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Organisation mondiale de la Sant

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ISBN 92 4 254650 X
Depuis sa premire dition publie il y a plus de vingt ans en 1984, le Manuel
de scurit biologique en laboratoire est toujours le guide pratique auquel
les laboratoires de tous niveaux se rfrent en matire de scurit biologique.
Une bonne technique microbiologique et une utilisation judicieuse des
quipements de scurit par un personnel convenablement form sont
toujours des lments fondamentaux de la scurit biologique en laboratoire.
Cela tant, la mondialisation, les progrs importants raliss par la
technologie, lapparition de maladies nouvelles et les srieuses menaces
que reprsentent les agents ou les toxines microbiologiques dtourns de
leur usage normal et dlibrment introduits dans lenvironnement, appellent
un rexamen des techniques actuellement utilises dans les laboratoires.
Cest pourquoi le manuel a t largement remani et dvelopp loccasion
de cette nouvelle dition.
Le manuel aborde maintenant la question de lvaluation du risque et les
rgles de scurit observer dans la mise en uvre des technologies de
recombinaison de lADN ; en outre, il propose un certain nombre de principes
directeurs pour la mise en service des laboratoires et leur agrment. Les
diffrents concepts de la scurit biologique sont exposs, de mme que la
rglementation internationale la plus rcente relative au transport des
substances infectieuses. Diverses considrations de scurit biologique
applicables aux laboratoires des tablissements de soins, qui figuraient dans
dautres publications de lOMS, sont galement reprises dans le manuel.
Le manuel devrait continuer tre, pour les pays, un encouragement mettre
en uvre des programmes de scurit biologique ainsi que des codes
nationaux de bonnes pratiques pour la manipulation, dans de bonnes
conditions de scurit, de matriels biologiques potentiellement infectieux.
MANUEL DE
SCURIT BIOLOGIQUE
EN LABORATOIRE
Troisime dition
MANUEL DE SCURITE
BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
Troisime Edition
ORGANISATION MONDIALE DE LA SANT
Genve
2005
Catalogage la source: Bibliothque de lOMS
Organisation mondiale de la Sant.
Manuel de scurit biologique en laboratoire. 3
e
d.
1.Matrise risque biologique mthodes 2.Laboratoire normes
3.Infection laboratoire prvention et contrle 4.Manuel I.Titre.
ISBN 92 4 254650 X (Classication LC/NLM: QY 25)
Cette publication a bnci dune subvention (Grant/Cooperative Agreement Number U50/
CCU012445-08) des Centers for Disease Control and Prevention (CDC), Atlanta, Gorgie, Etats-
Unis dAmrique. Les informations quelle contient sont publies sous la responsabilit exclusive des
auteurs et ne reprsentent pas ncessairement le point de vue ofciel de lOMS.
Organisation mondiale de la Sant 2005
Tous droits rservs. Il est possible de se procurer les publications de lOrganisation mondiale
de la Sant auprs de lquipe Marketing et diffusion, Organisation mondiale de la Sant, 20
avenue Appia, 1211 Genve 27 (Suisse) (tlphone: +41 22 791 2476; tlcopie: +41 22 791 4857;
adresse lectronique: bookorders@who.int). Les demandes relatives la permission de repro-
duire ou de traduire des publications de lOMS que ce soit pour la vente ou une diffusion
non commerciale doivent tre envoyes lunit Marketing et diffusion, ladresse ci-dessus
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y gurent nimpliquent de la part de lOrganisation mondiale de la Sant aucune prise de posi-
tion quant au statut juridique des pays, territoires, villes ou zones, ou de leurs autorits, ni quant
au trac de leurs frontires ou limites. Les lignes en pointill sur les cartes reprsentent des fron-
tires approximatives dont le trac peut ne pas avoir fait lobjet dun accord dnitif.
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duits commerciaux sont agrs ou recommands par lOrganisation mondiale de la Sant, de
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indique quil sagit dun nom dpos.
LOrganisation mondiale de la Sant a pris toutes les dispositions voulues pour vrier les
informations contenues dans la prsente publication. Toutefois, le matriel publi est diffus
sans aucune garantie, expresse ou implicite. La responsabilit de linterprtation et de lutilisa-
tion dudit matriel incombe au lecteur. En aucun cas, lOrganisation mondiale de la Sant ne
saurait tre tenue responsable des prjudices subis du fait de son utilisation.
Conception graphique par Minimum graphics
Imprim a Malte
iii
Avant-propos viii
Remerciements x
1. Principes gnraux 1
Introduction 1
PARTIE I Les principes directeurs de la scurit biologique 5
2. Evaluation du risque microbiologique 7
Echantillons pour lesquels les informations sont limites 8
Evaluation du risque et micro-organismes gntiquement
modis 8
3. Les laboratoires de base Scurit biologique niveaux 1 et 2 9
Code de bonnes pratiques 9
Conception et amnagement du laboratoire 12
Appareils et quipements de laboratoire 16
Surveillance mdico-sanitaire 17
Formation 18
Traitement des dchets 19
Scurit chimique, lectrique, incendie, radioprotection
et scurisation de lappareillage 21
4. Le laboratoire de connement Scurit biologique
niveau 3 22
Code de bonnes pratiques 22
Conception et amnagement du laboratoire 23
Appareils et quipements de laboratoire 24
Surveillance mdico-sanitaire 25
5. Le laboratoire de connement haute scurit Scurit
biologique niveau 4 28
Code de bonnes pratiques 28
Conception et amnagement du laboratoire 29
Table des matires
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
iv
MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
6. Animaleries 32
Animalerie Scurit biologique niveau 1 33
Animalerie Scurit biologique niveau 2 33
Animalerie Scurit biologique niveau 3 34
Animalerie Scurit biologique niveau 4 35
Invertbrs 36
7. Principes directeurs pour la mise en service des
laboratoires ou installations 38
8. Principes directeurs pour lagrment des laboratoires/
installations 41
PARTIE II Scurit biologique en laboratoire 49
9. Principes de la sret biologique en laboratoire 51
PARTIE III Equipements de laboratoire 55
10. Enceintes de scurit biologique 57
Enceinte de scurit biologique de classe I 58
Enceinte de scurit biologique de classe II 59
Enceinte de scurit biologique de classe III 62
Raccordements pour lvacuation de lair des enceintes
de scurit biologique 62
Choix dune enceinte de scurit biologique 63
Utilisation des enceintes de scurit biologique au laboratoire 64
11. Equipements de scurit 68
Isolateurs dpression en lm ou feuille de plastique souple 68
Pipetteurs 70
Homogniseurs, agitateurs secoueurs, mlangeurs
et gnrateurs dultrasons 71
Anses usage unique 71
Micro-incinrateurs 72
Equipements et vtements de protection individuelle 72
PARTIE IV Bonnes techniques microbiologiques 75
12. Techniques de laboratoire 77
Rgles de scurit pour la manipulation des chantillons
au laboratoire 77
Utilisation des pipettes et des dispositifs de pipettage 78
Comment viter la dissmination de matriel infectieux 78
TABLE DES MATIRES
v
Utilisation des enceintes de scurit biologique 79
Comment viter lingestion de matriel infectieux et le
contact avec la peau et les yeux 79
Comment viter linoculation accidentelle de matriel
infectieux 80
Sparation du srum 80
Utilisation des centrifugeuses 81
Utilisation des homogniseurs, des agitateurs secoueurs,
des mlangeurs et des gnrateurs dultrasons 82
Utilisation des broyeurs de tissus 82
Entretien et utilisation des rfrigrateurs et conglateurs 82
Ouverture des ampoules contenant du matriel infectieux 83
lyophilis
Stockage des ampoules contenant du matriel infectieux 83
Prcautions dusage pour manipuler du sang et autres
liquides biologiques, des tissus et des excreta 83
Prcautions prendre avec le matriel pouvant contenir
des prions 85
13. Plans durgence et conduite tenir en cas durgence 88
Plan durgence 88
Conduite tenir en cas durgence dans un laboratoire
de microbiologie 89
14. Dsinfection et strilisation 92
Dnitions 92
Nettoyage du matriel de laboratoire 93
Germicides chimiques 93
Dcontamination de lenvironnement local 100
Dcontamination des enceintes de scurit biologique 100
Lavage et dcontamination des mains 101
Dsinfection et strilisation par la chaleur 101
Incinration 104
Elimination 105
15. Introduction au transport des matires infectieuses 106
Rglementation internationale relative aux transports 106
Le systme du triple emballage 107
Consignes pour nettoyer des produits rpandus 107
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
vi
MANUEL DE SECURITE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
PARTIE V Introduction aux biotechnologies 111
16. Scurit et technologies de recombinaison de lADN 113
Considrations bioscuritaires applicables aux systmes dexpression
biologiques 114
Considrations bioscuritaires applicables aux vecteurs dexpression 114
Vecteurs viraux pour le transfert de gnes 114
Animaux transgniques et animaux knock out 115
Plantes transgniques 115
Evaluation du risque dans le cas des organismes gntiquement
modis 115
Autres considrations 117
PARTIE VI Scurit chimique, lectrique et incendie 119
17. Les risques chimiques 121
Voies dexposition 121
Stockage des produits chimiques 121
Rgles gnrales dincompatibilit chimique 121
Toxicit des produits chimiques 121
Produits chimiques explosifs 122
Renversement accidentel de produits chimiques 122
Gaz comprims et liqus 123
18. Autres types de risques au laboratoire 125
Risque dincendie 125
Risques lectriques 126
Bruit 126
Rayonnements ionisants 127
PARTIE VII La scurit : organisation et formation 131
19. Le responsable de la scurit et le comit de scurit 133
Le dlgu la scurit 133
Le comit de scurit biologique 134
20. La scurit du personnel de maintenance et dentretien 136
Services de maintenance des appareils et des btiments 136
Nettoyage 136
21. Programmes de formation 137
TABLE DES MATIRES
vii
PARTIE VIII Liste des contrles de scurit 141
22. Liste des contrles de scurit 143
Locaux 143
Entreposage 144
Assainissement et locaux pour le personnel 144
Chauffage et ventilation 144
Eclairage 144
Services 144
Sret biologique en laboratoire 145
Prvention des incendies et protection contre le feu 145
Stockage des liquides inammables 146
Gaz comprims et liqus 146
Risques lectriques 147
Protection individuelle 147
Sant et scurit du personnel 148
Appareils et quipements de laboratoire 148
Matriel infectieux 149
Produits chimiques et matires radioactives 149
PARTIE IX Bibliographie, annexes et index 151
Bibliographie 153
Annexe 1 Premiers secours 156
Annexe 2 Vaccination du personnel 157
Annexe 3 Centres collaborateurs de lOMS pour la scurit biologique 158
Annexe 4 Scurit demploi des appareils et instruments 159
Appareils et instruments dont lutilisation peut
comporter un risque 159
Annexe 5 Produits chimiques : dangers et prcautions prendre 163
Index 211
viii
LOrganisation mondiale de la Sant (OMS) a pris conscience depuis longtemps que
la scurit, et en particulier la scurit biologique, constitue une question importante
au plan international. LOMS a en effet publi la premire dition de son Manuel de
scurit biologique ds 1984. Ce manuel a constitu, pour les pays, une incitation
accepter et appliquer les concepts de base de la scurit biologique et mettre au
point des recueils nationaux de directives pratiques ou codes de bonnes pratiques
destins aux laboratoires de leur territoire o sont manipuls des micro-organismes
pathognes. Depuis cette poque, de nombreux pays se sont inspirs des indications
du manuel pour laborer ces recueils ou codes. Une deuxime dition en a t publie
en 1997.
En publiant cette troisime dition du manuel, consacre aux questions de sret
et de scurit biologiques qui se posent nous en ce troisime millnaire, lOMS
continue de jouer un rle pilote dans le domaine de la scurit biologique au niveau
international. Dans la prsente dition, limportance dune attitude responsable du
personnel est constamment souligne. De nouveaux chapitres ont t ajouts; ils
portent sur lvaluation du risque, les mesures de scurit dans la mise en uvre de
techniques utilisant de lADN recombinant et le transport dchantillons biologiques
infectieux. Des vnements rcents ont mis en lumire les nouvelles menaces que lon
pourrait faire peser sur la sant publique en dtournant dlibrment des agents ou
des toxines biologiques de leur usage normal pour les librer dans lenvironnement.
La troisime dition constitue donc galement une introduction la notion de sret
biologique notamment en ce qui concerne la protection des ressources biologiques
contre le vol, la perte ou le dtournement de ces agents qui pourraient dboucher sur
une utilisation mauvais escient dommageable pour la sant publique. Le nouveau
manuel contient galement des informations de nature scuritaire tires dune pu-
blication de lOMS intitule Safety in health care laboratories (1).
Cette troisime dition du Manuel de scurit biologique en laboratoire constituera
un ouvrage de rfrence et un guide utile aux pays dsireux de sattaquer la tche
difcile que reprsentent llaboration et ltablissement de recueils nationaux de
directives pratiques ou de codes de bonnes pratiques, pour une scurisation des
Avant-propos
AVANT-PROPOS
ix
ressources microbiologiques qui nentrave pas leur utilisation en clinique, dans la
recherche et en pidmiologie.
Dr A. Asamoah-Baah
Sous-directeur gnral
Maladies transmissibles
Organisation mondiale de la Sant
Genve, Suisse
x
Nous sommes trs reconnaissants aux personnes dont les noms suivent et dont les
comptences nous ont t prcieuses pour la prparation de cette troisime dition
du Manuel de scurit biologique en laboratoire :
Dr W. Emmett Barkley, Howard Hughes Medical Institute, Chevy Chase, MD, Etats-
Unis dAmrique
Dr Murray L. Cohen, Centers for Disease Control and Prevention, Atlanta, GA, Etats-
Unis dAmrique (retrait)
Dr Ingegerd Kallings, Institut sudois pour la lutte contre les maladies infectieuses,
Stockholm, Sude
Mme Mary Ellen Kennedy, Consultante en scurit biologique, Ashton, Ontario,
Canada
Mme Margery Kennett, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North
Melbourne, Australie (retraite)
Dr Richard Knudsen, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and
Prevention, Atlanta, GA, Etats-Unis dAmrique
Dr Nicoletta Previsani, Programme de scurit biologique, Organisation mondiale de
la Sant, Genve, Suisse
Dr Jonathan Richmond, Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and
Prevention, Atlanta, GA, Etats-Unis dAmrique (retrait)
Dr Syed A. Sattar, Facult de Mdecine, Universit dOttawa, Ottawa, Ontario, Canada
Dr Deborah E. Wilson, Division of Occupational Health and Safety, Ofce of Research
Services, National Institutes of Health, Department of Health and Human Services,
Washington, DC, Etats-Unis dAmrique
Dr Riccardo Wittek, Institut de biologie animale, Universit de Lausanne, Lausanne,
Suisse
Nous exprimons galement notre gratitude aux personnes suivantes pour laide
quelles nous ont apporte :
Mme Maureen Best, Bureau de la scurit des laboratoires, Sant Canada, Ottawa,
Canada
Dr Mike Catton, Victorian Infectious Diseases Reference Laboratory, North
Melbourne, Australie
Remerciements
REMERCIEMENTS
xi
Dr Shanna Nesby, Ofce of Health and Safety, Centers for Diseases Control and
Prevention, Atlanta, GA, Etats-Unis dAmrique
Dr Stefan Wagener, Canadian Science Centre for Human and Animal Health,
Winnipeg, Canada
Les auteurs et les membres du comit de lecture souhaitent galement exprimer leur
gratitude aux nombreux spcialistes qui ont contribu la premire et la seconde
dition du prsent manuel ainsi qu la rdaction de la publication de lOMS intitule
Safety in health-care laboratories (1997) (1).
1
1. Principes gnraux
Introduction
Dans tout le manuel, il est fait rfrence au danger relatif que reprsentent les micro-
organismes infectieux au moyen dune classication par groupe de risque (groupes
de risque de lOMS 1, 2, 3 et 4). Cette classication par groupe de risque nest appli-
cable quaux travaux de laboratoire. Ces groupes de risque sont explicits dans le
tableau 1.
Les laboratoires sont dsigns comme suit : laboratoire de base scurit
biologique niveau 1, laboratoire de base scurit biologique niveau 2, laboratoire
de connement scurit biologique niveau 3, laboratoire de connement haute
scurit scurit biologique niveau 4. Le niveau de scurit biologique est un indice
composite bas sur le type dorganisation, le mode de construction, les moyens de
connement et lappareillage du laboratoire ainsi que sur les pratiques et modes
opratoires observer pour travailler sur des agents appartenant aux divers groupes
Tableau 1. Classication des micro-organismes infectieux par groupe de risque
Groupe de risque 1 (risque faible ou nul pour les individus ou la collectivit)
Micro-organisme qui, selon toute probabilit, ne peut causer de maladie humaine ou animale.
Groupe de risque 2 (risque modr pour les individus, faible pour la collectivit)
Germe pathogne capable de provoquer une maladie humaine ou animale mais qui ne prsente
vraisemblablement pas un srieux danger pour le personnel de laboratoire , la collectivit, le
btail ou lenvironnement. Une exposition en laboratoire est susceptible dentraner une infection
grave, mais qui peut tre traite ou prvenue efcacement; par ailleurs le risque de propagation
de linfection est limit.
Groupe de risque 3 (risque important pour les individus, faible pour la collectivit)
Germe pathogne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale, mais qui ne
se transmet gnralement pas dun individu lautre. Il existe un traitement et des mesures
prventives efcaces.
Groupe de risque 4 (risque important pour les individus comme pour la collectivit)
Germe pathogne qui cause habituellement une grave maladie humaine ou animale et peut se
transmettre facilement dun individu lautre, soit directement, soit indirectement. Il nexiste
gnralement ni traitement, ni mesures prventives efcaces.
de risque. Le tableau 2 indique le rapport entre groupe de risque et niveau de scu-
rit biologique, mais il nassimile pas les groupes de risque au niveau de scurit
biologique des laboratoires conus pour travailler sur des micro-organismes appar-
tenant ces groupes.
Chaque pays ou rgion devra tablir une classication nationale ou rgionale, par
groupe de risque, des micro-organismes. Cette classication devra reposer sur les
critres suivants :
1. Pathognicit du germe.
2. Mode de transmission et gamme dhtes, qui peuvent dpendre de ltat immu-
nitaire de la population locale, de la densit et de la mobilit des htes, de la
prsence de vecteurs appropris et du niveau dhygine de lenvironnement.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
2
Tableau 2. Rapport entre groupe de risque et niveau de scurit biologique,
pratiques et appareillage
GROUPE DE NIVEAU DE TYPE DE PRATIQUES APPAREILLAGE DE
RISQUE SCURIT LABORATOIRE DE PABORATOIRE SCURIT
1 De base niveau Enseignement BTM Aucun;
de scurit de base paillasse sans
biologique 1 protection
2 De base niveau Services de BTM et Paillasse sans
de scurit sant primaires; vtements protection et
biologique 2 laboratoire protecteurs, ESB contre le
danalyses ou logo de risque risque
de recherche biologique darosols
3 Connement Diagnostic Comme niveau ESB ou autres
niveau de spcialis, 2, plus moyens de
scurit recherche vtements connement
biologique 3 spciaux, accs primaire pour
rglement et lensemble des
ux dair dirig activits
4 Connement Manipulation Comme niveau ESB classe III
haute scurit de germes 3, plus sas air ou
niveau de pathognes lentre, combinaisons
scurit dangereux douche la pressurises
biologique 4 sortie et utilises avec
limination une ESB classe
spcique des II , autoclave
dchets deux portes
formant sas
mural, air ltr
BTM, bonnes techniques microbiologiques; ESB, enceinte de scurit biologique (voir Partie IV).
1. PRINCIPES GNRAUX
3
3. Possibilit de prendre localement des mesures prventives efcaces, lesquelles
peuvent comprendre : une prophylaxie par vaccination ou administration
dimmunsrums (immunisation passive), des mesures sanitaires concernant par
exemple lhygine des aliments et de leau, llimination des rservoirs animaux
ou des arthropodes vecteurs.
4. Possibilit de dispenser localement un traitement efcace : immunisation passive,
vaccination post-exposition, utilisation danti-infectieux et dagents chimio-
thrapiques ou antiviraux, sans ngliger le risque dapparition de souches
pharmacorsistantes.
Pour dterminer quel niveau de scurit biologique en laboratoire sapplique
un agent donn, il faut procder une valuation du risque. Pour cela, on doit
prendre en compte non seulement le groupe de risque, mais aussi un certain nombre
dautres facteurs. Par exemple, un agent inclus dans le groupe de risque 2 ncessite
gnralement une installation, un appareillage, des pratiques et des modes opratoires
correspondant au niveau de scurit 2 si lon veut que le travail seffectue avec le
minimum de risques. Par contre, si certaines manipulations impliquent la production
darosols trs concentrs, il vaudra mieux passer au niveau 3 pour que les conditions
Tableau 3. Normes applicables aux diffrents niveaux de scurit biologique
NIVEAU DE SCURIT BIOLOGIQUE
1 2 3 4
Isolement du laboratoire
a
Non Non Oui Oui
Salle tanche pour dcontamination Non Non Oui Oui
Ventilation :
circulation vers lintrieur Non Souhaitable Oui Oui
systme de ventilation rgul Non Souhaitable Oui Oui
ltre HEPA sur la sortie dair Non Non Oui/Non
b
Oui
Double porte dentre Non Non Oui Oui
Sas air Non Non Non Oui
Sas air avec douche Non Non Non Oui
Vestibule Non Non Oui
Vestibule avec douche Non Non Oui/Non
c
Non
Traitement des efuents Non Non Oui/Non
c
Oui
Autoclave :
sur place Non Souhaitable Oui Oui
dans une salle du laboratoire Non Non Souhaitable Oui
deux portes formant sas Non Non Souhaitable Oui
Enceinte de scurit biologique Non Souhaitable Oui Oui
Systme de surveillance de la scurit du personnel
d
Non Non Souhaitable Oui
a
Isolement environnemental et fonctionnel par rapport aux points de passage
b
Selon la situation de la sortie dair (voir chapitre 4)
c
Selon le ou les agents qui sont manipuls
d
Par exemple, fentre, tlvision en circuit ferm, metteur-rcepteur
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
4
de scurit soient remplies, car ce niveau, un meilleur connement des arosols sera
assur dans le laboratoire. La dtermination du niveau de scurit biologique exig par
une manipulation donne consiste donc apprcier le risque en professionnel ,
plutt qu adopter automatiquement le niveau de scurit correspondant au groupe
de risque auquel appartient lagent pathogne en cause (voir chapitre 2).
Le tableau 3 rcapitule les installations et moyens ncessaires chaque niveau de
scurit biologique.
Pour dterminer le niveau de scurit biologique, on prend donc en compte le
micro-organisme (agent pathogne), les installations et moyens existants ainsi que les
pratiques et les modes opratoires respecter pour que le travail de laboratoire
seffectue dans de bonnes conditions de scurit.
PARTIE I
Les principes
directeurs de la
scurit biologique
2. Evaluation du risque
microbiologique
7
Dans sa pratique, la scurit biologique repose essentiellement sur une valuation du
risque. On peut saider de nombreux outils pour procder cette valuation, mais le
facteur le plus important reste le jugement professionnel. Lvaluation du risque doit
tre cone ceux qui connaissent le mieux les caractristiques des micro-organismes
sur lesquels on se propose de travailler, lappareillage et les modes opratoires mettre
en uvre, les modles animaux qui pourraient tre utiliss ainsi que les systmes de
connement et les installations disponibles. Il incombe au directeur du laboratoire ou
au chercheur principal de veiller ce quune valuation approprie du risque soit
effectue en temps voulu et de collaborer troitement avec le comit de scurit de
linstitution et le personnel charg de la scurit biologique pour que les quipements
et les installations ncessits par les travaux envisags soient mis la disposition du
laboratoire. Une fois le risque valu, on procdera priodiquement un rexamen
systmatique de la situation et on rvisera lvaluation si ncessaire, compte tenu
dventuelles donnes nouvelles susceptibles davoir des incidences sur le degr de
risque et de toute nouvelle information utile tire de la littrature scientique.
Ltablissement de groupes de risque applicables aux diffrents agents microbiens
constitue lun des outils les plus utiles pour lvaluation du risque microbiologique
(voir chapitre 1). Toutefois, il ne suft pas de connatre le groupe de risque auquel
appartient un agent pathogne donn pour valuer le risque effectif. Dautres lments
dapprciation doivent galement tre pris en compte en tant que de besoin, savoir :
1. La pathognicit du germe et la dose infectieuse
2. Lissue vraisemblable dune exposition au germe
3. Le mode de contamination naturel
4. Les autres voies ou modes de contamination rsultant de manipulations en laboratoire
(voie parentrale, particules aroportes, voie digestive)
5. La stabilit du germe dans lenvironnement
6. La concentration du germe et le volume de matriel biologique concentr
manipuler
7. La prsence dun hte appropri (humain ou animal)
8. Les informations tires de lexprimentation animale, les rapports faisant tat
dinfections contractes en laboratoire ou les rapports mdicaux
9. Le type doprations envisages (traitement par les ultra-sons, production
darosols, centrifugation, etc.)
10. Toute manipulation gntique du micro-organisme susceptible dtendre sa
gamme dhtes ou de modier sa sensibilit aux traitements reconnus comme
efcaces (voir chapitre 16)
11. La possibilit dintervenir localement titre prophylactique ou curatif.
En sappuyant sur les informations recueillies lors de lvaluation du risque, il est possible
de dterminer quel est le niveau de scurit requis pour les travaux envisags, de choisir
les quipements de protection individuelle et dtablir des modes opratoires normaliss
(MON) comportant dautres mesures de scurit labores en vue dassurer un
maximum de scurit pendant les travaux.
Echantillons pour lesquels les informations sont limites
La procdure dcrite plus haut pour lvaluation du risque donne satisfaction lorsquon
dispose dinformations sufsantes. Il y a cependant des cas o lon ne dispose pas de
donnes sufsantes pour apprcier correctement le risque, par exemple lorsquon a
affaire des chantillons cliniques ou pidmiologique prlevs sur le terrain. En pareil
cas, il est plus prudent de manipuler ces chantillons avec prcaution.
1. Les prcautions habituelles (2) doivent toujours tre prises et des dispositifs
mcaniques de protection (gants, blouses, lunettes) utiliss lors du prlvement
dchantillons sur des malades.
2. Connement de base les pratiques et modes opratoires prvues au niveau de
scurit biologique 2 constituent un minimum pour la manipulation des chantillons.
3. Le transport des chantillons doit seffectuer conformment la rglementation
nationale ou internationale.
Certaines donnes peuvent apporter un complment dinformation utile
lvaluation du risque que reprsente la manipulation de ces chantillons, savoir :
1. Le dossier mdical du malade
2. Les donnes pidmiologiques (statistiques de morbidit et de mortalit, mode de
transmission prsum, autres donnes fournies par ltude de la ambe pidmique)
3. Donnes relatives lorigine gographique de lchantillon.
Lorsquclatent des ambes dune maladie dont on ignore ltiologie, les autorits
comptentes, lOMS ou les deux la fois, peuvent tre amenes laborer des direc-
tives spciales et les diffuser sur le rseau internet (comme cela a t le cas en 2003
lors de lapparition du syndrome respiratoire aigu svre (SRAS)), le but tant dindi-
quer comment prparer les chantillons pour lexpdition et de prciser quel niveau
de scurit biologique les analyses doivent tre effectues.
Evaluation du risque et micro-organismes gntiquement modis
On trouvera au chapitre 16 une tude dtaille de lvaluation du risque dans le cas
dorganismes gntiquement modis (OGM).
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
8
9
3. Les laboratoires de base
Scurit biologique niveaux
1 et 2
Aux ns du prsent manuel, les indications et recommandations quil contient et qui
constituent un minimum pour les laboratoires de tous niveaux de scurit biologique,
sappliquent aux micro-organismes des groupes de risque 1 4. Si certaines prcau-
tions peuvent sembler inutiles pour quelques germes du groupe de risque 1, elles sont
nanmoins souhaitables titre dentranement lobservation de bonnes techniques
microbiologiques (BTM), cest--dire de techniques qui assurent la scurit. Les
laboratoires danalyses ou ceux qui sont attachs un tablissement de soins
(laboratoires de sant publique, laboratoires danalyses biologiques ou laboratoires
hospitaliers) doivent tous tre amnags au minimum conformment au niveau 2 de
scurit biologique. Etant donn quaucun laboratoire na la matrise totale des chan-
tillons quil reoit, il nest pas exclu que le personnel soit expos des micro-
organismes appartenant un groupe de risque plus lev que prvu. Cette possibilit
doit tre prise en compte dans llaboration des politiques et des plans de scurit.
Dans certains pays, les laboratoires danalyses biologiques sont soumis un agrment
ofciel. Partout dans le monde, les prcautions habituelles (2) de scurit doivent tre
adoptes et observes.
Les principes directeurs applicables aux laboratoires de base niveaux de scurit
biologique 1 et 2 exposs ici sont aussi dtaills et complets que possible car ils sont
essentiels pour tout laboratoire quel que soit soit son niveau de scurit biologique.
En ce qui concerne les laboratoires de connement scurit biologique niveau 3, et
les laboratoires de connement haute scurit scurit biologique niveau 4, les
principes directeurs exposs plus loin (chapitres 4 et 5) constituent des variantes ou
des complments des principes de base, applicables aux travaux sur des agents
pathognes particulirement dangereux.
Code de bonnes pratiques
Ce code est une liste des mthodes et techniques de laboratoire les plus importantes
pouvant constituer la base dune bonne technique microbiologique. Dans beaucoup
de laboratoires ou programmes nationaux relatifs aux laboratoires, ce code peut tre
utilis pour mettre par crit des pratiques et des modes opratoires destins assurer
la scurit du travail en laboratoire.
Tout laboratoire doit disposer dun manuel ou dun guide (manuel pratique,
manuel de bonnes pratiques, guide de scurit au laboratoire, manuel de scurit, etc.)
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
10
dans lequel sont repertoris les dangers effectifs et potentiels et qui indique comment
procder pour les liminer ou du moins les rduire au minimum. Les bonnes
techniques microbiologiques sont un lment essentiel de la scurit au laboratoire.
Lemploi dquipements et dappareils de scurit ne sauraient sy substituer et ne peut
intervenir qu titre complmentaire. Les principes les plus importants sont indiqus
ci-dessous.
Accs
1. Le pictogramme international de danger biologique (gure 1) doit tre appos sur
les portes des salles o des micro-organismes appartenant au groupe de risque 2
ou aux groupes suprieurs sont manipuls.
2. Aucune personne trangre au service ne doit tre autorise pntrer dans les
zones de travail du laboratoire.
3. Les portes du laboratoire doivent rester fermes.
4. Les enfants ne doivent pas tre autoriss entrer dans les zones de travail du
laboratoire.
Figure 1. Panneau de mise en garde apposer sur les portes des laboratoires.
5. Tout accs lanimalerie doit tre subordonn une autorisation spciale.
6. La prsence dans le laboratoire danimaux qui ne servent pas aux exprimenta-
tions doit tre interdite.
Protection individuelle
1. Le port de combinaisons, blouses, sarraus ou uniformes est obligatoire pour le
travail au laboratoire.
2. Le port de gants appropris est obligatoire chaque fois quun geste comporte un
risque de contact accidentel direct avec du sang ou autres liquides biologiques, du
matriel potentiellement infectieux ou des animaux infects. Aprs usage, on
devra se dganter aseptiquement et se laver les mains.
3. Le personnel doit se laver les mains aprs avoir manipul du matriel infectieux
ou des animaux contagieux et avant de quitter le laboratoire.
4. Le port de lunettes de scurit, dun cran facial (visire) ou dun autre dispositif
de protection est obligatoire quand il est ncessaire dassurer la protection des yeux
ou du visage contre les projections de liquides, limpact dobjets ou le rayon-
nement ultraviolet articiel.
5. Il est interdit de porter les vtements protecteurs hors du laboratoire, comme par
exemple la cantine, la caftria, dans les bureaux, la bibliothque, la salle du
personnel ou les toilettes.
6. On ne doit pas porter de chaussures bout ouvert dans le laboratoire.
7. Il est interdit de manger, de boire, de fumer, de se maquiller ou de manipuler des
lentilles de contact dans les zones de travail du laboratoire.
8. Il est galement interdit dentreposer des aliments ou des boissons en quelque
point que ce soit des zones de travail du laboratoire.
9. Les vtements de protection qui ont t ports au laboratoire ne doivent pas tre
rangs dans les mmes vestiaires ou armoires que les vtements de ville.
Modes opratoires
1. le pipettage la bouche est rigoureusement interdit.
2. Aucun objet ou matriel ne doit tre port la bouche; les tiquettes ne doivent
pas tre humectes avec la langue.
3. Toutes les techniques mises en uvre doivent rduire au minimum la formation
darosols et de gouttelettes.
4. Lemploi daiguilles et de seringues hypodermiques doit tre limit. Elles ne
doivent en aucun cas remplacer les dispositifs de pipettage ou servir une autre
n que les injections par voie parentrale ou le prlvement de liquides
biologiques sur les animaux de laboratoire.
5. Si des liquides sont rpandus accidentellement, en cas daccident, dexposition
patente ou possible du matriel infectieux, le chef de laboratoire doit toujours
tre immdiatement avis. Les accidents et incidents survenus doivent tre con-
signs et le rapport archiv.
3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2
11
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
12
6. Il est ncessaire dtablir par crit une marche suivre pour le nettoyage des
produits de toute nature qui viendraient tre rpandus.
7. Les liquides contamins doivent tre dcontamins (par voie physique ou
chimique) avant dtre jets dans le rseau dgouts sparatif. Selon le rsultat de
lvaluation du risque que reprsentent le ou les agents manipuls, il pourra tre
ncessaire de disposer dun systme de traitement des efuents.
8. Si des documents doivent sortir du laboratoire, ils devront avoir t protgs de
toute contamination.
Zones de travail du laboratoire
1. Le laboratoire doit tre tenu propre et en ordre et exempt de tout produit ou objet
non ncessaire aux travaux.
2. Les plans de travail doivent tre dcontamins sils ont t souills par des
produits potentiellement dangereux ainsi qu la n de la journe de travail.
3. Tout les matriels, chantillons et cultures contamins doivent tre dcontamins
avant dtre jets ou nettoys pour tre rutiliss.
4. Lemballage et le transport des chantillons sont soumis la rglementation
nationale ou internationale pertinente.
5. Si les fentres peuvent tre ouvertes, elles doivent tre munies de grillages pour
empcher la pntration des arthropodes.
Gestion de la scurit biologique
1. Il incombe au directeur (la personne qui a la responsabilit directe du laboratoire)
de faire prparer et adopter un plan de gestion de la scurit biologique ainsi quun
manuel pratique, un guide de laboratoire ou un guide dhygine et scurit.
2. Le chef de laboratoire (qui relve directement du directeur du laboratoire) doit
veiller ce que le personnel reoive une formation rgulire en matire de
scurit au laboratoire.
3. Le personnel doit tre averti des risques particuliers aux activits du laboratoire
et tenu de lire le manuel. Il doit galement suivre les instructions et les protocoles
normaliss. Le chef de laboratoire devra sassurer de la bonne comprhension de
ces instructions. Le laboratoire doit disposer dun exemplaire du manuel de
laboratoire ou du guide dhygine et scurit.
4. Il doit exister un programme de lutte contre les arthropodes et les rongeurs.
5. Si ncessaire, tous les membres du personnel doivent tre examins par un
mdecin, tre suivis mdicalement ou subir un traitement et un dossier mdical
doit tre ouvert pour chacun dentre eux.
Conception et amnagement du laboratoire
La conception dun laboratoire et la dnition des tches qui lui sont assignes doivent
tenir compte des situations connues pour engendrer des problmes, notamment :
3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2
13
1. La formation darosols
2. Le travail sur des volumes importants ou des concentrations leves de
micro-organismes
3. Un personnel ou des appareils trop nombreux eu gard la place disponible
4. Linfestation par des rongeurs ou des arthropodes
5. Entre interdite
6. Lordonnancement des tches : utilisation dchantillons et de ractifs particuliers.
Les gures 2 et 3 donnent des exemples damnagement de laboratoires aux niveaux
de scurit biologique 1 et 2.
Conception dun laboratoire
1. Le laboratoire doit tre sufsamment spacieux pour quon puisse travailler en
toute scurit et procder facilement au nettoyage et la maintenance.
Figure 2. Laboratoire classique au niveau de scurit 1.
(gure aimablement communique par CUH2A, Princeton, NJ, Etats-Unis dAmrique)
6. Les espaces de rangement doivent pouvoir recevoir le matriel courant, de manire
viter lencombrement des paillasses et des zones de passage. On prvoira gale-
ment des espaces pour le stockage de longue dure, qui devront tre commod-
ment situs, hors des zones de travail.
7. On prvoira la place et les moyens matriels permettant de manipuler et
dentreposer sans danger les solvants, les substances radioactives ainsi que les gaz
comprims et liqus.
8. Les vestiaires pour les vtements de ville et les objets personnels doivent se trouver
en dehors des zones de travail.
9. Les zones prvues pour se restaurer, boire ou se reposer doivent galement se
trouver en dehors des zones de travail.
10. On installera des lavabos, si possible avec leau courante, dans chaque salle du
laboratoire, de prfrence prs de la porte.
11. Les portes doivent tre munies de panneaux transparents, avoir une rsistance au
feu convenable et comporter de prfrence un systme de fermeture automatique.
12. Au niveau de scurit biologique 2, il doit y avoir un autoclave ou autre moyen de
dcontamination distance sufsamment proche du laboratoire.
13. Les systmes de scurit doivent couvrir les risques dincendie, les accidents
dorigine lectrique et comporter une douche de scurit ainsi quun rince-yeux.
14. On prvoira des zones ou des salles de premiers soins, convenablement quipes
et facilement accessibles (voir annexe 1).
15. Dans le plan de toute nouvelle installation, il faudra prvoir un systme de venti-
lation mcanique assurant un ux dair dirig vers lintrieur sans recyclage. A
dfaut, les fentres doivent pouvoir souvrir et tre munies dun grillage
anti-arthropodes.
16. Il est indispensable que lalimentation en eau soit able et de bonne qualit. Il ne
doit y avoir aucune interconnexion entre les branchements destins au travail du
laboratoire et le rseau deau potable. Le rseau public dadduction doit tre
protg par un dispositif anti-retour.
17. Lalimentation lectrique doit tre able et de puissance sufsante; il faut prvoir
un clairage de secours permettant de sortir en cas de ncessit. Il serait
souhaitable de disposer dun groupe lectrogne de secours pour lalimentation
des quipements indispensables tels quincubateurs, enceintes de scurit
biologique, conglateurs, etc., et pour la ventilation des cages de lanimalerie.
18. Lalimentation en gaz de ville doit tre able et sufsante. Il est impratif dassurer
le bon entretien de cette installation.
19. Il arrive que les laboratoires et les animaleries soient la cible de vandales.
Linstallation de systmes de protection physique et de scurit anti-incendie doit
tre envisage. Il est indispensable de renforcer les portes, dquiper les fentres
de grillages et de limiter le nombre de cls. Le cas chant, on devra tudier et
mettre en uvre toute autre mesure susceptible damliorer la scurit (voir
chapitre 9).
3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2
15
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
16
Appareils et quipements de laboratoire
Associe lobservation de bons protocoles et de bonnes pratiques de laboratoire,
lutilisation dappareils scuriss et dquipements de scurit permettra de rduire
les risques en cas de danger de nature biologique. La prsente section traite des
principes de base applicables aux appareils utiliser dans les laboratoires de tous
niveaux de scurit biologique. Les spcications applicables aux appareils destins
des laboratoires dont le niveau de scurit biologique est plus lev, sont abordes
dans les chapitres consacrs ces laboratoires.
Aprs consultation du comit de scurit et du dlgu la scurit biologique (sil
a t dsign), le directeur du laboratoire sassurera que lappareillage et lquipement
sont adquats et correctement utiliss. Les appareils seront choisis en fonction dun
certain nombre de principes gnraux tels que :
1. Etre conus pour empcher ou limiter les contacts entre loprateur et le matriel
infectieux
2. Etre faits de matriaux impermables aux liquides, rsistants la corrosion et
conformes aux normes de solidit
3. Etre dpourvus dasprits, de bords tranchants et dlments mobiles non
protgs
4. Etre conus, raliss et installs de faon tre faciles utiliser, rviser, net-
toyer, dcontaminer et soumettre aux essais de conformit. Dans la mesure du
possible, on vitera dutiliser de la verrerie et autres matriaux fragiles.
Des spcications dtailles portant sur la construction et les caractristiques de fonc-
tionnement sont parfois ncessaires pour que les appareils soient conformes aux
normes de scurit (voir galement les chapitres 10 et 11).
Appareils et instruments de scurit biologique essentiels
1. Dispositifs de pipettage, pour remplacer le pipettage la bouche. Il en existe de
nombreux modles.
