PRACTICA NO 4 COLORACIONES ESPECIALES

I.

INTRODUCCIN

Algunas especies de bacterias Gram positivas : principalmente de los gneros Bacillus, Clostridium, Sporosarcina y Thermoactinomyces, disponen de una serie de estrategias adaptativas cuando se ven sometidas a privacin de nutrientes en su medio ambiente. Una de ellas es induciendo un proceso de diferenciacin celular que conduce a la produccin de una estructura especial: endospora, que es una forma de reposo, durmiente (criptobitica : metabolismo prcticamente detenido), y que es capaz de resistir una amplia gama de agentes agresivos ambientales, fsicos y qumicos. Estas observaciones ms detalladas de las estructuras de los microorganismos, tales como las esporas, capsulas, flagelos, y corpsculos metacromaticos, requieren de mtodos especiales en la utilizacin de tintes bsicos, como por ejemplo en la utilizacin de esporas los mtodos de tincin son ms complejos a diferencia de una tincin bacteriana simple.

II.

OBJETIVOS

Observa y diferenciar las estructuras microbianas tales como esporas, capsulas y otras cubiertas. Evidenciar las diferencias de los diversos tipos de coloracin.

III.

MARCO TEORICO

TINCIN DE CPSULAS
Algunas bacterias presentan una capa externa a la pared, ms o menos gruesa que envuelve la pared celular o de algunas bacterias, denominada cpsula. Est compuesta de polisacridos, mucopolisacridos o polipptidos. No es una estructura vital para la bacteria, de modo que es posible que bajo determinadas condiciones ambientales o del propio desarrollo genere cpsula y bajo otras no lo haga. Se ha comprobado que la presencia de cpsula dificulta de algn modo la fagocitosis de las bacterias, es decir las cpsulas constituyen un factor de virulencia de los microorganismos. A consecuencia de su elevado contenido en agua, se tien dbilmente por los colorantes. Hay dos tcnicas Hiss y tinta china.

Metodo de Hiss

Como reactivos se emplean solucin acuosa de cristal violeta 1% y solucin acuosa de sulfato de cobre 2%.Las cpsulas se observacin objetivo de inmersin y las cpsulas se visualizaran de azul plido y las bacterias de color prpura y el fondo claro. Tincin Negativa Es el reverso del procedimiento de tincin usual: la cpsula se dejan sin teir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea. Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las clulas. La sustancia utilizada para la tincin negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las clulas, tal como la tinta china (que es una suspensin de partculas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua). La tincin negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las clulas en la microscopia ptica, pero su mxima utilidad est en revelar la presencia de cpsulas alrededor de las clulas bacterianas. Metodo de Tinta China

Como reactivos tenemos, solucin de fucsina diluida y nigrosina o tinta china. Se observa al microscopio con objetivo de inmersin y se visualizan las bacterias teidas de rojo por la fucsina y la cpsula ser un halo blanco que las envuelve.

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Materiales: Microscopio ptico Mechero Asa de siembra Pizeta Portaobjetos y cubreobjetos Aceite de inmersin Colorantes para tincin: cristal safranina, tinta china. Muestra de esputo

violeta, Lugol, alcohol cetona,

 Procedimiento: a. Coloracin de Capsulas :Mtodo de Hiss La muestra de esputo de persona resfriada, proceder a extender con un asa de siembra sobre el portaobjetos, calentando previamente el asa de siembra; fijar en la llama. Colorear con fucsina bsica o con Safranina, con suaves calentamientos hasta la salida de vapores blancos por 1 minuto. Lavar con solucin de sulfato de cobre al 20% a chorro continuo. Secar y observar al microscopio.

b. Coloracin de capsulas: Mtodo de tinta china (no se realiz) Sin fijar el frotis, se cubre con fucsina diluida durante dos minutos. Lavar con agua destilada y secar al aire Se colocan en un extremo del porta objeto dos gotas de nigrosina o de tinta china y se hace una extensin por el mtodo de los dos portaobjetos. Se deja secar y se observa al microscopio con objetivo de inmersin V. RESULTADOS Y ANLISIS DE RESULTADOS

Muestra de esputo con coloracin Hiss Aumento: 1000x Se observan bacterias en forma cocos. Las bacterias se tien de rosado.

