Psicobio12a - Neurobiologia Do Abuso de Drogas e Álcool

Neurobiologia das drogas de abuso
Prof.a. Dra. Maria Lucia O. Souza Formigoni

Disciplina de Medicina e Sociologia
do Abuso de Drogas
Departamento de Psicobiologia
UNIFESP
USO ABUSIVO DE
SUBSTNCIAS PSICOATIVAS:
Prevalncia Brasil
Populao geral
Fonte: CEBRI D, Levantamento domiciliar, 2005
Drogas mais experimentadas (uso na vida) so as que
tm maior prevalncia de dependncia
Dados da Organizao Mundial de Sade (2004)*:
2 Bilhes de pessoas consomem bebidas alcolicas
Uso prejudicial/dependncia
lcool: 76,3 milhes
outras substncias psicoativas: 15,3 milhes
No Brasil:
- At 2001: poucos dados sobre a prevalncia de problemas associados ao
uso de lcool e outras drogas na populao geral, restritos a
determinadas cidades/regies ou populaes estudantis.
- Segundo levantamentos realizados pelo CEBRID (Centro Brasileiro de
Informaes sobre drogas psicotrpicas, setor do Departamento de
Psicobiologia da Unifesp) entre 1987 e 1997 (Galdurz et el., 1997), em
mdia, o uso freqente de lcool foi relatado por 6,4% dos estudantes e
o de outras drogas por 3,1%.
* Fonte:WHO Global Status Report (2004) www.who.int - Publications
Problemas associados ao uso
de substncias psicoativas
Um espectro de problemas relacionados ao uso...
considerando todos os indivduos com problemas e seus colaterais...
CONSUMO ABUSO
PROBLEMAS RISCO
DEPENDNCIA
SNDROME DE DEPENDNCIA DE DROGAS
"Um conjunto de fenmenos fisiolgicos, comportamentais ou
cognitivos, no qual o uso da substncia alcana uma prioridade
muito maior para um determinado indivduo que outros
comportamentos que antes tinham maior valor. Uma caracterstica
descritiva central da sndrome de dependncia o desejo
(freqentemente forte, algumas vezes irresistvel) de consumir
drogas psicoativas (as quais podem ou no ter sido medicamente
prescritas), lcool ou tabaco. Pode haver evidncia que o retorno
ao uso da substncia aps um perodo de abstinncia leva a um
reaparecimento mais rpido de outros aspectos da sndrome do
que o que ocorre com indivduos no dependentes"
(CID-10, Organizao Mundial de Sade, 1994).
SNDROME DE DEPENDNCIA: CONCEITO
CRITRIOS DIAGNSTICOS:
1. Estreitamento do repertrio;
2. Salincia do comportamento de busca;
3. Tolerncia;
4. Sndrome de Abstinncia;
5. Esforos mal-sucedidos em parar/controlar.
6. Fissura/Compulso
7. Reinstalao
Porcentagens de dependentes no Brasil
LCOOL 12,3 %
TABACO 10,1 %
BENZODIAZEPNICOS 0,5 %
MACONHA 1,2 %
SOLVENTES 0,2 %
ESTIMULANTES 0,1 %
II LEVANTAMENTO DOMICILIAR SOBRE O USO DE
DROGAS PSICOTRPICAS NO BRASIL (CEBRID-SENAD 2006)
ABSTMIOS
OCASIONAIS
REGULARES
USO
ABUSIVO
DEPENDENTES
Abuso/dependncia de lcool: responsvel por 90 a 94% das
internaes por problemas associados ao uso de substncias
psicoativas em hospitais psiquitricos brasileiros.
(CARLINI & CARLINI-COTRIM, 1995)
19,5% homens
6,9% mulheres
Por que algumas pessoas se
tornam dependentes de
substncias psicoativas e outras
no?
GENTICA
Desenvolvimento
maturao do SNC
gnero, etc
COMPORTAMENTO
NEUROBIOLOGIA
AMBIENTE
As teorias diferem quanto ao peso que atribuem aos fatores que
influenciam o estabelecimento da dependncia de drogas
Por que nem todos os indivduos se tornam
dependentes?
Indivduo Droga
vias de
administrao
fatores
genticos
uso prvio
de drogas
contexto
social
estresse
Co-morbidades
psiquitricas
WEST (2001) classifica as teorias sobre dependncia em 5
grupos, de acordo com
o foco principal ser:
1. O fenmeno como um processo geral
2. Os efeitos do estmulo gerador de dependncia
3. A suscetibilidade individual
4. Os fatores ambientais
5. A recada e a recuperao
Teorias sobre a etiologia da dependncia
Teorias sobre a etiologia da dependncia
A existncia de tantas teorias indica que
provavelmente nenhuma delas
suficientemente abrangente para explicar o
fenmeno, havendo muitas lacunas de
conhecimento a serem preenchidas.
Entre as teorias que procuram explicar porque algumas drogas
tm alta propenso para desencadear dependncia, destacam-se
os trabalhos de WIKLER (1973) e WISE & BOZART (1987)
Segundo eles, as drogas de abuso seriam utilizadas por suas
propriedades reforadoras positivas e negativas:
- positivas: efeito prazeroso, euforia
- negativas: evitao de: desconforto, estados ansiosos
e/ou depressivos, sintomas de abstinncia
Embora os mecanismos associados ao efeito reforador negativo
variem, parece existir um mecanismo comum, compartilhado por
todas as drogas de abuso, em relao aos efeitos reforadores
positivos.
Efeitos reforadores das drogas de abuso
Teoria do incentivo-sensibilizao
Como as drogas psicotrpicas
agem como reforo positivo?
Teoria do incentivo-sensibilizao ao efeito
reforador positivo
Os sistemas neurais envolvidos no
desenvolvimento da dependncia de
drogas seriam os mesmos do sistema de
recompensa do crebro (principalmente
vias dopaminrgicas mesolmbica e
mesocortical) ativado por recompensas
naturais (gua, comida, sexo, etc)
reas cerebrais que estimuladas eletricamente causam
prazer (humanos) que provocam auto-estimulao
(animais).possuem stios de ligao (receptores ou canais
inicos) aos quais se ligam as drogas psicotrpicas.
Antagonistas destes receptores (ex. neurolpticos)
reduzem os efeitos reforadores tanto de recompensas
naturais, como da estimulao cerebral como do
prazer decorrente da administrao de drogas
Efeito reforador das drogas de abuso
Reforo: Estmulo contingente a uma resposta
comportamental, que aumenta a freqncia dessa resposta
A dependncia seria mantida pelo
desejo de obter prazer
Teoria: o consumo da droga mantido devido aos
efeitos reforadores da droga (~ prazer)
Computador
Bomba de infuso de droga
Catter
barra
Intravenosa
Animais consomem voluntariamente drogas de
abuso: modelos de auto-administrao
Roberts and Koob, 1997
Animais consomem voluntariamente drogas de
abuso auto-administrao oral
GABA
lcool
nicotina
ACh
lcool
PCP
Glu
DA
anfetamina
cocana
opiides
maconha
alucingenos
5HT
Adaptado de Stahl S M, Essential Psychopharmacology (2000)
Proposto mecanismo biolgico comum s drogas de abuso:
aumento da liberao do neurotransmissor dopamina nas vias
