Apunte Trabajos Prácticos y Tareas de Aula 2014

1
FAC. CS. BI OQU MI CAS Y FARMACUTI CAS

TRABAJOS PRCTICOS

TAREAS DE AULA

rea: Farmacognosia
2014

2
Docentes responsables del dictado de la asignatura Farmacognosia

Directora Acadmica del rea: Prof. Asociada Dra. Susana A. Zacchino
Prof. Adjunto Dr. Ricardo L. E. Furlan
Prof. Adjunto Dra. Silvia N. Lpez
Prof. Adjunto Dr. Maximiliano A. Sortino
J.T.P. Dra. Mara Victoria Castelli
J.T.P. Dr. Marcos G. Derita
Auxiliar de 1 Dr. Mario O. Salazar
Auxiliar de 1 Dra. Laura A. Svetaz
Auxiliar de 1 Lic. Carlos M. Solis
Auxiliar de 2 Lic. Estefana Butassi

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Indice

Tabla de contenido ............................................................................................. 4
Hidratos de carbono ........................................................................................... 5
Ejercitacin sobre hetersidos ............................................................................ 9
Lpidos .............................................................................................................. 12
T.P. Lpidos ...................................................................................................... 31
T.A. Lpidos ..................................................................................................... 33
Alcaloides ......................................................................................................... 39
Ejercitacin sobre alcaloides ............................................................................ 40
Alcaloides de la Quina ..................................................................................... 43
T.P. Alcaloides de la Quina ............................................................................. 46
Aceites Esenciales ............................................................................................ 48
T.P. Aceites Esenciales .................................................................................... 70
T.A. Aceites Esenciales .................................................................................... 78
Carotenoides ..................................................................................................... 81
T.P. Carotenoides ............................................................................................. 88
Hiprico generalidades ..................................................................................... 91
T.P. Hiprico .................................................................................................... 96
Anexos .............................................................................................................. 98
Recristalizacin ................................................................................................ 98
Cromatografa en Capa Delgada .................................................................... 107
Desecacin y Agentes Desecantes ................................................................. 110
Cromatografa de Adsorcin en Columna ...................................................... 118

4
Trabajos Prcticos 2014

Para el desarrollo de los trabajos prcticos el alumno debe conocer: Metodologa de
Trabajo en Productos Naturales (clase terica con la bibliografa indicada en ella) y
Mtodos Espectroscpicos (fundamentalmente IR, UV y
1
H-RMN).

TRABAJO PRCTICO (T.P.) CONOCIMIENTOS NECESARIOS
LIPIDOS

Tarea de aula
T.P. Obtencin de trimiristina a partir de
Nuez Moscada y saponificacin del
triglicrido

- Lpidos: generalidades
- Recristalizacin
- Cromatografa en Capa Delgada
- Gua de T.P. Obtencin de trimiristina a partir de
Nuez Moscada
ALCALOIDES

Tarea de aula
Obtencin de quinina y quinidina a partir de
Quina
- Alcaloides: generalidades
- Metodologa de trabajo con alcaloides
- Agentes desecantes
- Teora sobre Quina
- Gua de T.P. Obtencin de alcaloides de la Quina
ACEITES ESENCIALES

Tarea de aula
Obtencin de aceite esencial de Clavo
Obtencin de eugenol a partir de aceite
esencial de Clavo
- Aceites Esenciales: generalidades
- Destilacin de lquidos inmiscibles
- Gua de T.P. Obtencin de aceite esencial de
Clavo y Manzanilla
CAROTENOIDES

Obtencin de |-caroteno a partir de
Zanahoria
- Carotenoides: generalidades
- Cromatografa de Adsorcin en Columna
- Gua de T.P. Obtencin de -caroteno a partir de
Zanahoria
HIPRICO

Estudio comparativo de extractos y productos
comerciales que contienen Hiprico por CCD
- Generalidades de Hiprico
- Principales componentes
- Monografas farmacopeicas
- Gua de T.P.

Ejercitacin de Hidratos de carbono y Hetersidos

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HIDRATOS DE CARBONO: INTRODUCCIN

Los carbohidratos o hidratos de carbono son polihidroxialdehdos, polihidroxicetonas o
compuestos que por hidrlisis se convierten en aquellos. Un carbohidrato que no es hidrolizable
a compuestos ms simples, se denomina monosacrido. Los monosacridos que contienen un
grupo aldehdo, se le conoce como aldosa; si contiene una funcin cetona es una cetosa. Segn
el nmero de tomos de carbono que contenga, se conoce como triosa, tetrosa, pentosa,
hexosa, y as sucesivamente. La mayora de los monosacridos naturales son pentosas o
hexosas, siendo la ms importante la aldohexosa (+)-glucosa (frmula molecular: C
6
H
12
O
6
). Si
examinamos la frmula estructural de las aldohexosas, se observa que contienen cuatro centros
quirales o carbonos asimtricos (marcados con asteriscos):

Figura 1: aldohexosa

Para representar en un plano los carbonos asimtricos se han ideado varias
representaciones convencionales en proyeccin. La ms utilizada es la de Fischer. Segn esta
convencin, se proyecta la molcula sobre el plano del papel con las siguientes condiciones:
- La cadena carbonada se sita en vertical, con las valencias que la integran en direccin a
la parte posterior del plano.
- La cadena se orienta con la parte ms oxidada hacia arriba y la ms reducida hacia
abajo.
- Las valencias que no integran la cadena carbonada resultan horizontales y dirigidas
hacia la parte anterior del plano
Como estndar de referencia, se eligi el compuesto gliceraldehdo, por ser el
carbohidrato ms sencillo (una aldotriosa) capaz de exhibir isomera ptica.

6

As, se denomina ismero D al que presenta el OH a la derecha del espectador e ismero
L al que lo tiene hacia la izquierda en el gliceraldehdo:
- en los azcares se considera grupo OH unido al penltimo carbono (por ser el
carbono asimtrico ms alejado del grupo aldehdo o cetona)
La nomenclatura D-L permite designar la configuracin espacial absoluta de un
enantimero que posee un solo carbono asimtrico. Las letras D y L proceden de las palabras
latinas dextro y levo, pero no se debe confundir con la nomenclatura relativa que clasifica a los
enantimeros en formas dextrgiras y levgiras.
La D-(+)-glucosa puede describirse tambin como un hemiacetal cclico, resultante de la
reaccin entre el grupo aldehdo y el hidroxilo del C-5 de la estructura de la cadena abierta.
Hay dos formas ismeras de la D-(+)-glucosa debido a que estas estructura cclica tiene un
centro quiral ms que la estructura abierta original de Fischer. La -D-(+)-glucosa y la -D-(+)-
glucosa son diastermeros, puesto que difieren en configuracin del C-1. Tal par de
diastermeros se llaman anmeros.

Figura 2: Ciclacin de la glucosa y posterior reordenamiento


7

Figura 3: Formas de representar la estructura de la -D-(+)-glucosa (p.f. 146, [] = + 112). (a) Fisher; (b)
Haworth; (c) silla.

BIBLIOGRAFA

1. Robert Thornton Morrison/Robert Neilson Boyd. Qumica Orgnica; Fondo Educativo
Interamericano S.A., 1976; pp. 1097-1133.

EJERCITACIN DE HIDRATOS DE CARBONO
1. Entre los siguientes azcares distinga:
a) aldosas y cetosas.
b) D y L.


8
2. a - Indique el nombre completo de las siguientes cuatro estructuras de la galactosa.
b Marque los pares de enantimeros.
c Escriba las cuatro estructuras con frmulas de Haworth.

3. La imagen especular de la -L-(-)-galactopiranosa es:
a) -L-(+)-galactopiranosa.
b) -L-(+)-galactofuranosa.
c) -D-(+)-galactopiranosa.
d) -D-(+)-galactofuranosa.

4. El smbolo (+) o (-) es:
a) Un valor terico.
b) Un valor relacionado con la estereoqumica absoluta.
c) Un valor experimental.
Explique su eleccin.

5. Dibujar la frmula conformacional para la -D-galactopiranosa y dibujar:
a) Su enantimero.
b) Su anmero.
c) Un diastermero.
d) Un epmero.


9
EJERCITACIN SOBRE HETERSIDOS

1. Clasifique los siguientes hetersidos desde todos los puntos de vista que Ud. conoce.
2. Indique cuales son los compuestos que daran reaccin de Fehling positivo. Explique
por qu.
3. Explique la reaccin de hidrlisis con HCl diluido de los compuestos Digoxina,
Sensido C, Vitexina, Asiaticsido y Rutina.


10


11

Lpidos

12
LPIDOS
Desde el punto de vista bioqumico se considera que los lpidos son aquellas sustancias
que siendo insolubles en agua, pueden ser extradas de las clulas con disolventes orgnicos de
baja polaridad como ter y cloroformo. Esta definicin comprende una amplia variedad de
sustancias (esteroides, terpenos, grasas, aceites, ceras, fosfolpidos, etc.) que difieren mucho
desde el punto de vista estructural.
Sin embargo, en este captulo nos centraremos en los aceites, grasas, ceras y fosfolpidos
o sea en los steres de los cidos grasos con diferentes alcoholes. En el caso de los aceites,
grasas y fosfolpidos, el alcohol es el glicerol y en el caso de las ceras, es un alcohol de alto
peso molecular.
Veremos steres naturales en otra parte de esta asignatura, por lo que debe quedar bien
claro quines son los componentes de los steres lipdicos desde el punto de vista qumico.

GRASAS Y ACEITES
Las grasas son los constituyentes principales de las clulas almacenadoras de stas en
animales y plantas, y constituyen una de las reservas alimenticias importantes del organismo.
La diferencia entre grasas y aceites se da en que las primeras son slidas a temperatura
ambiente, en tanto que, los aceites son lquidos.
Desde el punto de vista qumico tanto los aceites como las grasas son steres
carboxlicos de un alcohol, el glicerol, con cidos grasos. Si los tres hidroxilos del alcohol estn
esterificados con un cido graso, el ster se llama triglicrido (Figura 1). Si los cidos grasos
que forman el triglicrido son del mismo tipo se los denomina triglicridos homogneos, en
caso que alguno o todos los cidos grasos que formen un triglicrido sean diferentes entre s se
denomina triglicrido heterogneo.

Lpidos

13

Figura1: Reaccin de formacin de triglicridos.

Si ese glicrido tiene dos hidroxilos esterificados se llama diglicrido, y si tiene un
hidroxilo esterificado se llama monoglicrido (Figura 2).

Diglicridos Monoglicrido

Figura2: Estructura de los dos posibles diglicridos y monoglicridos.

Los cidos grasos componentes de los lpidos naturales contienen en la mayora de los
casos un nmero par de tomos de carbono (de 2 a 22 tomos de carbono), lo cual es un
resultado natural de la biosntesis de los mismos (Tabla I). Aquellos que contienen 14, 16 y 18
carbonos son los que se encuentran en mayor proporcin en las grasas y aceites de origen
natural.

TABLA I: CIDOS GRASOS SATURADOS

Etanoico o actico

2:0
Butrico o butanoico

4:0
Hexanoico o caproico

6:0
Octanoico o caprlico

8:0

Lpidos

14
Decanoico o cprico

10:0
Dodecanoico o lurico

12:0
Tetradecanoico o mirstico

14:0
Hexadecanoico o palmtico

16:0
Octadecanoico o esterico

18:0
Eicosanoico o araqudico

20:0
Docosanoico o behnico

22:0

En la naturaleza se encuentran cidos grasos conteniendo instauraciones en una
proporcin considerable. Los ms comunes son aquellos que presentan dobles enlaces en sus
estructuras. El nmero de dobles enlaces pude variar de uno a seis (en plantas superiores el
nmero raramente excede los tres, pero en animales y algas puede llegar a seis) y en aquellos
casos que presentan ms de uno, los mismos no se encuentran conjugados (Tabla II).

TABLA II: CIDOS GRASOS INSATURADOS

Lpidos

15
Adems de los cidos grasos mostrados anteriormente se han descripto otros que se
encuentran en menor proporcin como por ejemplo los hidroxilados, acetilnicos (conteniendo
triples enlaces) y cclicos (Tabla III).

TABLA III: CIDOS GRASOS HIDROXILADOS, ACETILNICOS Y CCLICOS.

HIDROXILADOS

ACETILNICOS

CCLICOS

Lpidos

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NOMENCLATURA
Para nombrar los cidos grasos se han desarrollado diversos tipos de nomenclatura. El
nombre trivial es el ms comnmente empleado. Pero, si por ejemplo consideramos el cido
linoleico (Tabla II), las distintas posibilidades de nombrarlo que se encuentran en la literatura
son:
- Segn la IUPAC (International Union of Pure and Applied Chemistry): cido cis, cis-
octadeca-9, 12-dienoico.
- En forma reducida: C18:2
9,12
, donde el C18 indica el nmero de tomos de carbono; 2
el nmero de insaturaciones y (delta mayscula) indica la localizacin de los dobles enlaces
de configuracin cis.
- Para los estudios de bioqumica y biosntesis, se usa: C18:2 :6. C18 indica el nmero
de tomos de carbono; 2 el nmero de insaturaciones y (omega) el nmero de tomos de
carbono desde el metilo terminal hasta el doble enlace.
Para la nomenclatura IUPAC se debe considerar que el carbono carbonlico siempre es
el C1. Esta nomenclatura tiene el inconveniente de que la oxidacin de los cidos grasos
durante su metabolismo intracelular se efecta con acortamientos de la cadena de tomos de
carbono en unidades de dos tomos de carbono, (la -oxidacin), proceso que ocurre a partir
del carboxilo (C1); por lo tanto, la relacin del nuevo carboxilo que se forma en la cadena de
carbono respecto de la posicin de el o los dobles enlaces, cambia. La ltima nomenclatura
tiene la ventaja de que denomina C1 al del extremo opuesto, es decir al del metilo, y por lo
tanto durante la -oxidacin del cido graso, la relacin entre el C1 y los dobles enlaces no
resulta alterada.
Nomenclatura de triglicridos
Los glicridos se designan como steres; por ejemplo: tripalmitato de glicerilo o
nombres derivados del cido graso cambiando la terminacin ico por ina (para el caso
anterior sera tripalmitina).
El grado de esterificacin se indica por los prefijos mono, di o tri en el caso de glicridos
simples que tienen un solo tipo de cido graso (Figura 3.a). Para los glicridos mixtos, se usan
los prefijos de acuerdo con el nmero de radicales presentes, sealando las posiciones que
ocupan con la letra del alfabeto griego (Figura 3.b y c).
Lpidos

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(a) Tripalmitato de glicerilo (o tripalmitina)

(b) o estearo | palmitato olena

(c) | monopalmitato de glicerilo

Figura 3: Estructura de: (a) tripalmitato de glicerilo, (b) o palmitato | estearo olena y (c) | monopalmitato de
glicerilo.

CIDOS GRASOS ESENCIALES
Las grasas son nutrientes indispensables y se admite que en la alimentacin deben
constituir del 30 al 35% del aporte calrico diario. Si bien esto es cierto, debe quedar claro, que
no todos los cidos grasos tienen igual importancia en la dieta. Algunos cidos grasos
poliinsaturados son indispensables y se los denomina cidos grasos esenciales (AGE) porque
el organismo humano no los sintetiza (ej. cido linoleico) y por eso deben ser aportados
necesariamente con la dieta. Los AGE poseen un importante papel biolgico, siendo
constituyentes de fosfolpidos y precursores de eicosanoides (prostaglandinas, leucotrienos y
tromboxanos). Bsicamente se distinguen tres cidos grasos esenciales: cido linoleico, cido
linolnico y cido araquidnico.
En caso de dficit, los cidos linolnico y araquidnico podran sintetizarse a partir del
cido linoleico, por eso el cido linoleico se considera como el ms esencial de todos ellos.
El cido araquidnico (20:4) es quizs el cido graso ms importante de los tipo Omega (),
dado que es precursor directo de los eicosanoides.
o
Lpidos

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Los AGEs se encuentran en alimentos de origen animal y vegetal; especficamente, los
alimentos ricos en AGEs incluyen las semillas vegetales y los aceites de pescados de agua fra.
Cuando se habla de cidos grasos alimentarios generalmente se refiere a ellos como Omega 3
( 3) y Omega 6 ( 6) (Figura 4); que como se ha explicado antes, est relacionado con la
posicin del primer doble enlace desde el extremo metilo.

cido linolnico cido linoleico

Figura 4: Numeracin segn la nomenclatura omega () de los cidos linolnico ( 3) y linoleico ( 6).

Estos no son los nicos tipos de omega que existen sino que todos aquellos que tengan
instauraciones en esas posiciones van adquirir tal denominacin, por lo tanto los cidos grasos
insaturados en estas posiciones con mayor nmero de carbono tambin son considerados cidos
grasos tipo omega.

CONFIGURACIN DE LOS CIDOS GRASOS INSATURADOS NATURALES
La configuracin de los dobles enlaces de los cidos insaturados naturales es casi
siempre cis. Esta preferencia en la configuracin est directamente relacionada con el punto de
fusin de los cidos grasos.
En estado slido las molculas se acomodan entre s lo mejor que pueden,
mantenindose unidas por fuerzas de Van der Waals. Cuando mejor logran acomodarse, tanto
ms alto resulta el punto de fusin. Las cadenas de cidos saturados (Figura 5a) se hallan
extendidas en zig-zag debido a los ngulos de enlace tetradricos de modo que encajan bien
unas con otras.
Las cadenas insaturadas trans (Figura 5b) se parecen mucho a las saturadas, pero en las
cadenas insaturadas cis (Figura 5c) el zig-zag no es lineal por lo que el acomodamiento mutuo
es bastante deficiente. El resultado neto es que la instauracin cis disminuye el punto de fusin
del triglicrido (Tabla IV).
Lpidos

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Figura 5: Estructura de cido graso saturado (a) y cido graso monoinsaturado configuracin trans (b) y cis (c).

TABLA IV: PUNTOS DE FUSIN

CIDOS GRASOS SATURADOS CIDOS GRASOS INSATURADOS
Nombre Estructura P
f
Nombre Estructura P
f

cido lurico 12:0 44 cido palmitoleico 16:1 -7 32
cido mirstico 14:0 58 cido oleico 18:1 -9 16,3
cido palmtico 16:0 63 cido linoleico 18:2 -6 -5
cido esterico 18:0 72 cido linolnico 18:3 -3 -11,3

ACEITES Y GRASAS VEGETALES
La formacin de grasas y aceites es particularmente activa en el perodo de maduracin
de los frutos y semillas, almacenndose preferentemente en el endosperma, generalmente en
cantidades entre el 20-50%.
Los aceites y grasas naturales estn constituidos por mezclas de triglicridos lquidos y
slidos en las que normalmente predominan uno o dos cidos grasos (Tabla V). La extraccin
de las mismas se realiza con solventes orgnicos o por expresin en prensas hidrulicas en fro
o caliente.
Junto a los triglicridos, en los aceites y grasas vegetales se encuentran siempre cidos
grasos libres y una fraccin constituida por sustancias lipfilas no saponificables, variable en
cantidad en los distintos aceites. Como componente de esta fraccin insaponificable se
encuentran esteroles (fitosteroles como sitosterol, estigmasterol) tocoferoles (alfa-tocoferol),
carotenos, escualeno, alcoholes terpnicos, etc.
El aceite de oliva, por ejemplo, contiene un alto porcentaje de cido oleico mientras que
el aceite de maz se compone principalmente de los cidos linoleico y oleico. La manteca
contiene muchos cidos grasos, la mayora saturados.

Lpidos

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TABLA V: COMPOSICIN TPICA EN CIDOS GRASOS DE GRASAS Y ACEITES
COMPOSICION MEDIA %
Lurico Mirstico Palmtico Esterico Palmitoleico Oleico Linoleico Linolnico
ANIMALES
Mantequilla 2.5 11.1 29.0 9.2 4.6 26.7 3.6 -
manteca de cerdo ---- 1.3 28.3 11.9 2.7 47.5 6.0 ---
hgado de bacalao ---- 5.8 8.4 0.6 20.0 29.1 29.1 ---
Ballena 0.2 9.3 15.6 2.8 14.4 35.2 --- ---
VEGETALES
manteca de cacao --- --- 24.4 35.4 --- 38.1 2.1 ---
Coco 45.4 18.0 10.5 2.3 0.4 7.5 ---- ----
Maz ---- 1.4 10.2 3.0 1.5 49.6 34.3 ----
semilla de algodn ---- 1.4 23.4 1.1 2.0 22.9 47.8 ---
Linaza --- --- 6.3 2.5 --- 19.0 24.1 47.4
Oliva --- --- 6.9 2.3 --- 84.4 4.6 ---
Cacahuete --- --- 8.3 3.1 --- 56.0 26.0 ---
Soja 0.2 0.4 9.8 2.4 0.4 28.9 50.7 6.5

REACCIONES QUE PUEDEN EXPERIMENTAR LOS TRIGLICRIDOS
El grupo ster y los dobles enlaces de los triglicridos pueden experimentar reacciones
qumicas, entre ellas:

1) HIDRLISIS DE LOS ACEITES FIJOS O SAPONIFICACIN: es la hidrlisis en medio
alcalino que produce sales de cidos carboxlicos y glicerol (Figura 6), ambos solubles en
agua. El jabn corriente actual es una mezcla de sales sdicas de cidos grasos de cadena larga.

Figura 6: Reaccin de saponificacin.

Lpidos

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2) HIDROGENACIN DE DOBLES ENLACES: la hidrogenacin de alguno de los
dobles enlaces de cidos grasos convierte a los triglicridos en slidos. Este endurecimiento de
los aceites es la base de una industria importante que produce grasas para cocinar y
oleomargarinas. La hidrogenacin no slo cambia las propiedades fsicas de una grasa sino
tambin las propiedades qumicas y adems una grasa hidrogenada es menos propensa a
ponerse rancia que una no hidrogenada.
3) ENRANCIAMIENTO: es un proceso degradativo de oxidacin, como consecuencia del
cual las grasas adquieren caracteres organolpticos desagradables. La rancidez se debe a la
presencia de cidos y aldehdos voltiles de mal olor, sustancias que resultan del ataque por el
oxgeno a posiciones allicas reactivas en las molculas del triglicrido.
La causa ms comn de enranciamiento es la oxidacin atmosfrica espontnea, la luz, el
calor, la humedad y ciertos metales la aceleran. Por efectos de la rancidez, no solamente se
alteran los caracteres organolpticos sino que las grasas rancias son inconvenientes porque
destruyen factores indispensables en la alimentacin (Vitamina A y E, etc).
La estabilidad de algunos aceites a la rancidez se debe a la presencia de sustancias que
actan como inhibidores de la oxidacin llamadas antioxidantes. Son antioxidantes naturales
los tocoferoles, la cefalina y el gosipol.
Es posible que la hidrogenacin retarde el desarrollo de la rancidez, reduciendo el nmero
de dobles enlaces y luego el nmero de posiciones allicas.
4) ISOMERIZACIN DE DOBLES ENLACES: en presencia de catalizadores de
hidrogenacin, los compuestos insaturados no slo se hidrogenan sino que tambin se
isomerizan (con desplazamientos de dobles enlaces o transformaciones estereoqumicas) lo que
afecta las propiedades fsicas y qumicas.

