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Alexander C. vargas Mllne
LaboraLorlo de CnLogenla y lllogenla
uepLo de 8lologla
laculLad de Clenclas
u. ue Chlle
ul en hup://vargaslab.wordpress.com
Las exLremldades de los LeLrpodos uenen cuaLro grupos
prlnclpales de elemenLos esqueleucos :
Ll sLylopodo: elemenLo unlco proxlmal (8razo: Pumero, lerna:
lemur)
Ll zeugopodo: 2 elemenLos dlsLal al esulopodo (8razo: 8adlo y
ulna
lerna: ubla y llbula)
Ll auLopodo: muneca-Loblllo, palma-empelne y dedos
(mesopodo, meLpodo y falanges)
Brazo
(forelimb)
Pierna
(hindlimb)
Stylopodo
Zeugopodo: Lado anterior (interno) Radio-Tibia
Lado posterior (externo) Ulna- Fbula
Aves
Condylo: extremo (articular) del hueso
Trochanter: inserciones
musculares del fmur
El mesopodo: nmero variable de elementos (mueca-
tobillo) incluyendo 3 elementos proximales (que
articulan con el zeugopodo) Brazo: Radiale, Ulnare e
Intermedio , Pierna: Tibiale, Fibulare (tambien
conocidos como astrgalo y calcneo) e intermedio.
Hay un numero de elementos centrales (4 en el
ancestro de los tetrpodos modernos ), y elementos
distales tpicamente asociados a los dedos del
Metapodio.
El metapodio (mano: palma, pie: empeine) en
tetrpodos modernos consiste en 5 elementos o menos
(mano: metacarpos, pie: metatarsos) que constituyen
parte de los rayos digitales. Se numeran I a V desde
anterior (pulgar) a posterior (meique)
Los dgitos se encuentran distales al metapodio y estan
compuestos por falanges.
tetrapodos modernos (neotetrapoda): Todos los descendientes del
ancestro comn ms reciente compartido por los dos principales
grupos de tetrpodos vivientes (lisanfibios y amniotos)
Hueso sesamoide: osificacin
intratendinosa.
El hueso pisiforme tambin se
origina al interior de un tendn,
sin embargo hay quienes
afirman que corresponde al
elemento mesopodial C4
El pulgar del panda es un hueso
neomrfico (nuevo) y sesamoide
uesarrollo de la exLremldad de LeLrapodos: Ll prlmordlo de la exLremldad (llmb bud)
se desarrolla a parur de la somaLopleura (placa laLeral")
Llmb buds:
La expresln ms anLerlor de PoxC-6 colnclde con la poslcln de las exLremldades
anLerlores y la Lranslcln de verLebras cervlcales a Lorclcas
Plndllmb: lLx-1 es expresado slo en la somaLopleura posLerlor
Llmb 8ud (prlmordlo de la exLremldad) Ls la unlca zona donde la somaLopleura
aLrae la mlgracln de myoblasLos a parur de los myoLomos de los somlLos
AL8
Aplcal LcLodermal 8ldge (reborde ecLodermlco aplcal)
El mesodermo
transplantado
mantiene la identidad
de la extremidad
(brazo o pierna)
AER permite el
crecimiento hacia
fuera
Ll AL8 es requerldo para el creclmlenLo hacla fuera por adlcln de elemenLos ms dlsLales
Ll mesodermo es lmporLanLe para deLermlnar la polarldad anLero-posLerlor
lmplanLes heLerocrnlcos de AL8 + mesenqulma (Slo AL8 no hay fenoupo alLerado)
Identidad brazo o
pierna de primordios
Correlacin de la
identidad con la
expresin anterior de
Tbx5 y posterior de
Tbx4
Posible caso de thomesis epidrmica: Microraptor gui
ZPA: Zone of Polarizing Activity
Las identidad de las
condensaciones digitales
permanece indeterminada
hasta estadios tardios,
permitiendo la alteracion
experimental de la identidad
de una condensacin de
acuerdo al mesnquima
interdigital posterior a cada
condensacin (Dahn and
Fallon 2000).