mesolmbica e mesocortical (por mecanismos diretos ou indiretos).
Di Chiara &
Imperato 1988;
Nestler 2001
Mecanismo biolgico comum para as drogas
MORFINA
Stahl S M, Essential
Psychopharmacology (2000)
GABA
lcool
nicotina
ACh
lcool
PCP
Glu
DA
anfetamina
cocana
opiides
maconha
alucingenos
5HT
O transportador de O transportador de dopamina dopamina
DAT
dopamina
cocana
receptor
Cocana - inibe a ao do transportador,
prolongando a disponibilidade sinptica de DA
Mecanismos de ao das drogas de abuso
Anfetamina e Cocana
Anfetamina - aumenta diretamente a
liberao de DA e NA. A DA liberada ativa
a expresso de genes que fabricam
RNAm, conhecido como CART (transcrito
regulado por anfetamina e cocana).
Em seguida ocorre a sntese de vrios
peptdeos neurotransmissores CART.
CAR
T
CART
CART
peptide
GABA
lcool
nicotina
ACh
lcool
PCP
Glu
DA
anfetamina
cocana
opiides
maconha
alucingenos
5HT
Alucingenos
Alucingenos, drogas "projetadas"
(designer drugs) - as drogas
psicodislpticas, ou psicodlicas, produzem
alteraes na percepo, podendo gerar
alunicaes e iluses visuais, tteis,
auditivas ou at mesmo estados
psicotomimticos.
- Indolalquilaminas (LSD, psilocibina,
dimetiltriptamina -DMT) possuem
semelhana estrutural com a serotonina
- Fenilalquilaminas (mescalina,
2,5,dimetoxi-4metilanfetamina - DOM),
anfetaminas em altas doses -relacionadas
estruturalmente com dopamina e
noradrenalina.
Drogas "projetadas"- destaca-se o MDMA
(3,4 metilenodioximetanfetamina) -
conhecido como"ecstasy"
Podem atuar em vrios sistemas de
neurotransmisso, mas em geral atuam
como agonistas parciais dos receptores
5HT2A em stios serotoninrgicos ps-
sinpticos e tambm em auto-receptores
somatodendrticos 5HT1A.
Psilocibina
Mescalina
MDMA
LSD
serotonina
5HT2A
5HT2A
GABA
lcool
nicotina
ACh
lcool
PCP
Glu
DA
anfetamina
cocana
opiides
maconha
alucingenos
5HT
Fenilciclidina, Maconha
Fenilcilidina - antagonista de
glutamato, age como modulador
aloestrico do receptor glutamtrgico
NMDA, bloqueando-o e reduzindo o
fluxo inico para o interior da clula.
Maconha - o princpio ativo delta-
9-tetra-hidrocanabinol (THC) age
em receptores canabinides CB1
(acoplado a protena G, modula
adenilciclase e canais inicos) e
desencadeia liberao de DA.
PCP
Glutamato
stio de
PCP
THC
GABA
lcool
nicotina
ACh
lcool
PCP
Glu
DA
anfetamina
cocana
opiides
maconha
alucingenos
5HT
Nicotina
Nicotina- age diretamente em receptores colinrgicos nicotnicos (A e B)
localizados nos neurnios dopaminrgicos mesolmbicos e desencadeia
liberao de DA.
acetilcolina
receptor de
nicotina
GABA
lcool
nicotina
ACh
lcool
PCP
Glu
DA
anfetamina
cocana
opiides
maconha
alucingenos
5HT
Mecanismos de ao das drogas de abuso- Opiides
Prodinorfina
Dinorfina
POMC
Beta
Endorfinas
Proencefalina
Encefalina
s
receptores
opiides
POMC=pro-opiomelacortina
Opiides endgenos - existem no organismo opiides endgenos,
peptdeos derivados da pro-opiomelacortina (POMC), pr-encefalina e
pr-dinorfina.
oxicodona
morfina
hidrocodona
metadona
herona
codena
As drogas opiides como morfina,
herona, metadona, codena e
buprenorfina atuam sobre os receptores
opiides (mu,delta e kappa).
GABA
lcool
nicotina
ACh
lcool
PCP
Glu
DA
anfetamina
cocana
opiides
maconha
alucingenos
5HT
Mecanismos de ao das drogas de abuso- Opiides
Na ATV os neurnios so estimulados tonicamente pelas beta-
endorfinas, que modulam o funcionamento do interneurnio
gabargico.
No ncleo accumbens as dinorfinas podem suprimir a
liberao de DA. A ao dos dois sistemas de opiides endgenos
necessria para manuteno da liberao basal de DA.
(Figura adaptada de Spanagel et al., 1995)
Adaptaes com uso repetido
A repetio do uso repetido de drogas produz alteraes no sistema
(tolerncia e/ou sensibilizao), que contribuem para aumentar a
"salincia" do incentivo e o desejo de consumir mais drogas).
Tolerncia: necessrio um aumento da dose para a obteno do
mesmo efeito inicial ou aps uma mesma dose o efeito menor.
Administrao crnica
(mesma dose)
DROGAS EFEITO TOLERNCIA
Barbitricos Sedativo +
Anticonvulsivante -
Opiceos Euforignico +
Miose -
Analgsico +
A tolerncia se desenvolve aos EFEITOS de
uma droga e no droga em geral.
Tolerncia
Tolerncia "inata"
Fatores genticos
animais que preferem lcool desenvolvem tolerncia mais
facilmente do que os que no preferem
sob mesmos nveis de alcoolemia filhos de alcolatras
apresentam menores efeitos subjetivos de intoxicao (efeito
depressor) do que filhos de no alcolatras
Tolerncia disposicional (metablica ou farmacocintica)
se refere s mudanas adaptativas que resultam em
menores concentraes da droga nos stios de ao
Conseqncias das alteraes metablicas induzidas pela
induo enzimtica devida ao uso crnico de lcool:
tolerncia cruzada com benzodiazepnicos e
barbitricos
aumento da degradao de acetaminofem levando a
acmulo de metablitos hepatotxicos
Tolerncia aguda
Durante uma administrao aguda o efeito
observado na poro ascendente (A) da
curva de concentrao da droga maior do
que o observado na poro descendente (D),
na mesma concentrao.
concentrao
da droga
tempo
A
B
Tolerncia funcional (tissular ou farmacodinmica)
se refere a alteraes no local de ao
fisiolgica: devida a alteraes
no nmero de receptores
na afinidade de receptores
na composio da membrana
Possveis alteraes na
sensibilidade induzidas pela
administrao de drogas
supersensibilidade
subsensibilidade
Taquifilaxia: aps exposio crnica h reduo do efeito
mximo atingido, mesmo aumentando a dose ( aps um perodo de
abstinncia o efeito inicial pode ser obtido novamente)
Ex: LSD, mescalina, psilocibina
Tolerncia dependente do ambiente
ou comportamentalmente aumentada
Pessoas apresentam maior tolerncia se testadas em bares do que em
escritrios.
O desempenho repetitivo de uma tarefa de num determinado ambiente aumenta a
velocidade de aquisio da tolerncia, mas esta no transferida quando a tarefa
realizada em outro ambiente.
imaginar a realizao da tarefa durante a intoxicao alcolica
tambm acelera o desenvolvimento de tolerncia (Vogel-Sprott et. al
1984)
(Chen 1968, LeBlanc et al. 1973
ratos que recebem lcool num
ambiente e placebo em outro
apresentam diferentes nveis de
tolerncia aos efeitos sedativos e
