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1

Rpublique Algrienne Dmocratique Et


Populaire
MINISTERE DE LENSEIGNEMENT SUPERIEUR
ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE EL-HADJ LAKHDAR
BATNA
FACULTE DES SCIENCES
DEPARTEMENT DES SCIENCES DE LA MATIERE
MEMOIRE
Pour lobtention dudiplmede
MAGISTER
Spci alit : ChimieOrganique
Prsentpar :
MOKHTARI MOUNA
THEME
ETUDE PHYTOCHIMIQUE DE LA PLANTE
CALYCOTOME SPINOSA.Link
DEVANT LE JURY
DIBI AmmarPr. Universit de Batna Prsident
ABERKANE Med CherifM.C Universit de Batna Rapporteur
EL-HILLOU Malek Rasoul YacinePr. Universit dOum El Bouaghi Examinateur
HARKAT Hassina M.C Universit de Batna Examinatrice
BITAM Fatima M.C.B Universit de Batna Invite
A nneUniversitaire: 2011-2012
2
R emerciements
Cetravail a teffectuau laboratoiredechimieet chimiedelenvironnement, au dpartement dechimie, la
facultdes sciences deluniversitdeBatna, sous la direction demonsieur Med cherif Aberkane, matrede
confrences luniversitdeBatna.
J etiens leremercier tout particulirement pour tous ses efforts et pour lesoutien quil ma tmoigntout au
long decettetudeplacesous sa direction.
J etiens exprimer toutema gratitude Monsieur leprofesseur AmarDIBI (UniversitdeBatna) davoir
aimablement acceptdeprsider lejury decettethse.
J e remercie vivement Monsieur le professeur Malek Rasoul Yacine EL-HILLOU (Universit dOumEl
Bouaghi) davoir bien voulu juger cetravail.
J eremerciemademoiselleHassina HARKATmatredeconfrences deluniversitdeBatna,qui a bien voulu
examiner cemanuscrit et juger cetravail.
J eremerciemademoiselleFatima BITAMmatredeconfrences deluniversitdeBatna, davoiracceptnotre
invitation pour participer cejury dethse.
J exprimemes sincres remerciements monsieur Paul Mossetprofesseur deENSC deluniversitdeRennepour
son aideet sa disponibilitenmepermettant la ralisation des spectres.
Merci Sonia CHABANI demavoir aiddurant les moments difficiles
Mes remerciements vont galement tout mes amis, particulirement Sawsen, Najet, Ouasila, Siham, Amira,
Badra, Soria, Wasilaet tous les autres car trop nombreux pour les nommer tous.
Merci mes proches notamment mes parents, mon mari, mes deux enfantsAnfel et Akram, mes sursWarda,
Selma etAsma, mes frresYahya, Lotfi et Ilyes.
Sans vous, rien naurait possible, merci de votre soutien moral et de votreamour
3
Ddicace
CETTE THSE REPRSENTE LABOUTISSEMENT DU SOUTIEN ET DES
ENCOURAGEMENTS QUE MES PARENTS MONT PRODIGUS TOUT AU LONG DE
MA SCOLARIT.
LA PATIENCE ET LENCOURAGEMENT DE MON MARI MONT AID
SURMONTER TOUTES LES DIFFICULTS RENCONTRES AU COURS DE CETTE
THSE.
A MES DEUX ENFANTS ANFEL ET AKRAM.
A MES FRRES YAHYA, LOTFI, ILYES.
A MES SURS WARDA, SELMA, ASMA.
A MES NEVEUX FADI ET ASSIL.
4
ABREVIATIONS UTILISEES
C :Degr Celsius
:Dplacement chimique
1D : monodimensionnelle
2D :bidimensionnelle
AcOEt :Actate dthyle
CC :Chromatographie sur colonne
CCM :Chromatographie sur couche mince
CHCl
3
:Chloroforme
COSY :Spectroscopie de Corrlation H-H
d :doublet
dd :doublet de doublet
s :singulet
tl :triplet large
t :triplet
HMBC :Heteronuclear Multiple Bond Correlation
HSQC :Heteronuclear Single-Quantum Correlation
Hz :Hertz
IR :Infra- Rouge
J :constantes de couplage (RMN)
m:multiplet
Me :Mthyle
DMSO-d6 :Dimthylsulfoxyde deutr
Actone-d6actone deutr
MeOH :mthanol
MS :spectromtrie de masse
ppm :partie par million
Rf :facteur de rtention
RMN :rsonance magntique nuclaire
TMS:Tetramethylsilane
UV: Ultraviolet
5
Sommaire
Introduction.. 8
Chapitre I: Rappel bibliographique
I.1. Description de la plante tudie 11
I.1.1.La famille des Fabaceae. 10
Caractres botaniques de la famille. 11
Appareil vgtatif.. 12
Appareil reproducteur.. 12
Phylognie... 13
I.1.2. La sous-famille des Papilionoideae 13
Caractres botaniques.. 13
I.1. 3 Le genreCalycotom...... 14
Origine du nom 14
Utilisation 15
Classification scientifiquedeC. spinosa.... 15
I.1.4 Etudes chimiques sur la famille des Fabaceae 17
I.I.5 Les travaux antrieurs sur la phytochimie du genrecalycotome. 17
Chapitre II: Les composs flavonoidique
II.1 Les Flavonoides.. 21
II.2. Classes des Flavonoides 22
-Flavones, Flavonols... 23
-Flavanones. 25
-Isoflavones. 26
-Chalcones, aurones. 26
-Biflavonodes. 27
6
-Les anthocyanidines... 27
-Htrosides flavonodiques. 28
II.3. Biosynthse des Flavonoides. 27
II.4. Le Rle Bioactif des Flavonoides.. 31
II.5. Etude Chimique des Flavonodes.. 34
II.5.1. Chromatographie 34
II. 5.2. Spectroscopie UV.. 34
II. 5.3. Spectromtrie de Masse. 34
Chapitre III: Rsultats et discussion
III.1 Introduction... 38
III.2 Extraction.. 38
III.2.1 Macration.. 38
Protocole 39
III.2.2 Sparation... 40
A-Extrait chloroformique. 40
B- Extrait butanolique...... 40
III.2.3 Purification. 41
A- Extrait chloroformique.. 41
B- Extrait butanolique..... 42
III.3 Dtermination de structure des composs isols.. 42
III.3.1 Identification du produit M1.. 43
III.3.2 Identification du produit M2.. 54
III.3.2 Identification du produit M3.. 67
III.3.2 Identification du produit M4.. 79
Conclusion 86
7
Chapitre IV : Partie exprimentale
IV.1 Introduction.. 91
IV.2 Matriel Vgtal 91
IV.3 Mthodes Physico-chimiques....... 91
IV.3.1 Spectres de Masse (MS). 91
IV.3.2 Spectres de Rsonance Magntique Nuclaire (RMN).. 91
IV.3.3 Spectroscopie Infrarouge (IR) 91
IVI.3.4Chromatographies. 91
IV.3.4.1 CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM).. 91
IV.3.4.2 CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE (CC). 92
IV.4 Mthodes de fractionnement et de Purification 92
IV.4.1 Extrait chloroformique 92
VI.4.1.1. Purification. 95
Etude de (A-3+A-4).. 95
VI.4.2 Extrait mthanolique.. 95
VI.2.1. Purification 100
Etude de C-12... 100
VI.4.3. Composs isols de lespceCalycotome spinosa 101
VI.4.3.1. Compos M1... 101
VI.4.3.2. Compos M2.. 103
VI.4.3.3. Compos M3 104
VI.4.3.4. Compos M4 106
Rfrences bibliographiques.. 108
Rsum.. 112
8
Introduction
Depuis toujours, lhomme a utilis sont environnement et en particulier les plantes
pour se soigner. On estime que deux tiers des mdicaments actuels ont une
originenaturelle[1]: obtenus par hmi-synthse, partir dunpharmacophore ou par
modification dun produit naturel, composs issus des biotechnologies, vaccins,
composs dorigine vgtale, microbiologique ou animale. Seul un tiers des
mdicaments commercialiss possde donc une origine purement synthtique.
De plus, sur les 300 000 espces vgtales recenses, on estime que seules 15%
dentre elles ont t tudies sur le plan phytochimique, dont 6% pour leurs activits
biologiques[2] ce qui fait des plantes un rservoir de molcules bioactives encore peu
explor. Les substances naturelles et les plantes en particulier reprsentent une
immense source de chimiodiversit, avec souvent des structures trs originales dont
une synthse totale et rentable (complexit structurale, strospcificit) est souvent
impossible raliser.
Nanmoins, il faut noter que, dune part, le nombre despces vgtales diminue et
que dautre part, le savoir des mdecines traditionnelles tend lui aussi disparatre
progressivement. Il en rsulte une urgence connatre et protger ces espces et les
savoirs qui leur sont associs.
Particulirement en Algrie, les marchs regorgent de centaines de plantes
mdicinales diffrentes, sauvages ou cultives localement. Certaines sont prescrites
comme remdes usage domestique. Dautres sont mastiques pour combattre la
fatigue.
Tout en encourageant la recherche et ltude des substances actives dans les plantes,
leur structure, leur distribution, leur modification et les processus de transformation
qui se produisent au cours de leur vie, la revalorisation de la phytochimie en Algrie
pourrait aboutir lhomologation de nouveaux mdicaments base de plantes qui
sont trs riches en mtabolites secondaires.
Inscrit dans ce contexte gnral, ce travail de thse a pour objectif de caractriser
chimiquement les tiges et les feuilles dune Lgumineuses (Fabaceae) : Calycotome
spinosum.Link.
Aprs une prsentation botanique deC. spinosumet de sa place dans lesclassifications
scientifique, une synthse bibliographique permettra de dcrire les mtabolites
9
secondaires principaux dans ce genre : les flavonodes. Puis, les principales tudes
phytochimiques antrieures relatives aux espces du mme genre seront prsentes
afin dintroduire la partie principale de ce travail. Cette partie concerne en effet la
purification et la caractrisation des molcules obtenues lors de ltude phytochimique
des tiges et des feuilles deC. spinosum. Le dernier volet est consacr la prsentation
des techniques chromatographiques et danalyse structurales utilises.
10
I
11
I.1. Description de la plante tudie
I.1.1. La famille des Fabaces
La grande famille des Fabaces (de faba, la fve) doit son unit son fruit, appel
gousse ou lgume, do lautre dnomination de Lgumineuses sous laquelle cette
famille est plus connue.
Les Fabaces constituent une des plus grandes familles des plantes fleurs, avec plus
de 730 genres et 19 400 espces, rparties aussi bien en milieu tempr que tropical
[3]. Les formes arborescentes prdominent dans les pays chauds et les formes
herbaces dans les rgions tempres [4].
Nanmoins, la prdilection des plantes de cette famille pour les habitats arides ou
semi-arides est relie leur mtabolisme dpendant de lazote, qui est considre
comme une adaptation aux variations climatiques et imprvisibles de lhabitat. En
effet, la fixation de lazote viala symbiose lgumineuses-rhizobium permet aux
plantes de cette famille dobtenir des taux levs en azote ammoniacal au niveau de
leurs racines en fonction de la demande de leur mtabolisme [3].
Cette famille est compose de varits horticoles et beaucoup despces sont rcoltes
dans un but alimentaire, tant pour lalimentation humaine (haricot, pois, fve, soja)
quanimale (trfle, luzerne, sainfoin), pour leur huile (arachide, soja), leurs fibres,
comme combustible, pour leur bois, leur utilisation en mdecine (spartine extraite du
gent balais, rglisse) ou en chimie [3].
Caractres botaniques de la famille
Les plantes de la famille des Fabaces possdent plusieurs caractres morphologiques
en commun. Nanmoins, on observe aussi dans cette famille de trs nombreux types
floraux, dues plusieurs tendances volutives, plus ou moins synchrones, et en
particulier, une rduction du nombre des tamines et la cration dune fleur
zygomorphe se dit dune fleur dont les diffrentes pices de chaque verticille
(spales, ptales, tamines) sont disposes symtriquement par rapport un plan (plan
axe/bracte) . Les feuilles galement des plantes de cette famille prsentent une
volution morphologique.
12
Appareil vgtatif
Les racinessont gnralement pivotantes et laissent apparaitre des nodosits
rhizobium qui se forment si le sol est pauvre en azote[4].
Les feuillessont gnralement alternes, pennes ou trifolioles et stipules.
Cependant on peut noter quelques volutions : la foliole terminale peut tre absente
(fve) ou en forme de vrille (vesce), les folioles sont remplaces par des pines
(ajonc), les stipules font place des pines (robinier faux acacia), le nombre de
folioles peut tre rduit (trfle, gent), la nervation peut tre de type palme (lupin).
Appareil reproducteur
Les inflorescencessont des grappes plus ou moins allonges.