En una mano pentadctila tipica de tetrpodos modernos: El primer digito que inicia la
formacion de cartilago es el dedo 4, que est espacialmente en lnea con el calcneo/
ulnare y la ulna/fbula, definiendo un eje primario
Chelydra (tortuga) mano
Gallus (ave) pie
Secuencia altamente conservada de formacin de cartlago; El eje primario de
formacion de cartlago
Burke and Feduccia 1997
Eje primario
Los genes HoxA y HoxD ms posteriores se expresan de manera
dinmica en la extremidad, con patrones de expresion tempranos y
tardos distintos (que afectan distintos segmentos proximo-distales)
En la fase tarda (III), los genes HoxD10, D11, D12, D13 y A13 se expresan en los dedos 2-5, en cambio slo
HoxD-13 y A-13 se expresan en el dedo 1
Origen de las extremidades pareadas
Hiptesis: Las extremidades son homlogas a aletas
longitudinales como la aleta media
Los primeros vertebrados slo posean la aleta media, que
incluye la regin caudal (de la cola). No posean aletas de las
extremidades (aletas pectorales y pelvicas). Las aletas
pareadas de las extremidades slo aparece en gnathostomos
troncales (stem gnathostomes)
Existen varias semejanzas embriolgicas
y de expresin gentica entre el primordio
de la cola y el de las extremidades,
incluyendo la presencia de un VER
(ventral ectodermal ridge) semejante al
AER
La expresin de genes Hox
posteriores podra deberse a que la
aleta original (la caudal) se encuentra
hacia la regin posterior del cuerpo.
Aletas plvicas
Aletas pectorales
Las aletas pareadas pectorales (brazos) surgen antes de las plvicas (piernas)
En todas las aletas se puede observar un eje central del cual se proyectan rayos (radiales) y que se
argumenta corresponde al eje principal de formacin de cartlago de las extremidades de tetrpodos
En sarcopterigios rhipidistianos (en la imagen, sauripteris en adelante) hay un patrn de
bifurcacin del eje metapterygio que se corresponde con el arreglo observado en tetrpodos
En tetrpodos troncales hacen su aparicin los dedos definitivos
Teora original sobre el origen de los dedos (basado en comparacin
de tetrpodos con zebrafish):
Los dedos se habran originado junto con fase tarda de expresin de
genes Hox
(Error en la imagen: La expresin de D-11 es la de D-13 y viceversa)
Correcin tras observar tiburones y actynoperygios basales: La fase 3 de expresin es mucho ms
antigua y perdida secundariamente en el linaje conducente a los telesteos. Los radiales parecen
corresponderse con el autopodo
Symphysis
Acetbulo
Hay polydactylia ancestral en tetrpodos troncales, luego prdida de dedos y pentadactilia en
el pie y la mano de los primeros tetrpodos modernos. En estos, el dedo ms anterior (dedo
1) es bifalangeal. Se denomina pollex en la mano y hallux en el pie
Oster et al 1988
En Lepospndilos (Primeros
Batrachomorpha, ancestros de los anfibios
actuales) en la mano ha ocurrido una
reduccin a 4 dgitos. Estos pueden ser los
digitos 1,2, 3 y 4 pero en ranas, el eje
primario de formacin de cartlago sugiere
que son 2,3,4, y 5
Ntese la presencia de aparentes dedos
vestigiales prepollex, postminimus
Presencia de prepollex y prehallux anterior al dedo 1 en manos (A) y pies
(B) de Xenopus.
Ojo: una sola costilla
sacral en anfibios
Los urodelos poseen extremidades de desarrollo anormal dentro de los
tetrapoda. La secuencia de formacion de cartilago es diferente (ocurre primero
hacia anterior, en el dedo 1). No hay AER morfologico y hay expresion
autopodial de HoxA-11
A partir de una diferencia en la
secuencia en que se forma el cartlago
en las extremidades de las salamandras
respecto a los dems tetrpodos,
Holmgren propuso una teora difiltica,
en que dos grupos de peces distintos
habran conquistado la tierra,
evolucionando las extremidades de
manera independiente.
En realidad, hay un slo origen de las
extremidades de los tetrpodos: es el
desarrollo el que ha cambiado en
salamandra.
