Vous êtes sur la page 1sur 36

P PR R C CT TI IC CA A 1 1

F Fa ag go oc ci it to os si is s


Casi desde principios de la historia de la bacteriologa mdica, la fagocitosis ocupa un lugar muy
importante en la resistencia a las enfermedades infecciosas.
Existen clulas capaces de ingerir y digerir muchos tipos de organismos que logran penetrar en el
cuerpo, sin necesitar la ayuda inmunitaria especifica del sistema linfoide. Los macrfagos y los fagocitos
mononucleares participan fundamentalmente en el fenmeno de Fagocitosis.
Ciertas sustancias que facilitan la velocidad con que son fagocitados las bacterias y otros agentes
infectantes son las OPSONINAS.


I. FAGOCITOSIS IN VITRO

1. Materiales:
Cultivo de Candida albicans
5cc de sangre fresca con anticoagulante Wintrobe 1cc
Una jeringa de 5cc.
Bao Mara
Pipeta Pasteur
Colorante de Wright. Agua tamponada
Colorante rojo de congo al 1%
Lminas portaobjetos y cubreobjetos, microscopio. Aceite de cedro.

2. Procedimiento:
Obtener 5ml de sangre fresca, agregar sol. Wintrobe 1cc y agitar
Agregar al tubo con sangre 2cc de caldo de Candida albicans
Incubar a 37C por 30 , luego centrifugar
Con una pipeta Pasteur retirar de la interfase plasma, sangre, la capa leucocitaria.
Depositar una gota en una lmina con una gota de rojo congo. Cubrir con laminilla
cubreobjetos. Observar microscopio
Depositar otra gota en una lmina portaobjeto y extender como para hemograma y colorear
con Wright
Observar al microscopio


II. FAGOCITOSIS IN VIVO

1. Materiales:
Cepa de Candida albicans.
Jeringa hipodrmica de 1cc.
1 Pericote.

2. Procedimiento:
Inocular 0.5cc de Candida albicans va intraperitoneal al pericote.
A las 24 h. autopsiar al pericote y hacer improntas de hgado, corazn, lquido peritoneal:
colorear con Wright.
Observar al Microscopio.
























P PR R C CT TI IC CA A
2
2

R Re ea ac cc ci io on ne es s: : A An nt t g ge en no o- -A An nt ti ic cu ue er rp po o



I. EXPERIMENTO N 1:
Reaccin de precipitacin

La reaccin de precipitacin ocurre cuando un anticuerpo IgG divalente reacciona con una antgeno
polivalente soluble. La precipitacin es el resultado de la formacin de grandes complejos Insolubles de
molculas interconectadas de antgeno y anticuerpo.

La precipitacin se forma en la zona ptica de equivalencia entre el antgeno y el anticuerpo. La
inmunoprecipitacin es el mtodo mas simple y directo para la demostracin de la reaccin antgeno-
anticuerpo en el laboratorio.

Precipitacin en tubo Capilar: (Determinacin de PCR)
La protenas C reactiva no se encuentra normalmente en la sangre, sino que aparece en los estadios iniciales o
las enfermedades caracterizadas por cambios inflamatorios. Es serolgicamente diferente de las protenas
normales y puede ser detectada prontamente su presencia con un antisuero especifico para la protenas C.

1. Materiales:
Tubos capilares 1x80 mm.
Suero
Suero problema
Bases de plastilina

2. Procedimiento:
Un tubo capilar es sumergido dentro del suero anti PCR, dejar que el lquido se eleve de 25
a 30 mm dentro del tubo capilar. Es esencial que el tubo capilar sea sumergido en el
antisuero primero para evitar contaminacin del mismo con el suero del paciente.
Coloque el dedo sobre el extremo superior del capilar y squelo del antisuero
Sin remover el dedo del extremo superior del tubo capilar, sumerja el capilar dentro del
suero del paciente deje que un volumen igual del suero del paciente penetre al capilar. Es
importante que el antisuero y el suero del paciente estn en contacto. Deben ser evitadas las
burbujas del aire.
Invierta el tubo capilar varias veces para lograr la mezcla de los sueros, coloque el dedo en
un extremo dejando un espacio de aire alrededor de 1 cm en el extremo opuesto.
Inserte los tubos en la base de la plastilina, estando seguros que el final de la columna de
suero est alrededor de 1 cm por encima del bloque.
Coloque en la incubadora a 37 durante dos horas.
Tambin se permite dejar el tubo a la temperatura ambiente si no hay incubadora
disponible.
Si la protena C reactiva est presente en el suero del paciente, un precipitado ser percibido
al cabo de 3 minutos y un informe cualitativo puede ser hecho en este tiempo.
Contine la incubacin por espacio de 2 horas en total, y entonces coloque dentro de la
refrigeradora heladera a 0 - 6C durante la noche y a la maana siguiente puede hacer la
lectura final.





LECTURA:

Debern ser realizadas examinando los capilares frente a una luz, sin necesidad de usar un fondo de contraste
especifico. El colorante presente en el antisuero acenta cualquier precipitado antgeno-anticuerpo,
permitiendo una lectura fcil.