Les Fabaces les plus primitives (Mimosoides) possdent un prianthe rgulier et
rduit, avec des tamines trs nombreuses. Toutes les Fabaces possdent un ovaire
form dun seul carpelle. Celui-ci est supre et surmont dun style et dun stigmate.
Le fruit, lment le plus constant et qui caractrise cette famille, est appel gousse ou
lgume. Il sagit dun fruit qui souvre en gnral maturit grce une double
ouverture : ventrale et dorsale. Chez certaines espces, la gousse subit des
transformations.
Celle-ci peut prsenter des tranglements entre les graines (gousse lomentace,
indhiscente), elle peut devenir paucismine (jusqu une seule graine). En fonction
des espces, la gousse est sche ou charnue, aplatie ou comprime, spirale, arque,
aile, segmente, articule, verdtre ou de couleur vive. Sa taille va de quelques
centimtres une trentaine de centimtres.
Le nombre dovules est variable. Ils voluent pour former une graine arque,
exalbumine, qui est dailleurs souvent riche en composs haute valeur alimentaire
comme : lamidon (pois, fves, lentilles), des lipides (arachides, graines de soja), des
protines (graines de soja).
13
Phylognie
Ltude phylogntique de cette famille a t commence avec le gne
chloroplastique rbcL4, confirmant lorigine monophyltique de cette famille[3]. Les
Fabaceae peuvent tre rparties en 4 sous-familles selon lAPG III (2009):
- la sous-famille de Bauhiniodes, avec les arbres Orchides (Bauhinia) et les arbres
de J ude (Cercis)
- la sous-famille des Mimosoides
- la sous-famille des Caesalpinoides
- la sous-famille des Papilionoides ou Fabodes comprenant le genreCalycotome.
I.1.2. La sous-famille des Papilionoidees
La sous-famille des Papilionoidees est certainement la sous-famille la plus tudie, en
particulier en raison du grand nombre de plantes appartenant cette famille, 476
genreset 13 860 espces[3]. On retrouve dans cette sous-famille des arbres, en gnral
exotiques, des lianes, mais aussi beaucoup de plantes herbaces vivaces ou annuelles.
Caractres botaniques
Il sagit dune sous-famille exceptionnellement homogne, trs reconnaissable
laspect de ses feuilles alternes, stipules et composes pennes, celui de ses fleurs,
corolles dites en papillon et par ses fruits appels gousses[4].
Traditionnellement, les Papilionoidees ont t caractrises par des traits qui sont
considrs maintenant comme des synapomorphies caractre driv ou
apomorphique partag par deux ou plusieurs taxons de la sous-famille[3]. Ces
caractristiques incluent la prsence de bois avec un parenchyme prdominant axial
para trachal qui est assez rare ; des vaisseaux avec des trous alterns et de simples
perforations plates ; labsence de feuilles bipennes[3].
14
Les lments les plus caractristiques concernent la fleur des Papilionoidees :
La prfloraison est descendante (vexillaire). Les fleurssont cyclises, hermaphrodites
et fortement zygomorphes par la corolle.
La corolle, symtrie bilatrale, prsente une forme dite papilionace cest dire
quelle est constitue de cinq ptales disposs en forme de papillon. Le ptale dorsal
(appel aussi vexillum ou plus couramment tendard), recouvre les deux ptales
latraux ou ailes. Ces derniers recouvrent leur tour, les deux ptales infrieurs, libres
ou unis par leur bord interne sur une certaine longueur. Ces deux pices infrieures
constituent ensemble la carne qui renferme landroce et le gynce.
Landrocecompte dix tamines qui peuvent tre libres ou soudes. Elles sunissent le
plus souvent par leurs filets, formant un tube autour du carpelle (genre Sophora).
Elles peuvent aussi tre soudes entre elles et landroce est alors monadelphe (genre
Cytisus). Landroce est didelphe quand neuf tamines sont unies en un tube ouvert en
arrire et que ltamine postrieure reste libre (genreVicia et genreDerris).
I.1. 3 Le genre Calycotome
Origine du nom
Du grec calyx, calice, temn, je coupe : le calice se rompt circulairement et parat,
comme coup aprs la floraison[5].
Le genreCalycotome est caractrise par la fleur dont le calice ovode, couronn par
5 petites dents, compltement clos dans le bourgeon et se rompant circulairement par
le milieu au moment de la floraison ; tendard dress, carne recourbe ; style arqu ;
gousse comprime, suture ventrale largie et troitement aile de chaque cot,
graines non caroncules[6].
Les plantes de ce genre sont trs-pineuse, feuilles 3 folioles, fleurs jaunes.
Lespce spinosa, sujet de notre travail, est un arbrisseau de 1 2 mtres, tige
dress, rameaux pineux, divariqus, fortement stris, glabrescents; feuilles
noircissant par la dessiccation, folioles subsessiles, obovales, obtuses, glabres en
dessus, poils appliqus en dessous; stipules trs petites ; fleurs solitaires ou
fascicules par 2-4; pdicelles 2-3 fois plus longs que le calice, portant au sommet une
bracte bi-trifide ordinairement plus longue que large; carne aigu; gousse de 30-40
15
mm, sur 6-8, glabre, luisante et noire la maturit, suture suprieure seule un peu
aile, bord droit ; 3-8 graines. Lieux arides, surtout siliceux et montriueux de la
rgion mditerranenne ; Corse ; trs commun en Algrie[7].
Utilisation
Les gents sont capables grce aux nodosits sur leur racines, de fixer lazote
atmosphrique et denrichir le sol en produits azots. Les ruminants vitent cette
plante cause de ses pines [5].
Classification scientifique [8]
Royaume
Plante
Division
Magnoliophyta
Classe
Magnoliopsida
Ordre
Fabales
Famille
Fabaceae
Sous-famille Papilionoideae
(Faboideae)
16
Fruit de Calycotome spinosa
Figure I.1 :Photographie de Calycotome spinosa(L.) Link
Nous notons que cette espce se rattache beaucoup la deuxime et la seule
plante du mme genre dite : Calycotome villosa (voir figure I.2 et I.3).
Genre Calycotome
Espces C.spinosa
17
Figure I.2 :Calycotome villosaFigure I.3 :Calycotome spinosa
I.1.4 Etudes chimiques sur la famille des Fabaces
La famille des Fabaceae est extrmement riche en flavonodes, et celle
desPapilionaces est caractrise par la prsence disoflavones, de
rtinodesdanthocyanines et de flavonol glycosyls[9].
I.I.5 Les travaux antrieurs sur la phytochimie du genre Calycotome
Un trs peu dtude de lextrait chloroformique des parties ariennes deCalycotome
spinosa, a permis de dcrire deux flavonodes [10] (figures I.4 et I.5)
HO
OH
O
O
O
OH
O
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
OH
Figure I.4 :ChrysinFigure I.5 :7-O-(-D-glucopyranoside)chrysin
Calycotome villosa : est une espce voisine duCalycotome spinosa. Cest un arbuste
pineux 30-150 cm affichant fleurs jaunes au printemps qui pousse surtout dans le
nord de l'Afrique et l'Espagne [11].
18
Ltude de lextrait mthanolique des parties ariennes de Calycotome villosa, a
permis de dcrire trois composs dont deux flavonodes glycosides, et le 1-
Hydroxymethyl-6,7-dimethoxyisoquinoline-N-oxide [12] (figures I.6, I.7 et I.8).
H
3
CO
H
3
CO
N
O
1
2
3
4
4a
5
6
7
8
8a
OH
Figure I.6 : 1-Hydroxymethyl-6,7dimethoxyisoquinoline-N-oxide
O
OH
O
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
OH
Figure I.5 : 7-O-(-D-glucopyranosyl)chrysin
19
O
OH
O
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
O C
O
H
3
C
Figure I.7:7-O--D-[(6''-actyl)glucopyranosyl]chrysin
20
II
L escompossflavonoidiques
21
22
II.1 Les Flavonodes
Le terme flavonode est driv du mot grec flavus qui veut dire jaune [13]. Il
rassemble une trs large gamme de composs naturels appartenant la famille des
polyphnols, leur fonction principale semble tre la coloration des plantes (voir
tableau II.1).
Ils sont surtout abondants chez les plantes suprieures particulirement dans certaines
familles : Polygonaces, Rutaces, Lgumineuses, Ombellifres et Composes, mais
ils peuvent galement se trouver dans le rgne animal, les glandes scrtion
odorifrante du castor, le propolis des abeilles (la Chrysine, la Querctine, la
Galangine) et dans les ailes des papillons [14, 15].
Les flavonodes sont prsents dans les vacuoles sous forme dhtrosides, dont
lapartie osidique est frquemment le glucose ou le Rhamnose [16]. Ils jouent un
rleimportant dans les processus biologiques. Ils rglent la croissance de la plante
parinhibition dacide actique de lAuxin Indolyl Excytosis, et par
numrationdexpression du gne, et ils peuvent influer galement et de manire
diffrente surdautres cellules biologiques.
La concentration en flavonodes est maximale dans les organes jeunes et dans les
tissus externes et ariens car la lumire stimule leur biosynthse.
Tableau II.1: La couleur de quelques classes des flavonodes
Flavonodes Couleur Rfrences
Flavones, flavonols Jaune [14, 15]
Flavonones Incolore
Jaune
[14, 15]
Flavononols Ivoire [14, 15]
Isoflavones Ne prennent pas une seule
couleur
[15]
Chalcones et Aurones Jaune [14, 15]
Anthocyanidines Rouge en milieu acide
Bleu en milieu alcalin
Violette, mauve, rose
[17]
23
Dans l'industrie pharmaceutique, la recherche de nouvelles herbes mdicinales
contenant des composs flavonoidiques a beaucoup servi comme point de dpart pour
le dveloppement de drivs intressants [18].
Les flavonodes sont un groupe de composs polyphnoliques, avec des structures
chimiques diversifies et caractristiques. Plus de 4000 flavonodes diffrents
appartiennent des classes flavonodes incluant les flavonols, flavones, flavanones,
catechins, anthocyanidines, isoflavones, dihydroflavonols, et chalcones [19, 20]. Les
flavonodes font partie de l'alimentation humaine: nous les retrouvons dans les fruits
(citron), les lgumes et les boissons (th, caf, etc.) [20].
II.3.1 Classes des Flavonodes
On a dj recens plus de 4000 flavonodes diffrents, essentiellement dans les fruits
et les lgumes (voir tableau II.2) [21]. Les six classes des flavonodes (flavanones,
flavones, flavonols, isoflavones, anthocyanines et flavanes) varient dansleurs
caractristiques structurelles par la diversit fonctionnelle autour deloxygnation de
lhtrocycle (voir tableau II.3) [22].
Types daliments Flavonodes /100 g
Fruits : Cerise, raisin, pomme, pche 20-30 mg
Lgumes : Epinards, laitue, cleri,
chou
10-20 mg
Lgumes secs : Fve, haricot, pois
colors
0,5-1 mg
Autres aliments : Cacao (fve de
Calabar), th, gland, chtaigne
20-30 mg
Plantes mdicinales : Thym, origan,
menthe, romarin
10-20 mg
Tableau II.2 : Principales sources des flavonodes
Flavones, Flavonols :Ils reprsentent 80% des flavonodes connus, le noyau A est
substitu par deux hydroxyles phnoliques en C-5 et C-7 libres ou estrifis. Le noyau
24
B est dans 80% des cas substitu en 4ou di substitu en 3et 4ou encore tri substitu
en 3, 4et 5. Les positions 2, 6ne sont quexceptionnellement substitus [24]. Les
substituants sont des groupes OH ou OCH3 [23]. La diffrence essentielle entre les
flavones et les flavonols est la prsence dune oxygnation en C-3 dans les flavonols
(voir figure II. 9) [14].
O
O
1
2
3
4
5
6
7
8
1'
2'
3'
4'
5'
6'
R
1
R
2
A
B
O
O
1
2
3
4
5
6
7
8
1'
2'
3'
4'
5'
6'
R
1
R
2
OH
Flavone Flavonol
Figure II.9: Flavone,Flavonol
Tableau II.3: Diffrentes classes des flavonodes
Flavonodes 3 5 6 7 8 2 3 4 5 6
Flavones
ApignineDiosmtine
Lutoline
H
H
H
OH
OH
OH
H
H
H
OH
OH
OH
H
H
H
H
H
H
H
OH
OH
OH
OMe
OH
H
H
H
H
H
H
FlavonolsFistine
Kaempfrol
Morine
Myrictine
Querctine
OH
OH
OH
OH
OH
H
OH
OH
OH
OH
H
H
H
H
H
OH
OH
OH
OH
OH
H
H
OH
H
H
H
H
H
H
H
OH
H
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
H
H
H
OH
H
H
H
H
H
H
Isoflavones
Dadzine
Genstine
Orobol
H
H
H
H
OH
OH
H
H
H
OH
OHO
H
H
H
H
H
H
H
H
H
OH
OH
OH
OH
H
H
H
H
H
H
Flavanones
Hesprtine
Liquiritgnine
Naringnine
H
H
H
OH
H
OH
H
H
H
OH
OH
OH
H
H
H
H
H
H
OH
H
H
OMe
OH
OH
H
H
H
H
H
H
Flavanols
Taxifoline OH OH H OH H H OH OH H H
25
Il y a deux flavones communes, lapignine et la lutoline (et leur drivs)
schmatiss dans la figure II.10, ils peuvent tre reconnus sur le chromatogramme du
forestal comme tches marron sombres qui virent au jaune vert ou jaunissent en
employant le gaz ammoniaque fumant comme agent de rvlation.
