inmovilizar invertasa para la conversin continua de sucrosa! 0n nuevo mtodo para la preparacin de enzimas inmovilizadas altamente activas, es enlazarlas con anticuerpos monoclonales especficos unidos a su vez a soportes! *so de anticuerpos monoclonales para inmovili!acin en!imtica

#a enzima est unida a un sitio especfico bien definido sin que se vea afectada su actividad cataltica! #a trans lutaminasa & lutaminilB pptido B lutamiltransferasa( XI;ALMJINJMY se $a inmovilizado de esta forma por entrecruzamiento con lec$os de el de a arosa &/ffiLel <9( para producir un biocatalizador bastante especfico y muy activo, comenzando desde una preparacin de la enzima cruda! En la inmovilizacin de la carbo*ipeptidasa / XAA;KNJAKJNY, la enzima con la actividad ms alta se lo r con la utilizacin del par anticuerpo monoclonal de ratn ; enzima soportado en Euper it 8 &5[$m 1$arma( o en una 1rotena / ; +efarosa 8# A3 &1$armacia(!

1ara saber ms acerca de los compuestos marcados con ro'o vaya a 8$em>inder, localizador de productos qumicos!

Enlaces co*alentes
0n soporte insoluble en a ua puede unirse covalentemente a la enzima por medio de los rupos laterales reactivos de residuos de aminocidos &por e'emplo, rupos amino, $idro*il, tiol o fenlicos( que no estn asociados con el sitio activo de la enzima o con el sitio de enlace del sustrato! 3a'o condiciones normales, los enlaces covalentes son estables y no ocurre el desprendimiento de la enzima si la concentracin de sustrato o la fuerza inica cambia durante la reaccin! Este tipo de reacciones es frecuentemente complicado y se lleva a cabo ba'o condiciones relativamente e*i entes en comparacin con las de los mtodos de adsorcin fsica! El enlace covalente puede alterar la conformacin y el sitio activo de la enzima, lo que ocasiona una prdida si nificativa de la actividad o la selectividad de la misma!

Entrecruzamiento

#a enzima se puede inmovilizar por entrecruzamiento con otras molculas enzimticas o con una protena inerte como la alb%mina &co ; entrecruzamiento( para lue o precipitar el a re ado resultante! Este mtodo puede usarse en combinacin con un soporte, por e'emplo, una membrana, en donde las enzimas adsorbidas fsicamente se entrecruzan sobre la superficie de la membrana! 8omo a entes entrecruzantes se pueden utilizar reactivos biB o multifuncionales tales como lutaralde$do XAAAJ=;JIY, tolueno diisocianato XA=>AJ=IJMY, o derivados de bisdiazobenzidina! #a principal desventa'a de este mtodo es el empleo de condiciones relativamente severas y las dificultades en el control de la reaccin! 1or ello, las actividades de tales biocatalizadores son eneralmente ba'as!

1ara saber ms acerca de los compuestos marcados con ro'o vaya a 8$em>inder, localizador de productos qumicos!

#opolimerizacin enzim"tica
4tro mtodo de inmovilizacin es la copolimerizacin de la enzima con una matriz polimrica! / pesar del $ec$o que la enzima se une covalentemente a parte de la matriz, el mtodo puede observarse como una modificacin del atrapamiento con eles! En el mtodo ori inal, las protenas son viniladas con monmeros de acilacin o alquilacin y copolimerizadas con otros monmeros! #as venta'as de este mtodo sobre el atrapamiento radican en la elevada actividad y estabilidad debido a que no e*isten prdidas de la enzima! En la copolimerizacin enzimtica, el copolmero se implanta dentro de una matriz, como, por e'emplo, un polisacrido! 2ependiendo del soporte esco ido, puede alcanzarse un elevado nivel de estrs mecnico! 1ueden evitarse las resistencias a la difusin entre las partculas, si el copolmero enzimtico se implanta en la superficie de un soporte con porosidad ba'a! 1or e'emplo, ciertas enzimas pueden inmovilizarse ba'o estrictas condiciones, para producir un biocatalizador con constantes cinticas muy parecidas a las de la enzima natural, pero con mayor estabilidad trmica

trapamiento
El atrapamiento puede ser visto como el confinamiento fsico de una enzima dentro de una matriz semipermeable! #a estructura de la matriz debe ser lo suficientemente compacta para que la enzima pueda retenerse, pero debe permitir la permeabilidad de los sustratos y los productos! Leneralmente, la enzima no est enlazada qumicamente a la matriz como en la copolimerizacin enzimtica! #os mtodos de atrapamiento se subdividen en) atrapamiento con eles,

la microencapsulacin, y, micelas reversas!

trapamiento con !eles

En este procedimiento, las enzimas libres se atrapan dentro de los espacios intersticiales de un el polimrico entrecruzado insoluble en a ua! +e pueden utilizar materiales elificantes tales como polisacridos, protenas o polmeros sintticos! 2entro de los polisacridos naturales, los al inatos, el a ar y el B carra enano, son ampliamente utilizados en la preparacin de biocatalizadores inmovilizados! El el de poliacrilamida fue el primer material que se us para el atrapamiento de enzimas &por e'emplo, tripsina, papana, B amilasa y 2Bfructasa <,P ; difosfato aldolasa(! #a polimerizacin de acrilamida puede iniciarse con persulfato de potasio y con radiacin W !

Microencapsulacin
En este mtodo las enzimas se inmovilizan encerrndolas dentro de una membrana permeable al sustrato y al producto! #as microcpsulas resultantes eneralmente tienen un dimetro de < a <99 m! #a microencapsulacin provee una elevada concentracin de enzimas por unidad de volumen de preparacin inmovilizado! +in embar o, como en todos los sistemas de membrana semipermeable, la velocidad de difusin del sustrato limita las aplicaciones de los biocatalizadores microencapsulados!

Micelas re*ersas
#as molculas de surfactantes amfiflicos pueden formar micelas reversas en solventes $idrocarbonados! #as micelas contienen a ua y pueden utilizarse como contenedores de biopolmeros! #os polmeros solubilizados &enzimas o inclusive clulas enteras( mantienen su actividad biol ica y se prote en contra el solvente or nico presente en la superficie de la cubierta surfactante! "ales sistemas se pueden utilizar para la conversin biocataltica de sustratos insolubles en a ua u otras reacciones que requieren de la presencia de una fase or nica! #as micelas deben mantenerse en un reactor apropiado que permita la separacin fsica de la enzima y los reactivos- el uso de reactores de membrana parece ofrecer venta'as sustanciales!

Efectos de la inmo*ilizacin de enzimas

#a inmovilizacin se puede considerar con un proceso de unin aleatorio que, por esta razn, puede afectar ne ativamente el sitio activo de una enzima en varios rados, aun en el mismo proceso de inmovilizacin! +e $a observado, en eneral, una ba'a actividad especfica de las enzimas inmovilizadas! El rado de retencin de la actividad, depende del mtodo de inmovilizacin empleado! #as razones ms importantes por las cuales una enzima pierde su actividad se resumen a continuacin y se ilustran en la si uiente fi ura) +fectos de la inmovili!acin en!imtica

6a en!ima puede desnaturali!arse por reactivos o productos involucrados en el procedimiento de inmovili!acin %formacin de la matri! de atrapamiento, reaccin para el enlace covalente o reacciones de entrecru!amiento' &Esquema <(. 6as condiciones de inmovili!acin pueden conducir a la desnaturali!acin o a la desactivacin &Esquema :(. 6a desactivacin en!imtica puede causarse por un grupo reactivo en el sitio activo que participa en la reaccin de enlace &Esquema @(.

6as fuer!as de enlace pueden mantener la molcula en!imtica en una configuracin inactiva %cambios conformacionales' &Esquema A(. 6a orientacin de la molcula de en!ima unida relativa al soporte puede impedir el acceso de sustrato al sitio activo, o la liberacin del producto %efectos estricos' &Esquema ?(!

#os efectos sobre el microambiente enzimtico, a pesar de que se sabe que la inmovilizacin afecta la conformacin y produce efectos estricos, no se $an estudiado debidamente, por la dificultad para determinarlos! #os valores cinticos in$erentes, publicados para al unas enzimas inmovilizadas, no presentan variacin respecto a los valores intrnsecos &enzima libre(, aunque resulta l ico pensar que el ambiente en el cual se encuentra la enzima, afecta de al una forma su actividad! 0n soporte que presente o no, afinidad por un sustrato, puede $acer que la enzima aumente o disminuya esta afinidad! #a e*istencia de puentes de $idr eno en el soporte, tambin puede ori inar cambios en la estructura enzimtica causando alteraciones en su actividad! Loldman et al! &<NPC( al $idrolizar elatina con papana, encontraron que la actividad de la enzima libre era mayor que la de la enzima inmovilizada en nitrato de celulosa, pero el poder de $idrlisis de esta %ltima era mayor, ya que se lo r un P9T ms de conversin! 1ropiedades como la termoestabilidad, el p=, etc!, pueden verse afectadas por la inmovilizacin, no tanto por la disminucin real del efecto, si no por la proteccin que el soporte puede e'ercer! #a inmovilizacin de enzimas frecuentemente incrementa su estabilidad, debido probablemente a la estabilizacin de la estructura terciaria de la protena! /l unos tipos de inmovilizacin, especialmente atrapamiento, pueden causar impedimentos estricos tan randes que ori inan una inactivacin aparente de la enzima! El ran n%mero de factores que producen cambios en la cintica intrnseca de la enzima, e*i e que para cada biocatalizador se determine la cintica real o in$erente para as poder conocer y cuantificar la cintica efectiva!

M$todos para enzimas solubles

En los mtodos de inmovilizacin para enzimas insolubles, la modificacin de la enzima natural o la de su microambiente frecuentemente disminuye la actividad o la selectividad de la misma! 1ara mantener las enzimas en su estado natural, puede separarse una solucin enzimtica del sustrato y del producto por medio de una membrana permeable! #os poros de la membrana permiten la difusin del sustrato y del producto y retienen fsicamente las randes molculas enzimticas! 1ara esto pueden emplearse membranas para ultrafiltracin o microfiltracin de $o'a plana o membranas de fibra $ueca! #os cofactores, que normalmente son peque.as molculas que pueden difundirse a travs de la membrana, pueden retenerse en la zona de reaccin por medio de su acoplamiento con molculas ms randes! 1or e'emplo, el nicotinamida ; adenina dinucletido &G/2( se retiene completamente por una fibra celular

$ueca cuando se enlaza a una cadena soluble de polietilen licol! #a membrana tambin prote e la solucin enzimtica del ataque microbial! #a selectividad de los procesos puede controlarse con un adecuado dise.o de la porosidad e $idrofilicidad de la membrana! #os principales problemas asociados con los reactores de membrana, son la contaminacin de la misma causada por la adsorcin o difusin de especies y por resistencias a la transferencia de masa! #as limitaciones en la difusin a travs de la membrana pueden evitarse con el uso de enzimas inmovilizadas con carcter soluble ; insoluble! "ales preparaciones son bastante %tiles para la conversin de sustratos insolubles en a ua, como la celulosa! #a celulasa del /spergillus niger se inmoviliz sobre poli&#Bcido lutmico(, la cual es soluble en soluciones neutras o alcalinas pero puede precipitar por descenso en el p= sin prdida de la actividad enzimtica!

'nmo*ilizacin de c$lulas
/ pesar que la auto ; inmovilizacin de clulas sobre diversas superficies ocurre de manera natural, la inmovilizacin intencional de material celular es un desarrollo reciente! #os sistemas inmovilizados de clulas completas &microbiales, levaduras, ve etales o clulas de mamferos( son muc$o ms verstiles que los correspondientes a enzimas inmovilizadas! "ales biocatalizadores consisten en clulas muertas completas o desinte radas que contienen enzimas activas! 1or esta razn, las clulas viables en reposo o en crecimiento pueden inmovilizarse- esta tcnica se usa especialmente con clulas eucariticas en las cuales la maquinaria metablica completa se requiere frecuentemente para su aplicacin especfica! #a principal venta'a de los cultivos de clulas inmovilizadas, contrario a los cultivos en suspensin, es el reducido costo del bioprocesamiento, como resultado de densidades celulares ms elevadas, fcil separacin, y uso continuo o repetido del biocatalizador! #a inmovilizacin puede incrementar la resistencia al esfuerzo cortante de las clulas eucariticas que son sensibles a l! #as enzimas mantienen su eometra y su microambiente naturales, y estn prote idas contra los cambios en la masa total del sistema &temperatura, p=, fuerza inica, estrs mecnico(! #os materiales de soporte estabilizan la actividad biocataltica, pero este fenmeno no se $a entendido por completo! #as reacciones catalizadas por clulas completas inmovilizadas pueden clasificarse de la si uiente forma) )eacciones que involucran en!imas simples %bioconversiones' )eacciones que involucran sistemas multien!imticos con o sin cofactores )eacciones que involucran una ruta metablica completa con la produccin de metabolitos primarios o secundarios

#a utilizacin de clulas microbiales inmovilizadas resulta venta'osa en las si uientes reas)

cuando las en!imas deseadas son intracelulares y la en!ima extractada y purificada se vuelve inestable despus de la inmovili!acin cuando los microorganismos no contienen en!imas que interfieran con el proceso de inters o cuando tales en!imas pueden desactivarse sin prdida de la actividad catal"tica requerida y cuando los sustratos y los productos no tienen un peso molecular elevado y pueden difundirse a travs de la membrana celular.

#a utilizacin de clulas completas en lu ar de enzimas aisladas es costosa, e implica tediosos procedimientos de purificacin! #a mayor venta'a de estos sistemas biocatalticos, es que la estabilidad operacional puede aumentarse por la reactivacin de las enzimas en las clulas inmovilizadas! Esta reactivacin se puede lo rar con una breve incubacin en un medio o con el crecimiento controlado de las clulas inmovilizadas!

Soportes celulares
0na ran variedad de matrices or nicas e inor nicas estn disponibles para la inmovilizacin celular- aquellas interact%an con la superficie celular por medio de enlaces fsicos o qumicos! +e debe considerar una serie de factores para la seleccin del soporte adecuado para su utilizacin a ran escala) +l material debe estar disponible en cantidades suficientes y con un ba1o costo. +l material debe tener un gran rea superficial accesible a las clulas y a los reactivos. +l material debe ser mecnica, qu"mica y trmicamente estable, ba1os condiciones de proceso y de almacenamiento. 6a matri! debe contener un nDmero suficiente de grupos funcionales para enla!ar las clulas. +l material no debe reducir la actividad celular o iniciar el proceso de lisis. +l material debe ser fcilmente manipulable durante el proceso de inmovili!acin. +l material debe estar en capacidad de poder reutili!arse o disponerse en forma segura.

+n el caso del crecimiento de clulas viables, la matri! debe tener suficiente volumen vac"o o ser lo suficientemente elstico para dar cabida a las nuevas clulas.

T$cnicas de inmo*ilizacin celular

#a mayora de los mtodos de inmovilizacin celular son e*tensiones o modificaciones de aquellos que se discutieron en la seccin correspondiente a la inmovilizacin de enzimas! 0na forma de clasificacin consiste en usar la ruta por medio de la cual se prepara el biocatalizador) Bnmovili!acin libre de soportes Bnmovili!acin de una biomasa determinada sobre la superficie previamente conformada de un soporte Bnmovili!acin de una biomasa determinada durante el curso de la formacin del soporte %por e1emplo, por polimeri!acin' Bnmovili!acin por medio del crecimiento controlado de un inculo o por la germinacin de esporas inmovili!adas

'nmo*ilizacin celular sin soporte

#a manera ms simple de inmovilizar biocatalizadores es aprovec$ando su tendencia intrnseca a a re arse o flocular cuando la densidad celular es elevada! #as levaduras, los mo$os y las clulas ve etales forman a re ados que son relativamente estables al esfuerzo cortante en los reactores de lec$o fluidizado! #a floculacin puede inducirse por polielectrolitos tales como el quitosano! #a a re acin celular puede inducirse por reactivos de ba'o peso molecular- biB o multifuncionales, tales como el lutaralde$do, diazo diaminas o tolueno diisocianato, pero la to*icidad y elevada capacidad de reaccin de estas sustancias limitan su aplicabilidad en clulas inmovilizadas viables!

9nin de c$lulas a un soporte

+imilar a la inmovilizacin de enzimas insolubles, la unin de clulas a un soporte puede llevarse a cabo mediante los si uientes mtodos) /dsorcin fsica

1or enlaces inicos, o, 1or enlaces covalentes!

dsorcin fsica
#a inmovilizacin de microor anismos o clulas por ad$esin o adsorcin a una matriz previamente conformada, est basada en su afinidad por las superficies slidas durante el crecimiento! Este tipo de inmovilizacin puede lo rarse, si se ponen en contacto durante un perodo de tiempo definido, un soporte inerte con clulas activas en crecimiento! +ustancias qumicas adicionales son innecesarias, y la inmovilizacin se lleva a cabo durante el crecimiento! Go obstante la simplicidad y versatilidad de esta tcnica, su uso est restrin ido por la fuerza y la capacidad de ad$esin, la cual depende usualmente de las condiciones ambientales &p=, fuerza inica(! El empleo de velocidades elevadas de flu'o como mtodo de seleccin, en un lec$o fluidizado, produce buenos resultados! Estos sistemas de clulas vinculadas a superficies &biopelculas( se usan ampliamente en el tratamiento de a uas de desec$o!

Enlaces inicos
#os enlaces inicos son un caso especial de la adsorcin fsica, en el cual las clulas microbiales car adas pueden interactuar electrostticamente con los iones presentes sobre la superficie del soporte para formar comple'os estables! +e pueden usar soportes como resinas sintticas de intercambio inico, derivados modificados de la celulosa o materiales inor nicos! #a adsorcin celular se ve afectada principalmente, por factores tales como el p=, la fuerza inica, la car a superficial, la edad celular o la composicin de la superficie del soporte!

Enlaces co*alentes
#as clulas tambin pueden unirse a los rupos funcionales de la superficie del soporte por medio de enlaces covalentes! Esta tcnica se usa frecuentemente para la inmovilizacin enzimtica pero su empleo con clulas enteras es limitado, debido a la to*icidad de los a entes de acoplamiento, que ocasionan la prdida de la viabilidad o de la actividad de la enzima! #as principales venta'as de este mtodo son la reduccin o eliminacin de las prdidas de clulas y el me'oramiento de la resistencia a los esfuerzos mecnicos del biocatalizador, sin el incremento de barreras a la difusin!

'nmo*ilizacin de c$lulas por atrapamiento

Esta tcnica implica el uso de una estructura polimrica, una membrana o microcpsulas! /trapamiento estructural /trapamiento en membrana 6icroencapsulacin

trapamiento estructural
#os mtodos ms ampliamente usados de atrapamiento estructural, involucran la retencin de clulas dentro de la red de una matriz polimrica &fi ura <(! #a estructura es lo suficientemente compacta para prevenir la prdida de clulas, pero permite la difusin de los sustratos y de los productos! #a clula no est unida a la matriz, y la red polimrica se forma eneralmente, en presencia de las clulas que van a ser inmovilizadas! #os poros $idroflicos de las matrices se forman ba'o condiciones lo suficientemente moderadas como para permitir la inmovilizacin celular con mnima prdida de la viabilidad y de la actividad! 0igura A. >oto rafa que muestra clulas de ri.n de $amster beb &3=V( creciendo dentro de los poros de una matriz cermica especialmente construida!

#as matrices ms empleadas para el atrapamiento celular estructural son)

4el de poliacrilamida
Este el se us para inmovilizar clulas completas en la primera aplicacin e*itosa de atrapamiento estructural para la produccin de bioqumicos por biotecnolo a! #a misma tcnica se emple en la produccin de cido #Basprtico! El mtodo se basa en la polimerizacin por radicales libres en una solucin acuosa de acrilamida monmero que contiene la clulas a ba'a temperatura! El rado de entrecruzamiento determina la porosidad y las propiedades mecnicas de las pastillas formadas! #a ran desventa'a de la tcnica es la to*icidad del acrilamida monmero, del a ente de entrecruzamiento &por e'emplo, ., .O ; metilenodiacrilamida XAA;J>MJPY(, y el iniciador de la polimerizacin &por e'emplo, ., ., .O, .O ; tetrametiletilenodiamina XAA;JAIJPY- los cuales disminuyen la viabilidad celular y la actividad enzimtica! El $idro*ietil metacrilato XIMIJKKJPY puede usarse como alternativa menos t*ica para acrilamida!

/lginato QP;;NJ=IJ=R
+e e*trae a partir de al as marinas y de cultivos de /!otobacter vinelandii- es un copolmero lineal del cido B2Bmanurnico y del cido B#B ulurnico unidos por enlaces <, AB licosdicos! El al inato forma un el en presencia de iones multivalentes, eneralmente de calcio o aluminio! El atrapamiento controlado de las clulas es simple y eneralmente, no es t*ico! 7arios tipos de clulas pueden inmovilizarse con un prdida despreciable de la viabilidad! 1or lo anterior, la matriz puede solubilizarse en presencia de iones 8a :O o a entes quelantes tales como, fosfatos, citratos o cido etilndiaminotetractico!

#a matriz de al inato es mecnicamente dbil, as que las clulas en crecimiento &en especial, las clulas ve etales( pueden desprenderse de las esferas o inclusive desinte rarse!