 ANALISIS DE RESULTADOS: o La muestra de esputo se tio de rosado lo que nos indica que es una bacteria Gram negativa. VI. CONCLUSIONES Las bacterias que se encuentran en una muestra de esputo son bacterias en forma de cocos, que tienen una tincin Gram negativa. Lo que nos indica que la bacteria tiene una capa delgada de peptidoglucano y se tie de rosado debido a la safranina (colorante de contraste). NO SE REALIZO LA TINCION CON TINTA CHINA pero es necesario usar este tipo de coloracin para la observacin de las capsulas de los microorganismos, ya que debido a su elevado contenido en agua, se tien dbilmente por los colorantes.

VII.

BIBLIOGRAFIA
http://www.educa2.madrid.org/web/educamadrid/principal/files/0e8a6919-7eeb423f-9fa8b9c866aab3ff/T%C3%89CNICAS%20DE%20VISUALLIZACI%C3%93N%20MI CROSC%C3%93PICA%20DE%20MICROORGANISMOS.pdf http://www.danival.org/600%20microbio/5000micro_dvf/micro_dvf_222b.html

PRACTICA N0 7: CULTIVO EN MICROORGANISMOS

I. INTRODUCCION

El cultivo en vitro de los microorganismos requiere necesariamente del uso de un sustrato y un ambiente artificial ajustado a las condiciones mnimas de crecimiento con en este fin se han desarrollado diferentes medios de cultivos que proveen como mnimo de una fuente de carbono, nitrgeno factores especiales de crecimiento. El procedimiento general para lograr el aislamiento de un microorganismo en un cultivo puro, consiste en usar un medio de cultivo y condiciones de incubacin que estimulen el crecimiento y que inhiban el crecimiento de otros microorganismos acompaantes

II.

OBJETIVOS

Aislamiento de bacterias aerobias en placas Petri por los mtodos de estriado y diseminacin. Manejar los procedimientos de la recoleccin, el procesamiento de las muestras y los mtodos de aislamiento

III.

MARCO TEORICO

CULTIVO DE MICROORGANISMOS
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin de las caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin de la disponibilidad de nutrientes en el medio.
MEDIOS DE CULTIVO

Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energa y elementos qumicos para la sntesis de sus constituyentes celulares. De pendiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se pueden clasificar en auttrofos si es el CO2 atmosfrico (microorganismos que fotosintetizan) y hetertrofos si utilizan carbono orgnico. Los medios de cultivo se pueden clasificar en definidos cuando su composicin qumica se conoce totalmente y complejos cuando no es el caso

porque estn compuestos por mezclas de extractos de material es complejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.). Por otra parte, los medios de cultivo pueden ser lquidos o slidos si se aade algn agente solidificante que no sea consumible por los microorganismos (normalmente agar). En funcin de los microorganismos que pueden crecer en ellos, los medios pueden ser generales, selectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras suprimen el de otros (por ejemplo, el medio SPS para clostridios), diferenciales cuando alguno de sus componentes permite identificar las colonias de un tipo de microorganismos (por ejemplo medios con hemates para identificar colonias de microorganismos hemolticos), selectivodiferenciales cuando combinan las dos caractersticas anteriores (por ejemplo, el agar de MacConkey para identificar Escherichia coli), y medios de enriquecimiento que permiten aislar un tipo determinado de microorganismo a partir de una mezcla una poblacin mixta de gran tamao.
MTODOS DE AISLAMIENTO

