Guia de Hematologia Clinica

ATENCON Y CUDADOS EN LA GUA DE MANEJO HEMATOLOGA CLNCA
PRESTACON DE SERVCOS DE SALUD CODGO: AC ADX G003

APOYO DAGNOSTCO VERSON: 01-2007
INDICE
1. NTRODUCCON 3
2. TOMA DE MUESTRAS
3
3. CUADRO HEMATCO
3
3.1 HEMOGLOBNA (Hb)
4
3.2 HEMATOCRTO 4
3.3 NDCES ERTROCTAROS 4
3.4 RECUENTO CELULARES 4
3.4.1 RECUENTO HEMATES 4
3.4.2 RECUENTO DE LEUCOCTOS
4
3.4.3 RECUENTO DE PLAQUETAS
5
3.5 VELOCDAD DE SEDMENTACON GLOBULAR (VSG) 5
3.5.1 MONTAJE E NTERPRETACON 5
3.5.2 ALTERACONES 5
3.6 NDCES ERTROCTAROS SECUNDAROS
6
3.7 CUADRO HEMATCO AUTOMATZADO 6
3.7.1 PARAMETROS CALCULADOS
6
3.7.2 DFERENCAL LEUCOCTARO 7
3.7.3 HSTOGRAMAS 7
3.7.3.1 PLAQUETAS 7
3.7.3.2 ERTROCTOS
7
3.7.3.3 LEUCOCTOS
7
3.8 PARAMETROS ERTROCTAROS 7
3.9 PARAMETROS LEUCOCTAROS 8
3.10 PARAMETROS PLAQUETAROS 8
3.11 VALORES DE REFERENCA
9
4. ANALZADOR DE HEMATOLOGA STKS DE BECKMAN COULTER
9
4.1 PARAMETROS MEDDOS Y CALCULADOS
10
4.1.1 GUA RAPDA DE OPERACN COULTER STKS 11
4.1.2 PROCEDMENTOS DE MANTENMENTO COULTER STKS
15
4.1.2.1 MANTENMENTO SEMANAL
15
4.1.2.1.1 MANTENMENTO MENSUAL 16
4.1.2.2 PROCEDMENTO DE MANTENMENTO 16
5. FROTS DE SANGRE PERFERCA 17
5.1 METODO DE LOS DOS PORTA OBJETOS
17
5.2 REACTVOS PARA LA COLORACON
18
Elabor: Ligia Estella Ome
Bernal
Revis: Celmira Angel Valid: Luis Gerardo Cano Villate

5.2.1 COLORACON
18
5.2.2 LECTURA DEL RECUENTO DFERENCAL DE LEUCOCTOS
18
5.2.2.1 CARACTERSTCAS MORFOLOGCAS DE LOS LEUCOCTOS 19
5.3 MORFOLOGA DE LOS GLOBULOS ROJOS
19
5.3.1 ALATERACONES MORFOLOGCAS ERTROCTARAS 19
5.3.1.1 ALTERACONES DEL TAMAO (Anisocitosis) 20
5.3.1.2 MACROCTOSS 20
5.3.1.3 MCROCTOSS 20
5.3.1.4 ALTERACONES MORFOLOGCAS (Poiquilocitosis)
20
5.3.1.5 ALTERACONES DEL COLOR
20
5.3.1.6 HPOCROMA
20
5.3.1.7 POLCROMATOFLA
20
5.4 RANGOS DE ANSOCTOSS DE A CUERDO AL VCM 20
5.5 RANGOS DE CUNATFCACON DE LOS GLOBULOS ROJOS
20
5.6 NORMOBLASTOS 20
6. RECUENTO DE RETCULOSTOS 21
6.1 FUNDAMENTOS DE METODO
21
6.2 REACTVOS 21
6.3 MUESTRA 21
6.4 PROCEDMENTO 21
7. HEMOSTASA Y COAGULACON 22
7.1 TEMPO PARCAL DETROMBOPLASTNA 22
7.2 TEMPO DE PROTROMBNA (PT) 22
7.3 DESCRPCON DEL NSTRUMENTO ACL 300 PLUS
23
7.4 FUNCONES DEL TECLADO
23
7.4.1 TECLAS OPERATVAS
23
7.4.2 TECLAS DE DECSON 24
7.5 PUESTA EN MARCHA
24
7.6 EL PURGADO
24
8. CALBRACON DEL TEMPO DE PROTROMBNA 25
8.1 PROCESAMENTO DE MUESTRAS
25
8.2 MANTENMENTO 26
9. BBLOGRAFA 27
Bernal
2
HEMATOLOGIA CLINICA
1. INTRODUCCION
Un correcto procedimiento, en el anlisis de los diferentes compuestos sanguneos,
proporciona una ayuda eficaz en el diagnstico de las diferentes patologas. Este
procedimiento, inicia desde la toma de la muestra hasta la entrega del resultado al
medico.
Este manual, es una gua practica de los procedimientos, recomendaciones, y
explicaciones, de cmo es el manejo y los pasos a seguir, de las muestras que llegan
para ser analizadas en parmetros referentes a la hematologa.
2. TOMA DE MUESTRAS
La responsabilidad de un buen anlisis de los componentes sanguneos, comienza en
la toma de la muestra, este es el paso ms importante, pues, de la cantidad de
muestra y rapidez con que llegue al laboratorio depende un adecuado anlisis.
La persona encargada de la toma de la muestra, debe tener una serie de precauciones
para su recoleccin manteniendo las reglas de esterilidad, de bioseguridad y evitarle
perturbaciones al paciente.
Los materiales utilizados para la recoleccin de la muestra de un anlisis hematolgico
son:
Agujas estriles y desechables.
Tubos al vaco, si se utiliza el sistema venojet, y a presin atmosfrica si se
utilizan agujas normales.
Bernal
3
Anticoagulantes EDTA 1-2 mg/ml sangre o citrato de sodio 3.8%.
Alcohol
Algodn
Lo primero e indispensable que se debe realizar, es rotular el tubo de recoleccin con
el nombre del paciente, historia clnica, servicio que procede, fecha y nmero de
radicacin asignado en el laboratorio.
La puncin se realiza, por lo general, en la parte anterior del brazo, en el pliegue del
codo. Se debe limpiar la zona de venopuncin, con un algodn impregnado de alcohol,
del centro hacia fuera en crculos.
Las muestras deben ser procesadas en el menor tiempo posible y lo ms conveniente
es refrigerarlas mientras esto sucede.
3. CUADRO HEMATICO
Sin duda alguna el cuadro hemtico (CH), es de las pruebas ms solicitadas al
laboratorio clnico como un perfil de exmenes relacionados con los diferentes
elementos celulares en la sangre y seguimiento de entidades hematolgicas como no
hematolgicas.
El CH se basa en la determinacin de hemoglobina, hematocrito, recuentos celulares,
morfologa globular, velocidad de sedimentacin, e ndices eritrocitarios secundarios.
3.1 Hemoglobina (Hb) Es un pigmento respiratorio de la naturaleza proteica que
constituye el 95% del peso seco eritrocitario. A travs de esta, el hemate, realiza su
funcin transportadora de oxgeno desde los pulmones a los tejidos.
La determinacin de concentracin de hemoglobina, es de criterio fundamental, para el
diagnstico de una anemia. Los mtodos, se basan en las propiedades fsico-qumicas
de la hemoglobina. Desde 1967, se recomienda el mtodo colormetro de la
cianometahemoglobina (Hb + k3Fe(CN)6 Hi + CNKHiCN) como el mas fiable.
3.2 Hema!o"#i!o Es la relacin, entre el volumen de la masa de eritrocitos y la masa
total de la sangre. Refleja la concentracin de los eritrocitos, ms no la masa total de
estos. El hematocrito se expresa en porcentaje o preferiblemente de acuerdo al
sistema internacional de unidades. La relacin entre el Hto. Y Hb. En la clnica
contribuye al diagnstico de la anemia.
Mon!a$e man%al Llenar un capilar hasta las 2/3 partes aprox., sellando la
parte inferior con plastilina y llevarlo a la micro centrfuga, por 5 a 10 minutos
entre 10000 y 5000 rpm respectivamente. Se lee con una tabla estndar, y se
informa en porcentaje %.
3.3 &n'i"e( e#i!#o"i!a#io( El hematocrito, la concentracin de hemoglobina y el
recuento de glbulos rojos, se relacionan entre s mediante los llamados ndices
eritrocitarios, de gran utilidad en la orientacin diagnostica de una anemia. Estos
ndices son:
* Volumen Corpuscular Medio (VCM).
* Hemoglobina Corpuscular Media (HCM).
* Concentracin Corpuscular Media de Hemoglobina (CHCM).
Bernal
4
El tamao d los glbulos rojos, ser otra variable que influye en la valoracin del
hematocrito, si los glbulos rojos son muy pequeos, ocupan menor volumen y de
igual manera si son mas grandes ocuparan mayor volumen, ambas situaciones de
hecho son patolgicas y cursarn con estado anmico.