DIFERENCIA ENTRE GRASAS Y ACEITES
Grasas: Son mezclas complejas de triglicridos que contienen mayor proporcin de cidos
grasos saturados (Figura 7) y por tal razn son slidas a temperatura ambiente.

Figura 7: Estructura de tripalmitina.

Lpidos

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Aceites: Son mezclas complejas de triglicridos que contienen mayor proporcin de cidos
grasos insaturados (Figura 8) y por tal razn son lquidas a temperatura ambiente.

Figura 8: Estructura de o linoleil | palmitato oleina.

USOS DE ACEITES Y GRASAS
Los aceites vegetales son de amplio uso en cosmtica como el aceite de almendras, oliva,
man, coco, jojoba, etc., aunque tambin encuentran muchas otras aplicaciones.
Como ya dijimos mediante el proceso denominado hidrogenacin cataltica es posible
adicionar hidrgeno a los dobles enlaces de los glicridos insaturados de aceites, para
convertirlos en grasas slidas o semislidas, segn la extensin en la que se haya llevado a
cabo el proceso.
Muchas grasas comestibles se producen por hidrogenacin de aceites de maz y de
semillas de algodn. Las margarinas se preparan por hidrogenacin de aceites hasta alcanzar la
consistencia de la mantequilla, mezclando ntimamente el producto con sobrantes de leche,
completando con vitamina A y aadindole un colorante artificial.
En los ltimos aos, la grasa saturada de la dieta se ha considerado como un factor
causante de las enfermedades ateroesclerticas, las ms serias de las cuales son la trombosis
coronaria y la parlisis cerebral.
A consecuencia de las posibles implicaciones en la salud, los aceites como el de maz y
crtamo, que contienen grandes porcentajes de cido linoleico (poliinsaturado), se emplean
cada vez en mayor cantidad como alimentos. Las grasas de cocina semislidas y las margarinas
pueden hacerse a partir de esas grasas poliinsaturadas mediante el empleo de emulsionantes, en
lugar de la hidrogenacin, que se convierte as en una prctica del pasado.

Lpidos

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CARACTERIZACIN DE LOS LPIDOS NATURALES

Si los aceites naturales contienen cidos grasos distintos son posibles estructuras
diferentes de triglicridos. Algunas de ellas se deberan a que determinados cidos grasos
ocupan diferentes posiciones (por ejemplo la l-palmitato diestearina, es diferente de la 2-
palmitato diestearina) y otras a pares DL (por ejemplo la l-palmitato diestearina puede existir
como D o como L). Adems pueden existir triglicridos de diferente composicin como la
palmitodiestearina y la estearodipalmitina.
Todos estos compuestos difieren muy poco en sus propiedades fsicas por lo que resultan
muy difciles de separar. Es por eso que para caracterizar a un aceite o una grasa natural, se
usan las propiedades medias de la muestra y no las de sus componentes particulares.
En la pgina siguiente se detallan los diversos ensayos cuantitativos que se utilizan para
caracterizar grasas y aceites.

ndice de acidez
Es la cantidad en mg de KOH necesaria para neutralizar los cidos libres contenidos en
un gramo de sustancia.
REACCIN QUMICA

PROPIEDADES DESCRIPTAS: cantidad de cidos libres que forman parte de esa sustancia.

ndice de saponificacin
Es la cantidad en mg de KOH necesaria para neutralizar los cidos libres y saponificar
los steres contenidos en un gramo de sustancia.
REACCIONES QUMICAS
Reaccin de neutralizacin:

Reaccin de saponificacin:

PROPIEDADES DESCRIPTAS: cantidad de cidos totales (libres y esterificados) que forman
parte de esa sustancia.
Lpidos

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ndice de ster
Es la cantidad en mg de KOH necesaria para saponificar los steres contenidos en un
gramo de sustancia. Si el ndice de saponificacin y el ndice de acidez han sido determinados,
por diferencia entre los dos, se obtiene el ndice de ster.
REACCIN QUMICA

PROPIEDADES DESCRIPTAS: cantidad de cidos esterificados que forman parte de esa
sustancia. Se puede calcular el peso molecular medio, por ejemplo para un triglicrido seria:
PM
tg
= 168 x 1000 168 = 3 x PM
KOH

ndice de ester tg=triglicrido

ndice de iodo
El ndice de iodo de un aceite o grasa representa los gramos de iodo capaz de ser fijado, en
determinadas condiciones, por 100 gramos de la muestra en ensayo.
REACCIN QUMICA

PROPIEDADES DESCRIPTAS: grado de instauracin, un milimol de sustancia consume dos
miliequivalentes (256 mg) de iodo.

ndice de hidroxilo o ndice de acetilo
Es la cantidad en mg de KOH necesaria para neutralizar el cido actico obtenido por
hidrlisis de un gramo de aceite o grasa acetilado. Se obtiene por diferencia entre el ndice de
saponificacin de la muestra acetilada y de la muestra sin acetilar (ver ensayos para aceites y
grasas de la Farmacopea Nacional Argentina)
REACCIN QUMICA

Lpidos

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PROPIEDADES DESCRIPTAS: el cido graso primero se acetila con anhdrido actico que se
combina con todos los grupos hidroxlicos presentes. Como stos no existen en la mayora de
los cidos grasos (tanto libres o formando parte de glicridos), los pequeos valores de ndice
de acetilo que suelen obtenerse se deben a cantidades relativamente pequeas de esteroles. En
cambio en un aceite como el de ricino, el ndice de acetilo es elevado (146-150) como
consecuencia de la gran cantidad de cido ricinoleico, un hidroxicido.

La acetilacin se realiza segn el siguiente esquema
Muestra de aceite + Anhdrido actico
Calentamiento a reflujo durante 2 hs.
Agregar 500 mL de agua destilada y hervir haciendo burbujear N
2
y CO
2
Enfriar y separar el agua
Agua Aceite acetilado
Agregar Na
2
SO
4
y dejar
en contacto 1 hora
Filtrar y secar en estufa
ACEITE CLARO Y
BRILLANTE

ACEITES SECANTES
Ciertos aceites contienen gran proporcin de glicridos muy insaturados. Los ms notables
de ellos son, el aceite de linaza (semilla de lino) y el aceite de tung (de la nuez de tung). Tales
aceites se polimerizan dando una pelcula resistente y lustrosa cuando se ponen en contacto con
el oxgeno de la atmsfera. Se conocen con el nombre de aceites secantes y se emplean
considerablemente en la formulacin de pinturas, especialmente para superficies exteriores. El
ndice de Iodo da una medida de las propiedades secantes de un aceite (ver ms adelante). Los
aceites empleados en alimentacin son los semisecantes, por ejemplo el de soja y el de girasol.

ndice de iodo < 100 = no secante
Lpidos

26
ndice de iodo entre 100 y 150 = semisecante
ndice de iodo > 150 = secante

CERAS
Las ceras son productos naturales muy distribuidos en vegetales y animales, y cumplen
una funcin de recubrimiento. Qumicamente son steres de alcoholes saturados,
monohidroxilados y de alto peso molecular (C12 a C36), con cidos grasos de peso molecular
elevado (Figura 9). Es caracterstico que tanto los alcoholes como los cidos grasos sean de un
nmero par de tomos de carbono (Tabla VI). La mayora de estos alcoholes slo se han
encontrado en las ceras, siendo casi todos de cadena recta aunque en algunas ceras se puedan
encontrar alcoholes cclicos como los esteroles.

Figura 9: Estructura de palmitato de miricilo (a) y cerotato de cetilo (b).

Las ceras de plantas son en general de punto de fusin superior a las de otro origen. El
mejor solvente solubilizador de ceras es el benceno; son tambin solubles en ter, cloroformo y
casi todas son solubles en alcohol caliente. La solubilidad est en razn inversa al peso
molecular de los componentes.

TABLA VI: COMPONENTES DE LAS CERAS
Alcoholes primarios saturados
Lurico C
12
H
26
O
Mirstico C
14
H
30
O
Cetlico C
16
H
30
O
Octadecanol C
18
H
38
O
Eicosanol C
20
H
42
O
Carnaublico C
24
H
50
O
Cerlico C
26
H
54
O
Octacosanol C
28
H
58
O
Miriclico C
30
H
62
O
Lacerol C
32
H
66
O
Incarnatlico C
34
H
70
O

Alcoholes secundarios
Nonacosan-10-ol CH
3
-(CH
2
)
18
-CHOH-(CH
2
)
8
-CH
3

Lpidos

27
Nonacosan-15-ol CH
3
(CH
2
)
13
-CHOH-(CH
2
)
13
-CH
3

cidos
Palmtico CH
3
(CH
2
)
14
COOH
Lignocrico CH
3
(CH
2
)
22
COOH
Certico CH
3
(CH
2
)
24
COOH
Montanito CH
3
(CH
2
)
26
COOH
Melissico CH3(CH
2
)
28
COOH
Laceroico CH
3
(CH
2
)
30
COOH

SIGNIFICADO BIOLGICO DE LAS CERAS
Las ceras son generalmente secreciones de insectos o cubiertas protectoras de las hojas
o de los frutos, muy raramente son constituyentes celulares. En los animales las ceras sirven
para formar una cubierta protectora contra el agua, por su propiedad de hidrofobicidad. Este es
el papel de la secrecin crea elaborada por las glndulas esteatofrigias de las aves acuticas,
las que segregan una cera con la cual recubren su plumaje evitando que se moje. Tambin es
evidente esta accin protectora de la cera de abeja en los panales de miel, de la lanolina en la
lana de oveja, etc.
En los vegetales, las ceras se hallan como componentes de la capa cuticular o como ceras
epicuticulares que recubren hojas, tallos, frutos, etc. y probablemente su principal funcin es
protegerlos contra la transpiracin excesiva. Las hojas de casi todas las conferas se hallan
recubiertas por una membrana cuticular crea que contribuye a retener la humedad.

DIFERENCIA ENTRE CIDOS GRASOS, GLICRIDOS Y CERAS
Una diferencia prctica importante entre cidos grasos, glicridos (aceites o grasas) y
ceras est relacionada con los diferentes tipos de reacciones y reactividades en medio alcalino.
La saponificacin, del griego sapon (jabn), es la reaccin de hidrlisis de enlaces steres bajo
condiciones bsicas en medio acuoso o alcohlico que experimentan aceites, grasas y ceras
(obtenindose las sales de los cidos grasos y alcohol). Esta reaccin es diferente a la que
experimentan los cidos grasos libres en las mismas condiciones, estos se neutralizan (N)
formando la sal correspondiente.
Si bien glicridos y ceras saponifican, las condiciones en las que esta reaccin se lleva a
cabo son diferentes para cada grupo. Las ceras saponifican (S) solo cuando se utiliza un medio
alcohlico en tanto que los glicridos saponifican en este medio como en acuoso.

Lpidos

28
TABLA IV: Diferencia de reactividad de cidos grasos, glicridos y ceras.

NaOH aq. NaOH aq. KOH alcohlico KOH alcohlico
T ebullicin T ambiente T ebullicin T ambiente
AC. GRASOS N N N N
GLICRIDOS S NS S NS
CERAS NS NS S NS
(N= NEUTRALIZA, S= SAPONIFICA y NS= NO SAPONIFICA)

FOSFOLPIDOS
Tambin llamados fosftidos, incluyen todos los componentes lipdicos que contienen
fsforo en sus molculas. Los fosfolpidos son en general solubles en los solventes orgnicos
de las grasas, pero difieren considerablemente por ser insolubles en acetona, solvente que tiene
la propiedad de precipitarlos desde sus soluciones en alcohol, cloroformo, etc. La cefalina y la
esfingomielina son tambin insolubles en alcohol fro; la esfingomielina es casi insoluble en
ter etlico.
Los fosfolpidos son insolubles en agua, pero son muy higroscpicos y fcilmente
emulsionables, son precipitados por los cidos y con numerosas sales como cloruro de platino y
cadmio forman compuestos de adicin insolubles.
Son componentes esenciales de las clulas animales y vegetales. Se clasifican en:
A) LECITINAS (son los nicos fosfolpidos de aplicacin en farmacia)
B) CEFALINAS
C) ESFINGOMIELINAS
Las lecitinas son sustancias complejas que se encuentran en todos los tejidos, abundando
especialmente en el cerebro, en los nervios, en el esperma y en la yema del huevo de gallina
(aproximadamente un gramo por yema).
Las lecitinas derivan del glicerol, como los aceites y las grasas pero se diferencian de
ellas en que una funcin alcohlica se encuentra esterificada por un cido inorgnico, el
ortofosfrico. Siendo posible dos cidos glicerofosfricos, las lecitinas pueden derivar de
ambos tipos (Figura 10).
Lpidos

29

Figura 10: Estructura de o-cido glicerofosfrico (a) y |-cido glicerofosfrico (b).

Los cidos grasos hallados en las lecitinas son, entre los saturados: palmtico y esterico;
y entre los no saturados: oleico, linoleico, linolnico y araquidnico, este ltimo, se halla en las
lecitinas vegetales.
Se acepta que en general los cidos grasos presentes en una molcula de lecitina son
diferentes, y que uno de ellos es saturado y el otro es etilnico. No se descarta la posibilidad de
que existan lecitinas con un solo cido graso. Las lecitinas ms abundantes pertenecen a la serie
o y generalmente el cido graso insaturado est en posicin |.
Otro constituyente importante que se encuentra en la lecitina (Figura 11, a) es la colina
(Figura 11, b), la cual est esterificando una funcin cido fosfrico. La colina es una base
muy fuerte, y funciona en el organismo impidiendo la acumulacin de grasa

Figura 11: Estructura de lecitina (a) y colina (b).

Fuentes de obtencin de lecitina
-Ovolecitina: yema de huevo
-Vegilecitina: porotos de soja
-Cerebral: sesos de ternera
Usos: emulsionante, debido a los grupos polares que contiene es fcilmente dispersable en agua
y puede favorecer la formacin de emulsiones O/A. Sin embargo es muy raro que sea utilizada
sola, como agente emulsionable. Por otro lado es difcil de conservar por su fcil oxidacin.
Lpidos

30
Otras funciones: antioxidante, estabilizante de alimentos y preparados farmacuticos.

CARACTERSTICAS FSICAS DE LOS FOSFOGLICRIDOS
Son slidos blancos de consistencia crea, por exposicin al aire se oscurecen y
experimentan cambios complejos a causa de la tendencia de sus cidos grasos no saturados a
peroxidarse por la accin del oxgeno atmosfrico.

Esquema de saponificacin y separacin de cidos grasos, glicerol y sustancias
insaponificables

MATERIAL VEGETAL
FRACCION LIPIDICA
GLICEROL + SALES POTASICAS + SUSTACIAS INSAPONIFICABLES
FASE ETEREA
Sustancias insaponificables
FASE ACUOSA
Sales de cidos grasos + Glicerol
Extraccin con solventes
Saponificacin (KOH alcohlico)
1) Evaporar el solvente
2) Extraccin con ter/ agua
1) Acidificar (HCl diluido)
2) Extraccin con solvente orgnico
FASE ETEREA
Mezcla de cidos grasos
FASE ACUOSA
Glicerol

BIBLIOGRAFA
1-Farmacognosia. Fitoqumica de Plantas Medicinales 2, Jean Bruneton, Editorial Acribia,
S.A. Zaragoza (Espaa). 2001.
2- Dewick, P.M. Medicinal natural products: a biosynthetic approach 2 Ed, John Wiley &
Sons Ltd., Chichester, UK. 2002.
3- Lipid libray: Lipid Chemistry, Biology, Technology & Analysis. The American Oil
Chemists Society. Libre acceso via Internet HtT.P.://lipidlibray.aocs.org.
Lpidos

31
Gua de Trabajo Prctico: Lpidos

OBJETIVOS
*Obtencin de trimiristina a partir de Nuez Moscada.
*Generacin de cido mirstico a partir de trimiristina.

OBTENCIN DE TRIMIRISTINA A PARTIR DE NUEZ MOSCADA
La Nuez Moscada es la semilla madura y desecada de Myristica fragrans (Flia.
Miristicceas), desprovista de sus tegumentos y del arilo y a veces provista de una delgada capa
de cal que le sirve para ahuyentar los insectos (Figura 12). El secado de la semilla dura de 3 a
6 semanas, luego de las cuales se le quitan las testas. Los rboles de Myristica fragrans,
cultivados en regiones tropicales, fructifican 2 a 3 veces al ao.
(a) (b) (c) (d)

Figura 12: Fruto carnoso de Myristica fragrans (a y b), semilla cubierta del arilo (c) y semilla seca desprovista del
arilo y de la capa carnosa externa (d).

Constituyentes de las semillas:
25-40% de un aceite fijo slido a temperatura ambiente (manteca de Nuez Moscada)
constituido por trimiristina (Figura 13, a).
8-15% de un aceite voltil que contiene safrol y miristicina (Figura 13, b y c
respectivamente) como constituyentes principales.

Figura 12: Estructura de trimiristina (a), de safrol (b) y de miristicina (c).

Lpidos

32
AISLAMIENTO DE LA TRIMIRISTINA
1. Calentar a reflujo 2,5 gr. de Nuez Moscada finamente pulverizada en 15 ml. de ter de
petrleo durante 40 minutos en bao de agua.
2. Filtrar por gravedad con papel de filtro plegado. Desechar el residuo slido.
3. Eliminar el solvente por destilacin. Se obtiene un residuo semislido. Guardar una
muestra en tubo de Khan.
4. Recristalizar desde etanol. Se obtiene la trimiristina cristalina cuyos cristales son
incoloros e inodoros y cuyo punto de fusin est comprendido entre 54-55 C (las aguas madres
y las aguas de lavado contienen miristicina y otros productos que no sern extrados en ste
trabajo prctico y por lo tanto se descartan).

GENERACIN DE CIDO MIRSTICO A PARTIR DE TRIMIRISTINA:
SAPONIFICACIN DE LA TRIMIRISTINA
1. Calentar a reflujo 500 mg de trimiristina con 7,5 ml. de solucin de KOH alcohlico
al 3,5 % P/V durante una hora en un bao de agua. Separar una porcin de muestra para el
anlisis final.
2. Agregar 15 ml de agua al baln. Agitar para ver la formacin de espuma.
3. Acidificar con HCl concentrado (hasta pH cido) y dejar a temperatura ambiente hasta
que solidifique el cido mirstico.
4. Filtrar por succin y lavar los cristales con agua destilada.
5. Analizar los resultados por CCD.
Sembrar: (1) Extracto crudo, (2) TM pura, (3) cido mirstico
Fase Estacionaria: Slica Gel 60F
Fase Movil: Hexano:AcOEt (9:1)
Revelador: Vapores de I
2
.

CUESTIONARIO
1. Cules son los pasos a seguir en la recristalizacin de la trimiristina y del cido mirstico?
2. Explique por medio de ecuaciones y frmulas qumicas que obtiene por la saponificacin de
la trimiristina. Cul es el objeto del agregado de HCl cc. luego de la saponificacin y qu
producto se obtiene?
3. Considera Ud. suficiente la cantidad de KOH usado en ste trabajo prctico para la
saponificacin de la trimiristina? Justifique su respuesta.

Lpidos

33
TAREA DE AULA DE LPIDOS
A. EJERCITACIN SOBRE CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA
1. Ordene los siguientes solventes en orden creciente de polaridad (ver pg. 123). Dibuje sus
frmulas qumicas
Metanol
Cloroformo
Hexano
Acetato de etilo
Agua
2. Ordene las siguientes mezclas de solventes en orden creciente de polaridad
Hexano puro
Hexano:acetato de etilo 5:5
Acetato de etilo puro

3. Se realiza una CCD de los compuestos A y B, utilizando como fase estacionaria slica Gel y
como fase mvil hexano:acetato de etilo 5:5, dando como resultado el cromatograma de la figura.
a) Qu mancha corresponde a cada compuesto? Justifique
b) Cmo ser el cromatograma si utilizamos como fase mvil hexano?
c) Y si usamos metanol?
A B
OH C
H
2
C CH
3
HO OH

4. Qu relacin existe entre la posicin relativa en una CCD y el orden de elucin en una
cromatografa en columna? (suponer que se utilizan las mismas fases mviles y estacionarias en ambos
casos)
Punto de siembra

Frente de solvente
Desarrollo
Lpidos

34
5. El siguiente cromatograma fue realizado con las siguientes condiciones: fase mvil
hexano:acetato de etilo 5:5 y fase estacionaria Slica gel. Qu cambios realizara para lograr una mayor
separacin de las manchas?

B. EJERCITACIN SOBRE LPIDOS
1. Si realiza una CCD utilizando slica gel y cloroformo, de una mezcla de tripalmitina y cido
palmtico.
a) Cul sera el resultado de la misma una vez revelada con vapores de Iodo?
b) A qu compuesto corresponde cada mancha?
c) Cul sera el resultado si utilizara metanol como fase mvil?
d) Y si utilizara hexano?
e) Qu sucedera si cambiara la fase estacionaria por almina?
f) Y si la cambiara por RP18?
2. El grado de insaturacin de lpidos de membranas en las patas de reno es mayor en las clulas
cercanas a los cascos que en las cercanas al cuerpo. Qu valor tiene este gradiente de insaturacin para
la supervivencia?
3. Escriba las estructuras de todos los glicridos que sean formados por los cidos oleico y palmtico.
4. Calcular el PM de un triglicrido puro cuyo ndice de saponificacin es 200.
5. Calcular el ndice de saponificacin y el de iodo de un triglicrido puro de PM = 718 y que incluye
dos insaturaciones. Clasifquelo de acuerdo a su secatividad.
6. Calcule el ndice de acidez de un aceite de densidad 0.9 g/ml, sabiendo que en la titulacin de 10 ml
de aceite se consumieron 9 ml de KOH 0.1 N.
7. Se tienen los siguientes ndices de iodo para varios aceites: A=80, B=180, C=0,
D=100.Clasifquelos de acuerdo a su secatividad. Cules eligira para alimentacin?
8. El punto de fusin de las grasas naturales estar dado por un valor neto? Por qu?
Punto de siembra

Frente de solvente
Desarrollo
Lpidos

35
9. Escriba un ejemplo de un aceite, una grasa y una cera marcando sus semejanzas y diferencias. Diga
si el aceite que escribi es un triglicrido simple o mixto. Explique por qu.
10. Defina los ndices de lpido. Bajo qu condiciones determina el ndice de acidez y de
saponificacin. A qu se debe esa diferencia?
Indicar si los valores de los ndices de lpido sern iguales o distintos de cero.
ndice de
acidez
ndice de
ster
ndice de
saponificacin
ndice de
yodo
ndice de
acetilo
Triestearina pura
Tripalmitina con cido
palmtico

Trirricinolena pura
Trilinolena con cido
linoleico

11. Cul de los siguientes glicridos simples tiene mayor ndice de iodo: palmitina, triolena o
trilinolena? Escriba sus frmulas y explique.
12. Cmo estn compuestos los aceites y grasas vegetales?
13. Cmo explica la capacidad detergente de los jabones en relacin con su estructura (sales sdicas de
cidos grasos)?
14. Realice un esquema indicando reactivos y condiciones de trabajo para lograr la separacin de cido
palmtico y cido esterico a partir de una mezcla de:
a) cido palmtico y triestearina
b) cido esterico y palmitato de cetilo
c) Estearato de cetilo y tripalmitina
15. Qu mtodo/s de extraccin por solventes utilizara para obtener un lpido termolbil a partir de
una muestra vegetal? qu tipo de solventes utilizara?
16. Ud. recibe en su laboratorio una muestra que contiene Acido linolnico y triestearato de glicerilo
a) Indique cmo esperara que le dieran los ndices de lpido (acidez, saponificacin, ster, acetilo,
yodo) y justifique.
b) Esquematice cmo esperara que le diera una Cromatografa en Capa Delgada de la muestra que
Ud. recibi y justifique.
b.1- Fase estacionaria: Slica Gel 60 GF-254
Lpidos

36
Fase mvil: Hexano-Acetato de Etilo (9:1)
Revelador: Yodo.
Revelador: Yodo.
Revelador: Yodo.
b.4- Fase estacionaria: RP18
Fase mvil: Solvente adecuado para que ambos tengan relaciones de frente entre 0,3 y 0,8.
Revelador: Yodo.
c) Esquematice de la manera ms completa posible (indicando reactivos y condiciones) cmo
procedera para obtener por separado el cido estarico y cido linolnico.
d) Qu metodologa utilizara para verificar la pureza del cido esterico?