hipotermizantes somente no
ambiente onde receberam lcool
e no naquele em que
receberam placebo.
Mecanismos moleculares da Tolerncia
Tolerncia comportamental, intrnseca e extrnseca
Tolerncia comportamental - medida no nvel de
atividade do animal (como um todo), resultante de
interaes mtuas entre vrias estruturas cerebrais e
com outros sistemas.
Hoffman and Tabakoff (1989) classificam como:
tolerncia intrnseca devida a alteraes nos
neurnios que controlam o comportamento
Tolerncia extrnseca devida a adaptaes
comportamentais por meio de alteraes em circuitos
neuronais compensatrios ( por ex. no tolerncia
molecular em um circuito primrio)
Velocidade de desenvolvimento
A tolerncia tambm pode ser aguda, rpida ou crnica
Aguda: dentro da mesma ocasio (minutos)
Rpida: de 8 a 24 h - tem semelhana com a crnica
Crnica: aps dias de uso contnuo ou intermitente
Tolerncia Celular - avaliada no nvel do tecido
neuronal - rede de alteraes em um neurnio ou
conjunto de clulas, envolvendo alteraes em canais
inicos, receptores, etc.
Ainda no est completamente claro como levam s
alteraes comportamentais.
Perda de tolerncia: aps perodo de abstinncia a tolerncia
pode ser perdida levando a overdoses acidentais.
Reaquisio da tolerncia: aps o perodo de perda de
tolerncia a reaquisio ocorre de maneira mais rpida que a
aquisio inicial.
As adaptaes levam a um novo estado de equilbrio, mas s
custas de alteraes importantes em muitos sistemas, que so
funcionais SOB a ao da droga.
Sndrome de Abstinncia: Na AUSNCIA da droga muitas
destas adaptaes se tornam disfuncionais e podem
desencadear uma srie de sintomas, em geral opostos aos
efeitos agudos da droga e que podem ser revertidos pela
administrao de novas quantidades de droga.
Reforo negativo da dependncia de drogas
Segundo Way (1983) as drogas tambm podem ser usadas
pelo seu efeito reforador negativo, isto sua capacidade de
aliviar:
sintomas da sndrome de abstinncia;
sensaes subjetivas desagradveis como angstia,
ansiedade e dor;
outras sensaes que podem existir independentemente da
exposio droga e que poderiam ser resultantes e
desiquilbrios nos sistemas de neurotransmisso.
Sensibilizao
Para alguns efeitos (em
geral depressores) ocorre
tolerncia, mas para outros
(estimulante da atividade
locomotora por exemplo)
ocorre sensibilizao
Sensibilizao a mesma dose
inicial passa a desencadear um
efeito inicial maior
Administrao crnica
(mesma dose)
Teoria do incentivo-sensibilizao
ROBINSON & BERRIDGE (1993) propuseram a teoria
do incentivo-sensibilizao como a base neural do
desejo por drogas.
O efeito estimulante da atividade locomotora em
animais um modelo do efeito reforador positivo.
Segundo KOOB et al. (1993) alm da capacidade das
drogas de abuso de produzir reforamento
condicionado positivo e negativo, fatores ambientais
tambm contribuem para o desencadeamento do
desejo (craving) de consumir drogas.
Exposio repetida s drogas de abuso: alteraes
permanentes no funcionamento das vias de recompensa
cerebral, contribuindo para o estabelecimento da
dependncia (Robinson & Berridge, 1993)
Sensibilizao neural dos sistemas de recompensa a droga
e os eventos a ela associados passam a ter valor emocional
progressivamente maiores (salincia do incentivo)
= Dopamina
= Glutamato
= GABA
ATV
Acc
CPF
Vias neurais da sensibilizao comportamental ao etanol
aumento de dopamina no accumbens (Nestby et al., 1997;
Brodie, 2002)
antagonistas D1 reduzem:
- sensibilizao ao etanol (Camarini, 1997)
- sensibilizao a etanol + mazindol (Gevaerd & Takahashi,
1999)
sensibilizao cruzada com cocana e aumento dos
nveis de ligao de DAT no estriado (Itzhak & Martin, 1999)
DOPAMINA
Vias neurais da sensibilizao comportamental ao etanol
etanol inibe transmisso glutamatrgica mediada pelos
receptores NMDA e AMPA
antagonistas de NMDA e AMPA bloqueiam o
desenvolvimento e/ou expresso da sensibilizao a
diversas drogas, inclusive ao etanol (Broadbent & Weitemier,
1999; Camarini et al., 2000; Broadbent et al., 2003)
etanol facilita transmisso GABArgica mediada por
receptores GABA
A
agonistas de receptores GABArgicos bloqueiam efeito
estimulante e sensibilizao ao etanol
GLUTAMATO
GABA
Circuito motivacional (simplificado)
Vias neurais da sensibilizao comportamental
Adaptado de Pierce & Kalivas, 1997
As linhas mais espessas representam
aumento, enquanto que as linhas
pontilhadas representam reduo da
neurotransmisso.
Circuito sensibilizado
Estudos realizados no nosso
departamento sobre
sensibilizao ao lcool
MASUR & BOERNGEN (1980)
Ausncia de tolerncia ao efeito excitatrio do etanol
Sensibilizao e variabilidade individual
MASUR & BOERNGEN (1980): ausncia de tolerncia ao
efeito excitatrio do etanol
MASUR, DE SOUZA & ZWICKER (1986)
Pharmacol. Biochem. Behav 24:1225-1228
Ratos Wistar no
apresentavam efeito
estimulante do
etanol mas camundongos
Albinos suos apresentavam
O efeito estimulante depende
da espcie e da variabilidade
individual (MASUR & SANTOS,1988)
Animais: camundongos suios albinos machos, aproximadamente
90 dias de idade no incio do tratamento, provenientes do biotrio
do departamento de Psicobiologia, UNIFESP.
Testes de atividade locomotora:
15 min em caixas de atividade
Opto-Varimex.
Deteco de movimentao por
interrupo de feixes fotoeltricos
O que diferencia animais sensibilizados e no sensilizados?
Objetivo: Estudar alteraes comportamentais e neuroqumicas
associadas ao desenvolvimento de sensibilizao em camundongos
sensibilizados e no-sensibilizados ao efeito estimulante do etanol.
Testes de atividade locomotora
48 h 7 dias 7 dias 7 dias
1) Tratamento e testes de atividade locomotora induo da
sensibilizao comportamental
Drogas: etanol (2,2 g/kg ou 2,4 g/kg), em concentrao de 15 % (p/v)
em salina; salina (0,9 % NaCl).
Tratamento para induo da sensibilizao ao etanol:
21 dias, administrao diria
Administrao: via intraperitoneal
2 grupos de tratamento: etanol ou salina.
Classificao dos animais tratados com etanol de acordo
com a resposta locomotora no DIA 21:
Sensibilizados (SENS)
No-sensibilizados (NO-SENS)
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
A
t
i
v
i
d
a
d
e