O
O
1
2
3
4
5
6
7
8
1'
2'
3'
4'
5'
6'
HO
OH
OH
O
O
1
2
3
4
5
6
7
8
1'
2'
3'
4'
5'
6'
HO
OH
OH
OH
Apigenine Lutoline
Figure II. 10 : Les flavones : Apigenine et Luteoline
Il y a environ 34 flavones rares qui peuvent tre convenablement rpartis en cinq
classes dont les reprsentants sont : 5-hydroxyflavone, Baicalein, 2-
hydroxyflavone,C-methylflavone, 5, 6, 7, 8-tetrahydroxyflavone. La plupart dentre
Anthocyanidines
Cyanidine
Delphinidine
MalvidinePelargonidi
ne
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
H
H
H
H
OH
OH
OH
OH
H
H
H
H
H
H
H
H
OH
OH
OMe
H
OH
OH
OMe
H
H
OH
OMe
H
H
H
H
H
Chalcones
Buteine
Okonine
OH
OH
H
H
H
H
H
H
H
H
OH
OH
H
OH
OH
OH
H
H
H
H
Aurones
Maritimetine
Leptosidine
H
H
H
H
OH
OH
OH
OMe
H
H
H
H
OH
OH
OH
OH
H
H
H
H
Biflavonodes
Amentoflavone H OH H OH H H H OH H H
Htrosides
flavoniques
Lecontine
Cytisoside
O-glu
H
H
OH
H
H
OH
OH
H
C-glu
H
H
H
H
OH
OMe
H
H
H
H
26
elles ont des spectres dabsorption U.V. caractristiques [14]. Une condensation de
lactate malonate et lacide cinnamique est ltape cl de la biosynthse de certains
composs flavoniques [24, 26].
Flavanones (figure II. 11) :Ces molcules sont caractrises par labsence de la
double liaison entre C2-C3 et par la prsence dun centre dasymtrie, elle ne
comporte pas le groupement OH en position C3[24].
O
O
1
2
3
4
5
6
7
8
1'
2'
3'
4'
5'
6'
R
2
R
3
R
1
H
Figure II. 11 : Flavanone
Isoflavones (figure II. 12) :elles sont considres comme des drivs des
flavones, elles ont le squelette du 3-phnylchromane comme la Gnisteine 5, 7, 4-
trisubstitus. Les substituants sont des groupements OH [14]. Les isoflavonoides
reprsentent une sous-classe importante et trs distinctive des flavonodes. Ils ont une
distribution trs limite dans le royaume des plantes et ils sont restreints la sous-
famille Papilionoide des lgumineuses[27].
O
O R
2
R
1
R
3
R
1
=R
2
=R
3
=OH Gnisteine
27
Figure II. 12 : Isoflavone
Chalcones, aurones (figure II. 13) :Les chalcones sont dpourvues de
lhtrocycle central. Elles sont caractrises par la prsence dun chanon tricarbone
ctonique.
Le noyau B est assez frquemment non substitu. Les Aurones sont caractriss par
une structure de 2-benzylidne-coumaranone [23].
R
1
O
O
R
2
O
R
1
1
2
3
4
5
6
1'
2'
3'
4'
5'
6'
Figure II. 13 : Chalcone, Aurone
Biflavonodes :Les flavonodes peuvent se lier les uns aux autres, en particulier par
leurs carbones, 6 ou 8 ils se forment alors un dimre, un biflavonode. La majorit des
biflavonodes naturels sont des dimres de flavones et de flavanones, par exemple
lamentoflavone (figure II. 14). Les deux units en question peuvent tre ou non du
mme type (biflavones, biflavanones, flavone, flavonone) [23].
28
O
O
H
OH
HO OH
O
O
OH
Figure II. 14 : Amentoflavone
Les anthocyanidines :Leur structure commune est caractrise par le cation
flavylium (figure II.15) (2-phenylbenzo-pyrylium) portant des fonctions hydroxyles
et/ou mthoxyles [23]. Les sucres sont pratiquement toujours fixs en position 3 ce
qui est indispensable la stabilit de la molcule. Les anthocyanidines naturels
peuvent tre classes en trois sous groupes : Pelargonidine, cyanidine et delphinidine
[23].
O
+
Figure II.15 : Ion flavylium
Htrosides flavonodiques (figure II.16) :La partie osidique peut tre mono,
di ou trisaccharidique. Les monosaccharides sont forms avec le D-glucose, mais
aussi avec le D-galactose, avec des pentoses ou avec des acides D-
glucuroniques et Dgalacturonique.
29
Les liaisons entre la gnine et lose peuvent se faire par lun des hydroxyles
phnoliques de la gnine. Mais en rgle gnrale, ce sont surtout lhydroxyl en 7 des
flavones et lhydroxyl en 3 des flavonols qui sont impliqus [23].
H
OH
O
O
OH
OH
Ose
O
Figure II.16 : Htroside flavonodique
II.3.2 Biosynthse des Flavonoides
Les composs phnoliques forment un trs vaste ensemble de substances. Llment
structural fondamental qui les caractrise est la prsence dau moins un noyau
benznique auquel est directement li au moins un groupe hydroxyle, libre ou engag
dans une autre fonction (par exemple, ther, ester, etc.).
Les composs phnoliques vgtaux sont issus de deux grandes voies daromagense
:
1- la voie la plus courante (voir figure II.17) est celle qui, via le Shikimate (lacide
Shikimique), conduit lacide Benzoque, Lignanes, Coumarines, flavonoides, etc.;
2- lautre voie part de lactate-malonate et conduit par condensation repte des
systmes aromatiques (par exemple, Chromones, Isocoumarines, Quinones, etc.);
La pluralit structurale des composs phnoliques due cette double origine
biosynthtique est encore accrue par la possibilit, trs frquente, dune participation
simultane du Shikimate et de lactate llaboration de composs dorigine mixte (
flavonoides, Stilbnes, Xanthones, etc.) [24].
Les flavonoides sont des pigments de la plante issus du mtabolisme secondaire qui
sont synthtiss partir de la phnylalanine. La biosynthse de ces derniers prsente
30
un intermdiaire commun (figure II.18), une ttrahydroxychalcone partir de laquelle
se diffrencient plusieurs types de composs dont les plus importants sont les
anthocyanes et les flavones [28]. Par ailleurs, la 4, 2,4,6-ttrahydroxychalcone,
forme par la chalcone synthase partir du malonyl-CoA, un prcurseur de la voie
actate-malonate, et du 4-coumaroyl-CoA, issu de la voie Shikimate (figure II.18).
Les flavonodes peuvent ensuite tre modifis par des ractions
dhydroxylation,mthylation, glycosylation et acylation [28].
31
COO
-
OH
OH HO
COO
-
OH
O COO
-
COO
-
OH
COO
-
O
Quinones
HO
COOH
O O
HO
Shikimate Chorismate
Acide-coumarique
Coumarine
Flavonoides
Figure II.17 : Voie Shikimate de la biosynthse des composs
Phnoliques
32
Figure II.18 : Biosynthse des Flavonodes [29]
33
II.3.3 Le Rle Bioactif des Flavonoides
Le rle des flavonodes dans le monde vgtal sinscrit dans un contexte trs large de
relations entre une plante et son environnement assures par des mtabolites
secondaires.
Leur rle attractif ou rpulsif des pollinisateurs est attribu la couleur, la forme,
lodeur et le got des fleurs. Les flavonodes sont avec les chlorophylles et les
carotnodes les principaux facteurs de la coloration des plantes, et des ailes des
papillons car ils agissent comme
co-pigments.
Actuellement, il y a un intrt gnral pour les effets dittiques des polyphnols sur
la sant humaine.Ils jouent un rle important pour piger les radicaux libres qui sont
responsables dun grand nombre de maladies dgnratives (elseimer, parkinson) [30]
mais galement dans les mcanismes lis lapparition du cancer [30, 31]. En plus de
la forte activit antioxydant in vitro de beaucoup de ces composs (4-oxo-flavones,
anthocyanes, flavanes), ils semblent pouvoir jouer un rle intressant dans la
prvention des maladies cardio-vasculaires : rle des polyphnols associs aux fibres
dans llimination du cholestrol, oxydation des lipoprotines de faible
densit(L.D.L), circulation sanguine [32, 33].
Les voies dlimination du cholestrol dans lorganisme sont trs particulires,
puisque ce compos est limin par la voie fcale sous forme de strols neutres ou
acides (sels biliaires). Une ingestion suffisante de fibres alimentaires favorise
llimination. En plus, les catchines du th ou les tanins du raisin inhibent
labsorption intestinale du cholestrol. Il a t aussi dmontr que la rutine augmentait
significativement lexcrtion fcale de lacide biliaire [32].
Les flavonoides sont susceptibles de ragir avec la plupart des espces ractives
oxygnes. En fait, leur activit anti radicalaire ncessite :
La structure ortho-diphnolique du cycleB, qui est essentielle lactivit des
flavonoides possdant un htrocycle satur;
La double liaison C2-C3 conjugue avec la fonction 4-oxo, qui est responsable
de la dlocalisation dlectrons stabilisant le radical aroxyl;
Les hydroxyles en positions C-3 et C-5 dans le cycle A, qui permettent une
activit anti radicalaire maximale.
34
Les trois lments de structure dcrits ci-dessus, sont des pigeurs efficaces des
radicaux hydroxyles et peroxydes particulirement impliqus dans la peroxydase
lipidique. Les L.D.L. oxydes dclenchent la prolifration des cellules de la paroi
artrielle et attirent des cellules sanguines (monocycles qui se transforment en
macrophages). La modification oxydative qui touche au dpart les acides gras
(peroxydase), peuvent aussi altrer les apoprotines des L.D.L. Les flavonodes
possdent un caractre antioxydant qui peut chelater les mtaux et moduler lactivit
de nombreuses enzymes, en protgeant les L.D.L. vis vis de loxydation ainsi quen
intervenant au niveau des plaquettes et de la cholestrolmie [32].
Les flavonodes pourraient avoir un rle bnfique sur divers paramtres de la
circulation sanguine. Etant donn le rle des plaquettes dans le dveloppement de
lathrosclrose et dans linitiation de la thrombose, il est intressant de noter que les
flavonodes sont des inhibiteurs de ladhsion, lagrgation et de la scrtion
plaquettaires. Un autre aspect important concerne le rle des flavonodes sur la
rsistance et la permabilit vasculaire [32].
Limpact des flavonodes sur les parois vasculaires, ainsi que leurs proprits anti-
inflammatoires, sont lorigine de lutilisation en thrapeutique, comme
vasculoprotecteurs et veino-toniques des diverses flavonodes naturels ou de synthse
[32].
Les tudes ralises in vitro ou in vivo sur lanimal suggrent que les flavonodes
pourraient agir tous les stades de la cancrogense. Au cours de la phase dinitiation, ils
pourraient empcher ltablissement de la lsion gnotoxique par divers mcanismes : par
une inhibition des mono oxygnases hpatiques impliques dans l'activation des
mtabolique des pro carcinognes et /ou une activation des enzymes de conjugaison du
foie qui sont responsables de la dtoxification des xno biotiques, par un pigeage direct
du carcinogne, ou encore par une stimulation de ljection des carcinognes hors de la
cellule [32]. Dautre part, les flavonoides inhibent la croissance des lignes cellulaires
cancreuses en interfrant avec les mcanismes de transduction des signaux mitognes ou
par dautres mcanismes. [32].
Donc, les flavonodes sont des composs biologiquement actifs, possdant une
activit chimio-prventive potentielle contre une large varit de maladies chroniques
35
[31-34]. Citons par exemple lapignine qui est un flavonoide dittique prsent de
faon abondante dans les fruits et les lgumes et possdant une prvention
thrapeutique contre plusieurs maladies cardiovasculaires ainsi que le cancer [35].
Dautres flavonodes commelEriodictyol, leKaempfrol, laLutoline, larutine et la
Taxifoline sont bnfiques pour les cellules des neurones contre le stress oxydatif [36-
37].