Manus
Pes
En cambio, los tetrpodos mas cercanos a los amniotos que a los anfibios
modernos (anthracosaurios o reptiliomorphos) como Seymouria retuvieron la
pentadactilia ancestral en la mano y presentan un numero especifico de falanges
en cada dgito: 2-3-4-5-3 en la mano, y 2-3-4-5-4 en el pie
P A
Captorhinus: amniote temprano ms cercano a el linaje reptiliano que al
linaje de los mamferos. Tambin presenta la frmula 2-3-4-5-3 en la mano
y 2-3-4-5-4 en el pie
P A
Manus Pes
Ophiacodon es un amnioto temprano ms cercano a los mamferos que a los
reptiles. Tambien presenta 2-3-4-5-3 en la mano y 2-3-4-5-4 en el pie. Por lo
tanbto toda la evidencia indica que esta formula estaba presente en el ancestro
comun mas reciente de los amniotos
Manus Pes
P A
La misma formula falangeal ha sido retenida por varias especies de lagaratijas
desd ele ACMR de los amniotos
P A
Manus Pes
Homeosis en la Evolucin del Ala de las Aves
Nueva Evidencia Comparativa y Experimental
Dr Alexander Vargas
Departamento de Biologa
Facultad de Ciencias Universidad de Chile
Alligator mississippiensis
Gallus gallus (chicken)
Burke and Feduccia 1998 Science 278: 666
Ulna
El ala tridctila de las aves evolucion a partir de una mano reptiliana ancestral pentadctila; los dedos
del ala se desarrollan a partir de condensaciones cartilaginosas que en tetrpodos pentadctilos dan
origen a los dedos 2,3 y 4 (ndice, medio y anular)
El eje primario de formacin de cartlago en pentadctilos
siempre da origen al dedo 4 y est en lnea con la ulna y el
ulnare
Ulnare
Ulna
1
2 3 4 5
Origen del problema: Embriologa comparada vs. Morfologa comparada




Adems, es posible observar en el ala
la presencia de pequeas
condensaciones embrionarias que
aparentan ser un pulgar (dedo 1) y
meique (dedo 5) vestigializados
Embrin de avestruz (Struthio)
Nowicki & Feduccia 2002
Naturwissenschaften 89: 391
Sin embargo, la morfologa comparada (de taxa fsiles y vivientes)
identifica a los dedos del ala de las aves como 1, 2 y 3
Wagner y
Gauthier 1999
PNAS 96:5111
Solucin
propuesta:
1,2,3 = 2,3,4.
Inferencia de un
evento de
Desplazamiento
Hometico en
Serie (DHS)
(Homeotic Frame-
shift ) en la
evolucin del ala
Feduccia 1999 PNAS
A algunos puede tomarles un tiempo entusiasmarse con el DHS
(A) Alligator (B) The early ornithischian dinosaur Heterodontosaurus (C) The early theropod Herrerasaurus (D) The Neotheropod
Coelophysis (E) The tetanuran Allosaurus (F)The early maniraptoran Ornitholestes (G) the early bird Archaeopteryx (H) the
enanthiornithe Sinornis (I) nestling of the modern Opisthocomus (J) 12.5 day embryo of the duck Anas (K) the adult chicken Gallus
gallus (L) Adult Opisthocomus.
Cambios de identidad especificados por mesnquima interdigital posterior a cada dedo A)
Esquema de B) retirada de interdgito (ID) posterior a dedo 2 C) retirada de interdgito posterior a dedo
3 D) Control: injerto de condensacin 2 en ID 2 y E) condensacin 3 en ID 3. F) Condensacin 3 en ID
2 G) Condensacin 2 en ID 3
Dahn y Fallon 2000 Science 289: 438
En extremidades en que no hay controversia sobre la identidad de los dedos
(ratn, pie del pollo) la expresin de genes Hox se utiliza para identificar el
desarrollo del dedo 1. HoxD-10, HoxD-11 y HoxD-12 estn ausentes slo en el
dedo 1, pero se expresan en todos los dems dedos. HoxD-13 y HoxA-13, en
cambio, se expresan en todos los dedos, includo el dedo 1
HoxD-12 HoxD-13
Brazo
Pierna
11.5 12.5 11.5 12.5
Chiang et al 2001 Dev Biol 236: 421
1
3
2
4
5
1
2
3
4
5
Expresin forzada de HoxD-12 en el dedo 1 de
ratn: transformacin a un dedo 2
Expresin forzada de HoxD-12
en pie de pollo (colaboracin
con Fallon lab) sugiere
conservacin funcional de
HoxD-12 en ratn y pollo
(pese a 300 millones de aos
de divergencia evolutiva)
Expresin forzada de
HoxD-11 en dedo 1 del
pie del pollo:
transformacin a un dedo
2
EXPERIMENTOS FUNCIONALES
En el ala, HoxD-10, HoxD-11 y HoxD-12 estn ausentes slo en el dedo
bifalangeal anterior del ala.
La expresin gentica sugiere que este es un dedo 1, pese a
desarrollarse a partir de la posicin embriolgica del dedo 2.
Vargas & Fallon 2005 JEZB (MOL DEV EVOL) 304:86
Vargas and Fallon 2005 JEZ B (MDE) 304:86
Pie pollo Mano ratn
HoxD-13 HoxD-12 HoxD-13 HoxD-12
Mano de pollo (dias 7 y 8)
Qu tal si la ausencia de expresin de HoxD-12 es slo cosa de ser el
dedo ms anterior?