l
o
c
o
m
o
t
o
r
a
NO-SENS
Intermedirio
SENS
Tercil
inferior
Tercil
intermdio
Tercil
superior
VARIABILIDADE INDIVIDUAL
Sensibilizao no uma conseqncia
inevitvel da exposio repetida s drogas
* Difere do salina e do no-sensibilizado no mesmo teste (p<0.04);
# Difere do salina no mesmo teste (p<0.05);
*
#
#
*
*
*
Resposta locomotora ao longo do tratamento de 21 dias,
Sem e aps classificao em sensibilizados e no-sensibilizados
*
*
*
etanol ou salina
* Difere do grupo salina no mesmo
teste (p<0.01); difere do prprio
grupo no teste agudo.
0
500
1000
1500
2000
2500
basal agudo 7 dias 14 dias 21 dias
Testes
A
t
i
v
i
d
a
d
e

L
o
c
o
m
o
t
o
r
a
salina (n=16)
Etanol (n=64)
0
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
4500
Basal Agudo 7 14 21 dias
Testes
A
t
i
v
i
d
a
d
e

l
o
c
o
m
o
t
o
r
a
Salina
No-sensibilizado
Sensibilizado
Nveis de alcoolemia ao longo do tratamento de 21 dias
No houve diferenas entre os grupos em nenhum dos testes.
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
Agudo 7 14 21 dias
Testes
A
l
c
o
o
l
e
m
i
a

(
m
g
/
m
l
)
No-sensibilizado
Sensibilizado
No houve correlaes significativas entre resposta locomotora ao
etanol e nveis de alcoolemia em nenhum dos testes de atividade.
3) Anlise da densidade de ligao de receptores enceflicos:
AUTO-RADIOGRAFIA QUANTITATIVA
Receptor Ligante
D1 [
3
H] SCH 23390
DAT [
3
H] Win 35,248
D4 [
3
H] Nemonapride
NMDA [
3
H] MK-801
AMPA [
3
H] AMPA
BDZ [
3
H] Flunitrazepam
Radioligantes e deslocadores utilizados nos
experimentos de auto-radiografia quantitativa:
Autoradiografia
receptores DA
EPl
CPU-A IL
Acb
core
Acb
shell
CPU
-DL
CPU
-VL
CPU
-DM
CG
1
CG
2
LS
D
CA1-
R
CA3-
R
DG
Amig
med
Amig
lat
Entorrinal
Apenas camundongos
sensibilizados ao etanol
apresentaram aumento nos
nveis de ligao de receptores
D2 no caudado-putmen
anterior e ventro-lateral
(sistema nigro-estriatal)
quando comparados aos no-
sensibilizados e aos controles
(Souza-Formigoni et al. (1999) Psychopharmacology)
Animais com alta sensibilizao ao
efeito estimulante apresentavam igual
densidade de D1 e DAT em todas as
regies estudadas e aumento de D4
em regies ligadas motricidade e
sistema lmbico (tubrculo olfatrio e
n. septal lateral e no caudado-putamen
posterior) nos dois grupos, o que seria
efeito da administrao repetida de
lcool).
QUADROS et al. (2001)
Sistema dopaminrgico e sensibilizao
Densidade de ligao de receptores dopaminrgicos
D1 e DAT (Quadros et al., 2002)
No houve diferenas significativas
entre os grupos em nenhuma das
regies analisadas, em relao
densidade de ligao com o receptor
D1 ou com o DAT
SN
CPU
P
CPU-A
AcbC
Tu
CPU
DM
VP
CPU
DL
CPU
VM
CPU
VL
SALINA SENSIBILIZADO NO-SENSIBILIZADO
Sensibilizados e no-
sensibilizados: maiores
nveis de ligao de D4
no CPU posterior, em
relao aos controles