3.) Re"%en!o "el%la#e( Los estudios cuantitativos de los elementos formes de la
sangre (eritrocitos, leucocitos y plaquetas), se refieren a la concentracin de cada uno
de ellos en un microlito de sangre.
3.).1 Re"%en!o 'e *ema!+e( El mtodo tradicional, es mediante la cmara cuenta
glbulos, presentando un error excesivo. En actualidad el empleo de mtodos
electrnicos para el recuento celular da una mayor precisin y exactitud. El descenso
del numero de hemates, va con una disminucin de la concentracin de hemoglobina
y puede ser debido a una hemorragia, hemlisis o a una falta de formacin celular a
nivel de mdula sea.
3.).2 Re"%en!o 'e le%"o"i!o( Se utiliza la solucin de Turk (1:10), que tie
ligeramente el ncleo y elimina los hemates por hemlisis. Las proporciones son:
0.38ml de solucin de Turk y 20 / de sangre, se mezcla, se monta en la cmara de
Neubauer, en el microscopio se hace el conteo, se multiplica por 50 y obtenemos el
recuento de leucocitos.
3.).3 Re"%en!o 'e ,la-%e!a(: Las plaquetas son fragmentos de clulas de 2 a 4
micras de dimetro, son de color azul con grnulos prpura centrales. El recuento de
plaquetas se basa en la observacin en un frotis de sangre y el conteo de las
plaquetas en 10 campos del mismo, en una zona donde los glbulos apenas se toquen
entre s y en nmero sean mas o menos cien. Se hace la sumatoria de las plaquetas
contadas en los 10 campos y se realiza el promedio y este resultado se multiplica por
22.000. El resultado se informa como nmero de plaquetas/mm3.
3.. /elo"i'a' 'e (e'imen!a"i0n glob%la# (/SG): Las propiedades fsico-qumicas
en hematologa son fundamentales tres:
1. La velocidad de sedimentacin globular.
2. La viscosidad plasmtica y de la sangre total.
3. El volumen total de la sangre, el volumen plasmtico y el eritrocitarios.
Desde el punto de vista fsico, la velocidad de sedimentacin globular constituye una
medida de agregabilidad de los hemates y depende fundamentalmente de los
siguientes factores:
Tamao de los hemates o VCM.
Diferencia de densidad entre los hemates y el plasma.
Viscosidad plasmtica (concentracin de fibringeno y/o globulinas).
Temperatura ambiente.
LA VSG es constante, gracias al equilibrio entre el efecto de la albmina y de las
restantes protenas del plasma.
3...1 Mon!a$e e in!e#,#e!a"i0n: Se llena el tubo de Wintrobe de sangre sin burbujas,
con la ayuda de la aguja de Pasteur, y una jeringa, hasta la marca O. Colocar en un
Bernal
5
soporte vertical y al cabo de una hora, se lee en la escala descenderte, la cantidad de
milmetros cbicos que sedimento la sangre.
La sedimentacin globular se realiza en tres etapas:
1. Periodo inicial: agregacin (10 minutos) hemoaglutinacin o tendencia de los
hemates a formar agregados en forma de pilas de monedas.
2. Sedimentacin rpida o desplazamiento de los hemates hacia el fondo del
recipiente, a velocidad constante (40 minutos).
3. Perodo final: acumulo de hemates en el fondo del recipiente (10 minutos).
La etapa ms importante es la hemoaglutinacin porque de esta depende todo el
proceso.
3...2 Al!e#a"ione( Los hemates pequeos, o en nmero bajo, y el aumento de
la concentracin plasmtica de ciertas protenas como: el fibringeno, y las
globulinas, la sfilis, la artritis, TBC, y la hemodilucin son las principales
causas de un aumento.
La VSG disminuye en: insuficiencia cardiaca congestiva, hipofibrinogenemia y
alteraciones congnitas eritrocitarias, entre otras patologas.
3.1 &n'i"e( e#i!#o"i!a#io( (e"%n'a#io(: Los ndices eritrocitarios llamados
secundarios, son los que relacionan el hematocrito con el nmero de
hemates y la concentracin de hemoglobina, denominada a su vez ndices
eritrocitarios primarios. Son fundamentalmente tres:
a. Volumen Corpuscular Medio (VCM): Es el valor medio del volumen de cada
hemate. Se calcula a partir del hematocrito y el valor de hemates as:
VCM = Hematocrito / Recuento de glbulos rojos.
La unidad es el fentolitro (fl) y la cifra normal es de 85+-10fl.
b. Hemoglobina Corpuscular media (HCM): Expresa el valor medio contenido
de hemoglobina que existe en cada hemate.
Se determina mediante el HCM = concentracin de la hemoglobina en sangre total y el
numero de hemates por litro. La unidad es el pico gramo.
c. Concentracin de Hemoglobina Corpuscular Media (CHMC): Es la
concentracin de hemoglobina de un decilitro de hemates, y se calcula con
la concentracin de hemoglobina por litro de sangre y el valor del
hematocrito.
3.2 C%a'#o *em3!i"o a%!oma!i4a'o: A travs de la historia tecnolgica, el CH,
ha ganado un nivel de precisin como de lo parmetros que lo constituyen.
Los mtodos convencionales conocidos tambin como manuales, aparte de
ser poco exactos aportan pocos parmetros.
Varias tecnologas realizan el CH electrnico, informando parmetros internacionales
tales como: RBC (recuento de rojos), WBC (recuentos de leucocitos), PLT (recuento
de plaquetas), HGB (hemoglobina) y HCT (hematocrito).
Bernal
6
3.2.1 5a#3me!#o( "al"%la'o(: El VCM, MCH, MCHC, amplitud de distancia
Eritrocitaria (RWD), su aumento indica una poblacin de eritrocitos con anisocitosis,
volumen plaquetario medio (MVP), sus valores elevados indican, una adecuada
respuesta medular en caso de Trombocitopenia.
El MCV y RDW tienen una gran utilidad clnica ya que permiten enfocar el diagnstico
del paciente con anemia.
MCV bajo, RDW normal: deben descartarse anemias de enfermedad crnica y
talasemia.
MCV bajo, RDW alto: debe descartarse anemias de enfermedad crnica,
leucemia, hemorragia aguda.
MCV normal, RDW alta: deben descartarse anemia aplsica y poblacin
heterognea.
MCV alto, RDW alto: deben descartarse anemia megaloblstica, linfoctica
crnica.
3.2.2 Di6e#en"ial le%"o"i!a#io: Distingue tres poblaciones, estas son:
1. Linfocitos (LYMPH).
2. Neutrfilos (NEUT).
3. Clulas mixtas (MXD): Sumatoria de los eosinfilos, basfilos y monocitos. Si
estas clulas son ms de un 6% de los leucocitos o se detecte otra
anormalidad, el laboratorio informara un diferencial manual.
3.2.3 Hi(!og#ama( Suministran datos sobre el tamao promedio de las
partculas o clulas, la distribucin de las mismas sobre el tamao y la
presencia de subpoblaciones. En estas condiciones el histograma puede
ser considerado como una forma grfica de reportar el CH. Los
histogramas muestran el tamao y frecuencia relativa de las plaquetas,
eritrocitos y leucocitos.
3.2.3.1 5la-%e!a(: aparicin de un nuevo pico a la derecha de las plaquetas,
deben descartarse eritrocitos, Microcitos y fragmentos Plaquetarios.
3.2.3.2 E#i!#o"i!o(: Detecta transfusin reciente o anemia por diferencia nutricional
bajo tratamiento.
3.2.3.3 Le%"o"i!o(: aumento del pico de linfocitos, deben descartarse linfocitos.
Aumento de clulas medianas, descartar Eosinofilia, Basofilia o
Monocitosis. Aumento del pico de Neutrfilos, descartar Neutrofilia y
desviacin a la izquierda de granulositos.
Convencionalmente, los parmetros del Hemograma pueden ser reunidos en tres
grupos de acuerdo con los componentes celulares de la sangre. Son los parmetros
eritrocitarios, Leucocitarios y Plaquetarios.
3.7 5a#3me!#o( E#i!#o"ia!#io(: Son aquellos relacionados ntimamente con los
eritrocitos. En combinacin de los parmetros eritrocitarios es el punto de
partida para la clasificacin morfolgica de las anemias, estos son:
Recuento de Eritrocitos.
Hemoglobina.
Bernal
7
Hematocrito: El hematocrito electrnico es el resultado de relacionar el nmero
de eritrocitos con el tamao de los mismos.
Promedio Eritrocitario: Conocido como promedios corpusculares este se
obtiene por mediacin directa de los glbulos rojos al momento de hacer el
recuento de eritrocitos, en un promedio de 75.000 clulas.
El promedio de Hemoglobina corpuscular (PCPC): Se obtiene con frmulas
matemticas incorporadas al computador del equipo sobre la base del recuento
de eritrocitos, el hematocrito y hemoglobina.