Certains flavonodes (Querctine, Genistine, etc.) prsentent des effets anti-tumeurs
in vitro et inhibent le dveloppement du cancer chimio-induit chez lanimal. Cest
pourquoi leur participation dans la prvention des cancers avec dautres
micronutriments pourrait expliquer les effets protecteurs des fruits et des lgumes [16,
36, 38]. Les isoflavones et flavones pourraient tre plus particulirement impliqus
dans la prvention du cancer [16, 30, 39].
II.3.4 Etude Chimique des Flavonodes
II.3.4.1 Chromatographie
Les flavonodes sont prsents dans la partie arienne de la plante. La sparation des
ces composs est ralise par les mthodes chromatographiques telles que :
Chromatographie sur colonne : Cette mthode reste la technique la plus
utilise pour la sparation des produits isols premire purification et la
sparation des produits isols.
Les supports utiliss communment pour la sparation des flavonodes sont le gel de
silice, lalumine, la cellulose, le polyamide, le sephadex, etc. Ces adsorbants sont
utiliss selon la spcificit des produits flavonoidiques.
Chromatographie sur papier (Whatman) : C'est une technique qui convient
pour la sparation des mlanges complexes de tous les types de flavonodes et
leurs glycosides.
Chromatographie prparative sur couches minces : Cest une technique
voisine de la chromatographie sur papier, elle est galement utilise pour la
sparation et la purification, son avantage est la rapidit et la sensibilit.
II.3.4.2 Spectroscopie UV
La spectroscopie de l'absorption U.V. [40, 41] est largement utilise dans l'analyse
structurale des flavonodes. Ses avantages majeurs sont:
36
seulement une toute petite quantit de matire est exige pour lanalyse.
le matriel est disponible dans la plupart des laboratoires.
un grand taux d'information structuralement utile est produit.
la plupart des flavones et flavonoles expose deux bandes dabsorption
majeures: la premire bande -I est produite dans le rang 320-385 nm, la
seconde bande -II dans le rang 250-285 nm.
II.3.4.3 Spectromtrie de Masse
La spectromtrie de masse (EI) des flavonodes (aglycones) est un outil valide qui sert
la dtermination de leurs structures [41-42]. La plupart des flavonodes donnent des
fragments dions molculaires intenses. Gnralement, les flavonodes aglycones
montrent un pic majeur de [M-H] + et [M-CH3]+ lorsquil est mthoxyl. La
fragmentation la plus emprunte pour lidentification du flavonode est celle qui
implique la rupture du cycle A et cycle B (voir figure II.19).
37
O
O
voie-1
+
O
C
A
1
+
+
O
.
.
.
+/or
C
B
1
+
.
HC
voie-2
O
O
+
.
+
.
+ O C C H
C
O
+
B
2
+
Figure II.19 : Fragmentation des Flavones
38
III
39
III.1 Introduction
Les mthodes spectroscopiques sont utilises pour la caractrisation des produits
chimiques. Parmi les techniques utilises pour les composs organiques, la
spectromtrie de masse (MS) et la rsonance magntique nuclaire (RMN) sont les
plus frquentesainsi que la spectroscopie Infrarouge (IR).
Dans ce chapitre, nous prsentons les protocoles exprimentaux et dtermines les
structures des composs isols.
Les composs et les protocoles exprimentaux sont classs par ordre croissant par
rapport au numro que nous leur attribuons dans le chapitre suivant.
III.2 Extraction
La planteCalycotome spinosaa t rcolte entre les mois de mai et de juin, la plante
a t sche labri du soleil.
III.2.1 Macration
Un poids de 1 Kg de la plante sche a subi durant 24h. Une macration et lixiviation
dans un systme de solvant (MeOH/ H2O, 80/20: v/v) temprature ambiante. La
solution obtenue aprs filtration et concentration en ajoutant de leau distille (300ml)
a subi une extraction liquide- liquide avec des solvants organiques suivants:
L'ther de ptrole (3x500 ml), aprs concentration sec, lextrait brut obtenu a
eu une masse de 3g.
Le chloroforme (3x500 ml), aprs concentration sec, l'extrait brut obtenu est
dune masse de17g.
Le n-butanol (3x500 ml), aprs concentration sec, lextrait brut obtenu est de
30g.
Les diffrentes tapes de cette extraction sont rcapitules dans la figure III.20.
40
Protocole:
Filtration
Parties ari ennes de
Calycotome spinosum
(1 kg)
Macration dans le mthanol/eau (80/20 : v/v)
pendant 24h trois fois.
Poudre
vgtal
Extraits runis
Evaporation presque sec
Phase aqueuse
Extrait
theroptrolique 3g
Extrait
chloroformique
17g
Extrait butanolique
30g
Phase eau rsiduelle
Extraction
liquide-liquide
Evaporation sec
41
Figure III.20: Extraction des parties ariennes deCalycotome spinosa
III.2.2 Sparation
Des colonnes ouvertes sur gel de silice ont t utilises dans la premire et la seconde
tape de fractionnement des extraits chloroformique et butanolique.
Les systmes dlution utiliss taient composs de gradients Ether de ptrole/Actate
dthyle et Chloroforme/Mthanol pour lextrait chloroformique et
Chloroforme/Mthanol pour lextrait butanolique dans des proportions dtermines au
pralable sur couche mince avant la sparation.
A-Extrait chloroformique :
Une colonne chromatographique a t utilise pour la sparation de 10g de la phase
chloroformique avec le systme dlution Chloroforme/Mthanol. Elle a conduit 12
fractions de A1 jusqu A12. Les 2 fractions concernes par notre tude ont t
obtenu avec un systmes dlution de 5% et 10% comme lindique la figure III.21.
Figure III.21 : Etude de lextrait chloroformique
B- Extrait butanolique :
Une colonne chromatographique a t utilise pour la sparation de 10g de la phase
butanolique avec le systme dlution Chloroforme/Mthanol donnant naissance 13
fractions (de C1 jusqu C13, voir figure III.22).
Extrait
chloroformique
10g
Colonne gel de Silice
Chloroforme/Mthanol
12 Fractions :
A1 A12
Fractions tudies :
Fractions A3 (5%)
+A4 (10%) 4500mg
42
Figure III.22 : Etude de lextrait butanolique
III.2.3 Purification
Les analyses par chromatographie sur couches minces (CCM) sont effectues avec
desplaques de gel de silice. Aprs dveloppement, les plaques sontobserves sous
lampe UV 254 et 366 nm. Pour le cas de lextrait chloroformique.
Les plaques sont ensuite rvles par la vanilline sulfurique etchauffes jusqu
apparition de tches de diverses couleurs. Notons que la purificationde certaines
fractions a ncessit dautres colonnes chromatographiquesde gel de silice. Les dtails
de cette phase concernant les deux extraits sontprsents dans ce qui suit :
A- Extrait chloroformique :
Les fractions A3et A4 (4500mg) ont t spare sur colonne de gel de silice avec le
mlange Ether de ptrole/Actate dEthyle comme luant pour la premire fois, elle
donne les sous-fractions A1 A17. Les fractions A13, A14, A15 et A16 montrant
les mmes taches au vu de lanalyse CCM et de masse gale 650mg, ont t
rassembles puis soumises une seconde chromatographie sur colonne de gel de
silice. Llution ralise avec un mlange de solvants dichloromthane/mthanol des
diffrents gradients, a permis dobtenir 9 fractions (B1 B9).
Une prcipitation dans le mlange Ether de ptrole/ Actate dEthyle (50/50) de la
fraction B8 a permis dobtenir le composM2 ltat pur (6 ,3 mg).
Extrait
butanolique
10g
Colonne gel de Silice
Chloroforme/Mthanol
13 Fractions :
C1 C13
Fractions tudies :
Fraction C12
(50%)
4490mg
43
La fraction B5 a t purifie sur plaques prparatives de gelde silice dans le systme
dlutiondichloromthane/mthanol (93/7) eta abouti au composM3 de poids 5mg.
Une deuxime prcipitation dans le mlange Ether de ptrole/ Actate dEthyle
(50/50) de la fraction B6 a permis dobtenir le composM4 ltat pur (5,4 mg).
B- Extrait butanolique :
La fraction C12 (4,49g) est spare sur colonne en utilisant le systme dlution
chloroforme/mthanol pour obtenir les sous fraction (C1 C6).
Une prcipitation de la fraction C5 dans le Mthanol a donn le compos M1
ltat pur (11 mg).
III.3 Dtermination de structure des composs isols
III.3.1 Identification du produit M1 :
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
HO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
Figure III.23 : 7-O-(-D-glucopyranosyl)chrysin
Spectre IR :
Le spectre IR indique la prsence de groupement hydroxyle (3400 cm
-1
), carbonyle
(1600 cm
-1
) et aromatique entre (1400 et 1500 cm
-1
).
44
Figure III.24 :Spectre IR du compos M1
La dtermination de la structure du compos isol M1, en se basant sur les
spectresRMN-1H, RMN-13C et Dept135, indiquent la prsence de 21 atomes de
carbones (voir tableau III.4).
Lanalyse du spectre RMN-13C (figure III.26) montre :
Six signaux CH o
C
95.45 (C-8), 100.15 (C-6), 129.64 (C-3,5) et 126.98
(C-2,6), caractristiques dun squelette flavonol,
Cinq signaux CH o
C
100.31 (C-1), 73.54 (C-2), 77.63 (C-3), 69.98 (C -
4), 76.87 (C-5) et un CH
2
61.03 ppm (C-6) caractristiques des
carbones du glucose,
Un autre signal o= 182.66 ppm (C-4), caractristique dun carbone
carbonyl,
Deux signaux o
C
161.57 (C-5) et 163.65 (C-7) caractristiques des carbones
oxygnes.
3400
OH
1600
CO
1400-1500
Cycles
aromatiques
45
Figure III.25: Spectre RMN
13
C J-modul du compos M-1
O-CH
2
46
Figure III.26: Spectre RMN
13
C du compos M-1
Ltude du spectre RMN-1H du composM1 (Tableau III.4, Figure III.27) a permis
de mettre en vidence la prsence de:
Dun flavonode et a montr des signaux o 7.06 (1H, s) 6.87 (1H, d) et 6.47
(1H, d) typique de C-3, C-8 et C-6 protons d'un squelette flavone,
Les dplacements chimiques de 8,08 (d, H2, H6), 7.6 (m, H3,H5) et 7.66
(H4) suggre quil n'ya pas de substitution dans le noyau B du flavonode
Un proton comme singulet o =12.8ppm a t attribu au C-5 hydroxyle,
Quatre protons entre 3.17 et 3.47ppm indiqu la prsence dun fragment de
glucose,
Le signal 5.08 ppm t affect au proton anomre avec une constante de
couplage (J 8 Hz) indiquant une configuration . [43]
CH
2
C''-4
C-2''
C-4
C-2
C-7
C-5
C-9
C-5''
C-3''
C-8
C-6
C-1''
C-3
C-10
C-4'
C-1'
C-3',5'
C-2',6'
47
Figure III.27: Spectre RMN
1
H du compos M-1
Tableau III.4 : Les rsultats RMN 1H, 13C et Dept de M1
Position RMN
1
H ppm Multiplicit RMN 13C ppm Dept
C-2 --- --- 164.16 C
C-3 7.06 s 105.92 CH
C-4 --- --- 182.66 C
C-5 --- --- 161.57 C
OH
H2',6'
H3',5',4'
H3
H8
H6
H1''
H3'
48
C-6 6.47 d (J= 4 Hz) 100.15 CH
C-7 --- --- 163.65 C
C-8 6.87 d (J= 4 Hz) 95.45 CH
C-9 --- --- 157.57 C
C-10 --- --- 106.05 C
C-1 --- --- 131.04 C
C-2 8.08 d (J= 12 Hz) 126.98 CH
C-3 7.6 m 129.64 CH
C-4 7.66 m 132.7 CH
C-5 7.6 m 129.64 CH
C-6 8.08 d (J= 12 Hz) 126.97 CH
C-1 5.08 d (J= 8 Hz) 100.31 CH
C-2 3.28 m 73.54 CH
C-3 3.44 m 77.63 CH
C-4 3.17 tl (J= 12 Hz) 69.98 CH
C-5 3.47 m 75.87 CH
C-6 Ha: 3.73
Hb: 4.60
m 61.03 CH
2
49
Par ailleurs, le spectre COSY
1
H-
1
H (figure III.28) montre lexistence des
corrlationssuivantes :
Le proton H-6 (=6.47 ppm) et le proton H-8 (=6.87 ppm).
Les deux protons H-3', H-5' (=7.6 ppm) et les protons H -2', H-6'
(=8.08 ppm).
Le proton anomre H-1'' (=5.08ppm) et les protons H-2'' (3.28ppm).
Le proton H-6''a (3.47ppm) et le proton H-6''b (3.73ppm).