J #arragenano QAAAALJ>;JIR
Es el polisacrido sulfonado de mayor disponibilidad, no es t*ico y posee un elevado peso molecular! +e e*trae de al as marinas! Est compuesto por unidades de B2B alactosa ABsulfato y @, PBan$idroB2B alactosa! \nicamente la sal sdica del B carra enano es soluble en a ua fra! #a induccin de la elacin con iones de potasio se puede realizar ba'o condiciones moderadas y sin el uso de qumicos que disminuyan la actividad enzimtica! 4tra de las venta'as de esta tcnica consiste en que los biocatalizadores celulares inmovilizados pueden presentarse de diversas formas &pastillas, $o'as, esferas, etc!( +e dispone de dos procedimientos para el atrapamiento! 6ediante el procedimiento de un solo paso se involiza un n%mero considerable de clulas en el el! #a solucin celular salina se mezcla con el soluble de B carra enano en condiciones estriles y finalmente las esferas se incuban en el medio nutriente! 4tro mtodo involucra el uso de resinas fotoentrecruzables! #os rupos activos &por e'emplo, los rupos vinilo( se acoplan a polietileno o a oli meros de poli&propilen licol( de lon itud de cadena controlada para obtener prepolmeros! 2ic$os prepolmeros se mezclan con el cultivo celular y el entrecruzamiento se inicia con radiacin 07! #as venta'as de este mtodo son) El atrapamiento es simple y se realiza ba'o condiciones moderadas #os prepolmeros no contienen monmeros t*icos #a red del el se puede adaptar a las necesidades del proceso +e pueden lo rar propiedades fisicoqumicas del el ptimas seleccionando los prepolmeros ms apropiados

1ara saber ms acerca de los compuestos marcados con ro'o vaya a 8$em>inder, localizador de productos qumicos!

trapamiento en membrana
En este mtodo, las clulas no se atrapan en una matriz porosa sino que se retienen en una matriz semipermeable! #a membrana permite la difusin del material soluble $acia y desde las clulas inmovilizadas a medida que retiene y prote e los or anismos! #os

biorreactores de fibra porosa encuentran su mayor aplicacin en este campo, y en ellos los or anismos se confinan a un lado de la fibra porosa mientras que el sustrato soluble y los productos se confinan en la otra! +e pueden alcanzar densidades celulares mayores que las que se obtienen en el atrapamiento estructural, pero el crecimiento debe controlarse para prevenir la formacin e*cesiva de biomasa y una posterior ruptura de la membrana! El suministro de o* eno y nutrimentos a las clulas y la remocin de di*ido de carbono ocurren por difusin y pueden lle ar a ser insuficientes!

Microencapsulacin celular
En esta tcnica, las clulas se ubican dentro de una esfera de al inato la cual se cubre con una membrana semipermeable! #a membrana eneralmente est compuesta por al inato de calcio y poliB #Blisina! 0na vez cubierta con el el de al inato puede solubilizarse con citrato de sodio, de'ando las clulas inmovilizadas en esferas $uecas en las cuales pueden cultivarse! +e pueden lo rar diferentes dimetros de cpsula &desde :9 nm $asta : mm( y diferentes porosidades de membrana! En las microcpsulas de mayor tama.o, sin embar o, los radientes radiales de concentracin, ya sea de los nutrimentos o del o* eno, pueden ori inar un n%cleo necrtico!

'nmo*ilizacin de or!anelos
#as enzimas en las clulas viables pueden asociarse en estructuras supramoleculares, las cuales se ensamblan dentro de or anelos como mitocondrias, cloroplastos, pero*i*omas, vacuolas y n%cleo! "ales or anelos tienen sus propias funciones metablicas y, por consi uiente, proveen e*celentes biocatalizadores inmovilizados que pueden llevar a cabo reacciones de m%ltiples pasos y de m%ltiples funciones! /s mismo la inmovilizacin aumenta la lon evidad de los or anelos! /l unos e'emplos de los usos de los or anelos inmovilizados son la re eneracin del /"1, la o*idacin metaboltica y la fotoproduccin de $idr eno! #a mayora de las investi aciones estn relacionadas con el aislamiento y la inmovilizacin de cloroplastos como potenciales convertidores de ener a solar!

Efectos de la inmo*ilizacin sobre la c$lula

Estudios sobre los efectos de la inmovilizacin de &accharomyces cerevisiae para la produccin de metabolitos, fueron realizados por =an$n =a edol et al! &<NC:(, =olcbe y 6ar alit$ &<NC:(, L$ose et al! &<NC@(, Eada et al! &<NC9(, 2oran y 3ailey &<NCP(- y demostraron que la tasa especfica de consumo de o* eno por la levadura en cuestin, disminuye a valores entre el R@ y el RNT respecto a la de clulas libres- que la velocidad de eneracin de 84: disminuye a valores entre el RC y el CAT &dependiendo del soporte( del valor obtenido con

clulas sin inmovilizar! 4tros aspectos que se presentan son, la marcada reduccin del tiempo de replicacin, la irreductibilidad del tama.o celular y la conservacin de la tasa especfica de crecimiento de las clulas desprendidas! 1or otra parte, 2oran y 3ailey &<NCP(, mostraron que las clulas sufren variaciones en su metabolismo que las $ace producir ms etanol o conservar la capacidad de crecimiento a elevadas concentraciones de sustancias in$ibidoras! 4tros aspectos de los aspectos ambientales son presentados por Gavarro y 2urn &<NRR(, 2oran y 3ailey &<NCP(, 3ailey et al! &<NCR(, Lodia et al! &<NCR( y 8asson et al! &<NCR(! En los traba'os de 3ailey et al! se reportan cambios sustanciales en las propiedades cinticas de &accharomyces cerevisiae inmovilizada por entrecruzamiento en elatina, respecto a las clulas libres! #a velocidad de produccin de etanol aument entre un A9 y un ?9T, mientras que la velocidad de crecimiento se redu'o en un A?T! +e $an reportado efectos de la inmovilizacin sobre diferentes microor anismos! 7uillermard et al! &<NCC( demostraron que 6y*ococcus *ant$us inmovilizadas en al inato, producen oc$o veces ms cantidad de proteasas que las clulas libres! +teSart y 5obertson &<NCC(, utilizaron una tcnica de radiomarcacin para estudiar el efecto de la inmovilizacin de +. coli en membranas de celulosa! 8omprobaron que la diferencia entre la cintica de clulas inmovilizadas y la de clulas libres se deba %nicamente a efectos de la in$ibicin por producto ori inados por problemas difusionales dentro de la matriz! =olcber y 6or alit$ &<NC<(, probaron que un medio que contena al inato de calcio afectaba la cintica de las levaduras! +in embar o, 2oran y 3ailey &<NCP(, llevaron a cabo el mismo e*perimento en un medio con elatina y observaron que la cintica permaneca inalterable! /l unos autores como 6attiason y =ann, se.alan que la inmovilizacin afecta la actividad de a ua, y por esta razn, valores ba'os de esta propiedad pueden inducir cambios en el metabolismo celular! 8$en et al! &<NN9(, realizaron un estudio con clulas de ?. fragilis inmovilizadas en un lec$o percolador, y demuestran que el crecimiento de las clulas dentro del reactor depende de la presencia de fuentes de nitr eno y que la productividad en este sistema es una funcin parcialmente asociada al crecimiento!

#oinmo*ilizacin de biocatalizadores
#a coinmovilizacin se refiere a la inmovilizacin simultnea de combinaciones especficas de clulas, or anelos o enzimas que muestran actividad biocataltica complementaria! #as venta'as sinr icas de la coinmovilizacin se ven limitadas, sin embar o, por la compatibilidad biol ica de los componentes! #a coinmovilizacin se lo ra mediante el coatrapamiento de enzimas pre ; inmovilizadas y clulas completas en una matriz sencilla o mediante el acoplamiento directo de las enzimas con los microor anismos! El primer mtodo se us para inmovilizar alactosidasa y &accharomyces cerevisiae para la conversin de celobiosa a etanol! +e $an utilizado clulas de levaduras o micelias muertas para el acople directo de enzimas con paredes celulares en aplicaciones del procesamiento de alimentos! 4tra aplicacin interesante es la bioproduccin de $idr eno aseoso con $idro enasa y cloroplastos! #a coinmovilizacin caus un incremento en la produccin cinco veces mayor a la que se obtiene con el sistema que emplea dos especies catalticas inmovilizadas separadamente!

#in$tica de los biocatalizadores inmo*ilizados

#a velocidad de reaccin catalizada por una enzima soluble puede describirse eneralmente por una ecuacin cintica del tipo 6ic$aelis ; 6enten! El mecanismo ms simple para tales reacciones asume que la formacin reversible de un comple'o enzima ; sustrato &E+(, que se descompone irreversiblemente en un producto &1( y una enzima libre &E()

#a ecuacin de 6ic$aelis ; 6enten es)

2onde, r& es la velocidad de reaccin del sustrato, @5 es la m*ima velocidad de reaccin, ?5 es la constante de 6ic$aelis y c& es la concentracin del sustrato! #a velocidad de reaccin es funcin de la concentracin del sustrato y de la enzima, p=, temperatura, composicin del solvente y fuerza inica! El mecanismo de reaccin correspondiente para una enzima inmovilizada es ms complicado debido a) la actividad de la en!ima puede cambiar por la inmovili!acin, y, el sustrato se debe transportar al sitio activo y el producto se debe transportar desde el lugar de la reaccin hasta el seno de la solucin.

#a velocidad de reaccin se controla mediante parmetros adicionales que resultan de la inmovilizacin, como por e'emplo, cambios conformacionales, cambios qumicos, efectos particionales y efectos difusionales &esto es, transferencia de masa interna y e*terna(! #a resistencia a la transferencia de masa se debe considerar en las mediciones cinticas o cuando se modelan procesos con biocatalizadores inmovilizados! #a ecuacin de 6ic$aelis ; 6enten se puede adaptar el factor de efectividad )

4 en su forma linealizada)

2onde, c&/ es la concentracin del sustrato en la superficie! Qa que, tanto la concentracin de sustrato en la superficie y el factor de efectividad pueden variar con la concentracin del sustrato en el seno c& la linealizacin de #ineaSeaver ; 3urD y otras formas de linealizacin de la ecuacin de 6ic$aelis ; 6enten ya no se aplican! En la fi ura < se puede observar que la influencia de la transferencia de masa disminuye a elevadas concentraciones del sustrato y desaparece completamente cuando esta concentracin es infinita! El factor de efectividad cambia con la concentracin del sustrato en el seno, alcanzando su valor ms ba'o &9( cuando c&/ K 9! 0igura A.

#in$tica de las enzimas inmo*ilizadas por copolimerizacin o microencapsulacin

En el caso de este tipo de enzimas, se presenta una resistencia adicional interna a la transferencia de masa que afecta la actividad interna de la enzima inmovilizada! 3alance de materiales 8onsumo de sustrato de acuerdo con la cintica de 6ic$aelisB6enten 8onsumo de sustrato proporcional a la concentracin de sustrato 8onsumo constante de sustrato

Balance de materiales

El si uiente modelo, denominado modelo distribuido, se fundamenta en las si uientes suposiciones) 6a reaccin ocurre en cualquier punto de la en!ima 6a cintica de la reaccin es similar a la observada con la en!ima libre 6a transferencia de masa en la en!ima inmovili!ada ocurre mediante difusin molecular .o existe resistencia a la transferencia de masa en la superficie exterior de la en!ima inmovili!ada 6a en!ima inmovili!ada es esfrica

El balance de materia, ba'o condiciones de estado estacionario, corresponde a una partcula esfrica permeable de radio )o, entre ) y &)Od)( &>i ura <(! +i se supone constante la difusividad efectiva D + , del sustrato dentro de la partcula, el balance se e*presa de la si uiente forma)

+i esta e*presin se divide por A d) y se or aniza) 0igura A. $art"cula esfrica

En el lmite, cuando d) tiende a 9)

#onsumo de sustrato de acuerdo con la cin$tica de Michaelis ( Menten

#a velocidad de consumo de sustrato, si se supone que la cintica intrnseca de la reaccin local de la enzima inmovilizada se comporta se %n la ecuacin de 6ic$aelis ; 6enten, es

1.
8on 76 K q 2onde, @5 es la velocidad m*ima de la reaccin- es la actividad de la enzima inmovilizada, & moles sustrato convertido(&tiempo(B<& moles enzima(B<- es la densidad del soporte, &masa del soporte(/&volumen del soporte(- q es la car a de la enzima & moles enzima(/ &masa del soporte( +i se reemplaza la ecuacin < en la ecuacin de balance de materiales y se e*presa el resultado en forma adimiensional, se obtiene

2.
8on x K c&/co- K co/?5- K )/)o 2onde, )o es el radio de la partcula esfrica que sirve como soporte, y es el mdulo de Thiele, definido por)

3.

#as condiciones de frontera asociadas con la ecuacin : son

- c+ K co en 5 K 5o

4.

Estas condiciones e*presadas en forma adimensional se transforman en

- * K < en K < 2onde, )c es el radio cr"tico, en el cual la concentracin de sustrato es i ual a cero!

5.

#a velocidad lobal de consumo de sustrato en una partcula esfrica con enzimas inmovilizadas es

6.
2onde, @) es la velocidad observada de consumo de sustrato- /p/@p es la relacin entre el rea superficial y el volumen de la partcula, que para el caso de partculas esfricas es i ual a @/5 o! #a ecuacin P e*presada en forma adimensional se convierte en

7.
#a ecuacin < e*presada en forma adimensional es

8.
2onde, @o es la velocidad de la reaccin correspondiente a la concentracin de sustrato co, prevaleciente en el seno del fluido- K co/?5

9.
#a velocidad m*ima de reaccin, e*presada en funcin del modulo de "$iele es

1 .
#a velocidad de la reaccin si no $ubiera resistencia a la transferencia de masa, se obtiene mediante el reemplazo de @5 de la ecuacin <9 en la ecuacin C

11.
El factor de efectividad, , se define como la relacin entre la velocidad real de la reaccin &ecuacin R( y la velocidad de la reaccin si no $ubiera resistencia a la transferencia de masa &ecuacin <<(

12.

#onsumo de sustrato proporcional a la concentracin de sustrato

#a velocidad de consumo de sustrato e*presada como una reaccin de primer orden con respecto a la concentracin de sustrato es

vlida para c+ FF V6

1.

2onde, < es el coeficiente de velocidad de primer orden &tiempo( B<- c& es la concentracin del sustrato! +i se reemplaza la ecuacin < en la ecuacin de balance de materiales y el resultado se e*presa en forma adimensional se obtiene

2.
8on x K c&/co- K )/)o- A K &)o/@(&</D+(</: 2onde, A es el mdulo de "$iele correspondiente a una reaccin con cintica de primer orden! En la ecuacin :, x est limitado a medida que tiende a cero y x K < en K <! 2espus de reemplazar K x, la ecuacin : se convierte en

3.
#a solucin eneral de esta ecuacin diferencial es

4. 5.
1uesto que x debe limitarse $a medida que tiende a cero y de acuerdo con la primera condicin de frontera debe seleccionarse #A K 9! #a se unda condicin de frontera requiere que #> K &sen$@ A(B<! 1or lo tanto

6.
#a velocidad real de la reaccin limitada por difusin es i ual a la velocidad de transferencia de masa en la superficie de la enzima inmovilizada

7.
#a velocidad de la reaccin si no $ubiera resistencia a la transferencia de masa en los poros es <co! 1or consi uiente, despus de diferenciar la ecuacin P con respecto a y reemplazar la e*presin que resulta en la ecuacin R se obtiene

8.

#onsumo constante de sustrato

+i la velocidad de consumo de sustrato es constante con respecto a la concentracin de sustrato &cintica de orden cero(

para c+ M 9- vlida para c+ MM V6 2onde <o es el coeficiente de la reaccin con cintica de orden cero! +i <o se sustituye en la ecuacin de balance de materiales, se obtiene

Ecuacin vlida para c& M 9! #a concentracin de sustrato est limitada a medida que ) tiende a cero y c& K co en ) K )o! 1or consi uiente

El radio crtico )c por deba'o del cual la concentracin de sustrato es nula, se obtiene al reemplazar & c&/co( K 9 en la ecuacin anterior

#a velocidad real de la reaccin est dada por

#a velocidad de la reaccin si no e*istiera resistencia a la transferencia de masa es

8on base en lo anterior, el factor de efectividad, definido como la relacin entre las dos velocidades anteriores es

Modelo cin$tico estructurado para c$lulas inmo*ilizadas

6onbouquette y 4llis &<NN9(, presentan un modelo estructurado intrnseco para describir la cintica de clulas viables inmovilizadas dentro de un soporte poroso! #as predicciones en cuanto a las distribuciones de concentracin de biomasa interna en estado estable, los perfiles de sustrato biocatalizado, el crecimiento de las clulas inmovilizadas y las prdidas celulares del soporte- estn cualitativamente de acuerdo con la literatura! #os estudios de simulacin indicaron que la estructura porosa del soporte es una variable de dise.o particularmente importante que debe optimizarse! 3ase terica 4btencin del modelo Efectividad del biocatalizador

Base terica
#a si uiente ecuacin describe la reaccin y la difusin, en estado estacionario, en una capa del ada del biocatalizador

2onde, D es la difusividad efectiva basada en el rea transversal total , c& es la concentracin del sustrato limitante en el cultivo , ! representa la profundidad dentro del soporte, 9 es la concentracin de biomasa y r es al una reaccin biol ica consumidora de sustrato! El no aplicar esta apro*imacin en sistemas de clulas viables inmovilizadas, puede conducir a serias dificultades! #a difusividad efectiva se define tpicamente como

2onde, es la porosidad del catalizador, Do es la difusividad molecular y es el factor de tortuosidad!

En el caso de clulas viables inmovilizadas, el espacio vaco disponible para la transferencia de masa de nutrimentos y de productos, es una funcin de la concentracin de biomasa! 1or esta razn, un valor de D no tiene un si nificado especial) puede depender del tiempo, es especfico del sistema y por ello $ace parte %nicamente de un con'unto de condiciones! 4tro problema con esta apro*imacin deriva de la utilizacin de concentraciones de nutriente basadas en el volumen total del cultivo! En sentido estricto, la concentracin de sustrato limitante dentro del soporte debera basarse en el volumen del fluido que no ocupa la biomasa, esto es, el volumen abitico, ya que la concentracin de sustrato en la fase abitica es la cantidad de nutriente en el cual los microor anismos inmovilizados estn inmersos! #a concentracin de sustrato basada en el volumen total del cultivo &suma de los vol%menes bitico y abitico(, se apro*ima bastante a la intrnseca, la concentracin de la fase abitica en la mayora de las fermentaciones por lotes, puesto que la biomasa usualmente ocupa un peque.o porcenta'e del volumen total del cultivo! 8ontrario a lo anterior, dentro de los soportes porosos la biomasa inmovilizada eneralmente ocupa los espacios vacos ms accesibles, en los cuales se suplen los nutrimentos ms adecuados! 2ebido a esto, con el fin de predecir apropiadamente la distribucin de la actividad biocataltica dentro de los biocatalizadores $etero neos viables, se deberan usar e*clusivamente las concentraciones intrnsecas! 7arios rupos de investi acin observaron que las clulas viables se acumulan con elevadas densidades &<9 N ; <9<: clulas/ml( eneralmente en una capa ba'o la superficie, con un espesor desde ?9 $asta mil micrones! #a anc$ura actual de esta zona depende presumiblemente de las caractersticas fsicas del soporte, de la difusividad y de la concentracin superficial del nutriente limitante! 8on relacin a la fi ura <, el lmite inferior de la capa de clulas viables en estado estable, est fi'o a una profundidad dentro del biocatalizador tal que la concentracin del nutriente limitante en la fase abitica, y&, $a alcanzado el valor mnimo, y;&! 0igura A.

2entro de la re in en donde y& M y;& , la biomasa inmovilizada ocupa el espacio disponible entre los poros $asta la concentracin de estado estacionario de la biomasa viable, c9 , la cual, se supone, es independiente de la posicin! El crecimiento posterior ori ina un desprendimiento de las clulas del soporte ba'o condiciones de estado estacionario! En efecto, sobre la base de un componente n, densidad celular constante con un metabolismo descrito por m procesos- puede observarse que ba'o condiciones de un sustrato limitante, las clulas crecen continuamente a todos los valores de y& que sean ms randes que y;& &esto es, la velocidad especfica de crecimiento es muc$o mayor que cero( e*cepto que se administren antibiticos o se aplique una restriccin mecnica apropiada! 1or lo anterior, la fi ura < representa un crecimiento continuo del sistema de clulas inmovilizadas en estado estacionario con respecto al consumo de sustrato, la concentracin, el crecimiento y el desprendimiento de las clulas inmovilizadas! #os requerimientos de un modelo naturalmente sern) *na adecuada descripcin del crecimiento celular, *na ecuacin que describa la difusin y el consumo del sustrato limitante basada en la concentracin intr"nseca %de la fase abitica', y,

*na manera para describir el crecimiento final y el desprendimiento de biomasa del soporte.

4btencin del modelo

Obtencin de un modelo estructurado intrnseco en estado estable

/fortunadamente, el deseo de simular con ms precisin la complicada cintica de crecimiento y la de la sntesis de producto de or anismos unicelulares, $a conducido al reciente desarrollo de modelos menos fenomenol icos y ms realsticos, para sustituir a aquellos basados en la cintica enzimtica de 6ic$aelis ; 6enten &el e'emplo ms claro, la ecuacin de 6onod(! #os modelos intrnsecos estructurados son particularmente me'ores para aplicaciones comple'as como estas descripciones multi ; variables de biomasa- son ms fle*ibles que los modelos no estructurados y proveen una distincin ms clara entre la biomasa inmovilizada y los alrededores del microambiente! Esener et al! desarroll un modelo estructurado que describe la biomasa por medio de dos variables biticas intrnsecas! El componente 5 consiste principalmente de )./ &el cual es ms que todo ribosomal(, pero incluye tambin carbo$idratos, intermedios metablicos y los ,bloques de construccin, de las macromolculas celulares tales como aminocidos, nucletidos y cidos rasos! El componente 2 se compone de los constituyentes remanentes de las clulas tpicas, los cuales son, principalmente, estructuras proteicas pero que tambin incluyen material entico &-./(! #a fi ura < ilustra las interacciones propuestas de las particiones ) y - que simulan de forma simple, los procesos intracelulares correspondientes al crecimiento y al mantenimiento! 0igura A.