17. Si Ud. tiene una mezcla que contiene Trilinolena y en menor proporcin cido Ricinoleico:
a) Cmo esperara que dicha mezcla se presente a temperatura ambiente?
b) Caracterice a la muestra segn los ndices que debera presentar, explicando en cada caso qu
sustancia aporta ese resultado y por qu.
c) Proponga un esquema que permita separar a los componentes del extracto hasta obtener los
cidos grasos totales en forma libre, detallando reactivos y condiciones de trabajo.
d) Qu consideraciones prcticas debe tener en cuenta para realizar la purificacin de una sustancia
por recristalizacin?
e) Las cromatografas en capa delgada (CCD) A, B y C muestran los cromatogramas obtenidos de la
muestra.
A) Fase estacionaria: Slica Gel 60 GF-254
Fase mvil: Hexano
Revelador: Vapores de Yodo.
B) Fase estacionaria: Slica Gel 60 GF-254
Fase mvil: Hexano: Acetato de Etilo (5:5)
C) Fase estacionaria: Slica Gel 60 GF-254
Fase mvil: Hexano: Acetato de Etilo (2:8)

Lpidos

37

e.1- Cul de las tres fases moviles propuestas es la ms adecuada para la separacin de los
compuestos? Fundamente su respuesta.
e.2- Indique en las placas cromatogrficas a qu compuesto corresponde cada una de las manchas.
Justifique.
e.3- Esquematice el cromatograma que obtendra con fase estacionaria: RP18, Fase mvil: Hexano:
Acetato de etilo (5:5) y Revelador: Vapores de Yodo, indicando qu mancha corresponde a cada
compuesto
18. Al extracto de una planta se le realizan diferentes ensayos para caracterizarlo y se llega a la
conclusin de que est compuesto por un triglicrido simple con trazas del cido graso libre. Dicho
cido graso tiene un doble enlace y no posee grupos hidroxilos. El triglicrido tiene un peso molecular
de 968 y es termoestable.
a) Qu resultados se obtendrn en los diferentes ndices de lpido? Justificar
b) Bajo qu condiciones se pudo lograr la saponificacin completa de la muestra?
c) Cmo se pueden separar el cido graso del triglicrido? Realice un esquema indicando condiciones
de trabajo y reactivos.
d) Cul es el resultado de una CCD del extracto si utilizaron slica gel y una fase mvil de
hexano:cloroformo 5:5?
e) Con qu mtodos se pudo haber obtenido el extracto? Qu tipo de solventes se utilizaron?cul
considera el ms adecuado?Por qu?
f) Con qu mtodo se puede confirmar la estructura del triglicrido?

A B C

Frente de
solvente

Lpidos

38
EJERCITACIN SOBRE EL T.P. DE LIPIDOS
1. Qu ventajas tiene el mtodo de extraccin usado en el T.P. para la extraccin de Trimiristina con
respecto a:
a) Tiempo de extraccin
b) Temperatura de trabajo
c) Volumen de solvente necesario
2. Indique si los siguientes mtodos podran ser utilizados para el mismo fin:
-Maceracin -Soxhlet
-Infusin -Lixiviacin
-Decoccin
a) En los casos que contest afirmativamente, qu consideraciones debe tener en cuenta con
respecto al solvente.
b) En los casos que contest negativamente, justifique su respuesta.
3. Realice un esquema sobre el procedimiento de recristalizacin utilizado en el T.P., indicando en
cada paso reactivos, condiciones de trabajo y productos obtenidos.
4. Para lograr una buena recristalizacin: Qu consideraciones deben tenerse en cuenta respecto a:
a) Eleccin del solvente
b) Proceso de recristalizacin
5. Esquematice el resultado de una CCD fase normal donde se sembr:
- Testigo de trimiristina
- Trimiristina antes de la recristalizacin
- Trimiristina despus de la recristalizacin
a) Cmo puede evaluar la eficacia de la recristalizacin?
b) Cmo puede identificar a la trimiristina?
6. Qu cantidad de KOH y condiciones de reaccin son necesarias para lograr la completa
saponificacin de la trimiristina? Cmo lo realiza en el T.P.? Por qu?
7. Realice un esquema sobre el procedimiento de saponificacin de Trimiristina utilizado en el T.P.,
indicando en cada paso reactivos, condiciones de trabajo y productos obtenidos.
8. Esquematice el resultado de una CCD fase normal donde se sembr:
- Testigo de trimiristina
- Testigo de cido mirstico
- Trimiristina antes de la saponificacin
- Producto de la saponificacin si el KOH fue insuficiente
- Producto de la saponificacin si el KOH fue suficiente
Alcaloides

39
ALCALOIDES

CHCl
3
, agitar y decantar

Alcaloides

40
EJERCITACIN SOBRE GENERALIDADES DE ALCALOIDES
1.

Indique cul es la basicidad de cada nitrgeno en las siguientes estructuras. Fundamente su
respuesta e indique el pK
b
aproximado.

2. En las siguientes estructuras indique cul de los nitrgenos es ms bsico y por qu.

Alcaloides

41
3.
a) Indique cul es la basicidad de cada uno de los nitrgenos de estos alcaloides. Fundamente
su respuesta.
b) Ordenar los alcaloides por orden decreciente de basicidad.
c) Dibuje la estructura de todos los alcaloides en medio i) cido clorhdrico acuoso (pH = 1) y
ii) amonaco acuoso (pH = 8).

N
OCH
3
OCH
3
O
O
H
3
C
N
N
H
OH O
O
H
3
C
N
H
3
CO
H
3
CO
OCH
3
OCH
3
i) Papaverina ii) Queletrina
iii) Colchicina iv) Yohimbina
O
OH
H
3
CO
H
3
CO
OCH
3
NH
H
O CH
3

4. De la divisin toxicolgica le traen para analizar una muestra lquida que da positiva la
reaccin de Draggendorf. El poseedor de dicha muestra declar que tena codena
(antitusgeno). Cmo demuestra Ud. que en realidad tiene morfina?

Alcaloides

42
5. En base a sus conocimientos sobre basicidad de alcaloides esquematice un diagrama de
separacin de los siguientes compuestos, indicando reactivos, operaciones y condiciones de
trabajo.

Justifique detalladamente mediante un anlisis inicial que indique las caractersticas cido-base
de cada uno de los nitrgenos de cada compuesto.

6. Utilizando la estructura de orbitales del imidazol, explique su aromaticidad y sus
propiedades bsicas (pKb = 7).

Alcaloides

43
ALCALOIDES DE LA QUINA

INTRODUCCIN:
Algunos de los ejemplos ms interesantes de alcaloides con ncleos indlicos
modificados se pueden hallar en el gnero Cinchona. Ellos son quinina, quinidina, cinconidina
y cinconina. En sus estructuras, el ncleo indlico se ha reacomodado en un sistema
quinolnico.
Quinina y quinidina son pares de diasteremeros y tienen quiralidades opuestas en dos
centros, C-8 y C-9 (Figura 1). Cinconidina y cinconina son anlogos demetoxilados de quinina
y quinidina respectivamente.

R = OMe: (-) Quinina (8S, 9R)
R = H: Cinconidina (8S, 9R)
R = OMe: (+) Quinidina (8R, 9S)
R = H: Cinconina (8R, 9S)
N
R
H
OH
N
H
H
8
9
N
R
H OH
9
N
H
8
H

Figura 1: Alcaloides de la Quina

CINCHONA.
La droga vegetal Quina (segn FA 6 Ed) es la corteza desecada de tallos y races de
Cinchona calisaya Weddell (Rubiaceae) y de sus variedades o hbridos, conocida con el
nombre de Quina amarilla. No deber contener menos de 5% de alcaloides totales, ni ms de
2% de otras materias orgnicas extraas, y por incineracin no deber dejar ms de 4% de
cenizas. La Cinchona es un rbol alto, originario de sudamrica. Los rboles son cultivados en
muchas partes del mundo y alrededor de una docena de especies de Cinchona han sido
utilizadas comercialmente, pero existe una gran variabilidad del contenido de alcaloides y el
rango de los mismos, esto ha favorecido el cultivo de tres especies principales. C. succirubra
provee la corteza roja (5-7% alcaloides); C. ledgeriana provee la corteza marrn (5-14%
alcaloides) y C. calisaya, la corteza amarilla (hasta 17% alcaloides). Un nmero considerable
de alcaloides han sido caracterizados en la corteza de Cinchona, cuatro de ellos dan cuenta del
30-60% del contenido de alcaloides. Ellos son quinina, quinidina, cinconidina y cinconina,
Alcaloides

44
siendo quinina el constituyente principal. Estos alcaloides a menudo se encuentran presentes en
la corteza en combinacin con cido qunico.

RELEVANCIA EN EL TRATAMIENTO DE MALARIA.
Los alcaloides de Cinchona, en particular quinina, han sido utilizados durante muchos
aos en el tratamiento de malaria, una enfermedad causada por el protozoo Plasmodium
falciparum que an significa una gran amenaza para la salud. Quinidina, cinconina y
cinconidina tambin tienen propiedades antimalricas pero no son tan efectivos como la
quinina. La habilidad de Plasmodium para desarrollar resistencia a las drogas modernas
(muchas de ellas desarrolladas a partir de la propia quinina) reintrodujo en algunos pases a la
Quina para el tratamiento de la malaria. Es por eso que la Quina sigue teniendo gran relevancia
econmica y en la mayora de las farmacopeas se incluyen sales de quinina y de quinidina.

BASICIDAD DE ALCALOIDES DE LA QUINA.
Los alcaloides de la Quina son derivados del rubano que, a su vez, proviene de la unin
entre una quinolina y una quinuclidina (figura 2). Por lo tanto estos alcaloides tienen dos
nitrgenos, uno de la porcin quinolina y otro de la porcin quinuclidina, cuyas basicidades son
diferentes.
N
N
Quinolina
Quinuclidina
N
N
Rubano

Figura 2

El nitrgeno de la quinuclidina es un nitrgeno de amina terciaria. Su par electrnico
libre tiene poco carcter s ya que est en un orbital sp
3
; adems no tiene posibilidades de
deslocalizacin, por eso es un nitrgeno bsico (pKb = 4).
El par electrnico del nitrgeno de la porcin quinolina est localizado en un orbital sp
2
,
es decir, estos electrones poseen un mayor carcter s respecto de los electrones del otro
nitrgeno. Esto hace a este nitrgeno mucho menos bsico (pKb = 8,6). Los alcaloides tipo
Quina se encuentran en forma de base libre a pH mayores a 10. Debido a la presencia de dos
Alcaloides

45
grupos amino de basicidades diferentes, los alcaloides de la Quina pueden formar dos series de
sales: las sales bsicas y las sales neutras.

N
OCH
3
H
OH
N
H
H
pKb = 8,6
pKb = 4

Figura 3

Para el caso de la quinina, su sal bsica (Figura 4a) es aquella en la que slo est
protonado su nitrgeno quinuclidnico; es una sal mono-inica, que es bsica porque an le
queda un nitrgeno por protonar. sta sal da reaccin neutra en agua ya que a pH = 7 el
nitrgeno protonado posee mayor afinidad por su protn que el agua por lo que no hay reaccin
cida. Por su parte, el nitrgeno quinolnico no captar un protn debido a que su pKa (5,4) est
casi dos puntos por debajo de pH del medio por lo que no hay reaccin alcalina.
N
+
OCH
3
H
OH
N
H
+
H
H
H
a) Sal bsica de quinina b) Sal neutra de quinina
N
OCH
3
H
OH
N
H
+
H
H

Figura 4a-b.
En su sal neutra (Figura 4b), la quinina posee los dos nitrgenos protonados. Puesta en
agua, esta sal da reaccin cida ya que a pH neutro el nitrgeno quinolnico posee menor
afinidad por su protn que el agua, cedindoselo. La sal neutra es an ms soluble en agua que
la bsica por ser di-inica.

Alcaloides

46
Gua de Trabajo Prctico: Alcaloides de la Quina

OBJETIVO:
*Extraer y purificar los alcaloides de la Quina y detectar la presencia de quinina.

TCNICA:
1. Mezclar 1 gramo de droga vegetal Quina en un baln y agregar 2 ml de solucin de NaOH
5% P/V.
2. Extraer a reflujo con 15 ml de etanol utilizando agitacin durante 20 minutos. Filtrar y
descartar el residuo slido. Separar una pequea pocin de extracto en un tubo de Kahn para
realizar CCD al final del TP.
3. Eliminar el etanol por evaporacin a presin reducida.
4. Agregar H
2
SO
4
0.5 M hasta alcanzar un pH final de 2-3 (utilizando indicadores de pH).
Filtrar aplicando vaco.
5. Lavar el filtrado con 2 porciones de 10 ml de CH
2
Cl
2
. Rotular como FO 1.
6. Alcalinizar la solucin acuosa con solucin de NaOH 10% P/V hasta pH 12-13 y extraer dos
veces con 10 ml de CH
2
Cl
2
.
7. Juntar las fases clorofrmicas y secarlas con Na
2
SO
4
anhidro. Filtrar.
8. Eliminar el CH
2
Cl
2
del filtrado por destilacin simple o evaporacin a presin reducida.
Rotular como FO 2.
9. Realizar una cromatografa en capa delgada sembrando las siguientes soluciones:
a) Extracto etanlico del paso 2. b) Solucin de lavado del paso 5 (FO 1). c) Patrn de quinina
d) FO 2 obtenida en el paso 8.
Fase Estacionaria: Slica Gel 60 F
Fase Movil: CHCl
3
:MeOH:Dietilamina (8:2:2 gotas).
Revelador: luz UV =254 nm.

ANALIZAR:
1. Por qu se agrega cido previo a realizar los lavados con CH
2
Cl
2
?
2. Por qu la solucin de mezcla a sembrar debe estar lo ms concentrada posible?
3. Por qu se agrega una solucin de NaOH en la extraccin etanlica de los alcaloides a
partir de la droga vegetal?

Alcaloides

47
Espectro de RMN
1
H quinina:
N
N
R
H
H
H
HO
6
8
7
5
2
3
6
4
3
10
11
2
7
8
9
5
9
10
1
4
1

Caractersticas del espectro
1,52 ppm (m, H-7 ecuatorial, eq) ; 1,54 ppm (m, H-5eq), 1,71 pp(m, H-6 axial, ax); 1,84 ppm
(m, H-4); 1,86 ppm (m, H-7ax); 2,70 ppm (s ancho, H-3); 2,73 ppm (m, H-2 eq); 2,75 ppm (m,
H-6 eq); 3,12 ppm (m, H-2ax); 3,15 ppm (m, H-8); 3,17 ppm (m, H-6ax); 3,85 ppm (s, -OCH );
4,95 ppm (d, H-11 geminal, gem); 4, 97 ppm (d, 11 gem); 5,69 ppm (d, H-9); 5,70 ppm; (m, H-
10); 7, 19 ppm (s, H-5'); 7,28 ppm (d, H-7'); 7,52 ppm (d, H-3'); 7,94 (d, H-8'); 8,66 ppm (d, H-
2').

BIBLIOGRAFA:

Dewick, P.M. Medicinal natural products, a biosynthetical approach 3rd Ed; Wiley, Germany,
2009.
Aceites Esenciales

48
ACEITES ESENCIALES
GENERALIDADES
Los aceites voltiles son los principios voltiles de olor intenso responsables de los
olores de las flores y del sabor de las especias. Son ampliamente utilizados como saborizantes,
en perfumera y aromaterapia.
La ISO (International Standard Organization) define aceites voltiles como los
productos obtenidos de partes de plantas a travs de destilacin por arrastre con vapor de agua
u obtenidos por expresin de los pericarpios de frutos ctricos (familia Rutceas). Sin embargo,
sta es una definicin que no aporta ninguna informacin respecto de su composicin o de su
estructura qumica. De forma general, son mezclas complejas de sustancias voltiles,
lipoflicas, generalmente odorferas y lquidas. Tambin pueden ser llamadas aceites esenciales,
aceites etreos o simplemente esencias. Estas denominaciones derivan de algunas de sus
caractersticas fsico-qumicas. As, son llamados aceites debido al aspecto oleoso que
presentan; etreos (en latn, aetheroleum) debido a su solubilidad en solventes orgnicos
apolares como el ter y esencias o esenciales debido al agradable e intenso aroma que la
mayora de ellos presenta. Sin embargo su principal caracterstica es la capacidad de evaporarse
cuando son expuestos al aire a temperatura ambiente, difiriendo as, de los aceites fijos
(mezclas de sustancias lipdicas, obtenidas generalmente de semillas). En agua, los aceites
voltiles presentan solubilidad limitada, pero suficiente para aromatizar las soluciones acuosas.
Por lo general, reciben el nombre de la especie de la que proceden, como aceite esencial
de tomillo, aceite esencial de salvia, etc.
Sus caractersticas generales son:
- Mezclas complejas de aspecto oleoso, pero que no dejan mancha oleosa sobre el papel;
- Aromticos (confieren aroma);
- Generalmente lquidos a T ambiente;
- Volatilizan a T ambiente;
- Solubles en solventes orgnicos apolares y alcoholes de alta graduacin;
- De sabor generalmente acre (cido) y picante;
- Recientemente extrados, son generalmente incoloros o ligeramente amarillentos; son
pocos los aceites que presentan color, como el aceite esencial de Manzanilla, de coloracin
azulada, por su alto tenor en azulenos;
- Estabilidad: En general, los aceites voltiles no son muy estables. Principalmente en
presencia de aire, luz, calor, humedad y metales, se oxidan y resinifican;
Aceites Esenciales

49
- No son saponificables;
- La mayora de los aceites voltiles poseen ndices de refraccin elevados y muchos de ellos
son pticamente activos, propiedades estas usadas en su identificacin y control de calidad.
- La densidad de los AE suele ser inferior a la del agua, constituyendo una excepcin los
obtenidos a partir de la Canela, el Clavo y el Sasafrs, cuya densidad es superior a la
unidad.
Los contenidos en AE no superan el 1% en la mayora de los casos; una excepcin la
constituye el Clavo (botn floral de Eugenia caryophyllus) con un contenido superior al 15%.
En la mezcla, los compuestos que forman el aceite esencial se presentan en diferentes
concentraciones; normalmente, uno de ellos es el compuesto mayoritario, existiendo otros en
menores tenores y algunos en bajsimas cantidades (trazas). Por ejemplo, el 1,8-cineol (
eucaliptol) es el componente mayoritario del aceite de eucalipto y generalmente, su tenor es en
torno del 80%; entretanto, esta misma sustancia fue detectada en el aceite de bergamota en una
concentracin 40.000 veces menor que en el aceite de eucalipto, o sea, en torno de 0,002%.
As, en esos casos, se dice que este compuesto es un constituyente traza del aceite de
bergamota.
La composicin de los aceites esenciales vara de acuerdo a factores del entorno
(condiciones ambientales, temperatura, humedad, clima), prcticas de cultivo (suelo, riego,
abono), edad y ciclo vegetativo al momento de la recoleccin, etc. Durante la extraccin, sta
puede resultar alterada por el mtodo mismo de extraccin o por el tipo de solvente utilizado.
En el mercado se pueden encontrar aceites sintticos que pueden ser imitaciones de los
naturales composiciones de fantasa. Para el uso farmacutico, solamente los naturales son
permitidos por las farmacopeas. Excepciones son aquellos aceites que contienen solamente una
sustancia, como el aceite voltil de vainilla (que contiene vainillina). En esos casos, algunas
farmacopeas permiten tambin los equivalentes sintticos.

CLASIFICACIN
Los aceites esenciales pueden clasificarse de varias maneras, de las cuales las ms
comunes son por origen biosinttico por el grupo funcional del compuesto responsable de
brindarles los caracteres organolpticos. Este compuesto, llamado muchas veces compuesto
principal, no siempre es el que se encuentra en mayor proporcin. Por ejemplo, en el caso de
la esencia de naranja (Citrus sinensis), el d-limoneno es el componente mayoritario porque se
encuentra en un 90% pero el que le otorga las propiedades al aceite (y por lo tanto constituye el
componente principal) es el citral, un aldehdo terpnico que se encuentra slo en un 5%.
Aceites Esenciales

50

Clasificacin por origen biosinttico
Qumicamente, la gran mayora de los aceites voltiles estn constituidos por derivados
de fenilpropanoides o de terpenoides, siendo estos ltimos los preponderantes.
Muchos aceites contienen tanto componentes aromticos como terpenoides; pero
generalmente uno de ellos predomina sobre el otro. En base a esta clasificacin, se presentan
dos tablas. La Tabla I muestra aquellos aceites que presentan compuestos principalmente
aromticos y que, por lo tanto, derivan de la va del shikimato; En Tabla II se encuentran los
aceites constituidos principalmente por compuestos terpenoides.