Figure III.28: Spectre COSY H-H du compos M1
Ltude despectre de corrlation htro nuclaire HSQC (Figure III.29 et 30) a
conduit ltablissement des connections gminales RMN-
1
H-
13
C du compos M1 a
ainsi pu tre dmontr que les protons mthylniques localiss =3.73 ppm et
=4.60 ppm ont lis au carbone situ =61.03 ppm. Le spectre a montr galement
une corrlation entre le proton =5.08 ppm et le carbone situ =100.31 ppm
permettant le positionnement de ce carbone en C1''. Il a ainsi pu tredmontr que les
H6',2'/H3',5''
H1''/H2''
H6/H8
H6'a'/H6''b
50
protons H2'', H3'', H4'' et H5'' ont lisrespectivement aux carbones C2'' (73.54ppm),
C3'' (77.63ppm), C4'' (69.98ppm) et C5'' (75.87ppm).
Le spectre a montr respectivementdes corrlations entre les protons H3, H6 et H8 et
les carbones C3 (105.92ppm), C6 (100.15ppm) et C8 (95.45ppm).
Le spectre a montre des couplages directs entre:
-les protons H-2', H-6' et leur carbones C-2' (126.98ppm), C-6' (126.98ppm).
- Les protons H-3', H-5' et leur carbones C-3' C-5' rsonant o=126.64 ppm.
-Le proton H4' et son carbon C4' resonant o=132.7 ppm.
H6''a-C6'' H6''b-C6''
H4''-C4''
H2''-C2''
H3''-C3''
H5''-C5''
51
Figure III.29:Spectre HSQC du compos M1 (partie glucose)
Figure III.30:Spectre HSQC du compos M1 (partie flavone)
Ltuude de spectre de corrlation htro nuclaire observes longue distance
HMBC (Figure III.31, 32, 33) a montr la corrlation entre le proton o= 5.08ppm
(H1''), et le carbone situ o=163.65ppm (C7) confirmant que le glycose est attach
au carbone C7, les corrlations entre le proton o=7.06ppm et les carbone C1'
(131.04ppm), C2 (164.16ppm) et C4 (182.66ppm), ainsi que les correlations entre le
proton o=6.87ppm (H8) et les carbone situ o=100.31ppm (C1''), o=157.57ppm
(C9) et o=163.65 (C7). Une autre corrlation des protons o=8.08ppm avec le
carbone C2 o=164.16ppm (Voir tableau III.5)
H1''-C1''
H8-C8
H6-C6
H3-C3
H2',6'-C2',6'
H3',5'-C3',5'
H4'-C4'
52
O
O OH
O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
2'
3'
4'
5'
6'
H
H
H
1'
H
H
H
H
H
H
1"
H1''-C7 H6-C7 H8-C7
H8-C9
H6-C5
H2',6'-C2 H3-C2
H3-C4
H3-C1'
H6-C8
H8-C6
H2',6'-C4'
H4'-C2',6'
H3',5'-C3',5'
53
Figure III.31: Spectre HMBC du compos M1(partie flavone)
Figure III.32: Spectre HMBC du compos M1 (partie glucose)
H3''-C2''
H4''-C2''
H2''-C1''
C6-OH
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
HO
2"
3"
4"
5"
6"
O
1"
OH
1
4
5
6
7
8
9
10
H
H
54
Figure III.33: Spectre HMBC du compos M1partie flavone)
Tableau III.5: Corrlation HMBC et COSY (400MHz, DMSO)
Proton HMBC COSY
H6 C5, C7, C8 H6, H8
H8 C1'', C7, C9 H6, H8
H2',6' C2, C4' H2', H6', H3', H5'
H3',5'
H4'
C3', C5'
C2', C6'
H2', H6', H3', H5'
---
H1'' C7 H1'', H2''
H2'' C1'' H1'', H2''
H3'' C2'' ---
H4'' C2'' ---
H5'' --- ---
H6''a
H6''b
---
---
H6''a, H6''b
H6''a, H6''b
Ainsi, les spectres RMN-1H et RMN-13C a suggr que le compos M1 et un
aglycone Chrysin. De plus la corrlation entre H-1 (o=5.08) et le carbone C-7
(o=163.6) dans le spectre HMBC confirm que la glucosylation a lieu dans la position
7.
55
Sur la base des donns ci-dessus et la comparaison avec les valeurs de la littrature
pour les composs analogues, la structure de M1 a t tablie comme un flavonode
connu 7-O-(-D-glucopyranosyl)chrysin (figure III.23). Ses caractristiques sont en
bon accord avec ceux rapports dans la littrature sur un chantillon isol partir des
fleurs deSpartium junceum [44] et un chantillon synthtis par Dangles et al. [45]
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
HO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
Figure III.23 : 7-O-(-D-glucopyranosyl)chrysin
III.3.2 Identiication du produit M2
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
C
O
H
3
C
7"
8"
Figure III.35 : 7-O--D-[(6''-acetyl)glucopyranosyl]chrysin
Spectre IR :
56
Les donnes spectrales en IR sont identiques au compos M1. La diffrance entre les
deux spectres cest la prsence dune fonction ester (1700 cm
-1
).
Figure III.36 :Spectre IR du compos M2
La dtermination de la structure du compos isol M2, en se basant sur les specters RMN-
1
H, RMN-
13
C et Dept135, indiquent la prsence de23 atomes de carbones dont (Voir le
tableau III.6)
Lanalyse du spectre RMN-13C (figure III.37) montre :
Six signaux CH o
C
95.48 (C-8), 100 (C-6), 129.63 (C-3,5) et 126.93
(C-2,6), caractristiques dun squelette flavonol,
Cinq signaux CH o
C
100.14 (C-1), 73.43 (C-2), 76.63 (C-3), 70.22
(C -4), 74.31 (C-5) et un CH
2
63.81 ppm (C-6) caractristiques des
carbones du glucose,
Un autre signal o= 182.68 ppm (C-4), caractristique dun carbone
carbonyl,
Deux signaux o
C
161.55 (C-5) et 163.37 (C-7) caractristiques des carbones
oxygnes,
Deux signaux o=21.03ppm (CH
3
) et o =170.65 (CO) caractristiques d'un
groupement actyle.
1700 ester
1600 CO
3400
OH
1400-1500
Cycles
aromatiques
57
Figure III.36: Spectre RMN
13
C J-modul du compos M2
O-CH
2
CH
3
C3
C10
C2', C6
58
Figure III.37: Spectre RMN
13
C du compos M2
Ltude du spectre RMN-1H du composM2 (Tableau III.6, Figure III.38) a permis
de mettre en vidence la prsence de:
le spectre RMN-1H expos un modle de flavonodes et a montr des signaux
o 7.07 (1H, s) 6.85 (1H, d) et 6.46 (1H, d) typique de C-3, C-8 et C-6 protons
d'un squelette flavone,
Les dplacements chimiques de 8,08 (d, H2, H6) et 7.6 (m, H3, H4, H5)
suggre quil n'ya pas de substitution sur le noyau B du flavonode
Un proton comme singulet o =12.81ppm a t attribu au C-5 hydroxyle,
Quatre protons entre 3.17 et 4.36ppm indiquent la prsence dun fragment de
glucose,
Le signal 5.36 ppm t affect au proton anomre avec un constante de
couplage (J 8 Hz) indiquant une configuration . [43],
Trois protons comme singulet o =1.99 ppm indiqu la prsence dun
groupement CH
3.
Figure III.38: Spectre RMN
1
H du compos M2
C8''
C6''
C4''
C4
C2''
C5''
C3''
C8
C6
C1''
C3',5'
C1'
C4'
C9
C5
C7
C2
C7''
OH
H2',6'
H3',4',5'
H3
H3''
H8''
H8
H6
H1''
59
Tableau III.6 : Les rsultats RMN 1H, 13C et Dept de M2
Position RMN
1
H ppm Multiplicit RMN 13C ppm Dept
C-2 --- --- 164.15 C
C-3 7.07 s 105.93 CH
C-4 --- --- 182.68 C
C-5 --- --- 161.55 C
C-6 6.46 d (J= 4 Hz) 100 CH
C-7 --- --- 163.37 C
C-8 6.85 d (J= 4 Hz) 95.48 CH
C-9 --- --- 157.54 C
C-10 --- --- 106.12 C
C-1' --- --- 131 C
C-2' 8.08 d (J= 4 Hz) 126.93 CH
C-3' 7.6 m 129.63 CH
C-4' 7.64 m 132.72 CH
C-5' 7.6 m 129.63 CH
C-6' 8.08 d (J= 4 Hz) 126.93 CH
C-1'' 5.36 d (J= 8 Hz) 100.14 CH
C-2'' 3.31 m 73.43 CH
C-3'' 3.33 m 76.63 CH
C-4'' 3.17 m 70.22 CH
60
C-5'' 3.74 tl (J= 4 Hz) 74.31 CH
C-6'' H
a
: 4.08
H
b
: 4.36
dd (J= 12 Hz)
dd (J= 12 Hz)
63.81 CH
2
C-7'' --- --- 170.65 C
C-8'' 1.99 s 21.03 CH
3
Par ailleurs, le spectre COSY
1
H-
1
H (figure III.39, 40) montre lexistence des
corrlationssuivantes :
Le proton H-6 (=6.46 ppm) et le proton H-8 (=6.85 ppm),
Les deux protons H-3', H-5'(=7.6 ppm) et les protons H -2', H-6'
(=8.08 ppm),
Le proton anomre H-1'' (=5.36ppm) et les protons H-2'' (3.31ppm),
Le proton H-6''a (4.08ppm) et le proton H-6''b (4.36ppm),
Le proton H5'' (3.74ppm) et les deux protons H6''a et H6''b.
61
Figure III.39: spectre COSY du compose M2(partie glucose)
H5''-H6''a,H6''b
H6''a-H6''b
H1''-H2''
62
Figure III.40: spectre COSY du compose M2(partie flavone)
Ltude de spectre de corrlation htro nuclaire HSQC (Figure III.41 et342) a
conduit ltablissement des connections gminales RMN-
1
H-
13
C du compos M2 a
ainsi pu tre dmontr que les protons mthylniques localiss =4.08 ppm et
= 4.36 ppm ont lis au carbone=63.81 ppm. Le spectre a montr galement une
corrlation entre le proton = 5.36 ppm et le carbone=100.14 ppm permettant le
positionnement de ce carbone en C1''. Il a ainsi pu tredmontr que les protons H2'',
H3'', H4'' et H5'' ont lis respectivement aux carbones C2'' (73.43ppm), C3''
(76.63ppm), C4'' (70.22ppm) et C5'' (74.31ppm).
Le spectre a montr respectivement des corrlations entre les protons H3, H6 et H8 et
les carbones C3 (105.93ppm), C6 (100ppm) et C8 (95.48ppm).
Le spectre a montre les couplages directes entre:
- Les protons H-2', H-6' et leur carbones C-2' (126.93ppm), C-6' (126.93ppm).
- Les protons H-3', H-5' et leur carbones C-3' C-5' localiss o=129.63 ppm.
-Le proton H4' et son carbone C4' rsonant o=132.72 ppm.
H3',5'-H2',6'
H6-H8
63
-Les trios protons o= 1.99ppm taient attachs au carbone situ =21.03
ppmpermettant le positionnement de ce carbone en C8''.