Este modelo supone que la suma de las dos reacciones de describen la demanda de la fuente limitante de carbono y ener a &+( &sntesis del componente 5( y la formacin del componente 2- representa adecuadamente el crecimiento celular- y la inversin del componente 2 puede simular el metabolismo de mantenimiento! 2e esta forma, los miles de reacciones y procesos de transporte de masa que tienen lu ar dentro de la clula o en las paredes y/o membranas, se a rupan dentro de estas tres simples conversiones! 2e acuerdo con la tabla <, se supone que la formacin de ) y - no es <99T eficiente como indican los coeficientes de rendimiento, :) y :-, respectivamente! #a e*presin para la sntesis de la particin - &principalmente polimerizacin de protenas( 'ue a el doble papel del componente ) como fuente de reactivos &aminocidos( y como catalizador & )./ ribosomal(! #a inversin del componente 2, presumiblemente la de radacin a aminocidos o a constituyentes peptdicos &que no son procesos ener ticos intensos(, se representa con un rendimiento completo! Tabla A.

+ntesis de 5) +ntesis de 2)

Hnversin de 2) / pesar de lo modesto de este modelo, se $an obtenido impresionantes simulaciones del crecimiento de ?lebsiella pneumoniae en licerol, por parte de Esener et al! +in embar o, la pendiente y el intercepto de una rfica de x), la concentracin del componente ), contra , no est de acuerdo con los valores e*perimentales! +e desea una correlacin verificable e*perimentalmente dado que la concentracin del componente ) refle'a cercanamente el contenido ribosomal, el cual es representativo de la capacidad de sntesis de protenas! El problema se soluciona de forma simple, al sustraer una constante , de x) en el trmino para la formacin del componente -! Este a'uste refle'a el incremento de ribosomas ,inactivos, cuando la velocidad especfica de crecimiento es ba'a, e incrementa el valor del intercepto del componente ) &x;)( y disminuye la pendiente &m( correspondiente al perfil e*perimental! 0na sencilla ecuacin de estado estacionario es suficiente para describir completamente la fase bitica, ya que x) y x- se suponen sumadas a la densidad constante de la fase bitica, b! #a ecuacin que resulta &a partir del balance del componente )( es

1.
Que incluye el trmino & x)( que contabiliza la dilucin del componente ) del soporte debido al crecimiento celular! #a velocidad especfica de crecimiento puede e*presarse en trminos de y& y x)

2.
#a forma familiar del trmino de 6ic$aelis ; 6enten de la demanda de sustrato &formacin del componente )( su iere una formulacin simple de la ecuacin de estado estado estacionario para describir el consumo y la difusin de nutriente! +in embar o, la derivacin de un balance para la difusin y la reaccin con base en una concentracin intrnseca de nutriente limitante, tiene al unas caractersticas que no son evidentes en las ecuaciones para la concentracin del cultivo &no intrnseca(! 2e otra parte, como el interior del biocatalizador est compuesto de cavidades &macroporos( densamente pobladas de clulas y una fraccin inaccesible de ,microporos,, la construccin de la ecuacin para la fase abitica debera apro*imarse a un problema difusional de dos fases! Esto es, la difusividad en el volumen relativamente peque.o entre las clulas en una microcolonia inmovilizada puede diferir si nificativamente de la que se encuentra en los ,microporos, desocupados del soporte, debido al incremento de la tortuosidad o a la presencia de flu'os polimricos celulares!

#a ecuacin de estado estacionario para la fase abitica &con base en el volumen abitico( es

3.

2onde, es el volumen abitico en las microcolonias inmovilizadas, y D m y D c son las difusividades del sustrato en las microcolonias y en el soporte desocupado, respectivamente! Esta ecuacin se deriva con dos suposiciones! 1rimero, el flu'o se supone unidireccional y sin componente convectivo! +e undo, la pseudoisotropa del biocatalizador interior se supone que permite el empleo del mismo radiente de sustrato a lo lar o de las microcolonias y los microporos del soporte! #a e*presin dentro de los parntesis cuadrados en el primer trmino de la ecuacin inmediatamente anterior, realmente es un coeficiente de difusin compuesto, D m, una apro*imacin ruesa de las contribuciones combinadas al flu'o & flux( difusivo de masa a travs de las microcolonias y de los poros vacos del soporte! El se undo trmino es simplemente la e*presin para la demanda de sustrato, la cual depende del tama.o relativo de la fase bitica! 4bsrvese que el efecto final de sta derivacin sobre el trmino de demanda de sustrato equivale a la divisin por < ; c9/ b! En las fermentaciones por lotes o quimiostticas, c9/ b FF <, y, y& c& puesto que el volumen bitico es eneralmente un peque.o porcenta'e del volumen del cultivo! 1or ello, la e*presin para la demanda de sustrato se reduce a

4.
y <)/ b constituye la velocidad constante com%nmente medida! +in embar o, estas simplificaciones no pueden aplicarse a sistemas celulares viables inmovilizados ya que la fraccin de volumen bitico es si nificativa! 8on referencia a la relacin @, si se considera el caso simple en el cual D c K D m- la e*presin dentro de los parntesis cuadrados se reduce a D c obtenindose

5.

/qu, la velocidad constante aparente difiere de la de un quimiostato en el factor </&< ; c9/ b(! 4bsrvese que la transformacin de la ecuacin @ a la base usual, correspondiente al volumen total de catalizador Xmultiplicacin por &< B c9/ b(Y aun produce una velocidad constante aparente que difiere de la de un quimiostato en el factor ! El anlisis transiente es considerablemente ms comple'o, puesto que un trmino de la forma

6.

debe incluirse para contabilizar la concentracin de sustrato en la fase abitica debido a los cambios en el volumen de la fase bitica! /dicionalmente, la ecuacin transiente de la fase abitica se acopla a la ecuacin de la fase bitica ya que la velocidad de cambio de c9 con respecto al tiempo, depende de la velocidad de crecimiento as como del flu'o & flux( de biomasa dentro del soporte! 8on el fin de presentar el anlisis de estado estable, en el cual c9 se supone constante, una velocidad constante efectiva puede definirse como si ue

7.

#as tres ecuaciones necesarias para modelar por completo el sistema descrito, se presentan en la tabla : Tabla >.

0ase abitica %y&' En y+ K yc+ dy+/dz K 9 En z K z+ y+ K y++ 0ase bitica %x), '

$rdida de clulas %q&b'

#a ecuacin de prdida de clulas define simplemente el flu'o & flux( de biomasa en estado estacionario desde la superficie del soporte como la concentracin de biomasa de la capa de clulas viables, c9 multiplicada por la velocidad de crecimiento inte rada sobre el espesor del soporte celular! #a solucin de este sistema de ecuaciones se consi ue de manera simple, por la inte racin de la ecuacin de la fase abitica una vez analticamente, considerando la condicin de frontera en la cual y& K y;& y& K yc& en la lnea central de la capa de biocatalizador( y se resuelve numricamente la ecuacin de primer orden que resulta, con el uso, por e'emplo, del al oritmo de 5un e ; Vutta de cuarto orden! #a concentracin del componente ) y la velocidad especfica de crecimiento pueden calcularse en cada paso de inte racin para la evaluacin conveniente de la inte ral que define la prdida de clulas! 0na lista completa de los valores de los parmetros investi ados se incluye en la tabla @ Tabla =. +cuacin de la fase bitica 2e Esener et al!) +cuacin de la fase abitica

D5 K AR9,A /&l $( Dm K 9,9P &l (/$ Q5 K 9,R@ Q2 K 9,PP V+ K 9,9R /l m K AC,R &$ (/l *95 K :@,9 /l

D m K @,?!<9BP cm:/s D c K R,9!<9BP cm:/s

K 9,:9 cW/ b K 9,R: y++ K <9,9 /l yc+ K <,@N@!<9B@ /l

2e 6aal]e y V'eld aard) b K :A9,9 /l

8alculados) D2 K 9,9@<< l/& $( K :9,< /l y9+ K <,@N@!<9B@ /l

Efectividad del biocatalizador

Efecti*idad del biocatalizador

0na e*presin inicial para la efectividad del biocatalizador con base en la demanda de sustrato se obtiene directamente de la ecuacin para la fase abitica y est dada por

2onde, : K y&/y&& - S K !/l3# y & K y&&/?&! El rupo adimensional O, se define como l3#&<O)/D t ?&(</:, es un mdulo de pseudo primer orden que no es una comparacin real de las velocidades de difusin y reaccin ya que el orden de reaccin aparente vara de cero $asta uno, dependiendo de la concentracin del sustrato! Esta efectividad del biocatalizador se basa en la demanda total de sustrato, el cual se relaciona con el crecimiento de la biomasa y el crecimiento asociado con la sntesis de producto! #a ecuacin de la fase abitica inte rada una vez con la condicin de frontera y& K yc& puede sustituirse en el numerador, y enera, con al unas manipulaciones, la e*presin final para la efectividad del biocatalizador

2onde, c K yc&/?&! 8uando c K ; &K y;&/?&(, la cintica dentro del biocatalizador est determinada por la difusin, esto es, el espesor de la capa de clulas viables es menor que la mitad de la zona porosa del soporte! 3a'o estas condiciones, 3# K 3# el cual, de acuerdo con los anlisis estndar, se apro*ima a </ , el recproco del mdulo eneralizado! 1or esta razn)

4bsrvese que el mdulo eneralizado es una funcin e*plcita de tres cantidades independientemente manipulables de inters) l3# &la mitad del espesor del biocatalizador(, c9/ b, y y&&! /dems, puede calcularse analticamente, lo que permite la determinacin simple de los efectos de l3#, c9/ b e y&& sobre el mdulo, el cual puede usarse para estimar 3# rficamente a partir de la representacin de 3# contra &ver fi ura <(! 0igura A.

1ara la mayora de los valores de & de inters, la representacin de los factores de efectividad como se muestra en la fi ura ? & & K <A:,N( se apro*ima a la de una reaccin de orden cero,

<,9 K <,9

 M <,9 K </
+in embar o, en la vecindad de K <, la rfica para estos biocatalizadores es una curva suave! 0n mdulo en esta re in indica que e*iste una disminucin adicional en l3# y/o un incremento en y&& que puede comprimir la porcin de primer orden de los perfiles de y x), razn por la cual la efectividad lobal y la capa de clulas viables del biocatalizador se incrementan!

-enmenos de transporte en bioprocesos

#os reactores bioqumicos, son ampliamente usados en la industria de alimentos, en fermentaciones microbiales, en sistemas de tratamiento de desec$os y en al unos dispositivos biomdicos! En todos estos reactores estn involucradas varias fases, y los nutrimentos deben transferirse de una fase a otra! 1ara lo rar el rado deseado de conversin de reactantes a productos, o para suministrar la cantidad suficiente de nutrimentos para mantener la viabilidad celular, tanto la transferencia de masa como la transferencia de calor deben ocurrir en el rado preciso! 0no de los nutrimentos clave para todas las clulas aerbicas es el o* eno, el cual es muy poco soluble en a ua! 1or ello, el suministro de o* eno desde la fase aseosa $asta la fase lquida, es crtico en la mayora de las fermentaciones aerbicas! El transporte de o* eno determina el nivel de la actividad aerbica en los la os y en el suelo! 4tro as importante en los sistemas biol icos es el di*ido de carbono! Este as re ula el p= en los cultivos de clulas de mamferos! +u transporte y la interconversin entre varias de sus formas acuosas &84@:B, =84@B,=:84@( en solucin, deben considerarse frecuentemente en los tanques para el tratamiento anaerbico de desec$os &di estores anaerbicos( y en los la os! El estudio de la transferencia de calor es importante para el control de la temperatura en casi todos los reactores biol icos comerciales! /s mismo se contempla un breve estudio del comportamiento reol ico de las mezclas fermentativas y su a itacin! 5eolo a de las mezclas de fermentacin / itacin y dispersin "ransferencia de masa "ransferencia de calor

%eolo!a de las mezclas fermentati*as

#as mezclas de fermentacin estn constituidas por a ua, electrolitos, slidos en suspensin &partculas, flculos y materiales filamentosos( y materiales disueltos! Estas sustancias determinan el comportamiento reol ico y la tensin superficial de la mezcla, e influyen sobre la transferencia de momentum, calor y masa en los biorreactores! Hnconvenientemente la mayor parte de la informacin disponible sobre consumo de potencia por a itacin, transferencia de calor y transferencia de masa, se fundamenta en datos obtenidos con a ua! El a ua y las soluciones de electrolitos manifiestan un comportamiento reol ico sencillo descrito por la ley de GeSton, 3ird et al!, &<NP9(! #a mayora de los medios de fermentacin con bacterias y levaduras tambin manifiestan un comportamiento GeStoniano! #os medios donde participan clulas miceliales o donde se forman compuestos polimricos, se comportan eneralmente como fluidos no GeStonianos! #a determinacin del comportamiento reol ico de un fluido, requiere la construccin de un reo rama a partir del a'uste de los datos e*perimentales que se obtienen con un viscosmetro, dentro de un amplio intervalo de valores de la viscosidad! 6etz et al! &<NRN(, describen al unos mtodos de obtencin de las propiedades reol icas de los cultivos miceliales! 8$arles &<NRC(, clasifica las mezclas de fermentacin en tres cate oras) cultivos miceliales, cultivos con polisacridos e*tracelulares, y cultivos de bacterias y levaduras! #a fi ura < es una representacin cualitativa de los reo ramas tpicos de al unas mezclas de fermentacin! #os resultados e*perimentales reportados por diferentes investi adores, corresponden eneralmente a datos que se obtienen en diversos tipos de viscosmetros, factor que influye sobre los resultados y dificulta la confrontacin de los valores, aun tratndose de la misma mezcla! 0igura A.

5oels et al! &<NRA(, presentan una lista de los modelos matemticos empricos empleados por diferentes autores para describir la relacin entre la viscosidad aparente, /$, y el radiente de velocidad! #a ma nitud de los parmetros de los diferentes modelos depende de la concentracin, de la morfolo a celular, de las condiciones de crecimiento y de si es filamentoso o del tipo pelotilla! #os sustratos de ba'o peso molecular, como el almidn de maz disuelto en a ua, o una elevada concentracin de slidos no disueltos, afectan la reolo a del caldo aun a ba'as concentraciones celulares! #a viscosidad es probablemente el factor que afecta en mayor rado el coeficiente de transferencia de calor! #a disminucin de ste coeficiente es dramtica a partir de viscosidades del orden de 9,? D /&m s(, cuando la velocidad de aireacin es alta! Wuemin et al! &<NN<(, estudiaron el efecto de la viscosidad en mezclas de fermentacin de polisacridos & oma *antana(, sobre el coeficiente de transferencia de calor! En el caso de mezclas con una concentracin de :R ramos de oma por litro, a itadas con turbinas 5us$ton, el valor del coeficiente puede lle ar a ser tan slo el PT del valor en a ua!

>luidos GeStonianos >luidos noBGeStonianos +uspensiones +oluciones de macromolculas

-luidos :e2tonianos
#a viscosidad de una mezcla .eGtoniana, no se afecta por la velocidad de a itacin)

2onde, x! es el componente del esfuerzo cortante en el plano x! &G/m:(- dv!/dx, radiente de velocidad de la mezcla X&m/s(/mY- es la viscosidad de la mezcla XD /&m s(Y! #a ecuacin anterior puede eneralizarse para incluir fluidos con material suspendido o con macromolculas disueltas!

#a viscosidad aparente, /$ , depende del radiente de velocidad del fluido y de la temperatura y presin de la mezcla y, por consi uiente, no es una propiedad del fluido!

-luidos no ( :e2tonianos

E*iste una variedad de comportamientos no ; GeStonianos observados en soluciones lquidas de polmeros y/o en suspensiones de slidos o lquidos dispersos) 1lsticos 3in $am >luidos pseudoplsticos >luidos dilatantes 8uerpo de 8asson

Pl"sticos Bin!ham
El comportamiento de un plstico 3in $am es similar al de un fluido neStoniano, pero se requiere la aplicacin de un esfuerzo cortante inicial, ;, denominado tambin punto de cedencia para iniciar el flu'o &5oels et al!, <NRA(

7lida para *z M 9 - 9 9 2eindoerfer y Laden &<N??(, informan de un comportamiento de plstico 3in $am para las mezclas con cultivos de $enicillium chrysogenum- y +ato &<NP<(, para mezclas de Vanamicina!

-luidos pseudopl"sticos
#a viscosidad aparente de un fluido pseudoplstico es inversamente proporcional al radiente de velocidad &su modelo es uno de los ms utilizados(! /l unos fluidos manifiestan un comportamiento acorde con la ley de potencia o de 4stSald ; de Eaele &5oels et al!, <NRA(

2onde, ? es el coeficiente de consistencia XD /&m s(Y, que se considera como una viscosidad aparente cuando la velocidad de esfuerzo cortante es <- n es el ndice de flu'o &o ndice de comportamiento(, constante adimensional que es menor que < para fluidos pseudoplsticos &cuando n K < se obtiene el modelo para un fluido GeStoniano(! El comportamiento pseudoplstico $a sido observado por "uffile y 1in$o &<NR9(, en mezclas de &. aureofaciens- por 2eindoerfer y Eest &<NP9(, en mezclas de #. hellebori y de $enicillium chrysogenum y por "a uc$i et al! &<NPC(, en mezclas de +ndomyces!

-luidos dilatantes
#a viscosidad aparente de un fluido dilatante aumenta con la velocidad de corte! El flu'o de este tipo de fluidos tambin puede describirse mediante la ecuacin para un fluido pseudoplstico, pero en este caso, n M <! 4tros fluidos manifiestan un comportamiento acorde con la ley de potencia afectada por un esfuerzo cortante inicial, o comportamiento de =ersc$el ; 3ulDley, &5oels et al!, <NRA(

#uerpo de #asson
#a viscosidad aparente de un fluido que se comporta como un cuerpo de 8asson es inversamente proporcional al radiente de velocidad y depende, adems, de un esfuerzo cortante inicial

Suspensiones
7arias teoras predicen que una suspensin con esferas disueltas debera comportarse como un fluido GeStoniano! #a viscosidad efectiva, ef, de estas suspensiones est dada por

2onde, es la fraccin volumtrica de slidos y b es del orden de P a C! 1ara una densidad celular de <9 N clulas por mililitro y un dimetro celular de @!<9BA cm, el valor de es de ?!<9B@) el efecto de las clulas es aparentemente imperceptible! Elevadas fracciones volumtricas aparecen en operaciones de filtracin y en fermentaciones miceliales!

Soluciones de macromol$culas
8iertos microor anismos secretan polisacridos e*tracelulares y derivados biopolimricos relacionados! #os e'emplos incluyen oma *antana y cido polial nico, entre otros! El primero es ampliamente utilizado para modificar la viscosidad en alimentos procesados, en la estabilizacin de soluciones, y como el candidato ms importante para las operaciones de recuperacin de campos petrolferos! Estos biopolmeros proveen caractersticas de fluido pseudoplstico a la mezcla de fermentacin!

!itacin y dispersin
#a a itacin es necesaria para la distribucin apropiada de los nutrimentos y para remover los productos metablicos microbiales! "ambin es importante para el transporte de ener a y de o* eno!

Leneralmente la a itacin se realiza mecnicamente, que requiere ms ener a, pero ofrece productividades ms randes- tambin se puede lo rar mediante la dispersin de aire &a itacin pneumtica(, que se aplica a unidades con un volumen de ms de :99 m @! En la prctica, la potencia suministrada a un reactor por a itacin, vara entre < y ? E/l, donde apro*imadamente entre el C? y el N?T de ese valor corresponde a la a itacin mecnica y el resto a la ener a cintica y la e*pansin isotrmica del as dispersado! En trminos cualitativos apro*imados, se considera que un suministro de potencia al fluido menor de 9,: E/l, proporciona una a itacin moderada- entre 9,P y 9,C E/l, la a itacin es vi orosa- y para < E/l o ms, la a itacin es intensa! Estos valores estn relacionados con la potencia real entre ada al fluido y no tienen en cuenta las prdidas en sellos, co'inetes y otras ineficiencias elctricas y mecnicas! #a ener a mecnica suministrada puede alcanzar $asta un :?T de la car a calorfica total que debe ser removida de un biorreactor para mantener la temperatura ptima! #as prdidas por friccin en un fermentador de laboratorio pueden alcanzar $asta el R?T del total consumido por el motor! / nivel piloto estas prdidas pueden lle ar a ser del @9T con respecto al consumo total! / escala industrial, la friccin representa slo el ?T de la potencia consumida por el motor! Evaluacin de la potencia entre ada al fluido / itacin de fluidos GeStonianos no aseados / itacin de fluidos GeStonianos aseados / itacin de fluidos no GeStonianos no aseados / itacin de fluidos no GeStonianos aseados

E*aluacin de la potencia entre!ada al fluido

#a velocidad de un a itador se mide directamente con un tacmetro conectado al e'e! #a se.al elctrica se emplea para controlar la velocidad de a itacin y ase urar una adecuada transferencia de masa! #a medicin de la potencia entre ada a un impulsor, depende de la escala de operacin! la lectura de un vatmetro acoplado al motor del a itador proporciona datos e*actos a escala industrial y de planta piloto

2onde, $ es la potencia &E(- B es la corriente &amperios(- @/3 es el potencial elctrico aplicado &7(- e5 es la eficiencia del motor- cos es el factor de potencia! #a potencia entre ada a un fluido a escala de planta piloto, se determina directamente mediante dinammetros de torsin y detectores de esfuerzo, &/iba et al!, <NR@- GienoS y 6iles, <NPN(

2onde, es el momento de torsin &G m(- es la velocidad an ular del a itador &radin/s(!

Dispersin de !ases
#a potencia entre ada a un fluido por la dispersin de un as se calcula por medio de la ecuacin

2onde el primer trmino de esta ecuacin representa el cambio de la ener a cintica del as) vt es la velocidad del as en la tubera, &m/s(- vr es la velocidad del as en el reactor, &m/s(- gc es el factor de conversin de la ley de GeSton X< &D m(/&s : G(Y! El se undo trmino de la ecuacin anterior representa la e*pansin isotrmica del as, desde el punto de salida del as por la tobera $acia al lquido, donde la presin es pi, $asta el punto de salida de ases del reactor donde la presin es po- ) es la constante de los ases- 5g es el peso molecular del as- T es la temperatura absoluta del as &V(- 0m es la velocidad msica del flu'o de as &D /s(

2onde, 0 es el caudal del as, &m@/s(- g es la densidad del as, &D /m@(- $/3& es la presin absoluta &1a(, recurdese que la presin absoluta es la suma de las presiones baromtrica y manomtrica!