1. Terpenoides
Los terpenoides constituyen una gran variedad de sustancias vegetales. Este trmino es
empleado para designar a todas las sustancias cuyo origen biosinttico deriva de unidades de
isopreno. La unidad isoprnica, a su vez, se origina principalmente a partir del cido
mevalnico. Los esqueletos carbonados de los terpenoides son formados por la condensacin
de un nmero variable de unidades pentacarbonadas (= unidades isoprnicas), de acuerdo con
la regla del isopreno. En los componentes de aceites voltiles predomina la condensacin
cabeza-cola, como ilustra la Figura 1.
Los compuestos terpnicos ms frecuentes en los aceites voltiles son los monoterpenos
(cerca del 90% de los aceites voltiles) y los sesquiterpenos. Otros terpenoides, como los
diterpenos (C
20
), son encontrados en los aceites voltiles cuando son extrados por mtodos que
no requieren volatilizacin de los componentes, como por ejemplo la extraccin con solventes
orgnicos (Steinegger y Hansel, 1992). Los monoterpenos pueden dividirse en tres subgrupos:
acclicos, monocclicos y bicclicos. En cada uno de esos subgrupos, se encuentran incontables
sustancias, caracterizadas por unos 200 tipos diferentes de esqueletos. El nmero de
compuestos terpnicos conocidos sobrepasa los 8.000; en aceites voltiles se estima un nmero
superior a 150 para monoterpenos y a 1000 para sesquiterpenos.
Aceites Esenciales

51
Figura 1. Formacin cabeza-cola de los esqueletos carbonados de los compuestos mono y sesquiterpenoides,
constituyentes mayoritarios de los aceites esenciales.

2. Fenilpropanoides
Los fenilpropanoides se forman a partir del cido shikmico, que forma las unidades
bsicas del cido cinmico y p-cumrico. Estos ltimos, por medio de reducciones enzimticas
producen propenilbencenos y/o alilbencenos y, por medio de oxidaciones con degradacin de
las cadenas laterales pueden generan aldehdos aromticos, o por ciclaciones enzimticas
intramoleculares producir cumarinas (Figura 2).

Figura 2: Formacin de fenilpropanoides
Aceites Esenciales

52

Figura 3: Rutas biosintticas de formacin de Aceites Esenciales
Aceites Esenciales

53
TABLA I: Aceites Esenciales constituidos predominantemente por compuestos aromticos

Aceites Esenciales

54
TABLA I: Aceites Esenciales constituidos predominantemente por compuestos aromticos
(continuacin)

Aceites Esenciales

55
TABLA II: Aceites Esenciales constituidos predominantemente por compuestos terpenoides

Aceites Esenciales

56
(continuacin)

Aceites Esenciales

57
(continuacin)

Aceites Esenciales

58
(continuacin)

Aceites Esenciales

59
Clasificacin por grupos funcionales
La composicin de la mayora de los aceites voltiles va desde hidrocarburos terpnicos,
alcoholes simples y terpnicos, aldehdos, cetonas, fenoles, steres, teres, xidos, perxidos,
furanos, cidos orgnicos, lactonas, cumarinas, hasta compuestos con azufre.
En la Tabla III se presentan los aceites esenciales de acuerdo con la clasificacin en
base a los grupos funcionales de sus componentes principales.

TABLA III: Clasificacin de los Aceites Esenciales de acuerdo a grupos funcionales
Esencia
Mtodo de
extraccin / Parte
usada
Origen botnico Componentes importantes Uso
HIDROCARBUROS
Trementina
(aguarrs)
Destilacin con
vapor extraccin
y fraccionamiento
de la oleorresina
obtenida de la
madera
Pinus palustris Miller., y
otras especies de Pinus
L. (Flia. Pinceas)
64% o-pineno, 33%
|pineno, dipenteno, metilchavicol,
terpinoleno, acetato de bornilo y
pinocarveol
Irritante local,
revulsivo y
antisptico dbil
ALCOHOLES
Azahar
(nerol)
Destilacin con
vapor de las flores
frescas
Critrus aurantium L.(Flia
Rutceas)
30% (-)-linalol, (+)-o-terpineol, geraniol,
geranil acetato, |pineno, 7% linalil
acetato, limoneno
Perfume, Sabor
Cardamomo Destilacin con
vapor de la semilla
madura desecada
Elettaria cardamomum
(Flia. Zingiberacea)
26-40% cineol, 28-34% oterpinil
acetato, 2-14% limoneno, 3-5%
sabineno, 2-8% linalil acetato
Condimento,
carminativo
Cilantro Destilacin con
vapor del fruto
maduro desecado
Coriandrum sativum (Flia.
Umbelferas)
60-70% (+)-linalol, limoneno, o-pineno,
-pineno, p-cimeno, alcanfor
Condimento,
carminativo
Enebro Destilacin con
vapor del fruto
maduro desecado
Juniperus communis L.y
su var. depressa Pursh
(Flia. Cupresceas)
70% o-pineno, |pineno, o-terpineol,
borneol, geraniol, mirceno y sabineno
Sabor en
bebidas
alcohlicas,
Diurtico
Manzanilla Destilacin con
vapor de la
inflorescencia seca
Matricaria recutita M.
chamomilla L. (Flia.
Asterceas)
10-25% (-)-o-bisabolol, 1-15%
camazuleno, xidos del bisabolol
Antinflamatorio,
antilgico,
estimulante de
apetito
Menta Destilacin con
arrastre de vapor
de las partes
areas frescas de
la planta en flor
Mentha piperita L. (Flia.
Labiadas)
50-78% mentol libre, 5-20% mentol
esterificado, acetaldehido, cido
valrico, o-pineno, felandreno, cineol,
(-)-limoneno, (+) y (-)-mentona, acetato
de mentilo
Saporfero,
Carminativo,
Estimulante, y
revulsivo
Pino Destilacin con
vapor extraccin
y fraccionamiento
de la madera
Pinus palustris Miller., y
otras especies de Pinus
L. (Flia. Pinceas)
65%(+)-o-terpineol, 10% metilchavicol
y teres fenlicos afines, 9% borneol,
8% alcohol fenqulico, 4% mentanoles
Desinfectante,
Desodorante
Rosa Destilacin con
vapor de las flores
frescas
Rosa spp. (Flia.
Rosseas)
Geraniol, (-)-citronelol, (5-10%) nerol,
(-)-linalol y eugenol
Perfume
Sndalo Destilacin con
vapor del leo
interno desecado
Santalum album L. (Flia.
Santalceas)
90% mezcla de o y |-santalol Antisptico
urinario,
perfume
Agua de
Hamamelis
Destilacin en
corriente de vapor
de las ramas
recin cortadas y
parcialmente
desecadas
Hamamelis virginiana
(Flia. Hamamelidceas)
9,7% 2-hexen-1-al, 3,2% acetaldehdo,
3,5% o-ionona, 1% |-ionona, 0.2%
safrol
Astringente

Aceites Esenciales

60

TABLA III: Clasificacin de los Aceites Esenciales de acuerdo a grupos funcionales (continuacin)
ALDEHIDOS
Almendras
amargas
Maceracin con
agua y posterior
destilacin con
arrastre de vapor
de la mdula
madura y seca
(desprovista del
aceite fijo) del fruto
Prunus amygdalus
Batsch var. amara
(DeCandolle) Focke (Flia.
Rosceas)
>80% aldehdo benzico, 2-4% cido
cianhdrico
Ingrediente en
medicamentos
antitusgenos
Canela Destilacin con
vapor de las hojas
Cinnamomum cassia
Nees ex Blume (Flia.
Laurceas)
75-85% aldehdo cinmico,
salicilaldehdo, metilsalicilaldehdo,
metileugenol
Saporfero,
carminativa,
aromtica,
pungente y
antisptica
Cscara de
Limn
Expresin en fro
del epicarpio
fresco del fruto
Citrus limon (L.) Burmann
filius (Flia. Rutceas)
60-80% (+)-limoneno, 4% citral, 8% |-
pineno, 8% -terpineno, citronelal,
acetato de geranilo,
Saporfero,
carminativo,
estomquico
Naranja
amarga
Expresin del
epicarpio fresco
del fruto
Citrus aurantium L. (Flia.
Rutceas)
1,5-2,5% aurantiamarina, 0.1% cido
aurantiamrico, naringina, 0.4-3%
isohesperidina, 5-8% hesperidina
Saporfero,
carminativo y
estomquico.
Naranja dulce Expresin del
epicarpio fresco
del fruto maduro
Citrus sinensis (L.)
Osbeck (Flia. Rutceas)
90% (+)-limoneno, 5% o y |citral Sabor,
saporfero
CETONAS
Alcanfor Destilacin con
vapor de la
madera
Cinnamomum camphora
(L.) Nees et Ebermaier
(Flia. Laurceas)
27-45% alcanfor, 4-21% cineol, 1-18%
safrol
Antipruriginoso,
antiinfeccioso,
Alcaravea Destilacin con
vapor del fruto
maduro desecado
Cadum carvi L. (Flia.
Umbelferas)
50-60% carvona, 40-50% (+)-limoneno,
trazas de carveol y dihidrocarvona
Aromatizante,
Carminativa
Hierbabuena
(Menta
Romana o
verde)
Destilacin con
vapor de las partes
areas frescas de
la planta en
floracin
Mentha spicata (L) M.
cardaca Gerard ex Baker
(Flia Labiadas)
45-60% (-)-carvona, 6-20% alcoholes ,
4-20% limoneno
Saporfero,
carminativo
FENOLES
Clavo de olor Destilacin con
vapor de los
botones florales
desecados
Eugenia caryophyllus
(Sprengel) Bullock et
Harrison (Flia. Mirtceas)
(80-90%) eugenol, (2-27%)
acetileugenol, (5-12% ) |-cariofileno,
metil-K-n-amil cetona
Saporfera,
antiseptico,
carminativo
Tomillo Destilacin con
vapor de la planta
en floracin
Thymus vulgaris (L.) T.
zygis L. y su var. gracilis
Boissier (Flia. Labiadas)
timol, carvacrol, p-cimeno, canfeno,
limoneno
Saporfero,
antisptico
TERES FENOLICOS
Ans
estrellado
Destilacin con
vapor del fruto
maduro desecado
Illicium verum (Flia.
Magnoliceas)
80-90% anetol, metilchavicol y p-
metoxifenilacetona
Saborizante
Ans verde Destilacin con
vapor del fruto
seco
Pimpinella anisum L.
(Flia. Umbelferas)
80-90% anetol, metilchavicol, p-
metoxifenilacetona y |-cariofileno
Saborizante
Hinojo Destilacin con
vapor del fruto
maduro desecado
Foeniculum vulgare Miller
(Flia. Umbelferas)
50-60% trans-anetol, (+)-fenchona,
(+)-o-pineno, metilchavibetol, aldehido
anisico, cido anisico, dipenteno
Saporfero,
carminativo
Nuez
Moscada
Destilacin con
vapor de la medula
desecada de la
semilla madura
Myristica fragrans
Houttuyn (Flia. Mirtceas)
Safrol y miristicina (metoxisafrol),
metoxieugenol, 60-80% (+)-canfeno,
dipenteno, (+)-borneol, (-)-terpineol,
geraniol, (+) y (-)-o-pineno
Saporfero,
carminativo
OXIGENADOS
Eucaliptos Destilacin con
vapor de la hoja
fresca
Eucaliptus globulus
Labillardire y otras
espcies de Eucaliptus
L'Heritier (Flia. Mirtceas)
70-85% Eucaliptol (Cineol), o-pineno,
|-pineno, (+)-limoneno, p-cimeno,
o-pelandreno, canfeno, -terpineno
Saporfero,
antisptico,
diafortico y
expectorante

Aceites Esenciales

61
TABLA III: Clasificacin de los Aceites Esenciales de acuerdo a grupos funcionales (continuacin)
ESTERES
Lavanda Destilacin con
vapor de las
sumidades floridas
frescas
Lavandula officinalis
Chaix ex Villars (Flia.
Labiadas
30-45% acetato de (-)-linalilo, geraniol,
(-)-linalol, limoneno
Aromatizante
Romero Destilacin con
vapor de las
sumidades floridas
frescas
Rosmarinus officinalis L.
(Flia. Labiadas)
2-6% esteres (acetato de bornilo), 8-
20% alcoholes (borneol), 20% cineol,
o-pineno y canfeno
Aromaterapia,
perfumera,
saborizante

QUIMIOTAXONOMA, LOCALIZACIN Y FUNCIONES

1. QUIMIOTAXONOMA
Los aceites voltiles son abundantes en angiospermas dicotiledneas, como en las
familias Asterceas, Apiceas, Lamiceas, Laurceas, Myrtceas, Myristicceas, Magnoliceas,
Piperceas, Rutceas, entre otras. En angiospermas monocotiledneas la ocurrencia es
relativamente rara, con excepcin de gramneas (especialmente especies de Cymbopogon y
Vetiveria) y zingiberceas (especies de Alpinia y Curcuma, entre otras). Son raramente
encontrados en gimnospermas a excepcin de Conferas.

2. LOCALIZACIN
Dependiendo de la familia, los aceites esenciales pueden aparecer en estructuras
secretoras especializadas, tales como en pelos glandulares (Lamiceas), clulas
parenquimticas diferenciadas (Laurceas, Piperceas, Poceas), canales oleferos (Apiceas) o
en canales lisgenos o esquizgenos (Pinceas, Rutceas). En trminos generales stos se
localizan en la superficie del vegetal o cerca de la misma. Los aceites esenciales pueden estar
almacenar en ciertos rganos, tales como las flores (rosas, jazmn, naranjas), sumidades
(tomillo, lavanda, romero), hojas (hierba limn, eucalipto, laurel, menta) o incluso en la corteza
de los tallos (canela), madera (sndalo, palo de rosa), leos (alcanforero, sasafrs), races
(vetiver), rizomas (crcuma, jengibre), frutos (ans estrellado, hinojo) o semillas (nuez
moscada, mostaza). Aunque todos los rganos de una planta puedan acumular aceites
esenciales, su composicin puede variar dependiendo de la ubicacin. Por ejemplo, el aceite de
la corteza de la canela es rico en aldehdo cinmico, mientras que de las hojas y de las races de
ese mismo vegetal son ricos en eugenol y alcanfor, respectivamente. Los aceites esenciales
obtenidos de diferentes rganos de una misma planta pueden presentar composicin qumica,
caracteres fsico-qumicos y olores bien distintos. Cabe recordar que la composicin qumica de
un aceite esencial, extrado del mismo rgano de una misma especie vegetal, puede variar
significativamente, de acuerdo con la poca de colecta, condiciones climticas y de suelo.
Aceites Esenciales

62

3. DATOS FARMACOLGICOS Y TOXICOLOGA
Es importante diferenciar las propiedades farmacolgicas de una droga vegetal rica en
aceites esenciales de la actividad farmacolgica del aceite aislado de la misma. Por ejemplo, el
aceite esencial del romero (Rosmarinus officinalis L., Lamiceas) es antibacteriano, en tanto
que la infusin de la planta es empleada para el tratamiento sintomtico de problemas
digestivos diversos, por sus propiedades antiespasmdicas y colerticas, debidas a la presencia
de compuestos fenlicos.
De la misma manera, es necesario diferenciar la toxicidad de plantas medicinales ricas
en aceites esenciales y de los aceites esenciales aislados de las mismas. Generalmente los
aceites presentan toxicidad elevada, pero se encuentran en baja proporcin en las plantas.

MTODOS DE OBTENCIN DE ACEITES ESENCIALES
Destilacin en corriente de vapor (o arrastre con vapor de agua)
La destilacin en corriente de vapor o arrastre con vapor es una ingeniosa tcnica para la
separacin de sustancias insolubles en agua y ligeramente voltiles, de otros productos no
voltiles mezclados con ella. Es la forma ms habitual de obtencin de los aceites esenciales
(AE), dado que el arrastre en corriente de vapor hace posible la purificacin adecuada de
muchas sustancias de punto de ebullicin elevado mediante una destilacin a una temperatura
relativamente baja (la de ebullicin del agua a una dada presin atmosfrica). Esta tcnica es
particularmente til cuando la sustancia en cuestin hierve por encima de 100 C y se
descompone en su punto de ebullicin o por debajo de ste.
Para comprender cmo esto es posible, consideremos cmo se comporta en la
destilacin un sistema de dos fases formado por dos lquidos no miscibles. En una mezcla de
dos lquidos (x e y) completamente insolubles entre s, cada lquido ejerce su propia tensin de
vapor caracterstica e independiente de la del otro. Por lo tanto la tensin de vapor total (P
T
) se
puede calcular de la siguiente forma:

P
T
= P
x
+ P
y
(a T)

Donde P
x
es la tensin de vapor de x a la temperatura T, y P
y
es la tensin de vapor de y
a la misma temperatura. Las tensiones de vapor son completamente independientes de las
cantidades relativas de los componentes existentes en la mezcla.
Aceites Esenciales

63
El punto de ebullicin de la mezcla ser aquella temperatura en la que la tensin de
vapor total (P
T
) sea igual a la atmosfrica (en Rosario: P
atm
=760 mm de Hg). Esta temperatura
ser inferior al punto de ebullicin de cualquiera de los componentes del sistema, a menos que
P
x
o P
y
sean igual a cero.
En la Tabla IV se muestran las tensiones de vapor de clorobenceno (P
x
), agua (P
y
) y de
la mezcla de ambos lquidos inmiscibles (P
T
) a diferentes temperaturas del sistema. Notar que
cuando la suma de ambas tensiones parciales de vapor alcanza el valor de 760 mm de Hg, el
sistema entra en ebullicin (90,8 C) y esta temperatura se mantendr constante hasta que uno
de los lquidos se agote (P
x
o P
y
= 0 mm de Hg). Slo cuando ha desaparecido una de los dos
lquidos inmiscibles, el Peb aumenta hasta que hierve el componente que ha quedado
remanente en el baln.

TABLA IV: Presin de vapor de agua, Cl-benceno y de la mezcla agua-Cl-benceno a Temp=(20-132C).

Temp (C) 20 50 70 80 90,8 100 132
Pv
Cl-benceno
(mm) 9 43 100 147.5 218 296 760
Pv
agua
(mm) 18 92 234 355 542 760
Pv
Total
(mm) 27 135 334 502.5 760 105.6
Fuente: "Computer Aided Data Book of Vapor Pressure, 2nd edition".

Si uno de los lquidos es agua y si se trabaja a la presin atmosfrica, se podr separar un
componente de mayor punto de ebullicin (por ejemplo eugenol, Peb
eugenol
=253,5C) a una
temperatura menor que 100 C (lo cual es muy importante cuando la sustancia se descompone a
temperaturas del orden de su punto de ebullicin). Este procedimiento tambin es til para
separar sustancias voltiles de no voltiles o indeseables (resinas, sales inorgnicas, etc.)
Ahora bien, puesto que la presin ejercida por un gas (a una temperatura dada) es
proporcional a la concentracin de sus molculas, la relacin de las tensiones de vapor de x e y
en el punto de ebullicin de la mezcla ser igual a la relacin entre el nmero de molculas de x
y el nmero de molculas de y que destilan en la mezcla. En otras palabras, la composicin del
vapor se puede calcular de la siguiente forma:

Donde N
x
/N
y
es la relacin molar de x e y en el vapor. La relacin de pesos de x e y en el
vapor depender no solamente de la relacin de moles, sino tambin de los pesos moleculares
de x e y, y esta relacin de pesos (W
x
/W
y
) ser igual a:

Aceites Esenciales

64

Donde M
x
y M
y
son los pesos moleculares de x e y respectivamente.
Expresando en palabras esta importante ecuacin se puede decir que en la destilacin de
una mezcla de dos lquidos inmiscibles, las cantidades relativas en peso de los dos lquidos que
se recogen en el colector, son directamente proporcional a: 1) las tensiones de vapor de los
lquidos a la temperatura de destilacin, y 2), a sus pesos moleculares. Adems, como se
mencion ms arriba, la mezcla destilar a una temperatura constante en tanto exista por lo
menos algo de cada uno de los componentes.
Estos hechos constituyen la base de la purificacin y separacin de sustancias por
arrastre en corriente por vapor. Existen muchos compuestos orgnicos de punto de ebullicin
relativamente alto que con agua codestilan en una cantidad en peso lo suficientemente grande
para ser destilados con cierta rapidez por debajo de 100 C. Esto se debe a sus pesos
moleculares relativamente elevados comparados con los del agua. Para que la sustancia
insoluble destile en cantidad apreciable, debe tener una tensin de vapor de por lo menos 5-10
mm de Hg a 100 C.
Si en la destilacin en corriente de vapor, la fase insoluble en agua est formada por dos
componentes, las dos fases diferentes (la acuosa y la orgnica) destilan segn los principios de
la destilacin en corriente de vapor, es decir, la relacin molar de las dos fases en el destilado
es la misma que la existente entre las tensiones de vapor de las dos fases. Sin embargo, los
componentes de la fase orgnica destilan, respecto uno del otro, segn los principios de la
destilacin ordinaria, es decir que el destilado es ms rico que el residuo en el componente ms
voltil.
La mayora de los compuestos orgnicos que se arrastran en corriente de vapor no son
completamente insolubles en agua, especialmente a la temperatura de destilacin. Esto hace
disminuir algo de la eficacia calculada del proceso. La adicin de cloruro de sodio para saturar
la fase acuosa, presenta la doble ventaja de disminuir la solubilidad del compuesto orgnico en
la fase acuosa, y de disminuir tambin la tensin de vapor del agua respecto de la tensin de
vapor de la fase orgnica.

Aceites Esenciales

65
Equipo de destilacin por arrastre con vapor de agua
La hidrodestilacin se puede realizar al menos de dos maneras. El primer mtodo, y
generalmente el ms eficiente (Figura 5), consiste en colocar la droga convenientemente
fragmentada (fresca o tras desecacin) en un baln con agua para luego inyectar sobre sta el
vapor de agua generado previamente en otro recipiente. Este "vapor de arrastre" en realidad no
cumple la funcin de arrastrar el componente voltil, sino de condensarse en el matraz y formar
otra fase inmiscible que ceda su calor latente a la mezcla a destilar para lograr su evaporacin.
Adems, al hacer burbujear vapor a travs de la mezcla, el sistema se mantiene agitado y se
llega a un equilibrio entre el vapor y los dos lquidos. Los vapores de la sustancia, junto con los
del agua, son condensados en el refrigerante y recogidos luego en un colector.
Si en cambio, slo se requieren pequeas cantidades de vapor para destilar
completamente la mezcla, ste puede ser generado directamente en el baln que contiene la
droga (Figura 6). Este segundo mtodo no resulta aplicable para destilaciones que requieren
grandes cantidades de vapor, pues sera necesario agregar agua continuamente o usar balones
inconvenientemente grandes.
Cuando el rendimiento del aceite es muy bajo, el equipo se modifica de manera que la
porcin acuosa del destilado vuelva al baln repetidas veces. Para ello, se utiliza una Trampa
de Dean-Stark. Existen variantes de trampas de Dean-Stark para aceites esenciales menos
densos y ms densos que el agua, segn se requiera (figura 4). Esta hidrodestilacin continua se
conoce como COHOBACIN.

Figura 4: Trampas de Dean-Stark para aceites menos densos (izquierda) y ms densos (derecha) que el agua.
Aceites Esenciales

66

Figura 5: Equipo de destilacin por arrastre con vapor de agua

Figura 6: Equipo de hidrodestilacin simple.

