AllSet+ Gold SSP

Instrucciones de uso

AllSet+ Gold SSP

Instrucciones de uso Para uso diagnstico in vitro

Casi todas las tecnologas de tipificacin de tejidos basadas en ADN utilizan la tcnica PCR1 para amplificar el locus HLA bajo investigacin. El mtodo SSP es una tcnica basada en PCR que utiliza cebadores especficos de secuencia (Sequence Specific Primers, SSP) para la tipificacin de tejidos basada en ADN. La asignacin de los alelos se realiza casi exclusivamente determinando si la amplificacin se ha producido o no, es decir, mediante la visualizacin y la deteccin de la amplificacin por medio de electroforesis en gel de agarosa. En la tcnica PCR-SSP, cada par de cebadores identifica dos loci polimrficos cis y enlazados. El uso previsto de este producto es la tipificacin de ADN de alelos de HLA clase I o clase II. RESOLUCIN DEL TIPIFICACIN

Equipos de resolucin baja: Los alelos se resolvern al nivel genrico, o al nivel de grupo allico, que coincidir en general con las especificaciones definidas serolgicamente. Equipos de alta resolucin: Proporcionan alta resolucin o genotipificacin a nivel allico.
Contenido del manual: Seccin 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. Componentes del equipo Materiales, reactivos y equipo no suministrado Requisitos de la muestra Perfil de amplificacin del termociclador Preparacin de la muestra: Procedimiento Resolucin de problemas Limitaciones y precauciones Descripcin Pgina 2 2 3 4 5 9 12

1 Para uso diagnstico in vitro

Componentes del equipo:

Artculo 1.1 Bandejas de prueba de 96 pocillos

Descripcin Cada pocillo en el tubo de PCR contiene una solucin de cebador SSP seca que consiste en cebadores de alelos y/o de grupos especficos as como un par de cebadores de control que se corresponden con secuencias no allicas. El par de cebadores de control amplifica un fragmento de un gen conservado que est presente en todas las muestras. Tampn de PCR con dNTP y tampn de carga del gel.

Cantidad 10

Almacenamiento 2 8 C

1.2

Alcuotas de tampn de PCR optimizado Hojas de sellado del PCR CD ROM

10

2 8 C

1.3

Hojas de plstico autoadhesivas para bandejas de prueba de sellado Instrucciones de uso Traduccin de las instrucciones de uso Certificado de anlisis Documento de interpretacin especfica del lote

11

------------

1.4

------------

Materiales, reactivos y equipo no suministrado: 2.1 Taq ADN polimerasa, 5 unidades/l: 2.1.1 Las siguientes enzimas estn validadas para su uso con los productos AllSet Gold: Taq ADN polimerasa recombinante de Invitrogen; Roche Molecular Systems, Taq ADN polimerasa; Perkin Elmer, ampli-Taq ADN polimerasa; Fisher, Taq ADN polimerasa; Advanced Biotechnologies Ltd., Taq ADN polimerasa. Para poder usar otras ADN polimerasas, estas debern ser validadas por el usuario. 2.2 Pipetas y puntas de pipetas de filtro desechables: 1-10 l 10-200 l 100-1000 l

2.3

Pipetas electrnicas: Capacidad de 100-250 l, capaces de dispensar alcuotas de 8 l

2.4

Termociclador de 96 pocillos con tapa trmica:

2 Para uso diagnstico in vitro

Por ejemplo, MJ Research, PTC-100 Peltier, PTC-200 DNA Engine, PTC-225 DNA Engine Tetrad; Perkin Elmer, Gene Amp 9600; Perkin Elmer, Gene Amp 9700; y el LabLine, Thermal Block II modelo 212.

Nota: Los equipos han sido probados con los termocicladores especificados anteriormente. El uso de otros equipos necesitar de la validacin por parte del usuario o de los parmetros de termociclo.