Las lecturas pueden ser clasificadas de la siguiente manera:

NO PRECIPITADO NEGATIVO
1mm de precipitado Una cruz
2mm de precipitado Dos cruces
3mm de precipitado Tres cruces
4mm de precipitado Cuatro cruces
5mm de precipitado Cinco cruces
6mm de precipitado Seis cruces o ms




REFERENCIA:


Inmunodifusin Simple (Ouchterlony)

Esta prueba actualmente no vigente se basa en una reaccin de Ag-Ac. y como resultado forma precipitados
en la zona de equivalencia.

Si sobre la superficie quieta de un lquido aplicamos una gota de cualquier colorante, observamos que esta se
difundir de manera uniforme en todas las direcciones del seno del lquido, si en vez de utilizar este medio
empleamos un gel, esta difusin se har en forma ms lenta y uniforme.

Este principio junto con la propiedad que tienen los anticuerpos de formar precipitados con sus respectivos
antgeno. Se aplican en el estudio de las protenas del plasma enfrentndolas con antisueros especficos para
ellas. Lo que condiciona en el lugar de contacto de los bordes de la difusin es la formacin de bandas de
precipitacin, si la concentracin y velocidad de difusin de ambas sustancias son iguales.

Los resultados se interpretan como: Identidad total, Identidad Parcial o No Identidad.

















a) Identidad Total: Lnea de confluencia obtenida con do antgenos que no pueden distinguirse por el
antisuero utilizado.
b) Identidad Parcial: Formacin de espoln por tratarse de antgenos parcialmente relacionados con una
determinante comn x pero determinantes individuales y y z que reaccionan con una mezcla de
anticuerpos dirigida contra x e y. El antgeno con determinantes x y z slo puede precipitar
anticuerpos dirigidos contra x. Los anticuerpos remanentes (Ac y ) cruzan la lnea de precipitina para
reaccionar con el antgeno de la cubeta adyacente que contiene determinante y, dando origen a un espoln
sobre la lnea de precipitina.
c) Cruce de lneas formadas por antgenos no relacionados.


II. EXPERIMENTO N 2:
Reaccin de Aglutinacin Bacteriana

La aglutinacin es un fenmeno inmunolgico producto de una reaccin ANTIGENO-ANTICUERPO en el
que uno de los reactantes, el antgeno, es de naturaleza particulada de tamao grande, que no le permite
formar suspensiones coloidales o soluciones en medios acuosos (antgeno insoluble). Estas partculas pueden
ser bacterias, eritrocitos partculas de ltex, bentonita, etc. y se encuentran recubiertas en formas natural o
artificial por antgenos o anticuerpos. Al ser suspendidas en un medio salino y mezclarse con antisueros o
antgenos especficos, formaran los respectivos complejos Ag-Ac, observables a simple vista o con lentes de
poco aumento.

Aglutinacin bacteriana:
Existen muchos mtodos comnmente empleados para demostrar la aglutinacin bacteriana. Uno de los ms
simples es la aglutinacin microscpica en lmina de una suspensin de bacterias de salmonella tiphy con
suero positivo (con anticuerpos ant-salmonella). A esta prueba se le denomina Prueba de Widal.


1. Materiales:
Una lmina para aglutinacin con espacios marcados.
Sueros problemas de pacientes.
Un set de antgenos para aglutinacin en lmina: Tifico O, Tifico H, paratifico A,
paratifico B.
4 pipetas estriles
Palillos mondadientes

2. Procedimiento:
A. CUALITATIVAS
Con la pipeta coloque una gota de suero problema en cada uno de los espacios marcados (50
mL).
Agregar una gota de cada uno de los antgenos a cada uno de las gotas de los sueros
problema de un mismo paciente, proceda del mismo modo con los otros sueros.
Mezclar uniformemente con un mondadiente distinto para cada gota. Haga rotar suavemente
la lmina durante 3 - 5 minutos.
La aglutinacin se observa por la aparicin de grumos de tamao variable, que tienden a
agruparse en la periferie de la gota.
Anotar el resultado.


ANTGENOS O H A B
SUERO (50 mL)



Resultado: Cualitativo: 1+, 2+, 3+, ....



B. SEMICUANTITATIVO
Preparar diluciones colocando cantidades decrecientes de suero: 0.04 (40 ml), 0.02 (20 ml),
0.01 (10 ml) y 0.005 (5 ml).
Agregar el antgeno que result positivo en el cualitativo.
Ejemplo: O somtico: positivo 3+

SUERO
40 mL



20 mL


10 mL


5 mL


DILUCIONES 1/40 1/80 1/160 1/320
RESULTADOS

Resultado: Es la mayor dilucin donde an existe aglutinacin. Ejemplo: O 1/160







P PR R C CT TI IC CA A
3
3

H He em mo oa ag gl lu ut ti in na ac ci i n n d de et te er rm mi in na ad da a: : G Gr ru up po o S Sa an ng gu u n ne eo o


La superficie de los eritrocitos contiene un gran nmero de determinantes antignicos que son productos
directos o indirectos de los genes. Estos determinantes antignicos se clasifican en grupos sanguneos. Dentro
de cada grupo sanguneo los antgenos parecen que se heredan como producto de un solo gen o de un grupo
de genes ntimamente ligados.