El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos, mediante la produccin de colonias aisladas en cultivos slidos. El crecimiento explosivo de las bacterias permite producir un gran nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de forma que, tras un periodo de incubacin en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales (un clon bacteriano). Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las muestras ambientales son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es debido a dificultades intrnsecas en el cultivo (microorganismos parsitos de otros), al es conocimiento de los requerimientos especficos de cultivo, y a la existencia de grupos de microorganismos que deben mantenerse en equilibrio para poder sobrevivir (casos de sintrofa por ejemplo). Se estima que en slo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1 - 0,01 % de las bacterias marinas son cultivables. CULTIVO EN TUBO: CALDOS Y SLIDOS Los medios en tubo pueden presentarse slidos en forma inclinada, caldo o bien como medios semislidos. De acuerdo al procedimiento de inoculacin puede emplearse el asa o la aguja para inoculacin. Generalmente se emplea el asa para inocular especmenes en placa y la aguja de inoculacin para la transferencia de cultivos puros de placas a tubos con medio slido. Existen muchas frmulas de caldos, dependiendo de la bacteria que se desee crecer. En los tubos con medio slido, el tubo se pone a enfriar en posicin inclinada, de manera que al solidificar queda la superficie inclinada. Los tubos inclinados son tiles para el cultivo de aerobios y anaerobios facultativos. Las caractersticas del cultivo tales como pigmento son fciles de observar en este tipo de cultivo. Los procedimientos para inocular caldos, tubos inclinados y por picadura sern demostrados antes de que se lleven a cabo.

CULTIVO EN PLACA Si las bacterias se pueden separar por dilucin y despus se ponen en un medio slido para que den lugar a colonias, estas tendrn una medida, forma, color y textura dependiendo de cada microorganismo lo cual proporcionar una valiosa ayuda en su identificacin. El mtodo de estra cruzada consiste en la dilucin de un cultivo mediante el estriado en la superficie de un medio slido, en una caja Petri. Los microorganismos se van quedando al hacer las estras en diferentes partes de la superficie del medio de tal forma que en un momento dado quedarn clulas individuales o bien unidades formadoras de colonias, que al multiplicarse darn lugar a una colonia. Las placas estriadas se usan fundamentalmente para aislar cultivos puros en muestras que contienen flora mixta, tambin es til para el estudio de la morfologa colonial y propiedades hemolticas de las bacterias.

MTODO DE ESTRA CRUZADA

1. Flamee el asa hasta el rojo en toda su longitud empezando por la parte cercana al mango. 2. Tome una asa del cultivo que va a inocular y haga una serie de estras en un lado de la caja con movimientos rpidos de la mano. D la vuelta a su caja y flamee nuevamente su asa, tocando slo las ltimas estras una o dos veces, haga nuevas estras en ngulo recto a las primeras (pero sin volverlas a tocar). Otra vez d la vuelta a la caja, flamee su asa y repita el procedimiento. Despus de flamear su asa en cada serie de estras asegrese de que est fra antes de continuar estriando. Un buen aislamiento depende de hacer el mayor nmero posible de estras en cada lado de la caja. Sin embargo tenga cuidado de no rasgar el agar al hacer sus estras. 3. Proceda de igual manera con todas las cepas proporcionadas. 4. Incube todas las placas a 35C por 24 horas. 5. Marcar todas las cajas y tubos con: Nombre o nmero de equipo Fecha y hora de sembrado Microorganismo (gnero y especie bien claros) Grupo.