Salina Etanol
No-sensibilizados Sensibilizados
(n=10) (n=9) (n=11)

Bulbo olfatrio (camada
glomerular)
3,1 0,4 3,3 0,5 3,8 0,4
Tubrculo olfatrio 4,8 0,3 *6,1 0,4 *6,4 0,5
Ncleo accumbens
core 3,5 0,3 4,3 0,5 4,7 0,5
shell 4,4 0,3 4,8 0,4 5,4 0,7
Caudado-putmen
anterior 5,0 0,3 5,7 0,7 7,0 0,7
dorso-medial 5,0 0,6 6,3 0,6 6,2 0,5
dorso-lateral 7,1 0,6 8,7 0,8 8,8 0,6
ventro-medial 2,7 0,2 3,5 0,4 4,0 0,4
ventro-lateral 10,8 0,8 12,9 0,8 12,6 0,8
posterior 5,1 0,5 *6,8 0,6 *7,3 0,6
Ncleo septal lateral 0,8 0,1 1,1 0,1 *1,3 0,1
rea tegmental ventral 2,4 0,3 2,3 0,3 2,5 0,2

a
Valores representam mdias erro-padro em pmol/g tecido. Valores indicados com
asterisco (*) so estatisticamente maiores do que os valores do grupo salina (p<0.02).

Densidade de ligao de receptores dopaminrgicos D4:
Densidade de ligao de receptores glutamatrgicos AMPA

Etanol
Salina No-sensibilizados Sensibilizados
(n=10) (n=9) (n=11)

Bulbo olfatrio
camada plexiforme 56,9 1,5 59,5 2,6 53,5 3,2
camada glomerular 97,8 3,4 102,2 4,6 93,4 5,5
Tubrculo olfatrio 103,7 4,4 113,2 4,7 104,7 4,7
Ncleo olfatrio anterior
lateral
136,7 4,3 141,9 4,8 132,2 7,3
Crtex
frontal associativo 108,9 3,6 115,3 7,0 103,8 7,1
Pr-frontal 138,4 6,1 156,1 6,8 145,2 8,3
Cingulado (CG-1) 122,9 6,1 123,6 6,0 115,7 3,7
Cingulado (CG-2) 123,0 6,2 117,8 6,7 106,9 3,2
somato-sensorial 70,4 4,3 70,4 2,5 69,9 2,6
entorrinal 108,8 8,5 112,4 5,1 107,3 5,0
Ncleo accumbens
core 133,9 5,4 138,4 4,7 137,0 5,4
shell 135,3 5,3 138,7 5,8 139,3 5,7
Caudado-putmen
anterior 97,2 4,7 96,3 6,7 98,1 5,0
dorsomedial 95,6 4,8 92,3 6,0 86,0 3,5
dorsolateral 73,7 4,3 73,4 5,9 68,3 3,3
ventrolateral 86,4 4,2 95,3 6,0 83,1 2,9
ventromedial 79,9 5,0 84,1 5,6 79,2 2,7
posterior 70,4 4,0 68,4 2,1 68,6 2,9
Septo lateral 138,4 4,5 144,0 3,4 137,7 2,7
Giro denteado 193,8 6,6 197,4 6,6 190,7 4,0
Hipocampo
CA1-R 199,3 8,4 *204,4 5,3 188,3 4,9
CA3-R 128,5 8,2 133,5 5,7 123,7 4,6
Amgdala
medial 86,4 7,0 86,2 4,7 82,7 3,0
lateral 117,3 6,5 119,6 3,4 121,1 3,2

GD
CA1R
CA3
TLAMO
ATV
TU
ACC
ACC
CPUa
TU
ACC
core
ACC
shell
CPUa
Densidade de ligao de receptores glutamatrgicos
NMDA (Quadros et al., 2002)
No-sensibilizados
apresentaram maiores
nveis de ligao de
NMDA que controles e
sensibilizados no ncleo
accumbens (core) e no
crtex pr-frontal.
0
20
40
60
80
100
120
140
Prefrontal Cortex Nucleus Accumbens
Core
Regions
b
i
n
d
i
n
g

d
e
n
s
i
t
y

(
p
m
o
l
/
u
g

t
i
s
s
u
e
)Sensitized
Non-sensitized
Saline
*
*
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
7000
8000
Hab Acute Day 7 Day 14
Tests
C
r
o
s
s
i
n
g
s
high activity group
low activity group
Saline group
Expresso da
subunidade NR2A
aumentada na ATV
somente nos no
sensibilizados
(avaliada por
hibridizao in situ)
Paper em redao..
Densidade de ligao de receptores GABA
A
-BDZ
ABM
ABL
GD
CA1
CA3
TLAMO
TU
ACC
core
ACC
shell
CG1
CG2
ATV SN

Salina Etanol
No-sensibilizados Sensibilizados
(n=10) (n=9) (n=11)