Grupo ABO.- En 1900. Landstelner pblico su observacin de un patrn consistente en la aglutinacin de las
clulas sanguneas del humano por otro suero humanos. Las clulas de personas A eran aglutinadas por el
suero de los individuos del suero B y viceversa. Las clulas de algunas personas (grupo O) no eran
aglutinadas por ningn suero. Estas personas tenan anticuerpos contra A y B. Poco despus el cuarto AB fue
hallado. El suero de la sangre AB no tiene anticuerpos contra A ni contra B.

Isohemaglutinacin:

GRUPO SANGUINEO ISOANTIGENO ISOANTICUERPO
O Ninguno Anti A y B
A A Anti B
P B Anti A
AB A y B Ninguno

La determinacin de grupos en el sistema ABO es rpida y simple: los tipos son rpidamente determinados
con adicin de un suero tipo conocido, por medio del mtodo de aglutinacin en lmina. El suero tipo se
prepara en conejo y son cuidadosamente adsorbidos hasta que sean altamente especficos y no den reaccin
cruzada con antgeno de otra sangre de diferente grupo. Adems en los eritrocitos aproximadamente el 85% a
90% de la poblacin existe un antgeno Rhesus (Rh) (D) que no tiene normalmente aglutininas pero que es
importante su conocimiento en inmunoterapia e inmunopatologa.

1. Materiales:
Suero Anti. A. Anti B y Anti D (Rh)
Algodn, alcohol yodado, lancetas y portaobjetos

2. Procedimiento:
Utilizando la lanceta punzar un dedo limpiando previamente el pulpejo con alcohol
presionando el dedo haga caer tres gotas de sangre sobre una lmina portaobjetos.
A una de ellas aadirles una gota de suero anti-A, a la otra una gota de suero anti B y a la
tercera agregarle una gota de suero anti-D. Mezcle cada muestra con un palillo mondadiente
diferente.
Continuar mezclando con movimientos giratorios a la lmina durante unos minutos: la
aglutinacin se observa generalmente de 2 a 3 minutos, se aprecia fcilmente por la
presencia de grumos consistentes en grandes conglomerados de eritrocitos. Su ausencia
indica reaccin negativa.







1. Interpretacin:
Sistema ABO


SUERO ANTI-A SUERO ANTI-B GRUPO SANGUINEO
Positivo Positivo AB
Positivo Negativo A
Negativo Positivo B
Negativo Negativo O


Sistema Rh

SUERO Rh (Anti-D) GRUPO Rh
+ Positivo
- Negativo
- (falso) Variante Du






































Donacin de Sangre










































P PR R C CT TI IC CA A
4
4

P Po od de er r b ba ac ct te er ri ic ci id da a d de el l s su ue er ro o


El suero normal fresco contiene sustancias capaces de destruir a los microorganismos. Se sabe que en parte
esta actividad es debida a la presencia de anticuerpos normales, pero est tambin la presencia de factores
humorales. Por ejemplo el suero fresco no calentado contiene una sustancia conocida como
COMPLEMENTO, el cual bajo ciertas condiciones juega un rol importante en la destruccin de los
microorganismos. Esta sustancia puede ser destruida si el suero es primeramente calentado a 56 por 30.

El propsito de esta prctica consiste en demostrar los efectos combinados de las sustancias antes
mencionadas sobre algunas bacterias patgenas comunes.


1. Materiales :
4 Tubos 16x150; 6 tubos 13x100
4 Pipetas de 1 ml (1/10); una pipeta de 10ml (1/10)
1 Jeringa de 10ml con agua 20x1
Cultivo en caldo de Escherichia coli
Solucin salina estril 100ml (CINa 0.85%)
Agar nutritivo licuado; repartido en 9 tubos con 10ml c/u
9 Placas de Petri
Bao Mara a 35
Bao Mara a 56

2. Procedimiento:

Valindose de la jeringa extraer 10ml de sangre venosa. Obtener el suero por
centrifugacin.
La mitad del suero obtenido llevarlo al Bao Mara a 56 por 30.
Conservar la otra mitad.
Preparar 3 diluciones de caldo de cultivo con el microorganismo en sol. salina estril
(1:104, 1:105, 1:106) tal como sigue.
A. 1.0ml de 1:10,000 en 9ml de sol, salina.................1:100.000
B. 1.0ml de 1:10,000 en 9ml de sol, salina.................1:1000.000
CUIDADO: Est seguro de usar algodn protector en la pipeta cuando maneja
grmenes patgenos.
Repartir soluciones obtenidas (A y B) 0.5ml de c/u en 3 juegos de 3 tubos
A los tres primeros tubos aadirles 0.5ml de suero normal, a los siguientes tubos aadirles
0.5ml de suero calentado a 56 y a los tres ltimos aadirles 0.5ml de sol. salina (control).
Mezclar el contenido de los tubos e incubar a bao mara por una hora a 37
Despus de incubados vertir el contenido de cada tubo en Petris estriles marcndolos con
lpiz de cera
Aadir 10ml de Agar fundido a 45 en cada Petri y agitar suavemente con el propsito de
distribuir en forma pareja los microorganismos en el medio
Despus que el agar se halla solidificado, incubar todas las placas en forma invertida por 24
hs.






LECTURA E INTERPRETACIN

Despus de la incubacin marcar cuidadosamente aquellas placas que tengan no menos de 30 ni mas de 300
colonias. Las que no se encuentren dentro de estos lmites deben ser descartadas: Hacer comparaciones.
Registrar los resultados y explicarlos.