Los mutantes de pollo talpid2 y Silkie presentan un pie con un eje antero-
posterior alterado. talpid2 muestra un pie posteriorizado y polidctilo, sin
dedo 1. En Silkie, el dedo ms anterior no es el dedo 1 sino un dedo 2
ectpico
Silkie Talpid
2

Vargas & Fallon 2005 JEZB 304:86
En ratn, HoxA-13 se expresa en todos los dedos, pero slo el dedo 1 requiere
HoxA-13 para su formacin. Es el nico dedo que desaparece en ausencia de
funcin de HoxA-13
Image from Fromental-Ramain et al. 1996
Para observar la funcin de HoxA-13 en el ala, un alelo dominante negativo
(putativo) para HoxA-13 fue contruido que comprende una fusion of dominio
represor de la transcripcin del gen engrailed de drosphila y una regin de
HoxA-13 (EnHoxA-13) en un vector retroviral que fue electroporado en el
primordio del ala en estadio 17
Datos preliminares: Como resultado, el dedo anterior del ala dej de
formarse sugiriendo que slo este dedo requiere HoxA-13, tal como el
dedo 1 del ratn.
Desplazamiento
Hometico
en Serie:
Identidad y
expresin de
HoxD10-12
hacia posterior
Ratn Pollo
Pero, el ratn es slo un
pariente lejano de las
aves. Los crocodylia son
los parientes vivos ms
cercanos a las aves.
Aproximacin
comparativa:
Si el dedo ms anterior
del ala es un dedo 2, es
posible que en los
crocodilia el dedo 2 no
exprese HoxD-10, HoxD-11
y HoxD-12
Si, de acuerdo al DHS, la
ausencia de HoxD-10,
HoxD-11 y HoxD-12 en el
en el ala de las aves
indica, como en el ratn,
el desarrollo del dedo 1, la
ausencia de expresin
debiera observarse slo
en el dedo 1 de parientes
ms cercanos de las aves
Clonamos un fragmento del exon 1 de HoxD-11 de Alligator
mississippiensis para observar su expresin en dedos embrionarios.
Vargas et al 2008 PLoS ONE 3(10): e3325
Como en el ratn, en Alligator, HoxD-11 est ausente slo en el dedo 1
bifalangeal; el dedo anterior del ala se parece exclusivamente al dedo 1 de
Alligator
Esto es consistente con el DHS, que mantiene que los dedos del ala son 1,2 y 3
pese a desarrollarse a partir de las condensaciones 2,3,y 4
Vargas et al 2008 PLoS ONE 3(10): e3325
La transformacin hometica de dedos se ha
documentado, pero slo para dedos
individuales
Dahn y Fallon 2000 Science 289:438
La evidencia experimental: Es posible un DHS
en el lab?
Sin embargo, nunca se ha demostrado el desplazamiento en serie,
simultneo de ms de un dgito. Podemos inducir un DHS de manera
experimental?
Scherz et al. 2007 Dev Biol 308:343
La aplicacin de cyclopamina en estadios 18-20 produce alas bidctilas
con dedos 1 y 2.
Dnde est el eje primario
de formacin de cartlago en
estas alas experimentales?
Cyclopamine
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,) %)2 3,;'() 1#-/,3'#3D +,-+, +#)+, -% 13#/,<)2 +'-?')%8, -% &#)&,)/32&'()
,) ;32+',)/, @2&'2 2)/,3'#3
En 9/54 casos, las alas bidctilas presentaron un cartlago anterior al
dedo 1 que no se desarrolla en un dgito. Esta puede corresponder a
clulas con potencial condrognico que normalmente producen un
dgito pero que quedan vacantes (sin identidad especificada) tras el
DHS hacia posterior
Wildtype
Cyclopamine-Treated
La expresin de
HoxD-12 tambin
est desplazada, una
posicin digital ms
cerca del eje
primario de
formacion de
cartlago
La prdida del dedo
posterior, el
desplazamiento
de la morfologa y de
la expresin de
HoxD-12, y la
aparicin de un
cartlago anterior
vestigial, fueron
todas previamente
implicadas para el
DHS evolutivo. Esto
sugirie que el
mecanismo del DHS
se sobrepone con el
de la va de
sealizacin de Shh
Conclusiones
La ausencia de HoxD-12, HoxD-11 y HoxD-10 en dedo 1 es ancestral para
amniotos y conservada en ratn y pollo
El caso del ala de las aves ejemplifica cmo el origen embriolgico
puede no ser infalible como indicador de homologa (pese a que
generalmente funciona)
Como previamente no se haban
descrito desplazamientos
hometicos en serie experimentales,
la aplicacin de cyclopamina
confirma una posibilidad mecanstica
que previamente haba sido inferida
mediante comparaciones evolutivas.
(La naturaleza no hace distincin
entre ciencias experimentales y
comparativas; los mismos
mecanismos se ven reflejados en
ambas)