OTROS MTODOS DE EXTRACCIN
Los mtodos de extraccin varan conforme la localizacin del aceite voltil en la planta
y con el objetivo de utilizacin del mismo.

Extraccin con solventes orgnicos
El principal factor para el xito del proceso de extraccin es la correcta eleccin del
solvente. Este debe poseer especificidad y elevado poder de solubilizante, bajo punto de
ebullicin, baja capacidad residual, baja inflamabilidad y bajo costo. Los disolventes ms
usados son apolares (ter etlico, ter de petrleo, benceno o diclorometano). Esta metodologa
presenta la ventaja frente a la hidrodestilacin simple de operar a baja temperatura, con lo cual
existe una menor posibilidad de alteracin de los componentes termolbiles; por el contrario, se
extraen otros compuestos solubles en el disolvente seleccionado que no constituyen el aceite
Aceites Esenciales

67
esencial sino que, al contrario, lo adulteran (por ejemplo clorofila cuando se extrae aceite
esencial de hojas). Por eso, los productos as obtenidos raramente poseen valor comercial.

Enfloracin (enfleurage)
Este mtodo, muy utilizado en el pasado, actualmente se emplea slo en algunas
industrias de perfumes, en el caso de especies vegetales con bajo tenor de aceite con alto valor
comercial. Es empleado para extraer aceite voltil de ptalos de flores (naranjas, rosas,
junquillo, jazmn). Los ptalos son depositados a temperatura ambiente sobre una camada de
grasa, durante un cierto perodo de tiempo. En seguida, estos ptalos agotados son substituidos
por nuevos hasta la saturacin total de la grasa. La grasa saturada en aceite esencial es tratada
con alcohol, y para obtenerse el aceite esencial, el alcohol es destilado a baja temperatura. El
producto obtenido de esta manera posee alto valor comercial.

Prensado (o expresin)
Este mtodo es utilizado para la extraccin de los aceites esenciales de frutos ctricos. La
tcnica consiste en ejercer, bajo una corriente de agua finamente nebulizada, una accin
abrasiva sobre la superficie del fruto. Los pericarpios son prensados y el aceite voltil es
separado del residuo slido. Posteriormente, el aceite es separado de la emulsin formada con
el agua a travs de decantacin, centrifugacin o destilacin fraccionada.

Extraccin con CO
2
supercrtico
Este mtodo permite recuperar los aromas naturales de varios tipos y no solamente
aceite esencial de modo bastante eficiente y, actualmente, es el mtodo de eleccin para la
extraccin industrial de aceites esenciales. La ventaja fundamental de esta metodologa radica
en que ninguna traza de solvente permanece en el producto obtenido, tornndolo ms puro que
aquellos obtenidos por otros mtodos. Para tal extraccin, el CO
2
es primeramente licuado a
travs de compresin y en seguida, llevado a una Temp > 31C (Figura 7). A esta temperatura,
el CO
2
alcanza un cuarto estado, en el cual su viscosidad es anloga a la de un gas, aunque su
capacidad de disolucin es elevada como la de un lquido. Una vez efectuada la extraccin, se
hace retornar el CO
2
al estado gaseoso, resultando en su total eliminacin.
Aceites Esenciales

68

Figura 7: Diagrama de fases del CO
2
.

CONSERVACIN
La relativa inestabilidad de las molculas que constituyen los aceites esenciales torna
difcil su conservacin. Las posibilidades de degradacin son innumerables y pueden ser
estimadas a travs de la medicin de algunos ndices (perxido, refraccin), por determinacin
de caractersticas fsico-qumicas (viscosidad, miscibilidad con alcohol, poder rotatorio), o
mediante anlisis por cromatografa gaseosa (GC). El deterioro de los aceites esenciales reduce
su valor comercial, adems de constituir un factor de riesgo cuando ellos son destinados al uso
externo, ya que pueden provocar alergia o dermatitis de contacto.
Las alteraciones ocurren principalmente, por reacciones de oxidacin y de
polimerizacin. Las reacciones de oxidacin producen la llamada RESINIFICACIN del
aceite esencial (siendo los constituyentes insaturados ms afectados que los saturados).
Los aceites esenciales deben ser guardados libres de agua (desecados con Na
2
SO
4

anhidro) y de impurezas insolubles. Para reducir las degradaciones, se deben utilizar frascos de
pequeo volumen, en embalajes neutros, hechos de aluminio, acero inoxidable o vidrio mbar,
completamente llenos y hermticamente cerrados, que deben ser almacenados a baja
temperatura, o de preferencia, bajo atmsfera de nitrgeno. El uso de recipientes plsticos,
especialmente de polietileno y propileno, presenta problemas de permeabilidad y adsorcin de
componentes de los aceites voltiles. Se debe evitar el uso de sellos de goma, plstico o cuero,
por ser materiales que se pueden disolver o endurecerse con el paso del tiempo. Adems de eso,
Aceites Esenciales

69
con el uso de materiales plsticos, agentes plastificantes, como los ftalatos, pueden ser
liberados y contaminar el aceite esencial, disminuyendo su valor comercial.
Aceites Esenciales

70
Gua de Trabajos Prcticos: Aceites Esenciales

OBJETIVO:
*Aislamiento de aceite de Clavo y separacin de eugenol y acetil eugenol

EXTRACCIN DE ACEITE ESENCIAL DE CLAVO
El Clavo de olor consiste en los botones florales enteros desecados de Eugenia
caryophyllus [Sprengel] Bullock & Harrison (=Sysygium aromaticum (L.) Merr. & Perry)
Mirtaceae.
La inflorescencia se dispone en forma de umbela. Los botones se recolectan
manualmente cuando adquieren color rojo. Separados del pednculo se desecan y toman color
pardo-rojizo. Los botones se separan a mano de sus pedicelos.

COMPOSICIN QUMICA:
Contiene abundante aceite esencial (15-20%) ms denso que el agua, compuesto
principalmente por eugenol (80-90%). Otros componentes son acetileugenol (2-27%) y |-
cariofileno (5-12%). El aceite obtenido puede ser tratado simplemente como una mezcla de
eugenol y acetileugenol, ya que las trazas no son prcticamente detectadas.

Pednculos de Clavo. A, Esquema del hbito,
mostrando la disposicin opuesta y cruzada y los
pedicelos ltimos en grupos de tres.

Eugenia caryophyllus: A, Clavo de Penang; B, Clavo
de zanzbar; C, fruto (Clavo madre); D, pednculo del
Clavo; E, Clavo cortado longitudinalmente. 1, spalo;
2, ptalo; 3, estambres; 4, estilo, 5, vulos; 6, hipando;
7, glndulas de esencia.
Aceites Esenciales

71

La droga contiene adems flavonoides (derivados de la quercetina y el kamferol), cidos
fenoles (glico, protocatquico) y abundantes taninos (10-13%) entre los que se destaca el
elagitanino eugeniina. Contiene tambin pequeas cantidades de esteroles: sitosterol,
estigmasterol, y campesterol.

USO:
El Clavo se emplea principalmente como especia. Los fitomedicamentos con Clavo se
utilizan en preparados para lavados de la mucosa bucofarngea. En odontologa ha sido
empleado como anestsico local y antisptico, aunque ha sido reemplazado por un derivado:
eugenolato de cinc. El eugenol es un potente inhibidor de la actividad plaquetaria, por ello debe
evitarse su utilizacin por va interna en personas que reciben terapia anticoagulante y aspirina.
El aceite esencial de Clavo es un carminativo que ha sido empleado en clicos con flatulencia.
Tambin se emplea por va tpica en preparaciones destinadas a aliviar dolores reumticos.

TCNICA:
1. En un aparato de destilacin simple, separe el aceite esencial contenido en 2,5 gramos
de Clavos molidos. El destilado contiene aceite de Clavo, algo separado y algo emulsionado.
2. Extraiga 15 ml de la mezcla con tres porciones de 15 ml cada una, de ter de petrleo
o diclorometano.
3. Reserve una porcin del extracto etreo para una posterior CCD.
4. Para la separacin de los dos componentes principales, extraiga 15 ml de la solucin
etrea con 3 porciones de 15 ml cada una de solucin de NaOH al 10%.
5. La capa etrea se seca con Na
2
SO
4
anhidro, se filtra y el solvente se evapora y
recupera por medio de evaporador rotatorio.
6. Los extractos alcalinos reunidos se acidifican con HCl hasta reaccin cida al tornasol
y se extraen con 15 ml (dos veces) de ter. Secar con Na
2
SO
4
anhidro, filtrar y evaporar.
Aceites Esenciales

72
7. Haga una cromatografa en capa delgada para comparar el extracto original respecto
de los compuestos separados.
Fase Movil: DCM:Eter de Petrleo:c. frmico (7:4:2 gotas).
Revelador: Vapores de I
2
.
Esquematice su resultado y responda si dicho resultado es el que hubiera obtenido en
una separacin ptima.
Examine los espectros IR y
1
H-RMN del eugenol y analcelos.

MOSTRACIONES

DESTILACIN DE EUGENOL/AGUA
Un baln conteniendo 15 mL de eugenol y 50 mL de agua es ensamblado a un equipo de
destilacin simple. Mediante la lectura de la temperatura del sistema; se puede calcular la
Pv
eugenol
en la mezcla, a dicha temperatura. (La Pv
agua
se obtendr de la Tabla 4 al final del
texto).

EXTRACCIN DE ACEITE ESENCIAL DE CLAVO POR COHOBACIN
Se utiliza una Trampa de Dean-Stark para aceites esenciales ms densos que el agua
(Figura 4), con un baln en posicin C y un refrigerante en posicin D. A un baln de fondo
redondo (con capacidad de 1000 mL) se le agregan 25 g de Clavo de olor molido, se lo llena
hasta cubrir completamente la droga (aproximadamente hasta la mitad de su capacidad) y se le
agregan ncleos de ebullicin. Comenzar a destilar y observar el volumen de esencia obtenido
en el tubo graduado de la trampa.

EXTRACCIN DE ACEITE ESENCIAL DE MANZANILLA
La Manzanilla est constituida por las inflorescencias secas de Matricaria recutita L.
Rauschert Matricaria chamomilla L. (Asteraceae). Tambin se la conoce como Manzanilla
alemana o Manzanilla dulce.

Aceites Esenciales

73

COMPOSICIN QUMICA:
El constituyente principal de los capitulos florales de Manzanilla es el aceite esencial.
La esencia (0,25 y 1,5 %) contiene alrededor de un 50% de los sesquiterpenos con
esqueleto bisabolano: (-)-o-bisabolol y sus xidos A y B, xido de bisabolona, espiroteres
(hasta un 25%) y camazuleno (1-15%) el cual se forma a partir de la matricina (lactona
sesquiterpnica) durante la destilacin. El camazuleno es el responsable del intenso color azul
de la esencia.
Entre los flavonoides se han identificado principalmente hetersidos de la apigenina,
como la 7-glucosil-apigenina, y de otras flavonas y flavonoles, que constituyen hasta un 8% de
la droga.
Otros componentes son: polisacridos mucilaginosos (hasta un 10%), cumarinas
(umbeliferota y herniarina), cidos fenoles y lactonas sesquiterpnicas (matricina).

A, Flor; B, lgula de la misma; C, corte
longitudinal. 1, Fsculo; 2, lgula; 3, palea; 4,
receptculo; 5, brctea del involucro.
Farmacognosia, G. E. Trease and W. C. Evans, 3
edicin.

Aceites Esenciales

74

USOS:
La Manzanilla es utilizada desde la antigedad por sus propiedades antiinflamatorias,
como espasmoltica y antiulcerosa gstrica. El aceite esencial es antibacteriano, antifngico,
carminativo y eupptico (digestivo estomacal). Adems la droga tiene accin antiinflamatoria
tpica y cicatrizante y diversos ensayos han destacado cierta actividad sedante. Se utiliza por
va oral en el tratamiento de afecciones dermatolgicas, as como analgsico y antibacteriano
de la cavidad bucofarngea y como antiinflamatorio en irritaciones oculares que no vayan
acompaadas de heridas.
En cosmtica se utiliza en champes para aclarar los cabellos, y en geles solares.

TCNICA:
Se usa una trampa para aceites menos densos que el agua como la de la figura 4, con un
baln en posicin A y un refrigerante en posicin B. Usar un baln de fondo redondo (con
capacidad 500 1000 mL) conteniendo alrededor de 500 ml de agua en el caso del baln de
1000 ml. En la trampa se coloca 5 ml de xileno exactamente medidos.
Agregar al baln 40 g de Manzanilla y luego de colocar el refrigerante, hervir el
contenido del baln, manteniendo una ebullicin suave. Destilar a una velocidad de 3-4 ml por
minuto durante 4 horas o hasta que la cantidad de aceite voltil se mantenga constante. Leer la
cantidad de aceite voltil formado y calcular la concentracin por 100 g de droga.

Aceites Esenciales

75
DESTILACIN DEL ACEITE ESENCIAL DE NUEZ MOSCADA POR ARRASTRE
CON VAPOR DE AGUA.
La Nuez Moscada es la semilla madura y desecada de Myristica fragrans (Flia.
Miristicceas), desprovista de sus tegumentos y del arilo y a veces provista de una delgada capa
de cal que le sirve para ahuyentar los insectos. El secado de la semilla dura de 3 a 6 semanas,
luego de las cuales se le quitan las testas.

Constituyentes de las semillas:
25-40% de un aceite fijo slido a temperatura ambiente (manteca de Nuez Moscada)
constituido por trimiristina.
8-15% de un aceite voltil que contiene miristicina y safrol como constituyentes
principales.

Estructura de trimiristina (a), de safrol (b) y de miristicina (c).

La operacin en s, consiste esencialmente en arrastrar una sustancia, la cual es insoluble
en agua, por pasaje de vapor de agua dentro de la mezcla del componente y agua. Para ello se
utiliza un equipo de destilacin por arrastre con vapor de agua como el de la figura 5.
El vapor de agua es generado en un baln o kitasato, provisto de una purga que se cierra
cuando el vapor generado es continuo. El vapor de agua all generado pasa al matraz o baln
que contiene una mezcla de Nuez Moscada molida (25 g) macerada con agua.
En este recipiente se produce el arrastre de la sustancia, cuyos vapores, junto con los del
agua son condensados en el refrigerante y recogido luego en el colector.
Aceites Esenciales

76
TABLA 4: Presiones de vapor del agua por debajo de 100C
Temp
C
0 0.2 0.4 0.6 0.8

Temp
C
0 0.2 0.4 0.6 0.8
0 4.579 4.647 4.715 4.785 4.855 51 97.20 98.2 99.1 100.1 101.1
1 4.926 4.998 5.070 5.144 5.219 52 102.09 103.1 104.1 105.1 106.2
2 5.294 5.370 5.447 5.525 5.605 53 107.20 108.2 109.3 110.4 111.4
3 5.685 5.766 5.848 5.931 6.015 54 112.51 113.6 114.7 115.8 116.9
4 6.101 6.187 6.274 6.363 6.453 55 118.04 119.1 120.3 121.5 122.6
5 6.543 6.635 6.728 6.822 6.917 56 123.80 125.0 126.2 127.4 128.6
6 7.013 7.111 7.209 7.309 7.411 57 129.82 131.0 132.3 133.5 134.7
7 7.513 7.617 7.722 7.828 7.936 58 136.08 137.3 138.5 139.9 141.2
8 8.045 8.155 8.267 8.380 8.494 59 142.60 143.9 145.2 146.6 148.0
9 8.609 8.727 8.845 8.965 9.086 60 149.38 150.7 152.1 153.5 155.0
10 9.209 9.333 9.458 9.585 9.714 61 156.43 157.8 159.3 160.8 162.3
11 9.844 9.976 10.109 10.244 10.380 62 163.77 165.2 166.8 168.3 169.8
12 10.518 10.658 10.799 10.941 11.085 63 171.38 172.9 174.5 176.1 177.7
13 11.237 11.379 11.528 11.680 11.833 64 179.31 180.9 182.5 184.2 185.8
14 11.987 12.144 12.302 12.462 12.624 65 187.54 189.2 190.9 192.6 194.3
15 12.788 12.953 13.121 13.290 13.461 66 196.09 197.8 199.5 201.3 203.1
16 13.634 13.809 13.987 14.166 14.347 67 204.96 206.8 208.6 210.5 212.3
17 14.530 14.715 14.903 15.092 15.284 68 214.17 216.0 218.0 219.9 221.8
18 15.477 15.673 15.871 16.071 16.372 69 223.73 225.7 227.7 229.7 231.7
19 16.477 16.685 16.894 17.105 17.319 70 233.7 235.7 237.7 239.7 241.8
20 17.535 17.753 17.974 18.197 18.422 71 243.9 246.0 248.2 250.3 252.4
21 18.650 18.880 19.113 19.349 19.587 72 254.6 256.8 259.0 261.2 263.4
22 19.827 20.070 20.316 20.565 20.815 73 265.7 268.0 270.2 272.6 274.8
23 21.068 21.324 21.583 21.845 22.110 74 277.2 279.4 281.8 284.2 286.6
24 22.377 22.648 22.922 23.198 23.476 75 289.1 291.5 294.0 296.4 298.8
25 23.756 24.039 24.326 24.617 24.912 76 301.4 303.8 306.4 308.9 311.4
26 25.209 25.509 25.812 26.117 26.426 77 314.1 316.6 319.2 322.0 324.6
27 26.739 27.055 27.374 27.696 28.021 78 327.3 330.0 332.8 335.6 338.2
28 28.349 28.680 29.015 29.354 29.697 79 341.0 343.8 346.6 349.4 352.2
29 30.043 30.392 30.745 31.102 31.461 80 355.1 358.0 361.0 363.8 366.8
30 31.824 32.191 32.561 32.934 33.312 81 369.7 372.6 375.6 378.8 381.8
31 33.695 34.082 34.471 34.864 35.261 82 384.9 388.0 391.2 394.4 397.4
32 35.663 36.068 36.477 36.891 37.308 83 400.6 403.8 407.0 410.2 413.6
33 37.729 38.155 38.584 39.018 39.457 84 416.8 420.2 423.6 426.8 430.2
34 39.898 40.344 40.796 41.251 41.710 85 433.6 437.0 440.4 444.0 447.5
35 42.175 42.644 43.117 43.595 44.078 86 450.9 454.4 458.0 461.6 465.2
36 44.563 45.054 45.549 46.050 46.556 87 468.7 472.4 476.0 479.8 483.4
37 47.067 47.582 48.102 48.627 49.157 88 487.1 491.0 494.7 498.5 502.2
38 49.692 50.231 50.774 51.323 51.879 89 506.1 510.0 513.9 517.8 521.8
39 52.442 53.009 53.580 54.156 54.737 90 525.76 529.77 533.80 537.86 541.95
40 55.324 55.91 56.51 57.11 57.72 91 546.05 550.18 554.35 558.53 562.75
41 58.340 58.96 59.58 60.22 60.86 92 566.99 571.26 575.55 579.87 584.22
42 61.500 62.14 62.80 63.46 64.12 93 588.60 593.00 597.43 601.89 606.38
43 64.80 65.48 66.16 66.86 67.56 94 610.90 615.44 620.01 624.61 629.24
44 68.26 68.97 69.69 70.41 71.14 95 633.90 638.59 643.30 648.05 652.82
45 71.88 72.62 73.36 74.12 74.88 96 657.62 662.45 667.31 672.20 677.12
46 75.65 76.43 77.21 78.00 78.80 97 682.07 687.04 692.05 697.10 702.17
47 79.60 80.41 81.23 82.05 82.87 98 707.27 712.40 717.56 722.75 727.17
48 83.71 84.56 85.42 86.28 87.14 99 733.24 738.53 743.85 749.20 754.58
49 88.02 88.90 89.79 90.69 91.59 100 760.00 765.45 770.93 776.44 782.00
50 92.51 93.5 94.4 95.3 96.3 101 787.57 793.18 798.82 804.50 810.21

Aceites Esenciales

77
BIBLIOGRAFA

1. Oliveira Simes, C. M. [et al.]. Farmacognosia: da planta ao medicamento 2 ed. Rev; Ed.
Universidade/UFRGS/Ed. da UFSC Porto Alegre/ Florianpolis, 2000; pp. 387-415.
2. Dominguez, X. A., Experimentos de qumica orgnica 3 reimpresin; Ed. Limusa S.A.:
Mxico, 1975; pp. 41-42.
3. Roberts, R.M., Gilbert, J.C., Rodewalt, L. B., Wingrove, A.S. Modern Experimental Organic
Chemistry 3 ed; Saunders College: Philadelphia, 1969; pp. 44-49.
4. Wiberg, K. B. Tcnica de Laboratorio en Qumica Orgnica; Ed Kapelusz S.A.: Bs As, 1962;
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5. Brewster, R.Q., VanderWert, C.A., McEwen, W.E. Curso Prctico de Qumica Orgnica 2
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9. Fitoterapia. Vademcum de Prescripcin. Editores: Vanaclocha, B., Caigueral, S.4 edicin,
Masson S.A., Barcelona, Espaa, 2003.

Aceites Esenciales

78
TAREA DE AULA DE ACEITES ESENCIALES
1- Cules son las familias vegetales ms ricas en aceites esenciales? En qu estructuras
secretoras del vegetal se encuentran?
2- Para qu sintetiza el vegetal aceites esenciales?
3- Cules son los constituyentes qumicos ms abundantes de los aceites esenciales?
4- Por qu se los llama aceites voltiles y por qu aceites esenciales?
5- El componente de una esencia que le da las caractersticas de olor y/o sabor a la misma, es
el compuesto que se encuentra en mayor proporcin en la esencia?
6- Cules son los tipos de aceites voltiles que se conocen y en base a qu se ha hecho la
clasificacin? Nombre al menos dos.
7- Qu diferencia biosinttica existe entre los cidos grasos (componentes de los aceites
fijos) y los terpenoides (componentes de los aceites voltiles)?
8- Cules son las rutas biosintticas a travs de las cuales se forman los componentes de los
aceites voltiles?
9- Qu cambios se producen al someter a los aceites voltiles a:
a- Calentamiento con KOH alcohlico?
b- Exposicin al aire?
10- Si se coloca sobre un papel de filtro una gota de aceite fijo y una de aceite esencial y se lo
deja permanecer al aire un tiempo, qu sucede en cada caso?
11- Busque en la Farmacopea las esencias estudiadas. Qu propiedades de los aceites
esenciales utiliza la F.N.A. 6 Ed. para identificarlos?
12- Del anlisis de las tablas 1 y 2 (pginas 53-60) saque conclusiones respecto a:
a- Mtodo ms comn de obtencin de aceites esenciales.
b- Porcentaje de aceite esencial que contienen las especies vegetales.
c- Porcentaje de componente principal que contiene la esencia. Es semejante en todas las
esencias?
Complete el estudio de las esencias con los siguientes datos:
13- ESENCIA DE MENTA:
Aceites Esenciales

79
a- Explique por qu las esencias de menta de buena calidad slo se obtienen de plantas con
un gran porcentaje de tejidos maduros.
b- Qu diferencia existe entre la esencia de Mentha piperita y la esencia de Mentha
arvensis? Usos de cada una.
14- ESENCIA DE NARANJAS AMARGAS:
a- Qu diferencia en composicin qumica existe entre la esencia de naranja amarga y de la
dulce? Qu semejanzas en composicin qumica tienen ambas? Usos de ambas.
b- Qu significa esencia de limn desterpenizada? Para qu se practica este
procedimiento?
15- ESENCIA DE ALMENDRAS AMARGAS:
a- Por qu se clasifica a este aceite voltil dentro de los aceites voltiles glicosdicos y
tambin dentro de los aldehdos?
b- Tiene uso farmacutico la esencia de almendras amargas? Por qu?
16- ALCANFOR:
Qu diferencia existe entre el alcanfor que se vende en las farmacias y el natural?
17- ESENCIA DE LAVANDA
Escriba el acetato de linalilo.
18- Se quiere obtener una mezcla de dos sustancias inmiscibles A y B. Las presiones de vapor
(P
v
) de los compuestos aislados se detallan a continuacin:
50 80 100 150
P
v(A)=
130 240 480 760
P
v(B)=
347 520 760 970

Indicar:
a. A qu temperatura comienza la destilacin?
b. A qu temperatura corresponde T=2?
c. Qu compuestos destilan a esas temperaturas?
Aceites Esenciales

80
d. Cuando co-destilan, En qu proporcin lo hacen?