2. Enceintes de scurit biologique, utiliser systmatiquement dans les situations
suivantes :
manipulation de matriel infectieux. Ce matriel peut tre centrifug nor-
malement si la centrifugeuse est munie de godets de scurit tanches remplis
et vids dans une enceinte de scurit biologique.
existence dun risque accru dinfection aroporte.
techniques comportant un risque lev de formation darosols : par exemple,
centrifugation, broyage, mlange, agitation ou mixage nergiques, dsagrga-
tion par ultra-sons, ouverture de rcipients contenant du matriel infectieux
lorsque la pression intrieure peut tre diffrente de la pression ambiante, ino-
culation intranasale danimaux et rcolte de tissus infects sur des animaux ou
des ufs.
3. Anses de transfert jetables en matire plastique. On peut aussi utiliser des in-
cinrateurs lectriques pour anses de transfert placs dans une enceinte de
scurit biologique en vue de rduire la formation darosols.
4. Tubes et acons bouchon viss.
5. Autoclaves ou autres dispositifs appropris, pour dcontaminer le matriel infectieux.
6. Pipettes Pasteur jetables, en plastique si possible, plutt quen verre.
7. Il faut vrier, par des essais appropris, que les divers quipements ou appareils
tels quautoclaves ou enceintes de scurit biologique sont conformes aux spci-
cations et les recontrler priodiquement, conformment aux instructions du
fabricant (voir chapitre 7).
Surveillance mdico-sanitaire
Il incombe lemployeur, par lentremise du directeur du laboratoire, de veiller ce que
la sant du personnel soit surveille de faon satisfaisante. Cette surveillance a pour
objectif de dpister les maladies dorigine professionnelle. Pour y parvenir, il faut :
1. Assurer limmunisation active (vaccination) et passive du personnel lorsquil y a
lieu (voir lannexe 2)
2. Faciliter le dpistage prcoce des infections contractes au laboratoire
3. Ne pas coner de manipulations haut risque aux personnes particulirement
vulnrables (par ex. les femmes enceintes ou les sujets immunodprims)
4. Prendre des mesures de protection efcaces et veiller lefcacit des dispositifs
de protection.
Lignes directrices pour la surveillance des travailleurs qui manipulent des micro-
organismes au niveau 1 de scurit biologique
Il apparat, la lumire de lexprience passe, que les micro-organismes manipuls
ce niveau nont gure de chances de provoquer de maladies dimportance
mdicale ou vtrinaire. Lidal serait cependant que tous les candidats un poste dans
un laboratoire passent une visite mdicale dembauche au cours de laquelle on
recherchera leur antcdents mdicaux. Il est souhaitable que toute pathologie ou
accident de laboratoire soit signal sans dlai et que tous les membres du personnel
mesurent combien il est important de maintenir la qualit des techniques
microbiologiques.
Lignes directrices pour la surveillance des travailleurs qui manipulent des
micro-organismes au niveau 2 de scurit biologique
1. Une visite dembauche simpose avant laffectation un poste dans un laboratoire.
Cet examen comportera une anamnse la recherche des antcdents mdicaux
et un bilan mdical spcique de laptitude professionnelle sera effectu.
2. La direction du laboratoire devra tenir un registre des absences et des maladies du
personnel.
3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2
17
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
18
3. Les femmes en ge de procrer devront tre informes du danger que reprsente,
pour lenfant natre, lexposition professionnelle certains micro-organismes,
comme le virus de la rubole, par exemple. Les mesures spciques prendre pour
assurer la protection du ftus varient selon la nature du germe auquel la future
mre peut tre expose.
Formation
Les mesures de scurit et les appareils et dispositifs de protection, si efcaces soient-
ils, risquent toujours dtre pris en dfaut par lerreur humaine et la mdiocrit de la
technique. La base de la prvention des accidents, des incidents et des infections
dorigine professionnelle est que le personnel se sente concern par la scurit et sache
identier et matriser les risques qui existent dans le laboratoire. Cest pourquoi la for-
mation continue sur le tas aux mesures de scurit est indispensable. Ce proces-
sus commence au niveau de la direction du laboratoire, qui doit faire en sorte que la
scurit des pratiques et des protocoles soit incorpore la formation de base du per-
sonnel. Les mesures de scurit doivent toujours faire partie intgrante de linitiation
des nouveaux membres du personnel au fonctionnement du laboratoire. Il faut fami-
liariser les nouveaux employs avec les dispositions du code de bonnes pratiques et
leur indiquer les directives locales et notamment leur prsenter le manuel de labora-
toire ou le guide dhygine et scurit. Certaines mesures propres garantir que les
employs ont bien lu et compris les directives devront tre prises, elles pourront par
exemple consister leur faire signer certaines pages. Le rle des chefs de laboratoire
dans la formation du personnel directement sous leurs ordres est fondamental pour
lacquisition dune bonne technique. Le dlgu la scurit peut aider la forma-
tion du personnel et llaboration de matriels pdagogiques et autres documents
pour cette formation (voir galement le chapitre 21).
La formation du personnel doit systmatiquement inclure les prcautions
observer lors de lutilisation de certaines techniques particulirement dangereuses
couramment employes dans un laboratoire, savoir :
1. Techniques comportant un risque dinhalation (cest--dire qui conduisent la
formation darosols), telles que lutilisation danses, lensemencement en stries
de la glose en bote, le pipettage, la ralisation de frottis, louverture des cultures,
le prlvement de sang ou de srum, la centrifugation, etc.
2. Techniques comportant un risque dingestion, telles que la manipulation des
chantillons, des frottis ou des cultures
3. Techniques comportant un risque dinoculation percutane, telles que lemploi de
seringues et daiguilles
4. Manipulation danimaux avec le risque de morsures ou de griffures que cela
comporte
5. Manipulation de sang et de matriel biologique pouvant prsenter un danger
6. Dcontamination et limination des dchets infectieux.
3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2
19
Traitement des dchets
On entend par dchets tout ce dont on doit se dbarrasser.
Dans les laboratoires, la dcontamination et llimination dnitive des dchets
sont troitement lies. Dans la pratique quotidienne, il ny a toutefois gure de
matriels contamins qui devront tre vacus hors du laboratoire ou dtruits. La
majeure partie de la verrerie, des instruments et des vtements de laboratoire sera
recycle et rutilise. Le principe essentiel, cest que tous les matriels infectieux
doivent tre dcontamins, passs lautoclave ou incinrs dans le laboratoire.
Les principales questions quil faut se poser avant dliminer un objet ou du
matriel biologique provenant dun laboratoire qui travaille sur des microorganismes
ou des tissus animaux potentiellement dangereux, sont au nombre de trois :
1. Ces objets ou ce matriel biologique ont-ils t striliss ou dsinfects ef-
cacement par lun des procds approuvs ?
2. Dans la ngative, ont-ils t emballs selon une mthode agre en vue de leur
incinration immdiate sur place ou de leur transport vers un autre tablisse-
ment capable deffectuer cette opration ?
3. Llimination des objets ou du matriel biologique striliss ou dsinfects
comporte-t-elle des risques supplmentaires, biologiques ou autres, pour
le personnel charg de llimination immdiate sur place ou pour les
personnes susceptibles dtre en contact avec ces dchets en dehors du
laboratoire ?
Dcontamination
Le passage dans un autoclave vapeur est la mthode de choix chaque fois que
lon doit procder une dcontamination. Le matriel destin tre dcontamin
et limin sera plac dans des rcipients par exemple des sacs en plastique
autoclavables comportant le code couleur qui indique si leur contenu doit tre
autoclav ou incinr. Dautres procds ne peuvent tre envisags que sils sont capa-
bles dliminer ou de tuer les micro-organismes (pour plus de dtails, se reporter au
chapitre 14).
Manipulation et limination du matriel et des dchets contamins
Il faut instituer un systme didentication et de tri des matriels infectieux et de leurs
rcipients, en respectant la rglementation nationale et internationale en la matire.
Les diffrentes catgories sont les suivantes :
1. Dchets non contamins (non infectieux) pouvant tre rutiliss, recycls ou jets
avec les dchets mnagers ordinaires
2. Objets piquants ou tranchants contamins (infectieux) aiguilles hypodermiques,
scalpels, couteaux, verre bris; ces objets doivent toujours tre rassembls dans des
collecteurs imperforables (botes anti-piques) munis de couvercles et traits
comme du matriel infectieux
3. Matriel contamin destin tre dcontamin par passage lautoclave, puis lav
et rutilis ou recycl
4. Matriel contamin destin tre autoclav puis limin
5. Matriel contamin destin tre directement incinr.
Objets pointus ou tranchants
Aprs usage, les aiguilles hypodermiques ne doivent pas tre recapuchonnes, casses
ou dsadaptes des seringues jetables. Lensemble complet devra tre plac dans un
collecteur spcialement destin ce type dobjet. Les seringues jetables, utilises seules
ou avec une aiguille, devront tre places dans des collecteurs spciaux pour objets
pointus ou tranchants, puis incinres, aprs autoclavage pralable si ncessaire.
Les collecteurs pour objets pointus ou tranchants doivent tre imperforables ou du
moins rsistants la perforation et ne pas tre compltement remplis. Une fois remplis
aux trois-quarts, ils seront placs dans dautres conteneurs pour dchets infectieux
et incinrs, aprs passage pralable lautoclave, si la pratique du laboratoire lexige.
Les collecteurs dobjets pointus ou tranchants ne doivent en aucun cas tre jets dans
des dcharges.
Matriel contamin (potentiellement infectieux) destin tre autoclav et recycl
Il ne faut tenter aucun nettoyage pralable de matriels contamins (potentiellement
infectieux) destins passer lautoclave en vue dune rutilisation. Le nettoyage ou
les rparations ncessaires ne doivent tre effectus quaprs lautoclavage ou la
dsinfection.
Matriel contamin (potentiellement infectieux) destin tre limin
A part les objets pointus ou tranchants dont le cas est examin plus haut, tous les
matriels contamins (potentiellement infectieux) doivent tre autoclavs dans des
rcipients tanches, par exemple des sacs en plastique autoclavables avec code de
couleur, avant dtre limins. Aprs passage lautoclave, ils pourront tre placs
dans un conteneur pour le transport jusqu lincinrateur. Autant que possible, le
matriel dont les tablissements de soins ou de sant se dbarrassent ne doit pas tre
jet dans des dcharges, mme une fois dcontamin. Si le laboratoire dispose dun
incinrateur sur place, on peut se dispenser du passage lautoclave : les dchets
contamins seront placs dans des collecteurs destins cet usage (sacs avec code de
couleur, par exemple) et transports directement jusqu lincinrateur. Les conteneurs
de transport rutilisables doivent tre tanches et ferms hermtiquement. Il
faudra les dsinfecter et les nettoyer avant de les ramener au laboratoire et de les
rutiliser.
Chaque poste de travail doit disposer de conteneurs, pots, cuvettes, bocaux etc.
dchets, de prfrence incassables (en matire plastique, par exemple). Si lon utilise
un dsinfectant, les dchets doivent rester en contact intime avec le produit (cest--
dire en vitant quils soient protgs par des bulles dair) pendant une dure sufsante,
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
20
selon la nature du dsinfectant utilis (voir chapitre 14). Les pots dchets seront
dcontamins et lavs avant dtre rutiliss.
Lincinration des dchets contamins doit recevoir lagrment des autorits de
sant publique et de lorganisme charg de la lutte contre la pollution atmosphrique
ainsi que du dlgu la scurit biologique dsign par le laboratoire (voir au
chapitre 14 la section consacre lincinration).
Scurit chimique, lectrique, incendie, radioprotection et scurisation de
lappareillage
Un incendie, un accident dorigine chimique ou lectrique ou encore une irradiation
accidentelle, peuvent provoquer indirectement une solution de continuit dans le con-
nement des germes pathognes. Cest pourquoi il est impratif dans tout laboratoire
de microbiologie de bien respecter les rgles de scurit pour prvenir de tels acci-
dents. Ces accidents doivent normalement faire lobjet dune rglementation ofcielle
manant de lautorit locale ou nationale comptente, dont il faut au besoin solliciter
laide. Les risques chimiques, lectriques, radiologiques et incendie sont examins plus
en dtail dans la partie VI du prsent manuel (chapitres 17 et 18).
Des informations complmentaires sur les quipements de scurit sont donnes
au chapitre 11.
3. LES LABORATOIRES DE BASE SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAUX 1 ET 2
21
22
4. Le laboratoire de connement
Scurit biologique niveau 3
Le laboratoire de connement scurit biologique niveau 3, est conu et prvu pour
les travaux faisant intervenir des micro-organismes du groupe de risque 3 et des
volumes importants ou de fortes concentrations de micro-organismes du groupe de
risque 2 dont la manipulation risque davantage de provoquer la diffusion darosols.
Le degr de connement quimplique le niveau de scurit 3 exige le renforcement
des programmes de travail et de scurit par rapport ceux des laboratoires de base
scurit biologique niveaux 1 et 2 (exposs au chapitre 3).
Les recommandations qui gurent dans le prsent chapitre sont prsentes sous
la forme dadditifs celles qui concernent les laboratoires de base niveaux de
scurit 1 et 2, lesquelles doivent donc tre appliques avant les recommandations
particulires aux laboratoires de connement scurit biologique 3. Les additions
et modications les plus importantes concernent :
1. Le code de bonnes pratiques
2. La conception et lamnagement du laboratoire
3. La surveillance mdico-sanitaire.
Les laboratoires de cette catgorie doivent tre homologus et rpertoris par les
autorits sanitaires comptentes, nationales ou autres.
Code de bonnes pratiques
Le code de bonnes pratiques, dni pour les laboratoires de base scurit biologique
niveaux 1 et 2, sapplique moyennant les modications suivantes :
1. Le panneau de danger biologique (voir gure 1) appos sur la porte du labora-
toire doit indiquer le niveau de scurit biologique et le nom du chef de labora-
toire responsable de laccs aux locaux et prciser en outre les conditions
particulires dentre dans la zone, vaccination par exemple.
2. Les vtements protecteurs porter obligatoirement au laboratoire, doivent tre du
type suivant : tabliers, blouses, sarraus, tenues de nettoyage, combinaisons, coiffes
et, le cas chant, couvre-chaussures et chaussures spciales. Les blouses ordinaires
de laboratoire qui boutonnent devant ne conviennent pas, de mme que les
manches qui ne couvrent pas entirement les avant-bras. Les vtements de labo-
ratoire ne doivent pas tre ports lextrieur et seront dcontamins avant le
blanchissage. Il peut tre justi dter ses vtement de ville pour revtir une tenue
4. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3
23
de laboratoire approprie lorsquon travaille sur certains agents pathognes
(ravageurs ou agents responsables de zoonoses par exemple).
3. Tous les matriels potentiellement infectieux doivent normalement tre mani-
puls dans une enceinte de scurit biologique ou tout autre dispositif de con-
nement primaire (voir galement le chapitre 10).
4. Le port dun masque respiratoire peut tre ncessaire pour certaines manipula-
tions ou lorsque on travaille sur des animaux porteurs de certains germes
pathognes (voir chapitre 11).
Conception et amnagement du laboratoire
Les recommandations relatives la conception et lamnagement des laboratoires
de base niveaux de scurit biologique 1 et 2 sappliquent moyennant les modica-
tions suivantes :
1. Le laboratoire doit tre spar des zones de passage non rglement, lintrieur
du btiment. On peut complter lisolement en plaant le laboratoire au fond dun
couloir sans ouverture sur lextrieur, en construisant une cloison munie dune
porte ou encore en nouvrant laccs que par un vestibule (par exemple un sas
double entre ou le laboratoire de base scurit biologique niveau 2) dlimitant
une zone spcialement conue pour maintenir une diffrence de pression entre
le laboratoire et les espaces contigus. Le vestibule doit tre amnag pour la
sparation des vtements protecteurs sales et propres et disposer dune douche si
ncessaire.
2. Les portes du vestibule doivent tre fermeture automatique et verrouillage
asservi de sorte quune seule porte puisse tre ouverte la fois. Un panneau briser
en cas durgence peut tre prvu.
3. La surface des murs, des sols et des plafonds doit rsister leau et tre facile
nettoyer. Les orices mnags dans ces surfaces (pour la tuyauterie par exemple)
doivent tre scells pour faciliter la dcontamination des salles.
4. Le laboratoire doit pouvoir tre ferm hermtiquement pour tre dcontamin.
Des gaines seront installes pour permettre une dsinfection gazeuse.
5. Les fentres doivent tre fermes hermtiquement et rsister aux chocs.
6. Un lavabo pouvant tre command sans laide des mains sera plac prs de chaque
porte de sortie.
7. Le systme de ventilation doit crer un courant dair dirig de la zone daccs vers
lintrieur de la salle. Un dispositif de contrle visuel, muni ou non dune alarme,
doit tre install, de manire que le personnel puisse sassurer que le ux dair est
toujours correctement dirig.
8. Le systme de ventilation doit tre construit de manire ce que lair qui sort du
laboratoire de connement scurit biologique niveau 3, ne soit pas recycl dans
dautres zones du btiment. Lair peut tre ltr au moyen dun ltre particules
de haute efcacit (HEPA), reconditionn et recycl lintrieur de ce laboratoire.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
24
Lair vacu du laboratoire (autre que celui qui sort des enceintes de scurit
biologique) sera rejet directement lextrieur du btiment, de faon tre dis-
pers loin des btiments occups et des prises dair. Selon les agents utiliss, on
pourra vacuer cet air en le faisant passer au pralable travers des ltres HEPA.
On pourra installer un systme de rgulation du chauffage, de la ventilation et de
la climatisation de qui vite toute surpression permanente dans le laboratoire.
On peut envisager linstallation dun dispositif dalarme acoustique ou visuelle
parfaitement distinct pour prvenir le personnel en cas de panne du systme de
rgulation.
9. Les ltres HEPA doivent tous tre installs de manire permettre la dcontami-
nation gazeuse ou les essais de fonctionnement.
10. Les enceintes de scurit biologique doivent tre situes hors des zones de passage
et des courants dair entre les portes et les systmes de ventilation.
11. Lair qui sort des enceintes de scurit de classe I et II (voir chapitre 10), aprs
passage au travers des ltres HEPA, doit tre vacu sans perturber le ux dair,
ni dans lenceinte, ni dans le systme daration du btiment.
12. Il faut disposer, dans la salle mme du laboratoire, dun autoclave pour la dcon-
tamination des dchets. Si des dchets infectieux doivent tre transports lex-
trieur du laboratoire de connement pour dcontamination et limination, le
transport doit seffectuer dans des conteneurs incassables, hermtiquement ferms
et tanches, conformment la rglementation nationale ou internationale, selon
le cas.
13. Lalimentation en eau sera munie de dispositifs anti-retour. Les conduites
daspiration (circuit de vide) devront tre protges par des piges liquide
dsinfectant, des ltres HEPA ou des dispositifs quivalents. Les pompes vide
devront galement tre protges par des piges et des ltres.
14. La conception dun laboratoire de connement et les techniques mises en uvre
dans ce type de laboratoire doivent sappuyer sur une documentation approprie.
La gure 4 donne un exemple damnagement dun laboratoire au niveau 3 de
scurit biologique.
Appareils et quipements de laboratoire
Le choix de lappareillage, y compris des enceintes de scurit biologique (voir chapitre
10), repose sur les mmes principes que pour les laboratoires de base scurit
biologique niveau 2. Toutefois, dans un laboratoire de scurit biologique niveau 3, la
manipulation de tous les matriels potentiellement infectieux doit seffectuer dans une
enceinte de scurit biologique ou avec tout autre dispositif de connement primaire.
Il faut se souvenir que certains appareils tels que les centrifugeuses, par exemple, nces-
sitent des dispositifs de connement supplmentaires, par exemple utilisation de
godets, nacelles, etc. de scurit ou connement du rotor. Certaines centrifugeuses ou
dautres appareils comme les trieurs de cellules qui sont prvus pour travailler sur des
4. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 3
25
cellules infectes, peuvent ncessiter linstallation dune ventilation supplmentaire
avec ltres HEPA pour un connement efcace.
Surveillance mdico-sanitaire
Les objectifs des programmes de surveillance mdico-sanitaire des laboratoires de base
scurit biologique niveaux 1 et 2, sappliquent galement aux laboratoires de con-
nement scurit biologique niveau 3, moyennant les modications suivantes :
1. La visite mdicale est obligatoire pour tout le personnel de laboratoire qui
travaille dans le laboratoire de connement. Elle devra comporter une anamnse
Figure 4. Laboratoire classique au niveau 3 de scurit biologique.
(gure aimablement communique par CUH2A, Princeton, NJ, Etats-Unis dAmrique).
Le laboratoire est spar du lieu de passage gnral et accessible par un vestibule (qui
peut tre soit une entre double porte, soit le laboratoire de base niveau de scu-
rit 2) ou par un sas air. Le laboratoire est quip dun autoclave pour la dconta-
mination des dchets avant leur limination ainsi que dun vier commande mains
libres . Lair circule de lextrieur vers lintrieur et toutes les manipulations sur du
matriel biologique infectieux sont effectues dans une enceinte de scurit biologique.
la recherche des antcdents mdicaux et un examen physique destin vrier
si la personne est mdicalement apte exercer ce type dactivit professionnelle.
2. Si le bilan mdical est satisfaisant, lintress recevra une carte mdicale du genre
de celle qui est reproduite la gure 5 attestant quil est employ dans un
tablissement o se trouve un laboratoire de connement scurit biologique
niveau 3. Cette carte, que le titulaire devra toujours porter sur lui, comportera la
photographie du titulaire et devra pouvoir tre range dans un portefeuille ou
un porte-cartes. Elle devra galement indiquer le nom de la ou des personnes
contacter en cas de problme, lesquelles seront dsignes localement, mais qui
pourraient tre par exemple, le directeur du laboratoire, le conseiller mdical ou
le dlgu la scurit biologique.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
26
28
5. Le laboratoire de connement
haute scurit Scurit
biologique niveau 4
Le laboratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4, est
conu pour les travaux sur des micro-organismes du groupe de risque 4. Avant de
construire et de mettre en service un tel laboratoire, il convient douvrir des consul-
tations approfondies avec des institutions ayant lexprience du fonctionnement de ce
genre dinstallation. Les laboratoires de connement haute scurit oprationnels
scurit biologique niveau 4 doivent tre placs sous le contrle des autorits sani-
taires comptentes, nationales ou autres. Les informations qui suivent sont une simple
introduction. Toute personne ou institution qui souhaiterait mettre en place un lab-
oratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4 est invite
prendre contact avec le Programme sur la scurit biologique de lOMS pour plus de
renseignements.
1
Code de bonnes pratiques
Les dispositions du code de bonnes pratiques relatives au niveau 3 de scurit
biologique restent valables, moyennant les modications suivantes :
1. La rgle du travail en binme doit tre applique; autrement dit, personne ne doit
jamais travailler seul dans le laboratoire. Cette rgle prend toute son importance
dans un laboratoire scurit biologique niveau 4, o le port de combinaisons
pressurises est obligatoire.
2. Le personnel doit doit changer compltement de vtements et de chaussures avant
de pntrer dans le laboratoire et avant de sortir.
3. Le personnel doit sentraner la conduite tenir pour lvacuation durgence de
personnes blesses ou prises de malaise.
4. Il faut mettre au point un systme de communication entre les membres du per-
sonnel qui travaillent dans un laboratoire de connement haute scurit scu-
rit biologique niveau 4 et le personnel extrieur, que ce soit pour les contacts
habituels ou en situation durgence.
1
Programme de scurit biologique, Dpartement maladies transmissibles : surveillance et action, Organ-
isation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211 Genve 27, Suisse (http ://www.who.int/csr/).
5. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT HAUTE SCURIT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4
29
Conception et amnagement du laboratoire
Les caractristiques du laboratoire de connement scurit biologique niveau 3,
sappliquent au laboratoire de connement haute scurit scurit biologique
niveau 4, moyennant les additifs suivants :
1. Connement primaire. Le laboratoire doit tre dot dun systme efcace de con-
nement primaire respectant une ou plusieurs des conditions suivantes.
Laboratoire avec enceintes de scurit biologique de classe III. Le passage par deux
portes au minimum est ncessaire avant de pntrer dans les salles o se trou-
vent lenceinte ou les enceintes de scurit biologique de classe III (salle des
enceintes de scurit). Dans ce type damnagement, cest lenceinte de scu-
rit biologique de classe III qui assure le connement primaire. Le personnel
doit disposer dune douche avec un vestiaire intrieur et extrieur. Les fourni-
tures et le matriel qui ne sont pas apports dans la salle des enceintes de scu-
rit biologique en passant par le vestiaire, ne doivent tre introduits quaprs
passage dans un autoclave double porte ou une chambre de fumigation. Une
fois la porte extrieure bien ferme, le personnel qui se trouve dans le labora-
toire peut ouvrir la porte intrieure pour rcuprer fournitures et matriel. Un
systme de verrouillage asservi doit tre mis en place au niveau des portes de
lautoclave ou de la chambre de fumigation pour viter que la porte extrieure
ne puisse tre ouverte tant que lautoclave na pas effectu son cycle de stri-
lisation ou que la chambre de fumigation na pas t dcontamine (voir
chapitre 10).
Laboratoire pour travaux en combinaison pressurise. Sur le plan de la concep-
tion et de lamnagement, un laboratoire pour travaux en combinaison pres-
surise diffre sensiblement dun laboratoire de connement scurit
biologique niveau 4 dot denceintes de scurit biologique de classe III. Dans
ce type de laboratoire, les salles sont disposes de manire que le personnel
passe par le vestiaire et la salle de dcontamination avant dentrer dans le
secteur o du matriel biologique infectieux est manipul. Une douche pour
la dcontamination des combinaisons doit tre installe et le personnel doit
lutiliser avant de quitter les locaux du laboratoire de connement. Le per-
sonnel doit galement disposer dune douche avec un vestiaire intrieur et
extrieur. Le personnel qui pntre dans la zone o lon travaille en combi-
naison pressurise est tenu de revtir une combinaison dune seule pice, en
surpression, avec ltre HEPA et alimentation en air. Lalimentation en air de
la combinaison doit tre assure par un systme 100 % de redondance, avec
une alimentation en air indpendante utilisable en cas durgence. On entre
dans le laboratoire travers un sas air dot de portes tanches lair. Le per-
sonnel qui travaille dans ce type de laboratoire doit disposer dun systme
dalarme quil pourra utiliser dans lventualit dune panne mcanique ou
dune dfaillance de lalimentation en air (voir chapitre 10).
2. Rglementation de laccs. Le laboratoire de connement de haute scurit scu-
rit biologique niveau 4 doit tre situ dans un btiment spar ou tout au moins
dans une zone clairement dlimite dun btiment scuris. Lentre et la sortie
du personnel doit se faire travers un sas ou autre dispositif de ce genre. A len-
tre, le personnel doit se changer compltement; avant de sortir, il doit prendre
une douche avant de remettre ses vtement de ville.
3. Rgulation de la ventilation. Les locaux doivent tre maintenus en dpression.
Lair doit tre ltr au moyen de ltres HEPA tant ladmission qu lvacuation.
Un laboratoire avec enceintes biologiques de scurit classe III et un laboratoire
pour travaux en combinaison pressurise sont dots de systmes de ventilation
sensiblement diffrents :
Laboratoire avec enceintes de classe III. Lair destin aux enceintes de scurit
biologique classe III peut tre prlev dans la salle travers un ltre HEPA
mont sur lenceinte ou bien amen directement par le systme de ventilation.
Avant dtre vacu lextrieur, lair des enceintes de scurit biologique classe
III doit passer travers deux ltres HEPA. Lenceinte doit toujours tre en
dpression par rapport la salle. Il est ncessaire que ce laboratoire dispose
dun systme spcial de ventilation sans recyclage.
Laboratoire pour travaux en combinaison pressurise. Ce laboratoire doit pos-
sder un systme spcial de ventilation et dvacuation de lair vici. Lalimen-
tation et lvacuation sont rgles de manire que le ux dair qui circule dans
la zone o sont portes les combinaisons de protection soit dirig de la zone
de moindre danger vers la ou les zones de risque maximal. Il faut que les
ventilateurs dextraction soient en surnombre de faon que linstallation reste
constamment en dpression. Les diffrences de pression dans le laboratoire
lui-mme et entre le laboratoire et les locaux contigus, doivent tre surveilles
en permanence. Ce doit galement tre le cas de lair qui circule dans les
circuits dalimentation et dvacuation du systme de ventilation et un dis-
positif de rgulation appropri doit tre install pour viter toute surpression
lintrieur du laboratoire. Lair distribu dans la zone o sont portes les com-
binaisons de protection, la douche de dcontamination et les sas ou chambres
de dcontamination doit passer travers un ltre HEPA. Lair qui est vacu
du laboratoire doit passer travers deux ltres HEPA successifs avant dtre
rejet lextrieur. Une autre possibilit consiste, aprs cette double ltration,
recycler lair vacu, mais uniquement lintrieur du laboratoire. Lair
vacu dun laboratoire de connement scurit biologique niveau 4, ne doit
en aucun cas tre recycl vers dautres locaux. La plus grande prudence est de
rigueur si lon a opt pour un recyclage de lair dans un laboratoire o le port
de combinaisons pressurises est impos. Il convient de prendre en consi-
dration la nature des recherches effectues, lappareillage, les quipements, les
produits chimiques et autres substances ainsi que les espces animales utiliss
pour ces recherches.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
30
Tous les ltres HEPA doivent tre contrls et certis une fois par an. Leurs gaines
sont conues pour permettre de dcontaminer le ltre in situ avant de lenlever. On
peut aussi enlever le ltre en le plaant dans un conteneur scell tanche aux gaz en
vue de sa dcontamination ultrieure ou de sa destruction par incinration.
4. Dcontamination des efuents. Tous les efuents qui sortent du laboratoire o
sont portes des combinaisons pressurises, de la chambre de dcontamination,
de la douche de dcontamination ou dune enceinte de scurit biologique classe
III doivent tre dcontamins avant dtre dnitivement limins. La contami-
nation par la chaleur est le procd optimal. Il peut tre ncessaire de les amener
pH neutre avant de les liminer. Leau provenant de la douche du personnel et
des toilettes peut tre vacue directement dans lgout sparatif sans traitement.
5. Strilisation des dchets et des matriels. Il est indispensable de disposer dun
autoclave deux portes, formant sas. Toutefois, dautres mthodes de dconta-
mination doivent tre utilises pour traiter les quipements, appareils, instruments
ou objets divers qui ne resisteraient pas une strilisation la vapeur.
6. Sas dentre air pour les chantillons, les matriels et les animaux. Ils sont
ncessaires pour ce type dinstallation.
7. Un groupe lectrogne de secours et une alimentation spciale en air sont
ncessaires.
8. Le connement des coulements doit tre assur.
Le calcul, la conception et la construction des installations de connement haute
scurit biologique niveau 4, quelles soient dotes denceintes de scurit biologique
ou de zones avec port obligatoire de combinaisons pressurises, sont tellement com-
plexes que les auteurs ont renonc faire gurer dans le prsent manuel des reprsen-
tations schmatiques de ces installations.
En raison de la grande complexit du travail dans ce genre de laboratoire, un
manuel dtaill sera prpar et test loccasion dexercices de formation. Un plan
durgence sera galement labor (voir chapitre 13), en collaboration active avec les
autorits sanitaires nationales et locales. Il est galement souhaitable que dautres
services de secours tels que les pompiers, la police et les services durgence des
hpitaux y participent.
5. LE LABORATOIRE DE CONFINEMENT HAUTE SCURIT SCURIT BIOLOGIQUE NIVEAU 4
31
32
6. Animaleries
Lorsque des animaux sont utiliss des ns exprimentales ou de diagnostic, luti-
lisateur a lobligation morale de prendre toutes les mesures ncessaires pour viter des
souffrances inutiles. Les animaux doivent tre installs de manire confortable et
hyginique et recevoir de leau et des aliments de bonne qualit, en quantit sufsante.
A la n de lexprience, ils devront tre traits avec humanit.
Pour des raisons de sret, lanimalerie doit tre indpendante, spare du labora-
toire. Si elle est accole un laboratoire, elle sera conue de manire pouvoir tre isole
des zones publiques du laboratoire, et pouvoir tre dcontamine et dparasite.
Comme les laboratoires, les animaleries peuvent tre conues en fonction du
groupe de risque auquel les micro-organismes tudis appartiennent ou de lvalua-
tion du risque quils reprsentent et correspondre aux niveaux de scurit biologique
1, 2, 3 ou 4.
Tableau 4. Niveaux de connement des animaleries : pratiques et quipements de
scurit
GROUPE DE RISQUE NIVEAU DE CONFINEMENT PRATIQUES DE LABORATOIRE ET QUIPEMENTS DE SCURIT
1 NSBA-1 Accs limit, vtements protecteurs et gants.
2 NSBA-2 Pratiques comme pour NSBA-1, en plus :
panneaux de danger biologique : ESB de classe I ou
II pour les activits gnratrices darosols.
Dcontamination des dchets et des cages avant
le lavage.
3 NSBA-3 Pratiques comme pour NSBA-2, en plus : accs
rglement. ESB et vtements protecteurs spciaux
pour toutes les activits.
4 NSBA-4 NSBA-3 avec, en plus : accs strictement limit.
Changement de vtements avant dentrer. ESB de
classe III ou combinaisons pressurises. Douche
avant de sortir. Dcontamination de tous les
dchets avant sortie de linstallation.
NSBA, niveau de scurit biologique de lanimalerie; ESB, enceinte de scurit biologique
Eu gard aux agents utiliss dans un laboratoire dexprimentation animale, les
facteurs suivants sont prendre en considration :
1. La voie normale de transmission
2. Les volumes et concentrations qui seront utiliss
3. La voie dinoculation
4. La voie possible dexcrtion.
Eu gard aux animaux dexprience utiliss au laboratoire, les facteurs suivants sont
prendre en considration :
1. La nature des animaux, savoir leur agressivit et leur tendance mordre ou griffer
2. La nature de leurs ecto- ou endoparasites
3. Les zoonoses auxquelles ils sont sensibles
4. La propagation possible dallergnes.
Comme dans le cas des laboratoires, les exigences relatives la conception,
lquipement et aux prcautions observer sont dautant plus rigoureuses que le
niveau de scurit biologique est plus lev. Elles sont exposes ci-dessous et rsumes
dans le tableau 4. Ces directives sont cumulatives, cest--dire qu chaque niveau de
scurit sappliquent toutes celles qui valent pour les niveaux infrieurs.
Animalerie Scurit biologique niveau 1
Cest le niveau qui convient pour conserver la plupart des animaux dlevage aprs la
quarantaine ( lexception des primates, propos desquels il convient de consulter
les autorits nationales) et les animaux inoculs volontairement avec des agents
du groupe de risque 1. Une bonne technique microbiologique est indispensable. Le
responsable de lanimalerie doit dterminer la ligne de conduite gnrale, les proc-
dures et les protocoles applicables lensemble des oprations et en ce qui concerne
laccs au vivarium. Une surveillance mdicale approprie du personnel doit tre insti-
tue. Un guide dhygine et scurit ou un manuel pratique doivent tre rdigs et le
personnel doit sy conformer.
Animalerie Scurit biologique niveau 2
Cest le niveau qui convient pour le travail sur les animaux inoculs volontairement
avec des agents appartenant au groupe de risque 2. Les mesures de scurit suivantes
sont applicables :
1. Toutes les exigences relatives aux animaleries scurit biologique niveau 1,
doivent tre respectes.
2. Des panneaux de danger biologique (voir gure 1) seront apposs sur les portes
et autres endroits appropris.
3. Lanimalerie doit tre conue de manire pouvoir tre nettoye et entretenue
facilement.
6. ANIMALERIES
33
4. Les portes doivent souvrir vers lintrieur et se fermer automatiquement.
5. Les locaux doivent tre convenablement chauffs, ventils et clairs.
6. Si la ventilation est mcanique, le ux dair doit tre dirig vers lintrieur. Lair
vici est vacu lextrieur et ne doit en aucun cas tre recycl, o que ce soit
dans le btiment.
7. Laccs doit tre limit aux personnes autorises.
8. A part les animaux destins lexprimentation, aucun autre animal ne doit tre
introduit dans les locaux.
9. Un programme de lutte contre les arthropodes et les rongeurs doit tre mis en
place.
10. Sil y a des fentres, elles doivent tre scurises, rsister aux chocs et si elles sont
susceptibles dtre ouvertes, comporter des grillages pour empcher le passage des
arthropodes.
11. Les plans de travail seront dcontamins avec des dsinfectants efcaces aprs
utilisation (voir chapitre 14).
12. Des enceintes de scurit biologique (classe I ou II) ou des isolateurs disposant
dune alimentation spciale en air et dune vacuation de lair vici aprs ltra-
tion sur ltre HEPA doivent pouvoir tre utiliss pour les activits susceptibles
dentraner la formation darosols.
13. Un autoclave doit tre install, soit sur place, soit proximit.
14. Lorsquon retire la litire des animaux, il faut viter au maximum la formation
darosols et de poussires.
15. Tous les dchets et les litires doivent tre dcontamins avant limination.
16. Autant que possible, on limitera lutilisation dinstruments pointus ou tranchants.
Ces instruments doivent toujours tre ramasss dans des conteneurs rsistants
munis dun couvercle (botes anti-piques) et traits comme du matriel infectieux.
17. Le matriel destin lautoclavage ou lincinration doit tre transport en toute
scurit dans des conteneurs ferms.
18. Les cages des animaux doivent tre dcontamines aprs utilisation.
19. Les cadavres des animaux seront incinrs.
20. Le port de vtements et dquipements de protection est obligatoire dans lani-
malerie. Il devront tre retirs au moment du dpart.
21. Un lavabo doit tre install. Le personnel doit se laver les mains avant de quitter
laimalerie.
22. Toute blessure, mme mineure, doit tre traite de manire approprie. Elle doit
tre signale et enregistre.
23. Il est interdit de manger, de boire, de fumer et de se maquiller dans lanimalerie.
24. Tous les membres du personnel doivent recevoir une formation approprie.
Animalerie Scurit biologique niveau 3
Cest le niveau qui convient pour le travail avec des animaux inoculs volontairement
avec des micro-organismes appartenant au groupe de risque 3, ou si une valuation
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
34
du risque lindique pour une autre raison. Chaque anne, tous les systmes, pratiques
et modes opratoires doivent tre rexamins et faire lobjet dun contrle de confor-
mit. Les rgles de scurit suivantes sont applicables :
1. Toutes les exigences relatives aux animaleries niveaux de scurit 1 et 2 doivent
tre respectes.
2. Laccs sera strictement rglement.
3. Linstallation doit tre spare des autres laboratoires et animaleries par une pice
formant vestibule, dote dune entre double porte.
4. Un lavabo doit tre install dans ce vestibule.
5. Le vestibule doit galement comporter une douche.
6. Les locaux doivent tre dots dune ventilation mcanique assurant une circula-
tion continue de lair dans toutes les salles. Lair vici doit tre vacu travers des
ltres HEPA avant dtre rejet sans recyclage dans latmosphre extrieure. Le
systme doit tre conu de manire empcher une inversion du sens de circula-
tion de lair et toute surpression dans les locaux de lanimalerie.
7. Un autoclave doit tre install en un endroit commode de lanimalerie o se trou-
vent les quipements de connement. Les dchets infectieux doivent tre passs
lautoclave avant dtre transports dans dautres locaux de linstallation.
8. Il faut disposer dun incinrateur sur place ou prendre dautres dispositions en
consultation avec les autorits concernes.
9. Les cages des animaux porteurs de micro-organismes appartenant au groupe de
risque 3 doivent tre places dans des isolateurs ou tre disposes devant des ven-
tilateurs dextraction.
10. Il faut veiller un dpoussirage maximum des litires.
11. Tous les vtements de protection devront tre dcontamins avant de passer au
blanchissage.
12. Les fentres doivent tre hermtiquement fermes et rsister aux chocs.
13. Le cas chant, une vaccination sera propose au personnel.
Animalerie Scurit biologique niveau 4
Le travail dans cette animalerie sera normalement associ aux manipulations du la-
boratoire de connement haute scurit scurit biologique niveau 4, et les dis-
positions rglementaires nationales et locales devront tre harmonises pour pouvoir
sappliquer aux deux. Si des travaux doivent tre effectus dans un laboratoire o le
port de combinaisons pressurises est obligatoire, un certain nombre dautres
pratiques et procdures sont respecter en sus de celles qui sont dcrites ici (voir
chapitre 5).
1. Toutes les exigences relatives aux animaleries niveaux de scurit 1, 2 et 3 doivent
tre respectes.
2. Laccs sera strictement rglement; seul le personnel dsign par le directeur de
ltablissement doit tre autoris entrer.
6. ANIMALERIES
35
3. Personne ne doit travailler seul : la rgle du travail en binme doit tre applique.
4. Le personnel devra avoir reu la formation de microbiologiste la plus pousse pos-
sible et bien connatre les risques lis son travail et les prcautions observer.
5. Les secteurs o sont hbergs des animaux porteurs dagents pathognes du
groupe de risque 4 doivent rpondre en tout temps aux critres de connement
qui sappliquent aux laboratoires de connement haute scurit scurit
biologique niveau 4.
6. Lentre dans lanimalerie doit se faire par un vestibule formant sas air, dont le
ct propre doit tre spar du ct accs rglement par un vestiaire et des
douches.