!itacin
#os tipos de fermentadores utilizados con mayor frecuencia en bioprocesos son los fermentadores de laboratorio &fi ura <(, el tanque a itado, la columna de burbu'eo y el fermentador de recirculacin! 0igura A. >ermentador de laboratorio

#os fermentadores de laboratorio son recipientes con un volumen de operacin entre 9,? y ? litros, son fabricados eneralmente en vidrio y estn provistos de un sistema de a itacin mecnica! #os fermentadores denominados ,de banco, son similares a los de laboratorio, slo que poseen vol%menes de traba'o entre ? y <? litros!

+yDita &<NC@(, presenta las si uientes caractersticas esperadas en un fermentador peque.o) )elaciones geomtricas %factores de forma' similares a las de un fermentador industrial. #onstruccin hermtica para prevenir la contaminacin del medio. &istemas confiables de registro y control de temperatura, sistemas de control de p2 y ruptura de espuma con el propsito de garanti!ar condiciones estandari!adas en todos los ensayos. @olumen de operacin lo suficientemente grande como para permitir la toma de muestras sin alterar apreciablemente el volumen del cultivo o perturbar las condiciones de aireacin y de me!cla.

#a columna de burbu'eo es un tanque cilndrico dise.ado eneralmente con una relacin entre altura y dimetro mayor que @ y equipado con un distribuidor de aire! Es de costo reducido y de fcil construccin y mantenimiento! 5equiere una distribucin $omo nea de aire, pero tiene la desventa'a de enerar demasiada espuma! Entre las industrias que emplean este reactor estn las de cido ctrico, cido lctico, enzimas, esteroides y levadura para panadera! #os fermentadores de recirculacin ms utilizados, son el reactor con circulacin pneumtica de lquido & airlift(, y el fermentador de c$orro! El fermentador con circulacin pneumtica de lquido es una columna de burbu'eo equipada con un tubo concntrico de arrastre &draft tube(, con el ob'eto de distribuir el aire! Este tipo de fermentador se utiliza principalmente en los sitemas de tratamiento de a ua y para la produccin de protena unicelular! El fermentador de mezclado $idrulico, similar al de circulacin lquida pneumtica, est equipado con una bomba para recircular el lquido! / escala industrial el fermentador ms usado es el tanque a itado! En la fi ura : se representa esquemticamente un reactor de mezcla completa a itado por tres impulsores de turbina acoplados al e'e de rotacin! Gormalmente se instalan entre : y ? impulsores! 0igura >. >ermentador de tanque a itado

El tanque a itado es muy fle*ible ya que puede mane'ar fluidos con viscosidades muy diferentes y satisfacer un amplio intervalo de requerimientos de transferencia de calor! 8uando el sistema de camisa no es suficiente para proveer el rea requerida de transferencia de calor, siempre e*iste la posibilidad de instalar serpentines internos o e*ternos, o utilizar un intercambiador e*terno! #os impulsores son preferencialmente de turbina tipo 5us$ton! Estas turbinas son fciles de construir y suministran una elevada potencia y se caracterizan por una elevada eficiencia para dispersar el as! #os impulsores del tipo $lice marina, son utilizados cuando se necesita ba'a velocidad de corte y ba'as velocidades de transferencia de o* eno! #a relacin entre la profundidad del lquido en el reactor y el dimetro del mismo, vara entre :)< y @)<! En la prctica europea se prefiere una relacin @)<, y en los Estados 0nidos, :)<! /l unos fermentadores industriales estn construidos con la relacin <)<!

!itacin de fluidos :e2tonianos no !aseados

+e %n 6c8abe, +mit$ y =arriot &<NN<(, la potencia requerida para a itar un fluido GeStoniano se calcula a partir de)

2onde, $o es el n%mero de potencia- )e es el n%mero de 5eynolds X&n-/: (/ Y- 0r es el n%mero de >roude X&n:-/(/gY- &A,!!!,&n son factores de forma- $ es la potencia requerida para rotar un impulsor a una determinada velocidad &E(- gc factor de conversin de la ley de GeSton X< &D m(/&s: G(Y- es la densidad del fluido &D /m@(- n es la velocidad del impulsor, &rev/s(- es la viscosidad del fluido XD /&m s(Y- -/ es el dimetro del impulsor &m(- g es la aceleracin de la ravedad &N,C m/s:(

!itacin de fluidos :e2tonianos !aseados

#a potencia consumida por un sistema aseado es considerablemente menor que un sistema no aseado! / caudales ba'os, el as pasa por el impulsor sin dispersarse y el lquido fluye prcticamente sin ser perturbado por el as! / medida que el caudal aumenta, una mayor cantidad de as es capturada por los vrtices formados detrs de las paletas del impulsor y lue o es dispersada! En este momento, el consumo de potencia del sistema aseado comienza a disminuir con respecto al consumo del sistema sin asear! El sistema de a itacin se dise.a eneralmente para el procedimiento de esterilizacin donde el medio de fermentacin usualmente est en una condicin no aseada! El n%mero de aireacin, /+, la relacin entre la velocidad superficial del as y la velocidad en la punta del impulsor, define la intensidad de la aireacin

2onde, 04 es el caudal de as &m@/s(- -/ es el dimetro del impulsor &m(- n es la velocidad del impulsor &rev/s(- n-/ es la velocidad en la punta del impulsor &m/s(! En los cultivos de microor anismos miceliales se encuentra, por lo eneral, que las clulas sufren da.o cuando la velocidad en la punta del impulsor es mayor a ? m/s, &#ynd, <NCN(! #a relacin entre los consumos de potencia en un sistema aseado y en el mismo sistema sin asear, $4/$, vara entre <,9 y 9,@! Ean et al! &<NRN(, presentan la relacin $4/$, en funcin del n%mero de aireacin, /+, para el impulsor de turbina de $o'as planas

6ic$el y 6iller &<NP:(, desarrollaron la si uiente ecuacin

2onde, ? es una constante que depende de la eometra del sistema y del sistema de unidades empleado, 0/ es el caudal de as &m@/s(! #os intervalos de las variables fsicas en los ensayos se consi nan en la si uiente tabla

@ariable 7iscosidad XD /&m s(Y 2ensidad de la mezcla &D /m@( "ensin superficial &G/m( 1otencia consumida por el sistema aseado &E( 7olumen del lquido en el reactor &litros(

Bntervalo de valores N!<9BA ; 9,< C99 ; <P?9 9,9:R ; 9,9R: @,R@ ; RA,P @,? ; <9,?

!itacin de fluidos no :e2tonianos no !aseados

El consumo de potencia en la a itacin de un fluido no GeStoniano no aseado, depende de la velocidad de corte &o velocidad del impulsor(! 6etzer y 4tto &<N?R(, definen un n%mero modificado de 5eynolds para fluidos pseudoplsticos

1.
2onde, ?c es el ndice de consistencia de flu'o, i ual al esfuerzo cortante t correspondiente a una velocidad de corte de < s B<- m es el ndice de comportamiento de flu'o &m K <) fluido GeStoniano- m F <) fluido pseudoplstico- m M <) fluido dilatante(! "a uc$i y 6iyamoto &<NPP(, relacionaron los n%meros de potencia $o, y de 5eynolds modificado, )e$&, para mezclas no GeStonianas y no aireados, en la fermentacin de lucoamilasa con +ndomyces

2.
2onde, -T es el dimetro del tanque- -/ es el dimetro del impulsor- 7 es la anc$ura del impulsor!

En la si uiente tabla se presentan los valores de <, a, b y c, correspondientes a la ecuacin :! #as mezclas de fermentacin con or anismos miceliales &como en el caso de la produccin de antibiticos con $enicillium o &treptomyces( o con materiales polimricos &fermentacin de polisacridos( manifiestan un comportamiento pseudoplstico! )e$& D a b c T A; %Sona 6aminar' @: B9,N B<,R 9,A A; H N; %Sona de transicin' U N; %Sona de turbulencia' << B9,A B<,R 9,? N B9,9? B<,: 9,N

!itacin de fluidos no :e2tonianos !aseados

"a uc$i y 6iyamoto &<NPP(, investi aron el efecto de la aireacin sobre el consumo de potencia en la a itacin de un caldo no GeStoniano y encontraron que una forma modificada de la ecuacin de 6ic$el y 6iller, fi'a adecuadamente los datos e*perimentales de la fermentacin de lucoamilasa en r imen turbulento &)e$& M ?9(

2onde ?A es una constante que depende de la eometra del sistema y del sistema de unidades utilizado! #os mismos autores recomiendan la si uiente ecuacin para las zonas laminar y de transicin

Transferencia de masa
Evidentemente, la frontera que demarca la actividad aerbica y anaerbica depende de la concentracin de o* eno local en el seno del fluido, del coeficiente de difusin de o* eno y de las velocidades de respiracin locales en la re in aerbica! En los procesos

aerbicos la aireacin adecuada es lo ms importante! #a demanda de o* eno, que depende del tipo de sustrato utilizado y de las clulas involucradas en el proceso, se puede calcular con base en la si uiente ecuacin

1.
2onde, # es la demanda de o* eno de la masa de clulas formada- / es la cantidad de o* eno necesaria para la o*idacin del sustrato a di*ido de carbono y a ua- 3 es la cantidad de o* eno necesaria para la o*idacin de la masa celular a di*ido de carbono y a ua, : es el coeficiente de rendimiento de biomasa en sustrato &:9/&( o en o* eno &:9/,(! #a solubilidad del o* eno en soluciones acuosas a < atmsfera de presin y temperatura cercana a la ambiental, es del orden de <9 ppm! 0na poblacin de levaduras con respiracin activa puede consumir o* eno a una velocidad de 9,@ de o* eno por $ora y por ramo de clulas secas! El valor m*imo de consumo de o* eno para una poblacin con densidad de <9 N clulas por mililitro, se estima con la suposicin que el volumen celular es de <9 B<9 mililitros, del cual el C9T es a ua! #a demanda absoluta de o* eno es

K P!<9B@ /&ml $( K P

4:/&l $(

2e esta forma, la poblacin con respiracin activa consume o* eno a una velocidad que es apro*imadamente R?9 veces mayor al valor de saturacin de 4: por $ora! 8omo la cantidad de as disuelto es relativamente peque.a, se debe a.adir as continuamente al lquido con el fin de mantener viable la poblacin celular! Esto no es una tarea fcil, puesto que la ba'a solubilidad del o* eno ocasiona que la diferencia de concentracin que conduce la transferencia de o* eno de una zona a otra, siempre sea muy peque.a! #a demanda especfica de o* eno por ramo de biomasa presente, es producto de la demanda absoluta y de la velocidad de crecimiento! 1or e'emplo, la produccin de cido lucnico con $seudomonas ovalis requiere P:9 ml de o* eno por litro y por $ora- as mismo, la produccin de cido actico con /cetobacter suboxydans necesita ?99 ml de o* eno por litro y por $ora! #a velocidad de consumo de o* eno est controlada por las velocidades de transferencia a travs de las pelculas que se forman alrededor de las burbu'as de as y de las clulas y por la resistencia a la transferencia de masa a travs de la masa de fluido &ver fi ura <(! #a pelcula de lquido alrededor de la burbu'a de as representa la mayor resistencia a la transferencia para ases muy poco solubles!

0igura A. "ransporte de o* eno desde una burbu'a de as $asta una clula

1ara especies muy poco solubles en a ua, tales como o* eno o $idrocarburos, las dos concentraciones interfaciales de equilibrio cgi y cli del lado del as y del lquido respectivamente, pueden relacionarse por medio de una ley lineal de particin como la ley de =enry

2.
que estipula que la velocidad de intercambio de soluto a travs de la interfase es muc$o mayor que la velocidad de transferencia neta, como en este caso) a < atmsfera de presin y :?U8, la velocidad de colisin de 4 : en la superficie es del orden de <9:A molculas por centmetro cuadrado y por se undo, un valor muy por encima del flu'o neto para los requerimientos tpicos de consumo microbial mencionados anteriormente!

En estado estable, la velocidad de transferencia de o* eno a la interfase as ; lquido es i ual a la velocidad de transferencia de o* eno a travs de la pelcula del lado del lquido &fi ura <(! +i se toman cg y cl como las concentraciones de o* eno en el seno del as y en el seno del lquido respectivamente, se puede escribir >lu'o &flu*( de o* eno K Xmol 4:/&cm: s(Y #ado del as #ado del lquido

3. 4.

8omo las concentraciones interfaciales eneralmente no pueden medirse, las ecuaciones de transferencia se e*presan en funcin del coeficiente lobal de transferencia de masa ?l y de la concentracin lobal o fuerza conductora cEl ; cl, donde cEl es la concentracin en la fase lquida la cual est en equilibrio con la fase aseosa

5.
8on base en estas cantidades lobales, el flu'o &flux( de soluto est dado por

6.
2e las ecuaciones : a P, se obtiene la conocida relacin entre el coeficiente lobal de transferencia de masa ?l y los parmetros fsicos del problema de transporte de la doble pelcula, <g, <l y 5

7.

1ara las especies poco solubles, 5 es muc$o mayor que la unidad! /dems, <g es considerablemente mayor que <l! En estas circunstancias, se observa con base en la ecuacin R que ?l es apro*imadamente i ual a <l! 1or lo anterior, toda la resistencia a la transferencia de masa reside, esencialmente, del lado del lquido! #a velocidad de transferencia de o* eno por unidad de volumen de lquido &7"4(, est dada por) 7"4 K velocidad de absorcin de o* eno K X&flu*( &rea interfacial(Y/volumen de lquido en el reactor

8.
2onde, <la es el coeficiente volumtrico de transferencia de masa- a K //@ es el rea interfacial as ; lquido por unidad de volumen, y se utiliza la apro*imacin ?l <l descrita anteriormente! Es importante reconocer que 7"4 se define ,en el punto,! Jsta es una velocidad volumtrica local de consumo de o* eno- la velocidad volumtrica promedio de utilizacin de o* eno &moles por tiempo por unidad de volumen( 7 es , en la totalidad del volumen de lquido

9.

En eneral es i ual a 7"4, %nicamente si las condiciones $idrodinmicas, la relacin entre el rea interfacial y el volumen, y las concentraciones de o* eno son uniformes a lo lar o del reactor! "ericamente, la velocidad de demanda de ox"geno es m*ima cuando la concentracin de o* eno disuelto en el lquido se apro*ima a cero! +in embar o, con el fin de mantener el sistema activo, tiene que mantenerse una concentracin crtica mnima de o* eno disuelto, cl,crit, por encima de la cual no $ay un aumento apreciable de la demanda de o* eno! #a tabla < presenta al unos e'emplos de

los niveles crticos de o* eno para al unos microor anismos! +i cl K cl,crit el suministro de o* eno ser ptimo y la a itacin del sistema la ms apropiada! Tabla A. ,rganismo /!otobacter vinelandii +. coli Temperatura %V#' @9 @R,C <? &erratia marcescens $seudomonas denitrificans #evadura @< @9 @A,C :9 $enicillium chrysogenum :A @9 /spergillus ory!ae @9 cl, crit %mmol ,>/l' 9,9<C ; 9,9AN 9,99C: 9,99@< 9,9<? 9,99N 9,99AP 9,99@R 9,9:: 9,99N 9,9:9

Determinacin e;perimental del coeficiente *olum$trico de transferencia de o;!eno

Hdealmente, la velocidad de transferencia de o* eno debera medirse en reactores biol icos que incluyan la mezcla nutriente y la poblacin celular de inters! 8omo esto involucra toda la instrumentacin necesaria para la preparacin del inculo y del medio, prevencin de la contaminacin, y control ambiental del cultivo celular- resulta una manera poco conveniente y problemtica de conducir los e*perimentos de transferencia de masa! 8onsecuentemente, una estrate ia com%n para el estudio de las velocidades de

transferencia de masa, es la utilizacin de mezclas sintticas que se apro*imen a las condiciones de la biorreaccin, sin las complicaciones de un cultivo vivo! En tales apro*imaciones, el ob'etivo principal es entender la dependencia de <la de la $idrodinmica! 8on el fin que tales mezclas representen efectivamente el cultivo celular de inters, las si uientes propiedades del medio sinttico y de la mezcla real deberan ser idnticas) @iscosidad y dems caracter"sticas reolgicas )esistencia interfacial gas H l"quido Tendencia de las burbu1as a la coalescencia &olubilidad y difusividad del ox"geno

En eneral, la utilidad de las mezclas sintticas como apro*imacin a la situacin real, depende del rado en que estas propiedades se cumplan! #os e*perimentos con absorcin de o* eno en a ua pura, por e'emplo, satisfacen al unos de esos criterios! 6todo de o*idacin de sulfito de sodio 6todo del balance de o* eno 6todo esttico 6todo dinmico

8oeficiente volumtrico de transferencia de o* eno 2eterminacin de Dla

M$todo de o;idacin de sulfito de sodio

Este mtodo, descrito por 8ooper et al! &<NAA(, se fundamenta en la o*idacin de una solucin 9,?6 de sulfito $asta sulfato de sodio en presencia de un catalizador &8uOO 8oOO()

#a velocidad de esta reaccin es tal, que todo el o* eno que entra en solucin es inmediatamente consumido en la o*idacin del sulfito, de manera que la velocidad de o*idacin del sulfito es equivalente a la velocidad de transferencia de o* eno! En la prctica, la concentracin de o* eno disuelto, cl , es i ual a cero, y la ecuacin de velocidad de transferencia de o* eno se convierte en)

8on el propsito de medir la velocidad de transferencia de o* eno, se alimenta al reactor una solucin <G de sulfito de sodio y una solucin 9,99@6 de iones 8uOO! +e inicia la alimentacin de aire y se pulsa el cronmetro cuando las primeras burbu'as de aire emer en del dispersor! 2espus de un perodo de o*idacin entre A y :9 minutos, se suspende la a itacin y la alimentacin de aire, se toma una muestra de la solucin y se consi na el tiempo se.alado por el cronmetro! 8ada muestra se mezcla con un e*ceso de reactivo estndar de yoduro recin preparado y se realiza una titulacin con tiosulfato &Ga :+:4@(, con un indicador de almidn, $asta punto final! El mtodo de o*idacin de sulfito de sodio es sensible a la contaminacin por a entes surfactantes, tales como aminocidos, protenas, cidos rasos, steres y lpidos! 1or otra parte, la reolo a de una solucin de sulfito de sodio es completamente diferente a la de una mezcla de fermentacin y el costo del sulfito adems del tiempo necesario para cada ensayo &varias $oras, por lo eneral, de acuerdo con las velocidades de aireacin y a itacin(, dificultan su aplicacin a escala industrial! +in embar o, el mtodo es %til para cote'ar resultados obtenidos con diferentes fermentadores y estudiar los efectos del cambio de escala y de las condiciones de operacin sobre la transferencia de masa!

M$todo del balance de o;!eno

Este mtodo se fundamenta en la determinacin directa de la cantidad de o* eno que se transfiere a la solucin en un intervalo de tiempo determinado! El procedimiento incluye la medicin de los si uientes parmetros) 7olumen de la mezcla de fermentacin, @6 8audal de aire afluente, W/ 8audal de ases efluentes, W+ 1resin absoluta de los ases efluentes, $+ "emperatura absoluta del afluente, T/ "emperatura absoluta de los ases efluentes, T+ >raccin molar de o* eno en el aire afluente, :/ >raccin molar de o* eno en los ases efluentes, :+

#a demanda de o* eno se determina a partir de las si uientes ecuaciones)

2onde) n, son las moles de o* eno ), es la constante de los ases ideales &en el sistema de unidades ele ido para las dems variables( $, es la presin absoluta del sistema @, es el volumen ocupado por el o* eno T, es la temperatura absoluta

2onde) t, tiempo W/ K @ / / t W+ K @+ / t

2onde) K velocidad de transferencia de o* eno cl , es la concentracin de o* eno en la mezcla de fermentacin Estas determinaciones requieren la utilizacin de medidores precisos de flu'o, temperatura y presin y un analizador de o* eno aseoso! El analizador parama ntico de o* eno es lo suficientemente e*acto como para detectar cambios en la concentracin de o* eno entre el < y el :T! 0na vez establecida la demanda de o* eno, , se determina <la, a partir de la ecuacin de velocidad de transferencia de masa, donde cl es la concentracin de o* eno en la mezcla de fermentacin y cEl la concentracin de o* eno en equilibrio con la corriente de as- la concentracin de o* eno en la mezcla se mide por lo eneral con un sensor en lnea! #a variacin de &cEl ; cl ( es peque.a si el volumen del fermentador es menor que ?9 litros- en el caso de fermentadores de mayor volumen se recomienda la utilizacin de la media lo artmica de la diferencia de concentraciones cEl y cl entre la entrada y la salida del reactor)

M$todo est"tico
#os mtodos de evaluacin del coeficiente volumtrico de transferencia de o* eno mediante tcnicas de des asificacin, requieren una reduccin previa de la concentracin de o* eno disuelto $asta un valor li eramente superior al crtico, cl, crit , con el propsito de medir el incremento de la concentracin de o* eno disuelto en la mezcla durante un perodo adecuado de aireacin y a itacin! En el mtodo esttico descrito por Eise &<N?<(, se reduce la concentracin de o* eno por medio de la asificacin del lquido con nitr eno, de forma que la solucin es despo'ada de o* eno- lue o, el lquido deso*i enado es aireado y a itado con el ob'eto de medir el incremento de la concentracin de o* eno disuelto durante un tiempo t - por otra parte, en el reactor de e*perimentacin no $ay presencia de clulas viables! #a velocidad de transferencia de o* eno es i ual a la pendiente de la tan ente a la curva de valores de concentracin de o* eno disuelto en funcin del tiempo de aireacin, tal y como se muestra en la fi ura <, de acuerdo con la ecuacin de transferencia de o* eno) 0igura A. 5epresentacin esquemtica de la concentracin de o* eno disuelto en una solucin durante el perodo de aireacin! #a velocidad de transferencia de o* eno, d cl /dt, en el tiempo t, es i ual a la pendiente de la tan ente a la curva en ese momento!