Ancho de distribucin de los eritrocitos (ADE): Corresponde al coeficiente de
variacin en el tamao de los eritrocitos que se obtiene por mtodos
electrnicos, clasificando morfolgica las anemias.
El histograma de eritrocitos da la informacin necesaria para determinar el promedio
volumen corpuscular (PVC) y el ADE. Muestra el tamao normal de las clulas rojas.
El histograma tpico, muestra una poblacin entre 30 y 130fl con una distribucin
Gaussiana, y una segunda poblacin, ms pequea, conocida como dedo entre 130
y 185fl que aparece a la derecha de la poblacin principal. Los dedos del histograma
presentan eritrocitos aglutinados o artefactos. Mediante el histograma es posible
identificar varias poblaciones de eritrocitos cunado se presentan.
3.8 5a#3me!#o( le%"o"i!a#io(: Conocido como leucograma, corresponden al
recuento total y diferencial de leucocitos, siendo este, criterio indispensable
para definir las leucocitosis y la leucopenia. Son bien conocidas las
alteraciones en el recuento total de leucocitos en los procesos infecciosos.
Recuento diferencial de leucocitos: Los leucocitos son sometidos a un agente
ltico que acta sobre la membrana y el citoplasma, provocando un
encogimiento de la membrana celular alrededor del ncleo. De acuerdo al
volumen del ncleo, el histograma de leucocitos muestra tres poblaciones.
La primera poblacin ncleos entre 30 y 90 fl, constituida por linfocitos. La
segunda poblacin ncleos entre 90 y 160 fl en la parte baja del histograma y
representa los monocelulares (monolitos). La tercera poblacin, con ncleos
entre 160 y 450 fl. Es la zona ms amplia del histograma y corresponde a los
granulocitos.
A travs de estas tres poblaciones celulares se pueden ubicar otras poblaciones
(anormales), que son sealizadas por el instrumento. De acuerdo a la distribucin de
los histogramas se obtiene el recuento diferencial electrnico de leucocitos. El
recuento diferencial obtenido por esta tecnologa se caracteriza por una alta
especificidad y sensibilidad (97%), muy superiores a los mtodos convencionales.
3.19 5a#3me!#o( ,la-%e!a#io(. El CH convencional no ha considerado el estudio
de las plaquetas como parte integral del mismo, el CH electrnico no solo a
recuperado el recuento plaquetario, sino que ha aportado nuevos parmetros
que han demostrado ser de utilidad clnica. Los parmetros plaquetarios de
nuevos hemogramas son:
Recuento de plaquetas los nuevos parmetros plaquetarios son importantes en
diferentes entidades clnicas como alteraciones en el recuento de plaquetas pro
infeccin y en los estados anmicos. El recuento de plaquetas por medios
electrnicos se caracteriza por su alto grado de precisin (CV 4%) comparado
con el de los mtodos convencionales (hasta mas de 60%).
Bernal
8
Volumen Medio Plaquetario (VMP).Es el tamao de la plaqueta expresado en
la unidad de volumen fl. su resultado promedio es la medida electrnica del
tamao de unas 3000 plaquetas. La utilidad clnica, est en la clasificacin
etiolgica de las diferentes alteraciones plaquetarias como trombocitopenicas y
no trombocitopenicas.
Ancho de distribucin de las plaquetas (ADP): Presenta el coeficiente de
variacin en el tamao de las mismas. El ancho de distribucin de las
plaquetas desde el punto de vista morfolgico, representa una forma
electrnica de cuantificar el tamao plaquetario.
Plaquetocrito (Pto): Equivalente al Hto., se define como la relacin entre el
volumen de la masa de plaquetas con la masa total de la sangre. Refleja la
concentracin de las plaquetas, mas no la masa total de estas. El plaquetocrito
se obtiene para clculos matemticos que relacionan el nmero de plaquetas
por volumen y tamao de las mismas.
Histograma de plaquetas: Se define como plaquetas las partculas con volumen
entre 2 y 20 fl. El histograma plaquetario es ms sensible para determinar las
trombocitopatias que los estudios convencionales de visin directa en los
extendidos de sangre perifrica.
3.11 :alo#e( 'e #e6e#en"ia:
PARAMETROS NEONATOS 1MES-11 AOS ADULTOS
WBC 6000-19000/mm3 4500-12000/mm3 5000-10000
NEUTROFLOS VA 6000-18000 1100-6600 2000-7000
VR 45-75 % 31-51 % 54-62 %
LNFOCTOS VA 2500-10500 1000-7000 1500-4000
VR 41-61 % 38-42 % 30-40 %
MONOCTOS VA 0-3500 0-1000 200-800
VR 0-10 % 0-10 % 4-10 %
EOSNOFLOS VA 0-2000 0-700 0-450
VR 0-5 % 0-5 % 1-3 %
BASOFLOS VA 0-400 0-100 0-200
VR 0-2 % 0-2 % 0-1 %
RBC 4.1-6.7X10/6 3.8-5.3X10/6 4.5-5.5 X10/6
HB 15-22 g/dl 10.5-14.4 g/dl M M 12-16 g/dl
H 14-18 g/dl
HTO 44-66 % 32-43 % M 40-44 %
H 46-50 %
VCM 102-115 fl 72-90 fl 80-100 fl
HCM 33-39 pg 24-32 pg 27-32 pg
CHCM 28-36 g/dl 28-36 g/dl 32-36 g/dl
PLAQUETAS 150000-450000 150000-450000 150000-
450000
). ANALI;ADOR DE HEMATOLOGIA ST<S DE =EC<MAN COULTER
En laboratorios de mediano y alto volumen se ha hecho rutinario el uso de
analizadores de hematolgica automatizados que proporcionan un alto ndice de
productividad y resultados de excelente calidad. Su uso se ha vuelto extenso en el
mbito de salud en Colombia y muchos otros pases.
Bernal
9
Como cualquier avance tecnolgico es necesario comprender su utilidad, aprender
interpretacin de los parmetros evaluados y las limitaciones de la tecnologa.
Los analizadores de cuarta y quinta generacin (aquellos que hacen un recuento y
diferencial de leucocitos con por lo menos cinco poblaciones) utilizan el principio de la
impedancia o el principio Coulter para hacer mediciones de los eritrocitos y las
plaquetas.
Especificaciones Tcnicas:
Tecnologa VCSdiferencial de 5 partes
22 parmetros, Histogramas y Dispersogramas.
Reticulocitos y CD3-CD4 opcional.
109CBC + DF por hora
138 CBC por hora
Modo primario 250 microlitros de ST.
Tubos 13x100 o peditricos con adaptador
Modo secundario 150 microlitros de ST
dentificacin de muestras con cdigo de barras.
4 Reactivos lquidos listos para el uso con estabilidad a bordo > 30 das
Verificacin de reproducibilidad en recuentos celulares.
Data Base hasta 5.000 resultados
Host Quero
Fcil mantenimiento por parte del usuario
Programa de control de calidad interno.
qap.
).1 5ARAMETROS MEDIDOS > CALCULADOS
R=C Es el recuento de eritrocitos expresado en millones/ MM3. Su aumento identifica
una eritrocitosis y su disminucin una eritropenia o anemia.
MCV: Este parmetro es el volumen corpuscular medio (vcm) e indica el tamao
promedio de cada eritrocito. Su aumento por encima de los rangos de referencia indica
una macrocitosis, su disminucin una mirocitosis. Ha venido reemplazando la forma de
reportar los frotis de sangre perifrica +,++,+++.o -,--,---. Con lo cual antiguamente se
intentaba describir el grado de micro o macrocitosis. Por ser un parmetro
cuantificable ha quitado gran parte de subjetividad del informe del tamao eritrocitario
MCH y MCHC : La hemoglobina corpuscular media y concentracin de hemoglobina
corpuscular media son dos parmetros que nos indican la cantidad de hemoglobina
presente en cada eritrocito. ndican la presencia de hipocroma cuando esta por debajo
de los rangos de referencia. Al igual que el MCV, su informe cuantitativo ha permitido
reemplazar la forma de reportar el grado de hipocromia con cruces.
Hb: Es la concentracin de la hemoglobina.
RDW: La amplitud de distribucin eritrocitaria es un parmetro que cuando
esta elevado nos indica la presencia de anisocitosis.
PLT: ndica el recuento plaquetario.
MPV: Nos indica el tamao promedio de cada plaqueta y si estamos ante
microcitosis o macrocitosis plaquetaria.
El diferencial automatizado se hace con una medicin multiparamtrica de los
leucocitos. A una muestra de sangre diluida se pasa una cantidad determinada a
Bernal
10
travs de una celda de flujo donde se mide simultneamente a cada clula nucleada
su volumen total, la densidad nuclear por radiofrecuencia y dispersin de un haz de luz
lser el cual indica el grado de complejidad nuclear. Al realizar esta medicin en 5.000-
10.000 leucocitos se determina el diferencial y si existe la presencia de clulas
anmalas.