7. Le personnel doit retirer ses vtements de ville en entrant et mettre des vtements
protecteurs spciaux. Aprs le travail, il doit enlever les vtements protecteurs pour
que ceux-ci soient passs lautoclave, puis se doucher avant de partir.
8. Lanimalerie doit tre ventile au moyen dun systme dvacuation dair muni de
ltres HEPA qui soit conu pour crer une dpression (circulation de lair vers
lintrieur).
9. Le systme de ventilation doit tre conu pour empcher une inversion du sens
de circulation de lair et toute surpression dans les locaux de lanimalerie.
10. Il faut disposer dun autoclave deux portes pour lchange de matriel, le ct
propre souvrant dans une pice extrieure aux salles de connement.
11. Lchange de matriel non autoclavable doit se faire travers un sas air, dont
le ct propre doit souvrir dans une pice situe en dehors des salles de
connement.
12. Toutes les manipulations sur des animaux porteurs dagents pathognes appar-
tenant au groupe de risque 4 doivent seffectuer dans des conditions de scurit
correspondant celles dun laboratoire de connement haute scurit scu-
rit biologique niveau 4.
13. Tous les animaux doivent tre hbergs dans des isolateurs.
14. La totalit des litires et des dchets doit tre passe lautoclave avant de sortir
de lanimalerie.
15. Le personnel doit tre plac sous surveillance mdicale.
Invertbrs
Comme pour les vertbrs, le niveau de scurit de lanimalerie est dtermin par le
groupe de risque auquel appartiennent les agents pathognes tudis, toutefois une
valuation du risque peut conduire en dcider autrement. Des prcautions compl-
mentaires sont ncessaires avec certains arthropodes, notamment les insectes volants :
1. Les invertbrs infects et ceux qui ne le sont pas doivent tre logs dans des pices
distinctes.
2. Les pices doivent pouvoir tre fermes hermtiquement pour fumigation.
3. Des pulvrisateurs dinsecticides doivent tre mis disposition.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
36
4. Des systmes de refroidissement doivent tre prvus pour rduire, si ncessaire,
lactivit des invertbrs.
5. Laccs se fera par un vestibule comportant des piges insectes et dont les portes
seront munies de grillages pour empcher le passage des arthropodes.
6. Tous les conduits de sortie de ventilation et les fentres susceptibles dtre ouvertes
seront obturs par un grillage empchant le passage des arthropodes.
7. Le siphon des viers et des gouts ne doit jamais sasscher.
8. Tous les dchets seront dcontamins par passage lautoclave, car certains
invertbrs rsistent tous les dsinfectants.
9. On contrlera le nombre de formes larvaires et adultes des arthropodes volants,
rampants et sauteurs.
10. Les cages des tiques et des acariens seront places sur des plateaux contenant du
ptrole.
11. Les insectes volants infects ou qui pourraient ltre doivent tre conns dans des
cages double grillage.
12. Les arthropodes infects ou qui pourraient ltre doivent tre manipuls dans des
enceintes biologiques de scurit ou des isolateurs.
13. On peut galement manipuler les insectes infects ou qui pourraient ltre sur des
plateaux refroidis.
Pour plus ample information se reporter aux rfrences 3 6 de la bibliographie.
6. ANIMALERIES
37
38
7. Principes directeurs pour la mise
en service des laboratoires ou
installations
On peut dnir la mise en service dun laboratoire ou dune installation comme un
processus consistant procder un ensemble de contrles et tablir des dossiers
en vue dattester que les lments de la structure des locaux ainsi que tout ou partie
des systmes dont est quip le laboratoire ont t installs, inspects, soumis des
essais de fonctionnement et constats conformes aux normes nationales ou interna-
tionales, selon le cas. Ces prescriptions se fondent sur les critres de conception et
sur les fonctions respectives des divers systmes dont sera quip le laboratoire. En
dautres termes, la mise en service dun laboratoire ne comportera pas les mmes exi-
gences pour tous les niveaux de scurit biologique (1 4) et elle sera dautant plus
complexe que le niveau de scurit sera plus lev. Des conditions climatiques comme
des tempratures trs leves ou trs basses ou encore des valeurs extrmes de lhy-
gromtrie, de mme que des particularits gomorphologiques comme la prsence de
lignes de faille peuvent galement inuer sur la conception du laboratoire et par con-
squent sur les exigences de mise en service. Une fois la mise en service acheve, les
lments structuraux importants du laboratoire et les divers quipements annexes
auront t contrls dans diverses conditions dexploitation et de dfaut de fonction-
nement raisonnablement prvisibles et dclars conformes.
Le processus de mise en service et les contrles de conformit doivent tre organi-
ss de bonne heure, de prfrence lorsquon programme la construction ou la rno-
vation dun laboratoire. En prenant acte de la mise en place du processus de mise en
service ds les premiers stades du projet, les architectes, les ingnieurs, les respon-
sables scurit, le personnel sanitaire et au nal, le personnel du laboratoire lui-mme,
vont raliser ce que lon attend du laboratoire en question sur le plan de lefcacit et
exprimer de manire cohrente leurs attentes cet gard. Le processus de mise en
service constitue, pour linstitution et la collectivit locale, une meilleure garantie de
voir les lments structuraux, linstallation lectrique, les dispositifs mcaniques, la
plomberie, les systmes de connement et de dcontamination ainsi que les disposi-
tifs dalarme et de scurit fonctionner comme prvu et empcher la propagation de
tout micro-organisme potentiellement dangereux sur lesquels on travaille dans le
laboratoire ou lanimalerie.
Le processus de mise en service commence en gnral lors de la phase de prpara-
tion du projet et se poursuit pendant la construction et durant la priode de garantie
ultrieure. La priode de garantie doit en gnral se prolonger un an aprs la rcep-
tion de linstallation. Il est souhaitable, pour la mise en service, de ne retenir que des
organismes ou entreprises nayant aucun lien avec les bureaux darchitectes et
dingnieurs ou lentreprise de gnie civil qui ont conu et construit le laboratoire.
Cet organisme ou son reprsentant devra agir en tant que porte-parole de linstitu-
tion ou de ltablissement qui construit ou rnove le laboratoire et tre considr
comme un membre de lquipe charge de la conception des installations; il est capital
quil soit prsent ds les premiers stades de la prparation du projet. Parfois, cest lins-
titution qui assume elle-mme ce rle. Dans le cas de projets de laboratoires plus
complexes (niveaux de scurit biologique 3 ou 4), elle pourra sassurer les services
dun organisme ou dune entreprise extrieurs qui ont fait la preuve de leur exp-
rience et de leur comptence dans la mise en service de laboratoires ou danimaleries
posant des problmes complexes sur le plan de la scurit biologique. Mme si lins-
titution choisit un agent extrieur pour assurer la mise en service, elle doit malgr
tout rester membre de lquipe qui assume cette charge. Il est recommand en outre
que le dlgu la scurit de linstitution, le responsable du projet, le directeur du
programme ainsi quun reprsentant de la direction et de lquipe de maintenance, en
fasse galement partie, aux cts de lagent charg de la mise en service.
On trouvera ci-dessous la liste des systmes et appareillages qui pourraient faire
lobjet de contrles de fonctionnement au titre de la mise en service du laboratoire,
en fonction du niveau de connement de linstallation en construction ou rnova-
tion. Cette liste nest pas exhaustive. Le plan de mise en service dpendra lvidence
de la complexit du laboratoire envisag.
1. Systmes automatiques du btiment, et notamment les connexions avec les centres
de surveillance et de commande distance.
2. Systmes de surveillance et de dtection lectronique.
3. Verrouillage lectronique de scurit et lecteurs de proximit.
4. Chauffage, ventilation (alimentation et vacuation) et climatisation.
5. Filtres particules de haute efcacit (HEPA).
6. Systmes de dcontamination par ltration HEPA.
7. Commandes et asservissements des commandes de chauffage, ventilation, clima-
tisation et vacuation de lair vici.
8. Volets disolement tanches.
9. Systmes de rfrigration.
10. Chaudires et production de vapeur.
11. Systmes de dtection et dextinction des incendies.
12. Dispositif anti-reux pour les eaux uses.
13. Systmes de traitement de leau (par ex. osmose inverse, distillation, etc.).
14. Systmes de traitement et de neutralisation des efuents liquides.
15. Dispositif damorage de vidange des eaux uses.
16. Systmes de dcontamination chimique.
17. Systmes dapprovisionnement en gaz mdicaux de laboratoire.
7. PRINCIPES DIRECTEURS POUR LA MISE EN SERVICE DES LABORATOIRES OU INSTALLATIONS
39
18. Systmes dalimentation en air pour combinaisons pressurises.
19. Systmes dalimentation en air pour le service et lappareillage.
20. Contrle de la rgulation cascade des diffrences de pression dans les laboratoires
et locaux de service.
21. Rseau informatique local (LAN) et systmes informatiques denregistrement et
de traitement des donnes.
22. Alimentation lectrique par le rseau.
23. Groupes lectrognes de secours.
24. Alimentation lectrique sans coupure.
25. Eclairage de secours.
26. Joints dtanchit des traverses pour linstallation lectrique.
27. Joints dtanchit des traverses lectriques et mcaniques.
28. Installation tlphonique.
29. Asservissement du verrouillage de la commande des portes des sas air.
30. Joints dtanchit des portes.
31. Joints dtanchit des fentres et panneaux dobservation.
32. Etanchit des traverses des revtements disolement.
33. Contrle de labsence de dfauts dans les lments structuraux de linstallation :
dalles, murs et plafonds en bton.
34. Contrle du revtement disolement des sols, murs et plafonds.
35. Contrle du dispositif de mise en pression et disolement des enceintes de con-
nement pour le niveau de scurit 4.
36. Enceintes de scurit biologique.
37. Autoclaves.
38. Installation pour lazote liquide avec son dispositif dalarme.
39. Systme de dtection des fuites deau (par ex. en cas dinondation dans la zone de
connement).
40. Douche de dcontamination et systme de distribution dadditifs chimiques.
41. Installation de lavage des cages et de neutralisation des eaux de lavage.
42. Gestion des dchets.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
40
41
8. Principes directeurs pour
lagrment des laboratoires/
installations
Un laboratoire est un environnement complexe et dynamique. Aujourdhui, les
laboratoires de recherche biomdicale et de biologie mdicale doivent tre capables
de sadapter rapidement aux exigences et aux contraintes sans cesse croissantes de la
sant publique. Cest ainsi, par exemple, que les laboratoires doivent repenser leurs
priorits pour faire face la menace que reprsentent la rapparition de certaines
maladies infectieuses ou lmergence de pathologies nouvelles. Cest pour faire en
sorte que cette adaptation et les mesures de maintenance correspondantes seffectuent
avec la promptitude voulue que tous les laboratoires de recherche biologique et de
biologie mdicale sont soumis un agrment priodique. Cette procdure contribue
garantir que :
1. Le laboratoire est dot de systmes de contrle technique appropris et que
ceux-ci fonctionnent conformment aux prvisions.
2. Des moyens de contrle spciques du site et des protocoles utiliss ont t mis
en place.
3. Les quipements de protection individuelle sont adapts aux manipulations
effectues.
4. Le problme de la dcontamination des dchets a t convenablement tudi et
que la marche suivre approprie pour la gestion de ces dchets a t tablie.
5. Des rgles de scurit gnrale, concernant notamment les risques physiques,
lectriques et chimiques, ont t tablies.
La procdure dagrment dun laboratoire diffre du processus de mise en service
(chapitre 7) sur un certain nombre de points importants. Elle consiste en effet exa-
miner systmatiquement tous les quipements et mesures de scurit qui existent dans
le laboratoire (systmes de contrle technique, quipements de protection individu-
elle, gestion administrative). Les pratiques et procdures relevant de la scurit
biologique sont galement examines. Lagrment dun laboratoire est un processus
continu dassurance de la qualit et de la scurit qui doit tre repris priodiquement.
Lagrment dun laboratoire peut tre con des professionnels de la sant et de
la scurit au travail ou de la scurit biologique convenablement forms. Les insti-
tutions peuvent disposer, parmi leur personnel, de cadres possdant lensemble de
comptences ncessaires pour effectuer des audits, des enqutes ou des inspections
(ces termes sont considrs comme interchangeables) dans le cadre de la procdure
dagrment. Toujours est-il que ces institutions peuvent galement envisager den-
gager ou tre tenues dengager des tiers pour effectuer ce service.
Les centres de recherche biomdicale ou de biologie mdicale peuvent laborer des
outils destins ces audits, enqutes ou inspections an dassurer la cohrence du
processus dagrment de leurs divers laboratoires. Ces outils doivent prsenter une
adaptabilit sufsante pour tenir compte des diffrences matrielles ou opra-
tionnelles entre laboratoires quimplique la nature des travaux effectus, tout en assu-
rant une approche uniforme lintrieur de chaque institution. Il faut veiller ce que
ces outils ne soient utiliss que par un personnel convenablement form et quils ne
se substituent pas une bonne valuation bioscuritaire conduite par des profession-
nels. Les tableaux 5 7 en donnent quelques exemples.
Les rsultats des audits, enqutes ou inspections doivent tre discuts avec le per-
sonnel et la direction du laboratoire. Dans chaque laboratoire, il faut dsigner une
personne qui sera charge de veiller ce que des mesures soient prises pour remdier
toutes les dfectuosits releves au cours de ces contrles. Le processus dagrment
nest pas achev et le laboratoire ne peut tre considr comme oprationnel tant que
ces dfectuosits nont pas t corriges.
En raison de leur caractre complexe, les activits des laboratoires scurit
biologique niveau 4 ne peuvent tre envisages dans cet ouvrage. Pour plus de dtails
et des informations plus compltes, le lecteur est invit sadresser au Programme de
scurit biologique de lOMS
1
(voir galement lannexe 3).
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
42
1
Programme de scurit biologique, Dpartement maladies transmissibles: surveillance et action, Organ-
isation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211 Genve, Suisse (http://www.who.int/csr/).
8. PRINCIPES DIRECTEURS POUR L AGRMENT DES LABORATOIRES/INSTALLATIONS
43
Tableau 5. Laboratoire de base scurit biologique niveau 1 : contrle de scurit
Lieu : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Date : . . . . . . . . . . . . . . . .
Responsable du laboratoire : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE) OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS
Laboratoire
Signalisation approprie : UV, laser, substances .........
radioactives, etc. ....................................................
Directives bioscuritaires existantes et suivies ...........
Appareils de laboratoire correctement marqus .........
(danger biologique, radioactivit, ...........................
toxicit, etc. ............................................................
Conception du laboratoire
Facile nettoyer ..........................................................
Lampes UV dotes dun interrupteur dinterdiction ....
Etagres solidement assujetties ..................................
Revtement des paillasses tanche et rsistant aux acides,
aux bases, aux solvants organiques et la chaleur ....
Eclairage sufsant .......................................................
Espace de rangement sufsant et correctement utilis ..
Bouteilles de gaz
Toutes les bouteilles arrimes .....................................
Bouteilles de rserve munies de bouchons ................
Gaz asphyxiants ou toxiques prsents uniquement
dans les salles ventiles .........................................
Prsence de bouteilles vides ou en excs ...................
Produits chimiques
Produits inammables rangs dans larmoire
approprie ..............................................................
Double datage des produits gnrateurs de peroxydes
(rception et ouverture) .........................................
Bonne sparation des produits ...................................
Produits dangereux rangs au-dessus du niveau des
yeux ........................................................................
Produits rangs au sol ................................................
Rcipients de produits chimiques rests ouverts .......
Bon tiquetage de toutes les solutions .......................
Utilisation de thermomtres mercure .......................
Rfrigrateurs, conglateurs, chambres froides
Prsence daliments pour la consommation humaine ...
Produits inammables dans des units lpreuve
des explosions ou scurises ................................
Prsence de substances cancrognes, radioactives
ou dun risque biologique indique par une
marque extrieure ..................................................
Systme douverture durgence des chambres froides ..
Niveau de
scurit
biologique:
Joindre le
formulaire de
contrle
bioscuritaire
correspondant
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
44
Equipement lectrique
Prsence de rallonges .................................................
Prises femelles la terre et avec la polarit approprie .
Branchements proximit des viers sous les
douches, etc. ..........................................................
Appareils avec ls eflochs ou endommags ...........
Prises surcharges ou plaquettes connexions .........
Plaquettes connexions non poses sur le sol ..........
Fusibles appropris dans les gaines ...........................
Les prises proches de lalimentation en eau sont
conformes la rglementation locale ....................
Cbles lectriques la terre ........................................
Radiateurs portables ...................................................
Equipement de protection individuelle
Rince-yeux dans le laboratoire ....................................
Douche de scurit .....................................................
Equipement de protection individuelle (gants, blouses,
lunettes de scurit, lunettes coques etc.) ..........
Personnel portant des vtements appropris ..............
Blouses, combinaisons, sarraus, gants et autres
vtements ou accessoires de protection non
ports hors du laboratoire .....................................
Tenues de protection individuelle pour le stockage
cryognique ............................................................
Gestion des dchets
Signes dune vacuation dfectueuse des dchets .....
Dchets tris et rassembls dans les rcipients
appropris ..............................................................
Rcipients pour dchets chimiques marqus,
tiquets, dats et ferms ......................................
Rcipients pour dchets chimiques correctement
manipuls et rangs ...............................................
Rcipients pour objets pointus ou tranchants
correctement utiliss et limins ...........................
Pas de dtritus sur le sol ............................................
Afchage de la marche suivre pour llimination des
dchets ...................................................................
Existence de programmes de sant et scurit au travail
Communication du risque ...........................................
Protection respiratoire .................................................
Protection auditive ......................................................
Surveillance du formaldhyde .....................................
Surveillance de loxyde dthylne ..............................
Surveillance des gaz anesthsiants .............................
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE) OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS
8. PRINCIPES DIRECTEURS POUR L AGRMENT DES LABORATOIRES/INSTALLATIONS
45
Systmes de contrle technique
Locaux du laboratoire en dpression par rapport aux
autres locaux occups, les couloirs et les bureaux ...
Eviers ou conduites dvacuation jouant le rle dvents ....
Lavabo .........................................................................
Elments mcaniques exposs (poulies, engrenages) ...
Conduite daspiration (circuit de vide) avec ltres et
piges au niveau des paillasses .............................
Risque de reux dans le rseau dalimentation en eau ....
Appareil distiller leau en bon tat ............................
Programme actif et efcace de lutte contre les
arthropodes et les rongeurs ...................................
Pratiques et rgles gnrales
Aliments destins la consommation humaine
conservs en dehors du laboratoire .......................
Avertissement du genre Dfense dintroduire des
aliments rserv au travail de laboratoire
clairement marqu sur les fours micro-ondes ....
On mange, boit, fume ou se maquille dans le laboratoire ..
Rcipients en verre sous pression scotchs ou
protgs (par ex. piges vide) .............................
Pipettage la bouche interdit ......................................
Dispositifs de pipettage mcaniques, propipettes, etc.
fournis et utiliss ....................................................
Rangement distinct pour les tenues de laboratoire et
les vtements de ville .............................................
Tenue gnrale du laboratoire
Rcipients en verre rangs sur le sol ..........................
Risques de trbuchement manifestes .........................
Lingettes absorbantes propres sur les plans de travail ...
Manipulation mcanique des dbris de verre (pelle et
brosse, pinces, etc.) ...............................................
Scurit incendie
Pommes des asperseurs dgages et non obstrues ...
Pas de joints dtanchit au niveau des traverses
des murs, plafonds , planchers, etc. ......................
Passage de ls et de tuyaux dans louverture des portes ..
Alles de circulation de 1m de largeur au minimum .....
Objets rangs sur des conduites ou sur des
appareils lectriques ...............................................
Combustibles excdentaires stocks dans le laboratoire ....
Bains chauffants temprature constante
Avec faible niveau deau et interrupteur de surchauffe ...
Construits en matriau non combustible ....................
Signature du contrleur :. . . . . . . . . . Date dachvement du contrle : . . . . . . . . .
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE) OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS
46
Tableau 6. Laboratoire de base Scurit biologique niveau 2 : contrle de scurit.
Ce formulaire est utiliser avec le formulaire de contrle bioscuritaire pour le
laboratoire de base scurit biologique niveau 1
Lieu : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Date : . . . . . . . . . . . . . . . .
Responsable du laboratoire : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE) OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS
Enceinte de scurit biologique (ESB)
Agrment au cours de lanne prcdente ................. Date :
Nettoyage de la surface de lESB avec un dsinfectant
appropri au dbut et la n de chaque Emplacement :
manipulation ..........................................................
Grille frontale et ltre dvacuation non obstrus ...... Marque :
Prsence de ammes nues dans lenceinte ................
Conduites daspiration (circuit de vide) munies de Type :
ltres et de piges dsinfectants en tat de
fonctionner ............................................................ N
o
de srie :
Efcacit de lESB compromise par lair ambiant ou
lemplacement .......................................................
Utilisation de lESB en prsence dun risque de
formation darosols ..............................................
Laboratoire
Accs limit au personnel autoris .............................
Entre limite au personnel connaissant la totalit
des risques ............................................................
Panneau de danger biologique appos si
ncessaire sur la porte du laboratoire ...................
Informations du panneau exactes et jour .......
Panneau lisible et en bon tat ............................
Toutes les portes fermes ..........................................
Dcontamination
Dcontaminant spcique du ou des
micro-organismes en cause ..................................
Le chef de laboratoire est prvenu si du matriel
infectieux est rpandu ou impliqu dans un accident ...
Un dcontaminant appropri est utilis pour nettoyer
un produit rpandu ................................................
Les plans de travail sont nettoys avant et aprs
chaque manipulation, quotidiennement ou si un
produit a t rpandu ............................................
Manipulation des dchets contamins
Bon usage des conteneurs de dchets contamins ...
Pas de conteneurs remplis ras bords ......................
Conteneurs correctement tiquets et ferms ............
Cultures et autres dchets soumis rglementation
dment dcontamins avant limination ...............
Transport dans des conteneurs ferms, solides et
tanches du matriel dcontamin hors du
laboratoire, conformment la rglementation
locale .....................................................................
47
Dcontamination biologique des dchets mixtes
avant limination sous la forme de dchets
chimiques ou radiologiques ..................................
Protection individuelle
Vaccinations ou examens ncessaires rappels au
personnel selon les agents infectieux
manipuls ..............................................................
Services mdicaux comptents contacts pour les
bilans de sant, la surveillance mdicale et le
traitement en cas dexposition professionnelle .....
Port de gants pour la manipulation de matriel
biologique infectieux ou dquipements
contamins ............................................................
Protection faciale lors de travaux sur du matriel
infectieux en dehors dune ESB .............................
Lavage des mains une fois les gants enlevs et
avant de sortir du laboratoire en cas de travaux
sur des agents infectieux .......................................
Possibilit dadministrer un anti-infectieux titre de
premier secours .....................................................
Pratiques
Utilisation dune ESB sil y a possibilit de
projections ou de formation darosols de
matriel infectieux .................................................
Un manuel de scurit biologique a t prpar et
adopt ....................................................................
Le personnel lit, tudie et suit les instructions
relatives aux pratiques et techniques et en
particulier celles qui gurent dans le manuel de
scurit ou le manuel de laboratoire (obligatoire
une fois par an pour tout le personnel) ................
Les manipulations sont effectues de manire
produire le moins possible darosols ou
dclaboussures .....................................................
Des seringues autobloquantes ou jetables sont
utilises pour les travaux sur agents infectieux ....
Les godets et les rotors des centrifugeuses ne sont
ouverts qu lintrieur dune ESB .........................
Les chantillons infectieux sont transports hors
dune ESB dans des conteneurs approuvs
conformment la rglementation relative au
transport de ce type de produit .............................
Commodits
Lavabo install prs de la sortie du laboratoire .........
Signature du contrleur :. . . . . . . . . . Date dachvement du contrle : . . . . . . . . .
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE) OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS
48
Tableau 7. Laboratoire de connement Scurit biologique niveau 3 : contrle de
scurit. Ce formulaire est utiliser avec les formulaires de contrle bioscuritaire
pour les laboratoires scurit biologique niveau 1 et scurit biologique niveau 2.
Lieu : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Date : . . . . . . . . . . . . . . . .
Responsable du laboratoire : . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
POINTS CONTRLS (NOTER LA DATE) OUI NON SANS OBJET OBSERVATIONS
Etablissement
Laboratoire spar des points de passage normaux du
btiment .................................................................
Accs au laboratoire par un vestibule dot de portes
fermeture automatique ...........................................
Des joints dtanchit sont poss ou peuvent ltre au
niveau de toutes les traverses en vue de la
dcontamination du laboratoire .............................
Air du local non recycl et vacu hors des secteurs
occups ..................................................................
Systme de ventilation rgul permettant le contrle du
sens de circulation de lair .....................................
Protection individuelle
Port de blouses fermes sur le devant dans le
laboratoire ..............................................................
Port des vtements de protection limit aux locaux du
laboratoire ..............................................................
Lavabo actionn par le pied, le coude ou
dclenchement automatique ..................................
Protection des mains
Port de gants doubles pour le travail avec du matriel
infectieux et des dquipements ou des plans de
travail pouvant tre contamins .............................
Protection respiratoire
Port dune protection respiratoire par lensemble du
personnel du laboratoire lorsque des arosols ne
sont pas conns de faon sre dans une ESB ....
Pratiques
Dispositif de protection des muqueuses disposition
pour la manipulation de matriel infectieux hors
dune ESB ...............................................................
Personnel averti des risques particuliers lis lagent
ou aux agents infectieux ........................................
Personnel tenu de lire et dobserver toutes les
instructions relatives aux pratiques et techniques,
y compris celles du manuel de scurit biologique
ou du manuel de laboratoire ..................................
Mises jour annuelles adresses au personnel ou
formation complmentaire si des changements
sont apports certaines techniques ....................
Autoclavage de tous les dchets avant limination ....
Signature du contrleur :. . . . . . . . . . Date dachvement du contrle : . . . . . . . . .
PARTIE II
Sret biologique
en laboratoire
9. Principes de la sret biologique
en laboratoire
51
Jusquici, le contenu du Manuel de scurit biologique en laboratoire a surtout consist
dans un expos des principes classiques de la scurit biologique en laboratoire. Les
prcdentes ditions montrent combien il est important que les laboratoires aient
recours de bonnes techniques microbiologiques, disposent de systmes de conne-
ment appropris et dinstallations bien conues et agences, avec des quipements
correctement utiliss et entretenus, et quen outre les services administratifs veillent
rduire au minimum les risques de lsions ou de maladie chez le personnel. Si les
laboratoires suivent ces recommandations, ils seront galement mme de rduire
au minimum les risques pour lenvironnement et la collectivit dans son ensemble.
Divers vnements survenus ces dernires annes dans le monde mettent en lumire
la ncessit de protger les laboratoires et les matires quils dtiennent contre un
certain nombre de prils susceptibles dentraner des dommages pour la population,
le btail, lagriculture ou lenvironnement. Avant de voir quels peuvent tre les besoins
des laboratoires en matire de sret biologique, il convient de dnir clairement ce
que lon entend par scurit et sret biologique et en quoi ces deux notions se
distinguent.
La scurit biologique consiste dans la mise en uvre dun certain nombre de
principes, de techniques et de pratiques de connement visant prvenir le risque
accidentel dexposition du personnel des agents pathognes ou des toxines, ou
encore de libration de telles substances. La sret biologique, elle, consiste dans la mise
en place dun certain nombre de mesures dordre administratif et de gestion du per-
sonnel, en vue de rduire le risque de perte, de vol, dutilisation mauvais escient, de
dtournement ou de libration dlibre dagents ou de toxines.
Le vritable fondement de la sret biologique rside dans lapplication en la-
boratoire des pratiques de scurit biologique. En effet, grce aux valuations du
risque pratiques dans le cadre du programme bioscuritaire de ltablissement, on
peut recueillir des informations sur la nature des micro-organismes dtenus, sur
lemplacement de ces micro-organismes, sur le personnel qui demande pouvoir en
disposer et sur lidentit de la personne responsable de ces germes. On peut alors
exploiter ces informations pour dterminer si un tablissement dtient des matires
biologiques susceptibles dattirer des personnes envisageant den faire un usage crimi-
nel. Il convient dlaborer des normes nationales identiant et examinant les respon-
sabilits actuelles des pays et des tablissements dans la protection des chantillons,
des agents pathognes et des toxines dtenus contre toute utilisation abusive.
Il incombe chaque laboratoire, en fonction de ses besoins, de la nature de ses
activits et des conditions locales, dlaborer et de mettre en uvre un programme
de sret biologique spcique. Par consquent, les activits de sret biologique
pratiques dans un laboratoire doivent tre reprsentatives des divers besoins de cet
tablissement et bncier de la contribution ou de lavis des directeurs scientiques,
des principaux chercheurs, des responsable de la sret biologique, du personnel
scientique du laboratoire, du personnel dentretien, des responsables administratifs,
du personnel spcialis dans les technologies de linformation et, si ncessaire, des
services de rpression des fraudes et du personnel de scurit.
Les mesures de sret biologique en laboratoire doivent sappuyer sur un pro-
gramme complet de responsabilisation lgard des agents pathognes et des toxines,
qui comprend un inventaire actualis identiant lemplacement de ces matires et
du personnel y ayant accs et indiquant leur utilisation, leurs transferts internes
ltablissement ou entre tablissements, ainsi que toute inactivation et/ou limination
ventuelles des matires. De mme, il convient dtablir un protocole de sret
biologique pour le laboratoire, destin guider lidentication, le signalement, ltude
et llimination des failles dans la sret biologique de cet tablissement, y compris
les incohrences dans les rsultats dinventaire. La participation, les rles et les respon-
sabilits des autorits de sant et de scurit publiques en cas dentorse la sret
doivent tre clairement dnis.
Une formation la sret biologique en laboratoire, distincte de la formation la
scurit biologique en laboratoire, doit tre dispense tout le personnel. Une telle
formation devrait aider les membres du personnel comprendre les besoins en matire
de protection de ces matires et les raisons des diffrentes mesures de scurit
biologique. Elle devrait aussi inclure un examen des normes nationales pertinentes et
des procdures propres ltablissement. Au cours de cette formation, il convient
de prsenter galement les procdures prcisant les rles et les responsabilits du per-
sonnel en matire de sret en cas dinfraction dans ce domaine.
Laptitude professionnelle et morale travailler avec des agents pathognes dan-
gereux de lensemble du personnel disposant dun accs autoris rgulier aux matires
sensibles joue galement un rle dterminant dans lefcacit des activits concernant
la sret en laboratoire.
En rsum, les prcautions de sret doivent devenir des lments de routine du
travail de laboratoire, lgal des mesures dasepsie ou de scurit microbiologique.
Les mesures de sret biologique en laboratoire ne doivent pas faire obstacle un
partage efcace des matires de rfrence, des chantillons cliniques et pidmio-
logiques et des informations qui sy rapportent, ncessaires aux enqutes cliniques ou
de sant publique. Un programme de sret bien gr ne devrait pas entraver outre
mesure les activits quotidiennes du personnel scientique, ni faire obstacle la
ralisation des recherches. Un accs lgitime aux recherches et aux matires cliniques
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
52
importantes doit tre prserv. Lvaluation de laptitude des membres du personnel,
lapport ces membres dune formation spcique la sret et un respect rigoureux
des procdures de protection des agents pathognes constituent des moyens
raisonnables pour amliorer la sret biologique en laboratoire. La mise en place et
le maintien de tous ces efforts passe par la ralisation dvaluations des risques et des
menaces et par la rvision et la mise jour des procdures sur une base rgulire. Des
contrles du respect de ces procdures, sappuyant sur des instructions claires quant
aux rles, aux responsabilits et aux mesures correctives, doivent tre prvus par les
programmes de sret biologique en laboratoire et par les normes nationales dans ce
domaine.
9. PRINCIPES DE LA SURETE BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
53
PARTIE III
Equipements de
laboratoire
10. Enceintes de
scurit biologique
57
Les enceintes de scurit biologique (ESB) appeles aussi postes de scurit microbi-
ologique (PSM) sont conues pour viter que loprateur, le local du laboratoire et
le matriel de travail ne soient exposs aux arosols ou claboussures infectieux qui
pourraient se produire lors de la manipulation de matriels biologiques contenant des
agents pathognes, comme les cultures primaires, les souches pour les cultures et les
chantillons destins au diagnostic. Des arosols se produisent lors de toute manipu-
lation qui communique de lnergie un produit liquide ou semi-liquide, par exemple
lorsquon secoue, verse, agite, ou fait tomber un liquide goutte goutte sur une surface
ou dans un autre liquide. Dautres oprations, par exemple ensemencer en stries une
plaque de glose, inoculer des acons pour culture cellulaire laide dune pipette,
utiliser une pipette multivoies pour dlivrer une suspension liquide dagents infectieux
sur une plaque de microculture, homogniser et mlanger du matriel biologique
infectieux, centrifuger un liquide ou travailler sur un animal, peuvent provoquer la for-
mation darosols infectieux. Les particules darosol de moins de 5m de diamtre ou
les gouttelettes de diamtre compris entre 5 et 100m, ne sont pas visibles lil nu.
Lorsque des arosols se forment, loprateur ne sen rend gnralement pas compte, et
il na pas conscience non plus quils peuvent tre inhals ou provoquer la contamina-
tion croise des plans de travail. On a montr quune ESB convenablement utilise est
capable de rduire trs efcacement le nombre dinfections contractes au laboratoire
ou les contaminations croises conscutives une exposition des arosols infectieux.
Les ESB contribuent galement la protection de lenvironnement.
Au cours des annes, la conception de base des ESB a subi un certain nombre de
modications. Lune des plus importantes a t le montage dun ltre particules de
haute efcacit (ltre HEPA) sur le systme dvacuation. Ce ltre est capable dar-
rter 99,97 % des particules de 0,3m de diamtre et 99,99 % de celles dont le
diamtre se situe de part et dautre de cette valeur. Un ltre HEPA peut donc arrter
efcacement tous les agents infectieux connus et lon peut donc tre certain que lair
qui sort de lenceinte est exempt de germes pathognes. Une deuxime modication
a consist diriger lair ltr sur le plan de travail, ce qui permet dviter la conta-
mination de ce plan et de ce qui sy trouve. On parle souvent de protection du
produit pour dsigner cette caractristique. Le tableau 8 indique le type de
protection confr dans chaque cas.
Remarque. Les hottes ux laminaire horizontal ou vertical ne sont pas des
enceintes de scurit biologiques et ne doivent pas tre utilises comme telles.
Enceinte de scurit biologique de classe I
Le schma dune enceinte de scurit biologique de classe I est reprsent sur la gure
6. Lair est aspir par louverture frontale la vitesse minimale de 0,38m/s et passe sur
le plan de travail avant dtre vacu par une conduite munie dun ltre. Le courant
dair entrane hors de la zone de respiration de loprateur les particules darosol qui
pourraient se former au niveau du plan de travail et les dirige vers la conduite dva-
cuation. Loprateur peut passer les bras par louverture frontale pour atteindre le plan
de travail situ lintrieur de lenceinte tout en observant ce plan travers un panneau
de verre. Ce panneau peut galement tre compltement lev, ce qui permet daccder
plus facilement au plan de travail pour le nettoyer ou pour toute autre raison.
Lair de lenceinte est vacu par une conduite munie dun ltre HEPA : a) dans le
laboratoire, puis lextrieur du btiment par le circuit dvacuation de ce dernier; b)
lextrieur par le circuit dvacuation du btiment; c) directement lextrieur. Le
ltre HEPA peut tre mont sur la gaine dvacuation de lESB ou sur le circuit d-
vacuation du btiment. Certaines ESB de classe I sont quipes dun ltre HEPA
intgr, les autres utilisent le ventilateur dextraction qui quipe le circuit dvacua-
tion du btiment.
LESB de classe I a t la premire enceinte de ce type tre agre et, du fait de la sim-
plicit de sa conception, elle est encore trs largement utilise dans le monde. Elle
prsente lavantage dassurer la protection du personnel et de lenvironnement et peut
galement tre utilise pour travailler sur des radionuclides ou des produits chimiques
volatils et toxiques. Toutefois, comme lair aspir par louverture frontale passe sur le plan
de travail sans tre strilis, ce dispositif ne protge pas coup sr le produit manipul.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
58
Tableau 8. Choix dune enceinte biologique de scurit (ESB) en fonction du type de
protection recherch
TYPE DE PROTECTION ESB UTILISER
Protection du personnel, micro-organismes Classe I, Classe II, Classe III
des groupes de risque 1 3
Protection du personnel, micro-organismes Classe III
du groupe de risque 4, laboratoire avec
bote gants
Protection du personnel, micro-organismes Classe I, Classe II
du groupe de risque 4, port obligatoire de
combinaisons pressurises
Protection du produit Classe II, Classe III uniquement si ux laminaire
Protection contre les radionuclides volatils/ Classe IIB1, Classe IIA2 vacuation extrieure
protection chimique, quantits minimes
Protection contre les radionuclides volatils/ Classe I, Classe IIB2, Classe III
protection chimique
Enceinte de scurit biologique de classe II
Les cultures cellulaires et tissulaires tant de plus en plus utilises pour la culture des
virus, on a estim quil ntait plus acceptable de faire passer de lair non strilis
provenant de la pice sur le plan de travail. Les ESB de classe II ont t conues non
seulement pour assurer la protection du personnel, mais galement pour viter que
le matriel biologique prsent sur le plan de travail ne soit contamin par lair de la
pice. Les ESB de classe II, dont il existe quatre types (A1, A2, B1 et B2), se diffren-
cient des ESB de classe I par le fait quelles ne laissent passer sur le plan de travail que
de lair strile cest--dire ayant travers un ltre HEPA. Les ESB de classe II peuvent
tre utilises pour travailler sur des agents infectieux des groupes de risque 2 et 3. Elles
peuvent galement tre utilises pour travailler sur des agents infectieux du groupe de
risque 4 si loprateur porte une combinaison de protection pressurise.
Enceinte de scurit biologique de classe II, type A1
La gure 7 reprsente une enceinte de scurit biologique de classe II, type A1. Un
ventilateur plac lintrieur de lenceinte aspire lair par louverture frontale et le fait
passer travers la grille avant. Au niveau de louverture frontale, lair doit tre aspir
la vitesse minimum de 0,38m/s. Lair traverse ensuite un ltre HEPA avant de se
diriger vers le bas pour passer sur le plan de travail. Au cours de son mouvement
descendant, le courant dair se divise une distance denviron 6 18cm du plan de
travail pour former deux courants secondaires, lun qui passe travers la grille avant
10. ENCEINTES DE SCURIT BIOLOGIQUE
59
air ambiant
air potentiellement contamin
air filtr par le filtre HEPA
coupe latrale
A
D
C
B
Figure 6. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe I.
A, ouverture frontale; B, panneau dobservation guillotine; C, ltre HEPA mont sur
la conduite dvacuation; D, gaine dvacuation.
et lautre travers la grille arrire. Toutes les particules darosol qui se forment au
niveau du plan de travail sont immdiatement piges par ce courant descendant et
entranes travers les grilles avant ou arrire, ce qui assure une protection maximale
du produit manipul. Lair schappe ensuite par la chambre de distribution situe
larrire pour aboutir dans lespace qui se trouve au sommet de lenceinte, entre le
ltre dadmission et le ltre dvacuation. Compte tenu des dimensions relatives de
ces deux ltres, environ 70 % de lair est recycl travers le ltre dadmission pour
revenir sur le plan de travail; les 30 % restants sont rejets dans la pice ou lex-
trieur aprs avoir travers le ltre dvacuation.
Lair rejet par une enceinte de scurit biologique de classe II, type A1 peut tre
recycl dans la pice ou vacu lextrieur du btiment en raccordant lenceinte
une conduite dvacuation spciale laide dun manchon ou en le faisant passer par
le circuit dvacuation gnral.
Le recyclage de lair dans la pice a lavantage de rduire les dpenses en com-
bustible de ltablissement car lair chauff ou refroidi ne schappe pas lextrieur.
Le raccordement par une gaine tanche de lenceinte au circuit dvacuation permet
galement dutiliser certaines ESB pour travailler sur des radionuclides et des pro-
duits chimiques toxiques volatils (tableau 8).
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
60
coupe de face coupe latrale
air ambiant
air potentiellement contamin
air filtr par le filtre HEPA
B
A
E
C
D
F
Figure 7. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe II,
type A1.
A, ouverture frontale; B, panneau dobservation guillotine; C, ltre HEPA dvacua-
tion; D, chambre de distribution arrire; E, ltre HEPA dadmission; F, ventilateur.
Enceintes de scurit biologique de classe II, type A2 avec ventilation sur lextrieur
et de classe II, types B1 et B2
Les ESB de classe II, type A2 avec ventilation sur lextrieur et les ESB de classe II types
B1 (gure 8) et B2, sont des variantes de lESB II, type A1. Le tableau 9 en donne les
caractristiques, avec celles des ESB de classe I et de classe III. Chacune de ces
variantes correspond un usage particulier (voir tableau 8). Elles diffrent les unes
des autres plusieurs gards : vitesse de lair travers louverture frontale; quantit
dair recycle sur le plan de travail et vacue de lenceinte; circuit dvacuation,
qui dtermine si lair issu de lenceinte est rejet dans la pice ou lextrieur, par
lintermdiaire dun circuit dvacuation spcial ou par le circuit dvacuation
gnral; rglage de la pression (enceinte dont les gaines et la chambre de distribution
biologiquement contamines sont en dpression ou, dfaut, sont entoures de
volumes en dpression).
