DUPLICACION DE ADN El proceso de replicacin de ADN es el mecanismo que permite al ADN duplicarse (es decir, sintetizar una copia

idntica). De esta manera de una molcula de ADN nica, se obtienen dos o ms "clones" de la primera. Esta duplicacin del material gentico se produce de acuerdo con un mecanismo semiconservativo, lo que indica que las dos cadenas complementarias del ADN original, al separarse, sirven de molde cada una para la sntesis de una nueva cadena complementaria, de forma que cada nueva doble hlice contiene una de las cadenas del ADN original. Gracias a la complementacin entre las bases que forman la secuencia de cada una de las cadenas, el ADN tiene la importante propiedad de reproducirse idnticamente, lo que permite que la informacin gentica se transmita de una clula madre a las clulas hijas y es la base de la herencia del material gentico. La molcula de ADN se abre como una cremallera por ruptura de los puentes de hidrgeno entre las bases complementarias liberndose dos hebras y la ADN polimerasa III sintetiza la mitad complementaria aadiendo nucletidos que se encuentran dispersos en el ncleo. De esta forma, cada nueva molcula es idntica a la molcula de ADN inicial.

La replicacin empieza en puntos determinados: los orgenes de replicacin. Las protenas iniciadoras reconocen secuencias de nucletidos especficas en esos puntos y facilitan la fijacin de otras protenas que permitirn la separacin de las dos hebras de ADN formndose una horquilla de replicacin. Un gran nmero de enzimas y protenas intervienen en el mecanismo molecular de la replicacin, formando el llamado complejo de replicacin o replisoma. Estas protenas y enzimas son homlogas en eucariotas y arqueas, pero difieren en bacterias. En cada una de las molculas madres se conserva una de las cadenas originales, y por eso se dice que la replicacin del ADN es semi- conservadora. Hasta que finalmente se pudo demostrar que la replicacin es semiconservadora, se consideraron tres posibles modelos para el mecanismo de la replicacin:

Semiconservadora (modelo correcto). En cada una de las molculas hijas se conserva una de las cadenas originales. Conservadora. Se sintetiza una molcula totalmente nueva, copia de la original. Dispersora, o dispersante. Las cadenas hijas constan de fragmentos de la cadena antigua y fragmentos de la nueva.

La cantidad de ADN que se puede sintetizar a partir de un nico origen de replicacin se denomina replicn o unidad funcional de replicacin. El genoma bacteriano es un replicn nico circular. En organismos eucariticos, la replicacin del ADN se inicia en mltiples orgenes a la vez (hay uno cada 20 kb aproximadamente), es decir, hay varios replicones.

Debido a que en la clula ambas cadenas de la doble hlice de ADN se duplican al mismo tiempo, stas deben separarse para que cada una de ellas sirva de molde para la sntesis de una nueva cadena. Por eso, la replicacin avanza con una estructura en forma de horquilla formndose una burbuja de replicacin (tambin llamada estructura cuando el ADN es circular debido a la similitud entre la letra griega y la forma que adopta el cromosoma bacteriano en estados intermedios de replicacin). El movimiento de la horquilla es bidireccional.

La replicacin siempre se produce en sentido 5' 3', siendo el extremo 3'-OH libre el punto a partir del cual se produce la elongacin del ADN. Esto plantea un problema, y es que las cadenas tienen que crecer simultneamente a pesar de que son antiparalelas. Por ello, una de las cadenas debera ser sintetizada en direccin 3' 5'. Este problema queda resuelto porque una de las cadenas de ADN se sintetiza en forma discontinua, formado por grupos de entre 100 y 400 nucleotidos formando los restos de Okazaki. La cadena que se sintetiza en el mismo sentido que avanza la horquilla de replicacin se denomina hebra adelantada, y se sintetiza de forma continua por la ADN polimerasa, mientras que la que se sintetiza en sentido contrario al avance se denomina hebra rezagada o retrasada cuya sntesis se realiza de forma discontinua. La ADN polimerasa es