).1.1 GUIA RA5IDA DE O5ERACI?N COULTER ST<S
En"en'i'o Si el equipo se encuentra apagado, asegrese de encender:
Estabilizador
SMD (CPU y monitor).
mpresora.
Fuente de poder y neumtica.
Analizador.
En la pantalla del analizador aparece sistema activado y en estado aparece listo.
En el monitor aparece el men principal.
Al encender el equipo, siempre hay que activar la impresora, para esto pulso F5 desde
la pantalla principal del SMD, pulse nuevamente F5 hasta que Autoprint cambie a all
para que todos los resultados se impriman. Pulse F10 para salvar.
NOTA: Despus de encendido el instrumento debe permitirse la estabilizacin de la
celda de flujo mnimo por 30 minutos antes de realizar los procedimientos iniciales.
S!a#a U, Es indispensable realizar el startup siempre que el equipo se haya dejado
con detergente durante el procedimiento de shutdown.
Presione la tecla StartUp en el teclado del dilutor para comenzar el procedimiento.
Una vez terminado, el analizador enva los resultados al SMD.
Desde la pantalla principal pulse ENTER en STARTUP, aqu aparecen los resultados
del banco de hemoglobina, del conteo de fondo (background), presiones, vaco y las
pruebas electrnicas de rampa y precisin. En el software del analizador se
encuentran los valores lmite de estas pruebas, si alguno de estos resultados lo
sobrepasa, aparecer en color rojo y debern tomarse acciones correctivas.
Con!#ole( En el STKS se utilizan dos tipos de controles:
Latron Control. Es un control para la celda de flujo. Controla los parmetros de
volumen, conductividad y dispersin lser. El Latron Control consta de dos
componentes: el frasco marcado con el numero 1 corresponde al Latron Primer
que se debe pasar primero y sirve para purgar la celda de flujo. El frasco
marcado con el numero 2 corresponde al Latron Control que esta compuesto
por partculas de ltex en suspensin.
Control 5C. Es un control de sangre humana para monitorear los parmetros
de CBC y del diferencial. Viene en tres niveles: normal, anormal y Anormal .
Como pasar los controles Latron Control: Desde la pantalla principal pulse ENTER
sobre el men CONTROLS. Pulse ENTER sobre el submenu CONTROL RUN. En
esta pantalla aparecen los valores asignados para correr el Latron Control. En el caso
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11
que aparezca un control diferente pulse F2 (file) y seleccione el LATRON 2 que
corresponda al numero de lote que esta utilizando.
Teniendo en la pantalla los valores para el Latron 2 pulse F3 (Primer), aparece una
ventana en la parte superior derecha de la pantalla.
En el teclado del dilutor pulse F55 y ENTER (debe estar en esta funcin para poder
pasar el Latron). En la pantalla del dilutor aparece oprima manual.
Asegrese de limpiar muy bien la sonda de aspiracin y pase el frasco #1 (latron
primer tapa blanca). Retire el frasco cuando escuche un beep.
Una vez termina el conteo el resultado aparece en la pantalla. El conteo debe ser
inferior a 300.
Para pasar el Latron Control, pulse F3 (Latex). En el teclado del dilutor active F55
pulsando ENTER. Mezcle bien el frasco #2 (laton control- tapa negra) y pselo por
modo abierto igual que el frasco #1. Retire el frasco cuando escuche un beep.
Una vez termine el conteo los resultados aparecen en la pantalla. Asegrese que los
resultados estn dentro del rango.
Tenga la precaucin de usar la funcin 55 exclusivamente para pasar los controles
Latron; usar otra muestra en esta funcin causara graves daos en el instrumento.
Para salir de la funcin F55 presione dos veces la tecla STOP en el teclado del
analizador.
Control 5C: Lugo de haber pasado los controles Latron y antes de analizar las sangres
control, el sistema debe purgarse con una muestra cualquiera de sangre normal, esto
para preparar las lneas y principalmente la celda de flujo para recibir muestras de
sangre. Puede analizarse por modo secundario colocndose cualquier numero de
identificacin en el teclado del analizador con la tecla D y mnimo tres dgitos (por
ejemplo 001), luego presiones la tecla ENTER. Los resultados de este anlisis no son
vlidos.
En el monitor, en el men CONTROLS, CONTROL RUN, pulse F2 (FLE) para buscar
los archivos de los controles de sangre. Entre a cada uno de los archivos para ver en
pantalla los resultados.
Los controles de sangre se pueden pasar por modo primario, colocando los tubos con
los cdigos de barras hacia arriba en un cassette, o por modo secundario colocndole
como D el nmero del cdigo de barras.
Si cualquiera de los controles Latron o 5C se sale del rango el equipo muestra un
mensaje sobre fondo rojo en la parte inferior de la pantalla. Estos mensajes se pueden
quitar de la pantalla tecleando simultneamente ALT ESC.
Li(!a 'e !#aba$o Todas las muestras se pasen por modo primario o por modo
secundario deben ser incluidas en una lista de trabajo.
Para acceder a la lista de trabajo pulse SAMPLE ANALYSS desde el men principal
y selecciones el submenu WORKLST.
Usted puede hacer dos listas de trabajo diferentes, una para CBC y otra para CBC-
DFF, dependiendo de cmo quiera que se procesen las muestras. El tipo de lista
aparece en la parte superior de esta pantalla. Para cambiar entre una lista u otra
presione la flecha hacia la derecha (cursor).
Una vez seleccionada la lista de trabajo, pulse F5 (sequence) para activar el modo de
autosecuencia. En esta pantalla se activan los identificadores para las muestras. Los
Bernal
12
identificadores que se deben activar dependen de la forma como se vayan a pasar las
muestras por el equipo: modo primario (cerrado) o modo secundario (abierto).
!odo primario: En la parte superior de la pantalla active (ON) utilizando la barra
espaciadora sample autosequence y escriba el numero de la primera muestra, esto
en caso de que a su laboratorio lleguen todas las muestras en numero secuencial, de
lo contrario puede dejarla inactiva (OFF).
Pulse ENTER y active (ON) con la barra espaciadora Cass/Pos en CBC o en
CBC-DFF (dependiendo de cmo quiera trabajar), pulse ENTER y escriba el
numero de posicin del Cassette en donde va a empezar a trabajar. Al trabajar
en modo primario D M/S debe permanecer en OFF. Pulse F10 para salvar
los cambios hechos.
Pulse F2 (Add) para comenzar a hacer la lista de trabajo.
Seleccione el perfil (profile); 1 corresponde a CBC-DFF, 2 corresponde a CBC.
Pulse ENTER en Cass/Pos, automticamente aparecer la primera posicin
del cassette.
Pulse ENTER y llene los espacios correspondientes al nombre, procedencia,
historia clnica, etc. El nmero de secuencia aparece automticamente y va
aumentando secuencialmente con cada muestra programada si se hubiera
activado esta autosecuencia, si no, deber ingresarse manualmente el nmero
de identificacin de la muestra.
Pulse PgDn (pagina abajo) para grabar y continuar con la siguiente muestra.
Cuando programe la ltima muestra pulse F10 para salvar la programacin.
!odo secundario: En la parte superior de la pantalla inactive (OFF) sample
sequence, y active (ON) D M/S, pulse ENTER y escriba el numero de la primera
muestra que va a pasar por modo secundario.
Pulse F10 para salvar los cambios.
Pulse F2 (Add) para comenzar la lista de trabajo.
Seleccione el perfil, pulse ENTER, el numero de la muestra aparece
automticamente en D M/S.
Llene los espacios correspondientes al nombre, procedencia, historia clnica,
etc.
Pulse PgDn para grabar y continua con la siguiente muestra. Luego de la
ltima muestra programada pulse F10 para salvar.
Como ,#o"e(a# la( m%e(!#a(
!odo "rimario: Tenga en cuenta que para trabajar en modo primario (cerrado), el
volumen mnimo de sangre en los tubos debe ser de 1ml, y en lo posible los tubos no
deben ser destapados antes de ser pasados por el equipo.
El tamao de los tubos adecuado para colocar en estos cassettes es 13x150mm, para
tubos peditricos existen unos adaptadores especiales o de lo contrario debern
pasarse por modo secundario.
Coloque los tubos en los cassettes en el orden como fueron programados en la lista de
trabajo. Coloque los cassettes en el e quipo y pulse en el teclado del dilutor start
count.
!odo secundario: Pulse en el teclado el diluto D e introduzca el numero de la
muestra, este numero debe ser igual al que se programo en la lista de trabajo (mnimo
Bernal
13
tres digitos). Mezcle la muestra e introduzca el tubo en la sonda de aspiracin, retire el
tubo cuando escuche un beep.
=a(e( 'e 'a!o( El STKS puede almacenar en memoria 5000 resultados de
pacientes. Estos resultados pueden ser revisados a travs del submen Data Base
Query.
Desde la pantalla principal pulse el men Sample Analysis y pulse ENTER en el
Submen Data Base Query.