Les rfrences bibliographiques 7 et 8 ainsi que les brochures disponibles auprs
des fabricants donnent une description complte des diverses ESB de classe IIA et IIB.
10. ENCEINTES DE SCURIT BIOLOGIQUE
61
coupe de face coupe latrale
air ambiant
air potentiellement contamin
air filtr par le filtre HEPA
B
A
F
C
G
F
E
D
Figure 8. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe II, type
B1.
A, ouverture frontale; B, panneau dobservation guillotine; C, ltre HEPA dvacua-
tion; D, ltre HEPA dadmission; E, gaine dvacuation en dpression; F, ventilateur;
G, ltre HEPA dadmission dair. Il est ncessaire de raccorder le circuit dvacuation
de lenceinte au circuit gnral dvacuation du btiment.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
62
Tableau 9. Diffrences entre les enceintes de scurit biologique (ESB) des classes
I, II et III.
ESB VITESSE LENTRE (m/s) COURANT DAIR (%) CIRCUIT DVACUATION
RECYCL VACU
Classe I
a
0,36 0 100 Jonction rigide tanche
Classe IIA1 0,380,51 70 30 Evacuation dans la
pice ou manchon de
raccordement
Classe IIA2 avec 0,51 70 30 Evacuation dans la
ventilation sur pice ou manchon de
lextrieur
a
raccordement
Classe IIB1
a
0,51 30 70 Jonction rigide tanche
Classe IIB2
a
0,51 0 100 Jonction rigide tanche
Classe III
a
Sans objet 0 100 Jonction rigide tanche
a
Toutes les gaines et tous les conduits potentiellement contamins sont en dpression ou sont entours
de gaines et de volumes en dpression.
Enceinte de scurit biologique de classe III
Ce type denceinte (gure 9), qui assure au personnel la protection maximale, est
utilis pour travailler sur des agents infectieux du groupe de risque 4. Toutes les tra-
verses sont dotes de joints tanches aux gaz. Lair admis dans lenceinte passe
travers un ltre HEPA et lair qui en sort travers deux ltres HEPA. La circulation
de lair est assure par un circuit dvacuation spcial situ lextrieur de lenceinte,
qui en maintien lintrieur en dpression (environ 124,5 Pa). Pour accder au plan de
travail, on utilise des gants en caoutchouc trs rsistant xs des orices frontaux.
Les ESB de classe III doivent tre quipes dun sas de passage susceptible dtre stri-
lis et dot dun systme dvacuation avec ltre HEPA. Les enceintes de classe III
peuvent tre raccordes un autoclave double porte pour la dcontamination de
tout ce qui entre ou sort de lenceinte. Pour disposer dun plan de travail plus vaste,
on peut adjoindre plusieurs botes gants. Les ESB de classe III conviennent pour les
manipulations effectues dans les laboratoires de scurit biologique niveau 3 ou 4.
Raccordements pour lvacuation de lair des enceintes de scurit biologique
Il existe des manchons de raccordement ou des hottes que lon peut utiliser avec les
ESB de classe IIA1 ou IIA2 avec ventilation extrieure. Le manchon de raccordement
sadapte sur le botier dvacuation de lenceinte et permet den aspirer lair pour
lamener jusquaux gaines dvacuation du btiment. Un petit espace, gnralement
de 2,5cm de diamtre est mnag entre le botier dvacuation de lenceinte et le
raccord, ce qui permet daspirer lair de la pice pour lamener galement dans le
circuit dvacuation du btiment. Le manchon doit tre amovible ou tout au moins
tre conu pour permettre de contrler le fonctionnement de lenceinte. En rgle
gnrale, les uctuations du dbit de lair dans le circuit de ventilation du btiment
nont gure dinuence sur le fonctionnement dune ESB raccorde au circuit par un
manchon de ce genre.
Les ESB de classe IIB1 ou IIB2 sont dotes de jonctions rigides tanches, cest--
dire quelles sont raccordes directement, sans laisser aucun espace, au circuit dva-
cuation du btiment ou, de prfrence, un circuit dvacuation spcial. Il faut que
le circuit dvacuation du btiment soit parfaitement adapt aux spcications
indiques par le fabricant, tant en ce qui concerne le volume dair que la pression sta-
tique. Le processus dagrment des ESB jonction rigide tanche est plus long que
dans le cas des enceintes avec recyclage de lair dans la pice ou qui sont relies au
circuit dvacuation au moyen dun manchon ou dune hotte.
Choix dune enceinte de scurit biologique
Le choix dune ESB doit reposer avant tout sur le type de protection ncessaire : protec-
tion du produit manipul, protection du personnel contre des micro-organismes des
groupes de risque 1 4, protection du personnel contre des radionuclides ou des
10. ENCEINTES DE SCURIT BIOLOGIQUE
63
air ambiant
air potentiellement contamin
air filtr par le filtre HEPA
coupe de face coupe
latrale
B
A
E
C
D
C
F
Figure 9. Reprsentation schmatique dune enceinte de scurit biologique de classe III
(bote gants).
A, orices de xation des manchons gants; B, panneau dobservation guillotine; C,
deux ltres HEPA dvacuation monts en srie; D, ltre HEPA dadmission;
E, autoclave deux portes ou sas de passage; F, cuve de dsinfection chimique.
Il est ncessaire de raccorder le circuit dvacuation de lenceinte un circuit
dvacuation du btiment indpendant.
produits chimiques toxiques et volatils, protection simultane contre plusieurs de ces
risques. Le tableau 8 indique quel modle dESB utiliser pour chaque type de protection.
Il ne faut pas utiliser de produits chimiques toxiques ou volatils dans les enceintes
avec recyclage de lair dans la pice, savoir les enceintes de classe I qui ne sont pas rac-
cordes au circuit dvacuation du btiment ou les enceintes de classe IIA1 ou IIA2. Les
enceintes de classe IIB1 peuvent convenir pour des manipulations sur de trs petites
quantits de produits chimiques ou de radionuclides volatils. Lorsque lon travaille
sur des quantits plus importantes de radionuclides ou de produits chimiques volatils,
il faut utiliser une enceinte vacuation totale, cest--dire une ESB de classe IIB2.
Utilisation des enceintes de scurit biologique au laboratoire
Emplacement
La vitesse de lair qui traverse louverture frontale dune ESB est denviron 0,45m/s.
A cette vitesse, le ux dair entrant est facilement perturb par les courants dair pro-
duits par les personnes qui se dplacent proximit de lESB, les fentres ouvertes, les
registres dadmission de lair ou encore louverture ou la fermeture des portes. Il faut
donc installer les ESB dans des emplacements qui soient loigns des points de passage
et des courants dair qui pourraient perturber leur fonctionnement. Dans la mesure
du possible, il faudrait prvoir un dgagement dune trentaine de centimtres derrire
lenceinte et sur chacun de ses cts pour faciliter laccs en cas doprations de main-
tenance. Il peut galement savrer ncessaire de prvoir un dgagement denviron 30
35cm au-dessus de lenceinte an que lon puisse mesurer exactement la vitesse de
lair travers le ltre dvacuation et le cas chant, changer le ltre.
Oprateurs
Si les enceintes de scurit biologique ne sont pas utilises correctement, la protection
confre risque dtre considrablement rduite. Loprateur doit veiller ne pas per-
turber le ux dair entrant lorsquil passe les bras dans le volume de travail ou les en
retire. Il faut dplacer les bras trs lentement en avant ou en arrire, perpendiculaire-
ment louverture frontale. Avant de manipuler du matriel dans le volume de travail
dune ESB, il faut attendre environ 1 minute, une fois que lon a pass les bras lin-
trieur, pour que lenceinte sadapte et que le courant dair vienne balayer la surface
des mains et des bras. Il faut galement veiller ne faire quun minimum de mouve-
ments travers louverture frontale en plaant tous les instruments et objets nces-
saires sur le plan de travail avant de commencer la manipulation.
Disposition du matriel
La grille de reprise frontale des ESB de classe II ne doit pas tre obstrue par du papier,
des appareils ou dautres objets. Il faut dsinfecter la surface du matriel que lon va
disposer lintrieur de lenceinte avec de lalcool 70 %. On peut travailler sur un
linge absorbant imprgn de dsinfectant pour retenir les projections et les clabous-
sures. Tout le matriel doit tre dispos aussi loin que possible dans le volume de
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
64
travail, en se rapprochant au maximum du bord distal du plan de travail, mais en
vitant dobstruer la grille arrire. Les appareils qui produisent des arosols (par ex.
mlangeurs, centrifugeuses, etc.) doivent tre placs vers le fond de lenceinte. Le
matriel encombrant, comme les sacs de scurit biologique, les plateaux pour
pipettes utilises et les oles vide doivent tre placs sur un des cts du volume de
travail. Sur le plan de travail, il faut travailler en allant des zones propres vers les zones
contamines.
Le sac de scurit autoclavable destin recueillir le matriel infectieux et les
plateaux pipettes ne doivent pas tre placs hors de lenceinte. Les frquents mou-
vements de va-et-vient entre lintrieur et lextrieur de lenceinte qui sont ncessaires
pour utiliser ces rcipients peuvent perturber la veine de garde et par voie de con-
squence, nuire la protection du personnel et du produit manipul.
Utilisation et maintenance
La plupart des ESB sont conues pour une utilisation 24h sur 24 et les chercheurs
estiment que cette utilisation ininterrompue facilite la rduction du taux de poussires
et de matires particulaires prsentes dans le laboratoire. Les enceintes de classe IIA1 et
IIA2 dont lair est vacu dans la pice ou dans un circuit dvacuation spcial au moyen
dun manchon de raccordement, peuvent tre dbranches lorsquelles ne sont pas
utilises. Dans dautres types denceinte, comme les ESB de classe IIB1 et IIB2 qui sont
directement connectes aux gaines dvacuation par un raccordement tanche, lair
doit circuler en permanence pour que lair de la pice reste en tat dquilibre. Il faut
brancher les enceintes au moins 5 minutes avant de commencer travailler et attendre
galement 5 minutes une fois la manipulation acheve, pour purger le volume de
travail, cest--dire pour que lair contamin ait le temps dtre vacu de lenceinte.
Toute rparation effectue sur une ESB doit tre cone un technicien quali.
Si un dysfonctionnement se produit pendant lutilisation de lenceinte, il faut le si-
gnaler et y remdier avant de rutiliser lenceinte.
Lampes UV
Il nest pas ncessaire dquiper les ESB de lampes ultraviolets. Si toutefois on utilise
de telles lampes, il faut les nettoyer chaque semaine pour liminer la poussire et les
salets qui pourraient rduire laction germicide du rayonnement. Lintensit du
rayonnement ultraviolet doit tre mesure lors de chaque nouvel agrment de len-
ceinte an de vrier que lmission de la lampe est satisfaisante. Les lampes UV
doivent tre teintes quand des personnes sont prsentes dans la pice, an de
protger leurs yeux et leur peau contre toute exposition accidentelle.
Flammes nues
Il faut viter la prsence de toute amme nue dans lenvironnement quasi strile qui
existe lintrieur de lenceinte. En effet, les ammes perturbent la circulation de
lair et peuvent tre dangereuses si lon utilise galement des substances volatiles
10. ENCEINTES DE SCURIT BIOLOGIQUE
65
inammables. Pour striliser les anses bactriologiques, il existe des microbrleurs et
des fours lectriques, qui sont prfrables aux ammes nues.
Produits rpandus accidentellement
Il faut afcher dans le laboratoire un exemplaire de la conduite tenir si des produits
sont rpandus accidentellement et veiller ce chacun lise et assimile ces instructions.
Si un produit prsentant un danger biologique est rpandu accidentellement dans une
ESB, il faut nettoyer immdiatement le volume de travail pendant que lenceinte con-
tinue fonctionner. On utilisera cet effet un dsinfectant efcace que lon devra
appliquer en sefforant de produire le moins darosols possible. Tout ce qui entre en
contact avec le produit rpandu doit tre dsinfect ou pass lautoclave.
Agrment
La procdure dagrment stipule quun contrle doit tre effectu sur chaque ESB
pour vrier quelle fonctionne conformment aux spcications nationales et inter-
nationales et ne prsente pas de dfaut. Ce contrle doit tre pratiqu lors de linstal-
lation puis priodiquement par des techniciens qualis, conformments aux
instructions du fabricant. Pour valuer lefcacit du connement assur par une
enceinte, il faut procder aux contrles suivants : intgrit de la structure, prsence
ventuelle de fuites au niveau des ltres HEPA, paramtres vlocimtriques du ux
dair descendant, vitesse frontale du courant dair, contrle manomtrique de la
dpression, dbit des ventilateurs, essai au fumigne pour contrler le ux dair,
alarmes et asservissement du verrouillage. On peut galement effectuer dautres con-
trles (facultatifs) : dfauts disolation lectrique, intensit de lclairage, intensit du
rayonnement UV, niveau de bruit et vibrations. Une formation, des comptences et
des quipements spcialiss sont indispensables pour effectuer ces contrles et il est
vivement recommand de les faire excuter par un professionnel quali.
Nettoyage et dsinfection
Tout ce qui se trouve lintrieur de lenceinte, y compris lappareillage, doit faire
lobjet dune dcontamination en surface et tre retir du volume de travail une fois
la manipulation acheve, car un reste de milieu de culture peut permettre la pro-
lifration des micro-organismes.
Les surfaces intrieures de lenceinte doivent tre dcontamines avant et aprs
chaque utilisation. Les plans de travail et les parois intrieures doivent tre passs au
dsinfectant de manire tuer tous les micro-organismes prsents. A la n de la
journe de travail, on procdera une dcontamination nale consistant passer au
dsinfectant le plan de travail, les parois latrales, le fond ainsi que la face arrire du
panneau dobservation. A cet effet, on peut utiliser une solution dhypochlorite ou de
lalcool 70 %, si ces produits sont efcaces contre les germes que lon cherche li-
miner. Si on utilise un dsinfectant corrosif, comme lhypochlorite par exemple, il
faudra encore rincer les surfaces avec de leau strile.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
66
Il est recommand de procder cette dsinfection pendant que lenceinte est en
marche. Si elle a t arrte, on la remettra en marche pendant 5 minutes pour la
purger de lair quelle contient avant de la dbrancher dnitivement.
Dcontamination
Lenceinte doit tre dcontamine avant de changer les ltres ou avant de la dplacer.
La mthode la plus courante consiste en une fumigation au formaldhyde. La dcon-
tamination des enceintes doit tre effectue par un professionnel quali.
Equipements de protection individuelle
Des vtements protecteurs doivent tre ports chaque fois que lon utilise une ESB.
Les blouses de laboratoire sont acceptables pour le travail aux niveaux de scurit
biologique 1 ou 2. Aux niveaux 3 ou 4, il faut utiliser des blouses boutonnage dans
le dos, qui assurent une meilleure protection (sauf dans un laboratoire o le port dune
combinaison pressurise est obligatoire). Les gants doivent tre bien tirs de manire
passer par dessus les poignets et non pas en dessous. Pour se protger les poignets,
on peut ajouter des manches lastique. Certaines manipulations ncessitent le port
dun masque ou de lunettes de protection.
Alarmes
Les ESB peuvent tre quipes dun ou deux types dalarme. Certaines alarmes
nquipent que les enceintes dotes dun panneau dobservation guillotine. Ces
alarmes se dclenchent si loprateur place le panneau dans une mauvaise position et
ne sarrtent que lorsquil a remis le panneau correctement en place. Un autre type
dalarme est destin avertir dune perturbation dans la circulation de lair. Son
dclenchement est un signal de danger immdiat pour loprateur ou pour le produit.
Si cette alarme retentit, il faut interrompre immdiatement la manipulation et
prvenir le chef de laboratoire. Le manuel dutilisation fourni par le fabricant doit
indiquer quelle est ensuite la marche suivre. Ces questions doivent tre abordes lors
de la formation lutilisation des ESB.
Informations complmentaires
Le choix de lESB approprie, son installation, son utilisation correcte et le contrle
annuel de son bon fonctionnement sont des oprations complexes. Il est vivement
recommand quelles soient supervises par un professionnel de la scurit biologique
parfaitement form et expriment. Ce spcialiste doit trs bien connatre la littra-
ture correspondante mentionne dans la bibliographie du prsent manuel et il doit
avoir reu une formation complte sur la question. Les oprateurs doivent galement
recevoir une formation en bonne et due forme portant sur le fonctionnement et
lutilisation des ESB.
Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 5
et 7 16, ainsi quau chapitre 11.
10. ENCEINTES DE SCURIT BIOLOGIQUE
67
68
11. Equipements de scurit
Comme les arosols sont une source importante dinfection, il faut veiller ce quil
sen forme le moins possible et viter de les disperser. Des arosols dangereux peuvent
se former dans de nombreux laboratoires, par exemple lorsquon mlange, mixe, broie,
secoue, agite, traite aux ultrasons ou centrifuge du matriel biologique infectieux.
Mme en utilisant un appareillage qui rpond aux normes de scurit, il est prfrable
deffectuer autant que possible ces oprations dans une enceinte de scurit biologique
agre. Les diffrents types denceintes de scurit biologique, ainsi que leur utilisa-
tion et leur contrle sont traits au chapitre 10. Lutilisation dquipements de scu-
rit ne garantit pas la protection de loprateur si celui-ci nest pas form et nutilise
pas les techniques appropries. Ces quipements doivent subir des contrles prio-
diques an de sassurer quils continuent fonctionner en toute scurit.
Le tableau 10 donne la liste des quipements et instruments de scurit conus pour
liminer ou rduire certains risques et indique brivement les caractristiques qui con-
tribuent leur scurit dutilisation. Des prcisions sont donnes par la suite sur une
bonne partie de cet appareillage. Des informations complmentaires sur la manire
de bien les utiliser sont galement donnes au chapitre 12.
Lannexe 4 donne un certain nombre de renseignements sur les quipements et les
oprations ou manipulations qui comportent un danger.
Isolateurs dpression en lm ou feuille de plastique souple
Lisolateur dpression en lm souple est un dispositif de connement primaire
autonome qui assure une protection maximale contre le matriel biologique dan-
gereux. Il peut tre mont sur un support mobile. Le volume de travail est complte-
ment ferm par une enveloppe transparente en chlorure de polyvinyle (PVC)
suspendue un cadre en acier. La pression lintrieur de lisolateur est maintenue
une valeur infrieure celle de la pression atmosphrique. Ladmission de lair se fait
travers un ltre HEPA et son extraction travers deux ltres du mme type placs
en srie, ce qui vite davoir installer une gaine pour lvacuer lextrieur du bti-
ment. On peut quiper lisolateur dun incubateur, dun microscope ou dautres types
dobjets ou dinstruments tels que centrifugeuses, cages pour animaux, enceintes
chauffantes, etc. Tous ces objets ou ces matriels sont introduits ou retirs par des ori-
ces destins, lun linstrumentation et lautre aux chantillons, sans risque pour la
scurit microbiologique. Les manipulations se font laide de manchons dont
11. EQUIPEMENTS DE SCURIT
69
Tableau 10. Equipements et instruments de scurit biologique
EQUIPEMENTS ET RISQUES CARACTRISTIQUES DE SCURIT
INSTRUMENTS
Enceinte de scurit
biologique
Classe I Arosols et projections Flux entrant minimal (vitesse
frontale) au niveau de
louverture frontale. Bonne
ltration de lair vacu
Pas de protection du produit
Classe II Arosols et projections Flux entrant minimal (vitesse
frontale). Bonne ltration de
lair vacu
Assure la protection du produit
Classe III Arosols et projections Connement haute scurit
Assure la protection du
produit si ux laminaire
Isolateur dpression Arosols et projections Connement haute scurit
en feuille de plastique
souple
Ecran anti-projections Projections de produits chimiques Constitue un cran entre
loprateur et la manipulation
Pipetteurs Risques dus au pipettage la Facilit dutilisation
bouche : ingestion de germes Pas de contamination de
pathognes, inhalation des lextrmit pour laspiration,
arosols produits par la succion protection du pipetteur, de
exerce sur la pipette, expulsion lutilisateur et du circuit de
de liquide ou chute de gouttes, vide (conduites daspiration)
contamination de lextrmit de la Strilisation possible
pipette servant aspirer Pas de fuite par la pointe de
la pipette
Anse Projections provenant des anses Protection par un tube ferm
micro-incinrateurs, de transfert une extrmit en verre ou
Anses jetables en cramique,chauff au gaz
ou llectricit
Jetables, chauffage inutile
Rcipients tanches Arosols, produits rpandus par Construction tanche, munie
pour recueillir et suite de renversements ou de dun couvercle
transporter le matriel fuites Rsistance lusure
infectieux striliser Autoclavables
dans une installation
approprie de
ltablissement
lextrmit est munie de gants jetables. Lisolateur est quip dun manomtre pour
la surveillance de la pression lintrieur de lenveloppe plastique.
Les isolateurs en lm souple sont utiliss pour manipuler les micro-organismes
haut risque (groupes de risque 3 ou 4) sur le terrain, dans des conditions o il
serait impossible ou imprudent dinstaller et dutiliser des enceintes de scurit
biologique classiques.
Pipetteurs
Le pipettage doit toujours se faire au moyen de pipetteurs. Le pipettage la bouche
est absolument interdit.
On ne saurait trop insister sur limportance des dispositifs de pipettage. Les acci-
dents les plus courants lis au pipettage sont dus au pipettage la bouche. Laspira-
tion par la bouche et lingestion de produits dangereux sont responsables dun grand
nombre dinfections et daccidents de laboratoire.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
70
Conteneurs pour Piqres et coupures Autoclavables
objets pointus ou Anti-piques, robustes
tranchants
Conteneurs de Libration de micro-organismes Robustes
transport dun dans lenvironnement Conteneurs primaires et
laboratoire ou dun secondaires tanches leau
tablissemement (antifuites)
lautre Matriau absorbant retenant
les liquides
Autoclaves, Objets et matriel contamins Modles agrs
manuels ou (scuriss en vue de leur Efcacit de la strilisation par
automatiques limination ou rutilisation) la chaleur
Flacons bouchon Arosols et produits rpandus Connement efcace
viss
Protection du circuit Contamination du circuit de vide Un ltre cartouche arrte
de vide ou ou des conduites daspiration par les arosols (diamtre des
conduites des arosols ou le dbordement particules 0,45mm)
daspiration de liquides La ole trop-plein contient
un dsinfectant appropri.
On peut utiliser un otteur
en caoutchouc pour couper
automatiquement la
dpression quand la ole est
pleine
Le systme peut tre
entirement autoclav
EQUIPEMENTS ET RISQUES CARACTRISTIQUES DE SCURIT
INSTRUMENTS
Des germes pathognes peuvent galement tre vhiculs jusqu la bouche si le
doigt avec lequel on ferme la pipette a t contamin. Le pipettage la bouche prsente
un autre danger beaucoup moins connu, savoir linhalation des arosols qui se
forment pendant laspiration. Le cotonnage des pipettes nassure pas une ltration
microbiologique satisfaisante, en pression positive ou ngative, et des particules
peuvent traverser le coton. Si celui-ci est trs serr, on risque daspirer fortement, et
en consquence, daspirer le coton, larosol et mme le liquide. Lutilisation de pipet-
teurs permet donc dviter lingestion de germes pathognes.
Des arosols peuvent galement se former lorsquune goutte de liquide tombe sur
un plan de travail, lorsquon mlange une culture par aspirations et refoulements suc-
cessifs, et lorsquon soufe pour vacuer la dernire goutte de la pipette. On peut viter
linhalation des arosols qui se forment invitablement au cours du pipettage en tra-
vaillant dans une enceinte de scurit biologique.
Les pipetteurs seront choisis avec soin. Ils seront conus et utiliss de manire ne
pas crer de risque supplmentaire dinfection et ils doivent pouvoir tre nettoys et
striliss facilement. Des pipettes dont la pointe est munie dun embout (anti-
arosols) doivent tre utilises pour la manipulation des micro-organismes et des cul-
tures cellulaires.
Les pipettes dont lextrmit daspiration est brche ou fle ne seront pas uti-
lises car elles endommagent le joint tanche des dispositifs de pipettage et compor-
tent donc un risque.
Homogniseurs, agitateurs secoueurs, mlangeurs et gnrateurs dultrasons
Les homogniseurs domestiques (utiliss la cuisine) ne sont pas hermtiques et
librent des arosols. On utilisera exclusivement des homogniseurs conus pour les
laboratoires. Ils sont construits de manire rduire ou empcher la libration darosols.
Les broyeurs, que lon peut utiliser maintenant pour traiter de petits ou de gros volumes
de matriel biologique, peuvent galement entraner la formation darosols.
Lorsque des homogniseurs sont utiliss pour traiter du matriel contenant des
micro-organismes du groupe de risque 3, ils doivent toujours tre chargs et rou-
verts dans une enceinte de scurit biologique.
Les gnrateurs dultrasons peuvent entraner la formation darosols. Ils seront
utiliss dans des enceintes de scurit biologique ou couverts par un cran protecteur
pendant lutilisation. Lcran et lextrieur du gnrateur dultrasons seront dconta-
mins aprs usage.
Anses usage unique
Lavantage des anses usage unique tient ce quelles nont pas besoin dtre passes
la amme et quelles peuvent donc tre utilises dans des enceintes de scurit
biologique o les becs Bunsen et les micro-incinrateurs perturberaient le ux lami-
naire. Ces anses seront mises tremper dans un dsinfectant aprs usage et limines
selon la procdure applicable aux dchets contamins (voir chapitre 3).
11. EQUIPEMENTS DE SCURIT
71
Micro-incinrateurs
Les micro-incinrateurs fonctionnant au gaz ou llectricit comportent une pro-
tection en verre au borosilicate ou en cramique qui rduit les projections et la dis-
persion du matriel infect lorsque les anses sont strilises. Ils peuvent cependant
perturber le ux laminaire et doivent donc tre disposs vers le fond du plan de travail
de lenceinte.
Equipements et vtements de protection individuelle
Les quipements et vtements destins la protection individuelle constituent une
barrire matrielle qui rduit le risque dexposition aux arosols, aux claboussures
ou encore le risque dinoculation accidentelle. Ces quipements ou vtements doivent
tre ports pour travailler au laboratoire. Avant de quitter le laboratoire, il faut les ter
puis se laver les mains. Le tableau 11 dcrit succintement quelques types dquipement
de protection utiliss au laboratoire et les risques contre lesquels ils protgent.
Blouses, sarraus, combinaisons et tabliers de laboratoire
Il est prfrable que les blouses de laboratoire soient entirement boutonnes. Cela
tant, les sarraus ou les combinaisons manches longues boutonnes sur larrire pro-
tgent mieux que les blouses de laboratoire et ont la prfrence dans les laboratoires
de microbiologie ou pour travailler avec une enceinte de scurit biologique. Si nces-
saire, on peut porter un tablier sur la blouse ou le sarrau pour mieux se protger en
cas de renversement de produits chimiques ou de matriel biologique comme le sang
ou les milieux de culture liquides. Ltablissement doit disposer dun service de blan-
chisserie sur place ou proximit.
Les blouses de laboratoires, sarraus, combinaisons ou tabliers ne doivent pas tre
ports hors des locaux du laboratoire.
Lunettes coques, lunettes de scurit et crans faciaux
Le choix dun quipement destin protger les yeux et la face contre les clabous-
sures, les projections ou les chocs dpend de la nature des activits auxquelles se livre
loprateur. Il existe des lunettes de vue ou des lunettes non correctrices en matriau
incassable dont la monture est spcialement conue pour que les verres soient monts
par lavant et qui sont incurves ou dotes dcrans latraux (lunettes de scurit).
Ces lunettes de scurit ne protgent pas trs bien contre les claboussures ou
projections, mme quand elles sont dotes dcrans latraux. Pour se protger
contre les projections et les chocs, il faut porter des lunettes coques, le cas chant
par dessus les lunettes de vue ou les lentilles de contact (lesquelles ne protgent pas
des risques chimiques ou biologiques). Les crans faciaux (visires) sont en plastique
incassable, ils sadaptent sur le visage et sont maintenus au moyen de sangles ou dun
serre-tte.
Les lunettes coques et les lunettes de scurit ne doivent pas tre portes hors des
locaux du laboratoire.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
72
11. EQUIPEMENTS DE SCURIT
73
Appareils respiratoires
Une protection respiratoire peut se rvler ncessaire lorsquon procde des mani-
pulations particulirement dangereuses (par ex. le nettoyage dune surface o du
matriel infectieux a t rpandu). Le choix de tel ou tel appareil dpend de la nature
du danger. Certains de ces appareils sont munis de ltres interchangeables pour la
protection contre les gaz, les vapeurs, les particules et les micro-organismes. Il est
impratif dutiliser un ltre adapt au type dappareil respiratoire utilis. Pour une
protection optimale, il faut veiller bien adapter le masque la face de lutilisateur et
procder un essai. Il existe galement des appareils respiratoires totalement
Tableau 11. Les quipements de protection individuelle
EQUIPEMENT RISQUE VIT CARACTRISTIQUES DE SCURIT
Blouses et sarraus de Contamination des vtements Boutonnage par larrire
laboratoire Couvrent les vtements de ville
Tabliers de plastique Contamination des vtements Etanches leau
Chaussures Chocs et claboussures Bout ferm
Lunettes coques Chocs et claboussures Verres antichocs (doivent tre
correcteurs ou ports par
dessus les lunettes de vue)
Lunettes de scurit Chocs Verres antichocs (doivent tre
correcteurs)
Ecrans latraux
Ecrans faciaux Chocs et claboussures Protgent entirement le visage
Senlvent facilement en cas
daccident
Appareils et masques Inhalation darosols Diffrents modles : jetable
respiratoires usage unique; avec masque
complet ou demi-masque et
cartouche dpuration de
lair; adduction dair ltr
pression positive
intermittente; adduction
dair
Gants Contact direct Jetables, certis de qualit
avec des micro- microbiologique, en PVC,
organismes latex ou polyacrylonitrile
Protection des mains
Coupures A mailles
autonomes aliments en air par un systme intgr; ces dispositifs assurent une pro-
tection totale. Pour choisir lappareil qui convient, il est prudent de sadresser un
spcialiste quali, par exemple un ingnieur hygine et scurit. Les masques chirur-
gicaux nont dautre but que de protger le patient et ne confrent aucune protection
respiratoire ceux qui les portent. Il existe des appareils respiratoires jetables usage
unique (ISO 13.340.30) qui sont conus pour protger contre lexposition aux agents
biologiques.
Les appareils respiratoires ne doivent pas tre ports hors des locaux du
laboratoire.
Gants
Les mains peuvent tre contamines au cours de certaines manipulations. Elles sont
galement exposes aux coupures et aux piqres. Les gants de type chirurgical certi-
s de qualit microbiologique, en latex, PVC ou polyacrylonitrile sont trs utiliss
pour les travaux de laboratoire en gnral, comme pour la manipulation dagents
infectieux ou de sang et de liquides organiques contamins. On fait galement usage
de gants rutilisables, mais il faut veiller les ter correctement et les laver, nettoyer
et dsinfecter scrupuleusement.
Lorsquon a manipul du matriel infectieux, travaill avec une enceinte de scu-
rit biologique ou quon sapprter quitter le laboratoire, il faut ter les gants et se
laver soigneusement les mains. Les gants jetables qui ont t utiliss doivent tre
limins avec les dchets infectieux.
Des cas de ractions allergiques telles que dermatites ou hypersensibilisation imm-
diate ont t observs chez certains personnels de laboratoire ou dautres travailleurs
qui avaient port des gants en latex, notamment des gants poudrs. On devrait
pouvoir disposer dautres gants que des gants poudrs en latex.
Lorsquil y a risque de coupure, comme cela peut tre le cas loccasion dune
autopsie, il faut porter des gants en mailles dacier inoxydable. Il est toutefois noter
que ces gants protgent contre les coupures ou les entailles mais pas contre les piqres.
Les gants ne doivent pas tre ports hors des locaux du laboratoire.
Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 12,
17 et 18.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
74
PARTIE IV
Bonnes techniques
microbiologiques
12. Techniques de laboratoire
77
Lerreur humaine, une mauvaise technique et le mauvais usage des quipements et de
lappareillage sont lorigine de la plupart des lsions et infections attribuables aux
activits exerces dans un laboratoire. On trouvera dans le prsent chapitre un recueil
de techniques destines viter ou rduire au minimum les problmes de cette
nature qui surviennent le plus frquemment.
Rgles de scurit pour la manipulation des chantillons au laboratoire
Si le prlvement, le transport et la rception des chantillons au laboratoire ne sont
pas effectus correctement, il existe un risque dinfection pour le personnel.
Conteneurs chantillons
Les conteneurs chantillons peuvent tre en verre ou de prfrence en matire plas-
tique. Ils doivent tre solides et ne pas fuir lorsque le bouchon ou le capuchon est
plac correctement. Lextrieur du conteneur doit tre propre, sans trace de matriel.
Les conteneurs doivent tre correctement tiquets pour faciliter lidentication. Les
formulaires de demandes dchantillons ou les ches techniques ne doivent pas servir
emballer les conteneurs, mais seront placs dans des enveloppes spares, de
prfrence rsistantes leau.
Transport des chantillons lintrieur de ltablissement
Pour viter quil y ait des fuites ou du matriel rpandu accidentellement, on utili-
sera des conteneurs secondaires, des botes par exemple, munis de portoirs de faon
que le rcipient contenant lchantillon ne se renverse pas. Les conteneurs secondaires
peuvent tre en mtal ou en matire plastique, mais doivent tre autoclavables ou
rsistants aux dsinfectants chimiques et le couvercle doit de prfrence tre muni
dun joint dtanchit. Ils seront rgulirement dcontamins.
Rception des chantillons
Les laboratoires qui reoivent un grand nombre dchantillons devront rserver une
pice ou une zone particulire cet effet.
Ouverture des colis
Le personnel qui reoit et dfait lemballage des chantillons doit connatre les risques
quil court et on doit lui avoir appris respecter les prcautions dusage (2),
notamment en prsence dun conteneur bris ou qui fuit. Les conteneurs primaires
doivent tre ouverts dans une enceinte de scurit biologique. Le personnel doit avoir
des dsinfectants sa disposition.
Utilisation des pipettes et des dispositifs de pipettage
1. On utilisera toujours un dispositif de pipettage (pipetteur, propipette). Le pipet-
tage la bouche doit tre interdit.
2. Toutes les pipettes doivent tre cotonnes pour rduire la contamination du
dispositif.
3. Ne jamais soufer dans une pipette place dans un liquide contenant des agents
infectieux.
4. Les matriels infectieux ne seront jamais mlangs par aspirations et refoulements
successifs.
5. Ne pas soufer dans les pipettes pour en chasser le liquide.
6. Les pipettes deux traits sont prfrables aux autres, puisquon nest pas oblig de
soufer pour les vider.
7. Les pipettes contamines seront compltement immerges dans un dsinfectant
appropri plac dans un rcipient incassable. On les laissera tremper sufsamment
longtemps avant de les liminer.
8. Un rcipient pour les pipettes usages sera plac lintrieur de lenceinte de scu-
rit biologique (et non lextrieur).
9. On ne doit pas utiliser de seringue munie dune aiguille hypodermique pour pipetter.
10. Il existe des dispositifs qui permettent douvrir les acons capsuls au moyen dune
pipette, ce qui vite lutilisation des aiguilles hypodermiques et des seringues.
11. Pour viter la dispersion du matriel infectieux qui tomberait accidentellement de
la pipette, on placera sur le plan de travail un matriau absorbant qui sera ensuite
limin selon la procdure applicable aux dchets infectieux.
Comment viter la dissmination de matriel infectieux
1. Pour viter que les anses de transfert ne rpandent prmaturment leur contenu, il
faut que lanneau ait un diamtre de 2 3 mm et quil soit entirement ferm. Le
manche ne doit pas dpasser 6cm de long pour rduire le plus possible les vibrations.
2. On vitera le risque de projections de matriel infectieux par la amme nue dun
bec Bunsen en utilisant un micro-incinrateur pour striliser les anses de
transfert. Toutefois, il est prfrable dutiliser des anses usage unique qui nont
pas besoin dtre restrilises.
3. En schant les chantillons dexpectorations, on sefforcera dviter la formation
darosols.
4. Les chantillons et les cultures destins tre autoclavs ou limins seront placs
dans des conteneurs tanches, par exemple des sacs poubelle de laboratoire. Il faut
en fermer lextrmit avec du ruban adhsif autoclavable avant de les jeter dans
les poubelles.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
78
5. Les zones de travail doivent tre dcontamines avec un dsinfectant appropri
la n de chaque priode de travail.
Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter la rfrence (12).
Utilisation des enceintes de scurit biologique
1. Lutilisation et les contraintes des enceintes de scurit biologique seront
expliques tous les utilisateurs potentiels (voir chapitre 10), en se rfrant
aux normes nationales et la documentation approprie. Des protocoles
crits, des manuels dhygine et scurit ou des manuels dutilisation seront
remis au personnel. Il doit tre clairement expliqu, en particulier, que lenceinte
ne protge pas loprateur contre les claboussures, la casse ou les erreurs de
manipulation.
2. Lenceinte ne doit pas tre utilise si elle ne fonctionne pas correctement.
3. Le panneau dobservation vitr ne doit pas tre ouvert lorsque lenceinte est en
fonctionnement.
4. Pour travailler, on conservera dans lenceinte le moins possible dappareils et de
matriel. Il ne faut pas bloquer la circulation de lair dans le volume ou la gaine
arrire de lenceinte.
5. Il ne faut pas utiliser de becs Bunsen dans lenceinte. En effet, la chaleur dgage
dvierait le ux laminaire et pourrait endommager les ltres. On peut se servir
dun micro-incinrateur mais les anses jetables striles sont prfrables.
6. La totalit des oprations seront ralises au centre ou dans la partie arrire du
plan de travail et devront tre visibles par le panneau dobservation.
7. Il faut viter quil y trop de passages derrire loprateur.
8. Loprateur ne doit pas perturber le ux laminaire en passant les bras dans len-
ceinte ou en les retirant plusieurs reprises.
9. Il ne faut pas bloquer les grilles en entassant des notes, des pipettes ou dautres
objets car cela a pour effet de perturber la circulation de lair et risque dexposer
loprateur et le matriel une contamination.
10. Une fois la manipulation acheve et la n de la journe de travail, il faut dsin-
fecter la surface de lenceinte avec un produit appropri.
11. Le ventilateur de lenceinte doit continuer fonctionner au moins 5 minutes aprs
la n de la manipulation.
12. Il ne faut jamais introduire de paperasse dans une enceinte de scurit biologique.
Des informations complmentaires sur les enceintes de scurit biologique sont
donnes au chapitre 10.
Comment viter lingestion de matriel infectieux
et le contact avec la peau et les yeux
1. Les particules et les gouttelettes de grande taille (>5mm) formes pendant les
manipulations de microbiologie se dposent rapidement sur la paillasse et les
12. TECHNIQUES DE LABORATOIRE
79
mains de loprateur, aussi celui-ci doit-il porter des gants jetables et viter de
porter ses mains son visage, sa bouche et ses yeux.
2. Il ne faut pas consommer ou conserver de la nourriture ou des boissons dans le
laboratoire.
3. Il ne faut pas mettre dans sa bouche des objets tels que crayons ou stylos ni mcher
du chewing-gum lorsquon se trouve dans le laboratoire.
4. Il ne faut pas se maquiller dans le laboratoire.
5. Il convient dutiliser un dispositif pour se protger le visage, la bouche et les yeux
(cran facial ou autre) pendant toute opration risquant de donner lieu des pro-
jections de matriel infectieux.
Comment viter linoculation accidentelle de matriel infectieux
1. Si lon effectue les diffrentes manipulations et oprations avec le soin voulu, on
peut viter de sinoculer accidentellement du matriel infectieux avec des dbris
de verre. De toute faon, il est prfrable de remplacer le verre par du plastique
lorsque cela est possible.
2. Un accident avec des aiguilles ou seringues hypodermiques, des pipettes Pasteur
en verre ou du verre bris peut entraner linoculation de matriel infectieux.
3. Les piqres daiguille peuvent tre vites : a) en limitant au minimum ncessaire
lutilisation des seringues et des aiguilles (il existe des dispositifs simples qui per-
mettent douvrir les acons capsuls et dutiliser alors une pipette plutt quune
seringue); b) en utilisant des dispositifs spciaux de protection lorsque lemploi
dune seringue est ncessaire.
4. Il ne faut jamais remettre lembout sur laiguille. Le matriel usage unique doit tre
jet dans des conteneurs spciaux imperforables (anti-piques) munis dun couvercle.
5. On remplacera les pipettes Pasteur en verre par leur quivalent en matire plastique.
Sparation du srum
1. Cette opration ne sera effectue que par un personnel spcialement form.
2. Il faut porter des gants ainsi quun dispositif pour protger les yeux et les
muqueuses.