2.5 2.6

Tampn de electroforesis TBE (con una concentracin de 0,5X) Marcadores del peso molecular de ADN para cubrir un rango de 502.000 pb 2.6.1 Marcadores PCR de Invitrogen, cdigo de producto 74601250 (recomendado)

2.7 2.8

Agarosa para ADN de Invitrogen, cdigo de producto 75000500 (recomendado) Bromuro de etidio (10 mg/ml)

Aviso: El bromuro de etidio es mutgeno. Manipular con el equipo de proteccin personal adecuado.
2.9 Fuente de alimentacin para la electroforesis

2.10 Sistemas de electroforesis recomendados: 2.10.1 Sistema de electroforesis Electro-Fast: 96 lneas para muestras ms lneas de carga de marcadores por separado. Este producto se puede comprar a travs de Invitrogen Cdigo de producto 920001. 2.10.2 Sistema minigel extra ancho de Owl Centipede, modelo: D3-14 con 4 peines y 25 dientes de microdosis, con un grosor de 1,5 mm. Este producto se puede comprar a travs de Invitrogen Cdigo de producto 800001. 2.11 Sistema de documentacin del gel recomendado: 2.11.1 Transiluminador UV 2.11.2 Cmara polaroid con visera y filtro para documentacin del gel 2.11.3 Pelcula polaroid tipo 667 3 Requisitos de la muestra: 3.1 El ADN se puede extraer de clulas humanas con ncleo mediante el mtodo que se prefiera. La concentracin final del ADN antes del PCR-SSP debe ser de aproximadamente 50 ng/l.

3 Para uso diagnstico in vitro

3.2

El ADN aislado de muestras de sangre debe recogerse en tubos anticoagulantes de EDTA o ACD. NO UTILICE MUESTRAS HEPARINIZADAS. La heparina puede inhibir la amplificacin del ADN. La buena calidad del ADN es esencial para conseguir un resultado ptimo con el sistema AllSet Gold SSP. Un ADN de buena calidad significa: 3.3.1 El OD260/280 est entre 1,7 y 1,9 en muestra diluida medida con espectometra UV. 3.3.2 Al comprobarse con electroforesis en gel de agarosa, la mayor parte del ADN avanza ms lentamente que la franja de 9,4 kb del marcador de Lambda ADN digerido con Hind III.

3.3

Nota: El aislamiento del ADN se puede realizar a travs de cualquier protocolo cualificado que produzca ADN de gran pureza y de buena calidad, El equipo de aislamiento de Invitrogen (Cdigo de producto 761001) y el sistema QIAamp estn validados para su uso.
3.4 El ADN extrado no debe diluirse en dH20

Termociclador: AllSet Gold Perfil de amplificacin: 4.1 4.2 Es importante obtener tiempo de acceso rpido (~1 por segundo) y un control preciso de la temperatura para obtener unos resultados ptimos. Programe el termociclador usando los siguientes parmetros. Temperatura (C) 96 96 70 72 96 65 72 96 55 72 4 Tiempo (seg.) 60 25 50 45 25 50 45 25 60 120 especifique el tiempo Accin Desnaturalizacin Desnaturalizacin Hibridacin Extensin Desnaturalizacin Hibridacin Extensin Desnaturalizacin Hibridacin Extensin

Pasos Paso de desnaturalizacin A 5 ciclos 21 ciclos 4 ciclos

Mantenga

Para informacin especfica sobre el termociclador, consulte el manual del fabricante.

4 Para uso diagnstico in vitro

Preparacin de la muestra

NOTA: Este procedimiento debe realizarse en dos zonas distintas del laboratorio (amplificacin previa al PCR y amplificacin tras el PCR) tal y como se indica en las instrucciones que vienen a continuacin.