Al lado derecho de esta pantalla aparece una ventana en la que usted puede
seleccionar la forma como quiere buscar las muestras en la base de datos (Si no
aparece presione F6 sort). Usted puede buscar por fecha y hora, numero de
identificacin, pocisin de cassette o nombre del paciente. Para borrar alguna
informacin previamente ingresada, ubquese en ella y pulse F6 Clear. Tenga presente
que siempre que se abra esta ventana le va a mostrar la ultima bsqueda que se hizo
en la base de datos.
Una vez haya ingresado la informacin, pulse F8 (execute) para comenzar a buscar en
la base de datos. Cuando termina la bsqueda, el paciente o los pacientes aparecen
en la pantalla.
Site el cursor sobre el paciente que desea revisar.
Pulse F12 para ver los histogramas y los resultados numricos del paciente.
Pulse F4 (Print) para imprimir el resultado.
5#o"e'imien!o( 'e Ce(a"i0n Al finalizar el da debe hacerse un cierre del sistema y
dejarse en detergente para desproteinizar las cmaras y limpiar las vas. Para esto,
oprima la tecla SHUTDOWN en el teclado del dilutor. El instrumento inicia a hacer su
lavado que toma aprox. 5 minutos. Al finalizar oprima la tecla POWER OFF en el
teclado del dilutor para apagarlo, apague el monitor, el computador, la impresora y
finalmente la fuente de poder.
@%n"ione( E(,e"iale(
!odo C#C$C#C%&'((: El STKS puede trabajar en modo CBC (resultados sin analisis
diferencial) o modo CBC+DFF (resultados con todos los parmetros). Para activar o
inactivar modos, vaya a la pantalla superior del dilutor, presione PRNCPAL, aparece
una pantalla de Configuracin del Sistema con una opcion de Modo de Operacin,
oprima la tecla que esta en frente de esta opcin hasta que aparezca el modo de
operacin que desea CBC o CBC+DFF. Presione Retorno 2 veces para llegar a la
pantalla principal.
"urga de reacti)os
F02: Purga del Lyse
F16: Purga del soton
F17: Purga del Scatter Pak
Estas funciones se usan cuando se carga alguno de los reactivos en el sistema con el
fin de purgarlos.
&esobstrucci*n de aperturas
CLEAR APERTURE: Limpieza de las aperturas.
F01: Limpieza de las aperturas
F09: Choque elctrico aparturas.
Estas funciones se usan con el fin de desobstruir las aperturas de los baos de WBC y
RBC:
Bernal
14
&esobstrucci*n de la celda de flujo
F44: Limpieza de celda de flujo 1.
Estas funciones se usan para desobstruir la celda de flujo. Deben usarse con
moderacin, primero la F44 y verificar el funcionamiento, sino la F45 y verificar el
funcionamiento. Solo si no se resuelve el problema con estas dos funciones, aplicar
F46, en este caso la celda de flujo quedar llena de detergente, por lo que deber
apagarse el instrumento mnimo por 30 minutos y realizar nuevamente los
procedimientos iniciales. Esta funcin NO debe usarse rutinariamente porque
desestabiliza la celda de flujo.
+tras
ALARM RESET: Para callar la alarma sonora.
STOP: Para detener el analizador.
PRME APERTURE: Para activar el compresor cuando ha entrado en reposo (luego
de una hora sin usarse el instrumento).
).1.2 5ROCEDIMIENTOS DE MANTENIMIENTO COULTER ST<S
Mantenimiento Diario: Dentro de los procedimientos de mantenimiento diario nos
encontramos los procedimientos iniciales (start Up, Latron 1&2, Controles 5C) y los
Procedimientos finales (Shut down).
).1.2.1 Man!enimien!o Semanal
Limpiar los filtros de aire de la fuente de poder: Sacudir el polvo que se
acumula en ellos. Limpiarlos con gasa hmeda. No se deben lavar porque no
se deben colocar mojados sobre el compresor.
Limpiar los cassettes: Con una gasa hmeda limpiar las etiquetas de cdigos
de barras de los cassettes y por detrs para limpiar residuos de suciedad.
Limpiar la cama oscilante: Con una gasa hmeda limpiar la superficie de la
cama oscilante teniendo la precaucin de no partir los deditos que impulsan el
carretee. Limpiar tambin las plataformas de carga y descarga de los
cassettes.
Lavar la vlvula segmentadota: Abrir la tapa inferior del analizador, colocar una
gasa absorbente en la bandeja que se encuentra debajo de la vlvula
segmentadota. Con una jeringa sin aguja, dispensar a chorro agua destilada
sobre la vlvula con el fin de disolver el detergente que se cristaliza en ella. No
usar agujas ni cepillos para removerlo y no es necesario desmontar la vlvula.
Lavar el canal de enjuague de la sonda de aspiracin de modo primario: Para
este procedimiento necesitaremos Hipoclorito al 5% y filtrado. Cuando el
equipo indique LSTO en el teclado del dilutor, teclear F10 para elevar la
sonda. Abrir la tapa inferior del STKS y con una jeringa o un frasco lavador y
con una extensin de manguera dispensar 5ml de hipoclorito sobre la espumita
que se encuentra en el canal de enjuague de la sonda. NO NTRODUCR LA
MANO PARA EVTAR ACCDENTES CON LA SONDA! Una vez se haya
dispensado el desproteinizante, teclear STOP para que la sonda vuelva a su
posicin de origen y dejar reposar por 5 minutos. Antes del siguiente ciclo, el
STKS enjuagara con soton automticamente.
).1.2.1.1 Man!enimien!o Men(%al: Desproteinizar los baos y aperturas de
RBC y WBC: Este procedimiento debe realizarse cada mes o cada 15
das si se procesan ms de 100 cuadros hemticos al da. Preparar
Bernal
15
una solucin de hipoclorito de sodio al 5% en agua destilada y filtrarlo.
Cuando el teclado del dilutor indique LSTO teclear DRAN para
desocupar los baos. Con una jeringa o con un frasco lavador y con
una extensin de manguera, dispensar hipoclorito en cada bao a
travs de los FTTNGS que se encuentran en la parte superior de
cada bao, llenando sus tres cuartas partes (ms o menos sobre el
borde del electrodo). Teclear F11 para que durante 60 segundos se
aplique vaco a las aperturas y el hipoclorito pase a travs de ellas.
Debe seguir adicionando hipoclorito debido a que su nivel va bajando.
Cuando terminen los 60 segundos, teclear STOP y dejar reposar 5
minutos.
Luego, adicionar hipoclorito hasta el nivel indicado y teclear F12 para que se laven
los drenajes de los baos, continuar adicionando hipoclorito hasta el nivel indicado.
Cuando termine la funcin 12 teclear STOP y dejar reposar 5 minutos.
Luego, adicionar hipoclorito hasta el nivel indicado y teclear de nuevo F11 y
cuando termine teclear STOP para salir de la funcin y luego DRAN para drenar
los baos.
Proceder a realizar el STARTUP y los dems procedimientos iniciales.
).1.2.2 5#o"e'imien!o 'e Man!enimien!o AC%an'o (ea ne"e(a#ioA
Desobstruccin de aperturas: Existen varios procedimientos para desobstruir las
aperturas, estos deben ser usados de acuerdo a las necesidades y de forma
escalonada, realizando despus de cada uno, una verificacin con controle o con
muestras.
Clear Aperture o F01: con esta funcion se aplica vacio a las aperturas para tratar de
remover las partculas que estn causando obstruccin.
ZAP o limpieza elctrica de las aperturas (F09): con esta funcin se activa el circuito
de quemado que limpia elctricamente las aperturas y adiciona detergente. Luego de
aplicar esta funcin debe dejarse en reposo 15 minutos el analizador y posteriormente
realizar los procedimientos iniciales.
Desproteinizacin de baos y aperturas: con Hipoclorito de sodio al 5% como se indico
anteriormente.
Desobstruccin de la celda de flujo: Existen varios procedimientos para desobstruir la
celda de flujo, estos deben ser usados de manera escalonada y con moderacin.
Luego de cada paso debe verificarse con un control o muestra.
Verificar nivel de sotn: El mensaje de Celda de flujo obstruda puede presentarse
por agotamiento del diluyente, verifique que los dispensadores de diluyente y el tanque
de recubrimiento se encuentran llenos de isotn y purgue este reactivo con F16 o
reemplace si es necesario.
Purgar el reactivo Scatter Pack: el mensaje :::::: en el anlisis diferencial
acompaado de PC o PC2 en el dispersograma indican que la cantidad de muestra y/o
reactivo que llegan a la celda es insuficiente, verifique la cantidad de Scatter PAck y
purgue con F17 o reemplace si es necesario.
Bernal
16
LATRON 1&2: si el mensaje de Celda de flujo obstruida, PC1, PC2 o FC persisten,
haga un Background Test y pase los controles Latron 1&2, estos limpian la celda.