3. Les projections et les arosols ne peuvent tre vits ou rduits qu au moyen dune
bonne technique. Le sang et le srum seront pipetts avec soin et non verss dun
rcipient dans lautre. Le pipettage la bouche est interdit.
4. Aprs usage, les pipettes seront plonges compltement dans un bain dsinfectant
appropri. Il faut les laisser tremper pendant une dure sufsante avant limina-
tion ou lavage et strilisation en vue de leur rutilisation.
5. Les tubes chantillons contenant des caillots de sang ou autre et destins tre
limins seront rebouchs avec leur capuchon et placs dans un rcipient tanche
appropri dans lequel ils seront autoclavs et incinrs.
6. Il faut disposer de dsinfectants appropris pour nettoyer les claboussures ou les
liquides rpandus (voir chapitre 14).
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
80
Utilisation des centrifugeuses
1. Le bon fonctionnement mcanique des centrifugeuses de laboratoire est un
lment indispensable de la scurit microbiologique.
2. La centrifugeuse doit tre utilise conformment aux instructions du fabricant.
3. La centrifugeuse sera place une hauteur telle que loprateur puisse voir lin-
trieur de la cuve pour disposer correctement les godets (ou les pots ou nacelles
selon le cas) sur les tourillons.
4. Les tubes centrifuger ainsi que les rcipients contenant les chantillons devront
tre en verre pais ou de prfrence en matire plastique et ils devront tre inspec-
ts avant usage la recherche de dfauts ventuels.
5. Il faut que les tubes centrifuger ou les rcipients contenant les chantillons soient
bien ferms (si possible avec un bouchon viss).
6. Les godets doivent tre remplis, quilibrs, ferms et ouverts dans une enceinte de
scurit biologique.
7. Les pots (godets ou nacelles, etc.) xs sur les tourillons seront apparis daprs
leur poids et correctement quilibrs une fois les tubes en place.
8. Le volume laisser libre entre la surface du liquide et le bord du tube centrifuger
doit tre indiqu dans les instructions du fabricant.
9. Pour lquilibrage des pots vides, on utilisera de leau distille ou de lalcool
(propanol 70 %). Les soluts salins ou les solutions dhypochlorite sont viter
car ils corrodent les mtaux.
10. Des pots centrifuger fermant hermtiquement (pots de scurit) doivent tre
utiliss pour les micro-organismes appartenant aux groupes de risque 3 et 4.
11. Si lon utilise des rotors angulaires, il faut veiller ce que les tubes ne soient pas
trop remplis pour viter le risque de fuite.
12. Lintrieur de la cuve de la centrifugeuse sera inspect tous les jours la recherche
de taches ou de souillures au niveau du rotor. En prsence de salissures manifestes,
les protocoles de centrifugation seront rexamins.
13. Les godets (pots ou nacelles) ainsi que le rotor seront inspects chaque jour la
recherche de signes de corrosion ou de ssures, si nes soient-elles.
14. Les godets (pots ou nacelles), le rotor et la cuve de la centrifugeuse seront dcon-
tamins aprs chaque usage.
15. Aprs utilisation, les pots seront retourns et conservs ainsi pour que le liquide
dquilibrage puisse scher.
16. Des particules infectieuses aroportes sont parfois jectes la centrifugation. Ces
particules se dplacent une vitesse trop leve pour pouvoir tre captes par le
courant dair si la centrifugeuse est place dans une enceinte de scurit biologique
traditionnelle de classe I ou II ouverture frontale. En plaant la centrifugeuse
dans une enceinte de classe III, on vite la trop grande dispersion des arosols mis
par lappareil. Toutefois, une bonne technique de centrifugation et lutilisation de
tubes soigneusement ferms offrent une protection satisfaisante contre les arosols
infectieux et les particules en suspension.
12. TECHNIQUES DE LABORATOIRE
81
Utilisation des homogniseurs, des agitateurs secoueurs,
des mlangeurs et des gnrateurs dultrasons
1. Les homogniseurs domestiques (utiliss la cuisine) ne seront pas utiliss au
laboratoire car ils peuvent fuir ou donner lieu la formation darosols. Les
homogniseurs, mlangeurs et broyeurs de laboratoire prsentent moins de
danger.
2. Les couvercles, bols, oles ou acons doivent tre en bon tat, sans dfaut ni dfor-
mation. Le couvercle doit tre parfaitement adapt et le joint en bon tat.
3. Lorsque les homogniseurs, agitateurs ou gnrateurs dultrasons sont en
marche, la pression monte lintrieur du bol. Des arosols contenant des germes
infectieux risquent alors de schapper par linterstice entre le couvercle et le rci-
pient. Les bols en plastique et particulirement en polyttrauorthylne (PTFE)
sont recommands car le verre peut se briser, librant le matriel infectieux et
risquant de blesser loprateur.
4. Pendant lutilisation, ces appareils doivent tre couverts dun botier transparent
robuste en matire plastique qui sera dsinfect aprs usage. Si possible, on fera
fonctionner lappareil recouvert de son botier en plastique lintrieur dune
enceinte de scurit biologique.
5. Lopration termine, le conteneur sera ouvert dans une enceinte de scurit
biologique.
6. Une protection auditive doit tre fournie au personnel qui utilise des gnrateurs
dultrasons.
Utilisation des broyeurs de tissus
1. Les broyeurs en verre seront envelopps dans un tampon de matriau absorbant
et tenus par un oprateur gant. Les broyeurs en matire plastique (PTFE) sont
plus srs.
2. Les broyeurs de tissus seront utiliss et ouverts dans une enceinte de scurit
biologique.
Entretien et utilisation des rfrigrateurs et conglateurs
1. Les rfrigrateurs, les conglateurs et les enceintes dioxyde de carbone solide
(carboglace) seront dgivrs et nettoys priodiquement et les ampoules, les tubes,
etc. casss pendant la conservation, retirs. On portera une protection faciale et
des gants en caoutchouc rsistants pour effectuer ce travail. Aprs nettoyage, les
surfaces intrieures de lenceinte seront dsinfectes.
2. Tous les rcipients conservs dans les rfrigrateurs, etc. doivent tre clairement
tiquets, en indiquant le nom scientique du contenu, la date de stockage et le
nom de la personne qui les a stocks. Le matriel ancien ou sans tiquette sera
autoclav et limin.
3. Il faut tenir un inventaire du contenu des conglateurs.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
82
4. Les solutions inammables ne doivent pas tre conserves dans un rfrigrateur
qui nest pas antidagrant. Une tiquette de mise en garde sera appose cet effet
sur la porte des rfrigrateurs.
Ouverture des ampoules contenant du matriel infectieux lyophilis
On devra prendre des prcautions lorsquon ouvre des ampoules de matriel lyophilis
car lentre brutale de lair, alors que lintrieur de lampoule peut se trouver une
pression infrieure, risque de disperser une partie de son contenu dans latmosphre.
Les ampoules doivent toujours tre ouvertes dans une enceinte de scurit biologique.
Il est recommand de procder comme suit :
1. Dcontaminer tout dabord lextrieur de lampoule.
2. Faire un trait de lime sur le tube peu prs au milieu du tampon de coton ou de
cellulose, le cas chant.
3. Envelopper lampoule avec de louate imbibe dalcool pour se protger les mains
avant de la briser au niveau du trait de lime.
4. Retirer dlicatement la partie suprieure et traiter comme du matriel contamin.
5. Si le tampon de coton est encore en place au-dessus du contenu de lampoule, le
retirer avec des pinces striles.
6. Mettre le lyophilisat en suspension en versant lentement le liquide destin cet
effet de manire viter la formation de mousse.
Stockage des ampoules contenant du matriel infectieux
Les ampoules contenant du matriel infectieux ne doivent jamais tre immerges dans
de lazote liquide, les ampoules mal scelles ou ssures risquant de se briser ou dex-
ploser la sortie. Sil est ncessaire datteindre des tempratures trs basses, les
ampoules ne seront conserves que dans la phase gazeuse, au-dessus de lazote liquide.
On peut aussi stocker le matriel infectieux dans des cryostats ou sur carboglace. Le
personnel charg de retirer les ampoules cryoconserves doit se protger les yeux et
les mains.
La surface extrieure des ampoules cryoconserves sera dsinfecte lorsquelles
seront retires aprs stockage.
Prcautions dusage pour manipuler du sang et autres liquides biologiques, des
tissus et des excreta
Les prcautions dusage indiques ci-dessous (qui incluent les prcautions
universelles (19)) sont destines rduire le risque de transmission de micro-
organismes dont lorigine est connue ou inconnue (2).
Rcolte, tiquetage et transport dchantillons
1. Il faut observer ces prcautions dusage dans tous les cas et porter des gants quelle
que soit la manipulation.
12. TECHNIQUES DE LABORATOIRE
83
2. Le prlvement de sang sur des malades ou des animaux doit tre effectu par du
personnel expriment.
3. Pour les ponctions veineuses, on remplacera la seringue classique par un dispositif
de scurit usage unique (tube prlvement sous vide) qui permet de prlever
le sang directement dans un tube de transport ou de culture ferm qui met ensuite
laiguille automatiquement hors dusage (par obturation ou rtraction).
4. Les tubes devront tre placs dans des conteneurs appropris pour tre transports
jusquau laboratoire (voir le chapitre 15 pour les conditions observer durant le
transport) ou dans les locaux mmes (se reporter la section du prsent chapitre
consacre au transport des chantillons lintrieur de ltablissement). Les for-
mulaires de demande devront tre placs dans des sacs ou des enveloppes spars
rsistants leau.
5. Le personnel qui rceptionne les chantillons ne doit pas ouvrir ces sacs.
Ouverture des tubes chantillon et chantillonnage
1. Les tubes chantillon seront ouverts dans une enceinte de scurit biologique.
2. Le port de gants est obligatoire. Il est galement recommand de se protger les
yeux et les muqueuses (au moyen de lunettes coque ou dun cran facial).
3. Les vtements protecteurs seront complts par un tablier en plastique.
4. Pour viter claboussures ou projections, le bouchon sera saisi avec une feuille de
papier ou un morceau de gaze.
Verre et objets tranchants ou pointus
1. Dans la mesure du possible, le verre sera remplac par du plastique. Seul le verre
de qualit laboratoire (au borosilicate) devra tre utilis et le matriel brch
ou fl sera jet.
2. Il ne faut pas utiliser des aiguilles hypodermiques en guise de pipettes (voir gale-
ment, dans le prsent chapitre, la section intitule: Comment viter linoculation
accidentelle de matriel infectieux).
Frottis/gouttes paisses
La xation et la coloration des chantillons de sang, dexpectorations et de selles aux
ns dexamen microscopique ne tuent pas obligatoirement tous les micro-organismes
ou les virus quils contiennent. Il faut donc manipuler les frottis et les gouttes paisses
avec des pinces, les conserver de manire approprie et les dcontaminer ou les auto-
claver avant limination.
Appareils automatiques (gnrateurs dultrasons, agitateurs vortex)
1. Il faut utiliser des appareils conns pour viter la dissmination de gouttelettes
ou darosols.
2. Les efuents seront recueillis dans des rcipients ferms pour autoclavage ultrieur
et limination.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
84
3. Lappareillage doit tre dsinfect lissue de chaque sance de travail, en suivant
les instructions du fabricant.
Tissus
1. Il faut utiliser des xateurs formols.
2. Les coupes la conglation doivent tre vites. Si ncessaire, on protgera le cryo-
stat au moyen dun cran et loprateur devra porter un cran facial. Pour la
dcontamination, on remontera la temprature de lappareil 20 C.
Dcontamination
Les hypochlorites et les dsinfectants puissants sont recommands pour la dconta-
mination. Une solution dhypochlorite frachement prpare doit contenir 1g/litre de
chlore actif lorsquelle est destine lusage gnral et 5g/litre si elle est utilise pour
nettoyer du sang rpandu. Le glutaraldhyde peut tre utilis pour dcontaminer les
surfaces (voir chapitre 14).
Prcautions prendre avec du matriel pouvant contenir des prions
Les prions (galement dsigns sous le nom de virus lents ) sont associs aux
encphalopathies spongiformes transmissibles (EST), en particulier la maladie de
Creutzfeldt-Jakob (MCJ ; y compris la nouvelle variante), la maladie de Gertsmann-
Strussler-Scheinker, linsomnie fatale familiale et au kuru chez lhomme, la trem-
blante chez les ovins et les caprins, lencphalopathie spongiforme bovine (ESB) chez
les bovins et dautres encphalopathies transmissibles des cervids, de llan et du
vison. Si lon connat des cas de transmission lhomme de la maladie de Creutzfeldt-
Jakob, il semble quil ny ait pas de cas prouv dinfection acquise au laboratoire. La
prudence impose nanmoins dobserver certaines prcautions lors de la manipulation
de matriel biologique provenant de sujets humains ou danimaux potentiellement
infects.
Lorsquon envisage des travaux sur du matriel biologique susceptible de contenir
un agent associ des EST, le choix du niveau de scurit biologique va dpendre de
la nature de lagent et des chantillons tudier et il doit se faire en consultation avec
les autorits nationales comptentes. Cest dans les tissus du systme nerveux central
que lon trouve les concentrations les plus leves de prions. Les tudes effectues sur
lanimal indiquent toutefois quil est probable que de fortes concentrations de prions
soient galement prsentes dans la rate, le thymus, les ganglions lymphatiques et les
poumons. Selon des travaux rcents, des prions prsents dans les muscles squelet-
tiques et dans les tissus musculaires de la langue pourraient galement constituer un
risque de contamination (2023).
Comme il est difcile dinactiver compltement les prions, il convient dinsister sur
la ncessiter dutiliser autant que possible des instruments jetables et de prvoir un
dispositif de protection galement jetable pour couvrir le plan de travail de lenceinte
de scurit biologique.
12. TECHNIQUES DE LABORATOIRE
85
La principale prcaution observer par loprateur consiste viter lingestion de
matriel contamin ainsi que toute piqre cutane. Ces agents ntant pas dtruits par
les procds habituels de dsinfection et de strilisation utiliss au laboratoire, il con-
vient de prendre les prcautions complmentaires suivantes:
1. Il est vivement recommand dutiliser des quipements spcialement ddis
ces travaux, cest--dire qui ne sont pas partags avec les autres laboratoires de
ltablissement.
2. Le port de vtements protecteurs (sarraus et tabliers) et de gants (gants dautop-
sie complts par des gants en mailles dacier) est obligatoire.
3. Il est vivement recommand dutiliser du matriel jetable en matire plastique, qui
puisse tre trait et limin comme dchets secs.
4. Les appareils automatiques de traitement des tissus ne seront pas utiliss en raison
des difcults de dsinfection. On utilisera la place des bocaux et des bchers.
5. Toutes les manipulations seront effectues dans une enceinte de scurit
biologique.
6. On veillera scrupuleusement viter la formation darosols ainsi que les coupures
et les piqres cutanes.
7. Les tissus xs au formol seront considrs comme encore infectieux, mme aprs
xation prolonge.
8. Les chantillons histologiques contenant des prions sont largement inactivs par
un traitement de 1h lacide formique 96 % (24), (25).
9. Les dchets rsultant de la manipulation y compris les gants, les sarraus et les
tabliers jetables devront tre autoclavs dans un strilisateur vapeur pour charge
poreuse, la temprature de 134137 C, soit pendant un seul cycle de 18 minutes,
soit pendant six cycles successifs de 3 minutes chacun, puis incinrs.
10. Les instruments et le matriel non jetable, comme les gants mailles dacier par
exemple, doivent tre rassembls pour tre dcontamins.
11. Les dchets liquides infectieux contamins par des prions doivent tre traits
pendant 1 heure par une solution dhypochlorite de sodium contenant 20g/litre
de chlore actif (2 %) (concentration nale).
12. Les techniques bases sur la vaporisation de paraformaldhyde ne font pas baisser
le titre des prions et ces derniers sont galement rsistants au rayonnement ultra-
violet. Il faut nanmoins continuer dcontaminer les enceintes en utilisant les
mthodes traditionnelles (par ex. fumigation au formaldhyde) pour inactiver les
autres agents pathognes qui seraient prsents.
13. Les enceintes de scurit biologique et autres surfaces contamines par des prions
peuvent tre dcontamines en leur appliquant pendant 1 heure une solution
dhypochlorite de sodium 20g/litre de chlore actif (2 %).
14. Les ltres particules de haute efcacit (ltres HEPA) doivent tre incinrs
une temprature minimum de 1000 C une fois retirs. Avant dincinrer le ltre,
il est recommand de procder comme suit:
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
86
a. vaporiser une laque capillaire sur la face expose du ltre avant de lter;
b. ensacher le ltre pour lenlever;
c. retirer le ltre du volume du travail en veillant ce que la chambre de distri-
bution et les gaines inaccessibles ne soient pas contamines.
15. Les instruments doivent tre immergs pendant une heure dans une solution
dhypochlorite de sodium 20g/litre de chlore actif (2 %), puis bien rincs leau
avant lautoclavage.
16. Les instruments qui ne peuvent pas tre autoclavs peuvent tre nettoys en les
trempant plusieurs reprises pendant 1 heure dans une solution dhypochlorite
de sodium 20g/litre de chlore actif (2 %). Un rinage soigneux est ensuite nces-
saire pour liminer les rsidus dhypochlorite.
Pour de plus amples informations sur la conduite tenir avec les agents non conven-
tionnels, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 12, 26 et 27.
12. TECHNIQUES DE LABORATOIRE
87
88
13. Plans durgence et conduite
tenir en cas durgence
Tous les laboratoires qui travaillent sur des micro-organismes infectieux doivent
instituer les mesures de scurit quexigent les risques prsents par les germes et les
animaux manipuls.
Chaque fois quun tablissement manipule ou conserve des micro-organismes des
groupes de risque 3 ou 4 (laboratoire de base scurit biologique niveau 2, labora-
toire de connement scurit biologique niveau 3 et laboratoire de connement
haute scurit scurit biologique niveau 4), il est indispensable dtablir par crit
un plan durgence pour faire face au accidents qui pourraient se produire dans le
laboratoire ou lanimalerie. Les autorits sanitaires nationales ou locales doivent tre
associes llaboration de ce plan de prparation aux situations durgence.
Plan durgence
Le plan doit prvoir la conduite tenir dans diffrentes situations :
1. Mesures de scurit en cas de catastrophe, naturelle ou autre : incendie, inonda-
tion, sisme ou explosion par exemple.
2. Evaluation du risque biologique.
3. Mesures prendre dexposition accidentelle et dcontamination.
4. Evacuation durgence du personnel et des animaux.
5. Traitement mdical durgence des personnes exposes et des blesss.
6. Surveillance mdicale des personnes exposes.
7. Prise en charge clinique des personnes exposes.
8. Enqute pidmiologique.
9. Suivi de la situation aprs laccident.
Lors de llaboration de ce plan, il faudra envisager dinclure les points suivants :
1. Identication des micro-organismes haut risque.
2. Localisation des zones haut risque telles que laboratoires, aires de stockage,
animaleries.
3. Idencation du personnel et des populations risque.
4. Identication des responsables et de leurs responsabilits : dlgu la scurit
biologique, quipe de scurit, autorits sanitaires locales, cliniciens, microbiolo-
gistes, vtrinaires, pidmiologistes, pompiers et police.
5. Liste des moyens disponibles pour assurer le traitement et lisolement des per-
sonnes exposes ou contamines.
6. Transport des personnes exposes ou contamines.
7. Liste des sources dimmunsrums, de vaccins, de mdicaments, de matriel et de
fournitures spcialiss.
8. Approvisionnement en quipements et matriel de secours, par exemple vte-
ments protecteurs, dsinfectants, matriel et fournitures pour la dcontamination.
Conduite tenir en cas durgence dans un laboratoire de microbiologie
Accidents par inoculation, coupure et rosion
La personne accidente doit enlever ses vtements de protection, laver ses mains ainsi
que la ou les zone(s) atteinte(s), appliquer un dsinfectant cutan appropri et si
ncessaire consulter un mdecin. Un rapport indiquant la cause de la lsion et la
nature du micro-organisme en cause sera adress qui de droit et un dossier mdical
complet sera tabli de manire approprie.
Accidents par ingestion de matriel potentiellement infectieux
Il faut ter ses vtements protecteurs et consulter un mdecin. Un rapport indiquant
la nature du matriel ingr et les circonstances de laccident sera adress qui de
droit et un dossier mdical complet sera tabli de manire approprie.
Formation darosols potentiellement dangereux (hors dune enceinte de scurit)
Tout le personnel devra immdiatement vacuer la zone touche et toute personne
expose devra tre adresse un mdecin. Le chef de laboratoire et le dlgu la scu-
rit biologique seront immdiatement informs de lincident. Personne ne doit entrer
dans la pice pendant une dure sufsante (par ex. 1h) pour permettre lvacuation de
larosol et le dpt des particules lourdes. Si le laboratoire nest pas dot dun systme
central de ventilation, la rintgration des locaux sera retarde (par ex. de 24h).
Des panneaux doivent tre apposs pour indiquer que lentre est interdite. Au bout
dune priode de temps approprie, on procdera la dcontamination sous la sur-
veillance du dlgu la scurit biologique. Cette opration doit se faire en portant
des vtements protecteurs et une protection respiratoire appropris.
Rcipients casss et substances infectieuses rpandues
Les rcipients casss contamins par des substances infectieuses et les substances infec-
tieuses rpandues accidentellement devront tre recouverts dun linge ou de papier
absorbant sur lesquels on versera un dsinfectant quon laissera reposer pendant une
dure approprie. Le linge ou le papier absorbant et le matriel cass pourront ensuite
tre enlevs; les morceaux de verre seront manipuls avec une pince. On passera
ensuite une serpillire imprgne de dsinfectant sur la zone contamine. Si lon utilise
une pelle pour ramasser les morceaux de verre, il faudra la passer lautoclave ou la
tremper dans un bain dsinfectant efcace. Les linges, le papier et les serpillires uti-
lises pour le nettoyage devront tre jets dans une poubelle pour dchets contamins.
Toutes ces oprations doivent tre effectues avec des gants.
13. PLANS D URGENCE ET CONDUITE TENIR EN CAS D URGENCE
89
Si des documents, formulaires ou autres imprims ou notes sont contamins, ils
seront recopis et les originaux jets dans une poubelle pour dchets contamins.
Bris de tubes contenant du matriel potentiellement infectieux dans les
centrifugeuses dpourvues de pots tanches
Si les tubes sont casss ou prsums casss pendant que la centrifugeuse tourne, arrter
le moteur et attendre 30 minutes avant douvrir pour laisser reposer les suspensions.
Si laccident est dcouvert aprs louverture de la centrifugeuse, refermer immdiate-
ment le capot et attendre encore une trentaine de minutes. Dans les deux cas, il faut
prvenir le dlgu la scurit biologique.
Des gants rsistants (par ex. en caoutchouc pais) couverts si ncessaires avec des
gants usage unique, doivent tre ports pendant la totalit des oprations suivantes.
Pour retirer les dbris de verre, on utilisera des pinces, ventuellement garnies de
coton.
Les tubes casss, les morceaux de verre, les pots ou nacelles centrifuger, les touril-
lons et le rotor seront placs dans un bain dsinfectant non corrosif dont lefcacit
contre les germes concerns est connue (voir chapitre 14). Les tubes intacts et bouchs
peuvent tre placs dans un autre rcipient contenant un dsinfectant et rcuprs
ultrieurement.
La cuve de la centrifugeuse sera nettoye avec le mme dsinfectant, convenable-
ment dilu, aprs quoi on la nettoiera une seconde fois, on la rincera leau et on
la schera. Tout le matriel utilis pour le nettoyage sera considr comme dchets
contamins.
Bris de tubes lintrieur de pots ou de nacelles centrifuger tanches (de scurit)
Tous les pots ou nacelles tanches doivent chargs et dchargs dans une enceinte
de scurit biologique. En cas de bris prsum dans un pot hermtique, il faudra
desserrer de bouchon de scurit et passer le pot ou la nacelle lautoclave. On peut
aussi dsinfecter le pot ou la nacelle de scurit au moyen dun dsinfectant
chimique.
Incendies et catastrophes naturelles
Les services de secours, pompiers notamment, doivent participer llaboration des
plans de prparation aux situations durgence. Ils doivent connatre lavance les
pices o se trouve du matriel potentiellement infectieux. Il y avantage ce que le
personnel de ces services visite le laboratoire pour prendre connaissance de son
agencement et de son contenu.
Aprs une catastrophe naturelle, les services de secours locaux ou nationaux
doivent tre informs des dangers potentiels qui existent lintrieur ou au voisinage
des btiments. Ils ne pourront y pntrer quaccompagns dun membre expriment
du personnel. Le matriel infectieux devra tre recueilli dans des conteneurs tanches
ou des sacs jetables en matriau rsistant. Il appartient lquipe de scurit de
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
90
dterminer en fonction de la rglementation locale ce qui peut tre rcupr et ce qui
doit tre jet.
Services de secours : qui sadresser ?
Les numros de tlphone et adresses suivantes seront placs bien en vidence dans
les locaux de ltablissement :
1. Nom, adresse et plan daccs de ltablissement ou du laboratoire (pas ncessaire-
ment connus par la personne qui appelle ou le service appel).
2. Directeur de ltablissement ou du laboratoire.
3. Chef de laboratoire.
4. Dlgu la scurit biologique.
5. Service incendie/pompiers
6. Hpitaux, ambulances, personnel mdical (nom des divers centres de soins, cli-
niques, services ou du personnel mdical, si possible).
7. Police.
8. Mdecin.
9. Technicien responsable.
10. Services des eaux, du gaz et de llectricit.
Equipement et matriel de secours
Les quipements de secours suivants doivent tre disponibles :
1. Trousse de premiers secours, comportant des antidotes universels et spciques.
2. Extincteurs appropris et couvertures anti-feu.
La liste complmentaire ci-aprs, donne titre indicatif, pourra tre adapte la
situation locale :
1. Vtements de protection totale (combinaisons, gants et cagoules pour les acci-
dents impliquant des micro-organismes appartenant aux groupes 3 et 4).
2. Masques respiratoires complets avec cartouche ltrante contre les produits
chimiques et les particules.
3. Matriel pour la dsinfection des salles, pulvrisateurs et vaporisateurs de
formaldhyde, par exemple.
4. Civire.
5. Outils, marteaux, haches, cls, tournevis, chelles, cordages par exemple.
6. Matriel de signalisation et de balisage.
Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de se reporter aux rfrences 12
et 28.
13. PLANS D URGENCE ET CONDUITE TENIR EN CAS D URGENCE
91
92
14. Dsinfection et strilisation
La connaissance des principes de base de la dsinfection et de la strilisation est
dune importance cruciale pour la scurit biologique au laboratoire. Comme des
objets trs souills ne peuvent pas tre dsinfects et striliss rapidement, il est
tout aussi important de connatre les lments de base du nettoyage pralable la
dsinfection (prnettoyage). Sous ce rapport, les principes gnraux exposs dans le
prsent chapitre sont applicables toutes les catgories de germes pathognes connus.
Cest la nature du travail exprimental et des agents pathognes manipuls qui dter-
mine les besoins particuliers en matire de dcontamination. Les indications gnrales
qui sont donnes dans la suite de ce chapitre peuvent servir mettre au point des
faons de procder normalises ou plus spciques face aux dangers de nature
biologique qui existent dans un laboratoire donn.
Le temps de contact ncessaire avec un dsinfectant donn est propre chaque sub-
stance et chaque fabricant. Cest pourquoi toutes les recommandations relatives
lutilisation des dsinfectants doivent tre conformes aux spcications indiques par
le fabricant.
Dnitions
Dans le domaine de la dsinfection et de la strilisation on a recours une termi-
nologie trs varie. Les termes suivants sont parmi les plus couramment employs en
scurit biologique :
Anti-infectieux : Agent qui tue les micro-organismes ou en inhibe la croissance et la
multiplication.
Antimicrobien : Terme souvent employ comme synonyme d anti-infectieux .
Antiseptique : Substance qui inhibe la croissance et le dveloppement des micro-
organismes sans ncessairement les tuer. On applique en gnral les antiseptiques
sur le revtement cutan.
Biocide : Terme gnral qui dsigne tout agent capable de tuer des micro-organismes.
Dcontamination : Tout processus destin liminer ou tuer des micro-organismes.
Ce terme dsigne galement llimination ou la neutralisation de produits chi-
miques ou radioactifs dangereux.
Dsinfectant : Substance chimique ou mlange de substances chimiques utiliss pour
tuer des micro-organismes, mais pas ncessairement les spores. Les dsinfectants
sont gnralement appliqus sur des surfaces ou objets inanims.
Dsinfection : Destruction, par des moyens physiques ou chimiques, de germes mais
pas ncessairement de leurs spores.
Germicide chimique : Substance chimique ou mlange de substances utiliss pour
tuer les micro-organismes.
Microbicide : Substance chimique ou mlange de substances chimiques destins tuer
les micro-organismes. Ce terme est souvent utilis la place de biocide , ger-
micide ou anti-infectieux , dont il est synonyme.
Sporocide : Substance chimique ou mlange de substances chimiques destins tuer
les micro-organismes et leurs spores.
Strilisation : Processus par lequel on tue ou limine les micro-organismes et les
spores de toute nature.
Nettoyage du matriel de laboratoire
Le nettoyage consiste enlever les souillures, les matires organiques et les taches. On
peut procder par brossage, aspiration, dpoussirage sec, lavage leau ou avec une
ponge humide imprgne deau savonneuse ou additionne dun dtergent. La
crasse, les excrments et les matires organiques peuvent abriter des micro-organismes
et gner laction microbicide des dcontaminants (antiseptiques, germicides chi-
miques ou dsinfectants).
Un nettoyage pralable est ncessaire pour assurer une bonne dsinfection ou une
bonne strilisation. Beaucoup de produits germicides ne sont actifs qu la condition
dtre appliqus des objets prlablement nettoys. Ce prnettoyage doit tre effec-
tu avec prcaution pour viter de sexposer aux agents infectieux.
Il faut quil y ait compatibilit chimique entre le matriel utilis et les germicides
qui seront utiliss ultrieurement pour le dsinfecter. Il est assez courant dutiliser le
mme germicide chimique pour le nettoyage pralable et la dsinfection.
Germicides chimiques
De nombreuses substances chimiques peuvent tre utilises comme dsinfectants ou
antiseptiques. Chaque prparation doit toutefois tre choisie avec soin en fonction des
besoins spciques du laboratoire, parmi des produits commerciaux toujours plus
nombreux et divers.
Lactivit germicide de nombreux produits chimiques sacclre et samliore
lorsque la temprature slve. Dun autre ct, une temprature leve peut
provoquer une vaporation plus rapide et entraner galement la dcomposition
du produit. Cest pourquoi des prcautions particulires doivent tre prises pour
le stockage et lutilisation de ces produits dans les rgions tropicales o leur dure
de conservation risque de se trouver rduite en raison de la forte temprature
ambiante.
14. DSINFECTION ET STRILISATION
93
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
94
Beaucoup de germicides peuvent tre nocifs pour lhomme et lenvironnement. Il
faut donc les choisir, les stocker, les manipuler, les utiliser et les liminer avec le plus
grand soin, en respectant les instructions du fabricant. Lorsquon prpare des dilu-
tions de germicides chimiques, il est recommand, pour des raisons de scurit indi-
viduelle, de porter des gants, un tablier et une protection oculaire.
Il nest gnralement pas ncessaire dutiliser un germicide chimique pour le net-
toyage habituel des sols, des murs, des quipements et du mobilier. On peut toutefois
avoir avantage le faire dans certains cas, par exemple pour juguler une ambe
pidmique.
Une utilisation judicieuse des germicides chimiques contribue la scurit du lieu
de travail en rduisant le risque de contamination par des agents infectieux. Dans la
mesure du possible, on sefforcera dutiliser un nombre limit de produits pour faire des
conomies, faciliter linventaire des stocks et rduire la pollution de lenvironnement.
On trouvera ci-aprs une description des divers types de germicides chimiques,
avec des informations gnrales sur leurs applications et leur scurit demploi. Sauf
indication contraire, les concentrations sont donnes en poids par unit de volume
(p/v). Le tableau 12 rcapitule les dilutions recommandes pour les composs librant
du chlore.
Chlore (hypochlorite de sodium)
Le chlore, un oxydant action rapide, est un germicide chimique large spectre uni-
versellement disponible. Il est gnralement vendu sous forme deau de Javel, une
solution aqueuse dhypochlorite de sodium (NaOCl) que lon peut diluer avec de leau
pour obtenir diffrentes concentrations de chlore actif.
Tableau 12. Dilutions recommandes pour les composs librant du chlore
SITUATION PROPRE
a
SITUATION SALE
b
Chlore actif ncessaire 0,1 % (1g/l) 0,5 % (5g/l)
Hypochlorite de sodium 20ml/l 100ml/l
(5 % de chlore actif)
Hypochlorite de calcium 1,4g/l 7g/l
(70 % de chlore actif)
Dichloroisocyanurate de sodium, poudre 1,7g/l 8,5g/l
(60 % de chlore actif)
Dichloroisocyanurate de sodium, comprims 1 comprim/l 4 comprims/l
(1,5g de chlore actif par comprim)
Chloramine (25 % de chlore actif)
c
20g/l 20g/l
a
Aprs enlvement des salissures les plus importantes.
b
Pour verser directement, par ex. sur du sang ou avant llimination des salissures les plus importantes.
c
Voir texte.
Les solutions dhypochlorite utilises comme agents de blanchiment sont forte-
ment alcalines et corrodent les mtaux. Lactivit du chlore libre est rduite par la
prsence de matires organiques (protines). Les solutions-mres ou les solutions de
travail dhypochlorite stockes dans des rcipients ouverts dgagent du chlore, notam-
ment temprature leve, ce qui rduit leur pouvoir germicide. La frquence de rem-
placement des solutions de travail dhypochlorite dpend de leur concentration
initiale, des conditions ambiantes, ainsi que du type (avec ou sans couvercle) et de la
taille des rcipients dans lesquels elles sont conserves. A titre indicatif, les solutions
dans lesquelles on met tremper plusieurs fois par jour du matriel fortement souill
par des matires organiques doivent tre remplaces tous les jours au minimum, celles
dont la frquence dutilisation est moindre pouvant tre conserves jusqu une
semaine.
Comme dsinfectant gnral, on utilisera une solution 1g/l de chlore actif. Pour
nettoyer un produit rpandu qui prsente un risque biologique ou en prsence de
grandes quantits de matires organiques, il est recommand dutiliser une solution
plus concentre, contenant 5g/l de chlore actif. Les solutions dhypochlorite de
sodium usage domestique (eau de Javel) contiennent habituellement 50g/l de chlore
actif et doivent donc tre dilues au 1: 50 ou au 1: 10 avant dtre utilises, pour
obtenir une concentration nale respectivement gale 1g/l et 5g/l. Les solutions
dhypochlorite de sodium usage industriel ont souvent une concentration de prs
de 120g/l et doivent donc galement tre dilues pour obtenir les valeurs indiques
ci-dessus.
Les granuls ou comprims dhypochlorite de calcium (Ca(ClO)
2
) contiennent
gnralement environ 70 % de chlore actif. Les solutions 1,4 et 7,0g/l prpares
laide de ces granuls ou comprims contiendront donc respectivement 1,0 et
5g/l de chlore actif.
Leau de Javel nest pas recommande comme antiseptique, mais on peut lutiliser
comme dsinfectant usage gnral et pour faire tremper le matriel contamin non
mtallique. En cas durgence, elle peut galement tre utilise pour dsinfecter leau
de boisson, la concentration nale de 1 2mg/l de chlore actif.
Le chlore est extrmement toxique. Il ne faut donc entreposer et utiliser les solu-
tions dhypochlorite que dans des locaux parfaitement ventils. On ne doit pas non
plus les mlanger des acides pour viter un dgagement rapide de chlore. Nombre
de drivs du chlore peuvent se rvler dangereux pour lorganisme humain et pour
lenvironnement, aussi faut-il viter lusage inconsidr de dsinfectants chlors,
comme leau de Javel par exemple.
Dichloroisocyanurate de sodium
Le dichloroisocyanurate de sodium se prsente sous la forme dune poudre contenant
60 % de chlore actif. Les solutions 1,7 et 8,5g/l prpares laide de cette poudre
ont une teneur respective de 1 et 5g/l en chlore actif. Ce produit existe galement sous
forme de comprims contenant lquivalent de 1,5g de chlore actif. On obtient
14. DSINFECTION ET STRILISATION
95
approximativement la concentration ncessaire de 1 ou 5g/l en dissolvant 1 ou 4 com-
prims dans 1 litre deau. En poudre ou en comprims, le dichloroisocyanurate de
sodium est facile conserver dans de bonnes conditions de scurit. En prsence de
sang ou dautres liquides infectieux accidentellement rpandus, on applique le produit
sous forme solide et on le laisse agir pendant au moins 10 minutes avant de llim-
iner. On peut ensuite procder au nettoyage de la zone touche.
Chloramines
Les chloramines existent sous forme de poudres contenant environ 25 % de chlore
actif. Dans la mesure o le chlore est libr plus lentement quavec les hypochlorites,
la concentration initiale doit tre plus leve pour que lefcacit soit comparable
celle des hypochlorites. En revanche, les chloramines en solution sont moins inac-
tives par les matires organiques que les hypochlorites et elles sont recommandes
la concentration de 20g/l, que la situation soit propre ou sale .
Les solutions de chloramines sont pratiquement inodores. Il faut toutefois rincer
abondamment les objets qui y ont t plongs pour liminer tout rsidu de lagent
gonant ajout aux poudres de chloramine T (tosylchloramide sodique).
Dioxyde de chlore
Le dioxyde de chlore (ClO
2
) est un germicide, un dsinfectant et un oxydant puissant
et rapide qui agit des concentrations plus faibles que le chlore sous forme
dhypochlorite. Sous forme gazeuse, le dioxyde de chlore est instable et se dissocie
exothermiquement en chlore (Cl
2
) et en oxygne (O
2
). Par contre il se dissout dans
leau pour donner des solutions aqueuses stables. On peut lobtenir de deux manires:
1) sur place, par action de lacide chlorhydrique (HCl) sur le chlorite de sodium
(NaClO
2
); 2) en le commandant sous forme stabilise que lon active ensuite sur place
selon les besoins.
De tous les oxydants biocides, le dioxyde de chlore est le plus slectif. Lozone et le
chlore sont beacoup plus ractifs et agissent sur la plupart des composs organiques.
Le dioxyde de chlore en revanche, ne ragit que sur les composs soufrs rduits, les
amines tertiaires et secondaires ou encore sur certains drivs organiques ractifs ou
fortement rduits. On peut donc obtenir, avec des doses beaucoup plus faibles de
dioxyde de chlore, un rsidu plus stable quavec le chlore ou lozone. Sil est conve-
nablement prpar, la slectivit de ce produit permet de lutiliser plus efcacement
que lozone ou le chlore en prsence dune forte teneur en matires organiques.
Formaldhyde
Le formaldhyde (HCHO) est un gaz capable de tuer tous les micro-organismes, y
compris les spores, aux tempratures suprieures 20C. Par contre, il est inactif
contre les prions.
Laction du formaldhyde est relativement lente et ncessite une humidit relative
denviron 70 %. Il est commercialis sous forme de polymre solide, le paraformaldhyde,
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
96
prsent en paillettes ou en comprims, ou encore sous forme de gaz dissous dans leau
raison denviron 370g/l (37 %) additionn de mthanol 100ml/l comme stabilisateur
(formol). Par chauffage, ces deux formes librent du formaldhyde que lon utilise pour
dcontaminer et dsinfecter les espaces clos (locaux ou enceintes de scurit biologique,
par exemple) (voir ce sujet la section consacre la dcontamination de lenviron-
nement local dans ce mme chapitre). On peut galement lutiliser comme dsinfectant
liquide (formol 5 % dans leau).
On suspecte le formaldhyde dtre cancrogne. Cest de toute faon un gaz dan-
gereux, aux proprits irritantes, dot dune odeur cre. Ses vapeurs peuvent irriter
les yeux et les muqueuses. Il faut donc lentreposer et lutiliser sous une hotte ou dans
une zone bien ventile. Il faut se conformer la rglementation nationale en matire
de scurit chimique.
Glutaraldhyde
Comme le formaldhyde, le glutaraldhyde (OHC(CH
2
)
3
CHO) est galement actif
contre les bactries vgtatives, les spores, les champignons ou les virus lipidiques et
non lipidiques. Il nest pas corrosif et agit plus rapidement que le formaldhyde. Il lui
faut toutefois plusieurs heures pour venir bout des spores bactriennes.
Il est gnralement fourni sous forme de solution environ 20g/l (2 %) et certains
produits doivent tre activs (alcaliniss) avant usage par addition de bicarbonate
livr avec le produit. Une fois active, la solution peut tre rutilise pendant 1 4
semaines, selon le type de prparation et son mode ou sa frquence dutilisation. Les
bandelettes ractives fournies avec certains produits ne donnent quune indication
approximative de la concentration en glutaraldhyde actif prsent dans la solution
utilise. La solution doit tre jete si elle se trouble.