5.1 5.2

Preparacin previa a la amplificacin (realizada en la zona pre-PCR) Mezcla de PCR 5.2.1 Depende del nmero de reacciones PCR por prueba 5.2.2 Consulte la tabla para conocer los volmenes necesarios Tabla de clculo de mezclas de PCR:

10l pocillo/prueba 96 48 32 24 16 8

Tampn de PCR (l) 460 230 153 115 80 66

Agua (l) 608 304 203 152 105,8 87

ADN (50 ng/l) 125 62,5 42 31,3 21,7 18

Taq (l) 7 3,5 2,3 1,8 1,2 1

5 Para uso diagnstico in vitro

5.3

Distribucin de la bandeja 5.3.1 La orientacin correcta de la bandeja se identifica mediante la etiqueta de la bandeja y el pocillo de contaminacin azul en el ltimo pocillo de la prueba.

8 7 6 5 4 3 2 1

16 15 14 13 12 11 10 9

24 23 22 21 20 19 18 17

32 31 30 29 28 27 26 25

40 39 38 37 36 35 34 33

48 47 46 45 44 43 42 41

56 55 54 53 52 51 50 49

64 63 62 61 60 59 58 57

72 71 70 69 68 67 66 65

80 79 78 77 76 75 74 73

88 87 86 85 84 83 82 81

96 95 94 93 92 91 90 89

Etiqueta de la bandeja AllSet+ Gold SSP

5.4 5.5 5.6 5.7 5.8 5.9

Retire la bandeja del fondo de la estantera. Devuelva las bandejas restantes a la bolsa y vuelva a sellar. Aada agua y Taq polimerasa (5U/l) al tampn de PCR prealicuotado. Mzclelo bien. Aada 10 l de mezcla maestra al tubo de control de contaminacin que tiene el tinte azul. Aada ADN de muestra (50 ng/l) a la mezcla maestra restante. Mzclelo bien.

5.10 Dispense 10 l de la mezcla de PCR en los pocillos restantes de la bandeja AllSet+ Gold SSP. 5.11 Asegrese de que todo el lquido est en el fondo de la bandeja. Cubra la bandeja con un sello o tapones y cirrelos bien. 5.12 Ya tiene las muestras preparadas para la amplificacin por PCR. Guarde los reactivos del equipo que le sobren a una temperatura de 2-8 C 5.13 Preparacin de la amplificacin por PCR (realizada en la zona post-PCR) 5.14 Coloque la muestra en el termociclador y proceda conforme a los parmetros programados. 6 Para uso diagnstico in vitro

5.15 Inicie el programa. 5.16 Una vez que el programa haya finalizado, retire las muestras del termociclador. 5.17 No lleve el ADN amplificado a la zona de amplificacin pre-PCR. 5.18 Deteccin por PCR mediante electroforesis en gel de agarosa. 5.19 Prepare un gel de agarosa al 2% (p/v) (Invitrogen, cdigo de producto 75000500) en un tampn TBE de 0,5x. 5.19.1 Disuelva la agarosa (2 g/100 ml, tampn TBE de 0,5x) hirvindola en un horno microondas hasta su total disolucin. Enfre a 60 C. Aada bromuro de etidio a una concentracin final de gel de 0,5 g/ml. Cree un molde de gel con un grosor de 3-4 mm con pocillos de 3 mm de anchura. Deje que polimerice durante al menos 30 minutos.

5.19.2

5.20 Coloque el gel de agarosa en una unidad de electroforesis en gel submarina. El gel debe quedar cubierto 1-2 mm por el tampn TBE 0,5x desde la superficie del gel. 5.20.1 5.20.2 Retire el peine con cuidado. Cargue todo el producto PCR en secuencia directamente y con cuidado sobre el gel. Corra el gel con el tampn TBE 0,5x. 5.21.1 Corra los minigeles (un gel de menos de 10 cm entre los electrodos) durante 10 minutos a 15 voltios/cm y los geles ms grandes durante 20-24 minutos a 10 voltios/cm. Para calcular el voltaje, mida la distancia (en centmetros) entre los ELECTRODOS en el bao de electroforesis (la longitud del gel NO ES IMPORTANTE).