Figure III.41: spectre HSQC du compos M2 (partie glucose)
C6''-H6''a
C6''-H6''b
C8''-H8''
C4''-H4''
C2''-H2''
C3''-H3''
C5''-H5''
64
Figure III.42: spectre HSQC du compos M2(partie flavone)
Ltude de spectre de corrlation htro nuclaire observes longue distance HMBC
(Figure III.43,44, 45) a montr la corrlation entre le proton o=5.12ppm (H1''), et le
carbone situ o=163.65ppm (C7) confirm que le glucose est li au carbone C7, la
corrlation entre les protons o=1.99ppm et le carbone situ o=170.65ppm confirm
la prsence d'un ester, ce dernier est corrler avec les deux protons o=4.08ppm
(H6''a) et o=4.36ppm (H6''b) confirm que le groupement ester est li au carbone C6''
du glucose. Les corrlations entre le proton o=7.06ppm et les carbone C1' (131ppm),
C2 (164.15ppm) et C4 (182.68ppm), ainsi que les corrlations entre le proton o=
6.85ppm (H8) et les carbones o=100.14ppm (C1''), o=157.54ppm (C9) et o=163.37
(C7). Une autre corrlation des protons
o=8.08ppm avec le carbone C2 o=164.15ppm. La corrlation entre le proton
o=12.81 (OH) et les carbones C6 (100ppm), C7 (163.37ppm) et C10 (106.12ppm)
(Voir tableau III.7)
C6-H6 C1''-H1''
C8-H8
C3-H3
C2',6'-H2',6'
C3',5'-H3',5'
C4'-H4'
65
Figure III.43: spectre HMBC du compos M2(partie glucose)
C7-H1''
C7''-H6''a
C7''-H6''b
C7''-H8''
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
C
O
2"
3"
4"
5"
6"
C
O
C
7" 8"
H
H
H
O
1"
7
H
H
66
Figure III.44: spectre HMBC du compos M2(partie flavone)
C8-H6
C10-H6
C5-H6
C6-H8
C10-H8
C9-H8
C7-H8
C10-H3
C1'-H3
C2-H3
C4-H3
C2',6'-H4'
C4'-H2',6'
C2-H2',6'
O
O OH
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
2'
3'
4'
5'
6'
H
H
H
1'
H
H
H
H
H
67
Figure III.45: spectre HMBC du compos M2(partie flavone)
Tableau III.7: Corrlation HMBC et COSY (400MHz, DMSO)
OH-C6
OH-C10
OH-C7
O
O OH
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
68
Proton HMBC COSY
H-3 C-2, C-4, C-10, C-1' ---
H-6 C-5, C-8, C-10 H-6, H-8
H-8 C-6, C-7, C-9, C-10 H-6, H-8
H-2' C-2, C-4' H-2', H-3', H-5', H-6
H-3' --- H-2', H-3', H-5', H-6
H-4' C2'; C6' ---
H-5' --- H-2', H-3', H-5', H-6
H-6' C-2, C-4' H-2', H-3', H-5', H-6
H-1'' C-7 H-1'', H-2''
H-2'' --- H-1'', H-2''
H-3'' --- ---
H-4'' --- ---
H-5'' --- H-5'', H-6''a, H-6"b
H-6''a
H-6''b
C-7''
C-7''
H-6''a, H-6"b
H-6''a, H-6"b
H-8'' C-7'' ---
Sur la base de ces rsultats, nous attribuons donc ce compos la structure de la
figure III.43 qui celle du 7-O--D-[(6''-actyl)glucopyranosyl]chrysin
69
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
C
O
H
3
C
7"
8"
Figure III.35 : 7-O--D-[(6''-acetyl)glucopyranosyl]chrysin
III.3.3 Identification du produit M3
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
C
O
H
3
C
7"
8"
OCH
3
Figure III.46 : 7-O--D-[(6''-acetyl)glucopyranosyl]acacetin
Spectre IR :
Le compos M3 prsente les mmes caractristiques spectrales que le compos M2.
70
Figure III.47 :Spectre IR du compos M3
Les spectres RMN-
1
H, RMN-
13
C et Dept135 du compos M-3, indiquent la prsence
dun mlange de trois produits.
Lanalyse des spectres de proton et de carbone-13 du compos M3 indique une
similitude structurale avec le compos M2 au niveau des cycles A, C, et le glucose.
Le spectre RMN
13
C(figure III.50) rvle la prsence de :
Sept carbones quaternaires dont trois oxygns et deux groupement carbonyle
o=170.93 ppm et o =183.44ppm,
Sept signaux CH aromatique,
Le Dept indique la prsence dun carbone mthylne et un mthyle (figure
III.43),
Cinq signaux CH entre 64.31 et 101.32 indiquent la prsence dun glucose,
Un CH
3
o=20.76ppm
Lanalyse du spectre RMN-13C (figure III.49, 50) montre :
3400
OH
1700 Ester
1600 CO
1400-1500
Cycles
aromatique
71
Six signaux CH o
C
94.00 (C-8), 95.91 (C-6), 130.08 (C-3,5) et 127.37 (C-
2,6), caractristiques dun squelette flavone,
Cinq signaux CH o
C
101.31 (C-1), 74.53 (C-2), 77.80 (C-3), 71.26 (C -
4), 75.26 (C-5) et un CH
2
64.31 ppm (C-6) caractristiques des
carbones du glucose,
Un autre signal o= 183.44 ppm (C-4), caractristique dun carbone
carbonyl,
Trois signaux o
C
162.84 (C-5),164.44 (C-7) et 163.69 (C4) caractristiques
des carbones oxygnes,
Deux signaux o=20.77ppm (CH
3
) et o =170.93 (CO) caractristiques d'un
groupement actyle.
Figure III.48: Spectre RMN
13
C J-modul du compos M-3
CH
3
OCH
2
72
Figure III.49: Spectre RMN
13
C (partie glucose) du compos M-3
C2
C4
C6
C5
C3
73
C9
C5
C2
C7
C7
C4
C8
C1
C6
C3
C1
C2,6
C3,5
C4
C10
74
Figure III.50: Spectre RMN
13
C (partie flavone) du compos M-3
Ltude du spectre RMN-1H du compos M3 (Tableau III.8, Figure III.51, 52) a
permis de mettre en vidence la prsence de:
D'un flavonode et a montr des signaux o 6.48 (1H, s) 6.11 (1H, d) et 6.04
(1H, d) typique de C-3, C-8 et C-6 protons d'un squelette flavone,
Les dplacements chimiques de 8,09 (d, H2, H6) et 7.63 (m, H3, H5)
suggre quil ya une substitution sur le noyau B du flavonode
Un proton comme singulet o =12.85ppm a t attribu au C-5 hydroxyle,
Quatre protons entre 3.55 et 4.48ppm ont indiquant la prsence dun fragment
de glucose,
Le signal 5.16 ppm t affect au proton anomre avec un constante de
couplage (J 8 Hz) indiquant une configuration . [43],
Trois protons comme singulet o =2.08 ppm indiqu la prsence dun
groupement CH
3.
Figure III.51: Spectre RMN
1
H (partie glucose) du compos M-3
H8
H5
H4 H6a
H6b
H1
75
Figure III.52: Spectre RMN
1
H (partie flavone) du compos M-3
Tableau III.8: Les rsultats RMN 1H, 13C et Dept de M3
Position RMN
1
H ppm Multiplicit RMN 13C ppm Dept
C-2 --- --- 163.69 C
C-3 6.48 s 106.43 CH
C-4 --- --- 183.44 C
C-5 --- --- 162.98 C
C-6 6.03 d (J= 4 Hz) 95.91 CH
C-7 --- --- 164.44 C
C-8 6.11 d (J= 4 Hz) 94.00 CH
C-9 --- --- 158.51 C
C-10 --- --- 107.06 C
C-1' --- --- 119.08 C
C-2' 8.07 d (J= 8Hz) 127.37 CH
OH
H6
H2,6
H3,5
H8
H3
76
C-3' 7.36 d (J= 8Hz) 115.68 CH
C-4' --- --- 163.69 C
C-5' 7.36 d (J= 8Hz) 115.68 CH
C-6' 8.07 d (J= 8Hz) 127.37 CH
C-1'' 5.16 d (J= 8 Hz) 101.32 CH
C-2'' 3.55 m 74.53 CH
C-3'' 3.58 m 77.80 CH
C-4'' 3.53 m 71.20 CH
C-5'' 3.89 m 75.26 CH
C-6'' H
a
: 4.19
H
b
: 4.48
d (J= 4Hz)
d(J= 4 Hz)
64.31 CH
2
C-7'' --- --- 170.65 C
C-8'' 2.08 s 20.77 CH
3
Par ailleurs, le spectre COSY
1
H-
1
H (figure III.53) montre lexistence des
corrlationssuivantes :
Les deux protons H-3', H-5'(=7.63 ppm) et les protons H -2', H-6'
(=8.09 ppm),
Le proton anomre H-1'' (=5.16ppm) et les protons H-2'' (3.55ppm),
Le proton H-6''a (4.19ppm) et le proton H-6''b (4.48ppm),
Le proton H5'' (3.89ppm) et les deux protons H6''a et H6''b.
77
Figure III.53: spectre COSY du compose M-3
Ltude de spectre de corrlation htro nuclaire HSQC (Figure III.54, 55) a conduit
ltablissement des connections gminales RMN-
1
H-
13
C du compos M3 a ainsi pu
tre dmontr que les protons mthylniques localiss =4.19 ppm et
= 4.48 ppm ont lis au carbone=64.31 ppm. Le spectre a montr galement une
corrlation entre le proton = 5.16 ppm et le carbone=101.32 ppm permettant le
positionnement de ce carbone en C1''. Il a ainsi pu tredmontr que les protons H2'',
H3'', H4'' et H5'' ont lis respectivement aux carbones C2'' (74.53ppm), C3''
(77.80ppm), C4'' (71.20ppm) et C5'' (75.26ppm).
H2,6-H3,5
H1-H2
H6a-H6b
H5-H6a,H6b
78
Le spectre a montr respectivement des corrlations entre les protons H3, H6 et H8 et
les carbones C3 (100.71ppm), C6 (95.91ppm) et C8 (94.00ppm).
Le spectre a montre les couplages directes entre:
- Les protons H-2', H-6' et leur carbones C-2' (127.37ppm), C-6' (127.37ppm).
- Les protons H-3', H-5' et leur carbones C-3' C-5' localiss o=130.08 ppm.
Figure III.54: spectre HSQC (partie glucose) du compos M-3
C6''-H6''a C6''-H6''b
C5''-H5''
C4''-H4''
C2''-H2''
C3''-H3''
79
Figure III.55: spectre HSQC (partie flavone) du compos M-3
Ltude de spectre de corrlation htro nuclaire observes longue distance HMBC
(Figure III.56,57) a montr la corrlation entre le proton o=5.16ppm (H1''), et le
carbone situ o=164.44ppm (C7) confirm que le glucose est li au carbone C7, la
corrlation entre les protons o=2.08ppm et le carbone situ o=170.93ppm confirm
la prsence d'un ester, ce dernier est corrler avec le proton o=4.19ppm (H6''a)
confirm que le groupement ester est li au carbone C6'' du glucose. Les corrlations
entre le proton o=7.36ppm et les deux carbones C2et C6 (127.37ppm), ainsi que
les corrlations entre les protons o=8.07ppm (H2,H6) et le carbone o=165.20ppm
(C2).
Le carbone quaternaire oxygn C4 163.69 ppm prsente sur le spectre HMBC
(Figure III.51) une grande tache de corrlation (
3
J) avec les protons 3.84ppm dont le
carbone 56.37 (OMe) selon le spectre HSQC.
La valeur J =0.8 de constante de couplage permet de placer le mthoxy en C4
correspondant unepara-substitution.
C1''-H1''
C6-H6
C8-H8
C3-H3
C3',5'-H3',5'
C2',6'-H2',6'
80
Figure III.56: spectre HMBC (partie glucose) du compos M-3
H8-C7
C4- OMe
H6a-C7
H6a- C5
H1- C7
H3- C2
H2,6- C2
1'
2'
3'
4'
5'
6'
O
H
H
H
81
Figure III.57: spectre HMBC (partie flavone) du compos M-3
Lensemble de ces observations conduit la structure du7-O--
D[(6''acetyl)glucopyranosyl]acacetinconfirme par ailleurs par les comparaisons avec
les donnes de la littrature pour ce compos. [45-46,47] (figure III.46).
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
C
O
H
3
C
7"
8"
OCH
3
Figure III.46 : 7-O--D-[(6''-acetyl)glucopyranosyl]acacetin
III.3.4 Identification du produit M4:
O
OCH
3
OCH
3
O
1
2
3 4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
HO
OH
Figure III.58 : 7-3-dihydroxy-5,4-dimthoxyflavanone
82
La dtermination de la structure du compos isol M4, en se basant sur les spectres
RMN-
1
H, RMN-
13
C et Dept, indiquent la prsence de17 atomes de carbones dont
(Voir le tableau III.9):
Huit signaux carbones quaternaires dont quatre oxygns et un groupement
carbonyle ppm et o =188.09ppm,
Six signaux CH aromatique,
Le Dept indique la prsence dun CH
2
et deux OMe (figure III.59).
Lanalyse du spectre RMN-13C (figure III.60) montre :
Six signaux CH o
C
96.70 (C-8), 94.11 (C-6), 115.71 (C-5) et 120.37(C-6)
caractristiques dun squelette flavone,
Un signal o=188.09 ppm (C-4), caractristique dun carbone carbonyl,
Un autre signal o= 46.50 ppm (C-3), caractristique dun squelette
flavanone,
Quatre signaux o
C
163.75 (C-5), 165.72 (C-7), 147.81 (C-3) et 148.45
(C-4) caractristiques des carbones oxygnes.
Figure III.59: Spectre RMN
13
C J-modul du compos M-4
CH
2
OCH
3
OCH
3
83
Figure III.60: Spectres RMN
13
C du compos M-4
C3
4-OCH
3
5-OCH
3
C2
C8
C6
C2
C5
C6
C1
C4
C3
C4
C7
C9
C5
84
Ltude du spectre RMN-1H du compos M4 (Tableau III.9, Figure III.61, 62) a
permis de mettre en vidence la prsence de:
D'un flavonode et a montr des signaux o 2.58 et 2.99 (2H, dd), 6.06 (1H,d)
et 6.14 (1H, d) typique de C-3, C-8 et C-6 protons d'un squelette flavanone,
Six protons comme singulet o 3.80 et 3.88 ppm ont indiquant la prsence de
deux groupements OCH
3.