Nmero de Colonias

Escherichia coli Suero normal Suero calentado Solucin Salina
1:104
1:105
1:106


CUESTIONARIO

1.- Cules son los factores del complemento responsable de la citlisis?
2.- Qu tipo de anticuerpos han actuado en el experimento?
3.- Porqu el agar fundido en el momento de aadirlo a la placa Petri debe estar a una temperatura de 45?
4.- Qu sucedera si el paso N6 del experimento incubamos por 24 hrs?
5.- Si en un animal de experimentacin inoculamos por va endovenosa 0.5ml. de cada una de las
diluciones preparadas de Escherichia coli. Cmo podra comportarse en cada caso?
6.- Despus de una Proctosigmoidoscopia, una extraccin dentaria o una debridacin de abscesos, se
produce pasaje de bacterias al torrente circulatorio. Porqu no se produce septicemia?














P PR R C CT TI IC CA A
5
5


Prueba de Fijacin de Complemento



Este procedimiento emplea dos sistema Antgeno-Anticuerpo. La prueba consiste en colocar primero el
Antgeno especfico y el Anticuerpo en cuestin, conjuntamente con el complemento y luego, en un segundo
paso, aplicar el sistema indicador consistente en Eritrocitos de carnero y suero de conejo antieritrocito de
carnero (hemolisina). Si el complemento est presente en el momento de aadir el sistema indicador, quiere
decir que el primer sistema no lo utilizo en su reaccin y por tanto los eritrocitos de carnero son hemolisados.
Si el primer sistema emple complemento, es decir lo fij, al aadir el segundo sistema, la hemlisis no se
producir por la ausencia de complemento libre en la mezcla.

1. Materiales:
Suero problema, positivo y negativo: Inactivados a 56C por 30 min.
Antgeno: Adenovirus en solucin.
Buffer de Mayer
Complemento (suero de cobayo)
Sistema Hemoltico: mezcla de partes iguales de eritrocitos de carnero al 2% y Hemolisina
Tubos de Kahn (8)
Pipetas de 1 ml (8)

2. Procedimiento:
Diluir 0.2 ml de cada uno de los sueros con 0.8 ml de Buffer de Mayer. Se obtiene as una
dilucin de 1/5.
Rotular un tubo e Kahn para el suero problema y cuatro (4) tubos ms para control positivo,
control negativo control de antgeno y control de sistema hemoltico.
Aadir a cada tubo los siguientes reactivos en el orden sealado

SP C+ C- CAg CSH
Suero Problema (1/5) 0.2 ml -.- -.- -.- -.-
Suero Positivo (1/5) -.- 0.2 ml -.- -.- -.-
Suero Negativo (1/5) -.- -.- 0.2 ml -.- -.-
Antgeno 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml -.-
Complemento 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml -.- -.-
Buffer de Mayer 0.1 ml 0.1 ml 0.1 ml 0.4 ml 0.5 ml

Incubar todos los tubos a 37 en Bao Mara por 15 minutos
Aadir a cada tubo 0.3 ml del sistema hemoltico
Incubar todos los tubos en Bao Mara a 37C por 15






LECTURA

Observa la presencia o ausencia de hemlisis en cada uno de los tubos los controles deben dar la siguiente
lectura:


Control positivo No hemlisis
Control negativo Hemlisis
Control del antgeno: No hemlisis
Control del Sistema Hemoltico: No hemlisis



Anotar el resultado del suero problema: .......................................
































P Pr ru ue eb ba a d de e I In nm mu un no oe en ns sa ay yo o: : T Te es st t E El li is sa a p pa ar ra a V VI IH H


El Test ELISA para HIV se basa en un inmunoensayo absorbente enzimtico ligado para la deteccin de
anticuerpos al virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero humano o plasma. La prueba se
realiza en tres tiempos:

1.- Incubacin de la muestra problema
2.- Incubacin del conjugado
3.- Incubacin del sustrato

En los micropozos se encuentran una combinacin de cuatro antgenos recombinantes de los virus HIV 1 y 2
relacionados a la envoltura y al core del virus HIV.



1. Materiales:
Suero problema del paciente
Placas con micropozos ELISA
Conjugando: Antgeno-Ig G humano marcado con una enzima
Sustrato: TMB (Tetrametilbenzidina)
H2SO4 4N
Micropipetas de 50 ul.. 100ul
Buffer isotnico, bao mara y/o estufa a 37C
Lector ELISA
Lavadora de placas de ELISA

2. Procedimiento:
* Como paso previo debe tratarse todos los reactivos a temperatura ambiente.

a) Aadir 150 ul. de muestra problema y controles a los pocilos correspondientes
b) Cubrir los micropozos con un adhesivo
c) Incubar a 37C durante 1 hr.
d) Aspirar y lavar todos los pocillos cinco veces con tampn de lavado
e) Aadir 200 ul. de conjugado a todos los pocillos
f) Incubar a 37C durante 1 hr.
g) Aspirar y lavar todos los pocillos cinco veces con tampn de lavado
h) Aadir 200 ul. de solucin sustrato a todos los pocillos
i) Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 30 min.
j) Aadir 50 ul. de cido sulfrico 4N a todos los pocillos para detener la reaccin
k) Realizar la lectura de los micropozos en un lector ELISA


NOTA: Esta prctica se realizara en forma demostrativa.











