Universidad Autnoma de Baja California Bioingeniero Facultad de Ingeniera Mexicali

Bioqumica Manual de Prcticas de a!oratorio "r Fernando Amlcar #ols "omngue$

M%I% #usana &or$agara' Plasencia
(

PRCTICA 9
IDENTIFICACIN DE HIDRATOS DE CARBONO
COMPETENCIA
Determinar el tipo de azcares presentes en una muestra problema, aplicando los principios de qumica
analtica fundamentados en el comportamiento cualitativo ante ciertos agentes qumicos, como
consecuencia de los grupos funcionales que contienen o a sus propiedades fsicas.
INTRODUCCIN
Los carbohidratos son polihidroxialdehdos o polihidroxicetonas que se clasifican en tres grupos
principales: monosacridos, oligosacridos polisacridos. Los oligosacridos pueden ser hidrolizados para
rendir relativamente pocas mol!culas de monosacridos. Los polisacridos por otro lado, pueden ser
hidrolizados en un gran nmero de unidades de monosacridos. "stas unidades pueden o no corresponder a
una sola entidad. Los polisacridos tienen elevado peso molecular desempe#an el papel de nutrientes o
reserva, otros actan como elementos estructurales en las paredes celulares, o bien como adhesivos
intercelulares. Los polisacridos de reserva ms importantes en la naturaleza son el almid$n %plantas& el
gluc$geno %animales&. "l almid$n abunda especialmente en los tub!rculos como la papa en granos de
maz, trigo arroz, siendo el maz la principal fuente de almid$n industrial. "l almid$n contiene dos tipos de
polmeros de la glucosa: amilosa amilopectina. La maora de los almidones contienen '()'*+ de amilosa
,')*(+ de amilopectina.
Propiedades de la amilosa y amilope!i"a
La uni$n glucosdica a%-).& es bastante flexible, por lo que la forma de las mol!culas de amilosa, en
soluci$n acuosa, es principalmente la de espirales al azar, estructura que puede ser utilizadas por varios
agentes como el odo, que es capaz de formar comple/os de color azul. La amilopectina s$lo absorbe una
peque#a cantidad de odo, produciendo un comple/o de color ro/izo. La capacidad media de retenci$n de
odo por una muestra de almid$n sirve como ndice de la relaci$n amilosa#amilope!i"a$
Las amilasas %a)amilasas 0)amilasas& son una serie de enzimas capaces de catalizar la hidr$lisis del
almid$n. "l curso de la hidr$lisis del almid$n puede seguirse aprovechando la formaci$n del comple/o azul con
el odo, as como su desaparici$n durante la hidr$lisis pasando por un color ro/o en la hidr$lisis parcial por la
presencia de eritrodextrinas. 1tra forma de seguimiento es determinar la formaci$n de azcares reductores o
bi!n la cuantificaci$n de los monosacridos que se van formando.
Ide"!i%iai&" de ar'o(idra!os$ Los carbohidratos de pueden caracterizar en base a los grupos funcionales
que contienen o a sus propiedades fsicas.
)$ Pr*e'a de Molis(
2e basa en la formaci$n de derivados aldehdicos del furano que se condensan con el a)naftol, dando un
producto colorido %violeta&. 3ambi!n es positiva con cidos tales como: f$rmico, oxlico, ctrico acetona.
2iendo mu sensible capaz de detectar (.((-+ de glucosa (.(((-+ de sacarosa.
4na prueba negativa de 5olish indica ausencia de carbohidratos. 4na prueba positiva nos indica la presencia
de cualquier carbohidrato, sin embargo debe considerarse que el furfural tambi!n da positiva la prueba.
+$ Reai&" o" el lior o rea!i,o de Fe(li"-
La reacci$n con el licor o reactivo de 6ehling permite identificar azcares reductores, aunque en la reacci$n
no se emplea hidr$xido cprico libre. "ste ltimo se encuentra en estado combinado forma parte del
reactivo de 6ehling. "l licor de 6ehling representa un compuesto comple/o de cobre con tartrato de sodio
potasio de color azul.
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.$ Pr*e'a de Bial o de Ori"ol#HCl
"sta prueba es especfica para pentosas. La positividad de la prueba se reconoce por la formaci$n de una
coloraci$n verde brillante transparente. 7lgunos azcares que no son pentosas pueden dar una coloraci$n
verde, pero !sta es opaca.
/$ Pr*e'a de Seli0a"o%% para dis!i"-*ir e!o(e1osas
Las cetohexosas forman cerca de '()'8 veces ms derivados del furfural que las aldohexosas. "l resorcinol
reacciona s$lo con altas concentraciones de furfural produciendo un color ro/o fuego. 5u altas
concentraciones de aldohexosas pueden dar positiva la prueba. Las pentosas reaccionan dando un color
azul.
MATERIA2ES
3ubos de ensae de -9 x-(( mm
:ipetas
:arrilla de calentamiento
;a#o 5ara
' gradillas metlicas
REACTI3OS
2oluci$n de almid$n al -+
2oluci$n de glucosa -+
2oluci$n de sacarosa -+
2oluci$n de fructosa al -+
2oluci$n de lactosa al -+
2oluci$n furfural (.(-+
<eactivo de 5olish
<eactivo de 6ehling
<eactivo 1rcinol)=>l
<eactivo 2eli?anoff
='1 como control
DESARRO22O E4PERIMENTA2
Cara!eri5ai&" de ar'o(idra!os
Sol*io"es a pro'ar6
7lmid$n al -+,
Glucosa al 1%,
2acarosa al -+,
6ructosa furfural al (.(-+,
7gua como testigo negativo.
Pr*e'a de Molis(
-& >olocar (.8 ml de cada una de las soluciones a probar en tubos de ensae.
'& 7gregar - o ' gotas de reactivo de 5olish, mezclar bien de/ar resbalar por la pared del tubo ' ml de
='21. concentrado, teniendo cuidado de no agitar el tubo, de tal manera que se forme una capa
ba/o la soluci$n a probar.
@& Re-is!ro de Res*l!ados: 2i aparece un anillo violeta ro/izo en la interfase, la prueba es positiva
Reai&" o" el lior de Fe(li"-
-& >olocar (.8 ml de cada una de las soluciones a probar en tubos de ensae %utilizar como control
negativo un tubo con agua con la misma cantidad que las soluciones de azucares a probar&.
'& 7gregar - ml de Licor de 6ehling agitar.
@& >alentar en ba#o 5ara a ebullici$n.
.& Re-is!ro de Res*l!ados6 2i se presenta un cambio de coloraci$n a amarillo luego a ro/o, indica la
presencia de azcares reductores.