Les dplacements chimiques de 6.98 (ddd, H6), 6.86 (d, H5) et 7.16 (d,H2)
suggre quil y a des substitution sur le noyau B du flavonode.
Figure III.61: Spectres RMN
1
H du compos M-4
H3b
H3a
3H-OMe
85
Figure III.62: Spectres RMN
1
H du compos M-4
Tableau III.9: Les rsultats RMN 1H, 13C et Dept de M4
Position RMN
1
H ppm Multiplicit RMN 13C ppm Dept
C-2 5.34 dd (J=13.0, 2.9Hz) 80.00 CH
C-3 H
a
: 2.99
H
b
: 2.58
dd (J= 16.3, 13 Hz)
dd (J= 16.3, 2.9 Hz)
46.50 CH
2
C-4 --- --- 188.09 C
C-5 --- --- 163.75 C
C-6 6.14 d (J= 2.2Hz) 94.11 CH
C-7 --- --- 165.72 C
C-8 6.06 d (J= 4 Hz) 96.70 CH
C-9 --- --- 164.89 C
C-1 --- --- 131.91 C
H2
H8
H6
H5
H6
H2
86
C-2' 7.16 d (J=2Hz) 111.15 CH
C-3' --- --- 147.81 C
C-4' --- --- 148.45 C
C-5' 6.86 d (J= 8.1Hz) 115.71 CH
C-6' 6.98 ddd(J=8.1,2,0.5 Hz) 120.37 CH
5-OMe 3.88 s 56.39 CH
3
4-OMe 3.80 s 56.08 CH
3
Par ailleurs, le spectre COSY
1
H-
1
H (figure III.63) montre lexistence des
corrlationssuivantes :
Le proton H-3a (=2.99 ppm) et le proton H-3b (=2.58 ppm),
Le proton H-3a (=2.99 ppm) et le proton H-2 (=5.34 ppm),
Le proton H-6 (=6.14 ppm) et le proton H-8 (=6.06 ppm),
Le proton H-5 (=6.86 ppm) et le proton H-6 (=6.98 ppm),
87
Figure III.63: spectres COSY du compose M-4
Ltude de spectre de corrlation htro nuclaire HSQC (Figure III.64, 65) a conduit
ltablissement des connections gminales RMN-
1
H-
13
C du compos M4 a ainsi pu
tre dmontr que les protons mthylniques localiss =2.58 ppm et
=2.99 ppm est lis au carbone=46.50 ppm. Le spectre a montr galement une
corrlation entre le proton =5.34 ppm et le carbone = 80 ppm. Il a ainsi pu
H8-H6
H5-H6
H3a-H3b
H3a-H2
88
tredmontr que les protons H2', H5', et H6'ont lisrespectivement aux carbones C2'
(111.15ppm), C5' (115.71ppm), et C6' (120.37ppm).
Le spectre a montr respectivement des corrlations entre les protons, H6 et H8 et les
carbones C6 (94.11ppm) et C8 (96.70ppm).
Le spectre a montre les couplages directes entre:
Les trios protons o= 3.80ppm taient attachs au carbone situ =56.08 ppm.Les
trios protons o=3.88ppm taient attachs au carbone situ =56.39 ppm.
Figure III.64: spectre HSQC du compos M-4
C3-H3a
C3-H3b
89
Figure III.65: spectre HSQC du compos M-4
Ltude de spectre de corrlation htro nuclaire observes longue distance HMBC
(Figure III.66) a montr la corrlation entre le proton o= 2.99ppm (H3a), et le
carbone situ o=131.91ppm (C1), la corrlation entre les protons o=3.80ppm et
3.88ppm et les carbones situ o=163.75ppmet 148.45ppm confirm que les deux
mthoxy lie aux carbones C5 et C4, ainsi que les corrlations entre le proton o=
6.86ppm (H5) et les carbones o= 131.91ppm (C1'), o=148.45ppm (C4). (Voir
tableau III.10)
C2-H2
C6-H6
C8-H8
C2-H2
C6-H6
C5-H5
90
O
OCH
3
OCH
3
O
H
H
H
1
2
3 4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
Figure III.66: spectre HMBC du compos M4
C1-H3a C1-H5
C4-OMe C4-H5
C5-OMe
91
Tableau III.10: Corrlation HMBC et COSY (400MHz, Actone-d6)de
M4
Proton HMBC COSY
H-3a
H3b
C-1'
---
H-3a, H-3b
H-3a, H-3b
H-2 --- H-2, H-3a
H-6 --- H-6, H-8
H-8 --- H-6, H-8
H-5' C1, C4 H-5', H-6'
H-6' --- H-5', H-6'
Sur la base de ces rsultats, nous attribuons donc ce compos la structure de la
figure III.58 qui celle du 7-5-dihydroxy-5,4-dimthoxyflavanone.Ces rsultats sont
conformes aux donnes de la littrature [48, 49, 50]
O
OCH
3
OCH
3
O
1
2
3 4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
HO
OH
Figure III.58 : 7-3-dihydroxy-5,4-dimthoxyflavanone
92
III
93
IV.1 Introduction
L'analyse de la composition des extraits bruts, des diffrentes fractions et sous-
fractions a t ralise par les techniques chromatographiques usuelles (CCM, CC).
De la mme faon, l'identification structurale des composs isols s'appuie pour
l'essentiel sur les techniques spectroscopiques suivantes: IR, RMN, SM.
IV.2 Matriel Vgtal
La planteCalycotome spinosaa t rcolte durant le mois de mai 2007. la plante a t
suspendue pour schage pendant plusieurs jours lextrieur, mais labri de la
lumire directe du soleil. La plante a t identifi par le professeur Bachir Oudjehih
de linstitut dAgronomie et vtrinaires de Batna.
IV.3 Mthodes Physico-chimiques
IV.3.1 Spectres de Masse (MS)
Les spectres de masse des produits isols ont t enregistrs sur un spectromtre de
masse (waters Q-TOF2), du centre de recherche cole nationale suprieure de chimie
de RENNES Avenue du gnral Leclerc Campus de Beaulieu France.
IV.3.2 Spectres de Rsonance Magntique Nuclaire (RMN)
Les spectres RMN ont t mesurs 400 MHz (1H) et 100 MHz (13C) avec des
spectromtres : Avance 400 du modle Brucker AMX-400.
Le spectre DEPT, ainsi que les expriences bidimensionnelles COSY,HSQC, HMBC
et HMQC, ont t enregistrs laide de squences impulsionnelles spcifiques
fournies par Brucker. Les chantillons ont t dissous dans des solvants deutrs
DMSO-D6 ou Actone-D6. Les dplacements chimiques oont t exprims en ppm
par rapport au signal du ttramthylsilane (TMS), utilis comme rfrence interne.
IVI.3.4 Chromatographies
IV.3.4.1 CHROMATOGRAPHIE SUR COUCHE MINCE (CCM)
94
Les CCM sont effectues au moyen de couches minces (0.2 mm d'paisseur) avec gel
de silice 60 F254 indicateur de fluorescence sur aluminium (Merck) ou sur verre.
Aprs lution dans le solvant donn, et selon les cas, les plaques sont rvles par une
lampe UV (254 nm et/ou 366 nm) puis par rvlation laide de la vanilline
sulfurique. Les plaques sont ensuite chauffes jusqu apparition de tches de diverses
couleurs sur la plaque CCM.
IV.3.4.2 CHROMATOGRAPHIE SUR COLONNE (CC)
Des colonnes ouvertes sur gel de silice (60-230mesh) ont t utilises dans la
premire ou seconde tape de fractionnement de lextrait chloroformique et n-
butanolique. La taille des colonnes, la granulomtrie de la phase solide, le dbit de la
phase mobile et la taille des fractions ont t adapts la quantit et la nature des
chantillons sparer. Le choix des conditions dlution, le suivi de la sparation et le
rassemblement final des fractions ont t effectus sur la base danalyses par CCM.
IV.4 Mthodes de fractionnement et de Purification
Aprs avoir sch la plante lair libre, la partie arienneest extraite pour leur faire
subir initialement la phase de macration et lixiviation dans laquelle nous procdons
la prparation des extraits bruts de plante. Ensuite, dans un deuxime temps, les
extraits bruts sont fractionns par des mthodes chromatographiques puis
ventuellement purifis.
IV.4.1 Extrait chloroformique
Lextrait chloroformique (10g), a t prfractionn surcolonne de silice
(CHCl3 100% 100%MeOH). Aprs analyse sur CCM, 12fractions ont t obtenues.
Les rsultats obtenus sont prsents dans le tableau suivant :
95
Tableau IV.9 : Fractionnement de lextrait choloroformique de
C.spinosa
Fractions Eluant de colonne Observation sur CCM
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
Chloroforme
//
Chloroforme/Mthanol
99/1
//
97/3
//
95/5
//
90/10
//
80/20
//
70/30
//
60/40
//
//
Nant
//
//
//
//
//
//
//
Une tache
//
2 taches
//
//
//
//
Une tache
//
96
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
//
50/50
//
//
30/70
//
//
//
90/10
//
Mthanol
//
//
//
//
//
Traine
//
//
//
//
//
Les fractions prsentant le mme profil CCM sont runies pour donner 12 fractions
notes A-1 A-12 selon le tableau suivant :
Fractions Fractions collectes Masse en mg Observation sur CCM
97
A-1
A-2
A-3
A-4
A-5
A-6
A-7
A-8
A-9
A-10
A-11
A-12
1-2
3-6
7-8
9-10
11-12
13-14
15
16
17-22
23-26
27
2
337.2
1000
2500
2000
1023
541.1
299.3
462
200
332.5
261
538
Nant
Plusieurs taches
//
//
//
//
//
//
//
//
//
3 taches
Tableau IV.10 : Rassemblement des fractions de lextrait
chloroformique
IV.4.1.1. Purification
Etude de (A-3+A-4)
Une sparation par colonne normale de gel de silice a t ralise sur le mlange des
deux fractions A-3 et A-4 (4500mg) (EP 100% AcOEt 100%), puis par mthanol
100%.
17 sous-fractions (A1 A17) ont t obtenues selon le tableau suivant :
98
Sous-fractions Eluant (colonne) Poids mg Observation sur CCM
A1
A2
A3
A4
A5
A6
A7
A8
A9
A10
A11
A12
A13
A14
A15
A16
A17
Ether de ptrole
//
EP/AcOEt
97/3
95/5
90/10
//
80/20
70/30
65/35
//
55/45
30/70
//
Actate dthyle
//
Mthanol
//
Nant
//
//
//
Une tache
Plusieurs taches
Une tache
Nant
Plusieurs taches
//
//
//
//
//
//
//
Plusieurs taches +
traine
Tableau IV.11 : fractionnement de (A-3 +A-4)
99
Les quatre fractions (A13, A14, A15 et A16)montrant les mmes taches au vu de
lanalyse CCM et de masse gale 650mg, ont t rassembles puis soumises une
chromatographie sur colonne de gel de silice. Llution ralise par un mlange de
solvants dichloromthane/mthanol de diffrents gradients, a permis dobtenir 9
fractions (Tableau IV.12 ).
Fractions Eluant Poids (mg) Observation sur CCM
B-1
B-2
B-3
B-4
B-5
B-6
B-7
B-8
B-9
Dichloromthane
//
//
Dichloromthane/mthanol
99.5/0.5
//
//
99/1
98/2
Mthanol
Nant
//
//
//
2 taches
4 taches
3 taches
//
3 taches +traine
Tableau IV.12 : fractionnement de (A13, A14, A15 et A16)
Une prcipitation dans le mlange Ether de ptrole/ Actate dEthyle (50/50) de la
fraction B8 a permis dobtenir le composM2 ltat pur (6 ,3 mg). La CCM de ce
100
dernier montre la prsence dune tache visible 254nm se rvlant en couleur jaune
lacide sulfurique et aprs chauffage.
La fraction B5 soumis une purification sur plaques prparatives de gel de silice
normale dans le systme d'lution (CH
2
Cl
2
/MeOH: 93/7) a abouti lisolement de
produit M3de masse 5 mg.L'examen CCM montre la prsence dune tache visible
254nm se rvlant encouleur jaune la vanilline sulfurique et aprs chauffage.
Une prcipitation dans le mlange Ether de ptrole/ Actate dEthyle (50/50) de la
fraction B6 a permis dobtenir le composM4 ltat pur (5,4 mg). La CCM de ce
dernier montre la prsence dune tache visible 254nm se rvlant encouleur jaune
la vanilline sulfurique et aprs chauffage.