P PR R C CT TI IC CA A
6
6


T Te es st t A An nt ti ie es st tr re ep pt to ol li is si in na a O O ( (A AS SO O) )



NEUTRALIZACION: DE LA ESTREPTOLISINA O
Una de las funciones inmunitarias ms importantes mediadas por anticuerpos especficos es la neutralizacin
de toxina. Estos anticuerpos especficos llamados Antitoxinas tienen el papel principal la inmunidad
adquirida a enfermedades graves como difteria, ttanos. etc.

Casi todas las cepas de estreptococo grupo A producen dos factores hemolticos: estreptolisinas O y S
(exotoxinas). Cuando ocurre una infeccin por estreptococos de este grupo, la estreptolisina O, no asi la
S, estimula el desarrollo de un anticuerpo especfico: la antiestreptolisina O, dicho anticuerpo bloquea la
hemlisis por estreptolisisna O. Este fenmeno proporciona las bases para la determinacin cuantitativa del
anticuerpo.

La determinacin de los ttulos sricos de antietreptolisina O tiene gran importancia por su valor
diagnstico en paciente que tienen o han tenido recientemente una infeccin por estreptococo hemoltico del
grupo A, sobre todo por las secuelas que estas infecciones incluyen: fiebre, reumtica, glomerulonefritis,
eritema nodoso.

Por la frecuencia de infecciones estreptoccicas se encuentran ttulos bajos de Antiestreptolisina O en casi
todos los individuos. Se considera ttulos normales de Antiestreptolisina O de 40 a 160 Unidades Todd.

La Estreptolisina O en su forma reducida, agregada a Glbulos rojos, producen hemlisis, si el suero de un
paciente posee Antiestreptolisina O al aadirse la Estreptolisina se produce una reaccin Antgeno-
Anticuerpo y el anticuerpo neutraliza al antgeno total o parcialmente segn el nivel de anticuerpo presente si
una cantidad constante de Estreptolisina (Antig..) se agrega a cantidades cada vez menores de suero y si el
anticuerpo (ASO) presente es suficiente para neutralizar el antgeno no habr hemlisis cuando se agregue
glbulos rojos, cuando el Ag.excede al Ac. de exceso de Estreptolisina causar hemlisis. El Titulo de ASO
es reciproca de la mayor dilucin de suero que impide la hemlisis de los glbulos rojos.

FUNDAMENTO DEL TEST ANTIESTREPTOLISINA O
En el suero del paciente enfermo se encuentran los anticuerpos circulantes de tipo antiestreptollina en el cual
al unirse a un antgeno de una fase slida (ltex) va a producir una reaccin complejo Ag-Ab que se va a
traducir por la presencia de una aglutinacin del ltex.

En caso de un paciente negativo a este anticuerpo no ocurrir la reaccin de aglutinacin.

1. Materiales:
Suero problema del paciente
Antgeno fase slida absorbida en ltex
Suero control positivo
Suero control negativo
Diluyente
Palillos
Placas de reaccin




2. Procedimiento:
Colocar 5 ul. de suero problema en un circulo de la placa.
Colocar 50 ul. de suero control positivo y negativo en cada uno de los crculos restantes.
Agregar a cada uno de ellos 1 gota (50 ul.) del antgeno ltex, mezclar suavemente.
Agitar en forma rotativa por 3 min.
Leer en busca de una reaccin de aglutinacin.

Nota: Se debe descartar la prueba en caso de observar aglutinacin inapropiada con los controles positivo y
negativo.


CUESTIONARIO :

1. Qu funcin tienen los glbulos rojos en esta prueba?
2. Qu otras pruebas de laboratorio se conocen para el diagnstico de fiebre reumtica?
3. Explique por qu se inhibe la hemlisis en la determinacin de la ASO
4. Explique por qu se utilizan glbulos rojos O Rh + en la determ. de ASO.




Significancia Clnica

La antiestreptolisina -O- (ASO.) es una exotoxina producida por el estreptococo B-hemoltico (grupo A)
la cual tiene la capacidad de hemolizar los glbulos rojos de varias especies. La estreptolisina - O tiene
capacidad antignica resultando en la produccin por parte del organismo de anticuerpos
antiestreptolisina O.
La determinacin de los niveles de ASO es un mtodo universalmente aceptado para el diagnstico de
diversas enfermedades por infeccin de estreptococo tales como la fiebre reumtica y glomerulonefritis
La concentracin de ASO en individuos normales varia ampliamente. Despus de la fase aguda de una
infeccin por estreptococo, el titulo comienza a aumentar en alrededor de dos semanas llegando a sus
niveles mximos en cuatro a seis semanas, mantenindose alto por un periodo de tiempo relativamente
prolongado. En pacientes con fiebre reumtica. se encuentra un ttulo elevado en ms de 90% de los
casos, ttulos mantenidos por sobre las 500 unidades se consideran como evidencia de fiebre reumtica.
La determinacin de la concentracin de a ASO en forma aislada es de relativa utilidad. por lo cual se
recomienda la repeticin de la prueba a Intervalos de 10 a 15 das. Si se observa un aumento progresivo
de los ttulos obtenidos, es posible concluir que se est frente a una infeccin reciente. Por otra parte, la
disminucin subsecuente de los ttulos es un ndice claro de recuperacin