Le glutaraldhyde est toxique et irritant pour la peau et les muqueuses, aussi faut-
il viter tout contact avec ce compos. On doit lutiliser sous une sorbonne ou dans
une zone parfaitement ventile. Il nest pas recommand sous forme de pulvrisations
ou de solution pour dcontaminer les surfaces dun local. Dans tous les cas, on se con-
formera la rglementation nationale en matire de scurit chimique.
Drivs phnoliques
Les drivs phnoliques constituent un vaste groupe dagents qui ont compt parmi
les premiers germicides utiliss. Toutefois leur scurit demploi ayant t rcemment
mise en doute, leur emploi sest restreint. Ils sont actifs contre les bactries vgta-
tives, les virus lipidiques et, sous une forme approprie, galement contre les
mycobactries. Ils sont sans effet sur les spores et leur activit contre les virus non
lipidiques est variable. De nombreux composs phnoliques sont utiliss pour la
dcontamination des surfaces et certains dentre eux, comme le triclosan et le chlorox-
ylnol, comptent parmi les antiseptiques les plus courants.
Les produits destins au lavage des mains contiennent frquemment du triclosan.
Il est surtout actif contre les bactries vgtatives et nest pas agressif pour la peau et
14. DSINFECTION ET STRILISATION
97
les muqueuses. Des tudes en laboratoire ont cependant montr que les bactries de-
venues rsistantes au triclosan sous faible concentration se montrent galement rsis-
tantes lgard de certains types dantibiotiques. On ignore si cette observation peut
avoir des consquences sur le terrain.
Un certain nombre de composs phnoliques sont sensibles la duret de leau et
une eau trop dure peut les inactiver, cest pourquoi il faut les diluer avec de leau dis-
tille ou dsionise.
Il nest pas recommand dutiliser des drivs phnoliques pour traiter des surfaces
pouvant se trouver en contact avec des produits alimentaires ni des locaux frquen-
ts par de jeunes enfants. Ils sont susceptibles dtre absorbs par le caoutchouc et de
franchir la barrire cutane. Dans tous les cas, on se conformera la rglementation
nationale en matire de scurit chimique.
Composs dammonium quaternaire
On utilise toutes sortes de composs dammonium quaternaire sous forme de
mlanges et souvent aussi en association avec dautres germicides, comme les alcools
par exemple. Ces composs ont une activit satisfaisante contre les bactries vgta-
tives et les virus lipidiques. Certains dentre eux (comme le chlorure de benzalkonium)
sont utiliss comme antiseptiques.
La prsence de matires organiques ou de dtergents anionique et aussi la duret
de leau rduisent fortement le pouvoir germicide de certains composs dammonium
quaternaire. Il faut donc choisir avec soin ceux que lon envisage dutiliser comme
dsinfectants pour le nettoyage pralable la dcontamination. Certaines bactries
potentiellement dangereuses peuvent se dvelopper dans les solutions de sels dam-
monium quaternaire. Par ailleurs, ces composs peuvent saccumuler dans lenviron-
nement du fait de leur faible biodgradabilit.
Alcools
Lthanol (alcool thylique, C
2
H
5
OH) et le propanol-2 (alcool isopropylique,
(CH
3
)
2
CHOH) ont des proprits dsinfectantes similaires. Ils sont actifs contre les
bactries vgtatives, les champignons et les virus lipidiques mais sans effet sur les
spores. Leur activit contre les virus non lipidiques est variable. Pour que lefcacit
soit maximale, la concentration utilise doit tre voisine de 70 % (v/v) dans leau : les
concentrations suprieures ou infrieures risquent de ne pas avoir un pouvoir germi-
cide aussi lev. Les solutions aqueuses dalcools ont le grand avantage de ne pas laisser
de rsidus sur les objets traits.
Mlang dautres agents, lalcool est plus efcace que lorsquil est seul : cest le
cas par exemple de lalcool 70 % contenant 100g de formaldhyde par litre ou de
lalcool contenant 2g par litre de chlore actif. On peut utiliser une solution aqueuse
dalcool 70 % pour dsinfecter la peau, les paillasses et les enceintes de scurit
biologique ou encore pour y faire tremper de petits instruments chirurgicaux. Comme
lthanol dessche la peau, il est souvent additionn dmollients. Les produits pour
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
98
friction base dalcool sont recommands pour la dcontamination des mains si
celles-ci ne sont que lgrement souilles, dans les cas o il est malcommode ou
impossible de se les laver correctement. Il ne faut cependant pas perdre de vue que
lthanol est sans effet sur les spores et peut ne pas dtruire tous les types de virus non
lipidiques.
Les alcools sont volatils et inammables aussi ne faut-il pas les utiliser proximit
de ammes nues. Les solutions de travail doivent tre entreposes dans des rcipients
appropris pour viter lvaporation. Les alcools peuvent provoquer un durcissement
du caoutchouc et dissoudre certains adhsifs. Il est trs important de procder un
inventaire minutieux et un entreposage adquat des rserves dalcool pour viter
quil ne soit utilis dautres ns que la dsinfection. Les acons ou bouteilles con-
tenant des solutions dalcool doivent tre clairement tiquets pour viter tout auto-
clavage intempestif.
Iode et iodophores
Laction de ces dsinfectants est comparable celle du chlore, encore quils puissent
tre lgrement inhibs par les matires organiques. Liode peut tacher le tissu et les
surfaces environnantes aussi nest-il gnralement pas utilisable comme dsinfectant.
Par contre, liode et les iodophores sont de bons antiseptiques. La polyvidone iode
est un antiseptique sr et efcace pour le lavage chirurgical des mains et pour lan-
tisepsie de la peau du champ opratoire. Les antiseptiques base diode ne convien-
nent gnralement pas pour la dsinfection du matriel mdical ou dentaire. Liode
ne doit pas tre utilis sur laluminium ou le cuivre.
Liode peut tre toxique. Les composs organiques iods doivent tre conservs
410 C pour viter que des bactries potentiellement dangereuses ne sy dveloppent.
Peroxyde dhydrogne et peracides
Comme le chlore, le peroxyde dhydrogne (eau oxygne, H
2
O
2
) et les peracides sont
des oxydants nergiques et peuvent constituer de puissants germicides large spectre.
Ils sont galement moins nocifs que le chlore pour lorganisme humain et pour
lenvironnement.
Le peroxyde dhydrogne est fourni soit la sous forme dune solution 3 %
prte lemploi, soit en solution aqueuse 30 % que lon dilue dans 5 10 fois son
volume deau strilise. En fait, ces solutions 36 % de peroxyde dhydrogne ont
une action relativement lente et leur pouvoir germicide est limit. Il existe maintenant
des solutions contenant dautres substances destines stabiliser la teneur en
peroxyde dhydrogne. Ces produits ont une action germicide plus rapide et sont
moins corrosifs.
On peut utiliser le peroxyde dhydrogne pour dcontaminer les paillasses et les
enceintes de scurit biologique, et les solutions les plus concentres peuvent convenir
pour la dsinfection du matriel mdical ou dentaire qui ne supporte pas la chaleur.
La vaporisation de peroxyde dhydrogne ou dacide peractique (CH
3
COOOH) pour
14. DSINFECTION ET STRILISATION
99
dcontaminer le matriel mdical ou chirurgical non rsistant la chaleur exige un
appareillage spcial.
Le peroxyde dhydrogne et les peracides peuvent corroder les mtaux comme la-
luminium, le cuivre, le laiton et le zinc et ils sont galement capables de dcolorer les
tissus, le systme pileux, la peau et les membranes. Tout objet trait avec ces produits
doit tre rinc fond avant dtre mis en contact avec les yeux ou les muqueuses. Le
stockage doit toujours se faire labri de la chaleur et de la lumire.
Dcontamination de lenvironnement local
La dcontamination des locaux du laboratoire, de son mobilier et de son quipement
ncessite lemploi dune association de dsinfectants liquides et gazeux. Les surfaces
peuvent tre dcontamines au moyen dune solution dhypochlorite de sodium
(NaOCl) ; une solution contenant 1g de chlore actif par litre peut convenir pour las-
sainissement gnral des locaux, mais des solutions plus concentres sont recom-
mandes en cas de situation haut risque. Pour la dcontamination des locaux du
laboratoire, les solutions prtes lemploi contenant 3 % de peroxyde dhydrogne
(H
2
O
2
) peuvent parfaitement remplacer les solutions dhypochlorite.
On peut galement dcontaminer les salles et lquipement par fumigation au
formaldhyde produit en chauffant du paraformaldhyde ou en faisant bouillir du
formol. Ce procd est extrmement dangereux et doit tre mis en uvre par du per-
sonnel quali. Toutes les ouvertures de la pice (fentres, portes, etc.) doivent tre
hermtiquement fermes avec du ruban adhsif par exemple, avant le dgagement du
gaz. La fumigation doit tre effectue une temprature ambiante dau moins 21 C
et une humidit relative de 70 % (voir plus loin dans ce chapitre la section consacre
la dcontamination des enceintes de scurit biologique).
Une fois lopration acheve, il faut ventiler abondamment les locaux avant dau-
toriser lentre du personnel. Le personnel oblig de pntrer dans la salle avant lara-
tion doit porter un masque respiratoire appropri. On peut utiliser du bicarbonate
dammonium gazeux pour neutraliser le formaldhyde.
La fumigation de petits volumes avec du peroxyde dhydrogne en phase gazeuse
est galement efcace mais il faut un appareillage spcial pour la production du gaz.
Dcontamination des enceintes de scurit biologique
Pour dcontaminer les enceintes de scurit biologique de classes I et II, il existe un
appareillage qui permet de produire, de faire circuler et de neutraliser indpendam-
ment le formaldhyde. On peut aussi mettre la quantit dsire de paraformaldhyde
(pour une concentration nale de 0,8 % de formaldhyde dans lair) dans une pole
frire que lon place ensuite sur une plaque chauffante lectrique. On introduit gale-
ment dans lenceinte une autre pole contenant une quantit de bicarbonate dam-
monium de 10 % suprieure celle de paraformaldhyde et on la place sur une autre
plaque chauffante. Les prises dalimentation des plaques chauffantes doivent se
trouver hors de lenceinte, de manire pouvoir rgler les plaques depuis lextrieur
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
100
14. DSINFECTION ET STRILISATION
101
en les branchant ou en les dbranchant selon le cas. Si lhumidit relative est infrieure
70 %, il faut galement placer dans lenceinte un rcipient ouvert contenant de leau
chaude avant de fermer hermtiquement le panneau frontal avec du ruban pais (par
exemple du ruban adhsif entoil). Une paisse feuille de plastique est ensuite scotche
contre louverture frontale et la sortie de la gaine dvacuation de faon que le gaz ne
pntre pas dans la pice. Les traverses des ls dalimentation qui passent travers
le panneau frontal doivent galement tre tanchies avec du ruban adhsif entoil.
On branche la plaque lectrique qui chauffe le paraformaldhyde. Une fois que
celui-ci sest entirement vaporis, on la dbranche. On ne touche plus alors len-
ceinte pendant au moins 6h. Pass ce temps, on branche la deuxime plaque chauf-
fante et on laisse se vaporiser tout le bicarbonate dammonium. On dbranche ensuite
la plaque et on met en marche le ventilateur de lenceinte pendant deux intervalles de
2 secondes environ chacun pour faire circuler la vapeur de bicarbonate dammonium.
Lenceinte est laisse telle quelle pendant 30 minutes avant douvrir le panneau frontal
(ou denlever la feuille de plastique) et de dgager la sortie de la gaine dvacuation.
Avant de se servir de lenceinte, il faut lessuyer pour en liminer les rsidus.
Lavage et dcontamination des mains
Dans la mesure du possible, il faut porter des gants chaque fois que lon manipule du
matriel prsentant un risque biologique. Toutefois, cette mesure ne remet pas en
cause la ncessit, pour le personnel de laboratoire, de se laver rgulirement et con-
venablement les mains. Le lavage des mains est indispensable lorsque lon a mani-
pul des animaux ou du matriel prsentant un risque biologique ou encore avant de
quitter le laboratoire.
Dans la plupart des cas, un lavage soigneux des mains leau et au savon est suf-
sant pour les dcontaminer, mais lusage de savons germicides est recommand dans
les situations haut risque. Il faut bien se savonner les mains en frottant soigneuse-
ment pendant au moins une dizaine de secondes, puis les rincer leau claire et les
scher avec du papier ou une serviette propre (on peut ventuellement utiliser un
schoir air chaud).
Il est recommand de disposer de robinets commands avec le pied ou le coude.
Dans le cas contraire, on fermera le robinet en le saisissant avec une serviette en papier
ou en tissu an de ne pas se recontaminer les mains.
Comme indiqu plus haut, les produits pour friction base dalcool peuvent tre
utiliss pour se nettoyer les mains si celles-ci ne sont que lgrement souilles et que
lon ne peut pas se les laver convenablement.
Dsinfection et strilisation par la chaleur
La chaleur est lagent physique le plus couramment utilis pour liminer les germes
pathognes. La chaleur sche , qui nest absolument pas corrosive, est utilise pour
traiter de nombreux instruments et accessoires de laboratoire qui sont capables de
supporter une temprature de 160 C ou davantage pendant 2 4 h. Le brlage et
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
102
lincinration (voir ci-dessous) sont galement des formes de traitement par la chaleur
sche. Lautoclavage est la manire la plus efcace dutiliser la chaleur humide .
Lbullition ne tue pas ncessairement tous les micro-organismes et les germes
pathognes, mais on peut y recourir comme traitement strilisateur minimum lorsque
dautres mthodes (dsinfection ou dcontamination chimique, autoclavage) ne sont
ni utilisables ni disponibles.
Les objets striliss doivent tre manipuls et rangs de manire rester striles
jusquau moment de leur utilisation.
Autoclavage
Le traitement par la vapeur saturante sous pression (autoclavage) constitue le moyen
le plus efcace et le plus able pour striliser le matriel de laboratoire. Dans la plupart
des cas, les cycles suivants assurent la strilisation si lautoclave a t correctement
charg :
1. Temps de palier de 3min 134 C.
2. Temps de palier de 10min 136 C.
3. Temps de palier de 15min 121 C.
4. Temps de palier de 25minutes 115 C.
Parmi les divers types dautoclaves, on peut citer les suivants :
Autoclaves vapeur directe. Le schma dun de ces autoclaves est reprsent la gure
10. La vapeur pntre dans la chambre sous pression et dplace lair plus lourd vers
le bas; celui-ci passe ensuite dans la vanne dvacuation de la chambre, travers un
ltre HEPA.
Autoclaves extraction dair. Dans ces appareils, lair est extrait de la chambre avant
admission de la vapeur. Lair est vacu par une vanne munie dun ltre HEPA. A la
n du cycle, la vapeur est automatiquement vidange. Ces autoclaves peuvent fonc-
tionner 134 C et le cycle de strilisation peut donc tre rduit 3minutes. Ils cons-
tituent le systme idal pour les charges poreuses, mais en raison du vide qui est fait
dans la chambre, ils ne peuvent pas tre utiliss pour traiter des liquides.
Autoclaves de type autocuiseur source de chauffage extrieure. Ces autoclaves ne seront
utiliss que si lon ne dispose pas dun autoclave vapeur directe. Ils sont chargs par
le haut et chauffs au gaz, llectricit ou dune autre manire. La vapeur est pro-
duite en chauffant leau place au fond du rcipient et lair se dplace vers le haut
avant de sortir par la soupape dchappement. Lorsque lair a t vacu en totalit,
on ferme la soupape dchappement et on baisse le chauffage. La pression et la tem-
prature augmentent jusqu une valeur donne laquelle la soupape de scurit com-
mence fonctionner. Le temps de palier se compte partir de ce moment. A la n du
cycle, on coupe le chauffage et on laisse la temprature descendre 80 C ou moins
avant douvrir le couvercle.
Chargement des autoclaves
Le matriel ne doit pas tre entass lintrieur de la chambre pour que la vapeur
puisse pntrer sans difcult et que lair puisse tre limin facilement. Il faut que la
vapeur puisse atteindre le contenu des sacs.
Prcautions dutilisation
Lobservation des rgles suivantes permet de rduire les risques que comporte lutili-
sation dappareils sous pression.
1. Lutilisation et lentretien habituels des appareils doivent tre cons des per-
sonnes qualies.
2. Un programme de maintenance prventive, comprenant un contrle priodique
des joints de la chambre et de la porte ainsi que de tous les manomtres et dis-
positifs de commande doit tre mis sur pied et con un personnel quali.
3. La vapeur doit tre sature et exempte de substances chimiques (par ex. des inhi-
biteurs de corrosion) qui pourraient contaminer le matriel striliser.
4. Tout le matriel autoclaver doit tre plac dans des rcipients qui permettent
une vacuation facile de lair et une bonne pntration de la chaleur. La chambre
14. DSINFECTION ET STRILISATION
103
manomtre
dflecteur
vers double paroi
vanne
s
y
s
t

m
e
d

a
l
i
m
e
n
t
a
t
i
o
n
v
a
p
e
u
r
vers chambre
vanne
vers pompe vide
ou sortie vapeur
purgeurs vapeur
filtres de
vidange
clapet anti-retour
porte
filtre (coton)
dentre dair
manomtre
chambre
soupape de
scurit
chambre
robinet dentre
dair
double parois
soupape de
scurit
robinet de
vidange
Figure 10. Autoclave vapeur directe.
ne doit pas tre encombre an que la charge puisse baigner de manire uniforme
dans la vapeur.
5. Si lautoclave nest pas muni dun dispositif de scurit qui empche louverture
de la porte tant que la chambre est sous pression, il est indispensable que la
soupape principale soit ferme et quon laisse retomber la temprature de la
chambre en dessous de 80 C avant douvrir la porte.
6. Si on autoclave des liquides, il faut utiliser un systme dvacuation faible vitesse
pour viter quen raison de la surchauffe, ceux-ci se mettent bouillir lorsquon
les retire.
7. Les oprateurs doivent porter des gants et un cran facial pour se protger lors de
louverture de lautoclave, mme si la temprature est retombe moins de 80 C.
8. Pour tout contrle de routine du fonctionnement de lautoclave, il faut placer un
indicateur biologique ou un thermocouple au centre de chaque charge. Il est vive-
ment conseill de contrler rgulirement la temprature au moyen de thermo-
couples et dappareils enregistreurs en utilisant la pire charge possible , ce qui
permettra de dterminer ce que doit tre le droulement du cycle.
9. Le ltre de vidange plac en bas de la chambre (sil y en a un) doit tre retir et
nettoy tous les jours.
10. On veillera ce que la soupape dchappement des autoclaves de type autocuiseur
ne soit pas obture par du papier, etc. prsent dans la charge.
Incinration
Lincinration est une mthode utile pour se dbarrasser des carcasses danimaux, des
pices anatomiques ou autres dchets de laboratoire, avec ou sans dcontamination
pralable (voir chapitre 3). Lincinration des matriels infectieux ne peut se substituer
lautoclavage que si lincinrateur est plac sous la responsabilit du laboratoire.
Pour donner satisfaction, il faut que lincinrateur comporte un dispositif efcace
de rgulation de la temprature et une chambre de combustion secondaire. Un grand
nombre dincinrateurs, notamment ceux qui ne comportent quune seule chambre
de combustion, ne permettent pas de traiter de manire satisfaisante le matriel infec-
tieux, les carcasses danimaux et les matires plastiques. En effet la destruction risque
de ne pas tre totale et lefuent qui sort par la chemine peut polluer latmosphre
du fait de la prsence de micro-organismes ou de substances et fumes toxiques. Cela
tant, il existe, pour les chambres de combustion, de nombreux types de congura-
tion qui donnent satisfaction, mais lidal est dobtenir une temprature dau moins
800 C dans la chambre primaire et dau moins 1000 C dans la chambre secondaire.
Les matires et objets incinrer, mme sils ont t pralablement dcontamins,
doivent tre transports dans des sacs, de prfrence des sacs plastiques. Le personnel
prpos lincinration doit avoir reu des instructions appropries concernant le
chargement et le rglage de la temprature de lincinrateur. A noter que le bon fonc-
tionnement dun incinrateur dpend trs largement dun panachage judicieux des
matires et objets traits.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
104
Ces incinrateurs, existants ou en projet, continuent susciter des inquitudes
quant aux effets ngatifs quils pourraient avoir sur lenvironnement et les tudes se
poursuivent pour mettre au point des appareils plus respectueux de lenvironnement
et consommant moins dnergie.
Elimination
Llimination des dchets de laboratoire ou des dchets mdicaux est soumise
diverses dispositions rglementaires rgionales, nationales ou internationales et les
versions les plus rcentes de ces documents doivent tre consultes avant dlaborer
et de mettre en uvre un programme portant sur la manipulation, le transport et
llimination des dchets qui prsentent un risque biologique. En rgle gnrale, les
cendres extraites des incinrateurs peuvent tre traites comme des cendres domes-
tiques et prises en charge par les services locaux denlvement des ordures. Les dchets
autoclavs peuvent tre limins par incinration sur un site hors de la zone du la-
boratoire ou enfouis dans une dcharge autorise (voir le chapitre 3).
Pour de plus amples informations, le lecteur peut consulter les rfrences 13 et 29
39.
14. DSINFECTION ET STRILISATION
105
106
15. Introduction au transport des
matires infectieuses
Le transport des matires infectieuses ou potentiellement infectieuses est soumis une
rglementation nationale et internationale rigoureuse. Cette rglementation prcise
comment utiliser les matriaux demballage selon les formes prescrites et numre
galement les autres dispositions respecter pour les expditions.
Le personnel du laboratoire doit expdier les matires infectieuses en respectant la
rglementation applicable leur transport. Lobservation de ces rgles permet :
1. De rduire le risque de dtrioration ou de fuite des colis et par voie de
consquence,
2. de rduire lexposition une ventuelle infection et
3. damliorer les conditions de livraison des colis.
Rglementation internationale relative aux transports
La rglementation relative aux transports de matires infectieuses (quel quen soit le
moyen) repose sur le Rglement type des Nations Unies pour le transport des matires
dangereuses (40). Ces recommandations manent du Comit dexperts de lONU en
matire de transport des marchandises dangereuses (UNCEDTG). Pour avoir force de
loi, les dispositions du Rglement type des Nations Unies doivent tre incorpores
dans la rglementation nationale et internationale par les autorits comptentes (par
ex. les Instructions techniques pour la scurit du transport arien des marchandises
dangereuses de lOrganisation de lAviation civile internationale (OACI) ou lAccord
europen relatif au transport international des marchandises dangereuses par route
(ADR) (42)).
LAssociation du Transport arien international (IATA) publie chaque anne des
directives concernant le transport des matires infectieuses (43) auxquelles les com-
pagnies ariennes qui en sont membres doivent se conformer.
Comme le Rglement type des Nations Unies pour le transport des matires dan-
gereuses est un ensemble de recommandations qui est revu tous les deux ans, le lecteur
est pri de se reporter aux tout derniers textes rglementaires nationaux et interna-
tionaux en la matire.
LOMS intervient titre consultatif auprs du Comit dexperts des Nations Unies
en matire de transport des marchandises dangereuses. Un certain nombre de modi-
cations importantes concernant la rglementation relative au transport des matires
infectieuses gurent dans la 13
e
dition (2003) du Rglement type des Nations Unies
(40). Des indications sur les tenants et aboutissants de ces modications peuvent tre
obtenues auprs de lOMS (44).
La rglementation internationale relative aux modes de transport nest pas destine
se substituer aux prescriptions locales ou nationales en la matire. Toutefois, en lab-
sence de telles prescriptions, cest la rglementation internationale quil convient de
se conformer.
Il importe de noter que le transport international des matires infectieuses est
galement soumis la rglementation nationale relative limport-export.
Le systme du triple emballage
La gure 11 donne un exemple de triple emballage, qui constitue le meilleur systme
pour le transport des matires infectieuses ou potentiellement infectieuses. Cet embal-
lage comporte trois couches successives : un rcipient primaire, un emballage se-
condaire et un emballage extrieur.
Le rcipient primaire, qui contient lchantillon, doit tre hermtique, parfaitement
tanche, et son contenu doit tre indiqu sur une tiquette. Ce premier rcipient est
envelopp dans un volume sufsant de matriau absorbant pour quen cas de bris ou
de fuite, tout le liquide de lchantillon soit absorb.
Le rcipient primaire est plac dans un deuxime emballage, galement hermtique
et tanche, qui sert de protection. Plusieurs rcipients primaires envelopps de
matriau absorbant peuvent tre placs dans un mme emballage secondaire. Certains
textes rglementaires indiquent la limite de poids ou de volume autorise pour les
colis de matires infectieuses.
La troisime couche, qui constitue lemballage extrieur, protge demballage se-
condaire contre les dommages matriels qui pourraient se produire en cours de trans-
port. Il faut galement produire des formulaires contenant des donnes sur
lchantillon, des documents ou autres types dinformation qui en indiquent la nature,
en donnent la description, avec mention du nom de lexpditeur et du destinataire,
ainsi que tout document complmentaire, conformment aux derniers textes rgle-
mentaires en vigueur.
Le Rglement type des Nations Unies prconise lutilisation de deux modles dif-
frents de triple emballage. Le modle de base convient pour le transport de diverses
matires infectieuses, mais les prescriptions concernant le transport des micro-
organismes haut risque sont plus rigoureuses. Pour plus de dtails sur lutilisation
des diffrents types demballage en fonction de la nature des matires transportes, il
est conseill de se reporter aux textes rglementaires nationaux ou internationaux
relatifs aux diffrents modes de transport.
Consignes pour nettoyer des produits rpandus
Au cas o du matriel biologique infectieux ou potentiellement infectieux viendrait
tre rpandu, on appliquera les consignes suivantes :
15. INTRODUCTION AU TRANSPORT DES MATIRES INFECTIEUSES
107
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
108
Rcipient primaire
(tube essai)
Emballage secondaire
(tanche l'eau)
Bouchon
Matriau absorbant
Fiche de suivi de l'chantillon (y
compris liste dtaille du contenu)
Emballage extrieur
Etiquette de sens de
la manutention
(facultative lorsque le
volume du rcipient
primaire ne dpasse
pas 50 ml)
Etiquetage UN
Bouchon tanche
l'eau
Matriel
d'emballage
absorbant
Emballage secondaire
( l'preuve des fuites
ou non tamisant)
Etiquettes indiquant
l'expditeur et le
destinataire
Numro
d'identification
UN
Nom de transport UN
Emballage
extrieur rigide
Liste dtaille du contenu
(fiche de suivi de
l'chantillon)
Support de type porte-tubes
(mousse de polystyrne
plastique alvoles ouvertes)
Rcipient primaire
( l'preuve des fuites ou
non tamisant)
Figure 11. Exemples demballages triples.
(gures aimablement communiques par lIATA, Montral, Canada).
Emballage et tiquetage des substances infectieuses de catgorie A
Emballage et tiquetage des substances infectieuses de catgorie B
Emballage secondaire
(tanche leau)
Bouchon
Emballage extrieur
Etiquetage UN
Etiquette de sens de
la mauntention
(facultative lorsque le
volume du rcipient
primaire ne dpasse
pas 50 ml)
Matriau absorbant
Fiche de suivi de lchantillon (y
compris liste dtaille du contenu)
Rcipient primaire
(tube essai)
Bouchon tanche
leau
Rcipient primaire
( lpreuve des fuites
ou non tamisant)
Support de type porte-tubes
(mousse de polystyrne
plastique alvoles ouvertes)
Liste dtaille du contenu
(che de suivi de lchantillon)
Emballage
extrieur rigide
Nom de transport UN
Matriel
demballage
absorbant
Emballage secondaire
( lpreuve des fuites
ou non tamisant)
Etiquettes indiquant
lexpditeur et le
destinataire
Numro
didentication
UN
1. Porter des gants et des vtements protecteurs, y compris une protection oculaire
et faciale, si ncessaire.
2. Recouvrir le liquide avec des serviettes en tissu ou en papier pour viter quil ne
continue se rpandre.
3. Verser un dsinfectant appropri sur les serviettes et la zone environnante (en
gnral une solution dhypochlorite 5 % fait laffaire; toutefois si laccident
survient bord dun aronef, il faut utiliser un compos dammonium
quaternaire).
4. Appliquer le dsinfectant par zones concentriques en commenant par les bords
du secteur contamin et en se dirigeant vers le centre.
5. Au bout dune dure approprie (par ex. 30min), liminer les produits. En
prsence de dbris de verre ou autres objets pointus ou tranchants, se servir dune
pelle ou dun morceau de carton rigide pour les rassembler et les placer dans un
rcipient imperforable en vue de leur limination.
6. Nettoyer et dsinfecter lemplacement o le liquide a t rpandu (si ncessaire,
rpter les oprations 2 5).
7. Jeter les matriaux et produits contamins dans une poubelle tanche et
imperforable.
8. Une fois la dsinfection acheve, informer les autorits comptentes que le site est
dcontamin.
15. INTRODUCTION AU TRANSPORT DES MATIRES INFECTIEUSES
109
PARTIE V
Introduction aux
biotechnologies
16. Scurit et technologies de
recombinaison de lADN
113
Les technologies de recombinaison de lADN galement connues sous la dnomi-
nation de gnie gntique consistent associer du matriel gntique de diverses
origines pour crer des organismes gntiquement modis (OGM) qui nont pro-
bablement jamais exist dans la nature. Au dbut, les spcialistes de la biologie molcu-
laire craignaient que ces organismes ne soient dots de proprits imprvisibles et
indsirables susceptibles de les rendre dangereux sils venaient schapper des labo-
ratoires. Ces inquitudes ont constitu le thme central des dbats qui se sont drouls
lors de la confrence scientique tenue en 1975 Asilomar, en Californie Erats Unrs
dAmerque (45). Les discussions qui ont eu lieu lors de cette runion au sujet des prob-
lmes de scurit biologique ont abouti lnonc des premiers principes directeurs
concernant les technologies de recombinaison de lADN. Lexprience acquise aprs
25ans de recherches montre que les travaux de gnie gntique peuvent tre effectus
dans de bonnes conditions de scurit pour peu que lon value correctement le risque
et que des mesures sufsantes de scurit soient prises.
Les premiers travaux de gnie gntique avaient pour but de cloner des fragments
dADN dans des htes bactriens an dobtenir la surexpression de certains produits
gniques en vue dtudes ultrieures. Des molcules dADN recombinant sont gale-
ment utilises pour crer divers types dOGM, comme les animaux ou plantes trans-
gniques ou les animaux knock out cest dire dont certains gnes sont inactivs
ou supprims.
Les technologies de recombinaison de lADN ont dores et dj des retombes con-
sidrables en biologie et en mdecine et leur inuence va probablement encore sac-
centuer maintenant que lon connat la squence nuclotidique complte du gnome
humain. Des dizaines de milliers de gnes dont on ignore encore la fonction vont ainsi
pouvoir tre tudis grce au gnie gntique. La thrapie gnique pourrait tre
couramment utilises pour traiter certaines maladies et il est probable que les tech-
niques de gnie gntique vont nous permettre de disposer de nouveaux vecteurs de
clonage. Les plantes transgniques cres par recombinaison de lADN pourraient
galement prendre une place de plus en plus importante dans lagriculture moderne.
On ne doit procder une exprience comportant llaboration ou lutilisation
dOGM quaprs une valuation ou une analyse du risque biologique quelle com-
porte. Il est possible que la pathognicit et les dangers que peuvent comporter ces
organismes prsentent des caractristiques nouvelles et plus ou moins bien dnies.
Il faut donc tudier les proprits de lorganisme donneur et celles de lorganisme
receveur, la nature des squences dADN qui seront transfres et les caractristiques
de lenvironnement. La connaissance de tous ces facteurs devrait permettre de dter-
miner plus facilement le niveau de scurit biologique ncessaire pour la manipula-
tion sans danger de lOGM obtenu et les systmes de connement biologique et
physique mettre en uvre.
Considrations bioscuritaires applicables aux systmes dexpression
biologiques
Les systmes dexpression biologiques sont constitus par les vecteurs de clonage et
les cellules htes. Pour que ces systmes soient efcaces et puissent tre utiliss sans
danger, ils doivent rpondre un certain nombre de critres. Prenons titre dexem-
ple un de ces systmes, le plasmide pUC18. Souvent utilis comme vecteur de clonage
avec des bactries Escherichia coli K12, ce plasmide a t entirement squenc. Tous
les gnes ncessaires son expression dans dautres bactries ont t supprims de son
plasmide prcurseur, le pBR322. E.coli K12 est une souche non pathogne de coli-
bacilles qui est incapable de coloniser de faon permanente lintestin des tres
humains ou des animaux en bonne sant. Les techniques habituelles de gnie gn-
tique peuvent tre utilises sans risque sur le systme E.coli/pUC18 au niveau 1 de
scurit biologique, aussi longtemps que les produits exprims par lADN tranger
insr dans la bactrie ne ncessitent pas le passage un niveau suprieur.
Considrations bioscuritaires applicables aux vecteurs dexpression
Un niveau suprieur de scurit biologique peut tre ncessaire lorsque :
1. Lexpression des squences dADN provenant de germes pathognes sont suscep-
tibles daugmenter la virulence de lOGM.
2. Les squences insres ne sont pas parfaitement caractrises, comme cest par
exemple le cas lors de la prparation de bibliothques dADN gnomique
provenant de micro-organismes pathognes.
3. Les produits gniques peuvent avoir une activit pharmacologique.
4. Les produits gniques codent pour des toxines.
Vecteurs viraux pour le transfert de gnes
On utilise certains virus, des adnovirus par exemple, pour transfrer des gnes dans
dautres cellules. Ces vecteurs sont dpourvus des gnes qui commandent la rplica-
tion et on les cultive dans des lignes cellulaires capables de compenser ce dfaut.
Il peut arriver que ces vecteurs soient contamins par des virus capables de se rpli-
quer, virus qui apparaissent dans la ligne cellulaire la faveur de rares recombinaisons
spontanes ou peuvent aussi tre prsents en raison dune purication insufsante.
Ces vecteurs doivent tre manipuls au mme niveau de scurit biologique que les
adnovirus dont ils drivent.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
114
Animaux transgniques et animaux knock out
Les animaux porteurs de gnes trangers (animaux transgniques) doivent tre mani-
puls un niveau de connement correspondant aux caractristiques des produits de ces
gnes. Les animaux chez lesquels on a procd la dltion de certains gnes particuliers
(animaux knock out ) ne prsentent gnralement pas de danger sur le plan biologique.
Parmi ces animaux transgniques gurent ceux qui expriment les rcepteurs de
virus normalement incapables dinfecter lespce en question. Sil arrivait que de tels
animaux schappent dun laboratoire et transmettent leurs gnes trangers leurs
congnres sauvages, il pourrait thoriquement se constituer au sein de la population
animale un rservoir pour ces virus.
Cette possibilit a t voque dans le cas du virus poliomylitique et elle prend
toute son importance dans le contexte de lradication de la poliomylite. Des souris
transgniques exprimant le rcepteur au virus poliomylitique humain et produites
par diffrents laboratoires ont pu tre infectes par ce virus en utilisant diverses voies
dinoculation et la maladie rsultante sest rvle cliniquement et histopathologique-
ment analogue la poliomylite humaine. Toutefois, le modle murin diffre de lor-
ganisme humain en ce sens que le virus poliomylitique administr par voie orale se
rplique mal ou pas du tout dans les voies digestives. Il est donc trs peu probable
que, dans lventualit o ces souris transgniques schapperaient pour retourner
ltat sauvage, elles soient en mesure de constituer un nouveau rservoir animal du
virus poliomylitique. Cet exemple montre nanmoins que, pour chaque nouvelle
ligne danimaux transgniques, il faut procder des tudes minutieuses pour
dterminer par quelles voies ces animaux peuvent tre infects, quel est le volume
dinoculum ncessaire linfection et dans quelle proportion les animaux infects
excrtent le virus. En outre, il faut prendre toutes les mesures ncessaires pour assurer
un connement rigoureux des souris transgniques porteuses du rcepteur viral.
Plantes transgniques
Dans de nombreuses rgions du monde, les plantes trangniques exprimant des gnes
qui leur confrent une tolrance aux herbicides ou une rsistance aux insectes sont
aujourdhui au centre dune vive controverse. Le dbat porte essentiellement sur la
scurit sanitaire de ces plantes en tant qualiments et sur les consquences cologiques
que leur culture pourrait avoir long terme.
On utilise des plantes transgniques exprimant des gnes dorigine humaine ou
animale pour obtenir des produits dintrt mdical ou nutritionnel. Il convient de
procder une valuation du risque pour dterminer quel niveau de scurit
biologique ces plantes doivent tre produites.
Evaluation du risque dans le cas des organismes gntiquement modis
Dans le cas de travaux sur des OGM, lvaluation du risque doit prendre en compte
les caractristiques des organismes donneurs et receveurs. On en trouvera ci-aprs
quelques exemples.
16. SCURIT ET TECHNOLOGIES DE RECOMBINAISON DE L ADN
115
Dangers directement lis au gne insr (organisme donneur)
Une valuation du risque est ncessaire dans le cas o le produit du gne insr
possde une activit biologique ou pharmacologique reconnue qui pourrait se rvler
nocive, par exemple, si on a affaire des :
1. Toxines
2. Cytokines
3. Hormones
4. Rgulateurs de lexpression gnique
5. Facteurs de virulence ou daccroissement de la virulence
6. Squences oncognes
7. Facteurs dantibiorsistance
8. Allergnes.
Dans chaque cas, il faut valuer le niveau dexpression ncessaire pour quune acti-
vit biologique ou pharmacologique se manifeste.
Dangers lis au receveur ou lhte
1. Sensibilit de lhte
2. Pathognicit de la souche hte, et notamment sa virulence, son infectiosit et sa
production de toxines
3. Modication de la gamme dhtes
4. Etat immunitaire du receveur
5. Consquences dune exposition.
Dangers lis la modication de certains facteurs de pathognicit
Il y a beaucoup de modications qui nimpliquent pas de gnes dont les produits sont
intrinsquement nocifs, mais des effets indsirables peuvent se produire par suite de
la modication des facteurs pathognes ou non pathognes existants. La modication
dun gne normal peut avoir des rpercussions sur la pathognicit. Pour reconnatre
ces dangers potentiels, il faut se poser les questions suivantes (liste non exhaustive).
1. Y a t-il augmentation de linfectiosit ou de la pathognicit ?
2. Linsertion du gne tranger peut-elle compenser une mutation incapacitante chez
le receveur ?
3. Le gne tranger code-t-il pour un facteur de pathognicit appartenant un autre
organisme ?
4. Si lADN tranger contient un tel facteur de pathognicit, peut-on envisager que
cela ait des consquences pour la pathognicit de lOGM ?
5. Existe t-il un traitement ?
6. La modication gntique aura t-elle des consquences pour la sensibilit de
lOGM aux antibiotiques ou dautres types de thrapeutique ?
7. Lradication de lOGM est-elle possible ?
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
116
Autres considrations
Lutilisation danimaux ou de vgtaux entiers des ns exprimentales demande
galement mre rexion. Les chercheurs doivent respecter la rglementation, les
restrictions et les prescriptions relatives au travail sur les OGM en vigueur dans les
pays ou les institutions dans lesquels ils exercent leur activit.
Il peut exister dans certains pays une autorit nationale charge dtablir des direc-
tives concernant le travail sur les OGM et celle-ci peut aider les scientiques dter-
miner quel est le niveau de scurit biologique requis par leurs travaux. Ce niveau
peut parfois varier dun pays lautre et il peut aussi arriver quun pays dcide
dabaisser ou dlever le niveau de scurit exig pour tel ou tel systme vecteur/hte,
la lumire de donnes nouvelles.
Lvaluation du risque est un processus dynamique qui volue avec les nouvelles
avances et les nouveaux progrs de la science. Si ces valuations sont menes cor-
rectement, elles permettront lhumanit de continuer tirer prot du gnie gn-
tique dans les annes venir.
Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter les rfrences 17 et
46 48.
16. SCURIT ET TECHNOLOGIES DE RECOMBINAISON DE L ADN
117
PARTIE VI
Scurit chimique,
lectrique et incendie
17. Les risques chimiques
121
Le personnel des laboratoires de microbiologie est expos des produits chimiques
dangereux tout autant qu des germes pathognes. Il est donc primordial quil ait une
bonne connaissance des effets toxiques de ces produits, de leurs voies dexposition et
des risques que comportent leur manipulation et leur stockage (voir annexe 5). On
peut obtenir auprs des fabricants ou des fournisseurs des ches de scurit chimique
ou d autres types dinformation sur les risques de nature chimique. Le personnel des
laboratoires o de tels produits sont employs doit avoir accs cette documentation
sous une forme ou une autre, qui peut par exemple tre incluse dans le manuel de
laboratoire ou le guide dhygine et de scurit.
Voies dexposition
On peut tre expos des produits chimiques dangereux par :
1. Inhalation
2. Contact
3. Ingestion
4. Piqre daiguille
5. Lsion cutane.
Stockage des produits chimiques
Il ne faut conserver au laboratoire que la quantit de produits ncessaire pour lusage
quotidien. Les stocks doivent tre entreposs dans une rserve constitue dune pice
ou dun btiment spcialement destins cet effet.