VI.4.2 Extrait butanolique
Une colonne chromatographique a t utilise pour la sparation de 10g de la phase
butanolique avec le systme dlution Chloroforme/Mthanol donnant naissance 27
fractions (voir le tableau IV.13).
Tableau IV.13 : fractionnement de lextrait butanolique
Fractions Eluant de colonne Observation sur CCM
1
2
3
4
5
6
7
Chloroforme
//
Chloroforme/Mthanol
99/1
//
97/3
//
95/5
Nant
4 taches
3 taches
2 taches
Une tache
2 taches+traine
Traine
101
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
//
90/10
//
80/20
//
70/30
//
60/40
//
//
//
50/50
//
//
30/70
//
//
//
90/10
Mthanol
//
//
//
Une tache +traine
//
Nant
Traine
//
//
//
//
//
//
//
//
//
Une tache +traine
//
Nant
//
102
Les fractions qui montrent les mmes taches au vu de lanalyse CCM, ont t
rassembles donnant naissance 13 fractions (de C1 jusqu C13, voir tableau IV.14).
Fractions Fractions collectes Masse en mg Observation sur CCM
C-1
C-2
C-3
C-4
C-5
C-6
C-7
C-8
C-9
C-10
C-11
C-12
C-13
1-2
3-5
6-8
9-10
11
12
13
14-15
16-19
20-21
22-24
25
26-27
62.4
50
125.2
368.8
646.2
724.6
1466
1634
1528
626.7
1022
4494
7
Nant
4 taches
2 taches
Traine
//
//
//
//
//
//
Une tache +traine
//
Nant
Tableau IV.14 : Rassemblement des fractions de lextrait butanolique
IV.2.1. Purification
Etude de C-12
103
La fraction C-12 (4494 mg) est spare sur colonne de gel de silice en utilisant le
systme dlution chloroforme/mthanol (10% CHCl
3
/MeOH 100% MeOH) pour
obtenir les sous fraction (C1 C6) selon le tableau suivant :
Fractions Eluant de colonne Masse en mg Observation sur CCM
C1
C2
C3
C4
C5
C6
CHCl
3
/MeOH
90/10
80/20
70/30
//
//
Mthanol
13.9
34.9
205.8
141.9
116
48.9
Nant
//
Traine
//
Une tache +traine
Nant
Tableau IV.15 : fractionnement de C-12
Une prcipitation de la fraction C5 dans le Mthanol a donn le compos M1
ltat pur (11 mg). La CCM de ce dernier montre la prsence dune tache visible
254nm se rvlant en jaune lacide sulfurique et chauffage.
IV.4.3. Cmposs isols de lespce Calycotome spinosa
IV.4.3.1. Compos M1
Formule brute: C
21
H
20
O
9
104
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
HO
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
Nom systmatique:7-O-(-D-glucopyranosyl)chrysin
Poids du produit: 6,3 mg
Comportement chromatographique :
- Rf =0,5 (systme dlution : CHCl3-MeOH 85-15 v/v)
- Visible sous la lumire UV
- Coloration avec la vanilline sulfurique : jaune
- Pf=213-215C
-Aspect: poudre jaune
Spectre RMN
1
H (400 MHz, CD
3
OD, TMS):
7.06 (1H, s, H-3)
6.47 (1H, d, H-6)
6.87 (1H, d, H-8)
8.08 (2H, d, H-2', H-6')
7.6 (2H, m, H-3', H-5')
7.66 (1H, m, H-4')
5.08 (1H, d, H-1'')
3.28 (1H, m, H-2'')
3.34 (1H, m, H-3")
3.17 (1H, tl, H-4")
3.42 (1H, m, H-5")
105
3.51 (1H, m, H-6"a)
3.73 (1H, m, H-6"b)
Spectre RMN
13
C (100 MHz, DMSO, TMS)
164.16 (C-2); 105.92 (C-3); 182.66 (C-4); 161.57 (C-5); 100.15 (C-6); 163.65 (C-7);
95.45 (C-8); 157.57 (C-9); 106.05 (C-10); 131.04 (C-1'); 126.98 (C-2', C-6'); 129.64
(C-3', C-5'); 132.7 (C-4'); 100.31 (C-1"); 73.54 (C-2"); 77.63 (C-3"); 69.98 (C-4");
76.87 (C-5"); 61.03 (C-6").
IV.4.3.2. Compos M2
Formule brute:C
23
H
22
O
10
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
C
O
H
3
C
7"
8"
Nom systmatique:7-O--D-[(6"-acetyl)glucopyranosyl]chrysin
Poids du produit:11mg
Comportement chromatographique :
- Rf =0,4 (systme dlution : CH
2
Cl
2
-MeOH 93-7 v/v)
- Visible sous la lumire UV
106
- Coloration avec la vanilline sulfurique : jaune
- Pf=229-231C
-Aspect: poudre jaune
Spectre RMN
1
H :( 400 MHz, CD
3
OD , TMS):
7.07 (1H, s, H-3)
6.46 (1H, d, H-6)
6.85 (1H, d, H-8)
8.08 (1H, d, H-2', H-6')
7.6 (1H, m, H-3', H-5')
7.66 (1H, m, H-4')
5.36 (1H, d, H-1'')
3.31 (1H, m, H-2'')
3.33 (1H, m, H-3")
3.17 (1H, m, H-4")
3.74 (1H, t, H-5")
4.08 (1H, dd, H-6"a)
4.36 (1H, dd, H-6"b)
1.99 (3H, s, H-8")
Spectre RMN
13
C (100 MHz, DMSO, TMS)
164.15 (C-2); 105.93 (C-3); 182.68 (C-4); 161.55 (C-5); 100 (C-6); 163.37 (C-7);
95.48 (C-8); 157.54 (C-9); 106.12 (C-10); 131 (C-1'); 126.93 (C-2', C-6'); 129.63 (C-
3', C-5'); 132.72 (C-4'); 100.14 (C-1"); 73.43 (C-2"); 76.63 (C-3"); 70.22 (C-4");
74.31 (C-5"); 63.81 (C-6"); 170.65 (C-7"); 21.03 (C-8").
IV.4.3.3. Compos M3
Formule brute:C
23
H
23
O
11
107
O
O OH
O
O
H
HO
H
HO
H
H
OH
H
O
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
1"
2"
3"
4"
5"
6"
C
O
H
3
C
7"
8"
OCH
3
Nom systmatique:7-O--D-[(6''-acetyl)glucopyranosyl]acacetin
Poids du produit:5mg
Comportement chromatographique :
- Rf =0,5 (systme dlution : CH
2
Cl
2
-MeOH 93-7 v/v)
- Visible sous la lumire UV
- Coloration avec la vanilline sulfurique : jaune
-Aspect: poudre jaune
Spectre RMN
1
H :( 400 MHz, Actone-d6, TMS):
6.48 (1H, s, H-3)
6.03 (1H, d, H-6)
6.11 (1H, d, H-8)
8.07 (1H, d, H-2', H-6')
7.36 (1H, m, H-3', H-5')
5.16 (1H, d, H-1'')
3.55 (1H, m, H-2'')
3.58 (1H, m, H-3")
3.53 (1H, m, H-4")
108
3.89 (1H, H-5")
4.19 (1H, d, H-6"a)
4.48 (1H, d, H-6"b)
2.08 (3H, s, H-8")
Spectre RMN
13
C (100 MHz, Actone-d6, TMS)
165.20(C-2); 106.43 (C-3); 183.44 (C-4); 162.98 (C-5); 96.91 (C-6); 164.44 (C-7);
94.00 (C-8); 158.51 (C-9); 107.06 (C-10); 119.08 (C-1'); 127.37 (C-2', C-6'); 115.68
(C-3', C-5'); 163.69 (C-4'); 101.32 (C-1"); 74.53 (C-2"); 77.80 (C-3"); 71.20 (C-4");
75.26 (C-5"); 64.31 (C-6"); 170.93 (C-7"); 20.77 (C-8"); 56.37 (4-OMe).
IV.4.3.4. Compos M4
Formule brute: C
17
H
16
O
6
O
OCH
3
OCH
3
O
1
2
3 4
5
6
7
8
9
10
1'
2'
3'
4'
5'
6'
HO
OH
Nom systmatique:7-5-dihidroxy-5,4-dimthoxyflavanone
109
Poids du produit:5.4mg
Comportement chromatographique :
- Rf =0,3 (systme dlution : CH
2
Cl
2
-MeOH 93-7 v/v)
- Visible sous la lumire UV
- Coloration avec la vanilline sulfurique : jaune
-Aspect: poudre jaune
Spectre RMN
1
H :( 400 MHz, Acetone-d6, TMS):
5.34 (1H, dd, H-2)
2.99 (1H, dd, H-3a)
2.58 (1H, dd, H-3b)
6.14 (1H, d, H-6)
6.06 (1H, d, H-8)
7.16 (1H, d, H-2')
6.86 (1H, d, H-5')
6.98 (1H, ddd, H-6')
3.80 (3H, s, 4-OMe)
3.88 (3H, s, 5-OMe)
Spectre RMN
13
C (100 MHz, Actone-d6, TMS)
80.00 (C-2); 46.50 (C-3); 188.09 (C-4); 163.75 (C-5); 94.11 (C-6); 165.72 (C-7);
96.70 (C-8); 164.89 (C-9); 131.91 (C-1'); 111.15 (C-2'); 147.81 (C-3'); 148.45 (C-4');
115.71 (C-5); 120.37 (C-6); 56.08 (4-OCH
3
); 56.39 (5-OCH
3
).
110
Rsum
Les vertus mdicinales attribues aux plantes orientent les chercheurs sur la prsence
de principes actifs. Ces molcules qui proviennent du mtabolisme secondaire des
plantes, sont utilises par lhomme dans son arsenal thrapeutique. Dans ce contexte,
la phytochimieaborde la biogense des constituants actifs, leur isolement, et ltude de
leur structure chimique. Les recherches menes autour de cette thse rentrent dans ce
cadre et sintressent particulirement ltude phytochimique de lespce
Calycotome spinosa qui peut avoir une utilisation thrapeutique. Lobjectif du prsent
travail est la dtermination des structures des molcules isoles partir de cette
plante.
Dans le premier chapitre de cette thse, une description botanique de la plante,est
donne en se rattachant surtout leur compositionchimique. Le deuxime chapitre est
consacr la prsentation des caractristiquesbiosynthtiques des principaux
composs flavonoidiques quonretrouve dans la plante tudie. La synthse de
plusieurs donnes bibliographiques concernantces produits naturels a constitu une
partie importante de ce chapitre. Le troisime chapitre concerne lidentification et la
111
dtermination des structures de certains composs isols en utilisant des techniques
spectrales de pointe, telles que la RMN- 1H, RMN-13C, etc. Dans le quatrime
chapitre sont reports les protocoles et les techniques danalyses utiliss et toutes les
caractristiques spectrales des produits isols.
Linvestigation phytochimique des extraits chloroformique et butanolique de la plante
Calycotome spinosaa t entreprise. Ltude effectue a abouti lisolement de quatre
composs, dont la structure a t tablie au moyen de mthodes spectrales (IR, RMN-
1H, RMN-13C, etc.). Des rfrences bibliographiques ont t requises pour la
confirmation des structures dtermines.
Mots cls : phytochimie, Calycotome spinosa, composs flavoniques, RMN- 1H,
RMN-13C.
112
ABSTRACT
The medicinal properties attributed to the plants orient the researchers to the presence
of active principles. These molecules originate from secondary plants metabolism, are
used by man in his arsenal therapeutic. In this context, phytochemistry deals with the
biogenesis of active constituents, their isolation and the study of their chemical
structure. Researches conducted around this thesis fit into this framework and are
particularly interested in the phytochemical study of the species Calycotome
spinosawhich may have a therapeutic use. The objective of this work is the
determination of the structures of molecules isolated from this
plant........................................................
In the first chapter of this thesis, a botanical description of the plant is given mainly
by relating to their chemical compositions. The second chapter is devoted to
presenting the main biosynthetic characteristics of flavonoid compounds found in the
studied plant. The synthesis of several bibliographic information on these natural
products has been an important part of this chapter. The third chapter concerns with
the identification and structure determination of some isolated compounds using
advanced spectral techniques such as 1H NMR, 13C NMR, etc. In the fourth chapter
protocols and analysis techniques used and all the spectral characteristics of the
isolated products are reported...
The phytochemical investigation of chloroform and butanol extracts of the plant
Calycotome spinosahas been undertaken. The study has led to the isolation of fort
compounds, which structure was established by spectral methods (1H NMR, 13C
NMR, etc.) Bibliographic references were required for confirmation of determined
structures.
Keywords: Phytochemistry, Calycotome spinosa, flavonoid compounds, 1H-NMR,
13C NMR.
113
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