Bulbo olfatrio 355,4 10,4 359,0 18,0 353,1 9,3
Tubrculo olfatrio 75,7 2,3 83,5 5,0 78,2 4,9
Ncleo olfatrio anterior
lateral
73,2 4,7 77,5 6,2 71,1 5,4
Crtex
frontal associativo 167,1 6,1 168,4 11,3 159,7 4,5
pr-frontal 144,7 6,5 153,7 6,1 145,9 5,2
cingulado (CG-1) 168,6 6,0 174,4 7,6 159,0 5,1
cingulado (CG-2) 164,2 6,0 169,8 8,1 162,2 4,3
somato-sensorial 161,6 4,9 170,2 9,8 172,1 4,4
entorrinal 116,5 4,6 116,0 4,9 119,4 4,8
Ncleo accumbens
core 79,6 3,3 83,1 4,5 84,4 4,9
shell 84,3 3,4 87,9 4,1 88,9 4,7
Caudado-putmen
anterior 54,5 3,0 58,7 4,1 58,0 3,6
dorso-medial 52,7 2,0 56,3 4,2 53,3 2,3
dorso-lateral 52,0 2,2 56,5 3,9 53,0 2,9
ventro-lateral 60,8 2,1 65,6 3,3 61,5 3,3
ventro-medial 45,0 2,1 48,5 3,3 47,0 2,0
posterior 46,0 1,7 49,7 3,1 45,7 2,6
Plido ventral 173,2 8,7 180,9 11,9 179,2 7,2
Plido lateral 110,1 5,4 115,3 5,7 111,4 3,7
Septo lateral 63,6 2,4 71,9 4,1 62,7 2,9
Septo medial 161,1 11,4 166,6 9,1 158,9 8,0
Tlamo (LDDM) 77,1 9,5 74,4 5,6 79,1 5,7
Giro denteado 188,8 3,9 199,8 11,9 198,2 5,3
Hipocampo
CA1-R 144,6 4,2 153,0 8,9 151,5 4,3
CA3-R 122,4 5,1 130,4 9,3 127,7 4,8
Amgdala
medial 140,7 3,7 141,9 12,9 140,4 5,2
lateral 157,6 4,8 165,5 13,4 165,0 4,8
Substncia negra 169,9 7,2 172,4 12,4 182,2 7,7
rea tegmental ventral 61,6 4,4 53,9 3,9 ** 65,1 3,0

Valores representam mdias erro-padro em pmol/g tecido.

Quadro-resumo dos resultados (auto-radiografia):

Stios receptores Diferenas observadas Estruturas cerebrais
D1
-

D2
SENS>(NSENS=SAL) Caudado-putmen
anterior e ventro-lateral
D4
(SENS = NSENS) > SAL Caudado-putmen
posterior, tubrculo
olfatrio
DAT
-

NMDA
NSENS > (SENS = SAL) Ncleo accumbens core
e CPF
AMPA
NSENS > SENS CA1 hipocampal

GABA
A
-BDZ
SENS > NSENS ATV

Resposta locomotora de animais sensibilizados e no-sensibilizados
Grupo no-sensibilizado apresentou
resposta locomotora ao MK-801 mais
baixa que os grupos sensibilizado e
salina (* p<0,05).
DESAFIOS FARMACOLGICOS
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
1800
A
t
i
v
i
d
a
d
e

l
o
c
o
m
o
t
o
r
a
*
SENS
diaz
salina
salina
salina
diaz
NO-SENS
diaz
* Sensibilizados maior
resposta locomotora
que os demais grupos
(p<0,05)
Sensibilizao cruzada
entre etanol e diazepam
COM MK-801 (antagonista NMDA)
DIAZEPAM (0,5 mg/kg)
0
200
400
600
800
1000
1200
Agudo 7 14 21 dias
Testes de atividade
A
t
i
v
i
d
a
d
e

L
o
c
o
m
o
t
o
r
a
salina (n=24)
0,5 mg/kg diazepam (n=24)
1,0 mg/kg diazepam (n=24)
Resposta locomotora ao tratamento de 21 dias com
diazepam (0,5 ou 1,0 mg/kg)
O tratamento com diazepam no induziu sensibilizao
comportamental.
0
100
200
300
400
500
600
700
800
A
t
i
v
i
d
a
d
e

L
o
c
o
m
o
t
o
r
a
Diaz 0,5 mg/kg
etanol
salina
salina
salina
etanol
Diaz 1,0 mg/kg
etanol
Resposta locomotora de animais pr-tratados com diazepam
ou salina por 21 dias ao desafio com etanol (2,2 g/kg)
O tratamento com diazepam no alterou a resposta
locomotora ao etanol.

NMDA
NSENS > (SENS = SAL) Ncleo accumbens core
e CPF
AMPA
NSENS > SENS CA1 hipocampal

Desafio Resposta locomotora
MK-801
(antagonista NMDA)

NSENS < (SENS = SAL)

Sistema glutamatrgico e sensibilizao ao etanol:
Diferenas nos nveis de ligao de NMDA: desafio com MK-801
corrobora a existncia de diferenas funcionais entre SENS e
NSENS.
Etanol inibe receptores NMDA maior inibio nos NSENS?

GABA
A
-BDZ SENS > NSENS ATV

Desafio Resposta locomotora
diazepam
(agonista BDZ)

SENS > (NSENS = SAL = diazepam agudo)

Sistema GABA
A
-BDZ e sensibilizao ao etanol:

Tratamento Resposta locomotora
Diazepam
(agonista BDZ)

No houve sensibilizao

Desafio com etanol No houve sensibilizao cruzada

Sensibilizao cruzada unidirecional entre etanol e
diazepam
Objetivos
Comparar camundongos sensibilizados e no-
sensibilizados ao etanol no desempenho de uma
tarefa de condicionamento contextual de medo,
realizada antes do incio do tratamento.
Comparar camundongos sensibilizados e no-
sensibilizados ao etanol quanto expresso da
sensibilizao ao etanol em um ambiente de
teste nunca antes pareado administrao de
etanol.
Associao entre sensibilizao e processos de memria
Experimento consistiu de 3 etapas:
I) Tarefa de aprendizagem: condicionamento contextual de medo
II) Tratamento de 21 dias (etanol, salina) para classificao dos animais
III) Desafio locomotor dos animais em campo aberto
I II III
2 semanas
1 semana
Treino (dia 1): 3 choques (0.3 mA, 1s) em intervalos
de 30s (tempo total na caixa de contexto: 4 min)
Teste (dia 2): 5 minutos na mesma caixa de
contexto (sem choque)
REGISTRO DO COMPORTAMENTO DE
CONGELAMENTO (freezing)
TRATAMENTO COM ETANOL OU SALINA
Animais sensibilizados apresentaram maiores nveis de resposta de
congelamento ao contexto do que os no-sensibilizados.
Todos os animais receberam etanol e, aps 5 minutos, foram
colocados no campo aberto para registro de atividade locomotora por
5 minutos.
III) DESAFIO COM ETANOL (2,2 g/kg) NO CAMPO
ABERTO
CAMPO ABERTO
Resposta de congelamento no condicionamento
contextual de medo: SENS > NSENS
Fatores que contribuem para maior susceptibilidade para a
sensibilizao ao etanol tambm podem contribuir para a
capacidade individual de aprendizagem
Desafio com etanol no campo aberto: sensibilizados
no apresentaram sensibilizao ao etanol (SENS =
SALINA), mas SENS > NSENS.
Memria/aprendizageme sensibilizao ao etanol:

SENSIBILIZADOS NO-SENSIBILIZADOS Estruturas cerebrais
D2
CPU

NMDA
Accumbens core e CPF

AMPA
CA1 hipocampal

BDZ

ATV

D4 D4
CPU, Tub Olf

A sensibilizao ao etanol associada a
processos de memria e aprendizagem
Accumbens - participa na modulao do
valor emocional de memrias codificadas no
hipocampo
Amgdala - importante no condicionamento
aversivo
Variability in the response to alcohol
Sensitized and non-sensitized mice were also
evaluated as to the gene expression of some
enzymes and neurotransmitter receptors.
Mice locomotor activity in the tests performed after acute administration
and chronic ethanol (or saline) treatment.
* differs from non-sensitized and saline groups;
+ differs from previous tests
Differences between sensitized and non-sensitized
DRD2 gene expression
In the VTA, sensitized mice present increased expression of
D2 mRNA when compared to controls and non-sensitized
counterparts, corroborating data from autoradiographic and
pharmacological studies
Goeldner et al, submitted
0
1
2
3
4
controle baixa
sensibilizao
intermedirio alta
sensibilizao
D
2
/
G
A
P
D
H

-
C
P
F
Perfil de atividade locomotora
c,i
c,i
a
0
1
2
3
4
controle baixa
sensibilizao
intermedirio alta
sensibilizao
D
2
/
G
A
P
D
H

-
N
a
c
c
c
c
b
0
1
2
3
4
5
controle baixa
sensibilizao
intermedirio alta
sensibilizao
D
2
/
G
A
P
D
H

-
A
T
V
i
c
0
1
2
3
controle baixa
sensibilizao
intermedirio alta
sensibilizao
D
2
/
G
A
P
D
H

