01 Cuantificación

MODULO
CUANTI FI CACI ON EN ANALI SI S I NSTRUMENTAL

RECOPI LADO POR:
J orge Enrique Castillo Ayala
UNI VERSI DAD SANTI AGO DE CALI
ANALI SI S I NSTRUMENTAL
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C
1
C
1
C
2
C
2
A
1
A
2
A
C
SENSI BI LI DAD
La pendiente de la curva es una
medida de la sensibilidad del
instrumento.
Mayor pendiente, mayor
sensibilidad.
A diferentes pendientes, para la
misma seal analtica los cambios
de concentracin son diferentes.
RESPUESTA DEL DETECTOR
concentracin
respuesta
10 %
Alta
Concentracin
L.D 3 x ruido
R.L.
I
0
I
1
I
1
I
0
BAJ AS CONCENTRACI ONES
I
0
I
1 C
A
I
0
I
0
ALTAS CONCENTRACI ONES
I
0
I
1
C
A
C
1
C
2
C
3
A
A
C
Solucin Acuosa
Solucin cida
Solucin Bsica
Resultados por Defecto
Resultado por Exceso
CUANTI FI CACI N
La matriz de
anlisis debe ser
igual tanto para los
estndares como
para las muestras
blanco: corresponde a
una solucin de
calibracin de lectura
cero en el instrumento,
esta debe contener
todo lo que tiene la
muestra menos el
analito.
CURVA DE CALI BRACI N NORMAL
A
C
y = bx + a
Se obtiene a partir del mtodo de
mnimos cuadrados.
r: es la relacin existente entre los
valores de A ledos y los valores de
C indicados este valor se llama
coeficiente de correlacin y su
valor debe ser muy cercano a 1.
La curva de calibracin se hace con
estndares de concentraciones
conocidas, una vez realizada esta,
es posible encontrar la
concentracin de una muestra
desconocida mediante la utilizacin
de la ecuacin de la recta.
b = absortividad
a
EJ EMPLO
Un procedimiento normal para la determinacin de protenas es el ensayo
de sorcin de colorante de Bradford. Segn este mtodo, la protena se
trata con un colorante que, al unirse a ella, cambia su color de pardo a
azul, la intensidad del color azul (medido por la absorbancia de la luz a
una de 595 nm) es proporcional a la cantidad de protena presente.
Protena en g/mL
0.00 9.36 18.72 28.08 37.44
Absorbancia a 595 nm:
0.066 0.276 0.483 0.686 0.880
a. Determinar por mnimos cuadrados la ecuacin de la recta y = bx + a.
b. Trazar un grfico en el que aparezcan los datos experimentales y la
recta calculada.
c. En una muestra problema de protena dio una absorbancia de 0.573.
Calcular la concentracin en g/mL de protena en la muestra.
y = bx + a.
y =0.02177x + 0.0706
a.
Curva de Calibracin de Protena
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
0 10 20 30 40
Concentracin de proteina g/mL
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
b.
c. 23.07 g/mL
r = 0.9998
CURVA DE CALI BRACI N POR ADI CI N DE
ESTNDAR
Se prepara este tipo de curvas cuando hay interferencia de matriz.
Consiste en aadir cantidades conocidas de analito a la solucin problema, cuyo
contenido de analito se quiere determinar.
A partir del aumento de seal se deduce cuanto analito haba en la muestra
problema.
Este mtodo requiere una respuesta lineal frente al analito.
Muestra
Estndar
Solvente
1 2 3 4 5 6
A
C
a
Lectura del problema sin
estndar
Lectura del
problema ms el
estndar adicionado
Concentracin del
analito en el
problema
CURVA DE CALI BRACI N POR ADI CI N DE ESTNDAR
EJ EMPLO
Se quiere cuantificar cido ascrbico presente en jugo de naranja natural
empacado en bolsas.
Para esto se realizaron dos curvas de calibracin , una con estndares y otra