19- Calcular la composicin del destilado de una mezcla de la sustancia A con H
2
O
Datos:
T
eb mezcla
= 92C
T
eb A
= 170C
PM
A
= 150
P
atm
= 760 mm de Hg.
T (C) P
v (agua)
(mm de Hg.)
90 525
91 546
92 560
93 588
94 610
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 tiempo
Temp
T=1
T=2
(C)
Carotenoides

81

CAROTENOIDES

PIGMENTOS FOTOSINTTICOS
Todas las clulas fotosintticas contienen uno o ms de los pigmentos conocidos como
clorofilas, que son los principales pigmentos absorbentes de la luz en la mayor parte de las
plantas verdes. Pero, adems de la clorofila, las clulas fotosintticas contienen uno o ms
pigmentos accesorios, que incluyen a los carotenoides (amarillos, rojos o prpuras) y las
ficobilinas (rojas o azules), que son tambin utilizados como receptores de energa luminosa.
Ellos actan como receptores luminosos suplementarios para porciones del espectro visible que
no estn completamente cubiertos por la clorofila. Los electrones deslocalizados de su sistema
de dobles enlaces conjugados permite la captura y transmisin de energa lumnica, son
fotoprotectores frente a radiaciones nocivas y pueden actuar como antioxidantes. Sin embargo,
cuando la energa luminosa es absorbida por tales pigmentos, tiene que transferirse como
energa de excitacin a las molculas de clorofila antes de que pueda ser utilizada para la
fotosntesis. Es por eso que la clorofila es el componente indispensable del aparato fotosinttico
y los carotenoides y ficobilinas los accesorios.

Estos pigmentos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza, se acumulan en
los cloroplastos de todos los tejidos fotosintticos, caroteno, lutena, violaxantina y neoxantina
se encuentran en las hojas de casi todos los vegetales. Se localizan en los complejos proteicos de
los fotosistemas de membrana de los tilacoides donde intervienen en la fotosntesis.
En plantas se pueden encontrar en distintas localizaciones:
Carotenoides

82
- flores (pensamientos, maravillas, clavel de la India)
- frutos (capsantina en pimientos, licopeno en tomate)
- races (carotenos en Zanahoria)
- semillas (zeaxantina en maiz)

ESTRUCTURA QUMICA
- Nmero de tomos de carbono: Los carotenoides son molculas tetraterpnicas formadas
por encadenamientos de ocho unidades isoprnicas (marcadas como ejemplo en la estructura del
|-caroteno) y por lo tanto, conteniendo cuarenta tomos de carbono.

- Dobles enlaces: El cromforo caracterstico de los carotenoides es la presencia de al menos
diez dobles enlaces conjugados, generalmente con configuracin trans. Este extenso sistema t
es responsable que los carotenoides absorban en la regin del visible del espectro
electromagntico (entre 450 y 500 nm) y les confiere los colores amarillo, anaranjado o rojo que
se observan en los tejidos de las plantas.

- Presencia de grupos oxigenados: De acuerdo a la presencia de grupos funcionales oxigenados
en la molcula, los carotenoides pueden dividirse en:
- Carotenos: no poseen oxgeno en su molcula, son hidrocarburos solubles en solventes
poco polares.
- Xantfilas, son derivados oxigenados de los carotenos. Poseen en sus anillos laterales,
grupos funcionales oxigenados (alcoholes, aldehdos, cidos, cetonas y epxidos), son solubles
en solventes polares como etanol.

- Presencia de ciclos: Estas molculas poseen en sus extremos, ciclos de 5 6 tomos de
carbono, que se reconocen por letras griegas (o, , y ). En general, se encuentran unidos a la
cadena central por un enlace simple.

De acuerdo con estos ltimos criterios, los carotenoides pueden clasificarse de la siguiente
forma:

Carotenoides

83
Ejemplo
Carotenoides
Carotenos
Acclicos (no poseen
ciclos)
licopeno
Con un ciclo
-caroteno,
-caroteno
Con dos ciclos
-caroteno,
-caroteno
Xantfilas
zeaxantina
violaxantina
luteina
astaxantina
capsantina
flucoxantina

Ejemplos de carotenos hallados en la naturaleza:

- Carotenos:
Se conocen cinco carotenoides ismeros (o, |, , o ccaroteno) que han sido aislados
de Zanahorias (Daucus carota) y son los responsables del color anaranjado. En las Zanahorias la
proporcin aproximada es: 85% de |-caroteno, 15% de ocaroteno, 0,1% de -caroteno y
proporciones an menores de los ismeros o- y c-. Tambin se encuentran en otros vegetales
amarillo-anaranjados como meln, mango, papaya y calabaza; y en
vegetales verde oscuro como brcoli y repollitos de Bruselas.

|-caroteno

o-caroteno

o-caroteno

Carotenoides

84

-caroteno

- Licopeno:
El licopeno es el ismero acclico del |-caroteno responsable del color rojo del tomate
(Lycospersicon esculente) y tambin en pomelo rosado y sanda. Tiene una potente actividad
antioxidante protegiendo por el dao de radicales libres, especialmente aquellas causadas por
oxgeno singlete.

Ejemplos de xantofilas hallados en la naturaleza:

- Zeaxantina:
HO
OH

- Capsantina:
Es el principal carotenoide del pimiento comn (Capsicum annuum) y en otras especies
del mismo gnero, en los que representa hasta el 60% del total de los carotenoides presentes; y
tambin en el pimentn, utilizado extensamente como especia, por su color y aroma.

Carotenoides

85
OH
O
HO

- Luteina:
HO
OH

- Astaxantina:
Es el carotenoide ms comn en los animales. Es el principal pigmento responsable del
color rosa de la carne del salmn o de la trucha, y tambin de las huevas de algunos peces.
Como los dems animales, estos peces no pueden sintetizar los carotenoides de novo, por lo
que dependen de los contenidos en la dieta, que si pueden transformar unos en otros, con ciertas
limitaciones. Esto es importante en acuacultura, ya que si se quiere obtener el color habitual en
los animales salvajes, deben incluirse carotenoides precursores en los piensos.
HO
OH
O
O

- Flucoxantina
HO
O
OAc
OH
- Violaxantina:
HO
OH
O
O

Carotenoides

86
Carotenoides y Vitamina A
La vitamina A1 (retinol) y vitamina A2 (dehidro-retinol) son vitaminas liposolubles cuya
estructura es de un alcohol constitudo por la mitad de la molcula de |-caroteno (tiene
estructura de diterpeno). El retinol y sus derivados se encuentran en productos animales como
lcteos, huevos, hgado y riones, principalmente, en el aceite de hgado de bacalao por lo que
se lo utiliza como suplemento dietario. Los |-carotenos son precursores de la vitamina A (pro-
vitaminas A) en los que se transforman a travs de un proceso enzimtico que ocurre en los
tejidos animales y que es catalizado por una dioxigenasa.
OH
OH
Retinol (Vitamina A1)
Dehidro-retinol (Vitamina A2)
O

La deficiencia en vitamina A causa defectos en la visin, ceguera nocturna (nictalopata)
y enfermedad degenerativa de cornea, como tambin retardo en el crecimiento, hiperqueratosis
en la piel y aumento de la sensibilidad a infecciones. Los retinoides (vitamina A y anlogos)
actan en la sealizacin molecular que regula aspectos de la diferenciacin celular, el
desarrollo embrionario, el crecimiento y la visin.
Por otra parte, el consumo excesivo de vitamina A puede producir efectos txicos como
cambios patolgicos en la piel, prdida del cabello, visin borrosa y dolores de cabeza y, en
algunos casos, Sndrome de Hipervitaminosis A.
Se ha encontrado evidencia que los carotenoides ejercen una accin preventiva de
afecciones degenerativas cumpliendo un papel protector frente a algunos tipos de cnceres. Se
utilizan en el tratamiento de sntomas de porfirias, fotodermatosis, fotosensibilidad
medicamientosa, urticaria solar, etc. Se los utiliza en pldora autobronceantes y como colorantes
naturales no txicos. Se utiliza en la prevencin y curacin de enfermedades oftalmolgicas
como xeroftalmia y nictalopa.
Carotenoides

87
INTRODUCCIN PARA LA REALIZACIN DEL TRABAJO PRCTICO
- Extraccin: Los pigmentos presentes en las plantas: carotenos, xantofilas y clorofilas, como
son de estructura diferente, difieren en su solubilidad y, por lo tanto, se los puede extraer usando
solventes selectivos. Conviene hacer la extraccin con poca luz y calor porque los pigmentos
tienden a oxidarse y polimerizarse cuando estn expuestos a la luz y el calor.
- Purificacin: Una vez extrados, la separacin de carotenos de xantfilas se puede realizar
utilizando una columna cromatogrfica empleando como fase estacionaria un adsorbente
adecuado, muchos de los cuales han sido usados para la separacin de los pigmentos de los
cloroplastos: almina, inulina, almidn, slica gel, etc. Los carotenos (ms apolares) pasan
rpidamente a travs de la columna y los productos de oxidacin de los mismos, las xantofilas
quedan retenidas en la columna.
- I dentificacin: La estructura de los carotenos purificados, puede ser determinada a travs de
un espectro de
1
HRMN. ste presenta seales caractersticas que para el |-caroteno son:
1.57
2.21 2.21
2.21 2.21
1.74
1.25 1.25
1.82
1.57
1.74
1.96 1.82
1.25 1.25
6.51
6.51
6.51
6.51 6.23
6.23
6.23
6.23
6.51
6.51 6.51
6.51
6.51
6.51
H
H H
H H
H
H
H
H
H H
H
H
H

0 1 2 3 4 5 6 7
PPM

Carotenoides

88
Gua de Trabajo Prctico: Carotenoides
OBJETIVO:
Obtencin de | caroteno a partir de Zanahoria (Daucus carota)

TCNICA:
1. Macerar en oscuridad 4 gramos de Zanahoria rallada en 15 mL de etanol durante 5 minutos.
2. Filtrar con vaco.
3. Guardar el filtrado en un erlenmeyer.
4. Colocar el slido residual en un baln y extraer a reflujo con 10 mL de cloroformo durante
5 minutos.
5. Filtrar. Repetir los pasos 4 y 5, dos veces ms con 10 mL de cloroformo.
6. Juntar las soluciones extractivas y secar con sulfato de sodio anhidro.
7. Filtrar la solucin para separar el agente desecante. Reservar una porcin para
Cromatografa en Capa Delgada. Concentrar la muestra hasta un volumen final de 2 mL
aproximadamente.
8. Purificar el |-caroteno utilizando la tcnica de Cromatografa en Columna.
Carotenoides

89
9. Realizar una Cromatografa en Capa Delgada del extracto crudo y los eluatos de la
columna.
Fase Movil: Hexano: Acetona (9:1)
Revelador: Luz visible

TCNICA PARA LA CROMATOGRAFA EN COLUMNA DEL PRCTICO DE |-
CAROTENO
a) Empaque de la columna:
1. Colocar una bureta en posicin vertical fijndola con una pinza. El robinete debe estar
cerrado y sin vaselina si es de vidrio esmerilado.
2. Colocar una torunda de algodn o de lana de vidrio en el fondo de la columna por medio de
una varilla de vidrio.
3. Introducir en la bureta 12 mL de hexano-acetona 9:1.
4. Lentamente agregar 7 g. de la fase estacionaria de eleccin (Almina Neutra) en porciones
mientras se golpea continuamente con un tubo de goma o con un lpiz forrado con un tubo
de goma para favorecer el empaquetamiento uniforme de la columna.
5. Con una alcuota de solvente adicional lavar las paredes internas de la bureta.
6. Abrir la llave inferior de la columna para que salga el exceso de solvente contenido. La
altura del solvente no debe exceder de 2 a 5 mm sobre la superficie superior de la fase
estacionaria. Ahora la columna est lista para recibir la muestra que se desea separar. En
todo momento debe cuidarse que la fase estacionaria no se seque para evitar la formacin de
grietas y burbujas.

b) Siembra de la muestra:
1. Disolver la muestra en una mnima cantidad del solvente que se usa para desarrollar la
columna.
2. Aadir la solucin a la columna, abrir el robinete para que la misma penetre en la fase
estacionaria.

c) Desarrollo del cromatograma:
1. Habiendo introducido la muestra por completo dentro de la fase estacionaria, se agrega la
fase movil (hexano:acetona 9:1).
Carotenoides

90
2. Se recogen fracciones de 2 ml en frascos o tubos de ensayo. Dado que el |-caroteno es
coloreado se puede seguir el progreso del cromatograma observando cmo desciende la
mancha anaranjada.
3. Cuando todo el |-caroteno haya salido, suspender el pasaje de solvente.

CUESTIONARIO
1. Cules son las fuentes naturales de carotenoides?
2. Por qu deben ser incluidos en la dieta humana vegetales amarillos y plantas de hojas
verdes?
3. Qu relacin estructural tienen las xantofilas con el alfa y beta caroteno?
4. Cul es la relacin biogentica entre carotenoides y terpenoides?
5. Por qu al hacer la extraccin de beta carotenos previamente se hace una extraccin con
etanol?
6. Por qu no se debe dejar calentando ms tiempo a reflujo el extracto de Zanahoria?
7. Para qu se coloca la torunda de algodn o lana de vidrio en la columna?
8. Por qu es preferible que el robinete no tenga grasa o vaselina en una columna
cromatogrfica?
9. Por qu debe tenerse cuidado que no entren burbujas de aire en la columna?
10. En todo momento debe evitarse que la columna se seque (es decir que se quede sin
solvente). Por qu?

BIBLIOGRAFA
1-Farmacognosia. Fitoqumica de Plantas Medicinales 2, Jean Bruneton, Editorial Acribia,
S.A. Zaragoza (Espaa). 2001.
2- Dewick, P.M. Medicinal natural products: a biosynthetic approach 2 Ed, John Wiley & Sons
Ltd., Chichester, UK. 2002.
Hiprico

91
HIPERICO:
CPSULAS DE HIPRICO
Composicin
Cada cpsula contiene: extracto seco de Hypericum perforatum (equivalente a 500 mcg de
hipericina) 400 mg.

Farmacologa
Al presente no existen datos suficientemente consistentes como para indicar en forma
precisa un mecanismo de accin de los extractos de H. perforatum. La actividad antidepresiva es
mediada probablemente por una activacin de los sistemas serotoninrgicos, noradrenrgicos y
dopaminrgicos. Se ha demostrado que el extracto aumenta el contenido de serotonina,
norepinefrina y dopamina en el cerebro, mientras que la hiperforina inhibe la recaptacin de
estas sustancias. La hipericina tambin ha demostrado actividad antidepresiva, la cual en un
principio fue descripta como un inhibidor de la MAO. El efecto antidepresivo aparecera unas
dos semanas despus del comienzo de la administracin de la droga.
Indicaciones
Distimia. Depresin de intensidad leve o moderada, incluso la asociada a sntomas
neurovegetativos.
Dosificacin
Dosis recomendada: 1 cpsula 4-5 veces al da con las comidas. Se recomienda un perodo
mnimo de tratamiento de 4 a 6 semanas con una determinada dosis para obtener la actividad
antidepresiva plena. La duracin del tratamiento deber ser evaluada por el mdico tratante.
Actualmente se recomienda la utilizacin de antidepresivos por perodos no inferiores a seis
meses.
Flor de H. perforatum
Hiprico

92

Contraindicaciones
Antecedentes de hipersensibilidad a los componentes del producto. Embarazo. Lactancia.
Pacientes bajo tratamiento con antidepresivos del tipo IMAO. Pacientes que reciben psoralenos
o retinoides.
Reacciones adversas
Los efectos adversos ocasionalmente asociados al uso de extracto de hiprico son los
siguientes: nuseas, vmitos, diarrea, constipacin, mareos, dolor abdominal, ansiedad,
sequedad de boca, confusin, sedacin y decaimiento. El efecto ms grave (aunque infrecuente)
asociado al uso del extracto de hiprico es la fotosensibilizacin (aumento de la sensibilidad de
la piel a la exposicin solar). Este efecto podra ser responsable de la aparicin de quemaduras
en pacientes expuestos al sol que no lo hacen en forma adecuada (con protectores solares y en
horarios adecuados -antes de las 11.00 horas y despus de las 15.00 horas-), sobre todo en
pacientes de piel clara.
Conservacin
Mantener en sitio seco a temperatura no superior a 25C. Mantener ste y todos los
medicamentos alejados del alcance de los nios.

FARMACOPEA
ARGENTINA

OCTAVA EDICIN

HIPRICO, hierba
Definicin - Hiprico est constituido por las par-
tes areas superiores incluyendo hojas, botones flora-
les y flor, desecadas, recogidas durante la floracin de
Hypericum perforatum L. (Hypericaceae). Debe
contener no menos de 0,06 por ciento de hipericinas
totales, calculado como hipericina y debe cumplir con
las siguientes especificaciones.
CONSERVACIN
En envases inactnicos bien cerrados, en un sitio
fresco y seco.
ENSAYOS
Identificacin
A - Caractersticas macroscpicas - Hojas
opuestas, ssiles, oblongo-ovadas, de hasta 3,5 cm de
longitud; lminas de bordes lisos, con pelos glandula-
res oscuros en el margen y puntos traslcidos en toda
su superficie. Las flores son pentmeras, numerosas,
de color amarillo y pednculos cortos que forman
cimas compuestas (pleiocasios). Spalos 5, lanceola-
dos, con puntos negros en el margen. Ptalos 5, de
color amarillo oscuro, ovales, oblicuos y con glndulas
de color rojo oscuro en el borde. Estambres numero-
sos, agrupados de 3 a 6 haces (generalmente 3) con
glndula conectival apical. Gineceo gamocarpelar con
tres estilos. Fruto cpsula tricarpelar de 8-10 4-6
mm, ovoide o elipsoide-trgona, dehiscente en el pice,
rodeada por los restantes verticilos marcescentes. La
semilla es de 1 a 1,2 mm, cilindroide, foveolada, de
color castao a negro. La droga seca consiste ma-
yormente de flores, incluyendo hojas y yemas sin abrir.
Las hojas son de color verde o verde plido. Se ob-
servan los ptalos de las flores de color amarillo a
pardo amarillento, tambin hay alto contenido de
fragmentos de inflorescencias. Tanto las hojas como
los ptalos se caracterizan por la presencia de numero-
sas glndulas redondeadas de aproximadamente 0,5 a
1 mm de dimetro, en las hojas se las observan como
puntos traslcidos cuando se las ilumina a contraluz y
las de los ptalos son de color rojo oscuro y se presen-
tan solamente en los bordes. Los fragmentos de tallos
son de color verde plido, cilndricos, huecos y con
dos costillas longitudinales opuestas.
B - Caractersticas microscpicas - El tallo en
seccin transversal muestra clulas epidrmicas rec-
tangulares con cutcula conspicua y lisa; la corteza
consta de varias capas de colnquima. El floema y el
xilema se disponen en un anillo continuo, atravesado
por numerosos radios uniseriados; las fibras del xilema
son muy engrosadas y se disponen en series radiales.
La mdula es parenquimtica se lisa y ahueca. Los
canales secretores estn presentes en la corteza, floe-
ma y mdula. La hoja en vista superficial presenta la
epidermis superior con clulas poligonales de paredes
anticlinales rectas; en la epidermis inferior son ms
pequeas, con paredes anticlinales marcadamente
sinuosas con estomas frecuentemente paracticos o a
veces anomocticos; la cutcula es lisa, ms gruesa en
la epidermis superior. En seccin transversal la lmina
presenta estructura dorsiventral, con 1 2 hileras de
clulas en empalizada; glndulas oleosas conspicuas en
el mesfilo esponjoso. La nervadura central est
constituida por un solo haz colateral. La flor tiene los
spalos con caractersticas semejantes a las de la hoja,
con numerosas glndulas de color rojo en los bordes.
Los ptalos presentan la epidermis superior con clu-
las de paredes rectas y la epidermis inferior con pare-
des sinuosas, las glndulas de aceite son visibles, a
menudo alargadas con un contenido rojizo o amarillo.
Los granos de polen son prolados, de aproximada-
mente 20 m de dimetro con 3 colporos y exina lisa
o verrucosa.
C - Droga en polvo - El polvo es de color amari-
llo claro a pardo verdoso con un olor aromtico y
balsmico. Los fragmentos de hojas vistos en superfi-
cie muestran las clulas epidrmicas alargadas, poligo-
nales con paredes anticlinales gruesas, en forma de
rosario, con estomas paracticos (ocasionalmente
anomocticos); abundantes fragmentos de hoja, la
mayora conteniendo glndulas, algunas con un conte-
nido rojo cerca del margen, los ptalos muestran las
clulas de la epidermis superior, estrechas, alargadas,
con paredes anticlinales delgadas, rectas y sinuosas en
la epidermis inferior; se observan glndulas de aceites
alargadas con un contenido rojo o amarillo; numero-
sos granos de polen que tienen entre 20 y 25 m de
dimetro, prolados, tricolporados. Se observan frag-
mentos de tallos y frutos enteros acompaados por
estilos.
D - Aplicar la siguiente tcnica cromatogrfica.
Fase estacionaria - Emplear una placa para cro-
matografa en capa delgada (ver 100. Cromatografa)
recubierta con gel de slice para cromatografa con
indicador de fluorescencia, de 0,25 mm de espesor.
Fase mvil - Acetato de etilo, agua, cido frmico
y cido actico glacial (100:26:11:11).
Solucin estndar - Preparar una solucin de
hipersido y cido clorognico al 0,05% para cada
uno en metanol.
Solucin muestra - Pesar y reducir a polvo fino
aproximadamente 5 g de Hiprico y transferir 500 mg
de la droga pulverizada a un matraz de 25 ml. Agre-
gar 10 ml de metanol y mezclar. Calentar en un bao
de agua a 60C durante 15 minutos agitando con
frecuencia. Filtrar.
Revelador 1 - Solucin al 1% de difenilborinato
de 2-aminoetilo en metanol.
Revelador 2 - Solucin al 5 % de polietilenglicol
4.000 en etanol.
Procedimiento - Aplicar por separado sobre la
placa cromatogrfica, en bandas, 10 l de la Solucin
muestra y 10 l de la Solucin estndar. Dejar secar
las aplicaciones y desarrollar los cromatogramas hasta
que el frente del solvente haya recorrido aproximada-
mente tres cuartas partes de la longitud de la placa.
Retirar la placa de la cmara, marcar el frente del
solvente y dejar que el solvente se evapore. Pulverizar
sobre la placa con Revelador 1. Dejar secar al aire.
Pulverizar sobre la placa con Revelador 2, dejar secar
nuevamente al aire. Examinar el cromatograma bajo
luz ultravioleta a 366 nm. En el cromatograma se
deben observar dos bandas de fluorescencia rojo-
violceas debido a la presencia de hipericina con un
valor de R
f
aproximadamente de 0,85 y pseudohiperi-
cina con un valor de R
f
aproximadamente de 0,80;
varias zonas con una fluorescencia amarillo anaranja-
da, una de las cuales coincide en valor de R
f
y color
con la banda de hipersido con un valor de R
f
0,50
presente en la Solucin estndar. El cromatograma
de la Solucin muestra debe presentar una zona de
fluorescencia azul que coincide en posicin y color
con la banda del cido clorognico con un valor de R
f