#a inte racin de la ecuacin anterior conduce a la si uiente e*presin)

1or consi uiente, la representacin rfica de ln& cEl ; cl ( contra el tiempo, corresponde a una lnea recta cuya pendiente es ; <la , como se muestra en la fi ura :) 0igura >.

#a determinacin de <la por el mtodo esttico, tambin se realiza sobre la mezcla de fermentacin pero a re ndole clulas muertas o micelios para simular la concentracin del medio real! El detector del cambio en la concentracin de o* eno disuelto es normalmente del tipo recubierto por membrana, en vista de la comple'idad de las mezclas de fermentacin- por otra parte, el punto donde se realiza la determinacin debe ser representativo de todo el volumen de la mezcla, esta es la principal desventa'a del mtodo, puesto que el punto esco ido podra no ser el ms adecuado! El tiempo de respuesta del detector, definido como el tiempo necesario para re istrar el P@T de un cambio repentino, debe ser muc$o menor que el tiempo de respuesta a la transferencia del sistema &</ <la (!

M$todo din"mico

En este mtodo, descrito por 3andyopad$yay, =ump$rey y "a uc$i &<NPR(, se utiliza la actividad respiratoria de un cultivo en crecimiento para disminuir el contenido de o* eno en la mezcla antes de reiniciar la aireacin! #a fi ura < ilustra esquemticamente este procedimiento! 0igura A. Esquema del procedimiento de la determinacin de <la por el mtodo de des asificacin dinmica

#a concentracin de o* eno en el fermentador antes del punto /, es estable! El suministro de aire se suspende repentinamente en el punto / y, por lo tanto, el valor de <la es i ual a cero, y la pendiente de la lnea /3 es una medida de la velocidad de respiracin del cultivo)

2onde)

&4:( es la velocidad especfica de respiracin y

9, es la concentracin de biomasa

#a aireacin se reinicia en el punto 3 &fi ura <( y la concentracin de o* eno disuelto aumenta $asta alcanzar el valor inicial! El incremento en la concentracin de o* eno disuelto observado en el perodo 38, es la diferencia entre la transferencia de o* eno $acia la solucin y la demanda de o* eno por la respiracin del cultivo)

Esta ecuacin tambin se puede e*presar como)

#a representacin rfica de la ecuacin anterior, fi ura :, con cl en las ordenadas y Xdcl /dt O &4:(9Y en las abcisas, es una lnea recta cuya pendiente es i ual a &B</<la (! #a recta se construye con los valores de las tan entes a la curva 38, fi ura <, correspondiente a diferentes valores de cl ! 0igura >. 5epresentacin esquemtica de la determinacin del coeficiente volumtrico de transferencia de o* eno, <la, por el mtodo dinmico

#orrelaciones para el coeficiente de transferencia de masa

El coeficiente de transferencia de masa se afecta por la confi uracin del fermentador y por las propiedades fsicas del sistema as ; lquido! Leneralmente las ecuaciones de transferencia de masa se e*presan mediante rupos adimensionales que se obtienen por el mtodo 1i de 3ucDin $am a partir de las variables que influyen sobre el proceso! #os coeficientes y e*ponentes de las correlaciones obtenidas se deducen mediante el a'uste da datos e*perimentales! #a evidencia e*perimental indica que estas correlaciones son %tiles para determinar el valor del coeficiente de transferencia de masa, ?l , y del coeficiente volumtrico de transferencia de masa, <la , inclusive si los aspectos fundamentales de la mecnica de fluidos no aparecen e*plcitamente! #a relacin entre la potencia entre ada al fluido y el volumen de la mezcla, $/@, probablemente incluye todos los efectos del n%mero de 5eynolds y de la viscosidad, si se tiene en cuenta que el consumo de potencia depende de cada fluido! #a evaluacin del coeficiente de transferencia de masa con el uso de correlaciones empricas depende de las condiciones de operacin y de la confi uracin del reactor empleado! 2es raciadamente muc$as de las ecuaciones empricas no informan sobre la constante de proporcionalidad o sobre las condiciones de operacin utilizadas en los diferentes ensayos realizados para su deduccin, situacin que limita su uso! El coeficiente volumtrico de transferencia de masa, <la, es la combinacin de dos parmetros e*perimentales, el coeficiente de transferencia de masa, <l , y el rea de la superficie de separacin as ; lquido &o rea interfacial(

Q, a, se calcula de la si uiente forma

2onde, es la fraccin volumtrica de as en la fase dispersa &retencin de as B$oldupB(- -=> es el dimetro medio de &auter

2onde, h/ es la altura ocupada por el lquido aireado- h; es la altura del lquido sin airear- n es el n%mero de burbu'as- di es el dimetro de las burbu'as! #a fraccin volumtrica del as en la fase dispersa, conocida tambin como retencin de as, depende principalmente de la velocidad superficial del as y del consumo de potencia! En al unos casos el as provee por s mismo la a itacin del lquido, pero con mayor frecuencia se utiliza un impulsor, preferencialmente tipo turbina, para dispersar el as y $acer circular la dispersin lquido ; as a travs del reactor! #a retencin de as es uno de los parmetros ms sensibles a las propiedades fsicas del lquido! 8alderbanD y 6oo ; Qoun , &<NP<(, presentan las si uientes ecuaciones, confirmadas por 8alderbanD y Iones &<NP<(, para evaluar el coeficiente de transferencia de masa en dispersiones as ; lquido con partculas slidas de ba'a densidad en reactores a itados! #as partculas simulan la transferencia de masa entre burbu'as con un dimetro menor a :,? mm y los microor anismos en un fermentador

1ara burbu'as con un dimetro mayor a :,? mm

2onde, ?l es el coeficiente lobal de transferencia de masa &m/s(- &h es el n%mero de +$erSood- &c es el n%mero de +c$midt- 4r es el n%mero de Lras$of- -=> es el dimetro medio de +auter &m(- D /3 es la difusividad del componente / en el componente 3 &m:/s(- c es la viscosidad de la fase continua XD /&m/s(Y- c es la densidad de la fase continua &D /m@(- g es la aceleracin de la ravedad- es la diferencia de densidades entre el lquido y el as!

7an^t 5iet &<NRN(, presenta la si uiente ecuacin para evaluar la transferencia de o* eno en a ua en reactores a itados mecnicamente, cuyo volumen est entre : y :P99 litros

2onde, <la es el coeficiente volumtrico de transferencia de masa &</s(, calculado con una apro*imacin entre :9 y A9T- $ es la potencia entre ada al fluido &E(- @ es el volumen de la mezcla en el fermentador &m @(- vs es la velocidad superficial del aire, vs K W// &m/s(- W es el caudal de as &m@/s(- / es el rea transversal, / K & /A(->T &m:(- -T es el dimetro del fermentador &m(! 7an^ 5iet &<NRN(, recomienda la si uiente ecuacin para evaluar <la con una apro*imacin entre :9 y A9T, en el caso de la transferencia de o* eno en soluciones de electrolitos fuertes, no coalescentes, en fermentadores a itados mecnicamente, cuyo volumen vara entre : y AA99 litros

#as dos ecuaciones anteriores se aplican a reactores provistos con diversos tipos de a itadores, diferentes relaciones entre el dimetro del impulsor y el dimetro del tanque- y una relacin entre la potencia disipada por el impulsor y el volumen de la mezcla, & $/@( entre ?99 y <9999 &E/m@(! =ump$rey &<NRR(, recomienda las si uientes ecuaciones para evaluar <la, en tanques a itados mecnicamente se %n el volumen del fermentador

/l nivel de planta piloto

+n plantas de produccin 2onde, es una constante que depende de la confi uracin del sistema y del sistema de unidades empleado! /Dita y Qos$ida &<NR@(, presentan la si uiente ecuacin para calcular el coeficiente de transferencia de o* eno en diferentes soluciones acuosas en columnas de burbu'eo

2onde, D /3 es la difusividad de / en 3, &m:/s(- es la viscosidad cinemtica de la mezcla &m:/s(- es la tensin superficial &G/m(- c es la densidad de la mezcla &D /m@(- -T es el dimetro del tanque &m(- g es la aceleracin de la ravedad- es la fraccin volumtrica del as en la fase dispersa &adimensional(!

Transferencia de calor
En los reactores biol icos, se requiere la adicin o remocin de calor $acia o desde el fluido microbial, por las si uientes razones) +n el procedimiento de esterilizacin se suministra calor para calentar la me!cla hasta la temperatura necesaria para la eliminacin de todos los microorganismos. 6a me!cla se mantiene a esa temperatura durante un tiempo denominado perodo de sostenimiento. 6uego se retira calor hasta enfriar la me!cla a la temperatura de fermentacin. &e debe suministrar calor si el generado por la conversin de un sustrato, resulta insuficiente para mantener el nivel de temperatura. &e debe remover calor cuando la conversin de un sustrato genera excesivo calor con respecto a las condiciones ptimas del reactor. Tal es el caso de la mayor"a de los procesos fermentativos.

El calor se transfiere entre la mezcla de fermentacin $acia o desde un se undo fluido, de diversas formas &ver fi ura <(, esto es, con sistemas de camisa e*ternos, serpentines internos o e*ternos, flu'o a travs de un intercambiador de calor, o por evaporacin o condensacin del a ua y otros componentes voltiles del fluido celular! #as fluctuaciones de temperatura entre la atmsfera y la os y zonas trmicamente estratificadas, involucran claramente transferencia de calor- las temperaturas que resultan determinan la $abitabilidad de nic$os para diversas especies! >i ura <! -istintas formas de intercambio de calor

+uponiendo que las velocidades de transferencia y los cambios en las dems formas de ener a son despreciables, la ecuacin fundamental de estado estable en la cual se relaciona la velocidad total de eneracin de calor con la velocidad de remocin a travs de al una superficie de transferencia de calor- es 7elocidad de eneracin neta K velocidad de remocin K 2onde, T es la diferencia de temperatura caracterstica entre el bioproceso y el fluido de enfriamiento o calentamiento- / es el rea de la superficie de transferencia de calor- y * es el coeficiente lobal de transferencia de calor! 8omo en la transferencia de masa, la mayor resistencia a la transferencia de calor reside en una del ada capa relativamente inmvil de fluido, cercana a la frontera de transferencia! 1or otra parte, la masa lobal de fluido est bien a itada y por esta razn, permanece apro*imadamente isotrmica! #os coeficientes de transferencia de calor &h( &ver tabla <(, del a ua en ebullicin y de vapores en condensacin &tpicamente vapor de a ua(, $acen que estos fluidos sean convenientes en los procesos de esterilizacin! 8uando se requieren ba'as temperaturas, como es el caso de reactores para el tratamiento anaerbico de lodos, se emplea una corriente de a ua caliente &pero no en ebullicin(! #os lquidos viscosos presentan resistencias a la transferencia de calor mayores que las del a ua- y como en la transferencia de masa, esto se debe a un mayor rado de prdida de intercambio de calor entre el seno del fluido de intercambio con el fluido de la pared, y tambin a una conductividad trmica ms reducida! Tabla A. 8oeficientes de transferencia de calor h, Dcal/&m: $ora U8( #onveccin libre( Lases #quidos / ua en ebullicin @ ; :9 <99 ; P99 <999 ; :9999

#onveccin for!ada(

Lases #quidos viscosos / ua

<9 ; <99 ?9 ; ?99 ?99 ; <9999

7apores en condensacin)

<999 ; <99999

<rea de transferencia de calor

El rea efectiva de transferencia de calor de un sistema de camisa e*terna, se %n =umprey &<NCN(, es el rea lateral del tanque

2onde, /# es el rea de transferencia de calor de la camisa &m :(- -T es el dimetro del tanque &m(- 2 es la altura alcanzada por la mezcla de fermentacin dentro del reactor &m(! Es necesario remover el calor que se enera con el propsito de controlar la temperatura de la mezcla durante la fermentacin, &entre :? y @?U8(, ! 1or esta razn, se requieren reas de transferencia que por lo eneral no se pueden alcanzar con el rea disponible de la camisa! 8onsecuentemente, la mayora de los fermentadores con capacidad superior a <999 litros necesitan un serpentn interno! #as superficies $elicoidales tienen la venta'a de proporcionar una ran rea de transferencia en un volumen determinado de fluido, pero son relativamente costosos y difciles de mantener! El rea de transferencia de calor de un sistema de serpentn interno &>i ura <(, es

0igura A! 5eactor con serpentn interno

2onde, /& es el rea de transferencia de calor del serpentn interno- d es el dimetro e*terno del tubo de serpentn- 6& es la lon itud del serpentn, 6& K -&n& - -& es el dimetro del serpentn! Leneralmente -& K &9,N-T (, para serpentines sencillos de una sola $ilera, donde -T es el dimetro del reactor y n& es el n%mero de espiras del serpentn y es i ual a X2& /e O <Y, donde 2& es la altura del serpentn! 0sualmente 2& K 9,C2 , donde 2 es la altura que alcanza la mezcla de fermentacin dentro del reactor- e , es la separacin entre espiras adyacentes &por lo eneral, e vara entre :d y Ad ( ! 4tro tipo de sistema de transferencia de calor, consiste en la utilizacin de intercambiadores de calor de doble tubo o de coraza y tubos, con diversas confi uraciones de flu'o! Vern &<NP?(, presenta el dise.o de tales equipos de manera detallada!

Balance de ener!a

#a determinacin de los requerimientos de proceso de transferencia de calor, se inicia con la consideracin de un balance lobal de ener a! En un sistema a presin constante con cambios despreciables en las ener as cintica y potencial, el balance de ener a puede e*presarse en trminos de los cambios de entalpa, esto es, los calores de transformacin qumica o transformaciones de fase &por e'emplo, evaporacin y condensacin(, el calor sensible de los flu'os de masa y el calor transferido $acia o desde un se undo fluido que act%a como dispositivo de calentamiento o de enfriamiento! /s, se define) Wman K Wag K Wgas K Wacum K Winter K Wevap K Wsen K velocidad de eneracin de calor para el crecimiento y mantenimiento celulares velocidad de eneracin de calor debida a la a itacin mecnica del reactor velocidad de eneracin de calor debida a la aireacin velocidad de acumulacin de calor velocidad de transferencia de calor $acia los alrededores o un intercambiador velocidad de prdida de calor por evaporacin velocidad de anancia de calor sensible de las corrientes &salida ; entrada(

8on base en lo anterior, el balance de ener a es

8ooney, Ean y 6ateles &<NPC(, utilizaron este balance para calcular Wman de las mediciones $ec$as de Wacum por medio del se uimiento del aumento inicial de temperatura de un fermentador casi aislado! 3a'o tal e*perimento, Wevap y Wsen son peque.os, y Winter representa un trmino importante comparado con las randes velocidades individuales Wacum ; Wag! 8omo se mencion antes Wacum se supervisa calorimtricamente mientras que Wag se calcula para cada flu'o de as y velocidad de impulsin a partir de la correlacin de 6ic$el y 6iller! En el dise.o de un fermentador Wacum K 9 para un sistema de flu'o estable! Wag se estima para sistemas aseados o no aseados empleando las correlaciones de potencia apropiadas, presentadas! 2espreciando por el momento, Wevap &el cual puede ser importante en reactores de oteo( y Wsen el otro trmino importante que queda es Wman que puede calcularse utilizando las correlaciones apropiadas! En el dise.o de reactores a ran escala la eleccin de la temperatura de operacin y de las condiciones de flu'o determinar Wevap y Wsen, as como la eleccin del a itador y su dimetro determinar Wgas! #os trminos restantes son Wacum y Winter! +ea o no que el reactor se opere isotrmicamente, en cada instante se tiene)

8ar a trmica del calentador o enfriador

Leneracin

/cumulacin

5emovidos por una superficie diferente de un slido

Esta %ltima ecuacin a'usta la ma nitud de la transferencia de calor necesaria para mantener la temperatura y velocidad de acumulacin de calor deseadas! +e puede usar la ecuacin de la velocidad especfica de crecimiento, para representar la velocidad de eneracin de masa instantnea por unidad de volumen en un reactor por lotes

Q la correspondiente velocidad de eneracin de calor microbial instantnea Wman est dada por

2onde, @) es el volumen del reactor, : es el coeficiente de eneracin de calor, para el cual e*isten diversos mtodos para su clculo! #a ecuacin correspondiente para la reaccin isotrmica en estado estable en un flu'o continuo es

5ecurdese que como antes, :9/& puede depender de la edad del cultivo en un reactor por lotes y de la velocidad de dilucin - en un sistema de flu'o continuo!

#orrelaciones de transferencia de calor

#a ecuacin eneral de dise.o de transferencia de calor es

1.
+e requiere una e*presin para la coeficiente lobal de transferencia de calor *! 1ara la transferencia de calor en estado estable a travs de una pared plana de espesor 6G , que separa la mezcla de fermentacin a una temperatura Tme!cla, A - del fluido de calentamiento o enfriamiento o una temperatura Tme!cla, > - la continuidad del flu'o de calor demanda

2.
2onde <s en la conductividad trmica de la pared XDcal/&cm s U8(Y! En funcin del coeficiente lobal de transferencia de calor 0, que se define por

3.
4r anizando las ecuaciones anteriores se obtiene

4.
$ara una pared plana

En clara analo a con la transferencia de masa, la resistencia lobal </ * es la suma de las tres resistencias en serie! 1ara la transferencia de calor a travs de la pared de un tubo cilndrico, el rea para la transferencia cambia continuamente a travs de la pared! 1ara esta situacin la ecuacin apropiada para 0 es

5.
$ara la pared de un tubo 2onde, di y do son los dimetros interior y e*terior del tubo, respectivamente! El uso del subndice o, para el coeficiente lobal de transferencia de calor, *, identifica la superficie e*terior del tubo como el rea base para la transferencia de calor! #a conductividad trmica <s del slido depende del material y se incrementa li eramente con una disminucin de la temperatura! #os valores apropiados para diferentes materiales de transferencia de calor se encuentran en cualquier manual de in eniera! El anlisis de transferencia de momento y de transferencia de calor de la interfase fluido ; slido, proporciona los coeficientes individuales de transferencia de calor &hGA, hG>( o &ho, hi( necesarios en las ecuaciones A y ?! "ales coeficientes varan a lo lar o de la superficie de transferencia de calor, lo que obli a a la definicin de un coeficiente lobal de transferencia de calor local, de acuerdo con las mismas ecuaciones A y ?! +e $ace necesaria una detallada inte racin sobre el rea de transferencia de calor para calcular el calor total transferido! En eneral, para la transferencia de calor entre un fluido y una pared, los rupos adimensionales ms importantes que se utilizan son)

G%mero de Gusselt

6. 7. 8.

G%mero de 1randlt

G%mero de 5eynolds

2onde, < es la conductividad trmica del fluido- cp es la capacidad calorfica, d es una distancia &dimetro o separacin(- es la viscosidad y v la velocidad del fluido! #as variables sobre las que se definen estos n%meros pueden variar li eramente se %n sea la eometra del dispositivo de transferencia de calor! El coeficiente de transferencia de calor, h, e*presado adimensionalmente como el n%mero de Gusselt, es funcin del n%mero de 5eynolds y del n%mero de 1randlt

9.
8omo la $idrodinmica puede variar de acuerdo a la forma de la superficie de intercambio- se puede disponer de correlaciones que incluyan la relacin lon itud, 6, a dimetro, d, &6/d(

1 .
#as variaciones de temperatura inducen variaciones en las propiedades del fluido en puntos diferentes cercanos a la superficie de intercambio! 8omo la viscosidad es la ms importante de ellas, la relacin

7iscosidad del fluido a la temperatura media aritmtica 7iscosidad del fluido a la temperatura de pared Es una variable %til de correlacin

11.

12.

8omo h &y por lo tanto .u( puede definirse como un coeficiente local de transferencia de calor o como uno que se promedia sobre la superficie de transferencia de varias formas, se debe tener cuidado al determinar las temperaturas y las correlaciones para calcularlo!

%eactores equipados con camisa

El sistema de camisa tiene al unas venta'as de costo y economa de operacin de operacin con respecto a los sistemas de serpentn, pero el rea de transferencia de calor es prcticamente invariable una vez construido el tanque! 3rooDs y +u &<N?N(, recomiendan la si uiente ecuacin para calcular el coeficiente de pelcula entre el lquido en el reactor y la superficie interior del recipiente encamisado, vlida para un amplio intervalo de viscosidades y aplicable a un tanque a itado equipado con deflectores y una turbina de asas planas, y documentada por otros investi adores en sistemas equipados con paletas y turbinas de flu'o a*ial, &+treD, <NP@(

2onde, ho es el coeficiente de pelcula entre el lquido en el reactor y la superficie interior del recipiente encamisado XE/&m : U8(Y- -/ es el dimetro del impulsor &m(- -T es el dimetro del tanque &m(- es la viscosidad del lquido a la temperatura media XD /&m s(Y- p es la viscosidad del lquido a la temperatura de la pared- < es la conductividad trmica del lquido XE/&m U8(Y- cp es el calor especfico del lquido XI/&D U8(Y- es la densidad del lquido &D /m@(! /cDley &<NP9(, analiza los resultados de diferentes investi adores y recomienda la si uiente ecuacin para evaluar los coeficientes de pelcula correspondientes a la superficie interior del reactor y a la superficie e*terior de las superficies contenidas dentro del tanque

2onde, ho es el coeficiente de pelcula entre el lquido en el reactor y la superficie interior del reactor encamisado o entre el lquido en el reactor y la superficie e*terior del serpentn XE/&m : U8(Y- -T es el dimetro del tanque &m(! #os valores promedio del coeficiente a dependen del tipo de a itador y de la superficie de transferencia de calor) @alores promedio del coeficiente a /gitador "urbina "urbina 1aleta 1aleta /ncla =lice =lice &uperficie 8amisa +erpentn 8amisa +erpentn 8amisa 8amisa +erpentn #oeficiente a 9,P: <,?9 9,@P 9,CR 9,AP 9,?A 9,C@

%eactores equipados con serpentn

4lds$ue y Lretton &<N?A(, recomiendan la si uiente ecuacin para el calentamiento o enfriamiento de lquidos en un reactor equipado con deflectores, un serpentn $elicoidal y un impulsor de turbina

2onde, ho es el coeficiente de pelcula entre el lquido en el reactor y la superficie del reactor XE/&m : U8(Y- do es el dimetro e*terior de la tubera del serpentn &m(- a es un e*ponente dependiente de propiedades del fluido tales como viscosidad, capacidad calorfica y conductividad trmica! 1ara una evaluacin preliminar, el valor de a consistente con otras ecuaciones similares es, a K 9,:A!