Se esteriliza el asa y luego se toma una muestra del tubo Colonias aisladas al final de la siembra por estra
AU ME NTO : 400 X

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
MATERIALES

Placas Petri Asa de siembra Papel craft EQUIPOS Estufa Mechero de bunsen Autoclave

 PROCEDIMIENTO:

Antes de realizar la siembra, se debe plaquear los medios de cultivos, preparados durante el desarrollo de las prcticas anteriores. El procedimiento se realizara en asepsia, para evitar la contaminacin. o Primero se calentaran los medios de cultivo y esperar a que se vuelvan a estado lquido, en el Bao Mara a 90C. o Se tomara cada placa Petri estril y delante del mechero se le adicionara un volumen aprox. de 15 ml del medio de cultivo enfriado a 55C. o Se sellara la placa y se esperara a que se solidifique el medio para proceder a invertir la placa e incubar. Aislamiento por el mtodo de estriado por planos o Quemar el asa de siembra al rojo, y destapar el frasco en el cual se encuentra la muestra con el dedo meique y margen cubital de la mano derecha. o Cargar el asa en aro con el inoculo del cultivo. Flamear previamente la boca del tubo antes y despus de extrada la muestra. o Tomar con la mano izquierda la placa Petri con agar, el dedo ndice acta como bisagra y levantar con el dedo pulgar, la tapa de la placa. Realizar todo ello a la altura del mechero. o Descargar el inoculo en un punto de la capa superficial de la placa Petri y con el asa misma, describir las estras en el primer plano, hacer un cuarto de giro a la placa y describir las estras en segundo plano y as hasta completar un tercer plano, cuidando de no romper el medio. o Dejar caer suavemente la tapa de la placa con el control de los dedos pulgar e ndice. o Rotular los datos sobre el dorso de la placa Petri, escribiendo: nombre del grupo, tipo de siembra y fecha. o Incubar a 37 C durante 24 a 48 horas, colocando las placas en la estufa en posicin invertida. Aislamiento por el mtodo de diseminacin o Depositar una gota del inoculo sobre la superficie del medio. Cerrar la placa a la llama del mechero. o Colocar la placa sobre la mesa y mediante movimientos circulares sobre la mesa lograremos que el cultivo se esparza sobre todo el medio. o Rotular el dorso de la placa Petri, escribiendo: nombre del grupo, tipo de siembra y fecha. o Incubar a 37C durante 24 a 48 horas, colocando las placas en la estufa en posicin invertida.

V.

RESULTADOS:
En el siguiente cuadro se muestra el orden en el cual se cultiv cada muestra en cada medio de cultivo:
Placa n 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. Medio de cultivo MAC CONKEY MAC CONKEY STANDARD STANDARD STANDARD BAIRD PARKER BAIRD PARKER AGAR EMB AGAR EMB Mtodo de aislamiento DISEMINADO ESTRIADO ESTRIADO ESTRIADO DISEMINADO ESTRIADO ESTRIADO ESTRIADO ESTRIADO Muestra LECHUGA QUESO HUEVO LECHUGA AGUA RESIDUAL VESTIBULO NASAL MUCOSIDAD NASAL QUESO MAYONESA

VI.

CONCLUSIONES
Se debe realizar un correcto mtodo de aislamiento siguiendo las pautas dadas por el profesor Al momento de inocular la muestra en el medio de cultivo evitar romper o quebrar el medio, ya que esto malograra muestro trabajo en el medio de cultivo al momento de sembrar y no obtendramos los resultados deseados.

VII.

CUESTIONARIO
1. Explique las recomendaciones generales que se debe tener en cuenta para realizar un adecuado aislamiento de microorganismos.

Esterilizar el rea y los materiales de trabajo con alcohol y en la autoclave respectivamente. Se flamea los instrumentos a utilizar, para crear alrededor de ellos un rea esterilizada, principalmente la boquilla de los tubos de ensayo o alrededor de las placas.
2. Cules son las muestras problemas que pueden tomarse y cules son las normas especficas para recolectarlas?

Las muestras problemas pueden ser de tres tipos: Muestras de aire, agua y sedimentos Estos se rigen por los protocolos para la toma de muestra segn el tipo de muestra y el tipo de estudio que se realizara en dichas muestras 3. Cul es la finalidad del aislamiento de microorganismos? Para poder obtener una muestra pura, sin que esta contenga otro tipo de microorganismos no deseados.