Puede realizar 2 o 3 veces este paso.
F44: con esta funcin se aplica bajo presin y bajo vaco para desobstruir la celda de
flujo.
F45: con esta funcin se aplica alta presin y alto vaco para desobstruir la celda de
fljo.
F46: con esta funcin se aplica alta presin, alto vaco, corriente elctrica y detergente
para desobstruir la celda de flujo. NO DEBE UTLZARSE DE RUTNA Y NO DEBE
REALZARSE MAS DE UNA VEZ porque desestabiliza la celda y la daa. Luego de
este procedimiento, dejar en reposo 30 minutos el analizador y realizar los
procedimientos iniciales.
NOTA: NUNCA ASPRE HPOCLORTO DE SODO COMO MUESTRA YA QUE
DETERORA LA CELDA DE FLUJO.
.. @ROTIS DE SANGRE 5ERI@ERICA
La observacin de la morfologa celular es de gran utilidad en el diagnstico de
diversas patologas como son: anemias, leucemias, prpuras parsitos, etc. La
realizacin de la lamina de frotis de sangre perifrica debe ser impecable, procurando
que este no sea excesivamente grueso, con ello se conseguir una distribucin
acertada de las clulas en diferentes reas del frotis cuyo conocimiento es
fundamental, tanto para la morfologa eritrocitaria como para la realizacin de la
formula leucocitaria o recuento diferencial.
En cualquier mtodo que se utilice para la realizacin del frotis, deber tenerse en
cuenta las siguientes precauciones:
Todo el material que se utiliza debe estar limpio y desengrasado.
Si es de puncin digital, no deber emplearse la primera gota.
Si es de puncin venosa, se deber hacerse con la mxima rapidez posible.
..1 MB!o'o 'e lo( 'o( ,o#!a ob$e!o(: se debe colocar una gota de sangre en la parte
anterior de la superficie del porta objeto. Formando un ngulo de aproximadamente
45 o, colocar el otro porta objeto sobre la gota de sangre, esperando que por
capilaridad toda la sangre se distribuya, no dejando que llegue al extremo y luego
desplazarlo suavemente, a velocidad moderada, en sentido longitudinal hasta que la
gota de sangre quede bien extendida.
El grosor del frotis sanguneo, varia segn el ngulo que se forme entre los dos porta
objetos. El frotis se deja sacar a temperatura ambiente y en posicin horizontal, este
tendr tres reas de diferente grosor y con diferente distribucin de componentes
formes de la sangre.
Zona excesivamente gruesa(cabeza): se halla en la regin inmediata al punto
de partida de la extensin.
Zona excesivamente fina: corresponde al final de la extensin es un rea
donde las clulas terminan con una disposicin acordonada. En esta zona
existe un exceso de granulocitos y monocitos.
Bernal
17
Zona ideal: corresponde a la regin intermedia del frotis y en ella existe una
distribucin equilibrada de las clulas.
..2 Rea"!i:o( ,a#a la "olo#a"i0n
Colorante de Wright .
Solucion de buffer
..2.1 Colo#a"i0n: Para conseguir los mejores resultados hay que colorear las
extensiones en cuanto se hayan secado al aire, sin dejar en ningn caso mas de una
hora.
El frotis secado al aire se coloca sobre una gradilla de tincin.
La extensin se cubre en su totalidad con el colorante sin diluir durante un
minuto. El alcohol metlico fija la sangre.
Se diluye el colorante con el buffer, aproximadamente el mismo volumen hasta
que aparezca la escarcha metlica, para conseguir la mezcla del colorante con
el diluyente se sopla con suavidad en varios puntos de la placa, para
establecer corrientes suaves, igualando as la distribucin.
Se deja actuar este colorante diluido durante dos minutos.
Sin mover el porta objetos se lava con agua destilada hasta que las partes
mas delgadas sean de un color rosado. El colorante que haya quedado en el
vidrio de la lmina se limpia con una gasa limpia y se deja en forma vertical
hasta que seque.
..2.2 Le"!%#a 'el #e"%en!o 'i6e#en"ial 'e le%"o"i!o(: Con objetivo de 100x del
microscopio ptico, en la parte media del frotis, se comienza en un punto no muy
cercano al borde y se va recorriendo a lo ancho del frotis, hasta llegar a contar un total
de 100 leucocitos consecutivos diferencindolos morfolgicamente. Se realizan
siempre a muestras de bebes y a muestras que se quiera confirmar el resultado.
A diferencia de otros tejidos, la sangre esta constituida por tres tipos de clulas muy
diferentes entre s, tanto del punto de vista morfolgico, estructural y de funcional.
Clulas nucleadas(leucocitos), con funcin diversa.
Clulas anucleadas (hemates) con funcin respiratoria.
Seudo fragmentos citoplasmticos(plaquetas),con funcin hemosttica.
Los leucocitos o glbulos blancos, constituyen un conjunto de clulas con funcin
diversa, como la defensa del organismo frente a diversas sustancias o agentes
patolgicos, estas clulas tienen en comn las caractersticas de tener ncleo y
organelos citoplasmticos, lo que permite su fcil diferenciacin morfolgica con los
hemates y las plaquetas.
Desde el punto de vista morfolgico, los leucocitos se han clasificado en dos grupos:
Polinucleares: Cuyo ncleo es lobulado de apariencia mltiple
(neutrfilo,eosinfilo y basfilo)
Mononucleares: Con ncleo nico (linfocito y monocito)
..2.2.1 CARACTERISTICAS MOR@OLOGICAS DE LOS LEUCOCITOS
Ne%!#o6ilo Es el 60-65 % de los leucocitos. Su dimetro est entre 10 y 14 micras. El
citoplasma es ligeramente acidfilo, con granulaciones de carcter neutro, distribuidas
Bernal
18
en el citoplasma. El ncleo de color violeta oscuro y cromatina densa se caracteriza
morfolgicamente por presentar lbulos fragmentados o separados entre s, por
puentes de cromatina.
Eo(ino6ilo( es el 1-3 % de los leucocitos. Su dimetro es de 10-12 micras. El
citoplasma repleto de granulaciones, constituidas por grnulos redondos y de gran
tamao, casi nunca cubren el ncleo; estos contienen sustancias de carcter bsico,
fijando colorantes cidos como la eosina, dando un color pardo o anaranjado. El
ncleo posee una coloracin violeta, es bilobulado, forma masas simtricas unidas por
uno de sus extremos.
=a(o6ilo( Su proporcin, es inferior al 1% de los leucocitos. Su dimetro es de 12-14
micras. El citoplasma acidfilo, forma grnulos irregulares, fijando colorantes bsicos
como el azul de metileno. Las granulaciones, cubren el ncleo, el cual es de forma
irregular con lobulaciones.
Lin6o"i!o Constituye el 20-40 % del total de los leucocitos, su dimetro es de 7-18
micras. El citoplasma es escaso o abundante; su coloracin es azul plida, debido a su
Basofilia, que le confiere el contenido elevado de RNA, la granulacin azurfila puede
ser escasa y se encuentra en el citoplasma. El ncleo redondo, cromatina homognea.
Monoli!o( Del 2-10 % del total de leucocitos; el dimetro es de 14-20 micras. El
citoplasma es abundante y gris azulado: en ocasiones se halla vacuolado, con
granulaciones finas azurfilas. El ncleo localizado en el centro, casi siempre es
redondeado con invaginaciones, presentando variaciones dado su gran tamao, ocupa
gran parte del citoplasma y su cromatina es laxa, filamentosa e irregular, formando una
trama reticular.
..3 Mo#6olog+a 'e lo( gl0b%lo( #o$o( Para el diagnostico de algunas anemias,
presentan alteraciones caractersticas esferocitosis hereditaria, hemoglobinopatia S,
eliptocitosis congnita. Asimismo, ante cualquier anemia de origen desconocido,
resulta til valorar la intensidad de la policromatofilia, presencia de normoblastos,
punteado basfilo, anillos de Cabott, cuerpos de Howell-Joly.
..3.1 Al!e#a"ione( mo#6ol0gi"a( e#i!#o"i!a#ia( Se pueden clasificar en cuatro
grandes grupos: alteraciones de tamao, forma, color y policromatofilia adems de la
presencia de inclusiones.
..3.1.1 ALTERACIONES DE TAMACO (ani(o"i!o(i() Son de dos tipos
fundamentales:
..3.1.2 Ma"#o"i!o(i( Cuando el hemate es de tamao y VCM, superior al glbulo9
rojo normal. Se observa en anemias diseritropoyeticas, cuando hay un aumento de
eritropoyesis, enfermedades hepticas.
..3.1.3 Mi"#o"i!o(i( Es la existencia de hemates cuyo tamao y VCM es inferior al
del glbulo rojo normal, las causas mas frecuentes es la anemia ferropnica y la
talasemia.