5.21

5.21.2

5.22 Examine el gel durante la iluminacin ultravioleta y documntelo mediante fotografas. 5.22.1 Se puede utilizar el mismo tampn TBE 0,5x varias veces, pero se pueden obtener mejores rendimientos utilizando tampn fresco. ADVERTENCIA: El bromuro de etidio es un mutgeno fuerte. Lleve guantes de nitrilo y proteccin ocular al manipular geles y soluciones que contengan bromuro de etidio.

7 Para uso diagnstico in vitro

5.23 Interpretacin de los resultados: Examine la fotografa del gel con detenimiento y determine las lneas positivas. 5.23.1 Cada lnea del gel que contenga una muestra cargada debe ofrecer una banda de control exceptuando la lnea que contenga el pocillo de control de contaminacin. Vase la hoja de documentacin del gel para consultar los detalles sobre los tamaos de control internos. La banda de control puede o no amplificarse eficientemente cuando haya un producto especfico presente debido a la competencia por el sustrato. Los cebadores de control tienen una concentracin ms baja para favorecer la reaccin especfica del alelo. Es posible que en algunas lneas aparezcan bandas dbiles por encima del control interno (excepto el control interno de los 200 pares de base). Esto no tiene importancia; simplemente indican una fuerte amplificacin. La ausencia de bandas de control sin amplificacin especfica es indicador de que algunas reacciones fallaron. Si se pueden determinar los alelos en presencia de una falta de reaccin del PCR y dicha falta de reaccin no cambia la asignacin del alelo, no se tendr que repetir la prueba. Sin embargo, si hay un resultado que indica un homocigoto aparente, o la falta de reaccin pudiese cambiar la asignacin del alelo, se deber repetir la tipificacin. Si aparecen bandas dbiles del tamao del producto incorrecto, no las tenga en cuenta si la concentracin global y la claridad de la amplificacin son buenas. Los cebadores no utilizados formarn una banda difusa debajo de los 50 pares de bases. El dmero de cebadores puede aparecer por encima de la banda de cebadores, pero por debajo de la zona donde se encuentra el producto especfico; aparece como una banda difusa por debajo de los 80 pares de bases. Vase la hoja de trabajo con informacin detallada sobre los alelos. Las reacciones que sean falsos negativos pueden estar causadas por una amplificacin poco eficiente, la escasa calidad del ADN, la colocacin no homognea de los tubos en el bloque, las variaciones de temperatura a travs de los pocillos del termociclador en s o la calibracin inadecuada del termociclador. Los falsos negativos ocurren muy raramente cuando aparece la banda de control. Es posible que los falsos negativos se deban a un nuevo alelo o a un alelo que todava no haya sido caracterizado.

5.23.2

5.23.3

5.23.4

5.23.5

5.23.6 5.23.7

5.23.8 5.23.9

8 Para uso diagnstico in vitro

5.23.10

El pocillo de control de contaminacin contiene pares de cebadores que amplifican el ADN producido tanto por amplificaciones por PCR como por ADN genmico. Si la mezcla de tampn/Taq polimerasa se aadi directamente, cualquier banda en esa lnea es una prueba de contaminacin y los resultados de la prueba no sern vlidos. Es posible que aparezca una banda de dmero de cebadores de <80 pares de bases. Esto no invalidar la prueba. Los dmeros de cebadores aparecen de manera ocasional.