4. Qu es un clon? Conjunto de individuos genticamente idnticos que desciende de un mismo individuo. 5. Explique los mtodos para el aislamiento y cultivo de bacterias anaerobias Medios enriquecidos, no selectivos, selectivos y diferenciales Agar Brucella, Agar Schaedler, Agar Bacteroides, Agar Alcohol Fenil Etilico, Agar con yema de huevo. Sistema de incubacin en anaerobiosis.

VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf http://microdonto.files.wordpress.com/2010/03/cultivo-demicroorganismos2.pdf

PRACTICA NO8 MORFOLOGIA DE COLONIAS

I. INTRODUCCION:
Cuando tienes un cultivo en agar (caja petri) siempre es relevante anotar la morfologa colonial (colonias aisladas) de la cepa bacteriana para facilitar la identificacin. Generalmente se reporta la morfologa colonial tal como uno la percibe, por ejemplo si se ves que las colonias bacterianas son como puntitos, pues reportan que son puntiformes, si son lisas pues reportan que son lisas, si observas que estn como moco, pues reportan que estn mucosas, si su color es amarillento pues reportan que son de color amarillento, y as sucesivamente., tambin se puede agregar caractersticas que se consideren importantes para identificarlas.

II.

OBJETIVOS:

Reconocer los principales caracteres para la descripcin de colonias bacterianas Relacionar la morfologa colonial con la capacidad tintorial.

III.

MARCO TEORICO

MORFOLOGIA DE COLONIAS BACTERIANAS

Las colonias son masas visibles de clulas que se forman por divisin de una o varias clulas. El desarrollo de colonias sobre superficies de agar permite al microbilogo identificar las bacterias porque las especies forman a menudo colonias con una forma y aspecto caracterstico. El tamao, forma, textura y color de una colonia es propio de cada organismo. La morfologa de la colonia de una bacteria puede variar segn el medio en que crezca la bacteria. La identificacin presuntiva o preliminar de una bacteria se basa en la morfologa colonial, para ello se forma en cuenta las siguientes caractersticas:

1. TAMAO:

o Tamao pequeo: colonias puntiformes con aproximadamente 0,5 mm de dimetro o inferiores. o Tamao mediano: de 1 a 2 mm de dimetro. o Tamao grande: de 4 a 6 mm de dimetro. o Tamao muy grande: colonias extendidas en forma de velo invadiendo toda la superficie del medio de cultivo.
2. FORMA DE COLONIAS

3.

BORDES

o o o o o o

Entero Ondulado Lobulado Erosionado Filamentoso Rizado

4. ELEVACION

5. SUPERFICIE

o Lisa o Rugosa o Plegada

6. CONSISTENCIA (probarla con el asa)

o Cremosa o Membranosa

7. COLOR

Se usan trminos comunes para definirlo y se especifica si el pigmento producido difusible o no. Depende de las especies Depende del medio de cultivo Depende de nutrientes Muy variado
8. CARACTERSTICAS PTICAS

o LUZ TRANSMITIDA (observar a travs de la colonia) o Opaca: no permite el paso de luz o Traslcida: Deja pasar la luz sin permitir la completa visibilidad de los objetos observados a travs de la colonia. o Transparente: Deja pasar la luz permitiendo ver claramente los objetos observados a travs de la colonia. o LUZ REFLEJADA (observar la superficie de la colonia) o Opaca o Brillante

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Materiales
Cubreobjetos y portaobjetos Asa de siembra Mechero de bunsen Microscopio ptico Aceite de inmersin

PROCEDIMIENTO: o Seleccionar 5 colonias bacterianas y marcarlas o Con los cuidados indicados por el profesor, proceder a la descripcin de cada colonia, considerando los principales caracteres como forma, tamao, borde, elevacin , textura de la superficie, consistencia, grado de adherencia al medio, cromognesis. o Realizar la coloracin Gram de cada colonia descrita y observar al microscopio.

V.