%eactores con serpentines de placa *ertical

#os serpentines de placas son ms fciles de instalar y de mantener que los de tubos verticales! #as placas se colocan formando n ulos apropiados para incrementar el rea de transferencia de calor! /dicionalmente, racias a su mayor efecto deflector, no $ay necesidad de instalar pantallas adicionales para ase urar la turbulencia deseada, 1etree y +mall, &<NRC(

1ara 5e M A!<9@

1ara 5e F <,A!<9@ 2onde, 6 es la anc$ura de la placa- ho es el coeficiente de pelcula entre la superficie de la placa y el lquido XE/&m : U8(Y- es la densidad del licor &D /m@(- es la viscosidad del lquido a la temperatura media de la pelcula XD /&m s(Y!

'ntercambiadores de superficie raspada

#os lquidos viscosos y las suspensiones slido ; lquido, eneralmente se calientan o enfran en intercambiadores de superficie raspada! "picamente, estos intercambiadores son de doble tubo! El lquido viscoso fluye a ba'a velocidad dentro del tubo central! #a superficie interior del tubo central es raspada peridicamente por una o ms $o'as lon itudinales montadas sobre un e'e rotatorio!

#a superficie e*terior del tubo central est en contacto con vapor de a ua o con el lquido refri erante! #as porciones de lquido viscoso en contacto con la superficie de transferencia de calor estn esencialmente en reposo, e*cepto cuando son perturbadas por el paso de la $o'a raspadora! #a transferencia de calor $acia el lquido viscoso ocurre en condiciones inestables! 2e acuerdo con la si uiente ecuacin, &+Delland, <N?C(, el coeficiente de transferencia de calor sobre una superficie raspada depende de las propiedades trmicas del lquido, de su velocidad en la direccin lon itudinal y del dimetro y lon itud del intercambiador

2onde, 6 es la lon itud del intercambiador &m(- h1 es el coeficiente de transferencia de calor entre la superficie interior del tubo central y el lquido XE/&m: U8(Y- v es la velocidad promedio del fluido en la direccin lon itudinal &m/s(- -/ es el dimetro interior del tubo central &m(- n es la velocidad de rotacin del a itador &rev/s(!

#lasificacin
El dise.o de biorreactores depende de la concentracin de biomasa, los requerimientos de esterilidad, el mezclado, la suspensin, la aireacin, la transferencia de calor, y la eneracin de condiciones ptimas de esfuerzo cortante! En la si uiente tabla se resume informacin caracterstica de al unos biorreactores! Tabla A. 1armetros de dise.o de biorreactores que utilizan biocatalizadores especficos

3iocatali!ador $armetro 2ongos 3acterias, levaduras #ultivos me!clados

+n solucin 7iscosidad del medio &1a s( 7elocidad de consumo de o* eno XD /&m@ s(Y 9,< ; <,? 9,< ; < F 9,< 9,: ; : 9,< : ; :9 :99 ; <?99 F 9,< 9,9< ; 9,99< 9,99@ 9,9: ; 9,<?

Bnmovili!ados F 9,<

8oeficiente volumtrico de 9,9< transferencia de masa, <la &</s( Leneracin de calor debida al metabolismo XE/m: V(Y 8oeficiente lobal de transferencia de calor XE/&m: V(Y 1otencia por unidad de volumen &DE/m@( : ; :9 :99 ; <?99

< ; <?

F?

9,9< ; 9,9?

#os biorreactores tambin pueden clasificarse de acuerdo al tipo y a la forma del biocatalizador) 3iorreactores para clulas libres en cultivos sumergidos 3iorreactores para clulas o en!imas inmovili!adas en cultivos sumergidos o de superficie 3iorreactores con retencin o recirculacin del biocatali!ador

1or otra parte, pueden clasificarse de acuerdo a la confi uracin) )eactores de tanque %relacin altura/dimetro =' #olumnas %relacin altura/dimetro =' )eactores de tanque con recirculacin interna o externa

#olumnas con recirculacin interna o externa

0na clasificacin de reactores biol icos para procesos aerbicos se basa en la forma en que se suministra la ener a) 3iorreactores con dispositivos internos de mezclado mecnicos 3iorreactores con bombeo externo del l"quido %me!clado hidrulico' 3iorreactores en los cuales el suministro de potencia se reali!a por medio de aire comprimido %me!cla pneumtica'

#aractersticas b"sicas de los fermentadores a!itados

/unque el reactor de tanque a itado es todava el tipo de reactor ms importante en la tecnolo a de fermentaciones, el dise.o estndar es frecuentemente inapropiado en ciertos procesos de produccin! 1uesto que el tama.o del reactor se incrementa, se deben usar al unas modificaciones, ya que los radientes locales de concentracin y ciertas condiciones de flu'o no definidas en el reactor &especialmente randes diferencias en el esfuerzo cortante(, pueden influir en el crecimiento microbial! 2esarrollos adicionales incluyen la insercin de tubos concntricos de arrastre &reactor con recirculacin a itado mecnicamente(, la aplicacin de dispositivos especiales de a itacin, y el uso de m%ltiples a itadores &reactores de torre(! #os biorreactores a itados mecnicamente poseen las si uentes funciones) 2omogeni!acin &uspensin de slidos -ispersin de me!clas l"quido H l"quido 4asificacin/aireacin de l"quidos Bntercambio de calor

0n fermentador simple de tanque a itado se presenta en la si uiente fi ura) 0igura A. 5eactor de tanque a itado

1or lo eneral, el tanque de reaccin est provisto con cuatro deflectores! El a itador puede estar unido ya sea a la parte superior o a la parte inferior del reactor! El conocimiento de los esquemas de flu'o sirve como base para el establecimiento de los parmetros de dise.o &tiempos de mezclado, parmetros del transporte de calor y masa(! #a rotacin del disco produce primeramente, un movimiento tan encial del lquido- la aceleracin centrfu a resultante conduce un flu'o secundario adicional, el cual consiste de una componente radial y de una a*ial, y enera randes vrtices coa*iales por encima y por deba'o del a itador!

#os a itadores tpicos para medios de ba'a viscosidad son el impulsor tipo $lice y la turbina para el movimiento a*ial y el impulsor tipo $lice para el movimiento radial! En medios moderadamente viscosos, el impulsor multietapas a contracorriente &6HL( ori ina movimiento a*ial &con un componente radial( y el disco mezclador, entre otros, ori ina desde movimiento tan encial $asta radial! En medios altamente viscosos, se emplean a itadores $elicoidales para el movimiento a*ial! #os a itadores 6HL, HG"E56HL e HG"E51541 producen e*celente suspensin, $omo enizacin y transferencia de o* eno a%n en medios moderada y altamente viscosos! +u dise.o $idrulico da como resultado unas condiciones de mezclado relativamente ptimas dentro del reactor, lo cual facilita el cambio de escala! #a transferencia de calor en los reactores de tanque a itado se lo ra con el uso de camisas dobles, $elicoides o serpentines o por medio de intercambiadores de calor e*ternos!

#onfi!uraciones para fermentadores a!itados

0na seleccin de al unos biorreactores con dispositivos internos de a itacin mecnica se presenta en la fi ura <! El uso de tubos concntricos de arrastre &fi ura <3( tiene al unas venta'as) el flu'o circular, que es difcil de controlar, se reemplaza con una circulacin diri ida! /dicionalmente, la transferencia de calor se me'ora porque la velocidad lineal en la pared del recipiente se incrementa! El suministro de o* eno tambin se me'ora puesto que los tiempos de residencia de las burbu'as de as se $acen ms lar os en el flu'o circulante y la redispersin de burbu'as en el caso de reBentrada dentro de la zona de mezcla! #os reactores con a itacin mecnica &fi uras < ; @( incluyen) >i ura <! 3ioreactores agitados mecnicamente por medio de dispositivos internos de rotacin( /' )eactor de tanque agitado 3' J -' )eactores con recirculacin con tubos coaxiales de arrastre +', 0' )eactores con recirculacin con agitadores de hlice y diferentes dispositivos de aireacin 4' )eactor con recirculacin con agitador de hlice y tubo coaxial de arrastre 2' )eactor con recirculacin %4iovanola 0rXres' con tubos ondulados B' )eactor con recirculacin con agitadores que producen movimiento redial y axial Y' )eactor con recirculacin con mDltiples tubos coaxiales de arrastre ?' 0ermentador a gran escala con agitadores 5B4 6' )eactor con recirculacin con agitador de hlice %+<ato'

>i ura :! 3ioreactores agitados mecnicamente por medio de dispositivos internos de rotacin %BB' %/gitadores de auto J succin'( /', 3' )eactores de tanque con agitador hueco #' &istema @rtex -' 0ermentador 7aldhof +' Turbina +ffigas %#hemap, &ui!a' 0' /ireador @ogelbusch %@ogelbusch, /ustria' 4' /ireador 0rings, 0riborator %0rings, /lemania' 2' )eactor multietapa B' )eactor tipo toro %recirculacin hori!ontal'. a' /gitador hueco b' /gitador de paletas c' Tubo coaxial de arrastre d' -eflector e' /ireador f' 2lice g' 0iltros h' +1e hueco i' +nfriador 1' /gitador de paletas aleteado <' Tubo de reaccin l' Turbina m' &ellos magnticos n' -estructor de espuma

5eactores con a itadores de turbina, aireacin optimi!ada, y deflectores

5eactores con recirculacin a itados mecnicamente con a itadores de $lice %figura A3' tiene una elevada relacin de recirculacin, carga limitada de gas, y un esfuer!o cortante relativamente ba1o. &us venta1as incluyen buena transferencia de calor, buena separacin de burbu1as y control de la espuma debido a que la superficie del l"quido es succionado dentro del tubo concntrico de arrastre %volumen mximo del reactor N H I m ='. 5eactores con recirculacin con combinaciones de a itadores! 6a combinacin de agitadores de paleta, hlice y turbina permite la homogeni!acin del contenido del reactor %hlice' y la dispersin de burbu1as de gas %turbina' %figura AB'. 5eactores con a itadores de succin! *n gran nDmero de agitadores se ha desarrollado para este tipo de reactor %figura >'. +sta configuracin de tanque agitado es muy comDn en la tecnolog"a de alimentos %produccin de vinagre, levadura, aminocidos, vitaminas y aromas'. 5eactores con a itadores multietapa! *n incremento sustancial en la transferencia de ox"geno, se logra al instalar de dos a seis agitadores sobre un soporte %figura L?'. &i las !onas de agitacin se separan en compartimientos individuales por medio de platos perforados, redes, o constricciones en el dimetro del reactor, el esquema de flu1o se aproxima al de una cascada de reactores de tanque agitado o al de un reactor tubular ideal. +ste diseo me1ora el transporte de masa y el desempeo del reactor. &e tiene un alto esfuer!o cortante dentro de los compartimientos, lo cual es venta1oso en las reacciones l"quidoJl"quido %por e1emplo, transesterificacin de grasas y reacciones con sustratos muy poco solubles' 5eactores con mezcladores de vibracin! +l @ibromix y los reactores con elementos de me!cla con movimiento axial %figura =4' tienen discos perforados con orificios cnicos como elementos de dispersin. &us movimientos verticales pulsantes distribuyen la energ"a de entrada sobre un gran nDmero de clulas elementales. 6o anterior da como resultado una velocidad muy homognea de disipacin de energ"a, un esfuer!o cortante homogneamente distribuido, y una estructura de flu1o claramente definida. +sto particularmente facilita el cambio de escala %volumen de reactor por encima de I m ='. +ste tipo de reactor provee un buen suministro de ox"geno.

>i ura @! 3ioreactores agitados mecnicamente por medio de dispositivos internos de rotacin %BBB'( /' )eactor de cascada con agitadores de rotacin 3' )eactor de cascada con agitadores de vibracin #' )eactor de cascada con agitadores pulsantes -' )eactor de pel"cula fina con cilindro rotatorio +' )eactor con agitador de aletas 0' )eactor con disco de rotacin 4' )eactor con plato vibrante %@ibromix'

Biorreactores con mezcla pneum"tica

#os biorreactores con mezcla pneumtica poseen venta'as como su dise.o simple, buena transferencia de calor, base de rea peque.a, pocas operaciones de mantenimiento y muy ba'o esfuerzo cortante! Estos reactores pueden clasificarse de acuerdo al criterio de dise.o!

5eactores de columna de burbu'eo sin deflectores 5eactores con circulacin pneumtica de lquido 1armetros de dise.o para reactores de columna de burbu'eo

%eactores de columna de burbu.eo sin deflectores

Estos reactores comprenden la columna de burbu'eo simple, la columna de burbu'eo m%ltiple con platos perforados o distribuidor de as, columnas de burbu'eo con aireacin por tubos de inyeccin y las torres para floculacin de microor anismos &fi ura <(! / pesar de su estructura simple, las columnas de burbu'eo requieren una especificacin de dise.o detallada para una operacin ptima! #as propiedades del medio &viscosidad, fuerza inica, tensin superficial, concentracin de biomasa, etc!( cambian randemente durante la reaccin y ori inan problemas de in eniera de procesos debido a la formacin de espuma, fati a interfacial, flotacin de biomasa y coalescencia de burbu'as &formacin de burbu'as randes e inactivas(! #os aspersores de as dinmicos y estticos se emplean para la produccin de burbu'as, lo que da lu ar a una amplia variedad de biorreactores! >i ura <! 3iorreactores con me!cla pneumtica %columnas de burbu1eo'( /' #olumna de burbu1eo 3' )eactor con recirculacin de gran tamao #' )eactor con recirculacin externa -' )eactor con recirculacin con pared divisoria +' )eactor con recirculacin de flu1o hacia aba1o 0' #olumna de burbu1eo con platos perforados 4' #olumna de burbu1eo con me!cladores estticos 2' )eactor con recirculacin por etapas B' #olumna de burbu1eo pulsante con deflectores

%eactor con circulacin pneum"tica de lquido + irlift,

En este tipo de reactores la circulacin del lquido de fermentacin se determina por los tubos coa*iales de arrastre, las paredes divisorias) reactores de e'e y reactores de prisma, o tubos de recirculacin e*terna! Estos reactores pueden tener circulacin interna o e*terna &>i ura <(- la circulacin interna puede producirse por dos tubos de arrastre coa*ial &>i ura </( o por un flu'o invertido mediante el aseado del lquido en el espacio e*terior al cilindro &>i ura <3(, el cual tiene la venta'a de una superficie de succin y una mayor turbulencia cerca de la pared de transferencia de calor! 1ueden instalarse platos perforados, mezcladores estticos o empaques para la dispersin diferenciada de las burbu'as de as! #os reactores con circulacin pneumtica de lquido con circulacin e*terna presentan un comportamiento favorable de flu'o- se pueden instalar intercambiadores de calor o elementos adicionales de mezcla en el ba'ante! El volumen del ba'ante puede optimizarse para a'ustar los tiempos de residencia de los microor anismos en la zona pobre en o* eno, lo cual puede ser venta'oso para determinadas reacciones! >i ura <! 3iorreactores con circulacin pneumtica de l"quido %/irlift'( /' )eactor 6efrancois H 5ariller 3' )eactor 7asco con flu1o invertido #' )eactor de prisma con circulacin externa -' )eactor con recirculacin a presin elevada %B#B' +' )eactor &choller H B.4. 0' Tanque de burbu1eo hori!ontal

Par"metros de dise=o para reactores de columna de burbu.eo

El dise.o de este tipo de reactores requiere informacin cuantitativa sobre) 5 imen de flu'o +uministro de potencia 5etencin de as 6ezcla entre el as y el lquido "ransporte de masa &o* eno( "ransferencia de calor

%e!menes de flu.o
7elocidades lineales de as G4 ? cm/s producen un flu'o pseudo$omo neo de burbu'as uniformes- por encima de G4 K ? cm/s, se sobrepasa el punto de inundacin y el flu'o se trueca $etero neo! /dicionalmente a las burbu'as peque.as, se forman randes burbu'as que fomentan la circulacin del lquido! #a formacin de burbu'as en la re in de turbulencia se describe por el n%mero de Eeber)

2onde)

 es la presin dinmica de turbulencia &D /m s:(d3 el dimetro de la burbu'a &m( y

la tensin superficial &E/m(!

/ partir de las estimaciones del n%mero de Eeber para el equilibrio dinmico, de acuerdo con la teora de la turbulencia, el dimetro de la mayor burbu'a estable que puede e*istir en la zona de turbulencia est dado por)

2onde)

es la tensin superficial &E/m( 6 es la densidad de la fase lquida &D /m@($4 es la potencia de burbu'eo suministrada &E( y @6 es el volumen del lquido &m@(! 8onsecuentemente, en un sistema dado con 6 , y #O constantes, el m*imo tama.o de burbu'a depende %nicamente del suministro de potencia!

Suministro de potencia
El suministro de potencia para el as puede calcularse de acuerdo con la si uiente e*presin)

2onde) q4 es el caudal de as &m@/s(-

4 es la densidad del as &D /m@(5 es la constante universal de los ases &en unidades +H(" es la temperatura absoluta &V(G4; es la velocidad lineal del as en los orificios del equipo de aspersin &m/s( y es la relacin de compresin &adimensional()

2onde)

4 es la retencin de as &adimensional(26 es la altura de la columna de lquido &m(g es la aceleracin de la ravedad &m/s:( y pT es la presin por encima de la columna de lquido &1a(!

%etencin de !as
#a retencin de as 4 es importante para la caracterizacin de la dispersin as ; lquido y la interfaz entre las fases! 2e acuerdo con /Dita y Qos$ida &<NR@(, la si uiente relacin se aplica al medio acuoso)

2onde) g es la aceleracin de la ravedad &m/s:(-

6 es la densidad de la fase lquida &D /m@(-) es el dimetro del reactor &m(-

es la tensin superficial &E/m( 6 es la viscosidad cinemtica de la fase lquida &m :/s( y

G4 es la velocidad lineal de as &m/s(!

#os alco$oles y las sales influyen fuertemente en el contenido relativo de as!

Mezclado en la fase lquida

#a ecuacin de 2ecDSer et al! se recomienda para el clculo del coeficiente de mezclado re resivo a*ial de la fase lquida en la columna de burbu'eo)

2onde) G4 es la velocidad lineal de as &m/s( y -) es el dimetro del reactor &m(! 1ara el mezclado de la fase aseosa, 6an artz y 1$il$ofer &<NC9( determinaron)

2onde 4 es la retencin de as &adimensional(!

Transferencia de o;!eno
En la literatura se encuentran valores muy diferentes para los coeficientes volumtricos de transferencia de masa! 0na relacin simple entre <la y G4 es)

2onde) <la es el coeficiente volumtrico de transferencia de masa &o* eno( &s B<( y G4 es la velocidad lineal de as &m/s(! En el intervalo G4 F C cm/s &dimetro de los orificios del aspersor de < mm apro*imadamente(! 1ara viscosidades relativamente ba'as &F :9 m1a!s( y aireadores estticos, /Dita y Qos$ida &<NR@( establecen que)

2onde) -) es el dimetro del reactor &m(-

D ', # es el coeficiente de difusin molecular en la fase lquida &m :/s( 6 es la viscosidad cinemtica del lquido &m:/s( 6 es la densidad del lquido &D /m@( es la tensin superficial &E/m( y
g es la aceleracin de la ravedad &m:/s(!

Transferencia de calor
#a transferencia de calor en las columnas de burbu'eo puede estimarse con el uso de la si uiente correlacin)

2onde)

7 es el coeficiente de transferencia de calor &DE/m: V( 6 es la densidad del lquido &D /m@(cp es el calor especfico &m:/s: V(G4 es la velocidad lineal de as &m/s(d& el dimetro medio de +auter de las burbu'as &m(-

6 es la viscosidad cinemtica &m:/s(g es la aceleracin de la ravedad-

6 es la viscosidad dinmica del lquido &D /m s( y la conductividad trmica &DE/m V(!

Biorreactores con separacin de producto inte!rada

5todos
En la in eniera de bioprocesos est imponindose un desarrollo revolucionario con los sistemas de reaccin con separacin inte rada! #a inte racin de reactor y separacin de producto resulta venta'osa en los si uientes casos) +n sistemas de reaccin con intermedios inestables que son usados como productos +n fermentaciones con productos inhibidores o txicos $ara reducir el nDmero de etapas de procesamiento y para obtener una separacin de producto continua acoplada a la reaccin

#a fi ura < muestra al unas de las posibilidades de acoplamiento interno o e*terno de fermentacin y separacin, que se usan industrialmente! >i ura <! 3iorreactores con separacin de producto externa %/ J +' e interna %0 J 2'( /' )eactor con sedimentador 3' )eactor con flotacin de espuma #' )eactor con filtracin de flu1o cru!ado -' )eactor con adsorbedor externo +' #ombinacin -ilisis J reactor 0' 0ermentador extractivo 4' &eparacin interna por medio de dilisis 2' 0ermentador al vac"o

/l unos problemas de este tipo de sistemas son la necesidad de un sistema comple'o de esterilizacin, la coordinacin entre la velocidad de sustitucin del material en el reactor y la velocidad del flu'o de separacin, prevencin de la reduccin en la cantidad de nutrimentos, y prevencin del in reso o acumulacin de materiales t*icos!