5.24 Confirme el tamao de producto aproximado usando la hoja de trabajo. 5.25 Marque los resultados positivos y negativos para cada muestra en la(s) hoja(s) de trabajo. 6 Resolucin de problemas:

PROBLEMA

RAZN No hay suficiente cantidad de ADN El ADN contiene inhibidores del PCR (por ejemplo, protenas o etanol de los pasos de precipitacin). El ADN ha sido extrado de sangre heparinizada El ADN est disuelto en un tampn que contiene EDTA (por ejemplo, TE) Los tubos de PCR que no estn bien cerrados pueden tener prdidas por evaporacin y causar una falta de amplificacin

ACCIN Compruebe que el volumen y la concentracin de ADN aadidos son correctos. Mida la pureza del ADN. Intente un mtodo de extraccin de ADN alternativo. Utilice sangre no heparinizada. Repita la extraccin del ADN y disulvalo en agua esterilizada. Asegrese de que las hojas o tapones de sellado del PCR estn colocados correctamente: utilice una herramienta especfica para el cierre de tapones. Compruebe la tapa trmica del termociclador. Compruebe que se ha cargado el nmero correcto de pocillos y que cada pocillo contiene aproximadamente el mismo volumen de mezcla PCR. Por norma, calibre todas las pipetas segn las recomendaciones del proveedor. Realice el pipeteado con ms cuidado. Mezcle brevemente con un agitador antes de usar.

No hay amplificacin (ni amplificacin de los fragmentos de controles internos ni amplificacin especfica)

Falta de amplificacin errtica

Errores en la carga del gel

Uso de pipetas no calibradas Errores de pipeteado No se han mezclado correctamente antes de su uso 9 Para uso diagnstico in vitro

la muestra de ADN, la Taq polimerasa o las mezclas previas del PCR ADN impuro Poca cantidad de ADN Temperatura de hibridacin demasiado alta La calidad de la Taq polimerasa es baja Amplificacin no especfica (carreras o manchas) ADN impuro Mida la calidad del ADN. Si fuese necesario, repita la extraccin del ADN con soluciones recin preparadas. Mida la concentracin de ADN y Compruebe que los parmetros del PCR han sido programados correctamente. Los termocicladores deben calibrarse profesionalmente al menos una vez cada 12 meses. Utilice una ADN polimerasa validada. Mida la calidad del ADN. Si fuese necesario, repita la extraccin del ADN con soluciones recin preparadas. Prepare una nueva solucin de bromuro de etidio para conseguir mejores tinciones del gel. Compruebe el equipamiento de luz ultravioleta. Siga las instrucciones de almacenamiento que vienen en el empaquetado del producto. Compruebe que los parmetros del PCR han sido programados correctamente. Los termocicladores deben calibrarse profesionalmente al menos una vez cada 12 meses. Compruebe el volumen y la concentracin del ADN utilizado. Mida la calidad del ADN. Si fuese necesario, repita la extraccin del ADN con soluciones recin preparadas. Compruebe el volumen con detenimiento Utilice una ADN polimerasa validada.

Fragmentos de control interno dbiles

Seales de amplificacin cada vez ms dbiles a lo largo del tiempo

La solucin de tincin del gel de agarosa con bromuro de etidio es vieja Una de las lmparas ultravioletas est rota Almacenamiento incorrecto del equipo

Temperatura de hibridacin demasiado alta

Amplificaciones de falsos negativos

Poca cantidad de ADN

ADN impuro La cantidad de Taq ADN polimerasa utilizada es demasiado escasa La calidad de la Taq polimerasa es baja Amplificaciones de falsos positivos Pueden estar provocadas por la contaminacin

10 Para uso diagnstico in vitro

Utilice guantes, puntas de pipetas que tengan tapones de filtro, use zonas separadas para la fase previa al PCR y tras el PCR (pre-PCR y post-PCR). Haga

ADN impuro

Temperatura de hibridacin demasiado baja.