RESULTADOS:
De las colonias seleccionadas, se hizo la descripcin en el siguiente cuadro, segn las caractersticas indicadas:

Caracterstica

COLONIA 1 Medio de cultivo: Mac Conkey Mtodo: diseminado Muestra: lechuga

COLONIA 2 Medio de cultivo: Baird Parker Mtodo: estriado Muestra: pliegue nasal

COLONIA 3 Medio de cultivo: Baird Parker Mtodo: estriado Muestra: vestbulo nasal

COLONIA 4

COLONIA 5

Medio de Medio de cultivo: Agar cultivo: EMB standard Mtodo: estriado Muestra: queso Mtodo: estriado Muestra: huevo

Forma Tamao Borde Elevacin Textura Consistencia Transparencia Cromognesis Gram

Circular Puntiformes pequeos Entero Convexo Lisa Viscosa Translucido Rojo fucsia Gram -

Circular Puntiformes pequeos Entero Plano Lisa Seco Translucido Crema Gram +

Circular Puntiformes pequeos Entero Plano Lisa Viscosa Translucido Crema Gram +

Irregular Mediano Entero Convexo Rugosa Viscosa Opaca Lila

Fusiforme Puntiforme pequeos Dentado Plano Rugosa Seco Transparente Amarillo

VI.

CUESTIONARIO
Es el movimiento que se realiza luego de producido la fisin bacteriana esta determinara la formacin de agrupaciones celulares as como el aislamiento de las clulas hijas.

1. En qu consiste el movimiento post fisin?

2. Qu importancia tiene la produccin de pigmentos microbianos en la naturaleza? Estos cumplen diversas funciones tanto desde un punto de vista ecolgico como metablico ya que puede funcionar como asptico de otros microorganismos para evitar su crecimiento y por otro lado sirven muchas veces como pigmentos fotosintticos para la produccin de energa.

VII.

CONCLUSIONES
Se debe tener en cuenta las indicaciones dadas por el profesor encargado del laboratorio para realizar una correcta prctica de visualizacin de morfologa de colonias. La morfologa de las colonias va a depender del medio de cultivo en el cual se encuentra, del tipo de bacteria que se va a desarrollar en el medio y las condiciones a la cual est expuesta.

VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
http://microdonto.files.wordpress.com/2009/03/morfologia-de-lascolonias-bacterianas.pdf http://dentizta.ccadet.unam.mx/Instrumenta/contenido/practicas/bacteriol ogia/morfo.htm http://www.docstoc.com/docs/121382370/Morfolog%EF%BF%BDa-dela-colonial http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp6.pdf

PRACTICA NO 10 METODO DE ESTUDIO DE LOS HONGOS

I. INTRODUCCION

El estudio de los hongos se realiza a nivel macroscpico y microscpico. El estudio macroscpico se realiza a partir del cultivo puro, describindose el detalle sus caractersticas ms importantes: aspecto, superficie, color, difusin del pigmento en el medio y velocidad de crecimiento. En el estudio microscpico se realiza; un examen directo con azul de Lactofenol y/o utilizando al mtodo de la cinta adhesiva, y la tcnica de micro cultiv para estudiar las estructuras de reproduccin de los hongos.

II.

OBJETIVOS

Realizar preparaciones en fresco de distintas especies de mohos Observar e identificar la morfologa de los hongos

III.

MARCO TEORICO

METODOS DE ESTUDIOS DE HONGOS

LOS HONGOS MICROSCOPICOS
Son organismos pertenecientes al reino Fungi, con nutricin hetertrofa. Poseen una pared celular de quitina (carecen de celulosa) y pueden ser parsitos, que causan enfermedades al hombre y otros animales y a vegetales, o saprfitos, que se desarrollan sobre materia orgnica en descomposicin. Hay hongos unicelulares (levaduras) y pluricelulares, con organizacin tipo talo, formadospor filamentos ramificados y tabicados llamados hifas cuyo conjunto constituye el micelio. Los mohos son hongos filamentosos microscpicos, por ejemplo, el gnero Mucor. Pueden reproducirse asexualmente (por gemacin, esporulacin o fragmentacin) o sexualmente.