Bernal
19
..3.1.) La( al!e#a"ione( mo#6ol0gi"a( (5oi-%ilo"i!o(i() Las ms frecuentes son:
esferocitos codocitos drepanocitos, eliptocitos, equinocitos, acantocitos, dacriocitos,
esquistocitos, estomatocitos.
..3.1.. La( al!e#a"ione( 'el "olo# Reflejan las anormalidades en el contenido
hemoglobnico.
..3.1.1 Hi,o"#omia: Los hemates se tien dbilmente, por la disminucin de
hemoglobina. Si no existe una enfermedad que la explique, se debe pensar en una
anemia ferropenica o en una talasemia.
..3.1.2 5oli"#oma!o6ilia Los hemates con tonalidad gris azulada, esto es signo de
inmadurez celular, observndose en ciertas anemias acompaadas de reticulocitos en
sangre perifrica. Los hemates se caracterizan por ser de mayor tamao y su
coloracin azulada, debido al contenido de ARN.
..) Rango( 'e Ani(o"i!o(i( 'e a"%e#'o al /CM.
Ligera: 95-108 ft (macrocitos), 76-80 ft(microcitos)
Moderada: 109-120 ft(macrocitos),66-75 ft(microcitos)
Marcada: mayor de 120(macrocitos),Menor de 65(microcitos)
... Rango( 'e "%an!i6i"a"i0n 'e lo( gl0b%lo( #o$o(
Normal: anisocitosis e hipocromia: 0-5, poiquilocitosis 0-5, policromatofilia 0-2
Ligera: anisocitosis 6- 15,poiquilocitosis 1-5, policromatofilia 2-3
Moderada: anisocitosis 16-30,poiquilocitosis 6-15, policromatofilia 3-4
Marcada: anisocitosis e hipocromia mayor de 30, poiquilocitosis mayor de 30,
policromatofilia mayor de 4.
La anisocitosis e hipocromia y la policromatofilia se lee en 10 campos. La
poiquilocitosis se informa la que predomina.
..1 No#mobla(!o(: Se informan por porcentaje su presencia. Si se encuentran ms
del 10 %, se realizar correccin al recuento leucocitario empleando la siguiente
formula:
Leucocitos corregidos: ____Nmero de leucocitos contados x 100
____________________________________
Nmero de normoblastos + 100
El recuento de normoblastos ser, nmero de normoblastos observados por 100
leucocitos, esta relacin se hace con el diferencial en el FSP.
Para confirmar el recuento de leucocitos se cuentan en pequeo aumento (10 X) 3
campos donde los glbulos rojos apenas se toquen entre s, se promedian por campo
y se multiplica por 300.
1. RECUENTO DE RETICULOCITOS
Un Reticulocito es un eritrocito que se halla circulando en sangre perifrica en estado
inmaduro o sea que aun posee restos de cromatina nuclear.
Bernal
20
1.1 @%n'amen!o( 'e MB!o'o: Esta tcnica de coloracin se basa en la precipitacin
de dichos restos de cidos nucleicos por medio del NEW METHYLENE BLUE,
formando una red granulada dentro del eritrocito, sin destruirlo.
1.2 Rea"!i:o( Colorante Reticulocitos: New Methylene Blue, listo para usar.
1.3 M%e(!#a Sangre Venosa anticoagulada o Sangre Capilar.
1.) 5#o"e'imien!o: Usando una pipeta para glbulos tome sangre capilar o venosa
hasta la marca 0.5 y luego a 1.0 con el colorante. Lleve la mezcla al bulbo de la pipeta,
mezcle bien y deje en reposo 10 minutos.
Pasado el tiempo y descartando la primeras gotas, coloque una gota de la mezcla en
una lamina portaobjetos limpia y efecte un extendido de la manera usual.
Deje secar y examine directamente al microscopio usando aceite de inmersin y
objetivo 100x
Calculo
% Reticulocitos= No reticulocitos por 500 Eritrocitos X0.2
%Reticulocitos= No de reticulocitos x 100
-----------------------------------
1000
nterpretacin: Mediante este mtodo normalmente se encuentran valores
comprendidos entre 0.5 y 1.5 % en adultos. En recin nacidos entre 3 y 6 %
Notas
Una buena coloracin depende del extendido, este no debe ser muy grueso y se debe
evitar la formacin de grumos y estras.
Usar placas preferiblemente nuevas, sin ralladuras y libres de grasa.
2. HEMOSTASIA > COAGULACION
Complejo proceso mediante el cual la sangre se mantiene en estado fluido dentro de
los vasos sanguneos. Es dependiente de la integridad vascular, el recuento de
plaquetas, su funcin y las protenas plasmticas de la coagulacin. La definicin
incluye una interaccin entre estos tres compartimientos adems de los sistemas.
2.1 Tiem,o ,a#"ial 'e T#ombo,la(!ina (5TT) Al aadir fosfolpidos plaquetarios al
plasma, se activan los factores de la coagulacin necesarios para la formacin de
protrombinasa intrnseca; esta activa la protrombina y la trombina convirtiendo el
fibringeno en fibrina. El tiempo parcial de tromboplastina (PTT), evala
anormalidades de los factores de la va intrnseca, especialmente detecta deficiencias
del factor V,X,X,X, precalicreina y kiningeno, y tambin en factores ,V,X o
fibringeno.
La prueba se emplea principalmente para
Bernal
21
Monitoreo de pacientes con heparina, donde la formacin del coagulo es proporcional
al nivel de heparina utilizado.
En pacientes que reciben anticoagulantes orales, los factores ,V,X,X, se
disminuyen y el PTT se puede prolongar.
La presencia de inhibidores no especficos, tales como anticoagulante lpido puede
prolongar el PTT
El PTT es una importante prueba clnica, con amplia aplicacin en el diagnstico de
desordenes de coagulacin y monitoreo teraputico de enfermedades hemorrgicas o
trombticas.
2.2 Tiem,o 'e ,#o!#ombina (5T): La tromboplastina mstica y calcio adicionados a
plasma citratado, reacciona con los factores V,V,X, para formar un compuesto activo
que convierte la protrombina en trombina. La trombina al actuar sobre el fibringeno
forma la fibrina.
El reactivo inicia la va extrnseca de la coagulacin y las vas comunes. Despus de la
adicin de la tromboplastina y el calcio, el tiempo de coagulacin obtenido refleja la
actividad de los factores ,V,V,X, fibringeno.

La prueba se emplea principalmente para
Detectar deficiencias simples o combinadas del sistema de coagulacin extrnseco,
indicativos de trastornos en la coagulacin hereditarios o adquiridos, enfermedad
heptica o deficiencia de vitamina K.
Control de terapia con anticoagulantes orales.
La organizacin mundial de la salud unida al comit internacional de trombosis y
hemostasis ha recomendado reportar el resultado del PT en pacientes con
anticoagulantes orales usando los valores NR (Radio nternacional Normalizado).
INRDR (i(i)
Dnde PT del paciente
----------------------
PT control
El valor del S es determinado para cada reactivo y en la mayora va de acuerdo con
las normas de l OMS.
2.3 DESCRI5CION DEL INSTRUMENTO ACL 399 5LUS
El sistema ACL 300 plus de instrumentacin Laboratory, es un analizador totalmente
automatizado de alta productividad para uso clnico en pruebas de coagulacin y/o
fibrinolisis, cuyos resultados incluyen mediciones hemostticas directas y parmetros
calculados.
El nstrumento ACL esta dividido en cuatro zonas principales:
;ona 'e m%e(!#a( E #ea"!i:o( esta zona esta constituida por el carrusel de
muestras, el cual se encuentra sealizado con nmero para la identificacin de
muestras y la zona de reactivos, donde se colocarn reservorios con los mismos y
Bernal
22
adems se mantendran a una temperatura de 8 a 15 o C para alcanzar una mayor
estabilidad y en agitacin continua para evitar su sedimentacin
;ona 'e 'i(,en(a"i0n constituida por el bloque de agujas, las cuales van
conectadas a un recipiente el cual contiene un lquido denominado Emulsin de
Refeencia, cuya funcin ser la de limpiar puntas , evitando la formacin de fibrina y
como blanco de dispersin de la luz en cada corrida realizada.
;ona 'e #ea""i0n esta constituida por un plato de aluminio controlado
termostticamente para mantener una temperatura de 37 oC +/-1, donde se colocar
nuestro rotor (cubetas de reaccin) con 20 posiciones, para llevar acabo todas las
fases de las pruebas de coagulacin, as como un LED (Diodo emisor de luz) el cual
constituye nuestra fuente de luz para la deteccin nefelomtrica del cogulo leda a 90
o por un foto detector, el cual se encuentra localizado en la primera posicin enfrente
del LED.
En esta zona encontraremos un compartimiento para colocar los rotores (cubetas de
reaccin).
A un costado del instrumento encontraremos la lnea de desage de desperdicios
del mismo, cuya manguera deber estar siempre libre de obstrucciones, as como
contar con una buena cada para evitar la formacin de cogulos con el subsiguiente
taponamiento de la manguera.