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Pr*e'a de Ori"ol#HCl
-& >olocar (.8 ml de las soluciones a probar en tubos de ensae %utilizar como control negativo un tubo
con agua con la misma cantidad que las soluciones de azucares a probar&.
'& 7dicionar - ml del reactivo 1rcinol)=>l, mezclar llevar a ba#o 5ara hirviente durante @ minutos.
@& Re-is!ro de Res*l!ados:La aparici$n de un color verde botella brillante totalmente trasparente, indica
la presencia de una pentosa. 7lgunos otros azcares dan una coloraci$n verde, pero !sta es opaca.
Reai&" de seli0a"o%% para dis!i"-*ir aldo(e1osas y e!o(e1osas
-& >olocar (.8 ml de soluciones por probar en tubos de ensae.
'& 7dicionar (.8 ml de reactivo de 2eli?anoff con mucho cuidado.
@& >alentar a ba#o 5ara a ebullici$n durante 8 min haciendo observaciones cada minuto.
RESU2TADOS
>ompletar la siguiente tabla registrando observaciones pruebas positivas o negativas.
Reai&" Molis( Fe(li"- Seli0a"o%% Ori"ol#HCl
7lmid$n
Alucosa
2acarosa
6ructosa
Lactosa
6urfural
7gua %testigo negativo&
AP7NDICE$
Rea!i,o de Fe(li"-
6ehling 7: disolver @.8 g de sulfato cprico monohidratado en 8( ml de agua destilada.
6ehling ;: disolver -,.8 g de tartrato de sodio 8 g de Ba1= en 8( ml de agua destilada.
5ezclar volmenes iguales de los dos reactivos, agitar calentar a ebullici$n durante - minuto.
Ori"ol#HCl
Disolver (.-8 g de orcinol en 8( ml de =>l al 8(+ adicionar * gotas de cloruro f!rrico al -+. %6e>l@.9='1&.
Bi'lio-ra%8a$
;ettelheim C Landesberg. Laborator "xperiments for Aeneral 1rganic and ;iochemistr, .th. "dition.