Les produits chimiques ne doivent pas tre rangs par ordre alphabtique.
Rgles gnrales dincompatibilit chimique
Pour prvenir tout risque dincendie ou dexplosion, les produits qui gurent dans la
colonne de gauche du tableau 13 doivent tre entreposs et manipuls de faon viter
tout contact avec avec les substances places en regard, dans la colonne de droite.
Toxicit des produits chimiques
Certains produits chimiques peuvent avoir des effets indsirables sur la sant des per-
sonnes qui les manipulent ou en inhalent les vapeurs. Outre les poisons notoires, un
certain nombre de produits chimiques sont connus pour leurs divers effets toxiques.
Le systme respiratoire, le sang, les poumons, le foie, les reins et le tube digestif,
ainsi que dautres organes et tissus, peuvent tre touchs et mme subir de graves
lsions. Parmi toutes ces substances toxiques, certaines sont reconnues comme tant
tratognes ou cancrognes.
Les vapeurs de certains solvants sont toxiques lorsquelles sont inhales. Outre les
effets plus graves indiqus ci-dessus, lexposition peut entraner une atteinte sans
retentissement visible immdiat sur la sant, mais qui peut se traduire par un dfaut
de coordination, une somnolence et des symptmes du mme ordre, qui augmentent
le risque daccident.
Une exposition rpte ou prolonge la phase liquide dun grand nombre de
solvants organiques peut tre lorigine de lsions cutanes rsultant de la dissolu-
tion des graisses par les solvants ou bien encore dune action corrosive ou allergique.
Des informations dtailles sur les effets toxiques des produits chimiques sont
donnes lannexe 5.
Produits chimiques explosifs
Les azotures, qui entrent souvent dans la composition des solutions antibactriennes,
ne doivent en aucun cas entrer en contact avec le cuivre ou le plomb (canalisation
dvacuation et plomberie), car les azotures de ces mtaux explosent violemment au
moindre choc.
Les thers conservs depuis longtemps et qui ont cristallis sont extrmement insta-
bles et peuvent exploser.
Lacide perchlorique, qui sche sur des surfaces de bois, sur des matriaux de cons-
truction ou du tissu explose et senamme sous leffet dun choc.
Lacide picrique et les picrates dtonnent sous leffet de la chaleur et des chocs.
Renversement accidentel de produits chimiques
La plupart des fabricants de produits chimiques pour laboratoires fournissent des
afches indiquant la conduite tenir en cas de renversement de divers produits. Ces
afches ainsi que le matriel et les produits utiliser en pareil cas se trouvent gale-
ment dans le commerce. Elles devront tre apposes bien en vue dans le laboratoire.
Le matriel suivant doit galement tre fourni :
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
122
Tableau 13. Rgles gnrales dincompatibilit chimique
TYPE DE SUBSTANCE SUBSTANCES INCOMPATIBLES
Mtaux alcalins, comme le sodium, le Dioxyde de carbone, hydrocarbures chlors, eau
potassium, le csium ou le lithium
Halognes Ammoniac, actylne, hydrocarbures
Acide actique, sulfure dhydrogne, aniline, Oxydants, comme lacide chromique, lacide
hydrocarbures, acide sulfurique nitrique, les peroxydes ou les permanganates
1. Ncessaires pour traiter les produits rpandus
2. Vtements protecteurs, tels que gants en caoutchouc pais, surchaussures ou
bottes en caoutchouc, masques respiratoires
3. Pelles et copes
4. Pinces pour saisir les morceaux de verre
5. Serpillires, linges et serviettes en papier
6. Seaux
7. Carbonate de sodium (Na
2
CO
3
) ou monohydrognocarbonate de sodium (bicar-
bonate, NaHCO
3
) pour neutraliser les acides et les produits corrosifs
8. Sable (pour recouvrir les bases rpandues)
9. Dtergent non inammable.
En cas de renversement important dun produit chimique, procder de la manire
suivante :
1. Prvenir le dlgu la scurit comptent.
2. Faire vacuer le personnel qui nest pas indispensable.
3. Donner des soins aux personnes qui ont pu tre contamines.
4. Si le produit rpandu est inammable, teindre toutes les ammes nues, fermer
larrive de gaz dans la salle et les zones voisines, ouvrir les fentres (si possible)
et dbrancher les appareils lectriques susceptibles de produire des tincelles.
5. Eviter de respirer les vapeurs mises par le produit rpandu.
6. Ventiler les locaux en chassant lair vers lextrieur, si lopration est sans danger.
7. Se procurer le matriel ncessaire pour nettoyer (voir ci-dessus).
Gaz comprims et liqus
Le tableau 14 donne des conseils pour le stockage des gaz liqus et comprims.
17. LES RISQUES CHIMIQUES
123
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
124
Pour plus de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter les rfrences
1 et 49 51 ainsi que lannexe 5.
Tableau 14. Stockage des gaz liqus et comprims
BOUTEILLE CONSEILS POUR LE STOCKAGE
Bouteilles de gaz comprims Doivent tre solidement attaches (avec une chane par ex.)
et conteneurs un mur ou une paillasse solide de faon ne pas tre
de gaz liqus
a,b
dplaces par inadvertance.
Doivent tre transportes munies de leur bouchon
protecteur, au moyen dun chariot.
Si elles sont en grande quantit, doivent tre entreposes
dansun btiment appropri distance du laboratoire.
Cette rserve doit tre ferme clef et identie par un
panneau.
Ne doivent pas tre places proximit dun radiateur, de
ammes nues ou dautres sources de chaleur, ni de
matriel lectrique producteur dtincelles, ni directement
exposes au soleil.
Petites cartouches de gaz Ne doivent pas tre incinres.
usage unique
a,b
a
La vanne haute pression principale doit tre ferme lorsque la bouteille nest pas utilise et que la salle
est inoccupe.
b
Les pices dans lesquelles on utilise ou entrepose des bouteilles de gaz inammables doivent tre iden-
ties par des panneaux placs sur les portes.
125
18. Autres types de risques au
laboratoire
Le personnel de laboratoire peut tre expos des dangers lis diverses formes
dnergie et notamment au feu, llectricit, aux rayonnements et au bruit. On trou-
vera dans ce chapitre, les donnes essentielles concernant chacun deux.
Risque dincendie
Il est essentiel quil y ait une collaboration troite entre les dlgus la scurit et les
responsables locaux de la scurit incendie. Outre les risques de nature chimique, tout
incendie prsente un risque de dissmination de matriel biologique infectieux quil
faut prendre en compte, ventuellement pour dcider sil est prfrable dteindre
lincendie ou de le circonscrire.
Il est souhaitable de faire appel aux responsables locaux de la scurit incendie pour
la formation du personnel de laboratoire la prvention, aux mesures immdiates
prendre en cas de sinistre et lutilisation du matriel de lutte contre les incendies.
Des panneaux, judicieusement placs bien en vidence dans chaque salle, dans les
couloirs et les halls, devront mettre en garde le personnel et indiquer la conduite
tenir ainsi que les issues de secours emprunter.
Les causes les plus courantes dincendie au laboratoire sont les suivantes :
1. La surcharge lectrique
2. Le mauvais entretien du circuit lectrique, par ex. une isolation dfectueuse ou en
mauvais tat
3. La longueur excessive des tuyaux de gaz et des rallonges lectriques
4. Les appareils laisss allums inutilement
5. Des appareils ou quipements qui nont pas t conus pour une utilisation en
laboratoire
6. Les ammes nues
7. Des tuyaux de gaz endommags
8. Des ngligences dans la manipulation et lentreposage des produits inammables
ou explosifs
9. Des ngligences dans la sparation des substances chimiques incompatibles
10. La prsence dappareils ou dquipements produisant des tincelles proximit de
produits ou de vapeurs inammables
11. Une ventilation mal adapte ou insufsante.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
126
Le matriel de lutte anti-incendie doit tre plac proximit des portes des salles et
en divers points stratgiques des couloirs et des halls. Ce matriel peut consister en
tuyaux souples, seaux ( eau ou sable) et extincteurs. Les extincteurs doivent tre
rgulirement vris et entretenus et on veillera ce quils ne soient pas prims. Les
divers types dextincteurs et leur usage sont indiqus dans le tableau 15.
Pour de plus amples informations, le lecteur est pri de consulter la rfrence 49.
Risques lectriques
Il est essentiel que toutes les installations et lappareillage lectriques soient vris et
contrls rgulirement, y compris la mise la terre.
Des disjoncteurs et notamment des disjoncteurs diffrentiels doivent tre installs
sur les circuits lectriques des laboratoires. Les disjoncteurs ne protgent pas les
personnes; leur rle est de protger les circuits dune surcharge et, par consquent,
dviter les incendies. Les disjoncteurs diffrentiels sont eux destins protger les
personnes des chocs lectriques.
Tout lappareillage lectrique du laboratoire doit tre reli la terre, au moyen de
prises de terre, de prfrence.
La totalit des appareils et circuits lectriques du laboratoire doit tre conforme
aux normes nationales de scurit lectrique.
Bruit
Les effets dune exposition durable un bruit excessif sont insidieux. Certains
appareils de laboratoire, comme par exemple certains types de lasers ou encore les
installations qui abritent des animaux, peuvent entraner une importante exposition
de ce genre. On peut procder des mesures acoustiques pour dterminer le risque
dexposition au bruit. Si les donnes obtenues le justient, on pourra envisager des
Tableau 15. Les divers types dextincteurs et leur usage
TYPE UTILISER SUR NE PAS UTILISER SUR
Eau Papier, bois, tissu Feux dorigine lectrique,
liquides inammables,
mtaux incandescents
Dioxyde de carbone (CO
2
) Liquides et gaz Mtaux alcalins, papier
Gaz extincteurs inammables, feux
dorigine lectrique
Poudre Liquides et gaz Instruments et matriel
inammables, mtaux rutilisables car les rsidus
alcalins, feux dorigine sont trs difciles
lectrique liminer
Mousse Liquides inammables Feux dorigine lectrique
mesures techniques telles que lencoffrage des quipements bruyants ou la pose de
barrires ou dcrans anti-bruit autour de ces quipments ou entre les zones bruyantes
et les autres zones de travail. Si lon ne peut pas rduire le niveau de bruit et que le
personnel soit expos en permanence un bruit excessif, il faudra mettre en place un
programme de protection auditive prvoyant le port doreillettes de protection pour
les travaux en ambiance bruyante ainsi quune surveillance mdicale du personnel
pour dterminer les effets de cette nuisance.
Rayonnements ionisants
La radioprotection a pour but de mettre les sujets humains labri des effets nocifs
des rayonnements ionisants, effets qui consistent notamment :
1. En effets somatiques, par ex. des symptmes cliniques observables chez les sujets
exposs. Il sagit en particulier de cancers radio-induits, par exemple des leucmies
ou encore des cancers osseux, pulmonaires ou cutans, qui peuvent napparatre
que plusieurs annes aprs lirradiation. Dautres effets moins graves peuvent con-
sister en petites lsions cutanes, alopcie, anomalies sanguines, lsions des voies
digestives ou cataracte.
2. En effets hrditaires, par ex. des symptmes qui sobservent dans la descendance
des sujets exposs. Les effets hrditaires de lirradiation des gonades consistent
notamment en anomalies chromosomiques ou mutations gniques. Lirradiation
forte dose des cellules germinales prsentes dans les gonades peut galement
entraner la mort cellulaire, avec pour consquence des troubles de la fertilit chez
les deux sexes et une modication du cycle menstruel chez la femme. Une exposi-
tion du ftus pendant son dveloppement, en particulier entre la huitime et la
quinzime semaine de la grossesse, peut accrotre le risque de malformations con-
gnitales, darriration mentale ou de cancers radio-induits plus tard dans la vie.
Les principes de la radioprotection contre les rayonnements ionisants
Pour limiter les effets nocifs des rayonnements ionisants, il faut rglementer lutilisa-
tion des radio-isotopes, qui doit toujours respecter les normes nationales en la
matire. La mise en uvre de la radioprotection repose sur quatre principes :
1. Rduire le plus possible la dure dexposition
2. Se tenir le plus loin possible de la source de rayonnement
3. Disposer un blindage autour de la source de rayonnement
4. Substituer aux radionuclides dautres techniques non radiomtriques.
Les mesures de protection sont les suivantes :
1. Dure dexposition. On peut rduire la dure dexposition au cours des manipula-
tions de substances radioactives :
En sexerant pratiquer les techniques nouvelles et non familires sans utiliser
de radionuclide jusqu ce quon les matrise parfaitement
18. AUTRES TYPES DE RISQUES AU LABORATOIRE
127
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
128
En utilisant les radionuclides en temps voulu, avec prudence et sans prcipi-
tation
En veillant ce quune fois utilises, toutes les sources radioactives soient
immdiatement replaces dans leur lieu de stockage
En liminant frquemment du laboratoire les dchets radioactifs
En passant le moins de temps possible dans la zone ou dans le laboratoire o
il y a risque dirradiation
En sexerant bien grer et planier les manipulations de substances radio-
actives et leur dure.
Moins on passe de temps dans le champ dirradiation, plus la dose reue indi-
viduellement est faible, comme le montre lquation suivante :
2. Distance la source. Pour la plupart des rayonnements g ou X, le dbit de dose
varie comme linverse du carr de la distance une source ponctuelle :
On voit donc que si on double la distance entre la source de rayonnement et
loprateur, lexposition sera divise par quatre au cours de la mme dure. On
utilise divers dispositifs et systmes mcaniques pour augmenter la distance entre
loprateur et la source, par ex. des pinces de divers types et notamment long
manche ainsi que des dispositifs pour le pipettage distance. A noter quune petite
augmentation de la distance peut se traduire par une rduction non ngligeable
du dbit de dose.
3. Blindage. En plaant entre la source et loprateur ou les autres membre du per-
sonnel des crans capables dabsorber lnergie rayonne ou de lattnuer, on peut
limiter leur exposition. Le choix du type dcran et de son paisseur dpend de la
capacit de pntration du rayonnement (cest-a-dire de sa nature et de son
nergie). Des crans en rsine acrylique, en bois ou en mtal lger, dune pais-
seur de 1,3 1,5cm protgent contre les particules b trs nergtiques, mais pour
protger contre le rayonnement g ou X de haute nergie, il est ncessaire dutiliser
des crans au plomb de densit leve.
4. Substitution. Il ne faut pas utiliser de radionuclides sil existe dautres techniques.
Si lon ne peut pas substituer une autre technique une mthode radio-isotopique,
il faudra utiliser le radionuclide dont le rayonnement soit le moins pntrant ou
le moins nergtique possible.
Rgles de scurit pour le travail avec des radionuclides
Il y a quatre types de rgles pour le travail avec des substances radioactives, savoir :
1. Celles qui concernent la zone dirradiation
D de dose Constante 1 distance bit =
2
Dose Dbit emps = de dose t
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE

En utilisant les radionuclides en temps voulu, avec prudence et sans prcipi-
tation
En veillant ce quune fois utilises, toutes les sources radioactives soient
immdiatement replaces dans leur lieu de stockage
En liminant frquemment du laboratoire les dchets radioactifs
En passant le moins de temps possible dans la zone ou dans le laboratoire o
il y a risque dirradiation
En sexerant bien grer et planier les manipulations de substances radio-
actives et leur dure.
Moins on passe de temps dans le champ dirradiation, plus la dose reue indi-
viduellement est faible, comme le montre lquation suivante :
2. Distance la source. Pour la plupart des rayonnements g ou X, le dbit de dose
varie comme linverse du carr de la distance une source ponctuelle :
On voit donc que si on double la distance entre la source de rayonnement et
loprateur, lexposition sera divise par quatre au cours de la mme dure. On
utilise divers dispositifs et systmes mcaniques pour augmenter la distance entre
loprateur et la source, par ex. des pinces de divers types et notamment long
manche ainsi que des dispositifs pour le pipettage distance. A noter quune petite
augmentation de la distance peut se traduire par une rduction non ngligeable
du dbit de dose.
3. Blindage. En plaant entre la source et loprateur ou les autres membre du per-
sonnel des crans capables dabsorber lnergie rayonne ou de lattnuer, on peut
limiter leur exposition. Le choix du type dcran et de son paisseur dpend de la
capacit de pntration du rayonnement (cest-a-dire de sa nature et de son
nergie). Des crans en rsine acrylique, en bois ou en mtal lger, dune pais-
seur de 1,3 1,5cm protgent contre les particules b trs nergtiques, mais pour
protger contre le rayonnement g ou X de haute nergie, il est ncessaire dutiliser
des crans au plomb de densit leve.
4. Substitution. Il ne faut pas utiliser de radionuclides sil existe dautres techniques.
Si lon ne peut pas substituer une autre technique une mthode radio-isotopique,
il faudra utiliser le radionuclide dont le rayonnement soit le moins pntrant ou
le moins nergtique possible.
Rgles de scurit pour le travail avec des radionuclides
Il y a quatre types de rgles pour le travail avec des substances radioactives, savoir :
1. Celles qui concernent la zone dirradiation
18. AUTRES TYPES DE RISQUES AU LABORATOIRE
129
Figure 12. Symbole international
indiquant un risque
dirradiation
ATTENTION
RADIOACTIVITE

2. Celles qui concerne la paillasse o seffectue la manipulation


3. Celles qui concernent la gestion des dchets
4. Celles qui concernent les dossiers et la conduite tenir en situation durgence.
Parmi les rgles les plus importantes, on peut citer les suivantes :
1. Zone dirradiation
Nutiliser de substances radioactives que dans les zones spcialement destines
cet usage.
Seul le personnel indispensable doit tre prsent.
Porter un quipement protecteur individuel, notamment une tenue de labo-
ratoire approprie, des lunettes de scurit et des gants jetables.
Porter un dosimtre personnel pour la surveillance de lexposition au rayon-
nement.
Les laboratoires o sont manipuls des radionuclides doivent tre conus de
manire ce que le connement, le nettoyage et la dcontamination soient sim-
plis. La zone de travail sur les radionuclides doit tre situe dans une pice de
petites dimensions contigu au laboratoire principal ou dans un secteur spcial de
celui-ci, distance des autres zones de travail. Des panneaux portant le symbole
international de risque dirradiation doivent tre apposs lentre de la zone
dirradiation (gure 12).
2. Paillasse o seffectue la manipulation
Utiliser des plateaux contenant des matriaux absorbants jetables pour recueil-
lir les liquides rpandus.
Limiter la quantit de radionuclide utilise.
Disposer un cran de protection autour des sources de rayonnement, de la pail-
lasse et des secteurs o sont placs les dchets radioactifs.
Marquer le symbole de radioactivit sur les conteneurs de produits radio-
actifs en indiquant galement la nature du radionuclide, son activit et la date
de la mesure.
Utiliser des radiodosimtres pour le contrle des zones de travail, des vte-
ments protecteurs et des mains une fois le travail achev.
Utiliser des conteneurs de transport correctement blinds.
3. Dchets radioactifs
Eliminer frquemment les dchets radioactifs de la zone de travail.
4. Dossiers et conduite tenir en situation durgence
Tenir un registre exact de lutilisation et de llimination des produits radio-
actifs.
Compulser les dossiers dosimtriques la recherche dun dpassement
ventuel de la dose limite pour certains produits.
Mettre au point des plans daction en cas de situation durgence et faire
procder rgulirement des exercices.
En cas durgence, soccuper en premier lieu des accidents.
Nettoyer fond les zones contamines.
En cas de ncessit, demander laide des services de scurit.
Rdiger un rapport en cas dincident et larchiver.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
130
PARTIE VII
La scurit :
organisation
et formation
19. Le responsable de la scurit
et le comit de scurit
133
Il est indispensable que tout laboratoire ait un rglement de scurit dtaill, un
manuel de scurit et un programme pour leur mise en application. La responsabi-
lit en incombe normalement au directeur ou au chef de ltablissement ou du labo-
ratoire, lequel peut cependant dlguer certaines tches un responsable de la scu-
rit (dlgu la scurit) ou dautres membres comptents du personnel.
La scurit au laboratoire est galement laffaire de tous, quil sagisse des chefs de
service ou de leurs subordonns, et chaque membre du personnel est responsable de
sa scurit et de celle de ses collgues. Chacun est tenu de travailler dans le respect des
rgles de scurit et doit rendre compte son suprieur hirarchique de toute action
ou situation qui y contreviendraient ainsi que de tout incident.
Il est souhaitable de charger des consultants extrieurs ou des membres du per-
sonnel de procder des audits priodiques sur les conditions de scurit.
Le dlgu la scurit
Dans la mesure du possible, on nommera un responsable de la scurit biologique qui
sera charg de veiller ce que le rglement et les programmes de scurit soient sys-
tmatiquement respects partout dans le laboratoire. Cest le dlgu la scurit qui
remplit ces obligations au nom du directeur de ltablissement ou du laboratoire. Dans
les petites units, le dlgu la scurit peut tre un microbiologiste ou un membre
du personnel technique, qui assure ces fonctions temps partiel dans des conditions
dtermines. Quelle que soit la part dactivit consacre la scurit, la personne
dsigne doit possder les comptences professionnelles requises pour proposer,
examiner ou approuver les mesures prendre dans le prolongement des oprations
de connement ou de scurit biologiques. Le dlgu la scurit doit faire appli-
quer la rglementation et les directives nationales et internationales en matire de
scurit biologique et aider le laboratoire tablir des mthodes de travail norma-
lises. Il doit avoir une formation technique en microbiologie et en biochimie avec
des connaissances de base en sciences physiques et en biologie. Il est galement tout
fait souhaitable que le dlgu la scurit connaisse bien les pratiques et les rgles
de scurit au laboratoire et dans le domaine clinique, notamment en ce qui concerne
le connement du matriel biologique et les principes techniques relatifs la con-
ception, au fonctionnement et la maintenance des installations. Il doit galement
tre capable de communiquer efcacement avec le personnel administratif et tech-
nique ainsi quavec le personnel de maintenance et de nettoyage.
Les tches du dlgu la scurit consisteront notamment :
1. Procder des consultations sur la conformit aux rgles de scurit et de sret
biologiques ainsi quaux impratifs techniques.
2. Organiser des audits de bioscurit internes priodiques, sur les techniques, les modes
opratoires et les protocoles, les agents biologiques, le matriel et lquipement.
3. Sentretenir avec les personnes concernes des infractions aux consignes et proto-
coles de scurit biologique.
4. Vrier auprs de tous les membres du personnel que ceux-ci ont reu une for-
mation approprie en matire de scurit biologique.
5. Assurer une formation continue en matire de scurit biologique.
6. Enquter aprs tout incident d la dissmination ventuelle de matriel, poten-
tiellement infectieux ou toxique, rendre compte des rsultats au directeur du la-
boratoire et au comit de scurit biologique en leur faisant des recommandations
appropries.
7. Cooprer avec le service mdical touchant la possibilit dinfections contractes
par le personnel du laboratoire dans lexercice de ses activits.
8. Veiller ce que la dcontamination soit correctement effectue aprs renversement
accidentel de liquides ou autres incidents survenus avec du matriel infectieux.
9. Veiller la bonne gestion des dchets.
10. Veiller ce que tout appareil ou quipement soit convenablement dcontamin
avant une rparation ou un contrle.
11. Sensibiliser le personnel aux attitudes de la collectivit vis--vis des questions
touchant la sant et lenvironnement.
12. Etablir la marche suivre approprie pour limportation et lexportation par le
laboratoire de matriel biologique pathogne, en conformit avec la rglementa-
tion nationale.
13. Analyser, sous langle de la scurit, tous les plans, protocoles et modes
opratoires utiliss dans les travaux de recherche.
14. Etablir un systme pour faire face aux situations durgence.
Le comit de scurit biologique
Il convient de constituer un comit de scurit biologique dont le rle sera de dnir
la politique de ltablissement en matire de scurit biologique et dlaborer un code
de bonnes pratiques. Le comit doit galement examiner les protocoles de recherche
comportant la manipulation dagents infectieux, lutilisation danimaux, la mise en
uvre de techniques de recombinaison de lADN ou lutilisation dorganismes gn-
tiquement modis. Le comit pourra galement avoir pour fonctions dvaluer les
risques, dlaborer un nouveau rglement en matire de scurit biologique et dar-
bitrer les conits sur les questions de scurit.
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
134
La composition dun comit de scurit doit tre reprsentative des diverses
branches professionnelles de ltablissement ainsi que de ses spcialits scientiques.
La composition dun comit de scurit devrait, au minimum, tre la suivante :
1. Un ou plusieurs dlgus la scurit
2. Des scientiques
3. Du personnel mdical
4. Un ou plusieurs vtrinaires (en cas dexprimentation animale)
5. Des reprsentants du personnel technique
6. Des reprsentants de la direction du laboratoire.
Le comit de scurit biologique doit galement prendre conseil auprs des dlgus
la scurit des divers services et des spcialistes de la scurit (par ex. de la radio-
protection, de lhygine et scurit industrielles, de la lutte contre lincendie, etc.) et
il pourra loccasion faire appel des spcialistes extrieurs de diffrents domaines
apparents, aux autorits locales et aux organismes nationaux de rglementation.
Lorsquun protocole particulirement sensible ou litigieux est en discussion, il peut
galement tre utile davoir lavis de membres de la communaut.
19. LE RESPONSABLE DE LA SCURIT ET LE COMIT DE SCURIT
135
136
20. La scurit du personnel de
maintenance et dentretien
Le bon fonctionnement dun laboratoire et sa scurit reposent dans une large mesure
sur le personnel de maintenance et dentretien et il est donc essentiel quil reoive la
formation voulue aux questions de scurit.
Services de maintenance des appareils et des btiments
Les ingnieurs et les ouvriers qualis qui assurent la maintenance et la rparation des
btiments, des installations et de lappareillage doivent avoir une certaine connais-
sance des activits du laboratoire ainsi que des rgles et consignes de scurit.
Lessai des appareils aprs rvision, par exemple les contrles defcacit des
enceintes de scurit biologique aprs le remplacement des ltres pourra tre con
au dlgu la scurit biologique ou effectu sous sa direction.
Les tablissements et laboratoires qui ne disposent pas de leurs propres services
techniques de maintenance doivent entretenir de bonnes relations avec les prestataires
de services locaux et les familiariser avec leurs quipements et leurs activits.
Les ingnieurs et le personnel de maintenance ne doivent pas pntrer dans des
laboratoires de connement scurit biologique niveaux 3 ou 4 sans une autorisa-
tion dlivre par le dlgu la scurit ou le chef de laboratoire ou sans leur sur-
veillance.
Nettoyage
Dans les laboratoires de connement scurit biologique niveau 3 ou de conne-
ment de haute scurit scurit biologique niveau 4, le nettoyage doit tre fait par
le personnel du laboratoire. Dans le cas contraire, lquipe de nettoyage ne doit inter-
venir dans ces laboratoires quavec lautorisation du dlgu la scurit biologique
ou du chef de laboratoire ou sous leur surveillance.
137
21. Programmes de formation
Une formation continue en cours demploi est indispensable pour maintenir la sen-
sibilisation aux questions de scurit parmi le personnel de laboratoire et le person-
nel de maintenance ou dentretien. Il appartient aux chefs de laboratoire, avec laide
du dlgu la scurit et dautres personnes comptentes, dassurer la formation du
personnel. Lefcacit de cette formation, comme dailleurs de toute formation en
sant et scurit au travail, dpend dun certain nombre de facteurs : engagement de
la Direction, motivations des uns et des autres, bonne formation professionnelle ini-
tiale, bonne communication interpersonnelle et en n de compte, buts et objectifs de
ltablissement. Les points ci-dessous sont essentiels pour lefcacit du programme
de formation la scurit biologique.
1. Evaluer les besoins. Il sagit par l de dnir les tches accomplir, par ordre
dimportance (eu gard leur frquence, ncessit et complexit) et dtail des
oprations ncessaires leur ralisation.
2. Fixer les objectifs de la formation. Cest--dire les comportements observables
que le personnel est suppos adopter dans son travail lissue de sa formation.
Ces objectifs pourront tre xs en tenant compte des conditions dans lesquelles
le personnel effectue certaines activits ou adopte certaines attitudes et du niveau
de comptence exig.
3. Prciser le contenu de la formation et les moyens pdagogiques utiliss. On
entend par contenu de la formation les connaissances ou comptences que le per-
sonnel doit acqurir pour atteindre les objectifs xs en matire de comportement.
Ce sont les personnes qui connaissent le type de travail et ses exigences qui sont
le mieux mme de dnir le contenu du programme de formation la scurit
biologique. On peut galement insister sur les rsultats dexercices consistant
rsoudre divers problmes ou mettre au point un systme dapprentissage pour
corriger les erreurs commises par le personnel dans lutilisation dune technique
donne. Il nest pas certain quil existe une mthode pdagogique (confrences,
enseignement tlvis, enseignement assist par ordinateur, vido interactive, etc.)
qui soit meilleure que les autres. Les besoins particuliers du personnel en forma-
tion, la composition du groupe, etc. jouent cet gard un rle trs important.
4. Prendre en compte les aptitudes individuelles lapprentissage. Une formation
bien pense doit prendre en compte les caractristiques et particularits des indi-
vidus. Chaque individu ou groupe dindividus peut diffrer par ses aptitudes, son
bagage, sa culture, la langue dans laquelle il sexprime et son niveau de comp-
tence avant formation. La mthode utilise pourra tre dicte par le jugement que
les personnes en formation portent sur la manire dont le programme peut
amliorer leur comptence professionnelle et leur scurit personnelle. Par
exemple, certains individus ont une approche visuelle ou plutt pratique de lap-
prentissage, alors que dautres prfrent travailler sur des documents crits. Il faut
galement tre lcoute de tout besoin particulier exprim par les personnes en
formation; par exemple adapter les cours pour les malentendants. Outre la prise
en compte de tous ces aspects, il est recommand toute personne qui prpare un
programme de formation la scurit de se familiariser avec les principes de la
formation des adultes.
5. Prciser les conditions de lapprentissage. Aucun lment de la formation, quil
sagisse dun cours, dune vidocassette que lon visionne ou de documents crits
que lon consulte, ne doit tre en contradiction ou sans rapport avec lapprentis-
sage de la technique ou de la question enseigne ou encore provoquer un blocage
de cet apprentissage. Par exemple, si le but de la formation est damliorer lapti-
tude rsoudre des problmes, la mthode pdagogique doit privilgier la re-
xion et le raisonnement plutt que la mmorisation pure et simple. La formation
dispense doit requrir des apprenants quils se montrent productifs et ragissent
de manire approprie (rponse positive, exacte ou crdible). En outre, tout
lment de la formation qui fournit une occasion dapplication pratique dans des
conditions analogues celles du poste de travail facilitera la mise en uvre en si-
tuation relle de la comptence acquise par lapprenant.
6. Evaluer la formation. Elle a pour but de fournir des informations qui permet-
tront de savoir si linstruction dispense a atteint son but. Cette valuation se fait
gnralement de quatre manires :
mesure de la raction de lapprenant la formation dispense
mesure du degr de restitution dont lapprenant est capable ou de ses
rsultats
apprciation des changements de comportement dans le poste de travail
recherche et valuation de rsultats tangibles par rapport aux buts et objectifs
de ltablissement.
Pour procder une valuation exhaustive de la formation, il faut rpondre ces
quatre points. Le mode dvaluation le moins efcace consiste ne prendre en
considration que les ractions de lapprenant linstruction dispense car elles
peuvent tre sans vritable rapport avec ce qui a t effectivement appris. Il ne faut
en aucun cas utiliser cette mthode comme seule mesure de lefcacit de la
formation.
7. Rviser la formation. Du fait de la multiplicit des critres de mesure des rsul-
tats, il est rare quune valuation conduise la conclusion que le programme de
formation est un succs ou un chec total. En gnral, les rsultats de lvaluation
indiquent que certaines parties du cours ont t mieux comprises, retenues ou
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
138
appliques que dautres. Si, la suite dun programme de formation, on constate
des hauts et des bas ou des lacunes dans les connaissances ou les comptences
souhaites, cest peut-tre le signe quil faut envisager de prolonger la formation,
de changer de mthodes pdagogiques ou de recruter des formateurs plus
comptents.
LOMS peut fournir divers outils pour la formation la scurit microbiologique.
21. PROGRAMMES DE FORMATION
139
PARTIE VIII
Liste des contrles
de scurit
22. Liste des contrles de scurit
143
Cette liste est destine faciliter lvaluation du degr de scurit et de sret micro-
biologiques dans les laboratoires biomdicaux.
Locaux
1. Les principes directeurs relatifs la mise en service et lagrment du laboratoire
ont-ils t pris en compte pour la construction des installations ou les expertises
ultrieures ?
2. Les locaux sont-ils conformes la rglementation nationale et locale en matire
de travaux publics, notamment en ce qui concerne la rsistance aux catastrophes
naturelles ?
3. Les locaux sont-ils gnralement en bon ordre et non encombrs ?
4. Sont-ils propres ?
5. Y a t-il des dfauts de structure au niveau des sols ?
6. Les sols et les marches descaliers sont-ils rguliers et antidrapants ?
7. Est-ce que lespace est sufsant pour pouvoir travailler sans danger ?
8. Est-ce que les dgagements et les couloirs sont assez larges pour le passage du per-
sonnel et des gros appareils ?
9. Les paillasses et autres plans de travail, le mobilier et les installations sont-ils en
bon tat ?
10. La surface des paillasses et autres plans de travail est-elle rsistante aux solvants et
aux produits chimiques corrosifs ?
11. Y a-t-il un lavabo dans chaque salle du laboratoire ?
12. Est-ce que la construction et lentretien des locaux permettent dempcher
lentre et linstallation de rongeurs ou darthropodes ?
13. Est-ce que toutes les conduites deau chaude ou de vapeur apparentes sont isoles
ou protges pour que le personnel ne se brle pas ?
14. Le laboratoire dispose-t-il dun groupe lectrogne pour assurer le relais en cas de
panne lectrique ?
15. Laccs aux locaux du laboratoire peut-il tre limit aux seules personnes
autorises ?
16. A-t-on procd une valuation du risque pour sassurer que le laboratoire
dispose des installations et quipements voulus pour lexcution de ses tches ?
Entreposage
1. Les systmes dentreposage et de rangement (tagres, etc.) sont-ils conus pour
que le matriel entrepos ne puisse ni glisser, ni se renverser, ni tomber ?
2. Les aires dentreposage sont-elles encombres de dbris, dobjets inutiles et
inutilisables sur lesquels on pourrait trbucher, qui pourraient prendre feu ou
hberger de la vermine ?
3. Les conglateurs et aires dentreposage peuvent-ils tre ferms clef ?
Assainissement et locaux pour le personnel
1. Les locaux sont-ils propres, bien tenus et dans de bonnes conditions dhygine ?
2. Dispose-t-on deau potable ?
3. Y a-t-il des toilettes et les lavabos spars pour les hommes et les femmes et sont-
ils satisfaisants et propres ?
4. Y trouve-t-on de leau chaude et froide, du savon et des essuie-mains ?
5. Les vestiaires sont-ils spars pour les hommes et pour les femmes ?
6. Chaque membre du personnel peut-il laisser ses vtements de ville dans un endroit
prvu cet effet (armoires, par ex.) ?
7. Une pice est-elle rserve au personnel pour le djeuner, etc. ?
8. Le niveau sonore est-il acceptable ?
9. Le ramassage des poubelles contenant les dchets ordinaires est-il satisfaisant ?
Chauffage et ventilation
1. La temprature du lieu de travail est-elle confortable ?
2. Y a-t-il des stores aux fentres situes en plein soleil ?
3. La ventilation est-elle satisfaisante (air renouvel par ex. au moins six fois par
heure) en particulier dans les pices o elle est mcanique ?
4. Le systme de ventilation est-il muni de ltres HEPA ?
5. La ventilation mcanique perturbe-t-elle les ux laminaires lintrieur et autour
des enceintes de scurit biologique et des hottes ou sorbonnes ?
Eclairage
1. Lclairage gnral est-il satisfaisant (par ex. 300 400lux) ?
2. Un clairage local est-il fourni au-dessus des paillasses ?
3. Les pices sont-elles partout bien claires ou subsiste-t-il des coins sombres dans
les pices et les couloirs ?
4. Les tubes uorescents sont-ils parallles la surface des paillasses et des plans de
travail ?
5. Les tubes uorescents ont-ils un spectre quilibr ?
Services
1. Chaque salle du laboratoire est-elle quipe avec sufsamment dviers, de robinets
deau et de gaz et de prises de courant pour que lon puisse travailler sans danger ?
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
144
2. A-t-on mis en place un programme convenable dinspection et de maintenance
pour les fusibles, les lampes et tubes, les cbles, les canalisations, etc. ?
3. Les pannes sont-elles rpares dans un dlai raisonnable ?
4. Existe-t-il un service technique interne charg de la maintenance avec des
ingnieurs et des ouvriers comptents ayant une certaine connaissance des travaux
qui sont effectus dans le laboratoire ?
5. Laccs de ce personnel technique de maintenance aux locaux du laboratoire
est-il rglement et enregistr ?
6. Sil nexiste pas de service technique interne charg de la maintenance, a-t-on pris
contact avec des ingnieurs et des constructeurs du lieu pour les familiariser avec
lappareillage et les activits du laboratoire ?
7. Le laboratoire dispose-t-il dun service de nettoyage ?
8. Laccs de lquipe de nettoyage aux divers locaux du laboratoire est-il rglement
et enregistr ?
9. Existe-t-il un service informatique et ce service est-il scuris ?
Sret biologique en laboratoire
1. A-t-on procd une analyse qualitative des risques pouvant peser sur le
laboratoire an de dterminer contre quels risques le laboratoire doit tre
protg ?
2. A-t-on dni les risques acceptables et les paramtres pour la planication de la
rponse aux incidents ?
3. Lorsquil ny a personne, le btiment est-il bien totalement ferm clef ?
4. Les portes et les fentres sont-elles construites pour rsister une effraction ?
5. Les pices contenant des matriels dangereux et des appareils coteux sont-elles
fermes clef lorsquil ny a personne ?
6. Laccs ces pices, appareils et matriels est-il rglement et enregistr ?
Prvention des incendies et protection contre le feu
1. Y a-t-il un systme dalarme incendie ?
2. Les portes coupe-feu sont-elles en bon tat ?
3. Le laboratoire dispose-t-il de dtecteurs dincendie et ces dtecteurs sont-ils en
bon tat de marche et rgulirement vris ?
4. Les postes dalarme incendie sont-ils accessibles ?
5. Les sorties sont-elles toutes indiques par un panneau lumineux adquat ?
6. Laccs aux sorties est-il indiqu lorsquil nest pas directement visible ?
7. Toutes les sorties sont-elles dgages et non dissimules ou encombres par des
lments dcoratifs, du mobilier ou des appareils et les portes sont-elles dver-
rouilles lorsque le btiment est occup ?
8. Laccs aux sorties est-il prvu pour que lon puisse fuir sans avoir traverser une
zone haut risque ?
9. Les sorties dbouchent-elles toutes lextrieur ?
22. LISTE DES CONTRLES DE SCURIT
145
10. Les couloirs, dgagements, passages, etc. sont-ils libres et dgags pour permettre
la circulation du personnel et du matriel de lutte anti-incendie ?
11. Le matriel et les quipements de lutte anti-incendie sont-ils facilement identi-
ables par un code de couleur appropri ?
12. Existe-t-il des extincteurs portatifs toujours pleins, en bon tat et la place prvue ?
13. Les salles du laboratoire o existe un risque dincendie sont-elles quipes
dextincteurs et de couvertures anti-feu utilisables en cas durgence ?
14. Si des gaz ou des liquides inammables sont utiliss dans une pice, la ventilation
mcanique est-elle sufsante pour liminer les vapeurs avant quelles natteignent
une concentration dangereuse ?
15. A-t-on appris au personnel comment se comporter en cas dincendie ?
Stockage des liquides inammables
1. Est-ce que les rserves de liquides inammables sont stockes dans un endroit
spar du btiment principal ?
2. Un panneau de risque incendie est-il visiblement appos lentre du local ?
3. Le local est-il quip dun systme de ventilation naturelle ou force distinct du
btiment principal ?
4. Les interrupteurs lectriques sont-ils antidagrants ou placs lextrieur du
btiment ?
5. Le systme dclairage du local est-il antidagrant pour que les vapeurs ne
risquent pas de senammer au contact des tincelles ?
6. Les liquides inammables sont-ils conservs dans des rcipients ventils appro-
pris, fabriqus avec des matriaux incombustibles ?
7. Le contenu des rcipients est-il correctement indiqu sur ltiquette ?
8. Des extincteurs ou des couvertures anti-feu appropris sont-ils placs lextrieur,
mais proximit de la rserve de liquides inammables ?
9. Des panneaux Dfense de fumer sont-ils apposs bien visiblement lintrieur
et lextrieur de la rserve ?
10. Est-ce que la quantit de produits inammables conservs dans les salles du
laboratoire est la plus faible possible ?
11. Ces produits sont-ils conservs dans des armoires de scurit anti-feu ?
12. Ces armoires portent-elles des panneaux indiquant la prsence de produits
inammables et un risque dincendie ?
13. Le personnel a-t-il appris transporter et utiliser correctement les liquides
inammables ?
