LABORATRIO DE ANALISES CLNICAS-UFVJM PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRO Pgina 1 de - POP 3 Data Edio/Reviso: Identificao: Verso: Emisso: 03/11/2013 POP-001

001 02/11/2013 REA EMITENTE: Departamento de Farmcia PROCEDIMENTO ANALTICO: Centrfugo-Sedimentao pela Formalina-ter 1.0 OBJETIVO

Tcnica eficiente para recuperar e identificar cistos de protozorios e ovos e larvas de helmintosem material fecal fresco.
2.0 AMOSTRAANALISADA

Material fecal no preservado

3.0 REAGENTES

1. Soluo de formaldedo a 10% (v/v) 2. ter etlico (C4H10O) 3. Soluo salina a 0,85%
4.0 MATERIAL

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Basto de vidro Clice de sedimentao Centrifuga Cotonete Gaze Lmina Microscpio Tubo Falcon15mL

5.0 TCNICA

1. Usar luvas durante todas as etapas do procedimento. 2. Colocar 1 ou 2g de fezes frescas colhidas de vrias partes do bolo fecal em frasco contendo 10ml de gua corrente ou soluo salina a 0,85%. 3. Filtrar a suspenso atravs de gaze, levemente umedecida em gua corrente, dobrada duas vezes e receber o filtrado em um tubo de centrfuga de 15ml com fundo redondo. A suspenso pode ser filtrada atravs de filtro descartvel (Parasitofiltro), com ala de segurana, levemente umedecido em gua corrente. 4. Centrifugar (650 x g/1min).

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5. Decantar o sobrenadante e adicionar 1 a 2ml de gua corrente ou soluo salina a 0,85% ao sedimento antes de ressuspend-lo. Completar com gua corrente (ou soluo salina a 0,85%) 2/3 do volume do tubo. Agitar e centrifugar (650 x g/1min). 6. Repetir a etapa 4, at que o sobrenadante se apresente relativamente claro. 7. Depois que o ltimo sobrenadante decantado, ressuspender o sedimento com 1 a 2ml de formalina a 10% (dar preferncia soluo tamponada de formalina a 10%, pH neutro). Completar o volume da suspenso em 10ml com formalina a 10%. Deixar em repouso durante cinco minutos. 8. Adicionar 3ml de ter ou acetato de etila, fechar o tubo e agitar vigorosamente, na posio invertida, por 30 segundos. Remover a tampa com cuidado. 9. Centrifugar (500 x g/1min). Quatro camadas se formaro: 1.) sedimento no fundo do tubo contendo os parasitos; 2.) camada de formalina; 3.) tampo de detritos fecais; 4.) camada de ter na superfcie 10. Afrouxar e separar o tampo de detritos das paredes do tubo comum estilete fino e, com cuidado, decantar as trs camadas superiores. Limpar com swab de algodo as paredes do tubo, removendo os detritos remanescentes. 11. Uma pequena quantidade do lquido que permanece nas paredes do tubo escorre para o fundo junto ao sedimento. Misturar o lquido e o sedimento, preparando as lminas para a pesquisa de ovos, larvas e cistos.
6.0 OBSERVAES

1. Ritchie e cols relataram que o pH da formalina afeta o encontro dos ovos e cistos no sedimento. Dados mostram que a formalina no pH neutro mais eficaz do que a formalina no tamponada no estudo dos parasitos.

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2. No usar gaze com mais de duas camadas de espessura; gaze mais espessa pode reter o muco (contendo oocistos de Cryptosporidium e de Cyclospora e/ou esporos de microspordios). 3. Tubo com fundo redondo mais apropriado do que tubo cnico de centrfuga de 15ml. A gua corrente poder ser substituda pela soluo salina 0,85% durante todo o procedimento, conquanto a adio de gua s fezes frescas causa a ruptura dos cistos de Blastocystishominis (corpo central). Alguns autores preferem o uso de formalina a 5 e 10% em substituio gua corrente em todas as etapas da lavagem.

7.0 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

DE CARLI, G.A. Parasitologia clnica- seleo de mtodos e tcnicas de laboratrio para o diagnstico das parasitoses humanas. 1ed., So paulo, Atheneu, 2001.
Elaborao Data: 02/11/2013 Reviso Data: 03/11/2013 Aprovao 03/11/2013