la enzima que cataliza la sntesis de la nueva cadena de ADN A pesar de que la ADN polimerasa slo tiene un sitio activo para emparejar los cuatro dNTP diferentes, la unin correcta de los pares de bases A:T, C:G es posible basndose en la geometra de stos. (una purina siempre se empareja con una pirimidina) El crecimiento de la cadena se produce en direccin 5' 3', ya que se requiere de un grupo 3'-OH libre para el inicio de la sntesis puesto que ste es el que realiza el ataque nucleoflico sobre el fosfato del dNTP (liberando un grupo PPi o pirofosfato y generando el enlace fosfodiester entre las pentosas del esqueleto de ADN), de forma que las ADN polimerasas requieren de un iniciador 3'-OH llamado cebador que es sintetizado por la ARN primasa. Las ADN polimerasas tambin realizan otras funciones durante el proceso de replicacin. Adems de participar en la elongacin, desempean una funcin correctora y reparadora gracias a su actividad exonucleasa 3', que les confiere la capacidad de degradar el ADN partiendo de un extremo de ste. Es importante que existan estos mecanismos de correccin ya que de lo contrario los errores producidos durante la copia del ADN daran lugar a mutaciones.

La helicasa rompe los puentes de hidrgeno de la doble hlice permitiendo el avance de la horquilla de replicacin. La topoisomerasa impide que el ADN se enrede debido al superenrollamiento producido por la separacin de la doble hlice. Las protenas SSB se unen a la hebra discontnua de ADN, impidiendo que sta se una consigo misma. La ADN polimerasa sintetiza la cadena complementaria de forma continua en la hebra adelantada y de forma discontnua en la hebra rezagada. La ARN primasa sintetiza el cebador de ARN La ADN ligasa une los fragmentos de Okazaki.

El proceso se puede dividir en 3 fases: iniciacin, elongacin y terminacin. Los cebadores los quita la pol. I y coloca bases a la cadena en crecimiento por la ligasa.

PROCESO DE REPLICACION:

Se da con consumo de ATP, la helicasa acta rompiendo los puentes de hidrgeno que mantienen unida la doble hlice. Las denominadas protenas SSB , (protenas ligantes de ADN monocatenario) se encargan de la estabilizacin del ADN monocatenario generado por la accin de las helicasas, impidiendo as que el ADN se renaturalice o forme de nuevo la doble hlice, de manera que pueda servir de molde. Por otro lado, conforme las helicasas van avanzando se van generando superenrollamientos en la doble cadena de ADN por delante de la horquilla y si stos no fueran eliminados, llegado a un punto el replisoma ya no podra seguir avanzando. Las topoisomerasas son las enzimas encargadas de eliminar los superenrollamientos cortando una o las dos cadenas de ADN y pasndolas a travs de la rotura realizada, sellando a continuacin la brecha. En el siguiente paso, la ADN Pol III cataliza la sntesis de las nuevas cadenas aadiendo nucletidos sobre el molde. Esta sntesis se da bidireccionalmente desde cada origen, con dos horquillas de replicacin que avanzan en sentido opuesto. Cuando el avance de dos horquillas adyacentes las lleva a encontrarse, cuando dos burbujas se tocan, se fusionan, y cuando todas se han fusionado todo el cromosoma ha quedado replicado. Como la ADN Pol III necesita de un extremo 3'-OH libre, es necesario que una ARN primasa catalice la formacin de un fragmento corto especfico de ARN llamado cebador, que determinar el punto por donde la ADN polimerasa comienza a aadir nucletidos. As, durante la sntesis, en cada horquilla de replicacin se van formando dos copias nuevas a partir del cebador sintetizado en cada una de las dos hebras de ADN , pero debido a la unidireccionalidad de la actividad de la ADN Pol III, que slo es capaz de sintetizar en sentido 5 3', la replicacin slo puede ser continua en la hebra adelantada; en la hebra rezagada es discontinua, dando lugar a los fragmentos de Okazaki. En la hebra rezagada, cuando la ADN Pol III hace contacto con el extremo de otro fragmento de Okazaki contiguo, el cebador de ARN de ste es eliminado y los dos fragmentos de Okazaki son unidos por la ligasa.