)eactores de membrana
#a reaccin y la separacin se combinan en los denominados reactores de membrana &fi ura :(! #a membrana tiene las si uientes funciones) )etencin del biocatali!ador Bnmovili!acin del biocatali!ador &uministro de sustratos )emocin de productos $roteccin del biocatali!ador de influencias indeseables %esfuer!os mecnicos, burbu1as de aire' &eparacin de dos fases de fluido %fermentacin perextractiva y perevaporativa' 5odificacin de la selectividad por interaccin controlada y transporte de masa

>i ura :! 5eactores de membrana) /' )eactor de membrana plana 3' 0ermentador con filtracin de flu1o cru!ado #' 0ermentador con filtros de rotacin -' )eactor de fibra porosa con clulas en la cmara de retencin a' 5embrana b' 3iocatali!ador

+e emplean membranas de ultrafiltracin, microfiltracin y dilisis! El biocatalizador puede presentarse libre en el espacio de retencin, adsorbido como una capa limtrofe en la membrana, o inmovilizado en los poros de la membrana!

#a eficiencia de reactores de membrana plana es ba'a &fi ura :/(, pero las unidades de filtracin de flu'o cruzado &fi ura :3(, filtros dinmicos &fi ura :8(, unidades de dilisis, y mdulos de fibra $ueca &fi ura :2(, resultan apropiados para aplicaciones industriales!

#omparacin de biorreactores
#or reactores biol icos se comparan, usualmente, sobre la base de la inversin y de los costos de operacin para uno o ms productos! #a productividad para un producto determinado est dada por

2onde c$ es la concentracin de producto, 9 la concentracin de biomasa, :$/9 es el coeficiente de rendimiento de producto relativo a la biomasa, una constante, y la velocidad especfica de crecimiento! En el caso de reaccin con limitacin de o* eno la productividad lobal est determinada por la velocidad de transferencia de o* eno

2e esta forma, en los procesos aerbicos, la potencia de entrada especfica & $/@6( es particularmente importante! 0na velocidad de transferencia de o* eno apropiada puede obtenerse por medio de dispositivos mecnicos, $idrulicos o pneumticos! #a eficiencia de transferencia de o* eno se define por)

#a eficiencia de transferencia de o* eno es una funcin del dise.o del reactor, del tipo de potencia de entrada, y de las propiedades del medio &por e'emplo, coalescencia y viscosidad(, la eficiencia decrece al incrementarse la potencia de entrada especfica! Entre los reactores con potencia de entrada suministrada mecnicamente, los aireadores de superficie y los reactores con elementos de mezclado movidos a*ialmente tienen las me'ores eficiencias, se uidos por los reactores de tanque a itado, y por los reactores $orizontales con recirculacin! En los reactores con ener a disipada solamente a travs de la compresin de as &columna de burbu'eo(, la eficiencia depende de la altura de la capa de lquido esparcido, del aspersor y de la composicin del medio! El uso de anillos de recirculacin internos o e*ternos reduce la eficiencia! #as eficiencias de transferencia de o* eno de diferentes reactores se presentan en la tabla <! "abla <! +ficiencia de transferencia de ox"geno de varios dispositivos de aspersin )eactor /ireador %<g ,>/<7 h' >ermentador a itado / itador $ueco / itador de disco / itador de $lice <,A :,9 ; :,? 9,C ; <,< 9,CC 5eactor de inyeccin sumer ida con recirculacin /spersor de un orificio @,@: /ltura del l"quido @T, %m' %<g ,>/m= h' : @ @ <9 <9 <: <9 A A

4rificio de

@,P ; @,C

R ; <?

<:

inyeccin 8olumna de burbu'eo 6ezclador esttico Hnyector 8olumna de burbu'eo multietapas @,@ @,P <9 R <9 <9 <9 <9

1latos @,@N perforados &d K @ mm( 1latos A perforados &d K < mm(

<9

#a combinacin de reactores ms eficiente es probablemente el reactor con recirculacin con una columna multietapas! En este caso, una entrada de casi A9 D 4:/m@ $, se lo ra con una potencia de :,? DE/m & +,> K <P D 4:/DE!$(! 0n criterio adicional, que se usa para la comparacin de biorreactores, es el tiempo de mezcla ! Este es el tiempo requerido para minimizar las diferencias de concentracin &la diferencia m*ima es del ? ; <9T de la concentracin final( en la totalidad del contenido del reactor! #os a itadores con altas relaciones dimetro a itador/dimetro recipiente y los deflectores, eneralmente tienen muy ba'os tiempos de mezcla, a%n a ba'as velocidades de rotacin! En medios altamente viscosos, los tiempos de mezcla ba'os con a itadores $elicoidales! #os reactores aerbicos se deben comparar con base en la productividad m*ima de biomasa ! +in embar o, no se pueden obtener conclusiones claras debido a la ran variedad de factores que influyen! #a comparacin de biorreactores es si nificativa, %nicamente cuando la poblacin de microor anismos es estable y la productividad de biomasa puede determinarse de acuerdo con el o* eno limitante

8uando se conoce :9/, , y es constante, <la puede calcularse a partir de la ecuacin anterior! /l unos aspectos adicionales que deben considerarse para la comparacin de biorreactores son) 0lexibilidad H uso para varias biorreacciones

#apacidad de esterili!acin a corto y largo pla!o -isponibilidad y costos de inversin

/ pesar de los nuevos diseos y desarrollos en el campo de los biorreactores, aproximadamente el I;Z de todas las reacciones bioqu"micas se llevan a cabo en reactores de tanque agitado.

Dise=o de Biorreactores
El biorreactor es el centro de todo procesamiento bioqumico! 1or medio de la combinacin del conocimiento de la cintica de las reacciones biol icas con los balances de materia y ener a, se puede, por lo menos en principio, dise.ar y analizar el comportamiento del biorreactor! En la prctica, este procedimiento se $ace ms comple'o debido a la naturaleza de los catalizadores biol icos, los cuales pueden tener propiedades que varan con el tiempo y mostrar comple'os esquemas cinticos- y de la naturaleza de las mezclas de fermentacin, las cuales pueden presentar serias desviaciones de la idealidad dando como resultado comple'os esquemas de flu'o y fenmenos caractersticos de transferencia de masa y calor! En vista del alcance que tiene este tutor, se considerarn e*clusivamente al unas simplificaciones que permitan que las caractersticas esenciales del dise.o del biorreactor se $a an patentes! Esto involucra el uso de modelos cinticos simples y la suposicin del comportamiento ideal tanto para la fase lquida como para la fase aseosa dentro del reactor! /l considerar al unos biorreactores ideales, se pueden obtener soluciones de dise.o matemticamente mane'ables! #as desviaciones de la idealidad pueden ser incorporadas con posterioridad al modificar estas soluciones! 1or lo eneral, se supone que la clula o la enzima en un reactor ideal est e*puesta a un ambiente espacialmente uniforme, de esta forma, la velocidad de reaccin no vara localmente! Estas suposiciones son adecuadas para describir el comportamiento de reactores industriales a ran escala, a%n si se tiene en cuenta que pueden e*istir desviaciones del mezclado ideal y de la distribucin uniforme de clulas y enzimas dentro del reactor! "eniendo en cuenta lo anterior, se considerarn los reactores por lotes, los cuales se caracterizan por no poseer flu'os de entrada ni de salida! En el caso ideal, los reactores por lotes tienen una fase continua y $omo nea- la fase lquida est completamente mezclada y posee una temperatura y composicin uniformes! Go e*isten variaciones espaciales en la concentracin de reactivos o de productos! #a fase aseosa en los reactores aerobios por lotes puede estar completamente mezclada o puede modelizarse como flu'o en pistn! #a cintica de la reaccin en consideracin es clave para determinar el comportamiento del biorreactor!

1or otra parte se presentan dos tipos de biorreactores continuos) el reactor continuo de tanque a itado de mezcla completa y el reactor de flu1o en pistn o reactor tubular! #as operaciones semicontinuas son comunes en los biorreactores industriales y se denominan como operaciones por lotes con alimentacin &fedJbatch(! En este caso el reactor se opera inicialmente como un reactor por lotes y cuando un nutriente &usualmente la fuente de carbono( se consume, se alimenta al reactor si uiendo un protocolo predeterminado! 5eactor por lotes 5eactor continuo de tanque a itado 5eactores de flu'o en pistn y de lec$o empacado 5eactor por lotes alimentado &0edJbatch(

%eactor por lotes

0n reactor por lotes de mezcla completa es espacialmente $omo neo como resultado de una a itacin intensa- la temperatura y el p= tambin pueden mantenerse uniformes, en todo punto del reactor, con un control apropiado! #a forma ms eneral de las ecuaciones de balance de materiales y de ener a para las especies de inters, es)

<! 2onde) @ es el volumen del reactor-

ci es la concentracin del componente i c1 representa la concentracin de otras especies que pueden influir las velocidades de formacin o consumo de i en la reaccin y r&ci, c1( es la velocidad volumtrica de formacin de ci por la reaccin! "ambin se puede escribir un balance de masa lobal para el sistema)

:! +uponiendo que la densidad total de la fase lquida & ( es constante, el volumen de lquido permanece constante, y se puede sacar @ del diferencial de la ecuacin anterior, para obtener)

@! 8on la densidad & (, y las capacidades calorficas constantes, la ecuacin de conservacin de la ener a se puede escribir como)

A! 2onde) cp es la capacidad calorfica-

2) es el calor de reaccin y
r9 es la velocidad volumtrica del incremento en la masa de clulas secas!

/unque el biorreactor se opera por lotes, la ecuacin de balance de ener a contiene los trminos para el flu'o de calor del reactor asociado con el control de la temperatura &W ( y para la eneracin de calor por a itacin &B 7, traba'o de e'e(! 8omo e'emplo, el crecimiento microbial puede representarse por dos ecuaciones para la masa de clulas y el sustrato, utilizando el modelo de 6onod)

?!

P! 8on condiciones iniciales 9&9( K 9; - c&&9( K c&; Estas ecuaciones pueden sumarse despus de multiplicar la ecuacin P por :9/& para obtener)

Q de esta forma)

R! E*presando 9 en funcin de c& , a partir de la ecuacin anterior y reemplazando el resultado en la ecuacin P, se tiene)

C!

Ecuacin que puede inte rarse analticamente para obtener)

N!

En esta ecuacin, c& est implcita y el tiempo en el cual se consume el sustrato, puede encontrarse calculando valores de t correspondientes a valores especficos de la concentracin de sustrato! +i en el cultivo se forma un producto que puede estar parcialmente asociado o no asociado al crecimiento microbial, de la forma)

<9! el balance de materiales para el sustrato debe reescribirse para contabilizar la conversin de sustrato en producto, &ecuacin <<(, y las tres ecuaciones de balance de material que resultan) ecuaciones ?, <9 y <<, pueden resolverse numricamente para obtener los perfiles de concentracin tpicos!

<<!

5uerte de clulas en un cultivo por lotes

En un cultivo en crecimiento, al unas clulas pueden volverse inactivas o morir, como resultado de errores en la autosntesis &mala interpretacin del /2G, por e'emplo(! Go obstante la fraccin de clulas viables en los cultivos bacteriales puede ser bastante alta en el crecimiento por lotes, las clulas eucariotes pueden morir a velocidades apreciables, y as, la viabilidad de ese cultivo ser menor del <99T! +i se considera que %nicamente las clulas viables & 9v ( eneran clulas no viables & 9nv ( con una cintica de primer orden, en funcin de la concentracin de clulas viables con una constante de velocidad de reaccin < , se tiene, para el crecimiento microbial)

<:!

<@! El crecimiento de la poblacin total de clulas est dado por)

<A! +i se considera que es apro*imadamente constante para la mayor parte de la fase e*ponencial del crecimiento por lotes, la ecuacin <: puede inte rarse para 9v &t ( y el resultado se sustituye en la ecuacin <A para 9T ! #a inte racin de la ecuacin que resulta, proporciona la concentracin de clulas viables y la relacin de viabilidad & 9v /9T()

<?!

<P!

+i el inculo se compone principalmente de clulas viables, 9v&9(/9T&9( es apro*imadamente i ual a <, y la e*presin para la viabilidad, se reduce para tiempos lo suficientemente randes &e*p& B <(t M<( a)

<R! esto es, la viabilidad fraccional permanece constante para la mayor parte del perodo e*ponencial de crecimiento! +i la velocidad de muerte < es i ual a la velocidad de crecimiento, , se tiene entonces un crecimiento lineal de la biomasa total)

<C!

%eactor continuo de tanque a!itado

Este tipo de reactor puede operarse en varias formas, se %n las necesidades del proceso de produccin! Quimiostato) 5eactor continuo de tanque a itado ideal >ormacin de producto 8atlisis enzimtica en reactores continuos de tanque a itado 5eactor continuo con recirculacin Quimiostatos en serie 1rocedimientos rficos de dise.o de reactores continuos en serie

El >uimiostato1 el reactor continuo ideal de tanque a!itado

El uso de reactores continuos de tanque a itado, con el fin de e*tender la duracin de un cultivo microbial, se implement en la dcada de <N?9 por GovicD y +zilard &<N?9( y 6onod &<N?9(! El $ec$o que un reactor continuo de tanque a itado se poda utilizar para mantener el crecimiento microbial en su valor de estado estacionario, el cual puede variarse desde cualquier velocidad de crecimiento $asta la m*ima max , fue un avance muy importante, ya que acab con la tradicional manera de pensar en el sentido que el tiempo para el crecimiento estacionario de los microor anismos era %nicamente posible a la m*ima velocidad, correspondiente al tiempo mnimo de

replicacin que aparece en los cultivos por lotes! 1or consi uiente, el empleo de biorreactores continuos de mezcla completa para el estudio de la fisiolo a microbial, condu'o a importantes avances en la comprensin del ciclo celular, la re ulacin metablica y la formacin de productos! #a confi uracin tpica de un reactor continuo de tanque a itado, se muestra en la fi ura <! >i ura <! +squema de un biorreactor continuo de tanque agitado. $or lo general, se controlan las velocidades de flu1o de nutrimentos al reactor, el p2 y la temperatura. 9 indica el peso de clulas secas, c & es la concentracin de sustrato y 0 es el flu1o de nutrimentos al reactor.

#a a itacin se puede lo rar por medio de impulsores o por el movimiento de la fase lquida debido al ascenso de burbu'as de as! En los sistemas aerobios, el suministro de o* eno a los microor anismos se lleva a cabo, eneralmente, por burbu'eo de aire! En el caso ideal la fase lquida est completamente mezclada, es decir, la composicin del lquido es uniforme en todos los puntos de la mezcla de reaccin! 2e forma similar, la temperatura se mantiene constante y uniforme por medio de la circulacin de a ua de enfriamiento, bien sea por serpentines que se encuentran dentro del reactor, o por el interior de una c$aqueta que rodea el recipiente de reaccin! 1or lo eneral, el p= del medio de cultivo se controla con la adicin de cido o de base! #as ecuaciones de balance de materiales se pueden formular para cada una de las variables de importancia del reactor! +i se supone el caso en el cual %nicamente un sustrato &&( limita la velocidad de crecimiento de los or anismos y que la velocidad volumtrica de crecimiento est dada por 9, se tienen las si uientes ecuaciones)

</!

<3!

<8! 8uando los flu'os volumtricos de entrada y de salida, 0e , 0sal , se mantienen constantes e i uales a 0, las ecuaciones se simplifican a) &ntese que d9/dt ya no es i ual a 9, como si sucede durante el crecimiento por lotes(

:/!

:3! #a relacin, 0/@ se denomina eneralmente como velocidad de dilucin & - (, con unidades recprocas de tiempo! Esta velocidad de dilucin es el inverso del tiempo promedio de residencia, , y es i ual al n%mero de veces que una cantidad de mezcla de reaccin equivalente al volumen del reactor pasa a travs del recipiente de reaccin, por unidad de tiempo! En estado estacionario & ++ (, las derivadas con respecto al tiempo se $acen i uales a cero, y la ecuacin para la concentracin celular tiene la solucin)

@! 8uando la corriente de alimentacin es estril &lo cual casi siempre ocurre(, 9; es i ual a cero, y las dos soluciones posibles para la ecuacin anterior, son)

A!

En el caso inusual en el cual la velocidad especfica de crecimiento del cultivo X &c&(Y es independiente de la concentracin de sustrato y, adems, es constante, la concentracin de clulas en estado estacionario & 9++( cuando la velocidad de dilucin es i ual a , es indeterminada! #a solucin de la se unda ecuacin de balance de materiales muestra que la concentracin de sustrato en estado estacionario tambin es indeterminada, no obstante que tanto 9++ como c&++ deben satisfacer)

?! Q as, es posible obtener un intervalo de valores para las concentraciones de clulas y de sustrato! Esto puede ser visto e*perimentalmente, cuando las concentraciones de entrada de sustrato son muy ba'as- tambin se observa que las concentraciones de clulas y de sustrato varan con el tiempo! Leneralmente, sin embar o, la velocidad especfica de crecimiento es funcin de la concentracin de sustrato! 8uando se utiliza la relacin de 6onod entre y c& , las ecuaciones de balance de materiales ya no se indeterminan y se obtiene)

P! Ecuacin que puede resolverse para c& )

siempre que Q de la ecuacin de balance para el sustrato se tiene)

R!

C! Q al reemplazar - K en la ecuacin anterior)

N! #a se unda solucin de estado estacionario se obtiene cuando 9++ K 9! El valor correspondiente a la concentracin de sustrato es c&++ K c&; ! Este estado estacionario se denomina como 8lavado8, puesto que las clulas ya no estn presentes en el reactor! #a velocidad de dilucin a la cual ocurre el lavado, puede $allarse e*aminando la ecuacin P! 8uando c&++ es i ual a la concentracin de sustrato en la corriente de alimentacin, se encuentra que la velocidad de dilucin es)

<9! #a m*ima velocidad de dilucin es li eramente menor que la m*ima velocidad especfica de crecimiento! +i la velocidad de dilucin es mayor que este valor, el sistema tiende a la se unda solucin de estado estacionario 9++ K 9! Esto puede observarse a partir del comportamiento de c++ - como - max , c++ se vuelve indeterminada! "abla <! )esumen de las soluciones de estado estacionario.

siempre que

es indeterminada si

#os valores de ?& son peque.os, particularmente cuando se comparan con los de la concentracin de sustrato en la corriente de entrada, c&; ! 1or ello, la concentracin de sustrato en el estado estacionario es muy peque.a e independiente de la concentracin de sustrato en la corriente de entrada! #as soluciones noBtriviales pueden aplicarse %nicamente en el caso en donde la concentracin es muc$o mayor que c&++ ! +i c&; F c&++ , la velocidad especfica de crecimiento es constante, las ecuaciones se indeterminan y pueden observarse una ran variedad de estados estacionarios! #a operacin de un reactor continuo de tanque a itado ba'o condiciones en las cuales slo un sustrato limita el crecimiento, da como resultado un valor casi constante de la concentracin de sustrato sobre un amplio intervalo de velocidades de dilucin! 4tros sustratos, los cuales se consumen a velocidades proporcionales a la velocidad especfica de crecimiento de biomasa, tambin tendrn concentraciones de estado estacionario que son independientes de - y, adems, son constantes! 1or esta razn, este tipo de operacin de biorreactores se denomina com%nmente como operacin quimiosttica &es decir, el ambiente qu"mico permanece esttico(! 8uando la velocidad de dilucin se apro*ima a max , la concentracin de clulas desciende rpidamente! #a operacin del quimiostato a velocidades de dilucin cercanas a max es e*perimentalmente complicada debido a la sensibilidad del sistema! 1eque.as variaciones de la concentracin de sustrato en la corriente de entrada, la velocidad del flu'o de alimentacin o en la velocidad de crecimiento de los microor anismos, pueden ocasionar el lavado de las clulas! #a productividad volumtrica de clulas en un quimiostato est dada por -9++ &e*presada por lo eneral, en unidades de ramos de clulas por litro de reactor por $ora(! #a velocidad de dilucin a la cual la productividad es m*ima se encuentra a partir de)

de esta forma #a concentracin de biomasa correspondiente es)

<<!

<:! +i ?& FF c&; la productividad volumtrica se reduce a :9/& maxc&; !

#omparacin entre la productividad de un cultivo por lotes y la de un cultivo continuo

#a productividad de biomasa de cultivos por lotes y continuos puede compararse ba'o las mismas condiciones siempre que c&; MM ?& ! #a solucin de la ecuacin de balance de biomasa para el cultivo por lotes puede simplificarse si se supone que max durante la fase e*ponencial del crecimiento! 2e esta forma, se obtiene el tiempo de duracin de la fase e*ponencial texp )

<@! Ecuacin que se puede or anizar en la forma)

<A! El tiempo total necesario para la fermentacin por lotes, es la suma de los tiempos de las fases de adaptacin y e*ponencial y de los tiempos empleados en vaciar, esterilizar e inocular de nuevo el reactor! Jstos %ltimos re%nen en una sola constante denominada tiempo muerto tm ! 8on base en lo anterior, el tiempo total de la operacin por lotes ser la suma del tiempo de la fase e*ponencial de crecimiento y el tiempo muerto)

<?! +i la concentracin inicial de sustrato &c&;( es i ual a la de la alimentacin al quimiostato, la biomasa producida en este tipo ser apro*imadamente :9/&c&; ! #a productividad volumtrica del reactor por lotes es por lo tanto :9/&c&; /tlotes ! #a comparacin de sta con la m*ima productividad de un quimiostato &ecuacin <<(, permite obtener)

<P!

"picamente, la relacin de la concentracin final de clulas a la concentracin de clulas en el inculo & 9/9;( es apro*imadamente i ual a <9! 1or esta razn, el cultivo continuo ofrece un mnimo de :,@ veces la productividad de una fermentacin por lotes!

-ormacin de producto
#os modelos no estructurados que describen la cintica de la formacin de producto, se pueden incorporar en las ecuaciones de balance del quimiostato! #as ecuaciones de balance de materiales de estado estacionario para biomasa, sustrato y producto, correspondientes al modelo eneral para la formacin de producto asociado y no asociado al crecimiento &aplicable a una amplia variedad de productos microbiales(, son)

</!