P PR R C CT TI IC CA A
7
7


P Pr ru ue eb ba a d de e M Ma an nt to ou ux x ( (H Hi ip pe er rs se en ns si ib bi il li id da ad d t ta ar rd d a a) )
R Re ea ac cc ci i n n a al l p po ol lv vo o d de e c ca as sa a ( (H Hi ip pe er rs se en ns si ib bl li id da ad d
i in nm me ed di ia at ta a) )


I. EXPERIMENTO N 1:
Hipersensibilidad Tardia
Es una intradermorreacin en la que se usa un filtrado de cultivo de bacilos tuberculosos conocido como
Derivado Proteico Purificado (PPD). Si existen linfocitos sensibilizados a este antgeno, dan lugar a la
aparicin de ppula y eritema en la zona inyectada, en un lapso de 24 horas a 48 horas.

1. Materiales:
1 Jeringa de tuberculina con aguja N 25
PPD 50 U.I x mm
Algodn y Alcohol
Regla milimetrada

2. Procedimiento:




Limpiar una zona de la piel antebrazo y aplicar con la jeringa 0.1 ml de PPD (5UI) por va
intradrmica.

3. Lectura:

Despus de 24 a 48 horas de la aplicacin se efecta la lectura de la respuesta inflamatoria producida
la cual estar en relacin con la mayor o menor sensibilidad del organismo a este tipo de antgeno.




4. Tipo de Respuesta:

Eritema, edema y necrosis central Positivo ++++
Eritema acentuado y edema de ms de 20 mm Positivo +++
Eritema y edema de 10 a 20 mm Positivo ++
Eritema y edema de 5 a 10 mm Positivo +
Leve eritema e indicios de edema de 5mm o menos Dudoso
Solo se aprecia el lugar de inoculacin de el agua Negativo



DIAGNSTICO DE TUBERCULOSIS POR LA
PRUEBA DE MANTOUX


Por qu debe hacerse la prueba de Mantoux?
La prueba de la Mantoux puede mostrar si la persona ha sido infectada con las bacterias causantes de la
tuberculosis.

Quin necesita hacerse la prueba?
- Personas que hayan tenido contacto diario muy cercano con alguien que tenga la tuberculosis
activa.
- Personas que tengan sntomas de tuberculosis tales como cansancio constante, prdida de apetito,
fiebre, sudores nocturnos, prdida de peso, tos persistente.
- Personas que tienen un sistema inmunolgico dbil o problemas de salud.

Qu cuidados se debe tener despus de la prueba?
- NO cubrir el lugar del pinchazo con una curita.
- NO rascarse el brazo, si pica, ponerse una compresa fra.
- Puede lavarse el brazo y secarlo dndose palmaditas, pero NO debe frotrselo.

Qu significa un resultado negativo?
Esto puede significar que la persona no ha sido infectada con las bacterias que causan la tuberculosis.
Puede significar que a la persona le hicieron la prueba muy pronto despus de haber inhalado las bacterias.
El cuerpo reacciona a la prueba de la tuberculina unas cuantas semanas despus de haberse infectado con las
bacterias. En este caso, la prueba debe repetirse despus de tres meses.

Qu significa un resultado positivo?
Esto significa que las bacterias que causan la tuberculosis estn en su cuerpo. A pesar de que la persona est
infectada con las bacterias de la tuberculosis, esto no significa que tenga la enfermedad

PPD

Definicin
PPD (Derivado Purificado de Protena) es un examen selectivo estndar para la tuberculina, un antgeno que
causa tuberculosis. La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa crnica de los pulmones.
Razn para el procedimiento
Una PPD se da habitualmente a todas las personas admitidas como un enfermo hospitalizado. No requiere una
PPD si se ha tenido una reaccin positiva en el pasado o si tiene prueba que se ha tenido una PPD en los
ltimos tres meses.






Procedimiento
Una aguja diminuta se usa para inyectar una cantidad pequea de solucin lquida bajo la piel en su brazo. En
2 3 das una enfermera ver si hay alguna reaccin a la prueba.
Una reaccin es positiva si un abultamiento cerca del tamao de un borrador de lpiz o ms grande aparece en
su brazo. A menudo rojez tambin se desarrolla en el sitio en el que la inyeccin se dio. Estas reacciones
significan que usted sido expuesto(a) a la tuberculosis en algn momento en el pasado. No significa que tiene
TB. Otras pruebas incluyendo una radiografa del trax (rayos X del pecho) se hacen para ver si usted en
realidad tiene TB.
Si se tiene una reaccin positiva al PPD, a menudo es tratada(o) con el medicamento INH (Isoniazida) por 6 a
9 meses. El propsito de estas pastillas (tomadas una vez al da) es destruir los grmenes de TB en su cuerpo
y prevenir que usted desarrolle TB en realidad.


II. EXPERIMENTO N 2:
Sensibilidad al Polvo de Casa
Es una reaccin de hipersensibilidad de tipo inmediata. Es positiva en los pacientes que presentan mastocitos
sensibilizados en IgE especifica contra este antgeno.