2.) @UNCIONES DEL TECLADO
2.).1 Te"la( o,e#a!i:a(:
STO5 Abortar el ciclo en cualquier momento, si se confirma pulsando la tecla Enter
antes de un plazo de 5 segundos.
5RT La tecla de PRT puede ser utilizada en todo momento excepto durante los ciclos
de las tcnicas. Nota: La tecla para el avance del papel se encuentra en la tapa de la
impresora (Tecla de color gris)
5ROG Esta tecla se utiliza para seleccionar los programas de utilidades o para salir
del men de utilidades volviendo al men principal.

Este men de programas especiales (PROG) puede ser activado en cualquier
momento excepto mientras el sistema se encuentra en la fase de adquisicin del ciclo,
si bien algunos programas individuales no pueden ser introducidos durante un ciclo de
anlisis.
2.).2 Te"la( 'e 'e"i(i0n
Pg-Up:Pd-Dw: Estas teclas se utilizan para desplazarse por los
diferentes mens.
Flechas arriba,abajo , a los lados: Estas fechas se utilizan para
desplazar el cursor hacia arriba, abajo, izquierdo o derecha en la
pantalla de los men, permitiendo con ello la seleccin del ciclo o del
programa deseado o para efectuar las selecciones solicitadas en
pantalla.
ENTER: Para confirmar los datos numricos o bien una decisin.
Flecha hacia la izquierda: Para retornar a una pantalla anterior.
Teclas numricas: Para la introduccin de todos los datos numricos.
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23
Teclas Alfanumricas: Para la introduccin de todos los datos
alfanumricos.
NS: Para insertar nueva informacin.
DEL: Para borrar informacin.
COMMANDS Para acceder a opciones adicionales.
2.. 5%e(!a en Ma#"*a: Conectar el instrumento a la red del suministro elctrico y
efectuar el encendido del mismo haciendo uso del interruptor de alimentacin del
panel trasero.
Comprobar que la fecha y hora son correctas ( sino, modificados desde el
PROG/CONFGURACON/FECHA Y HORA). El instrumento est equipado con un
reloj interno que memoriza la fecha y la hora al apagar:
Nota: El mensaje TEMPERATURA DE NCUBACON FUERA DE RANGO Aparece
presentando durante 15 minutos despus de que el soporte del rotor haya alcanzado
la temperatura de funcionamiento para permitir el calentamiento del instrumento.
Siguiendo el ciclo del "puesto en marcha abrir la tapa de la impresora y colocar un
rollo de papel ya preparado (Ref 80075-00) en su asentamiento encima de la
impresora. ntroducir el papel en la ranura superior de la impresora con el extremo del
rollo de papel saliendo por la parte inferior del asiento. Apretar el pulsador de color gris
existente en el lado derecho de la impresora.
Cuando el papel avance desde la ranura inferior de la impresora, hacerlo pasar por la
gua de la tapa de la misma y cerrar la tapa tirando con suavidad del papel para evitar
el bloqueo del mismo.
2.1 El 5%#ga'o Seleccionar PROG/DAGNOSTCOS/PURGADO. Comprobar que
durante el purgado el nmero de burbujas en las cmaras del diluidor se reduzca al
mnimo. Si es necesario, pinzar los tubos de salida de las cmaras mientras el pistn
alcance el punto muerto inferior.
Al finalizar los pasos anteriores, al presionar la tecla PROG y regresar al men
principal (PRUEBAS), se selecciona PT-FB y se procede a la calibracin. Cabe
mencionar que la nica prueba dentro de las consideradas RUTNA ( TP-PTT-TT) que
se calibra es el Tiempo de Protrombina, esta calibracin se realiza slo cuando se
cambien lotes de plasma de Calibracin, PT FB o Emulsin de Referencia.
7. CALI=RACION DEL TIEM5O DE 5ROTROM=INA
S un reactivo es de diferente lote y el valor de fibringeno del plasma
calibrador cambia, se debe calibrar.
Verifique el nivel de la solucin de referencia. Realice una purga con la
funcin PGR: Seleccionar PRME.
Reconstituya 1 vial de plasma calibrador con 1 ml de agua destilada.
Hidratar por 30 minutos, agitar suavemente.
Actualice los datos del S y nmero de lotes de los reactivos en la opcin
PGR: DATOS DE REFERENCA.
Sirva el plasma calibrador en una copilla de 0.5 ML y ubquelo en la
posicin Pool del rotor de muestras. Sirva 2 Ml del plasma calibrador en
una copilla de 0.5 ml y ubquelo en la posicin Pool del rotor de muestras.
Sirva 2 ml de emulsin de referencia en la posicin Dil del rotor de
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24
muestras. Dispensar el reactivo de Pt en el reservorio 1. Colocar rotor
nuevo.
Seleccionar la prueba de PT-FB en pantalla. Enter.
Con el cursor seleccionar la opcin Calibracin enter. Actualizar los datos
de S y nmero de lotes. Enter. Seleccionar Start con el cursor.
El equipo imprime la curva de calibracin con los datos de la Media, CV y
coeficiente de correlacin r2
Se obtiene los siguientes valores de coeficientes de variacin:
CV(PT)= 100 % </ = 1.5 %
50 % </= 2 %
25% </= 2%
CV(FB)= 300 mg/d l </= 8 %
150 mg/dl </= 12 %
75 mg/dl </= 12 %.
Si cualquiera de los valores antes mencionados se encuentra sombreado, nos
indica que algun paso de la calibracin estuvo mal realizado, por lo que se
procedera a repetirla.
Si los resultados obtenidos se encuentran dentro de rango se aceptar
quedando grabada la calibraci0n en el equipo hasta que no se realice una
nueva.
7.1 5ROCESAMIENTO DE MUESTRAS:
Seleccione en el Men las pruebas a correr: PT-FB y/o PTT
Coloque el plasma calibrador en la posicin Pool.
Verifique el estado de los reactivos en los reservorios, solucin de
referencia y rotor.
Digite la lista de muestras.
Con el cursor seleccione la opcin Star.
Los resultados aparecen en pantalla y se imprimen automticamente.
Verificar diariamente los procedimientos del protocolo de
mantenimiento.
7.2 MANTENIMIENTO
1. Limpieza del reservorio de desage: el reservorio de desage es aquel donde
se colocan las agujas cuando el equipo no se encuentra en trabajo, para su
limpieza slo debemos colocar las agujas en la posicin de calibracin de
puntas (entrando a lista de chequeos), de esta forma estarn desplazadas de
la posicin original y podremos retirar el reservorio para su lavado, en el hueco
dejado, por medio de una jeringa de 10 ml agregamos a presin cloro diluido al
10 % para limpiar la lnea de desage, una vez realizada esta operacin
regresaremos el reservorio y las puntas a su posicin original.
2. Limpieza de los sensores pticos: abriremos la tapa donde se lleva a cabo la
reaccin, se limpiar el LED (foco rojo) con un istopo hmedo y despus
secaremos, lo mismo se realizara con el foto detector que se encuentra en el
primer pozo enfrente del LED.
3. Limpieza del filtro de aire: este se encuentra en el costado izquierdo del ACL,
para su limpieza se apaga el instrumento, se retira el filtro, se lava al chorro de
agua, se deja secar y se vuelve a colocar, hasta este momento se vuelve a
encender el instrumento.
4. Limpieza y lavado de los reservorios de reactivos: solo se vaciar el contenido
de los reservorios y se lavaran con agua destilada.
Bernal
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5. Ciclo de limpieza: este ciclo consiste en:
3 purgados sustituyendo la emulsin de referencia con cloro diluido al 10 %
3 purgados sustituyendo el cloro al 10 % con agua destilada y
3 purgados sustituyendo el agua destilada con la Emulsin de referencia
Original
La calendarizacin de los mantenimientos se indica en el mismo instrumento dentro de
la bitcora de mantenimiento.

8. =I=LIOGRA@IA
1) CORTES, Armando. ABC de la medicina transfusional. Cruz roja
Colombiana.
1 Edicin, Bogot 1994
2) GAMBOA, MARA CRSTNA. Manual Hemostasia y
coagulacin.1992
3) LNARES, S.G. Principios de nmunologa y transfusin. 2 Edicin
Caracas 1986
4) MANUAL AUTOMATED HEMATOLOGY ANALYZER
5) MSNUSL CD 3200
6) MANUAL TECNCO DE
7) OPERADOR MANUAL
8) RESTREPO, Alberto. Hematologia 1994
9) RUZ ARGUELLES. Fundamentos de Hematologa, Editorial Mdica
Panamericana , Mxico 1994
10) SABRAFEN, Sans J. Hematologa clnica. Barcelona, Espaa. 1990
11) VVES, Joan Lus Tcnicas de Laboratorio en Hematologa. Editorial
Salvat 1996
12) WLLAMS, Hematologa. Editorial Salvat 1995
13) WNTROBE. Hematologa clnica. Buenos Aires, nteramericana
editores 1995
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