Gaz comprims et liqus
1. Chaque bouteille de gaz portable est-elle tiquete correctement (code de couleur
et contenu) ?
2. Le bon tat des bouteilles de gaz et de leurs manodtendeurs est-il rgulirement
vri ?
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
146
3. Les manodtendeurs sont-ils rgulirement entretenus ?
4. Quand une bouteille est utilise, se sert-on dun manodtendeur ?
5. Quand les bouteilles ne sont pas utilises ou sont transportes, sont-elles fermes
par un bouchon protecteur ?
6. Toutes les bouteilles de gaz comprims sont-elles ranges de manire ne pas
pouvoir tomber, notamment en cas de catastrophe naturelle ?
7. Les bouteilles et les fts de gaz de ptrole liqu sont-ils placs loin des sources
de chaleur ?
8. Le personnel a-t-il appris utiliser et transporter correctement les gaz com-
prims ou liqus ?
Risques lectriques
1. Toutes les installations neuves, remplaces, modies ou rpares sont-elles con-
formes aux normes nationales en matire de scurit lectrique et maintenues telles ?
2. Le cblage intrieur des btiments est-il reli la terre ?
3. Tous les circuits du laboratoire sont-ils munis de disjoncteurs et de disjoncteurs
diffrentiels ?
4. Les appareils lectriques sont-ils tous agrs par un laboratoire dessai ?
5. Les cbles dalimentation souples de tous les appareils sont-ils aussi courts que
possible, en bon tat, sans usure, dommage ou raccord ?
6. Chaque prise nest-elle utilise que pour un seul appareil (pas dadaptateurs) ?
Protection individuelle
1. Tous les membres du personnel du laboratoire disposent-ils de vtements pro-
tecteurs dont le modle et ltoffe ou le matriau sont approuvs, tels que blouses,
sarraus, combinaisons, tabliers ou gants ?
2. Le personnel qui travaille sur des produits chimiques dangereux ou sur des sub-
stances radioactives ou cancrognes dispose-t-il daccessoires de protection sup-
plmentaires tels que tabliers et gants de caoutchouc pour la manipulation des
produits chimiques et le traitement des liquides rpandus ou gants rsistants la
chaleur pour le dchargement des autoclaves et des fours ?
3. Le personnel dispose-t-il de lunettes de scurit, de lunettes coques et dcrans
faciaux (visires) ?
4. Existe-t-il des postes pour le rinage des yeux ?
5. Existe-t-il des douches durgence ?
6. Les mesures de radioprotection sont-elles conformes aux normes nationales et
internationales, et comportent-elles la fourniture de dosimtres individuels ?
7. Le laboratoire dispose-t-il de masques respiratoires rgulirement nettoys, ds-
infects, vris et rangs de manire hyginique dans un endroit propre ?
8. Les masques respiratoires sont-ils dots des cartouches ltrantes de modle appro-
pri, notamment de ltres HEPA pour retenir les micro-organismes et de ltres
spciaux pour les gaz ou les particules ?
22. LISTE DES CONTRLES DE SCURIT
147
9. Vrie-t-on si les masques respiratoires sont bien adapts aux personnes qui
doivent les porter ?
Sant et scurit du personnel
1. Existe-t-il un service de mdecine du travail ?
2. Y a-t-il des armoires pharmacie ou trousses de premiers soins aux endroits
adquats ?
3. Y a-t-il des secouristes qualis ?
4. Ces secouristes sont-ils forms pour les premiers soins correspondant aux dangers
propres au laboratoire : contact avec des produits chimiques corrosifs, ingestion
accidentelle de toxiques ou de matriel biologique infectieux ?
5. Le personnel qui ne travaille pas dans le laboratoire (nettoyage et administration)
est-il inform des risques que reprsente le matriel biologique manipul ?
6. Des afches judicieusement places indiquent-elles o se trouvent les postes de
premiers secours, les numros de tlphone des services durgence, etc.
7. Les femmes en ge de procrer sont-elles informes des consquences que peut
avoir la manipulation de certains micro-organismes, substances cancrognes,
mutagnes ou tratognes ?
8. A-t-on dit aux femmes en ge de procrer que si elles sont enceintes, ou pensent
ltre, elles doivent prvenir le membre responsable du service mdical ou du per-
sonnel scientique, de faon que des mesures concernant leur travail puissent tre
prises si ncessaire ?
9. Existe-t-il un programme de vaccination adapt au travail du laboratoire ?
10. Peut-on pratiquer des tests cutans ou existe-t-il un service de radiologie pour la
surveillance mdicale du personnel qui travaille sur des matriels contenant des
bacilles tuberculeux ou dautres matriels justiant ce genre de contrle ?
11. Existe-t-il un registre bien tenu des accidents et des maladies ?
12. Des panneaux de prvention des accidents et de mise en garde sont-ils utiliss pour
rduire les accidents du travail ?
13. Le personnel est-il entran suivre les instructions appropries pour la
scurit biologique ?
14. Le personnel du laboratoire est-il invit signaler les risques dexposition ?
Appareils et quipements de laboratoire
1. Tous les appareils sont-ils agrs sur le plan de la scurit ?
2. Existe-t-il des protocoles pour la dcontamination du matriel avant la
maintenance ?
3. Les enceintes de scurit biologique et les hottes ou sorbonnes sont-elles rgulire-
ment vries et rvises ?
4. Les autoclaves et autres appareils fonctionnant sous pression sont-ils rgulire-
ment inspects ?
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
148
5. Les rotors et les pots centrifuger sont-ils rgulirement inspects ?
6. Les ltres HEPA sont-ils rgulirement changs ?
7. Utilise-t-on des aiguilles hypodermiques au lieu de pipettes ?
8. La verrerie fle ou brche est-elle toujours jete et non rutilise ?
9. Existe-t-il des conteneurs de scurit pour le verre cass ?
10. Utilise-t-on du plastique plutt que du verre lorsque cest possible ?
11. Existe-t-il des conteneurs spciaux pour les objets tranchants ou pointus et sont-
ils effectivement utiliss ?
Matriel infectieux
1. Reoit-on les chantillons dans de bonnes conditions de scurit ?
2. Tient-on un registre des arrives de matriel biologique ?
3. Lemballage des chantillons est-il ouvert avec soin et prudence, en prvision dune
casse ou dune fuite possibles ?
4. Porte-t-on des gants ou tout autre type de protection pour dfaire lemballage des
chantillons ?
5. Le personnel a-t-il t form pour expdier les substances infectieuses conform-
ment la rglementation nationale ou internationale ?
6. Les paillasses et plans de travail sont-ils propres et en ordre ?
7. Le matriel infectieux jet est-il limin tous les jours ou plus souvent, et confor-
mment aux normes de scurit ?
8. Tous les membres du personnel sont-ils informs des mthodes utiliser pour le
nettoyage aprs casse ou renversement accidentel de rcipients contenant des cul-
tures ou du matriel biologique infectieux ?
9. Le fonctionnement des strilisateurs est-il vri au moyen dindicateurs
chimiques, physiques ou biologiques ?
10. Est-il prvu de dcontaminer les centrifugeuses rgulirement ?
11. Dispose-t-on de pots tanches pour les centrifugeuses ?
12. Utilise-t-on les bons dsinfectants ? Sont-ils utiliss correctement ?
13. Y a-t-il une formation spciale pour le personnel qui travaille dans les laboratoires
de connement scurit biologique niveau 3 et les laboratoires de connement
haute scurit scurit biologique niveau 4 ?
Produits chimiques et matires radioactives
1. Les produits chimiques incompatibles sont-ils bien entreposs ou manipuls
sparment les uns des autres ?
2. Les produits chimiques sont-ils tous correctement tiquets, avec nom et mise en
garde ?
3. Les panneaux de risque chimique sont-ils bien en vidence ?
4. Existe-t-il des ncessaires contenant le matriel voulu pour nettoyer les liquides
rpandus accidentellement ?
22. LISTE DES CONTRLES DE SCURIT
149
5. Le personnel connat-il la conduite tenir en cas de renversement accidentel ?
6. Les produits inammables sont-ils entreposs correctement et en petite quantit
dans des armoires agres ?
7. Dispose-t-on de portoirs pour les bouteilles ?
8. Y a-t-il un responsable de la radioprotection ou un manuel que lon puisse
consulter ?
9. Le personnel a-t-il suivi une formation pour le travail avec des matires radioac-
tives dans de bonnes conditions de scurit ?
10. Un registre des stocks et de lutilisation des matires radioactives existe-t-il et est-
il tenu correctement ?
11. Le laboratoire dispose-t-il dcrans de blindage pour la protection contre la
radioactivit ?
12. La surveillance dosimtrique du personnel est-elle assure ?
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
150
PARTIE IX
Bibliographie,
annexes et index
Bibliographie
153
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9. Microbiological safety cabinets. Recommendations for information to be exchanged between
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dards Institution, 1992 (Standard BS 5726-2:1992).
10. Microbiological safety cabinets. Recommendations for selection, use and maintenance.
London, British Standards Institution, 1992 (Standard BS 5726-4:1992).
11. Biological containment cabinets (Class I and II) : installation and eld testing. Toronto,
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13. Sant Canada. Lignes directrices en matire de bioscurit en laboratoire, 2
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MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
154
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e
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restructur en vigueur le 1
er
Janvier 2003. New York et Genve, Nations Unies, 2002,
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51. Lewis RJ. Saxs dangerous properties of industrial materials, 10th ed. Toronto, John Wiley
and Sons, 1999.
BIBLIOGRAPHIE
155
ANNEXE 1
Premiers secours
156
Les premiers secours consistent dans lapplication immdiate, par des personnes
qualies, de principes mdicaux reconnus sur le lieu dun accident. Cest la mthode
admise pour traiter un accident en attendant quil puisse tre pris en charge par un
mdecin en vue du traitement dnitif de ses lsions.
Le matriel minimum pour les premiers secours se compose dune trousse de
premiers soins, de vtements de protection et dquipements de scurit pour le
secouriste ainsi que dun dispositif dirrigation oculaire.
Trousse de premiers soins
Cette trousse doit tre faite dun matriau qui protge le contenu de la poussire et
de lhumidit. Elle doit tre place bien en vue et tre facilement reconnaissable. Par
convention internationale, elle est marque dune croix blanche sur fond vert.
La trousse de premiers soins doit contenir :
1. Une che dinformation donnant des conseils gnraux
2. Des pansements adhsifs striles de diverses tailles en emballage individuel
3. Des tampons oculaires avec leurs bandages de xation
4. Des bandages triangulaires
5. Des compresses striles pour couvrir les plaies
6. Des pingles de nourrice
7. Un assortiment de pansements striles mais non imprgns
8. Un manuel de premiers soins faisant autorit, publi par ex. par la Croix-Rouge.
Equipement de protection pour le secouriste :
1. Une protection buccale pour le bouche bouche
2. Des gants et autres dispositifs de protection mcanique pour viter une con-
tamination par le sang
1
, et
3. Un ncessaire pour nettoyer le sang rpandu (voir chapitre 14).
Il faut galement un dispositif pour lirrigation oculaire et le personnel doit avoir
appris sen servir.
1
Garner JS, Hospital Infection Control Practices Advisory Committee. Guideline for isolation precautions
in hospitals. American Journal of Infection Control, 1996, 24:2452 (http://www.cdc.gov/ncidod/hip/
isolat/isolat.htm).
ANNEXE 2
Vaccination du personnel
157
Il faut sentretenir en dtail avec chaque chercheur des risques que comporte le travail
sur tel ou tel agent infectieux. Avant de commencer travailler sur ces agents, il con-
vient de se renseigner sur la possibilit de se procurer localement des vaccins et des
mdicaments (par ex. des antibiotiques), sur leur autorisation de mise sur le march
et sur leur utilit. Certains membres du personnel peuvent tre dj immuniss en
raison dune vaccination ou dune maladie infectieuse antrieures.
Si un vaccin ou une anatoxine appropris sont autoriss la vente sur le march
local et que lon puisse se les procurer, il faut en proposer ladministration si une
valuation du risque et lexamen clinique de la personne en cause concluent la
possibilit dune exposition.
Il faut galement que ltablissement dispose dune installation o les personnes
victimes dune contamination accidentelle puissent bncier de la prise en charge
clinique correspondant leur cas.
ANNEXE 3
Centres collaborateurs de lOMS
pour la scurit biologique
158
Pour obtenir des renseignements sur les cours, outils et matriels pdagogiques
dans le domaine de la scurit biologique, le lecteur peut sadresser par crit aux
organismes suivants :
Programme de scurit biologique, Dpartement maladies transmissibles : sur-
veillance et action, Organisation mondiale de la Sant, 20 Avenue Appia, 1211
Genve 27, Suisse (http://www.who.int/csr/).
WHO Collaborating Centre for Biological Safety, Swedish Institute for Infectious
Disease Control, Nobels Vg 18, S-171 82 Solna, Sude
(http://www.smittskyddsinstitutet.se/English/english.htm).
WHO Collaborating Centre on Biosafety Technology and Consultative Services,
Bureau de la scurit des laboratoires, Sant Canada, 100 Colonnade Road,
Loc. : 6201A, Ottawa, Ontario, Canada K1A 0K9
(http://www.hc-sc.gc.ca/pphb-dgspsp/ols-bsl).
WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Training,
Ofce of Health and Safety, Centers for Disease Control and Prevention, 1600
Clifton Road, Mailstop F05, Atlanta, GA 30333, Etats-Unis dAmrique
(http://www.cdc.gov/).
WHO Collaborating Centre for Applied Biosafety Programmes and Research,
Division of Occupational Health and Safety, Ofce of Research Services, National
Institutes of Health, Department of Health and Human Services, 13/3K04 13
South Drive, MSC 5760, Bethesda, MD 20892-5760, Etats-Unis dAmrique
(http://www.nih.gov/).
WHO Collaborating Centre for Biosafety, Victorian Infectious Diseases Reference
Laboratory, 10 Wreckyn St, Nth Melbourne, Victoria 3051, Australie. Adresse
postale : Locked Bag 815, PO Carlton Sth, Victoria 3053, Australie
(http://www.vidrl.org.au/).
ANNEXE 4
Scurit demploi des appareils et
instruments
159
Lutilisation de certains appareils et instruments peut comporter un risque micro-
biologique. Dautres, au contraire, sont spcialement conus pour prvenir ou rduire
les risques biologiques (voir chapitre 11).
Appareils et instruments dont lutilisation peut comporter un risque
Le tableau A4-1 donne la liste des appareils, instruments et manipulations qui com-
portent un risque et fournit des indications sur la manire dliminer ou de rduire
ce risque.
Tableau A41. Appareils, instruments et manipulations comportant des risques
APPAREILS ET INSTRUMENTS RISQUES ELIMINATION OU RDUCTION DU RISQUE
Aiguilles hypodermiques Inoculation accidentelle, Ne pas recapuchonner ni casser
arosols, renversements les aiguilles.
Utiliser des aiguilles avec
systme de blocage pour viter la
sparation accidentelle de laiguille
et de la seringue ou utiliser un
systme jetable dans lequel
laiguille et la seringue sont
indissociables.
Appliquer de bonnes techniques
de laboratoire :
Remplir soigneusement la
seringue pour rduire la
formation de bulles et de
mousse.
Eviter dutiliser des seringues
pour mlanger des liquides
infectieux; si on ne peut faire
autrement, veiller ce que
lextrmit de laiguille soit
sous la surface du liquide qui
se trouve dans le rcipient et
viter dexercer trop de
pression.
160
Avant de retirer une aiguille
plante dans un bouchon de
caoutchouc fermant un acon,
envelopper laiguille et le
bouchon dans un tampon
de coton imprgn dun
dsinfectant appropri.
Rejeter lexcs de liquide et
les bulles dair en tenant la
seringue verticalement, dans
un tampon de coton imprgn
dun dsinfectant appropri ou
dans un petit acon contenant
du coton.
Utiliser une enceinte de scurit
biologique pour toutes les
manipulations sur du matriel
biologique infectieux.
Placer les animaux dans un
dispositif de contention pour les
inoculer. Utiliser des aiguilles ou
des canules mousses pour
linoculation intranasale ou orale.
Employer une enceinte de scurit
biologique.
Aprs usage, autoclaver et veiller
liminer convenablement. Si on
utilise un ensemble jetable
aiguille-seringue, ne pas les
dsolidariser avant lautoclavage.
Centrifugeuses Arosols, projections et bris Utiliser des pots centrifuger (de
de tubes scurit) ou des rotors scells.
Nouvrir les pots ou les rotors
quaprs les avoir laiss reposer
pendant 30min ou le faire dans
une enceinte de scurit biologique.
Ultracentrifugeuses Arosols, projections et bris Monter un ltre HEPA entre la
de tubes centrifugeuse et la pompe vide.
Tenir un registre dutilisation
pour chacun des rotors et mettre
en uvre un programme de
maintenance prventive pour
rduire le risque de pannes
mcaniques.
Remplir et vider les pots
centrifuger dans une enceinte de
scurit biologique.
Jarres anarobies Explosion, dispersion de Vrier que le panier mtallique
matriel infectieux qui renferme le catalyseur est en
bon tat.
APPAREILS ET INSTRUMENTS RISQUES ELIMINATION OU RDUCTION DU RISQUE
Dessiccateurs Implosion, dispersion de A placer dans une cage mtallique
morceaux de verre et de solide.
matriel infectieux
Homognisateurs et Arosols, fuites et casse Faire fonctionner et ouvrir dans
broyeurs de tissus une enceinte de scurit
biologique.
Utiliser des modles
spcialement conus pour viter
les fuites au niveau des paliers
des rotors et des joints
circulaires ou utiliser un broyeur
de type stomacher.
Attendre 30min avant douvrir le
bol de lhomogniseur pour que
larosol ait le temps de se
dposer. Rfrigrer pour
condenser larosol.
Si lon utilise un broyeur
manuel, tenir le tube dans un
tampon de matriau absorbant.
Sonicateurs, Arosols, lsions de Faire fonctionner et ouvrir
nettoyeurs lappareil auditif, dermite lappareil dans une enceinte de
ultrasons scurit biologique.
Isoler lappareil pour le protger
des ultrasons.
Porter des gants pour protger les
mains contre les effets chimiques
des dtergents.
Mlangeurs de cultures, Arosols, projections et Oprer dans une enceinte de
agitateurs renversement de liquides scurit biologique ou une
enceinte de connement primaire
spcialement conue.
Utiliser des acons culture
solides munis dun bouchon vis
et dont louverture comporte un
ltre solidement x, si
ncessaire.
Lyophilisateurs Arosols et contamination Utiliser des raccords circulaires
par contact direct permettant de maintenir
lappareil hermtiquement ferm.
Utiliser des ltres air pour
protger le circuit de vide.
Utiliser une mthode satisfaisante
pour la dcontamination; par voie
chimique par exemple.
Prvoir un pige humidit
entirement mtallique et un
condenseur de vapeur.
APPAREILS ET INSTRUMENTS RISQUES ELIMINATION OU RDUCTION DU RISQUE
161
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
162
Vrier avec soin que les acons
de verre ne sont pas
endommags. Nemployer que
des acons conus spcialement
pour utilisation sous vide.
Bains-marie Prolifration de Nettoyer et dsinfecter
micro-organismes. Lazoture rgulirement.
de sodium forme des Ne pas utiliser dazoture de
composs explosifs avec sodium pour viter la prolifration
certains mtaux. des germes.
Outre les risques microbiologiques, il faut galement prvoir et viter ceux que com-
portent les appareils et quipements utiliss. Le tableau A4-2 ci-dessous numre
quelques causes courantes daccidents.
Tableau A42. Causes courantes daccidents avec des appareils ou quipements
ACCIDENT CAUSE DE LACCIDENT RDUCTION OU LIMINATION DU
RISQUE
Dfaut de conception ou de construction
Feu dorigine lectrique Pas dinterrupteur de Respect des normes
dans un incubateur surcharge nationales.
Electrocution Pas de mise la terre
Utilisation incorrecte
Accident de centrifugeuse Dfaut dquilibrage des Former et encadrer le
pots centrifuger sur les personnel.
rotors oscillation libre
Explosion dun incubateur Former et encadrer le
anarobie personnel.
Equipement mal adapt
Explosion dans une ole Mauvaises conditions de Utiliser du matriel
vide usage domestique transport de lazote liquide spcialement conu.
Explosion dans un Produit chimique dangereux Ne ranger les solvants et
rfrigrateur usage non plac dans un les extraits bas point
domestique conteneur anti-tincelles et dclair que dans des
antidagrant, par exemple rfrigrateurs ou des
de lther thylique dans un enceintes anti-tincelles
acon dont le bouchon fuit et antidagrants.
Maintenance dfecteuse
Feu dans un photomtre Mauvais remontage des Former et encadrer le
amme pices du photomtre personnel.
pendant la maintenance
APPAREILS ET INSTRUMENTS RISQUES ELIMINATION OU RDUCTION DU RISQUE
163
ANNEXE 5
Produits chimiques : dangers et
prcautions prendre
On trouvera dans cette annexe les donnes de sant et de scurit connatre au sujet
dun certain nombre de produits chimiques couramment utiliss dans les laboratoires
danalyses biologiques et de recherche, accompagnes de quelques donnes gnrales
et des prcautions observer.
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MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
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ANNEXE 5. PRODUITS CHIMIQUES : DANGERS ET PRCAUTIONS PRENDRE
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ANNEXE 5. PRODUITS CHIMIQUES : DANGERS ET PRCAUTIONS PRENDRE
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ANNEXE 5. PRODUITS CHIMIQUES : DANGERS ET PRCAUTIONS PRENDRE
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ANNEXE 5. PRODUITS CHIMIQUES : DANGERS ET PRCAUTIONS PRENDRE
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ANNEXE 5. PRODUITS CHIMIQUES : DANGERS ET PRCAUTIONS PRENDRE
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ANNEXE 5. PRODUITS CHIMIQUES : DANGERS ET PRCAUTIONS PRENDRE
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MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
210
alcools 9899
alimentation
lectrique 15, 31
en eau 15, 24
aliments, 11
allergie au latex 74
amnagement du laboratoire
classication par groupe de risque 1
scurit biologique niveaux 1 et 2 :
1315
scurit biologique niveau 3 : 2324, 25
scurit biologique niveau 4 : 29, 31
ammoniac et solutions 174
ampoules contenant du matriel infectieux
ouverture 83
stockage 83
anhydride actique 174
aniline 175
animaleries 11, 3237
invertbrs 3637
niveau de connement 32
scurit biologique niveau 1 : 33
scurit biologique niveau 2 : 3334
scurit biologique niveau 3 : 3435
scurit biologique niveau 4 : 3536
animaux
limination des carcasses 34
ne servant pas aux expriences 11, 33
transgniques et knock out 115
anses de transfert
usage unique 17, 69, 71
micro-incinrateurs 69, 72
utilisation sans risque 78
antimicrobiens 92
antiseptiques 92, 9798, 99
appareils respiratoires (quipement de
protection) 23, 7374
acariens 37
accs
animaleries 32, 33, 34, 35
laboratoire 11, 23, 2930
accidents 11
appareils/quipements 162
voir aussi premiers secours, blessures,
renversement
actaldhyde 164
actate de thallium 165
actone 165
actonitrile 166
actylne 167
acide
actique 167
chromique 168
nitrique 169
oxalique 169
perchlorique 122, 170
phosphorique 170
picrique 122, 171
sulfurique 172
acroline 173
arosols
activits gnrant des 57
enceinte de scurit biologique 16, 57
quipement de scurit 68
potentiellement dangereux 89
risques dus au pipettage 70
agitateurs secoueurs 71, 82
agrment
enceintes de scurit biologique 66
laboratoires/installation 4142
aiguilles hypodermiques 11, 84, 160
limination 1921
pour injection, viter linoculation 80
alarmes 23, 67
211
Index
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
212
argent 175
arthropodes
animaleries 37
lutte contre les 12, 34
Association du Transport arien
international (IATA) 106
audit 41, 42
auramine 176
autoclavage 19, 102104
autoclaves 70, 102104
deux portes 31
extraction dair 102
animaleries 3436
source de chauffage extrieure 102
vapeur directe 102
chargement 103
conformit 17
disponibilit 15, 17, 24, 31
prcautions dutilisation 103104
azoture 122, 176
azoture de sodium 176
bains-marie 162
bec Bunsen 78, 79
benzne 177
benzidine 177
bicarbonate 123
dammonium 100
biocide 92
1,1-Biphnyl-4,4-diamine 177
bislnite de sodium 191
blessures
conduite tenir en cas durgence 89
personnel de lanimalerie 34
prvention 80
blouses de laboratoire 72, 73
boissons 11, 15, 34, 80
bonnes techniques microbiologiques 912,
7787
brome 178
bromure de cyanogne 179
broyeurs de tissus 82, 161
bruit 126127
cages 34, 3536
animaux 34, 35
insectes volants 37
carbonate de sodium 123
4,4-carbonoimidoylbis N,N-
dimthylbenzamine 176
carte de surveillance mdicale 2526, 27
catastrophes, naturelles 88, 9091
centres collaborateurs de lOMS pour la
scurit biologique 158
centrifugeuses 81, 160
appareils, connement 2425
bris des tubes 90, 160
utilisation incorrecte 162
chaleur
dsinfection et strilisation 101104
humide 102
sche 101
chaussures 11, 22, 28, 73
chef du laboratoire 12, 133
programme de formation 18, 137139
chloramines 94, 96
chlore 9495, 180
chloroforme 181
chlorure dhydrogne 182
circulation de lair
alarmes 23, 67
animalerie 34, 35, 36
enceintes de scurit biologique 5960,
61
scurit biologique niveau 3 : 23
scurit biologique niveau 4 : 30
code de bonnes pratiques
scurit biologique niveaux 1 et 2 : 912
scurit biologique niveau 3 : 2223
scurit biologique niveau 4 : 28
combinaisons de laboratoire 72, 73
comit de scurit biologique 134135
composs chlors 9495
composs dammonium quaternaire 98
conception, laboratoire
principes directeurs 3839
scurit biologique niveaux 1 et 2 :
1215
scurit biologique niveau 3 : 2324, 25
scurit biologique niveau 4 : 2931
conduite daspiration (circuit de vide) 24,
70
connement primaire 29
conformit, quipements 17
INDEX
213
conglateurs 8283
consignes pour nettoyer des produits
rpandus 107109
consommation daliments 11, 15, 34, 80
conteneurs
chantillons 77, 84, 107
matriels contamins 2021
objets tranchants 20, 70
rcipients
casss 8990
tanches 69
contrles, scurit du laboratoire 4142
formulaires 4348
cosmtiques 11
coupures 89
cuivre 183
cyanure de sodium 184
cytochalasine 185
dchets 1921
animaleries 34, 36
contamins par des prions 86
dcontamination 19, 24
invertbrs 3637
radioactifs 130
scurit biologique niveau 4 : 31
traitement/limination 1921, 24, 105
dcontamination
dchets 1920, 24
dnition 92
des mains 101
efuents/liquides 12, 31
enceintes de scurit biologique 67,
100101
environnement local 100
liquides biologiques 85
matriels contamins par des prions
8587
voir aussi nettoyage, dsinfection
dlgu la scurit biologique 18, 90,
133134
drivs phnoliques 9798
dsinfectants 93, 94100
dsinfection 92105
autoclavage 102104
chimique 93100
dchets 2021
dnition 93
enceintes de scurit biologique 6667
nettoyage pralable 93
produits rpandus 107109
voir aussi dcontamination, strilisation
dessiccateurs 161
dichloroisocyanurate de sodium (NaDCC)
94, 9596
dithylther 189
3,3-dimthyl-(1,1-biphnyl)-4,4-diamine
207
dimthylamine 185
dimthylbenzne 210
2,4-dinitrophnylhydrazine 185
dioxane 186
dioxyde
de carbone, solide 186
de chlore 96, 187
de dithylne 186
directeur du laboratoire 12, 133
disjoncteurs 126
dispositif anti-retour 15, 24
dissmination de matriel infectieux, viter
la 7879
douches 29, 35
bullition 102
chantillons 7778
conteneurs 77, 84, 107
tiquetage 8384
ouverture
des colis 7778
des tubes et chantillonnage 84
pour lesquels les informations sont
limites 8
prcautions dusage 8385
rception 77
rcolte 8384
systme du triple emballage 107, 108
transport 77, 84
clairage 14, 144
coulement, laboratoire de connement
31
cran anti-projections 69
crans faciaux (visires) 11, 7273
efuents/liquides contamins 11, 12, 31
enceinte vacuation totale 64
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
214
enceinte de laboratoire de classe III 2930
rgulation de la ventilation 3031
enceintes de scurit biologique (ESB)
5767, 69
agrment 66
animaleries 3435
choix 58, 6364
classe I 5862
classe II 5962
type A1 5960, 62
types A2, B1 et B2 6162
classe III 62
laboratoire 2930
contamination par des prions 86
dcontamination 67, 100
emplacement 24, 64
raccordements pour lvacuation de lair
6263
utilisation
et maintenance 65
systmatique 16, 2324
sans risque 6467, 79
encphalopathie spongiforme bovine (ESB)
85
enfants 10
quipement et vtements de protection
individuelle 7274
animaleries 34, 36
enceinte de scurit biologique 67
laboratoire de base 11
laboratoire de connement 2223
haute scurit 29, 30
liste de contrle 148
prions 86
quipement et matriel
de secours 91
de scurit 21, 6874
liste des contrles 148149
laboratoire de base 1617
connement 2425
risques 159162
rosion 89
Escherichia coli K12 114
thanol (alcool thylique ) 98, 187
thanolamine 188
thanolamine-2-aminothanol 188
thers 122
tiquetage, modle 8384
valuation du risque microbiologique 12,
78
animalerie 3233
organismes gntiquement modis
115117
excrta, prcautions dusage 8385
extincteurs 126
femmes en ge de procrer 18, 148
fentres
animaleries 34, 35
laboratoire 12, 15, 23
locaux pour invertbrs 37
ltres air, voir ltres HEPA
ltres particules de haute efcacit
(HEPA)
animalerie 34
contamination par des prions 86
enceinte de scurit biologique 57, 58,
59, 60, 62, 63
scurit biologique niveau 3 : 2324, 25
scurit biologique niveau 4 : 2930, 31
oles vide 162
xateurs formols 85
acons bouchon viss 17, 70
ambes, tiologie de maladies inconnues 8
ammes nues 66, 78
formaldhyde 9697, 190
formation 137139
personnel
danimaleries 34, 36
de laboratoire 18
scurit biologique 5152
utilisation des enceintes de scurit
biologique 67
formol 97
friction base dalcool pour le lavage des
mains 9899, 101
frottis, pour microscopie 84
fumigation 100
gants 11, 67, 73, 74
gaz
alimentation du laboratoire 15
comprims et liqus 123, 146147
gnrateurs dultrasons 71, 82, 8485, 161
INDEX
215
gnie gntique 113
germicides chimiques 93100
glutaraldhyde 97, 191
gouttes paisses 84
grillages empchant le passage des
arthropodes 37
groupes de risque, microbiologique 9
classication 12
laboratoire de base 9
niveau de scurit biologique 23
homognisateurs et broyeurs de tissus
161
hotte ux laminaire horizontal ou vertical
57
1-hydrazino-2,4-dinitrobenzne 185
hydroslnite de sodium 191
hydroxyde
de potassium 192
de sodium 192
hypochlorite
de calcium 94, 95
de sodium 9495, 100, 193
incendies 21, 125126
listes, contrles pour la prvention et la
protection 145146
procdures durgence 9091
risques 125, 162
incidents, voir accident, renversements
incinrateurs 104105
incinration 21, 104105
ingnieurs 136
ingestion de matriel infectieux 7980,
89
inoculation accidentelle 80
insectes volants 37
inspection du laboratoire 4142
interdiction de fumer 11, 34
invertbrs 36, 37
iode 99, 194
iodophores 99
isolateurs dpression en lm ou feuille
de plastique souple 6869, 70
isopropanol, propanol-2 98, 202
jarres/incubateurs anarobie 160, 162
laboratoire
agrment 4142
formulaire, contrles de scurit 4348
locaux, liste de contrle 143
principes directeurs 3840
scurit biologique 5153
services, listes, contrles de scurit
144145
techniques 7787
zones de travail 12
voir aussi laboratoire de base, laboratoire
de connement,
laboratoire de connement haute
scurit
laboratoire de base (niveaux de scurit 1 et
2) 1, 921
code de bonnes pratiques 912
conception et amnagement 1215, 16
quipement 1317
formation 18
formulaires, contrles de scurit 4348
scurit chimique, lectrique, incendie,
radioprotection et scurisation
de lappareillage 21
surveillance mdico-sanitaire 17
traitement des dchets 1921
laboratoire de connement (scurit
biologique niveau 3) 1, 2, 2226
appareils et quipement 2425
code de bonnes pratiques 2223
conception 2324
formulaire, contrles de scurit 48
surveillance mdico-sanitaire 2526
laboratoire de connement haute scurit
(scurit biologique niveau 4) 1,
2, 2831
code de bonnes pratiques 28
conception et amnagement 2931
lavage des mains 11, 74, 101
animaleries 34
lavabos 15, 23, 34
lentilles de contact 11
liquides biologiques, prcautions dusage
8385
liste des contrles de scurit 143150
litire, animaux 34, 35
lumires ultraviolets 65
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
216
lunettes coque 71
lutte contre les rongeurs 12, 34
lyophilisateurs 161162
maladie de Creutzfeldt-Jakob (MCJ) 85
matriel contamin voir matriel infectieux
matriel infectieux
autoclavage et rutilisation 20
contact avec la peau et les yeux 7980
dcontamination voir dcontamination
limination 1920, 24
viter la dissmination 7879
ingestion 7980, 89
liste, contrles de scurit 149
lyophilis, ouverture des ampoules 83
projections 1112, 8990, 107109
mlangeurs 71, 82, 161
mercure 194
mesures de scurit 15, 145146
mthanol 97, 196
mthylbenzne 208
meubles, laboratoire 1415
microbicide 93
micro-incinrateurs 69, 72
microscope, frottis et gouttes paisses 84
murs 14, 23
naphthylamine 196
nettoyage
enceintes de scurit biologique 6667
quipe de 136
matriel de laboratoire 93
rfrigrateurs et conglateurs 8283
nettoyeurs ultrasons 161
ninhydrine 197
nitrate dargent 197
nitrobenzne 198
niveau de connement, animaleries 32
niveau de scurit biologique de
lanimalerie (NSBA) 32
N-phnyl-a-naphthylamine 196
N-phnyl-b-naphthylamine 196
objets tranchants 20
animaleries 34
conteneurs pour llimination 20, 70
viter les blessures 74, 80, 84
OGM voir organismes gntiquement
modis
Organisation de lAviation civile
internationale (OACI) 106
Organisation mondiale de la Sant (OMS)
centres collaborateurs pour la scurit
biologique 158
Programme de scurit biologique 28
organismes gntiquement modis
(OGM) 113117
autres considrations 117
valuation du risque 115116
o-Tolidine 207
oxyde
de chrome VI 168
de dithylne 206
de ttramthylne 206
oxygne 199
panneau de danger biologique 9, 22, 33
paraformaldhyde 97, 100
peau
contact avec la 7980
coupure, inoculation et rosion 89
voir aussi blessures
pentoxyde de phosphore 199
peracides 99100
priode de garantie, matriel de laboratoire
3839
permanganate de potassium 200
peroxyde dhydrogne 99100, 200
personnel
dentretien et de maintenance 136
formation voir formation
gestion de la scurit biologique 12
locaux, liste de contrle 144
objets/vtements personnels 15
rgles de scurit 5152
responsable de la scurit 133135
surveillance mdico-sanitaire voir
surveillance mdico-sanitaire
vaccination 157
phnol 201
photomtre amme 162
pipettage 78
la bouche 11, 70
dispositif 1617, 7071, 78
INDEX
217
pipettes 17, 78
plafonds 14, 23
plans durgence 8889
plans de travail
animaleries 34
laboratoire 12
plantes transgniques 113, 115
plasmide pUC18 114
portes
animaleries 34
laboratoire 15, 23, 29
prcautions dusage 8386
prlavage 93
premiers secours 15, 156
primates 33
principes directeurs, laboratoires/
installation 3840
prises relies la terre 126
produit blanchissant (hypochlorite de
sodium) 9495, 100, 193
produit pour friction des mains base
dalcool 9899, 101
produits chimiques (risques) 21, 121123
enceinte de scurit biologique 64
explosifs 122, 162
incompatibles 122
listes, contrle de scurit 149150
renversements 122123
spciques 163210
stockage 121
toxicit 121122
voies dexposition 121
2-propanol 98, 202
protection
auditive 126127
de la face 11, 7273
des produits 58, 60
des yeux 11, 7273, 80
pyridine 203
radionuclides
enceintes de scurit biologique 64
rgles de scurit pour le travail avec des
128130
substitution 128
rayonnements ionisants 21, 127130
effets nocifs 127
liste, contrles de scurit 149150
paillasses o seffectue la manipulation
129
principes de radioprotection 127128
rfrigrateurs 8283, 162
rglementation internationale relative aux
transports 106107
renversements
dans les enceintes de scurit biologique
66
de matriel infectieux 11, 8990,
107109
de produits chimiques 122123
de sang 85
reprsentant de ltablissement 39
risques lectriques 21, 126, 162
liste, contrles de scurit 147
salle de repos 15
sang, prcautions dusage 8385
sas air 29, 30, 36
scurit biologique 5152
en laboratoire 5153
gestion 12
scurit biologique niveau 1 : 1, 2,
921
animalerie 3233
classication des micro-organismes
infectieux 14
conception du laboratoire 1315
formulaire, contrles de scurit du
laboratoire 4345
surveillance mdico-sanitaire 17
voir aussi laboratoire de base
scurit biologique niveau 2 : 1, 2, 921
animalerie 32, 3334
conception du laboratoire 1315
formulaire, contrles de scurit du
laboratoire 4647
surveillance mdico-sanitaire 1718
voir aussi laboratoire de base
scurit biologique niveau 3 : 1, 2, 2226
animalerie 32, 3435
conception du laboratoire 2324
formulaire, contrles de scurit du
laboratoire 48
voir aussi laboratoire de connement
MANUEL DE SCURIT BIOLOGIQUE EN LABORATOIRE
218
scurit biologique niveau 4 : 1, 2, 2831
animalerie 32, 3536
conception du laboratoire 2931
voir aussi laboratoire de connement
haute scurit
slnium 204
seringues 11, 20
srum, sparation du 80
service dentretien des btiments 136
services de secours 91
sols 14, 23
souris susceptibles dtre porteuses de
poliovirus 115
sporocide 93
strilisation 31, 92105
chaleur 101104
dnition 93
matriel contamin par des prions
8687
nettoyage avant 92, 93
voir aussi dcontamination, dsinfection
stockage
ampoules contenant du matriel
infectieux 83
espace, laboratoire 15
gaz comprims et liqus 123,
146147
liquides inammables 146
locaux, liste des contrles de scurit
143144
produits chimiques 121
sulfure dhydrogne 205
surveillance mdico-sanitaire
laboratoire de base 1718
laboratoire de connement 2526, 27
liste, contrles de scurit 148
symbole international indiquant un risque
dirradiation 129, 130
systme dexpression biologique 114
systme de chauffage, ventilation et air
conditionn 2324
liste, contrles de scurit 144
systme de circulation dair
combinaison pressurise 29
enceintes de scurit biologique 5762,
6364
voir aussi systmes de ventilation
systme, demballage 107, 108
du triple emballage 107, 108
systme de communication 28
systme de refroidissement, arthropodes
37
systmes de ventilation
animaleries 34, 35, 36
laboratoire
de base 15
de connement 23
haute scurit 3031
liste, contrles de scurit 144
tablier de laboratoire 72
technologie de recombinaison de lADN
113117
tellurite de potassium 205
ttrachlorure de carbone 205
ttrahydrofuranne 206
ttroxyde dosmium 207
tiques 37
tissus
contenant des prions 86
prcautions dusage 85
toilettes 144
tolune 208
transfert de gne 114
transport 12, 106109
chantillons 77, 8384
matriel infectieux 2021, 24
rglementation internationale
106107
systme du triple emballage 107,
108
Transport des Marchandises dangereuses,
Comit dexperts de lONU
en matire de (UNCEDTG)
106
travail en binme 28, 36
trichlorthylne 209
triclosan 9798
2,4,6-trinitrophnol (acide picrique) 122,
171
trousse de premiers secours 156
tubes
bouchon viss 17
bris dans les centrifugeuses 90
INDEX
219
ultracentrifugeuses 160
urgences 8891
conduite tenir 8991
plan d 8889
scurit biologique niveau 4 : 28, 31
vaccination, du personnel 157
vecteurs 114
dexpression 114
viraux 114
ventilation
animaleries 34
enceintes de scurit biologique 24, 30,
5860, 62, 63
laboratoire de connement 23, 24
haute scurit 30
verre 84
manipulation de dbris de 89, 90, 109
prcautions pour lutilisation 80, 84
vestibules 23, 35, 36
vtements de protection 29
combinaisons 29
pressurises 2930
xylne 210
zone dirradiation 128129
zones de travail, laboratoire 11, 12