Una vez el sistema inmunitario de un atpico ha comenzado a producir IgE contra alrgenos la nueva IgE
producida se va a ir anclando en la superficie de clulas que tengan receptores para IgE en su superficie. Los
mastocitos estn presentes en el tejido conectivo de muchos tejidos. Dado que estas clulas tienen receptores
para IgE pueden recoger en su superficie la IgE producida por los linfocitos B. Cuando los alrgenos acceden
a un tejido como la mucosa respiratoria, los que sean especficos de las IgEs presentes en la superficie de los
mastocitos, se unirn y conducirn a la activacin del mastocito. La activacin del mastocito conduce a la
liberacin de diferentes mediadores (Histamina, leucotrienos, TNF-a que van a tener diferentes efectos sobre
vasos sanguneos, bronquios e intestinos. Todo esto conduce a una reaccin de hipersensibilidad inmediata
que puede producir broncoconstriccin, liberacin de mucus y que pone en marcha el mecanismo de una
posterior reaccin retardada a las pocas horas.

1. Materiales:
1 Jeringa de tuberculina con aguja N 25
Antgeno: Polvo de casa en solucin
Algodn y alcohol
Regla milimetrada

2. Procedimiento:
Limpiar una zona de la piel antebrazo e inyectar por va intradrmica 0.1. ml de la solucin
de polvo de casa.

3. Lectura:
Observa la aparicin de mcula y ppula a los 15.30 y 60 minutos despus.






























Reacciones de Hipersensibilidad




















TIPO I
















TIPO III













P PR R C CT TI IC CA A
8
8

S Sh ho oc ck k A An na af fi il l c ct ti ic co o



La prctica consiste en una anafilaxia generalizada y suele obtenerse en el laboratorio inyectando una pequea
dosis de antgeno a un animal (dosis sensibilizante), y algunos das ms tarde, otra dosis intravenosa de
antgeno (dosis desencadenante).

En el hombre este fenmeno es ms complejo desde el punto de vista fisiopatolgico y recibe el nombre
SHOCK ALERGICO.

1. Materiales:
1 Cobayo
Jeringa de Tuberculina
Suero de caballo 1:100 albmina de huevo 1:10 en sol. salina (Antgeno)

2. Procedimiento:

Inocular un cobayo por va intraperitoneal con 1 ml de la solucin del antgeno a eleccin.
Despus de 10 a 20 das inyectar por va intracardica 1 ml de dicha solucin de antgeno.

RESULTADOS:

Las manifestaciones de la anafilaxia varan segn la especie, pues vara tambin el rgano de choque afecta
en el cobayo, a los pocos minutos de la inyeccin del antgeno (dosis desencandenante) en animal empieza ara
estornudar, toser, quizs presenta convulsiones, e incluso colapso y muerte.


CUESTIONARIO:

1.- Qu debe hacerse antes de inyectar por va intravenosa por primera vez cualquier medicamento?
2.- Investiga en algn hospital por una Historia Clnica donde un paciente haya presentado Shock
anafilctica. presentar un resumen del caso
3.- Qu valor tiene la aplicacin de antihistaminicos despus de producido el shock anafilctico?




SHOCK ANAFILCTICO

Definicin:
Sndrome clnico grave, sbito y adverso de etiologa variada con relacin a los agentes desencadenantes, con
mecanismos inmunolgicos implicados en su fisiopatologa, que se manifiesta por sntomas y signos
aislados o combinados, fatales en muchas ocasiones si no se diagnostican y tratan urgentemente.

Fisiopatologa:
La anafilaxia proviene tras la exposicin a una protena externa que activa la generacin de un anticuerpo
especifico de la clase de Inmunoglobulina IgE. Estas molculas de IgE se unen rpidamente a los mastocitos
y basfilos, estimulando la degranulacin de estas clulas para la liberacin masiva de mediadores
preformados como la histamina, triptasa, quininas, factor de activacin de plaquetas y metabolismo del cido
araquidnico especialmente leucotrienos.
Para que se produzca la anafilaxis es necesario que el individuo haya estado expuesto al antgeno antes y que
haya sintetizado una gran cantidad de anticuerpos IgE especficos.
En una siguiente exposicin puede producirse una reaccin de hipersensibilidad inmediata.
Los medicamentos del tipo de las penicilinas, derivados y antibiticos relacionados con esta familia, as
como los sueros heterlogos figuran como las causales ms frecuentes de las severas reacciones de anafilaxia.