METODOS DE MONTAJES:
a) MTODO DE MONTAJE HMEDO El procedimiento se lleva a cabo con el ansa de gancho o con una aguja montada sobre un trozo de varilla, se procede tomando una pequea porcin de la colonia a estudiar (a veces es necesario ayudarse con otra ansa). La muestra debe tomarse de un sitio intermedio entre el centro y la periferia de la colonia. Este pequeo fragmento de colonia se transfiere a una gota de

lactofenol azul de algodn en un portaobjeto y se cubre con un cubreobjeto. Se presiona suavemente directamente sobre el fragmento de la colonia para deprimir las hifas y otras estructuras y permitir un mejor examen microscpico. b) PREPARACIN EN FRESCO DE MOHOS

TCNICA
Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de lactofenol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Realizar la misma operacin en otro portaobjetos que se usar para lavar la muestra. Tomar el material a observar en una mnima cantidad con agujas finas o lancetas procurando arrancarlo desde la base y disponerlo con cuidado sobre la gota de uno de los portaobjetos. Con esta especie de lavado se consigue desprender el exceso de conidios que casi siempre llenan estas preparaciones y que impiden ver lo que realmente interesa, los conidiforos. Transportar el material con la lanceta a la gota del segundo portaobjetos que ser ya el definitivo. Si se trata de hongos con picnidios (estructuras globosas tapizadas en su interior por los conidiforos), se aplastarn stos ligeramente sobre la gota o se seccionarn con un bistur. Con agujas muy finas se distribuye el material en la gota de manera que no quede amontonado. Colocar el portaobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas entre los dos vidrios.

c) MTODO DE MONTAJE CON CINTA ADHESIVA Se aconseja usar cinta adhesiva de alta transparencia. Se hace un doblez de una tira de 4 cm, con el lado adhesivo hacia afuera, y se sostiene entre los dedos pulgar e ndice. El lado adhesivo se presiona firmemente contra la superficie de la colonia del hongo. El micelio areo se adhiere a la superficie y puede separarse del resto. Las tiras de cinta inoculadas se colocan en una gotita de lactofenol-azul de algodn en un portaobjeto.

IV.

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

MATERIAL: o o Microscopio Portaobjetos y cubreobjetos (22x22 mm) muy limpios y desengrasados con alcohol o Aguja enmangada o lanceta o Trozo enmohecido de fruta o pan o un cultivo de hongos o Solucin de Lugol

1. EXAMEN DIRECTO Colocar sobre un portaobjetos una gota de solucin de Lugol no demasiado grande para evitar que el cubreobjetos flote y la preparacin quede demasiado gruesa. Tomar la muestra a observar en una mnima cantidad con agujas finas o lancetas arrancando la base y disponerlo con cuidado sobre la gota colocada previamente en el portaobjetos. Colocar el cubreobjetos poco a poco y empezando por un lado para evitar que se formen burbujas. Llevar al microscopio para su observacin.

V.

RESULTADOS

Luego de llevar a l microscopio para su observacin tenemos lo siguiente:

MUESTRA DE TOMATE MUESTRA DE MOHO DE PAN

AUMENTO: 400X Se lograron observar hifas y esporangioforo

AUMENTO: 400X Se observa que hay hifas y esporangios

VI.

CONCLUSIONES

Pudimos observar que en las frutas enmohecidas se lograron observar hongos al hacerle un montaje y llevarlo al microscopio. Podemos diferenciar en cada muestra se logr encontrar dos tipos diferentes de hifas que los caracterizan.

VII.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
http://www.biologia.edu.ar/micologia/13_micologia.htm http://www.joseacortes.com/practicas/hongos.htm