por adicin de estndar; los resultados son los que aparecen en la tabla:
0.573 30.0
0.506 25.0 0.505 30.0
0.442 20.0 0.423 25.0
0.376 15.0 0.350 20.0
0.310 10.0 0.276 15.0
0.245 5.0 0.200 10.0
0.172 0.0 0.130 5.0
A C ppm A C ppm
ESTNDAR
ADICIN DE CALIBRACIN CURVA DE
Curva de Calibracin para cido Ascorbico
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0 5 10 15 20 25 30 35
Concentracin de cido Ascorbico ppm
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
r = 0.99979 y = bx + a
C =8.008 ppm y = 0.01496x +0.0522
r = 0.99987 y = bx + a
C =13.26 ppm y = 0.01326x +0.17589
Curva de Calibracin por Adicin de Estndar para
cido Ascrbico
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
-20 -10 0 10 20 30 40
Concentracin de cido Ascrbico
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
CUANTIFICACI CUANTIFICACI N POR EST N POR EST NDAR INTERNO NDAR INTERNO
Estndar
interno
Estndar
de analito
Solvente
1 2 3 4 5
CURVA DE CALIBRACIN
MUESTRA
Respuesta del
estndar de analito
Respuesta del
estndar interno
El compuesto utilizado como estndar interno debe:
Ser qumicamente diferente del analito
Generar una respuesta que no interfiera con la respuesta del
analito
Se puede adicionar antes de preparar la muestra o antes del
anlisis.
En concentraciones similares debe dar una respuesta similar
Debe tener un porcentaje de recuperacin conocido.
Pequeos cambios en temperatura o flujo no afectan el resultado
El estndar interno no debe estar presente en la muestra.
No es necesario que se analice siempre el mismo volumen de
muestra
[ ] [ ]
,
_
S
A
F
X
A
S X
A
X
es el rea de la seal del analito
es la concentracin del analito
A
S
es la seal del estndar interno
es la concentracin del estndar interno
F es el factor de respuesta.
Donde:
[ ] X
[ ] S
Ejemplo:
En una experiencia preliminar, una solucin que contiene X 0,0837 M y
S 0,0666 M dio como rea de pico A
X
= 423 y A
S
= 347, respectivamente.
Para analizar 10,0 mL de una muestra desconocida se aadieron 10,0 mL de
S 0,146 M, y la mezcla se diluyo a 25,0 mL en un matraz volumtrico. Esta
mezcla dio un cromatograma en el cual A
X
= 553 y A
S
= 582.
Hallar la concentracin de X en las muestra desconocida.
[ ] [ ]
,
_
S
A
F
X
A
S X
SEAL Y RUI DO
RUI DO
SEAL
Toda medida analtica consta de dos componentes. La primera la seal,
lleva la informacin relativa al analito que es de inters para el qumico.
La segunda, denominada ruido, compuesta por informacin ajena que es
indeseada porque deteriora la exactitud y la precisin en un anlisis, y
adems establece un lmite inferior en la cantidad de analito que se puede
detectar.
Por esta razn la relacin seal/ruido (S/R) es un parmetro de calidad
mucho ms til que el ruido solo para describir la calidad de un mtodo
analtico o el funcionamiento de un instrumento.
El ruido se define como la desviacin estndar sde numerosas medidas de
la intensidad de la seal, la cual viene dada por la de las medidas. Por
tanto, S/R viene dada por
En la mayora de las
medidas, el valor
promedio de la seal de
ruido R es constante
independiente de la
magnitud de la seal S.
X
El efecto del ruido en el
error relativo de una medida
aumenta a medida que
disminuye el valor de la
cantidad medida
s
X
estndar desviacin
media
R
S