Diagnstico:
Se basa en el antecedente de la exposicin a algn alergeno externo y los signos y sntomas clnicos
caracterizados por congestin de los tejidos y edema.
Los signos y sntomas son derivados de:
1. Shock circulatorio:
Hipotensin
Alteraciones de la frecuencia cardaca (Bradicardia o taquicardia en dependencia del estadio
de la afeccin)
Palidez marcada
Sncope
2. Obstruccin de las vas areas superiores:
Edema de la Epiglotis y laringe
Estridor respiratorio
Tiraje supraesternal
3. Broncoespasmo:
Disnea
Polipnea
Tiraje supraesternal e infraesternal, intercostal y subcostal
Respiracin de Kusmaull
Hipersecrecin pulmonar(edema)
Sibilancias
4. Sntomas cutneos:
Sudoracin
Palidez
Eritema
Urticaria
Prurito
5. Sntomas gastrointestinales:
Dolor Abdominal
Diarreas
Nuseas
Vmitos
6. Sntomas neurolgicos:
Cefalea
Mareos
Confusin mental
Convulsiones
Alteraciones de la conciencia de diversa severidad (Somnolencia, Estupor, Letargo, Coma)


Diagnstico diferencial:
Reaccin anafilactoide: Histaminoliberadores inespecficos, degranulacin de basfilos y
mastocitos, no existe reaccin antgeno anticuerpo. Se activa el complemento (C3A, C5A) por
inhibicin de la sntesis de Prostaglandinas
Coma hipoglicmico (Ayunas, ejercicios violentos, etc)
IMA
Reaccin Vasovagal

Conducta a seguir:
Una vez efectuado el diagnstico de anafilaxis se proceder al tratamiento inmediato, cuyo objetivo
fundamental ser garantizar la vida del paciente, para lo cual se tomaran las siguientes medidas de urgencia:
Posicin de shock: Colocar al paciente en posicin supina con las extremidades inferiores
elevadas
Mantener vas areas permeables (pudiendo ser necesarias la entubacin pulmonar para la
respiracin asistida o mecnica y/o la traqueotoma segn lo merite el caso).
Canalizacin una vena profunda para la administracin de los medicamentos necesarios.
Mantener estables los parmetros vitales tales como frecuencia cardaca, temperatura,
tensin arterial, frecuencia respiratoria, PVC, Monitoreo constante, etc.
Realizar una evaluacin del estado de los gases e iones en el organismo por medio de una
gasometra e ionograma, corrigiendo las alteraciones que pudieran presentarse.
Realizar un balance de los lquidos corporales.
Proceder a la extraccin de muestra de sangre adems para conocer el estado de los
elementos formes de la sangre, grupo sanguneo y factor Rh.


El tratamiento especfico se realizar simultneamente y consiste en:

Adrenalina acuosa (amp. 1ml)-1:1000, administrar:


Edad
Nios de 2 a
6 aos
Nios de 6 a
12 aos
Usar 0.5 ml
diluido en 10cc
de Solucin
Salina Isotnica,
EV lento(2 o 3
min)
Adultos

Dosis
(cc)

0.15 ml

0.2 ml
0.3-0.5
ml/10-15, hasta
un total de 2 cc

Si existiera colapso venoso, pudiera utilizarse la va intramuscular subcutnea
Pudiera utilizarse Epinefrina acuosa a 5 mg en 500 ml de Solucin Salina EV a goteo segn
la tensin arterial, en los casos de severidad.
El Shock Anafilctico debe tratarse en el lugar donde ocurra, de disponerse de los
medicamentos indispensables. Slo despus de la recuperacin de los signos vitales debe procederse a
su remisin, siempre acompaado de un personal mdico y enfermera.
Si es producido por la picadura de insectos se aplicar un torniquete por encima de la
picadura; en la zona de esta se administrar la Epinefrina de 0.1 a 0.3 en forma circular cuatro
punturas, de ser posible se debe extraer el aguijn sin exprimir.
Tratamiento complementario:

Antihistamnicos:
a)Difenhidramina(EV o IM): (amp. 20 mg en 2 ml)

Nios: 5 mg/Kg./24 horas
Adultos: 25-50 mg c/6 horas.

b)Cimetidina: (amp. 300 mg en 2 ml)

4mg/Kg/dosis, sin exceder los 2 g

En casos prolongados de anafilaxia pueden utilizarse como terapia los corticoesteroides por
va parenteral a razn de:
a)Prednisona(EV): (Bbo. 60 mg en 3cc 5cc)
Nios: - Menores de 1 ao = 10mg/Kg/dosis c/6 u 8 horas
- De 1 a 14 aos = 20mg/Kg/dosis c/ 6 u 8 horas
Adultos: 60 mg c/8 horas.

b)Hidrocortisona(EV): (Bbo. 100-500 mg en 3cc 5cc)

Nios: 15 mg/Kg/dosis c/6 u 8 horas
Adultos: 100 mg c/8 horas

Si persiste el broncoespasmo administrar:
a)Broncodilatadores:
Aminofilina(EV):

Nios: 5-7 mg/ Kg/24 horas
Adultos: 250 mg (1amp.) lento de 10-20 minutos, puede repetirse la dosis cada
seis horas.

Si la hipotensin persiste puede aadirse a la venoclisis un suplemento de Dopamina o
Norepinefrina.

Tambin se pueden utilizar expansores de volumen Albmina o Dextrn para el tratamiento
de la hipotensin persistente.

Prevencin de la Anafilaxis:

1. Efectuar una Historia Clnica Farmacolgica antes de administrar cualquier medicamento.
2. Administrar los medicamentos por va oral siempre que sea posible, reservar la va parenteral para los casos
en que sea indispensable.
3. Observar al paciente durante 30 minutos despus de la administracin de un frmaco por va parenteral.
4. Si se descubren antecedentes de hipersensibilidad, se deben efectuar pruebas cutneas, si no se dispone de
un medicamento alternativo.
5. El paciente debe conocer y llevar en todo momento una tarjeta de alerta mdica.