Se ha utilizado una tabla de interpretacin incorrecta

Patrones de amplificacin extraos

El patrn de amplificacin contiene un falso positivo

Nuevo alelo que no viene reflejado en la tabla de interpretacin

Bandas sin distincin, difusas

Es posible que el tampn de la electroforesis est caliente El peine utilizado tiene las ranuras demasiado gruesas Distinta fuerza del tampn de la electroforesis al del tampn del gel utilizado Tampn de electroforesis con concentracin errnea Burbujas de aire en la pipeta

una manipulacin cuidadosa y exacta en todos los pasos. Compruebe la amplificacin en la mezcla de control de contaminacin. Mida la calidad del ADN. Si fuese necesario, repita la extraccin del ADN con soluciones recin preparadas. Compruebe que los parmetros del PCR han sido programados correctamente y los termocicladores han sido calibrados profesionalmente al menos una vez cada 12 meses. Compruebe que el nmero de lote del producto utilizado es el mismo que el nmero de lote en los documentos de interpretacin. Compruebe que todas las amplificaciones tienen el tamao correcto. Se puede haber malinterpretado un objeto (remanente, dmero de cebadores) como una amplificacin especfica. Repita la tipificacin, si es reproducible. Pngase en contacto con Invitrogen para obtener informacin sobre patrones de amplificacin de alelos descritos recientemente. Utilice el tampn TBE recomendado. Realice la electroforesis con un voltaje ms bajo. Utilice peines ms finos. Utilice el mismo tampn para el gel que para el tampn de la electroforesis. Se recomienda el TBE 0,5x. Pipetear adecuadamente. Se recomienda TBE 0,5x. Pipetear con cuidado.

El amplicn no se carga adecuadamente

11 Para uso diagnstico in vitro

Limitaciones y precauciones: 7.1 Antes de ejecutar el mtodo AllSet+ Gold SSP en su laboratorio, realice el control de calidad de los mtodos basados en la amplificacin usando muestras tipificadas conocidas molecularmente. Dichas muestras se pueden obtener de los paneles de referencia International Workshop Reference Cell Panel y UCLA DNA Reference Panel. Asegrese de consultar la Tabla de especificidad de mezclas de cebadores y la Lista de ambigedades para ms informacin sobre cobertura. Se han realizado todos los esfuerzos posibles para validar las mezclas de cebadores utilizadas en este equipo con muestras de ADN tipificadas molecularmente o muestras tipificadas serolgicamente bien caracterizadas. Debido a la falta de acceso a material de referencia tipificado molecularmente, puede que algunos pocillos no hayan sido validados utilizando ADN de control positivo. Consulte el certificado de anlisis para obtener informacin detallada. El tipificado de HLA utilizando AllSet+ Gold SSP debe realizarse en presencia de de un director, supervisor tcnico o supervisor general cualificado en funcin de las normas de acreditacin aceptados por el laboratorio. Volvemos a hacer hincapi en que estos productos estn destinados a un uso exclusivamente profesional. Se llev a cabo una comparacin de las metodologas de tipificacin AllSet+ Gold SSP e Invitrogen Corporation SSP UniTube SSP para evaluar la exactitud de los equipos de tipificacin AllSet+ Gold SSP. En la comparacin, se recogieron diecisiete muestras al azar y se analizaron para su tipificacin de alelos HLA usando varios equipos de tipificacin AllSet+ Gold SSP y SSP UniTube de clase I y II. Los resultados muestran una concordancia positiva del 100% (17/17) entre los dos mtodos. Con cada lote del equipo, se incluye un certificado de anlisis, donde se describen las caractersticas de rendimiento de cada lote fabricado. Si necesita informacin adicional, pngase en contacto con el Servicio de Asistencia Tcnica llamando al +1800-558-4511 (EE. UU.), +44 151 346 1234 (Europa) Todos los resultados de tipificacin deben confirmarse utilizando otro mtodo de tipificacin.