La relacin seal/ruido es la inversa de la desviacin estndar
relativa RSD del conjunto de medidas, esto es
s
X
RSD R
S 1
Como norma general, es imposible la deteccin de una seal cuando la

relacin seal/ruidoes menor a 3
FUENTES DE RUI DO EN LOS ANLI SI S
Dos tipos de ruidos afectan principalmente a los anlisis; el ruido qumico y el
ruido instrumental.
RUI DO QU MI CO: proviene de multitud de variables incontroladas que
afectan a la qumica del sistema que se analiza.
Algunos ejemplos de estas son:
1. Variaciones no detectadas de temperatura o presin que afectan el
equilibrio qumico.
2. Fluctuaciones en la humedad relativa que cambian el contenido de
humedad de las muestras.
3. Vibraciones que conducen a una estratificacin de los slidos
pulverulentos.
4. Cambios de la intensidad de la luz que afectan materiales fotosensibles.
5. Vapores del laboratorio que interaccionan con la muestra o los reactivos.
FUENTES DE RUI DO EN LOS ANLI SI S
RUI DO I NSTRUMENTAL: este ruido se asocia a cada componente de
un instrumento fuente, transductor de entrada, elementos que procesan
la seal, transductor de salida. Adems el ruido de cada uno de ellos
puede ser de distintos tipos o provenir de distintas fuentes.
Por lo tanto, el ruido que finalmente se percibe es una mezcla compleja que,
por lo general, no se puede caracterizar por completo.
Se pueden reconocer ciertos tipos de ruido
1. Ruido trmico o Johnson.
2. Ruido de disparo
3. Ruido de parpadeo 1/f
4. Ruido ambiental
La seal analtica para cada punto estsujeta a
variacin, esta depende del ruido
S/R =10
S/R =10
S/R =10
S/R =3
LI MI TE DE CUANTI FI CACI N
LI MI TE DE DETECCI N
LI MI TE DE DETECCI N Y DE
CUANTI FI CACI ON
Valor de yreal, encontrado
experimentalmente
Valor de ycalculado sobre la
recta a travs de los mnimos
cuadrados ( ) y
[X]
S
e
a
l

a
n
a
l
t
i
c
a
[X] para cada punto es constante
no est sujeta a variacin
El lmite de deteccin y de cuantificacin se puede obtener a partir de una lnea
de calibracin de bajas concentraciones de la siguiente forma:
Concentracin ng/mL 0 5 10 15 20 25 30
Absorbancia 0.003 0.127 0.251 0.390 0.498 0.625 0.763

Ejemplo:
Se obtuvieron los siguientes resultados cuando se analizaron una serie de
soluciones estndar de plata por espectrofotometra de absorcin atmica de
llama.
Se analiz una muestra a la que se le realiz el siguiente tratamiento; se
sumergi en una solucin de cido ntrico una pelcula de radiografa que
peso 25 g, esta solucin se paso en forma cuantitativa a un baln de 100 mL y
se completo con agua hasta el aforo; de esta solucin se midi una alcuota de
5 mL y se paso a un baln de 100 mL, se completo con agua hasta el aforo;
esta solucin se midi en el espectrofotmetro dando una lectura de
absorbancia de 0.452.
Encuentre los gramos de plata en la pelcula y determine el lmite de deteccin
y el lmite de cuantificacin del mtodo y del instrumento.
y = 0,0252x + 0,0021
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,9
0 5 10 15 20 25 30 35
Concentracin ng/mL
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
Concentracin (X) Absorbancia (y)
( ) y
y y
( )
2
y y
0 0.003 0.002 0.00089 7.97E-07
5 0.127 0.128 0.00093 8.62E-07
10 0.251 0.254 0.00275 7.56E-06
15 0.390 0.380 0.01043 0.000108
20 0.498 0.505 0.00739 5.47E-05
25 0.625 0.631 0.00621 3.86E-05
30 0.763 0.757 0.00596 3.56E-05

( )
4
2
10 47 . 2

i
i i
y y
( )
3
2
1
2
10 03 . 7
2
'
n
y y
s
i
i i
x
y
Para el calculo del lmite de deteccin
y = 3s
y/x
+ y
B
y = 3 x 7.03 x 10
-3
+ 0.0021 = 0.0232
Concentracin del LD = (y - 0.0021)/0.0252 = 0.836 ng/mL
Para el calculo del lmite de deteccin
y = 10s
y/x
+ y
B
y = 10 x 7.03 x 10
-3
+ 0.0021 = 0.0724
Concentracin del LD = (y - 0.0021)/0.0252 = 2.788 ng/mL

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