<3!

<8! 8on las si uientes soluciones de estado estacionario)

:/!

:3!

:8! 3a'as velocidades de dilucin favorecen la produccin de sustancias no asociadas al crecimiento, mientras que los productos asociados al crecimiento tienen un comportamiento paralelo al de la biomasa! #a productividad volumtrica est dada por)

@! 2e forma similar, la velocidad de dilucin correspondiente a la productividad m*ima, se puede encontrar $aciendo d&21(/d2 i ual a cero!

#at"lisis enzim"tica en un reactor continuo de tanque a!itado

E*isten muc$as confi uraciones de reactores continuos de tanque a itado que utilizan enzimas en una u ocasionalmente, varias reacciones! 1or lo eneral, el costo elevado de la preparacin de enzimas impide su adicin continua a la alimentacin del reactor! 8on base en lo anterior, la enzima debe retenerse dentro del reactor, ya sea evitando su remocin con el uso de una membrana de ultrafiltracin a la salida del recipiente, o por medio de la inmovilizacin de la enzima sobre soportes, los cuales se mantienen dentro del reactor por medio de una pelcula a la salida del mismo! +i las cinticas de la reaccin que est siendo catalizada son lo

suficientemente lentas, la recirculacin a velocidad elevada de la fase lquida, a travs de un reactor enzimtico de lec$o empacado, se apro*imar al comportamiento de un reactor continuo de tanque a itado! /l unos e'emplos de reactores continuos de tanque a itado para reacciones catalizadas por enzimas se presentan en la fi ura <! >i ura <! /lgunos mtodos para retener en!imas en un reactor continuo de tanque agitado( /' +n!ima inmovili!ada en forma de esferas, cuya salida del reactor se previene por medio de una pantalla en la l"nea de salida 3' )etencin por medio de un ultrafiltro #' *na recirculacin rpida a travs de un reactor de lecho empacado, produce un comportamiento cintico aproximado al de un reactor continuo de tanque agitado

El anlisis de las reacciones catalizadas por enzimas en reactores continuos de tanque a itado es un poco ms sencillo que el del crecimiento microbial y la formacin de producto! 8onsidrese una reaccin que involucra enzimas solubles que se a'ustan a la cintica de 6ic$aelis ; 6enten, con una estequiometra lobal de una mol de producto formado por mol de sustrato reaccionante & & $ (! #os balances de sustrato y de producto en estado estacionario, para esta situacin son)

<! :! Estas ecuaciones se pueden resolver para las concentraciones de sustrato de estado estacionario como una funcin de la velocidad de dilucin! #ue o se puede determinar la conversin!

@!

0na apro*imacin ms simple para el dise.o del reactor es especificar una conversin fraccional deseada de sustrato!

de donde)

A!

8on este valor de c& , se puede resolver la ecuacin < para el tiempo de residencia &</ -( necesario para la conversin correspondiente!

?!

+e pueden utilizar otras e*presiones para r&c&, c$( dentro de la ecuacin < y emplear la misma apro*imacin utilizada para encontrar el tiempo de residencia correspondiente a un rado especfico de conversin de sustrato! #a tabla < presenta las soluciones para al unas formas comunes de cinticas enzimticas!

"abla <! 0ormas cinticas y sus correspondientes tiempos de residencia, para grados espec"ficos de conversin de sustrato Q F%c&; J c&'/c&;R "iempo de residencia &</-( necesario para alcanzar un rado especfico de conversin,

E*presin de velocidad r&c& , c$( 6ic$aelis ; 6enten

Hn$ibicin por sustrato

Biorreactor continuo de tanque a!itado con recirculacin

8uando en un reactor continuo de tanque a itado se disminuye el tiempo de residencia, la productividad celular aumenta $asta alcanzar un valor m*imo! +in embar o, si el tiempo de residencia disminuye li eramente despus de alcanzar este valor, la velocidad de eneracin de clulas es inferior a la velocidad de salida de clulas en el efluente del reactor y la productividad desciende rpidamente debido al ,lavado, de las clulas del reactor! 0n procedimiento para aumentar la productividad es recircular las clulas despus de separarlas de la corriente de salida por medio de un filtro u otro sistema de separacin &fi ura <(! #a velocidad de crecimiento es proporcional a la concentracin celular 9, y al aumentar 9 aumenta la productividad! 1or consi uiente, el reactor continuo de tanque

a itado se puede operar en condiciones estables slo si e*iste una recirculacin parcial y una corriente efluente +, tal como se muestra en la fi ura <! >i ura <! )eactor continuo de tanque agitado con recirculacin

1ara esta situacin, el balance de materiales del reactor es)

<! 2onde) 0 es el afluente al reactor9/ , 9 son las concentraciones celulares en el afluente y en reactor, respectivamente@ es el volumen de la mezcla de fermentacin en el reactor y

es la velocidad especfica de crecimiento celular!

En estado estacionario, d9/dt se $ace i ual a cero y si se supone que el afluente es estril & 9/ K 9(, la ecuacin anterior se convierte en)

:! /l definir la relacin de recirculacin, 3 K +/0, la ecuacin anterior queda)

@! 2onde - es la velocidad de dilucin &0/@(! +i 3 K < entonces + K 0, por consi uiente, no $abra recirculacin y la velocidad especfica de crecimiento sera i ual a la velocidad de dilucin! +i la velocidad de crecimiento se a'usta a la cintica de 6onod, se obtiene la si uiente e*presin para evaluar la concentracin de sustrato en estado estacionario, despus de reemplazar K 3- en la ecuacin de 6onod)

A!

Ecuacin que es vlida %nicamente si rendimiento :9/& !

max

/- M 3! #a concentracin de clulas en el reactor se determina a partir del coeficiente de

?! #a recirculacin de clulas se usa especialmente en los procesos de fermentacin para la produccin de etanol y en el tratamiento anaerobio de a uas de desec$o!

>uimiostatos en serie
En los cultivos por lotes, cada etapa del crecimiento microbial es el resultado del cambio en la fisiolo a de la clula- cada etapa depende de una precedente! 1or otra parte, en los cultivos continuos, el estado fisiol ico ya no est determinado por uno anterior, ms bien, est controlado por la velocidad de dilucin! 1or lo anterior, el cultivo no posee una ,$istoria,! En situaciones en las cuales el cultivo debe pasar a travs de varios estados fisiol icos con el fin de producir la sustancia de inters, una combinacin de varios tipos de reactor proveer la confi uracin de reaccin ptima, definida como el volumen de reactor ms peque.o para un rado especfico de conversin! En los casos en donde la velocidad ptima de formacin de producto puede presentarse a condiciones diferentes de temperatura y p= de las del crecimiento, dos o ms reactores de tanque a itado operados en serie, permiten condiciones ptimas para el crecimiento y la formacin de producto en cada reactor! 8uando se emplea una mezcla de sustratos &como en el caso de dos sacridos, o un sustrato como la lactosa, la cual se $idroliza para formar dos sacridos(, se consume primero el sustrato preferencial- el uso de dos reactores de tanque a itado en serie permite que el sustrato preferido se consuma completamente en el primer reactor para que el se undo sustrato se consuma posteriormente, en el se undo reactor, minimizando as, el volumen de reaccin necesario! / continuacin se e*amina el comportamiento de estado estacionario de quimiostatos en serie con m%ltiples corrientes de alimentacin! El sistema ob'eto de estudio posee dos etapas, con una se unda alimentacin en la %ltima etapa! #a confi uracin se presenta en la fi ura <! >i ura <! -os quimiostatos en serie, con alimentacin separada al segundo reactor. &e indican las concentraciones de estado estacionario de biomasa y de sustrato

+e pueden formular los balances de materiales de estado estacionario, tanto para las clulas como para el sustrato en cada etapa del sistema! Gtese que las velocidades especficas de crecimiento sern diferentes debido a las distintas concentraciones de sustrato y condiciones ambientales &tales como el p=(, en cada reactor! 1ara simplificar el anlisis, se supone que los valores de las constantes de la ecuacin de 6onod, max y ?& , son las mismas en cada etapa)

</!

<3! 1ara la se unda etapa)

:/!

:3! 5eemplazando -A K 0A/@A y -> K &0A O 0>o(/@> en la ecuacin :/, se obtiene)

@! Es decir, la velocidad de crecimiento en la se unda etapa es siempre menor que la velocidad de dilucin lobal & ->( en esa etapa! 8ombinando la ecuacin :/ y la ecuacin :3, y solucionando para 9> , se tiene)

A!

+i en la se unda etapa se utiliza el modelo de 6onod, para describir la velocidad especfica de crecimiento)

?! #a concentracin de sustrato de estado estacionario c&> se $alla reemplazando la e*presin para 9> en la ecuacin :3 y solucionando la ecuacin que resulta! +lo la raz positiva tiene si nificado!

P!

+i no $ay flu'o de entrada en la se unda etapa, las soluciones de estado estacionario se pueden encontrar a partir de la e*presin)

R/! R3! R8! Leneralmente 9A++ y 9>++ no difieren si nificativamente y la velocidad especfica de crecimiento en la se unda etapa ser apro*imadamente i ual a cero! +in embar o, si se presenta in$ibicin por producto, las velocidades especficas de crecimiento pueden tener randes variaciones!

Procedimientos !r"ficos de dise=o

8uando no se dispone de un modelo cintico que describa la dependencia de la velocidad de crecimiento en funcin de las concentraciones de sustrato o de producto, se puede emplear un procedimiento rfico basado en informacin obtenida de un cultivo por lotes de la concentracin de clulas, sustrato o producto- para predecir el comportamiento de estado estacionario de uno o ms quimiostatos dispuestos en serie! 8onsidrese la informacin de la concentracin de clulas, obtenida de un cultivo por lotes, en funcin del tiempo &fi ura <(! 1or diferenciacin rfica de la informacin, se puede encontrar d 9/dt como funcin del tiempo! 2el balance de materiales para un cultivo por lotes &ecuacin <(, se observa, que una lnea recta que cruce la rfica de d 9/dt contra 9, tendr una pendiente de ! )

<! En una operacin quimiosttica con velocidad de dilucin -, ser i ual a - en estado estacionario! 1or ello, una lnea recta con pendiente - trazada desde el valor de la concentracin de clulas a la entrada 9; &la cual, eneralmente, ser cero en un quimiostato simple(, interceptar la curva de d9/dt contra 9 en el punto donde K - ! El valor correspondiente de 9, &9A(, ser el valor de la concentracin de estado estacionario de clulas en el reactor! +i se e*tiende el anlisis anterior a un sistema multietapa, se podr trazar una lnea con pendiente -> , la velocidad de dilucin en la se unda etapa, desde el punto &9A , 9( que interceptar la curva en el punto correspondiente al valor de la concentracin de estado estacionario de clulas en el se undo reactor, 9> !

%eactores de flu.o en pistn y de lecho empacado

El e*tremo opuesto al reactor de mezcla completa es el reactor de flu1o en pistn, en el cual, el fluido se desplaza a lo lar o de un tubo o canal de forma que se presenta un mezclado imperceptible en la direccin del flu'o &la direccin a*ial(, pero $ay una mezcla bastante buena en la direccin radial! "ales reactores son comunes en la industria qumica, pero por razones que se considerarn ms adelante, son poco utilizados para el crecimiento de clulas! +in embar o, estos reactores se utilizan frecuentemente para clulas inmovilizadas y reacciones con enzimas! #a isomerizacin de lucosa a fructosa, que es un paso clave en la produccin de 'arabe de maz con un elevado contenido de fructosa, es un e'emplo importante de un proceso comercial que se lleva a cabo en un reactor de lec$o de enzimas inmovilizadas! #os dia ramas esquemticos de un reactor de flu'o en pistn y de uno de lec$o empacado, se presentan a continuacin) >i ura <! -iagramas esquemticos de un reactor de flu1o en pistn y de uno de lecho empacado

8onsidrese primero un reactor de flu'o en pistn sin catalizador y que contiene clulas o una enzima! +i la velocidad superficial en la direccin a*ial &direccin !( es us &la velocidad superficial es la velocidad lineal promedio que el fluido debera tener si no $ubiera empaque en el reactor y es i ual a 0// , donde / es el rea transversal del reactor y 0 es el flu'o volumtrico dentro del mismo(, se pueden escribir las si uientes ecuaciones de estado estacionario para el balance de clulas y de sustrato)

<! 2onde r9 y r& son las velocidades de reaccin basadas en los vol%menes de lquido! +i la velocidad a*ial es constante, como debera ser el caso si la densidad del fluido permanece constante, estas ecuaciones se convierten en)

:! #as cuales pueden reescribirse en funcin de un tiempo constante caracter"stico &K ! / us (

@!

1or consi uiente, las ecuaciones se reducen a las de un reactor por lotes, e*cepto que reemplaza al tiempo t ! #as condiciones iniciales y finales sobre las cuales estas ecuaciones se inte ran, son las si uientes) !K9 !K6

K9 K 6 / us

9 K 9; 9 K 9final

c& K c&; c& K c&final

/s, las soluciones para las ecuaciones anteriores para varias e*presiones de velocidad &por e'emplo, la ecuacin de 6onod( pueden tomarse directamente de los resultados para un reactor por lotes! El reactor de flu'o en pistn ofrece un rado de conversin de sustrato mayor que el de un reactor de tanque a itado de i ual volumen &y por lo tanto, i ual tiempo de residencia(, porque la velocidad de reaccin en un reactor de tanque a itado ser menor que en un reactor de flu'o en pistn! En un reactor de tanque a itado, la concentracin de sustrato cae inmediatamente al valor de salida y la velocidad de reaccin se determina por este valor! 8on una cintica del tipo 6onod, la velocidad decrece al disminuir la concentracin de sustrato- por ello, el reactor de flu'o en pistn ofrece la venta'a de mayores velocidades de reaccin que en un reactor de tanque a itado, debido a que la concentracin de sustrato desciende desde su valor inicial a lo lar o de la direccin a*ial! #as principales dificultades en la operacin de un reactor de flu'o en pistn con clulas suspendidas radican en la necesidad de proveer un inculo continuo de clulas &9; debe suministrarse a la entrada del reactor(, y en el mantenimiento de un p= constante as como en el suministro de o* eno a lo lar o de la lon itud del reactor! Estos problemas eneralmente son tan e*tremos que e*isten pocos e'emplos de reactores biol icos perfectos de flu'o en pistn! /l unos tipos de reactor pueden apro*imarse como lmite, al comportamiento de flu'o en pistn- por e'emplo, un reactor con circulacin pneumtica de lquido con una fuerte circulacin $acia arriba de lquido, o un ran tanque de tratamiento de a uas de desec$o! En contraste con el crecimiento microbial, los reactores de flu'o en pistn y de lec$o empacado se emplean com%nmente con enzimas libres e inmovilizadas! /qu las necesidades de suministro de o* eno y control de p= no se aplican usualmente, ya que muc$as reacciones enzimticas no requieren o* eno y no eneran cidos o bases! 8omo se mencion, una de las mayores aplicaciones industriales de este tipo es la isomerizacin de lucosa a fructosa para la produccin de 'arabe de maz con alto contenido de fructosa! Esta reaccin est catalizada por lucosa isomerasa inmovilizada sobre un soporte, tal como al%mina, en reactores de lec$o empacado! En un reactor de lec$o empacado, la velocidad a*ial del fluido ser mayor que en un reactor abierto de flu'o en pistn y depende de la fraccin de espacio vaco , definida como) K 7olumen libre del reactor/7olumen total del reactor A!

K < ; &7olumen total de partculas/7olumen total del reactor( y la velocidad de fluido intersticial, vi , es) vi K >/&rea de la seccin transversal( K >/&7/#( ?!

#a velocidad intersticial se emplea lue o para calcular el tiempo de residencia del lquido ! Jste tiene el valor K &@/0 (! En el caso de enzimas en solucin, la fraccin de espacio vaco ser i ual a la unidad! 0n valor tpico de para enzimas inmovilizadas sobre soportes esfricos es apro*imadamente i ual a 9,A! En el caso de enzimas libres o inmovilizadas, el balance de materia para el sustrato tiene la forma)

P! y es posible la inte racin analtica de esta ecuacin para al unas cinticas comunes! #a tabla < muestra e'emplos de la e*presin del tiempo de residencia en funcin de los parmetros de la e*presin de velocidad! Gtese que @[5 es el producto de @5 &m*ima velocidad de reaccin por unidad de volumen de catalizador Blquido ms slidoB( y el volumen de catalizador por unidad de volumen de lquido &<B (/ ! 2e esta manera, @[5 K @5&<B (/ ! "abla <! Tiempo de residencia en funcin de la conversin de sustrato Q F %c&; Jc&'/c&;R para reacciones en!imticas en reactores de flu1o en pistn y de lecho empacado E*presin de velocidad 6ic$aelis ; 6enten "iempo de residencia & K #/us (

Hn$ibicin por sustrato

%eactor por lotes alimentado +Fed-batch,

En al unos procesos industriales, tales como la produccin de levaduras para panadera y antibiticos, el reactor puede operarse de manera semicontinua, con una corriente de entrada de alimentacin pero sin una corriente de salida &fi ura <(- este tipo de operacin permite que la concentracin de sustrato se pueda mantener en al %n valor predeterminado! >i ura <! )epresentacin esquemtica de un reactor por lotes alimentado. 0 es la corriente de entrada, c &/ la concentracin de sustrato en la alimentacin, @ es el volumen de la me!cla de fermentacin y 9 la concentracin de biomasa en la me!cla de fermentacin

En la produccin de levaduras para panadera, por e'emplo, un e*ceso de lucosa conduce al inicio impetuoso de la fermentacin y de la produccin de etanol, lo cual reduce la produccin de clulas! 6ediante el suministro lento de lucosa a una velocidad tal, que pueda ser consumida por completo por la levadura, la concentracin de lucosa residual se mantiene en apro*imadamente cero y se obtiene la m*ima conversin de sustrato! 2e forma similar, en la produccin de penicilina, es com%n obtener primero una elevada

concentracin de clulas en el reactor durante la fase e*ponencial del crecimiento, en el cual se produce muy poca penicilina, y lue o el suministro de la fuente de carbono y de nitr eno al cultivo se $ace a una velocidad que i uala los requerimientos biosintticos y de mantenimiento del or anismo &los requerimientos de mantenimiento para la produccin de penicilina son bastante altos(- durante la alimentacin de sustrato, el volumen del reactor se incrementa! En al %n punto, parte del volumen del reactor se retira &por lo eneral entre el <9 y el :?T( y el proceso se repite- la mezcla retirada contiene producto a una elevada concentracin, lo cual es venta'oso en la recuperacin del mismo! Este tipo de operacin es una forma intermedia entre la operacin por lotes y la continua, incrementando la duracin de la fermentacin por lotes y de la productividad lobal del reactor! En la tecnolo a de operacin por lotes con alimentacin repetida, el fermentador no se descar a completamente despus de la reaccin- el residuo se usa como inculo para la si uiente corrida! / continuacin se analiza la operacin por lotes con alimentacin, con velocidades de alimentacin constantes y la operacin por lotes con alimentacin repetida! El punto de partida es la formulacin de los balances de materiales para la biomasa, el sustrato y el producto 'unto con un balance total de materiales que es necesario puesto que el volumen del reactor cambia con el tiempo! 8on la suposicin que la densidad del lquido es constante, estas ecuaciones son

</!

<3!

<8!

<2! 2onde) c&/ es la concentracin de sustrato en el afluente y

 es la velocidad especfica de formacin de producto!

+i por el momento se omite la formacin de producto, las ecuaciones de balance de materiales son)

:/!

:3!

:8! Estas ecuaciones son similares a las de un quimiostato, con una importante diferencia- el trmino 0/@, anlo o a la velocidad de dilucin -, cambia con el tiempo, puesto que @ aumenta, mientras que - es constante para la operacin quimiosttica en estado estacionario! #os balances de clulas y sustrato se pueden combinar e inte rar para obtener)

@! +i la concentracin de sustrato en el afluente c&/, satisface la ecuacin)

A! +e tiene)

?!

#o cual tambin es cierto para tiempos muy lar os &es decir, para t MM @/0(, en los cuales el trmino e*ponencial es peque.o! / continuacin se analiza un caso especial! +i la velocidad de alimentacin 0 es constante, se puede esperar, por comparacin con el comportamiento del quimiostato, un estado cuasiestacionario en el perodo en donde la concentracin celular es constante con respecto al tiempo, es decir, d9/dt 9! #o anterior requiere que la velocidad especfica de crecimiento , a 0/@, debe disminuir como @ se incrementa en el tiempo! +i decrece continuamente, la concentracin de sustrato debe disminuir con el tiempo &por esto d c&/dt no puede ser cero(! 5eemplazando la relacin de 6onod para , se obtiene

P!

#a masa total de clulas &9@ ( con estas condiciones est dada por

constante 1or esta razn, la masa total de clulas crece linealmente con el tiempo!

R!

/$ora, se contempla como la velocidad especfica de crecimiento debe variar ba'o condiciones de estado cuasiestacionarias! 8omo 0 es constante, @ crece linealmente con el tiempo &@ K @; O 0t( y

C! Hnicialmente, cuando @ @;

N!

8uando el tiempo se $ace mayor el volumen crece y @ MM @; , por ello)

<9!

#a velocidad especfica de crecimiento decrecer rpidamente al comienzo y lue o a una velocidad muc$o ms lenta a medida que transcurra el tiempo! Esto puede observarse numricamente al solucionar las ecuaciones de balance de biomasa y sustrato! 1ara simplificarlas, se introducen las si uientes variables adimensionales)

#os balances de materiales se convierten en)

<<! +i se considera el caso en el cual 0 no es constante y vara con el tiempo, se puede seleccionar 0 de tal forma que 0/@ sea constante, indicado por ! Esto implica

por lo tanto

<:!

1or lo anterior, el sistema con alimentacin e*ponencial alcanzar las concentraciones de estado estacionario correspondientes a las del quimiostato! "anto 9 como c& se pueden mantener en valores constantes!