aproximadamente de 0,40 presente en la Solucin
estndar.
Cenizas totales (ver 630. Mtodos de Farmacog-
nosia)
Debe cumplir con los requisitos.
Determinacin de aflatoxinas <110>
Debe cumplir con los requisitos.
Materia extraa (ver 630. Mtodos de Farma-
cognosia)
No debe contener ms de 3,0 % de tallos con un
dimetro superior a 5 mm y no ms de 2 % de otras
materias extraas.
Prdida por secado <680>
No debe perder ms de 10,0 %, determinado sobre
1,0 g de Hiprico pulverizado y secado en estufa entre
100 y 105 C durante 2 horas.
VALORACIN
Preparacin muestra - Pesar y reducir a polvo fi-
no 5,0 g de Hiprico y transferir 800 mg del polvo,
exactamente pesado, a un baln de 100 ml. Agregar
60 ml de una mezcla de tetrahidrofurano y agua
(80:20) y agitar. Calentar la mezcla a ebullicin en
bao de agua a 70 C a reflujo durante 30 minutos.
Centrifugar durante 2 minutos a 2.000 rpm y transferir
el sobrenadante en un matraz de 250 ml. Suspender el
residuo con 60 ml de una mezcla de tetrahidrofurano y
agua (80:20). Transferir al baln y repetir la opera-
cin por 30 minutos ms. Centrifugar durante
2 minutos a 2.000 rpm y reunir los sobrenadantes.
Evaporar hasta sequedad. Disolver el residuo con
15 ml de metanol ayudndose con ultrasonido y llevar
a un matraz aforado de 25 ml. Lavar el matraz de
250 ml con metanol y completar a volumen de 25 ml
con el mismo solvente. Filtrar y descartar los prime-
ros 2 ml del filtrado. Transferir 5 ml del filtrado a un
matraz aforado de 25 ml y completar a volumen con
metanol.
Procedimiento - Medir la absorbancia de la Pre-
paracin muestra a 590 nm por comparacin emple-
ando como blanco metanol. Calcular el contenido en
porcentaje de hipericina en la porcin de Hiprico en
ensayo por la frmula siguiente:
(125/870)(A/P)
en la cual A es la absorbancia de la Solucin muestra
a 590 nm; P es el peso de Hiprico en mg y 870 es el
coeficiente de extincin especfica E (1 %, 1 cm) de
hipericina (ver 470. Espectrofotometra ultravioleta y
visible).
Hiprico

96

TRABAJO PRCTICO HIPRICO
OBJETIVO:
Analizar mediante el uso de cromatografa en capa delgada (CCD) distintos preparados
farmacuticos que contienen Hiprico (Hypericum perforatum)
DESARROLLO EXPERIMENTAL
a) Preparacin de extracto metanlico de Hiprico hierba
Extraer por calentamiento a reflujo 1 gramo de Hiprico hierba en polvo con 10 ml de
metanol durante 10 minutos. Filtrar por gravedad. El extracto obtenido se utilizar para la CCD.
b) Preparacin del extracto metanlico del fitoterpico conteniendo droga Hiprico
Del preparado farmacutico elegido, tomar una cantidad equivalente a 500 mg de Hiprico
y pulverizarlo.
Colocar en un erlenmeyer y agregar 15 ml de metanol. Agitar durante 10 minutos con
agitador magntico. Llevar a 25 ml con metanol
Filtrar la solucin por gravedad. Tomar 1 ml del filtrado y llevar a 5 ml con metanol. El
extracto obtenido se utilizar para CCD.
1-Anlisis cromatogrfico por CCD:
Sistema cromatogrfico:
Fase Estacionaria: Slica gel 60 GF 254: 0,1mm (cromatofolios comerciales)
Fase Mvil: Acetato de etilo / Acido frmico / Acido actico glacial / Agua (100:11:11:27)
Distancia de desarrollo: 6 cm
Testigos: Rutina, solucin al 1% en metanol.
Hipericina, solucin al 0,00028% en metanol.
Acido clorognico, solucin al 0,05 % en metanol

Hiprico

97

Revelado:
- Observacin de la placa a la luz UV de 365 nm antes y despus del revelado con NP/PEG.
CCD
Identificacin de la droga Hiprico a travs de marcadores por CCD. Comparacin
del perfil cromatogrfico de la droga Hiprico con el extracto obtenido a partir del
preparado farmacutico.
Siembras:
Extracto metanlico de Hiprico hierba: 10 l en banda de 0,5 cm
Extracto metanlico del preparado farmacutico: 10 l en banda de 0,5 cm
Testigo Rutina 10 l en banda de 0,5 cm
Hipericina (0,00028 %) 10 l en banda de 0,5 cm
Acido clorognico 10 l en banda de 0,5 cm
Observar:
-Bandas de fluorescencia rojo violceas debido a la presencia de hipericina (Rf aprox 0,85)
y pseudohipericina (Rf 0,8)
-Varias zonas de fluorescencia amarillo anaranjado, una de ellas debido a la presencia de
rutina (Rf 0,35)
-Zona de fluorescencia azul que coincide en posicin y color con la banda del cido
clorognico (Rf aprox 0,40)
Anexos

98

ANEXOS

RECRISTALIZACIN
Los compuestos orgnicos obtenidos de fuentes naturales o los de sntesis, rara vez se
obtienen puros. Los primeros suelen ir acompaados de otros compuestos orgnicos del medio
del cual provienen y los sintticos estn impurificados por los reactivos y otros productos que
se originan en la reaccin (productos secundarios). Es entonces imprescindible la purificacin
de estas sustancias.
De los mtodos de purificacin disponibles, algunos de los ms utilizados son
cromatografa de adsorcin en columna, cromatografa en capa delgada preparativa, particin
con solventes, destilacin (en caso de lquido) y la recristalizacin fraccionada. Para
compuestos orgnicos que son slidos a temperatura ambiente, el proceso de recristalizacin es
la tcnica de eleccin para realizar la purificacin.
En general, la purificacin por este mtodo se basa en el hecho de que la mayora de los
slidos son ms solubles en un disolvente en caliente que en fro. El slido que se va a purificar
se disuelve en el disolvente caliente, generalmente a ebullicin, la mezcla caliente se filtra para
eliminar todas las impurezas insolubles y, entonces, la solucin se deja enfriar para que se
produzca la cristalizacin. En el caso ideal, toda la sustancia deseada debe separarse en forma
cristalina y todas las impurezas solubles deben quedar disueltas en las aguas madres.
Finalmente, los cristales se separan por filtracin y se dejan secar. Si con una cristalizacin
sencilla no se llega a una sustancia pura, el proceso puede repetirse empleando el mismo u otro
disolvente.

CONSIDERACIONES PRCTICAS
Para efectuar una recristalizacin por disolucin, debern realizarse estos pasos:
1 Eleccin del solvente.
2 Disolucin de la muestra.
3 Decoloracin.
4 Eliminacin de impurezas insolubles.
5 Cristalizacin.
6 Separacin de los cristales del lquido madre.
7 Lavado de los cristales.
8 Secado.
Anexos

99

1 ELECCIN DEL SOLVENTE
Un disolvente apropiado para recristalizacin debe reunir las siguientes condiciones:
a) No reaccionar con el compuesto a purificar.
b) Debe solubilizar una cantidad grande de slido a purificar en caliente y muy pequea en
fro. Es decir, debe poseer un coeficiente trmico de solubilidad elevado para obtener una
buena cosecha de cristales. Es conveniente que la cantidad de solvente necesario para
solubilizar 100 mg de sustancia en caliente est entre 1 y 3 ml.
c) Que solubilice totalmente a las impurezas en el solvente fro, o que sean totalmente
insolubles en el solvente caliente.
d) Debe poseer un punto de ebullicin adecuado, relativamente alto, que permita una
considerable variacin de temperatura; no muy alto porque dificultara su eliminacin en el
secado de los cristales, ni muy bajo pues se evaporara durante la manipulacin. Adems es
conveniente que el punto de ebullicin del solvente sea menor que el punto de fusin del slido
a purificar, para evitar que ste funda por encontrarse sobresaturada la solucin.
e) Al enfriarse debe permitir la formacin rpida de cristales y no impedir el crecimiento
de los mismos por viscosidad.
f) De fcil manipulacin, no inflamable y econmico.

TCNICA
A 100 mg de muestra pulverizada, se la introduce dentro de un tubo de Kahn y se agrega
solvente segn el Esquema 1, en proporciones de 0,5 ml, hasta que todo el slido se disuelva a
la temperatura de ebullicin o hasta que se haya alcanzado un volumen total de 3 ml de
disolvente.

Anexos

100

Esquema 1

Conseguida la disolucin total del slido a temperatura de ebullicin con un volumen de
solvente comprendido entre 1 y 3 ml/100mg, la solucin se enfra; si el slido no cristaliza
espontneamente, se tratar de inducirla por agitacin o raspado de las paredes del tubo, si no
aparecen cristales, el solvente no sirve y se ensaya otro.
Si, en cambio, la cristalizacin se produce, se separan los cristales del lquido madre por
filtracin, se lavan con pequeas porciones de solvente fro, se secan y se determina el punto de
fusin, el que se compara con el de la muestra original.
Si en los ensayos anteriores, se ha encontrado un solvente en el cual el slido es muy
soluble y otro en el que es muy poco soluble, y ambos solventes son miscibles entre s, se
puede probar con una mezcla de ambos, realizndose el ensayo con par de solventes. Se toman
100 mg de muestra pulverizada, se disuelve en 0,5 ml del solvente de gran poder de disolucin.
Se lleva a ebullicin y, manteniendo esta temperatura, se agrega gota a gota el de pobre poder
de disolucin, hasta turbidez de la solucin en caliente. Se vuelve a agregar el primer solvente
hasta que la turbidez de la solucin, en caliente, desaparezca. Se deja enfriar y se contina con
la tcnica anterior.
No se disuelve
en fro
Se disuelve en cantidad
apreciable en fro
+ 0,5 ml de solvente
No se disuelve Se disuelve
enfriar lentamente
Observar: - facilidad de cristalizacin
- cantidad de cristales formados
se calienta a
ebullicin
Se descarta
100 mg de slido pulverizado
Anexos

101

Entre los solventes ensayados, el criterio a seguir en la eleccin del ms conveniente
debe basarse en:
a) Pureza de los cristales obtenidos.
b) Cantidad de cristales.
c) Volumen de solvente (comprendido entre 1 y 3 ml por cada 100 mg de sustancia).
Si dos o ms de los solventes ensayados renen las mismas caractersticas en relacin a
los puntos antes citados, se debe elegir al menos txico, menos voltil y de menor costo.
Siempre que sea posible, se utilizar agua.

2 DISOLUCIN DE LA MUESTRA
Elegido el solvente, se procede a recristalizar el total de la sustancia. El objetivo es
disolver el soluto en la mnima cantidad de disolvente a su temperatura de ebullicin.

TCNICA
Si el solvente elegido no es agua, se coloca el slido finamente pulverizado en un
erlenmeyer de cuello esmerilado, de tamao adecuado a la solucin a obtener. Se agrega el
solvente en cantidad que se juzgue insuficiente para disolver la totalidad del slido a
temperatura de ebullicin y se le adapta un refrigerante en posicin de
reflujo. Se coloca el sistema sobre una manta de calefaccin, calentando
suavemente hasta ebullicin, con agitacin (ver figura 1). Si la
disolucin no es total, se agrega ms solvente con pipeta, por la parte
superior del refrigerante, calentando a ebullicin y agitando despus de
cada agregado, hasta disolucin total de la sustancia a purificar.
Es necesario poner especial atencin en que la sustancia no
funda, ya que el slido fundido ocluye en su seno impurezas que retiene
por solidificacin.
Si el solvente utilizado es agua, la solucin se realiza en un
erlenmeyer desprovisto de refrigerante.

Efectuada la disolucin, el paso siguiente estar determinado por el aspecto que presente
la misma, que puede ser:
1 Incoloro (o del color caracterstico de la sustancia a purificar), que a su vez puede ser:
a) sin partculas insolubles.
b) con partculas insolubles.
Anexos

102

2 Coloreado, que a su vez puede ser:
a) sin partculas insolubles.
b) con partculas insolubles.
En las soluciones de tipo 1-a) se procede a provocar la cristalizacin. A las del tipo 1-b) es
necesario filtrarlas en caliente.
A las soluciones del tipo 2-a) y 2-b), se las debe decolorar primero y filtrar en caliente
despus.
En el caso de que la solucin tenga aspecto opalescente, es necesario colocarle un agente
adsorbente y luego filtrar en caliente.

3 DECOLORACIN DE LA SOLUCIN
Frecuentemente la solucin se colorea con impurezas orgnicas de peso molecular
elevado que acompaan al producto natural deseado o que se han formado como productos de
descomposicin o subproductos en el proceso de sntesis. En estos casos el color se puede
eliminar utilizando una pequea cantidad de carbn activado.
Otro caso puede ser que la solucin se presente opalescente, en cuyo caso es necesario
tambin el agregado de carbn activado, para que adsorba las impurezas insolubles que
provocan las opalescencias, y luego filtrar en caliente.

TCNICA
A la solucin caliente, pero por debajo de su temperatura de ebullicin para evitar
proyecciones, se agrega con esptula el carbn en una proporcin de 0,1g por 100 ml de
solucin, se agita y se deja actuar durante unos minutos. Es importante resaltar que el agregado
de carbn activado no sea excesivo, ya que podra adsorber algo de la sustancia que esta siendo
purificada.
Luego se agrega un 10% de exceso de solvente para facilitar la posterior filtracin de la
solucin caliente.
Se calienta a temperatura de ebullicin por unos minutos y se filtra.

4 ELIMINACIN DE LAS IMPUREZAS INSOLUBLES
La eliminacin de partculas insolubles, en caliente, se consigue haciendo una filtracin
en caliente.
Como el lquido que se pretende filtrar es una solucin saturada en caliente, debemos
tomar todas las precauciones para evitar que cristalice soluto en el embudo. Estas son:
Anexos

103

1) Mantener durante la filtracin la solucin en ebullicin.
2) Agregar 10% de exceso de solvente, lo que provoca una dilucin de la solucin,
evitando la sobresaturacin por evaporacin del solvente o descenso de temperatura (esto
provocado por el manipuleo de la solucin).
3) Mantener el embudo caliente. La temperatura no debe ser mayor a la del punto de
ebullicin del solvente elegido. Al estar calentado el embudo al punto de ebullicin del
solvente, evitamos que se evapore la solucin.
4) Filtrar rpidamente, para evitar la evaporacin o reducirla al mnimo. Esto se
consigue con la ayuda de succin.

TCNICA
El equipo consta de un embudo Hirsh o Buchner, segn la cantidad de lquido a filtrar,
que se adapta a la boca de un kitasato mediante un trozo de caucho que impide la prdida de
vaco. El kitasato se conecta a la bomba de vaco (figura 2). Se cortan varios papeles de filtro
de forma circular de modo que cubran completamente los orificios de la placa perforada del
embudo pero que no alcancen las paredes laterales (figura 3) porque las impurezas y el carbn
pueden filtrarse a travs de los bordes.

- Figura 2 - Equipo de vaco -
Anexos

104

- Figura 3 -

Se calienta el embudo a la misma temperatura que el punto de ebullicin del solvente
usado. Si el solvente usado es agua, se coloca invertido y completamente sumergido en un bao
de agua, mantenindolo a ebullicin durante unos minutos. Si se trata de otro solvente, se
coloca en estufa a la temperatura del punto de ebullicin del solvente.
El embudo caliente se adapta rpidamente al resto del equipo de filtracin y se coloca el
papel de filtro, que debe quedar completamente liso y sin arrugas. Esto se consigue
humedeciendo el papel con unas gotas del solvente caliente.
Con ayuda de una varilla se agrega la solucin a filtrar (a la que se le ha agregado un 10%
de exceso de solvente); mantenindola a ebullicin durante toda la filtracin.
Para evitar que la succin provoque el paso rpido de una corriente de aire fro que enfre
el sistema y provoque la cristalizacin en el embudo, se debe trabajar de manera tal que
siempre haya solucin caliente en el embudo.
Si durante la filtracin se produce la cristalizacin del slido en el filtro, habr que
redisolverlo. Para ello se unen los cristales a la solucin original, se calienta, y puede ser
conveniente agregar un mayor exceso de solvente que se elimina luego por evaporacin.

5- CRISTALIZACIN
Es la obtencin de cristales de la solucin. Se trata de obtener la mxima cantidad de
sustancia con la mnima cantidad de impureza. Para lograrlo es necesario mantener la
disolucin en reposo dejndola enfriar lentamente, primero a temperatura ambiente y luego en
bao de agua fra o hielo hasta que no se separen ms cristales.
Si enfriamos rpidamente o agitamos se formarn cristales pequeos con gran superficie
total, adsorbiendo cantidades apreciables de impurezas. La velocidad de cristalizacin vara
entre lmites muy amplios dependiendo entre otros factores de la sustancia disuelta, de las
impurezas presentes y muy especialmente de la naturaleza del solvente.
Anexos

105

Si dadas las condiciones necesarias la cristalizacin espontnea no se produce, se puede
realizar alguno de los siguientes procedimientos para inducirla:
a) variacin de la temperatura
b) raspado de las paredes del recipiente
c) sembrado
d) variaciones locales de concentracin

6- SEPARACIN DE LOS CRISTALES DEL LQUIDO MADRE
Obtenidos los cristales, es necesario separarlos del lquido madre teniendo en cuenta que
ste debe ser eliminado al mximo con una mnima evaporacin para evitar que se deposite
sobre el cristal la impureza que se desea eliminar.
La filtracin por gravedad es bastante lenta e ineficaz, logrndose mejores resultados por
filtracin a presin reducida. Con sta se impulsa el lquido a travs del papel de filtro por una
diferencia de presiones que acelera notablemente la operacin y logra una mejor separacin. Es
necesaria la mxima eliminacin posible del lquido madre retenido por los cristales para que al
evaporarse el solvente no queden impurezas sobre los mismos.

TCNICA
El mismo aparato usado para filtracin en caliente (Figura 2) se usa para la filtracin en
fro. El tamao del embudo se elegir de acuerdo con la cantidad de slido a recoger,
prefirindose el ms pequeo que contenga todos los cristales, con suficiente holgura para no
dificultar su posterior lavado.
El arrastre de los cristales adheridos a las paredes del recipiente, se realiza con lquido
madre, ya que como ste est saturado en ese slido, no hay prdidas por disolucin del mismo.
Una vez que estn todos los cristales en el embudo, se les extrae lo ms completamente
posible el lquido madre, comprimindolos con una esptula mientras se aplica succin.
Valor del lquido madre: el filtrado obtenido, llamado aguas o lquidos madres, no se
tratar como residuo, pues a partir de l puede obtenerse una nueva cosecha de cristales. Para
ello, es necesario concentrar la solucin por evaporacin parcial del solvente para saturarla
nuevamente y permitir su precipitacin. Los cristales as obtenidos son generalmente menos
puros por ser ms alta la proporcin de impurezas en el lquido madre, siendo necesario
recristalizarlos.

Anexos

106

7- LAVADO DE LOS CRISTALES
Si la sustancia purificada no forma soluciones slidas con la impureza, los cristales
separados son puros, pero retienen lquido madre que al secarse contaminar al cristal con sus
impurezas. La cantidad de lquido madre retenido ser mnima en cristales grandes y
uniformes, en contacto con soluciones madres poco viscosas, mientras que cristales pequeos
no uniformes de soluciones viscosas, retendrn una cantidad importante.
Para separar totalmente la solucin madre depositada, se efecta el lavado. Debe emplearse
el mismo solvente que sirvi para la disolucin, previamente enfriado para disminuir la
solubilidad de la sustancia. Se efectan repetidos lavados con pequeas cantidades por ser
mucho ms efectivo que pocos lavados con el mismo volumen total.
Si el disolvente es de punto de ebullicin elevado difcil de eliminar por evaporacin, se
puede hacer un ltimo lavado con una pequea cantidad de un disolvente de punto de
ebullicin ms bajo, miscible con el anterior en el que el soluto es insoluble.

TCNICA
Sin efectuar succin, se cubren los cristales contenidos en el embudo con la mnima
cantidad de solvente puro y fro; con una varilla se remueve la mezcla hasta lograr impregnar
todos los cristales con el disolvente hacindolo cuidadosamente de modo de no romper ni
mover el papel de filtro.
Despus de este procedimiento aplicar succin presionando suavemente con la esptula. Se
interrumpe el vaco y se repite este proceso varias veces.

8- SECADO DE LOS CRISTALES
Para lograr cristales puros debemos eliminar totalmente el solvente empleado en el lavado.

TCNICA
Se separa el embudo del kitasato y, con ayuda de una esptula, se retira el papel de filtro
junto con los cristales. Se deja secar por evaporacin del solvente.
Comprobar la pureza de los mismos determinndoles el punto de fusin.