7.2

7.3

7.4

7.5

7.6

12 Para uso diagnstico in vitro

Referencias: 8.1 Saiki RK, Scharf S, Faloona F, Mullis KB, Horn GT, Erlich HA, Arnheim N. Enzymatic amplification of beta-globin genomic sequences and restriction site analysis for diagnosis of sickle cell anemia. Science. 1985 Dec 20;230(4732):1350-4. Wu, D. Y., Ugozzoli, L., Pal, B. K. & Wallace, R. B. (1989). Allele-specific enzymatic amplification of beta-globin genomic DNA for diagnosis of sickle cell anemia. Proc Natl Acad Sci U S A 86(8), 2757-60. Newton, C. R., Graham, A., Heptinstall, L. E., Powell, S. J., Summers, C., Kalsheker, N., Smith, J. C. & Markham, A. F. (1989). Analysis of any point mutation in DNA. The amplification refractory mutation system (ARMS). Nucleic Acids Res 17(7), 2503-16. Olerup, O. & Zetterquist, H. 1992 HLA-DR typing by PCR amplification with sequence-specific primers (PCR-SSP) in 2 hours: an alternative to serological DR typing in clinical practice including donor-recipient matching in cadaveric transplantation [see comments]. Tissue Antigens 39(5), 225-35. Bunce, M., O'Neill, C. M., Barnardo, M. C. N. M., Krausa, P., Browning, M. J., Morris, P. J. & Welsh, K. I. 1995b Phototyping: Comprehensive DNA typing for HLA-A, B, C, DRB1, DRB3, DRB4, DRB5 & DQB1 by PCR with 144 primer mixes utilising sequence-specific primers (PCR-SSP). Tissue Antigens 46(5), 355-367. Richmond, Y. and McKinney, W. (eds.) 1993. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories. Nmero de publicacin HHS (CDC) 93-8395. National committee for Clinical Laboratory Standards. Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids and Tissue. Tentative Guideline. NCCLS Document M29-T Villanova, PA:NCCLS, 1989. National committee for Clinical Laboratory Standards. Protection of Laboratory Workers from Infectious Disease Transmitted by Blood, Body Fluids and Tissue. Tentative Guideline. NCCLS Document M29-T Villanova, PA:NCCLS, 1989. Satsangi J, Jewell DP, Welsh K, Bunce M, Bell JI.Effect of heparin on polymerase chain reaction. Lancet. 1994 Dec 11;343(8911):1509-10.

8.2

8.3

8.4

8.5

8.6 8.7

8.8

8.9

MAN0002569 Revisin 04 Impreso el 5/10

13 Para uso diagnstico in vitro

Representante en Europa:
Invitrogen Ltd. Regulatory Affairs Manager 3 Fountain Drive Inchinnan Business Park Paisley PA4 9RF Great Britain Tel: 44 (0)141 814

Invitrogen Corporation 9099 North Deerbrook Trail Brown Deer, Wisconsin 53223, EE. UU. Tel.: (800) 955-6288 Fax: (800) 331-2286 www.invitrogen.com

Productos autodeclarados (Marca CE) 54050D Equipo AllSet+ Gold SSP de alta resolucin DQB1-para tipificacin de tejidos de HLA 54060D Equipo AllSet+ Gold SSP de alta resolucin DQA1- para tipificacin de tejidos de HLA 54070D Equipo AllSet+ Gold SSP de alta resolucin DPB1- para tipificacin de tejidos de HLA 54090D Equipo AllSet+ Gold SSP de alta resolucin DPA1- para tipificacin de tejidos de HLA 54330D Equipo AllSet+ Gold SSP Locus C- para tipificacin de tejidos de HLA 54390D Equipo AllSet+ Gold SSP de baja resolucin DQ- para tipificacin de tejidos de HLA 542130D Equipo AllSet+ Gold SSP DQB1*02/04- para tipificacin de tejidos de HLA 542140D Equipo AllSet+ Gold SSP DQB1*03- para tipificacin de tejidos de HLA 542150D Equipo AllSet+ Gold SSP DQB1*05- para tipificacin de tejidos de HLA

14 Para uso diagnstico in vitro

Para obtener los datos de contacto especficos de cada pas, visite nuestro sitio web en www.invitrogen.com

Invitrogen Corporation 9099 N. Deerbrook Trail Brown Deer, Wisconsin 53223, EE. UU. Tel.: 1-800-955-6288 Fax 1-800-331-2286 Correo electrnico: catalog@invitrogen.com