-
A
M
I
i
d
PFC
VTA
Acc
AMY
Relative mRNA levels after normalization for GAPDH mRNA
expression and relative protein levels after normalization for
tubulin protein expression of D1 and D2 (long and short
isoforms) receptors and DAT (part A) and 2A and 2B
subunits of NMDA receptor (part B) in the amygdala of
sensitized or non-sensitized sensitized mice after 21 days of
treatment with saline or 2.2 g/Kg ethanol
c differs from control group (p<0.05)
D1 D2 DAT
5-HT3B
5-HT3A
Amygdale
NR2A
NR2B
No differences between sensitized and non-
sensitized animals in mRNA or protein levels of
receptors or subunits analyzed in total
amygdale
However, considering the amygdale is a complex structure composed of
distinct subareas with different functions, the expression of receptors and
subunits specifically in each region of the amygdaloidal complex may elucidate
the participation of amygdale in the process of development of behavioral
sensitization
Animais
sensibilizados:
-consomem mais
lcool
-- tem menores
nveis de receptores
NMDA1 e expresso
de protena no Nacc
-apresentam maior
razo AMPA/NMDA
- Sensibilizao
pode estar
associada a reduo
da funo do
receptor NMDA ps-
sinptico
-Confirmados:
- maiores nveis de expresso do gene do
receptor DRD2 nos animais sensibilizados
-maiores nveis de expresso do gene dos
receptores do glutamato (NMDA2A and B) e
GABA receptors nos animais no-sensibilizados
- outras anlises em andamento
Estudos em andamento
Micro-array para anlise simultnea da expresso de vrios genes
Diferenas nos nveis de ligao seriam pr-existentes ao
tratamento, ou teriamsido induzidas pelo mesmo?
Ausncia de diferenas nos estudos de auto-radiografia no
exclui participao dos receptores no fenmeno (como no
caso do D1, por ex.) outras abordagens neuroqumicas e
eletrofisiolgicas
Associao entre processos de memria e sensibilizao
necessidade de se estudar outras tarefas de aprendizagem
Entendimento dos fatores que podem facilitar ou criar
resistncia sensibilizao ao etanol podem contribuir para
o entendimento das bases neurobiolgicas da dependncia
ao etanol, assim como da propenso individual para o
desenvolvimento da dependncia.
Implicaes
Sensibilizao pode aumentar a
vulnerabilidade dependncia de lcool
Animais sensibilizados apresentam prejuzo da
LTD mediada pelo receptor NMDA
Os dados sugerem que este prejuzo poderia
estar associado com diferenas individuais na
vulnerabilidade dependncia de lcool.
Implicaes
GENTICA
Desenvolvimento
maturao do SNC
gnero, etc
COMPORTAMENTO
NEUROBIOLOGIA
AMBIENTE
SOCIAL
Estudo de fatores genticos
SIONALDO FERREIRA, NILZA ARAJO, ISABEL QUADROS (1999), GABRIELA OLIVEIRA, DBORA HIPLIDE
(atrs) DEBORAH SUCHECKI (1983), AGATHA TRINDADE (2003), MARIA LUCIA O. SOUZA-FORMIGONI (1979),
SHIRLEY TAKAHASHI (2003), RAQUEL FORNARI, ANDREZZA KIM (2005) (PRIMEIRO PLANO)
CAMARINI
((USP)
NBREGA
(CAMH)
ROSELI BOERGEN-
LACERDA 1978
JANDIRA MASUR
PIRES
ZWICKER
SILVA-FILHO
HELENA
LODDER
SANTOS
TABACH
GINA STRUFFALDI
MORATO 1973
COLABORADORES
DALMEIDA (PEDIATRICS/UNIFESP)
FRUSSA-FILHO (PHARMACOLOGY UNIFESP)
PLANETA (UNESP)
Nesta linha de pesquisa muitos biomdicos (13) tm
trabalhado:
ELIANE DE LUCCA (1995)
SYLVIA ENNS (1997)
suzi
Karina
Abraho
Gabriela
Fujisaka
Francine
Goeldner
ETANOL E NEUROTRANSMISSO
Neurotransmissores de maior interesse:
DA, 5HT, Glu, GABA, peptdeos opiides, adenosina
3 categorias:
1) Neurotransmissores excitatrios que ativam a clula ps-
sinptica Ex: glutamato
2) Neurotransmissores inibitrios que deprimem a atividade da
clula ps-sinptica Ex: GABA
3)Neuromoduladores que modificam a resposta da clula ps-
sinptica a outros neurotransmissores
Ex: adenosina
5) aumenta os nveis de serotonina
Animais que preferem lcool (P) apresentam nveis de 5HT
mais baixos do que os que no preferem (NP), (McBride et
al.1995) e possuem menor quantidade de receptores 5HT1A
(DeVry 1995) principalmente na regio do accumbens
Hiptese: ingesto de lcool seria uma tentativa de
normalizar baixos nveis de 5HT, desde que etanol
agudamente aumenta os nveis de 5HT
Inibidores seletivos de recaptao de serotonina (ISRS), como
a fluoxetina, provocam reduo do consumo de etanol em
animais e em alguns dependentes de lcool
antagonistas dos receptores 5HT3 e 5HT1a reduzem o os
efeitos teraputicos destas drogas podem estar associados aos
efeitos sobre ansiedade e depresso, co-morbidades
freqentemente associadas dependncia de lcool
Mecanismos de ao das drogas de abuso - lcool
6) pode afetar a funo de neuromoduladores como a adenosina
ADENOSINA
A interao entre este modulador e receptores de adenosina
localizados em superfcies de membrana pode facilitar ou dificultar a
neurotransmisso
Etanol afeta a funo do sistema adenosina, por alterar a funo de
seus transportadores, provocando alterao nos nveis de
mensageiros secundrios
Estes efeitos estariam relacionados sedao, intoxicao e
incoordenao motora induzidas pelo lcool
SISTEMA GLUTAMATRGICO
a importncia do aminocido Glutamato s foi reconhecida nas
ltimas dcadas, sendo seus receptores identificados nas dcadas de
70 e 80
a ativao de seus receptores: acido 4 propil--amino-3 hidroxi-5-
metil-ioxizol (AMPA), kainato ou n-metil-d-aspartato (NMDA) causa
excitao da clula ps-sinptica, devido ao aumento da entrada de
Na
+
ou Ca
+
, que causa despolarizao
Primeiros estudos sobre interao de etanol com glutamato surgiram
a partir de 1989, demonstrando em cultura de clulas que baixas
concentraes de etanol apresentavam efeito inibidor do fluxo inico
mediado pelo NMDA
outros receptores do Glutamato tambm podem ser inibidos mas em
concentraes maiores
lcool altera a liberao de neurotransmissores (DA, Nor, Ach)
induzida pela ativao do NMDA
SISTEMA GLUTAMATRGICO
parece ser necessria a presena da subunidade NR2B do receptor
NMDA para que ocorra a ao inibitria do etanol
as alteraes induzidas pela inibio do receptor NMDA esto na base
de muitos dos efeitos farmacolgicos, comportamentais e
conseqncias do consumo de lcool como:
Sndrome Fetal pelo lcool (resultante da inibio do NMDA no perodo pr-natal)
alteraes de memria e aprendizagem (devido a alteraes na LPT (long-term-
potentiation
+
aumento da excitotoxicidade devida a aumento de receptores NMDA (decorrncia do
consumo crnico de etanol). Antagonistas de NMDA reduzem a sintomatologia da
sndrome de abstinncia
estudos comportamentais sugerem que ratos reagem administrao de
antagonistas do receptor NMDA da mesma forma que ao lcool
* LTP processo atravs do qual neurnios formam conexes sinpticas estveis aps terem sido expostos repetidamente a padres
especficos de estimulao
2) Inibe a neurotransmisso mediada pelos receptores
glutamatrgicos NMDA
receptor NMDA
outros receptores do Glutamato tambm podem
ser inibidos mas em concentraes maiores
lcool altera a liberao de outros
neurotransmissores (DA, Nor, Ach) regulada pela
ativao dos receptores NMDA
3) Aumenta a neurotransmisso do sistema GABA
complexo receptor GABA
Etanol aumenta o fluxo de Cl- para dentro das
clulas, facilitando a ao do GABA (efeitos
ansiolticos, sedativos e hipnticos atingidos com
altas doses)
SISTEMA GABA
O GABA o principal neurotransmissor inibitrio do SNC, agindo
atravs da interao com o receptor GABA
A
Etanol aumenta o fluxo de Cl
-
para dentro das clulas, facilitando a
ao do GABA, produzindo inibio neuronal
Estas aes esto associadas aos efeitos ansiolticos sedativos e
hipnticos do lcool (altas doses)
alteraes na funo do receptor GABA
A
esto associadas ao
desenvolvimento de tolerncia aos efeitos depressores do etanol,
assim como dependncia fisiolgica
diferenas individuais na susceptibilidade ao efeito do lcool no
sistema GABA poderiam estar associadas `a susceptibilidade para o
desenvolvimento de dependncia do lcool
agonistas gabargicos como os BDZ so eficazes no tratamento da
sndrome de abstinncia ao lcool
PEPTDEOS OPIIDES ENDGENOS
So substncias neuromoduladoras que alteram as aes de
neurotransmissores do SNC
eles dificultam a excitao neuronal por alterarem as propriedades
eltricas da clula nervosa
induzem alvio da dor e euforia
etanol pode ativar o sistema opiide, contribuindo para o efeito
reforador.
Antagonistas destes opiides reduzem a auto-administrao de lcool
e a vontade de ingerir lcool em humanos
h hipteses que um sistema opiide com responsividade aumentada
poderia contribuir para a predisposio ao alcoolismo em alguns
indivduos
4) aumenta a liberao de opiides e canabinides no sistema de
recompensa cerebral
h hipteses que um sistema opiide com responsividade
aumentada poderia contribuir para a predisposio ao
alcoolismo em alguns indivduos
Antagonistas de opiides
reduzem ou eliminam os
efeitos estimulantes ("high")
do lcool, reduzem a auto-
administrao de lcool e o
desejo ("craving") de consumir
lcool (em humanos)

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Prof.a. Dra. Maria Lucia O. Souza Formigoni

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