Anexos

107

CROMATOGRAFA EN CAPA DELGADA

La cromatografa en capa delgada es un tipo de cromatografa de adsorcin solido-
lquido. Usualmente se la abrevia como CCD o TLC (siglas en ingles de Thin-Layer
Chromatography). La fase estacionaria (FE) es un slido que se extiende en forma de capa
delgada (~250 m) en una placa de vidrio, plstico (acrlico) o metal (aluminio). Un pequeo
volumen de una solucin de la mezcla a ser separada se siembra cerca de uno de los extremos
de la placa y sta dentro de una cuba de elucin que contiene la cantidad necesaria del solvente
de elucin como para quedar justo por debajo del punto de siembra (Figura 1). El solvente
asciende por capilaridad, arrastrando con l los componentes de la mezcla a diferentes
velocidades. Como resultado se obtiene una serie de manchas en la placa, en la lnea
perpendicular al nivel de solvente en la cuba cromatogrfica (Figura 2).

Figura 1: Cuba cromatogrfica.

Cuando hablamos de cromatografa de adsorcin, hablamos de una competencia entre los
compuestos a separar y el solvente de elucin por los sitios libres en el adsorbente. Los tipos de
interacciones que causan adsorcin son los mismos que causan atraccin entre cualquier
molcula, es decir, atraccin electrosttica, complejacin, formacin de puente de hidrgeno,
fuerzas van der Waals, etc. El poder de elucin de un solvente se refiere a la capacidad del
mismo de desplazar las molculas de analito de su unin a la FE (desorcin), con lo cual, stas
migran hacia arriba. Si los compuestos a separar tienen mucha mayor afinidad por la FE que la
FM, entonces estos compuestos quedaran retenidos en el punto de siembra puesto que el
solvente no tiene suficiente fuerza como para desplazarlos. Si por el contrario, la FM tiene
mucha mayor afinidad por la FE, entonces los compuestos a separar no podrn competir con la
Anexos

108

FM por estos sitios de la FE y corrern con el frente de solvente. En situaciones intermedias a
las anteriores, los componentes de la mezcla corrern por debajo del frente del solvente: cada
componente se desplazar a lo largo de la placa con una velocidad dependiente de su propia
afinidad por la FE. Entonces, al momento en que el frente del solvente llega a la parte superior
de la placa, los diferentes componentes de la mezcla habrn recorrido diferentes distancias a lo
largo de la placa. En todos los casos, el orden en que eluyen los compuestos no se modifica;
puesto que el orden de elucin depende de la FE y no de la FM.
Los tipos de adsorbentes slidos son los mismos que pueden ser utilizados en
cromatografa en columna, siendo slica gel activada y almina activada las ms ampliamente
utilizadas. Ambas fases estacionarias son polares y cuando se trabaja con ellas se dice que se
trabaja en fase normal. En estos casos, los compuestos ms polares son los que mayor
afinidad tienen por la FE y son los que se desplazan por la placa a menor velocidad.
Tambin existen las fases estacionarias reversas, de naturaleza apolar. La slica gel RP es
muy utilizada (note que el RP se refiere a Reverse Phase). En estos casos, los compuestos
que quedan ms retenidos son los apolares y los polares corren al frente.
La tcnica TLC es rpida y fcil de realizar, se presta bien a la rutina de anlisis de
composicin de mezclas, y la informacin que brinda respecto del mejor sistema de solventes
puede ser aprovechada para la realizacin posterior de una columna cromatogrfica.
Una ventaja distintiva de las CCD es que requieren una muy pequea cantidad de muestra.
El lmite de deteccin puede alcanzar los 10
-9
g y los tamaos de muestra pueden alcanzar los
0,5 mg en las TLC preparativas.
La deteccin de manchas en el cromatograma es fcil para materiales coloreados, y se han
desarrollado un gran nmero de procedimientos para detectar manchas en muestras no
coloreadas. Por ejemplo, se puede irradiar la placa con luz ultravioleta para localizar aquellas
manchas que corresponden a compuestos fluorescentes. Otra alternativa consiste en impregnar
el adsorbente slido con una sustancia fluorescente inerte; en estos casos, las manchas que
absorben luz UV pero no fluorescen, aparecen como manchas negras en un fondo fluorescente
cuando son irradiadas con este tipo de luz.
Otros agentes ampliamente utilizados se vaporizan en forma de spray sobre la placa,
haciendo que las manchas se vuelvan fcilmente evidentes. Ejemplos de agentes de deteccin
utilizados de esta manera son el cido sulfrico, que causa que muchos compuestos orgnicos
se carbonicen, y solucin de permanganato de potasio. El yodo es otro agente de deteccin
ampliamente utilizado. En este caso, la placa se coloca en un recipiente saturado con vapores
Anexos

109

de yodo. El yodo es adsorbido por muchos compuestos orgnicos, y sus manchas se vuelven
coloreadas (generalmente de color marrn).
Bajo una serie de condiciones dadas (adsorbente, solvente, grosor de la capa y
homogeneidad) la movilidad de un compuesto respecto de la movilidad del frente de solvente,
R
f
, es una propiedad del compuesto (Figura 2).

Figura 2: CCD: placa original (izq.); cromatograma desarrollado (der).

BIBLIOGRAFA

1. Roberts, R.M., Gilbert, J.C., Rodewalt, L. B., Wingrove, A.S. Modern Experimental
Organic Chemistry 3 ed; Saunders College: Philadelphia, 1969; pp. 44-49.

Siembra
Capa de adsobente
R
f
= Distancia migrada por la mancha/ Distancia migrada por el solvente
Frente de solvente
Anexos

110

DESECACIN Y AGENTES DESECANTES

INTRODUCCIN
Se conoce como secado, a la eliminacin de pequeas cantidades de agua, u otros
lquidos, presentes en gases, lquidos o slidos, para obtener un producto seco.

IMPORTANCIA DEL SECADO:
Pequeas cantidades de humedad modifican el punto de fusin y/o inhiben la
cristalizacin de algunos slidos. Adems muchos slidos cuando destilan en presencia de
agua, se hidrolizan, reaccionan o se arrastran con ella en la destilacin. Por todas las razones
enunciadas, el secado de los solventes y otras sustancias de laboratorio ha llegado a ser una
prctica corriente.

MTODOS DE DESECACIN
El secado puede realizarse por procedimientos fsicos o qumicos:
Agentes desecantes qumicos: Son aquellas sustancias qumicas que, en contacto con el
agua, forman:
a) un nuevo compuesto (proceso irreversible).
b) un hidrato (proceso reversible).
En ambos casos los agentes desecantes qumicos deben reunir las siguientes
condiciones:
1- No reaccionar con la sustancia a secar.
2- Tener una gran eficacia o poder desecante, o sea eliminar el agua casi
completamente.
3- Tener gran capacidad de desecacin, es decir, eliminar una gran cantidad de
agua por unidad de peso del desecante.
4- Secar rpidamente.
5- Ser fcilmente separable de la sustancia una vez seca.

AGENTES DESECANTES REVERSIBLES
La mayora de los agentes desecantes qumicos actan combinndose con el agua para
formar hidratos en un proceso reversible.

Anexos

111

La capacidad de secado depende de la estequiometra de la reaccin de formacin del
hidrato.
Mientras que la eficacia, depende de la tensin de vapor de equilibrio del sistema a la
temperatura del secado. Cuanto menor tensin de vapor presente el sistema agente
desecante/hidrato, menor cantidad de agua hay en el mismo y de esta manera se ofrece una alta
eficacia desecante.
En general se trata de sales, bases fuertes o cidos fuertes, por ejemplo cloruro de
calcio, sulfato de calcio, sulfato de sodio, sulfato de magnesio, carbonato de potasio, hidrxido
de potasio o de sodio, cido sulfrico, etc.
Ej.: el CaSO
4
granulado forma un hidrato que contiene solamente medio mol de agua
por mol de CaSO
4
.

Observamos que tiene:
a) Capacidad de secado muy pequea, ya que un gramo de agente desecante elimina slo
0,066 gr de agua.
b) Sin embargo, la Pv del sistema CaSO
4
- CaSO
4
.H
2
O es slo de 0,004 mm de Hg a
25C. Esto quiere decir que el agua de cualquier fase lquida orgnica en equilibrio con el
sistema de sulfato clcico, se elimina hasta que su Pv en la fase lquida, es solamente de 0,004
mm de Hg. Por este motivo el CaSO
4
es un agente desecante muy eficaz.
Muchos de los agentes desecantes reversibles forman ms de un hidrato, dependiendo
de la cantidad de agua existente en la sustancia a desecar. Por ejemplo: el MgSO
4
puede formar
hidratos con 1, 2, 4, 5, 6 y 7 molculas de agua por unidad, variando para cada sistema su
presin de vapor en el equilibrio a temperatura constante. Observar que la tensin de vapor en
equilibrio de los distintos sistemas agente desecante/hidrato, aumenta con el nmero de
molculas de agua de hidratacin, desde 1 mm de Hg hasta 11,5 mm de Hg.

Anexos

112

Como se ve, la presin de vapor de equilibrio de los distintos sistemas aumenta con el
grado de hidratacin; si representamos la Pv del sistema en funcin de moles de agua/mol de
MgSO
4
, se obtiene, a temperatura constante, el siguiente grfico:

moles de agua
por mol de
Pv en
mm. de Hg.
0 1 2 3 4 5 6 7
12
10
8
6
4
2
MgSO
4

Si queremos hidratar el MgSO
4
anhidro, y lo hacemos agregando cantidades crecientes
de vapor de agua, vemos que, a 1 mm de Hg, la Pv se mantiene hasta que todo el MgSO
4
se
haya convertido en MgSO
4
.H
2
O. En ese momento, la Pv sube bruscamente hasta 2 mm de Hg,
donde comienza a formar el dihidrato y se mantiene a esa presin de vapor hasta que todo se
haya transformado en dihidrato; y as sucesivamente hasta llegar a 11,5 mm de Hg.
Por esto, con MgSO
4
se pueden lograr secados de distintos grados, segn la cantidad de
agente desecante que se emplee respecto del agua existente.
Por ejemplo, si se aade 1 mol de MgSO
4
por cada mol de agua, se formar el
monohidrato, a una Pv de equilibrio de 1 mm de Hg, por lo tanto la capacidad ser baja, y la
eficacia elevada.
Anexos

113

Si se usara 1 mol de sulfato por cada 7 moles de agua, se formar el heptahidrato, con
una Pv de equilibrio de 11,5 mm de Hg; en ese caso la capacidad ser elevada pero la eficacia
baja.
Entonces, si tenemos un agente desecante que forma varios hidratos, para lograr un
secado ptimo no nos conviene utilizar de una sola vez gran cantidad de agente desecante;
debemos realizar el secado en etapas, separando la porcin de desecante puesta antes de aadir
la siguiente.
De esta manera se elimina la mayor cantidad de agua formando el hidrato mayor
(capacidad) y las trazas finales mediante la formacin del hidrato menor (eficacia).
A veces resulta ventajoso eliminar la mayor cantidad de agua con un desecante de gran
capacidad y barato (como el Na
2
SO
4
), y despus completar el proceso con un agente de gran
eficacia (como el CaSO
4
).
Adems, la Pv de los distintos sistemas que forman hidratos, aumenta rpidamente con
la temperatura. Por esto, los agentes desecantes que actan formando hidratos son ms eficaces
a temperaturas bajas. Frecuentemente la agitacin ayuda a alcanzar ms rpidamente el
equilibrio agente desecante/hidrato, acelerando as la velocidad de secado.
Los lquidos nunca deben ser destilados en presencia del agente desecante que se us
para secarlos, ya que se producira la reversibilidad de la reaccin, desprendindose
nuevamente agua.
Finalmente, los agentes desecantes deben separarse de la sustancia seca luego de haber
ejercido su accin. Esta separacin se realiza por decantacin o filtracin al vaco, nunca por
destilacin por los motivos que se expresaron arriba.

Anexos

118

CROMATOGRAFA DE ADSORCIN EN COLUMNA
La adsorcin es un fenmeno que consiste en el aumento de concentracin de una
sustancia en la superficie de un slido presente en el seno de una solucin, es un fenmeno
fsico que depende de una serie de fuerzas de atraccin tales como las de Van Der Waals,
puentes de hidrgeno u otras interacciones electrostticas. Las separaciones por adsorcin en
columna se basan en la diferencia de velocidad a la que son transportados los componentes de
una mezcla a travs de una fase estacionaria (FE) slida (que es un material adsorbente) por
medio de una fase mvil (FM) lquida.
En la cromatografa de adsorcin en columna, la FE adsorbente se empaqueta dentro de
una columna de vidrio y la mezcla a purificar pasa a travs de ella para que sus componentes
sean adsorbidos. La cantidad de soluto debe ser pequea frente a la cantidad de adsorbente para
que todo el soluto se adsorba en una pequea zona en la parte superior de la columna. Esta
adsorcin de la mezcla en la parte superior de la columna se denomina siembra y constituye
el proceso inicial de la separacin.
La separacin cromatogrfica de dos sustancias, X y O, presentes en una mezcla se
puede entender mejor analizando la Figura N 1. En la Figura 1a se puede observar la muestra
sembrada en la parte superior de la columna. Luego de la siembra, se hace pasar a travs de la
columna solvente puro (FM) y una parte del material adsorbido en la parte superior de la FE se
transfiere al solvente (Figura 1b). Con el primer agregado de FM, una parte de la muestra
adsorbida pasa a la FM y es empujada a lo largo de la columna (Figura 1c). La cantidad
transferida de un componente de la mezcla va a depender de su coeficiente de adsorcin en el
adsorbente y de su solubilidad en la FM. Cuando este solvente que arrastra sustancias
adsorbidas llega a una nueva porcin de adsorbente, se establece un nuevo equilibrio y parte de
las sustancias se vuelven a depositar sobre el slido. Se suceden muchos de estos equilibrios y
el fenmeno de separacin se produce porque las sustancias que tienen mayor afinidad por el
adsorbente pasan una mayor cantidad de tiempo adsorbidas en la FE (se mueven ms
lentamente) que las que tienen menor afinidad por el adsorbente (que son arrastradas
rpidamente). Por lo tanto, el proceso cromatogrfico implica una serie de equilibrios entre la
adsorcin-desorcin producidos en la FE y del arrastre por solubilizacin en la FM, en los
cuales reside su capacidad separativa.
Anexos

119

Figura 1: separacin cromatogrfica de dos sustancias X y O. Se muestran los equilibrios que se
producen entre la fase estacionaria (FE) y la fase mvil (FM) a lo largo de la columna.
a) Siembra.
b) Primer equilibrio entre la FE y la FM de la mezcla X y O.
c) Avance de la FM a travs de la columna.
d) Segundo equilibrio entre la FE y la FM.
e) Avance de la FM.
f) Tercer equilibrio de la muestra entre FE y FM.
g) Nuevo avance de la muestra en la columna.

La Figura 2 representa la distribucin de X y O a lo largo de la columna despus de haberse
producido los equilibrios mostrados en la figura anterior.

Figura 2: distribucin de X y O en cada zona de la columna. Las barras con lneas punteadas
representan la concentracin del compuesto O. Las barras de lneas completas representan la
concentracin del compuesto X.
Anexos

120

En condiciones adecuadas los componentes de una mezcla se distribuyen como
campanas en principio superpuestas y luego separadas, al acercarse al final de la columna
(Figura 3).

Figura 3: distribucin de X y O en cada zona de la columna. Perfiles de concentracin de las
bandas de soluto O y X a dos tiempos diferentes, durante su migracin a lo largo de la columna.

La fase mvil es colectada a la salida de la columna en fracciones de volumen
relativamente pequeo que contienen a los componentes de la mezcla en diferentes
proporciones. En el mejor de los casos, los compuestos O y X se encuentran separados
completamente en diferentes fracciones.
Si los componentes de la mezcla son coloreados, el proceso cromatogrfico es
fcilmente observable (Figura 4), detectndose una serie de bandas coloreadas, lo que ha dado
origen al trmino cromatografa (del griego chromato: color).

Figura 4: proceso de separacin de dos compuestos coloreados.

Anexos

121

Con materiales incoloros los procesos de separacin no pueden ser observados
directamente, en esos casos las diferentes fracciones colectadas de la columna se pueden
analizar por cromatografa en capa delgada (CCD) y emplear alguna forma de revelado (UV,
ninhidrina, I
2
, etc.) que permita detectar a los componentes de la mezcla presentes en cada
fraccin (Figura 5).

Figura 5: proceso de identificacin de compuestos por CCD.

A menudo es difcil predecir cules seran las condiciones ptimas para una separacin
dada, ms an cuando se desconoce la composicin de la mezcla a separar. Para lograr una
separacin eficiente debe elegirse una combinacin adecuada de FE y FM, al respecto existen
algunas reglas generales tiles que a menudo permiten una separacin satisfactoria.

ADSORBENTES QUE PUEDEN SER EMPLEADOS COMO FE
Muchos materiales son tiles como adsorbentes. La interaccin entre los componentes
de la mezcla a separar y el adsorbente no debe ser demasiado fuerte porque esto hara necesario
utilizar cantidades muy grandes de solvente para arrastrar los diferentes compuestos a travs de
la columna. El adsorbente tampoco debe ser demasiado dbil, porque los compuestos
atravesarn la columna muy rpidamente saliendo de la misma sin separarse. Para una mayor
efectividad, el adsorbente debe ser de partcula uniforme y de elevada rea por unidad de
volumen, pero se debe tener en cuenta que cuando el tamao disminuye, se dificulta el pasaje
del solvente a travs de la FE y puede volverse necesario ejercer presin para lograr la
separacin.
Anexos

122

La almina (Al
2
O
3
) es un adsorbente polar fuerte muy activo que viene en tres formas:
neutra, cida y bsica. Las alminas cida y bsica ofrecen buen poder de separacin para
cidos y bases, respectivamente. Para compuestos sensibles a reacciones qumicas bajo
condiciones cidas y bsicas, debe usarse almina neutra. La almina, as como muchos otros
adsorbentes, adsorber una cantidad considerable de agua al estar en contacto con aire hmedo.
El agua es fuertemente adsorbida y su presencia produce un proceso de separacin diferente al
de adsorcin, el reparto entre dos fases lquidas. Si se requiere que el proceso de separacin sea
por adsorcin exclusivamente, es necesario "activar" la almina (y tambin otros adsorbentes)
calentando en estufa y dejando enfriar en un desecador, para evitar que se hidrate nuevamente.
El gel de slice, por su parte, tambin es un adsorbente muy comnmente usado y comparable a
la almina por su poder adsorbente. Es interesante considerar que a veces un adsorbente puede
actuar como catalizador y, en algunas circunstancias, promover cambios qumicos importantes
en la muestra. El gel de slice, por ejemplo tiene una acidez considerable.

EFECTO DE LA ESTRUCTURA DEL SOLUTO SOBRE EL GRADO DE
ABSORCIN.
En general aquellos compuestos que poseen grupos polares y capaces de formar puentes
de hidrgenos son retenidos ms fuertemente por adsorbentes polares. El orden usual de
adsortividad sobre almina, y en general sobre fase normal, es: cidos y bases > alcoholes y
tioles > aldehdos y cetonas > haluros y steres > hidrocarburos no saturados > hidrocarburos
saturados. Algunos otros grupos funcionales se muestran en la Figura 6, en orden decreciente
de afinidad por los adsorbentes.
CONH
2
OH
NHCOCH
3
NH
2
OCOCH
3
COCH
3
N(CH
3
)
2
NO
2
OCH
3
H
Cl
COOH

Figura 6: clasificacin de grupos funcionales de acuerdo a su afinidad por los adsorbentes.

Anexos

123

SOLVENTE DE ELUCIN.
La naturaleza de los solventes usados como fase mvil es muy importante en el diseo
de un experimento cromatogrfico. El poder eluyente de una determinada fase mvil es su
capacidad para empujar a los componentes de una mezcla a lo largo de la columna. En fases
estacionarias normales (slica, almina) el poder eluyente de un solvente se relaciona con su
polaridad. Si el solvente es demasiado polar su poder eluyente ser demasiado alto y los
componentes de la mezcla saldrn juntos de la columna. Para una separacin efectiva, el
solvente debe ser significativamente menos polar que los componentes de la mezcla. Adems
los componentes deben ser solubles en el solvente. De otra forma, permanecern adsorbidos en
la FE.
En un experimento de elucin isocrtico la muestra se coloca en la columna y se usa un
nico solvente, o combinacin de solventes, durante toda la separacin. En el procedimiento
llamado elusin por gradiente se emplean una serie de solventes de poder eluyente creciente
para desarrollar el cromatograma.
Los poderes de elucin de varios solventes estn en el orden dado abajo en la Figura 7.
Aumento del
poder eluyente
Tolueno
Benceno
Diclorometano
Cloroformo
Eter Etlico
Acetato de Etilo
Acetona
1-propanol
Etanol
Metanol
Agua
Hexano
CCl
4

Figura 7: clasificacin de solventes de acuerdo a su poder eluyente.

Una forma de comprobar la capacidad separativa de distintas mezclas de solventes
consiste en emplear CCD para ver el comportamiento de la mezcla en cada uno de los solventes
propuestos. La fase mvil ms apropiada para la separacin encontrada por CCD ser adecuada
para el desarrollo de la columna (Figura 8).

Anexos

124

Figura 8: eleccin del mejor solvente para comenzar una columna por CCD.

Un paso de la cromatografa en columna que es clave y por lo tanto vale la pena resaltar
es el de la siembra de la muestra. Una vez llena la columna con la FE, se pasa FM hasta que la
FE se encuentre embebida en la misma de forma homognea (Figura 9a). Luego se deja
descender el solvente (abriendo el robinete de la columna) hasta que el menisco coincida con la
lnea de la FE (Figura 9b) y se adiciona una solucin concentrada de la mezcla a purificar
(Figura 9c). Hecho esto se abre nuevamente el robinete para permitir el ingreso de la mezcla a
purificar a la columna, y su adsorcin sobre la fase estacionaria (Figura 9d). Es importante en
este punto evitar que el solvente descienda por debajo de la lnea de la FE.

Figura 9: siembra de una solucin en la columna cromatogrfica.

Una vez terminada la siembra, se puede comenzar el proceso separativo por agregado
cuidadoso de FM en la columna.

Anexos

125

ANALIZAR:
1) Cul de los tres solventes empleados en la Figura 8 es el mejor para producir la separacin en
la columna? Por qu?
2) Por qu se evita en todo momento que el solvente descienda por debajo de la lnea de la FE?
3) Por qu la solucin de mezcla a sembrar debe estar lo ms concentrada posible?

BIBLIOGRAFA:

1. D. Abbott; R. Andrews. "Introduccin a la cromatografa", Editorial Alhambra, Mxico, 1966.
2. Royston M. Roberts, John, C. Gilbert, Lynn B. Rodewald, Alan S. Wingrove. "Modern
Experimental Organic Chemistry", 3 Edicin, Saunders College Phiadelphia, 1979.
3. Harold, Gomes, Casidy. "Adsorption and chromatography", Interscience Publishers, New York
(1951).
4. Kenneth B. Wiberg. "Tcnica de laboratorio en Qumica Orgnica", Kapelusz, Buenos Aires
(1962).
5. K. Randerath."Tcnica general de la cromatografa en capa fina", Verlag chemie, Weinheim,
1965.
6. Skoog, West, Holler. Fundamentos de Quimica Analitica, 8va edicin Thomson, 2005.

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