Tesistratamientodeaguasresiduales 120526125722 Phpapp02

1
DIAGNSTICO MICROBIOLGICO DE LOS TANQUES DE

ECUALIZACIN, ACIDIFICACIN Y CORRIENTE DE SALIDA DE LA
PLANTA DE TRATAMIENTO DE AGUAS RESIDUALES DE UNA
INDUSTRIA CERVECERA DE BOGOTA D.C.

MNICA MOYA MORENO
MNICA ADRIANA RODRGUEZ PINZN

PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
Facultad de Ciencias
Carrera de Microbiologa Industrial
Bogot, D.C; 2000

2

TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al ttulo de

MICROBIOLOGO INDUSTRIAL

Mara Mercedes Martnez
Directora

Isabel Cristina Gutirrez
Coodirectora

Facultad de Ciencias
Carrera de Microbiologa Industrial
Bogot, D.C; 2000

3

La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus tesis de grado

Artculo 23 de la Resolucin No. 13 de Julio de 1946

4

MNICA MOYA MORENO
MNICA ADRIANA RODRGUEZ PINZN

_______________________________ ________________________
Dra. AURA ROSA MANASCERO Dr. CARLOS CORREDOR
Directora de la Carrera de Decano Acadmico
Microbiologa Industrial Facultad de Ciencias

FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Bogot, D.C; 2000

5

Dra. MARA MERCEDES MARTNEZ
DIRECTORA

Dra. ISABEL CRISTINA GUTIRREZ
COODIRECTORA

CARRERA DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Bogot, D.C; 2000

6

7

Dra. SANDRA BAENA
JURADO

Dr. MANUEL EDUARDO RUIZ
JURADO

CARRERA DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL
Bogot, D.C; 2000

8

A Dios, a mis padres y a mi hermano quienes han
sido el ms grande aliciente en mi carrera.
Mnica Moya Moreno

A mis padres y hermanas por brindarme su apoyo y
comprensin en la realizacin de este proyecto.
Mnica Adriana Rodrguez Pinzn

9
AGRADECIMIENTOS

Los Autores expresan sus agradecimientos a:

Las directivas de la Divisin de Produccin y al Departamento de Investigacin y
Desarrollo de la Industria Cervecera por permitir el desarrollo del proyecto y
contribuir con el patrocinio total para su ejecucin.

La Dra. Mara Mercedes Martnez, Directora del proyecto por su constante
orientacin cientfica en el manejo de la investigacin, y por su estmulo para el
xito del proyecto.

La Dra. Isabel Cristina Gutirrez, Codirectora del proyecto por su constante apoyo
y su empeo en la realizacin de la investigacin.

A nuestros amigos y compaeros con quienes hemos tenido la fortuna de
compartir estos aos.

A todas las personas que en una u otra forma contribuyeron al logro de la
investigacin.

Septiembre de 2000

10
TABLA DE CONTENIDO
Pg.
RESUMEN xx
1. INTRODUCCIN....................................................................................... 1
2. MARCO TEORICO.................................................................................... 2
2.1. Industria cervecera.................................................................................... 3
2.1.1. Proceso de elaboracin de la cerveza.................................................... 3
2.1.2. Puntos crticos de contaminacin de los efluentes cerveceros................ 4
2.1.3. Caractersticas de los vertimientos de una industria cervecera............. 5
2.2. Aguas residuales....................................................................................... 6
2.2.1. Caractersticas de las aguas residuales.................................................. 7
2.3. Tratamiento de aguas residuales..... .......................................................... 9
2.3.1. Pretratamientos o tratamientos primarios............................................. 10
2.3.1.1. Homogenizacin y regulacin del caudal.......................................... 11
2.3.2. Tratamientos secundarios...................................................................... 11
2.3.2.1. Tratamientos anaerobios.................................................................... 13
2.3.3. Tratamientos terciarios.......................................................................... 18
2.4. Metabolismo y bioqumica de la digestin anaerobia.............................. 20
2.4.1. Hidrlisis.................................................................................. ............. 21
2.4.1.1.Tanque de ecualizacin o igualacin................................................... 22
2.4.2. Acidificacin......................................................................................... 23
2.4.3. Acetognesis.......................................................................................... 24
2.4.4. Metanognesis....................................................................................... 24
2.5. Sistema actual de tratamiento de aguas residuales de la cervecera en
estudio.............................................................................................................
25
2.5.1. Tratamiento primario............................................................................. 27
2.5. 2. Tratamiento secundario......................................................................... 27
2.5.2.1. Homogenizacin de caudales............................................................. 27
2.5.2.2. Acidificacin...................................................................................... 29
2.5.2.3. Proceso metanognico........................................................................ 29
2.6. Microorganismos indicadores de la calidad........................................... 32
2.7. Legislacin sobre vertimientos............................................................... 35

11
2.7.1. Legislacin internacional...................................................................... 35
2.7.2. Marco legal colombiano...................................................................... 37
3. JUSTIFICACION........................................................................................ 39
4. OBJETIVOS................................................................................................ 41
4.1. Objetivo General....................................................................................... 41
4.2. Objetivos Especficos............................................................................... 41
5. METODOLOGIA...................................................................................... 42
5.1 Ubicacin................................................................................................... 42
5.2. Temporalidad.................. .......................................................................... 42
5.3. Muestreo.................................................................................................. 42
5.3.1. Frecuencia de muestreo......................................................................... 42
5.4. Procesamiento de muestras..................................................................... 44
5.4.1. Anlisis microbiolgicos....................................................................... 46
5.4.1.1. Recuento de hetertrofos.................................................................... 46
5.4.1.2. Recuento de coliformes...................................................................... 46
5.4.1.3. Recuento de mohos y levaduras......................................................... 46
5.4.1.4. Aislamiento y recuperacin de cepas................................................. 46
5.4.1.5. Identificacin de cepas aisladas.......................................................... 47
5.5. Evaluacin de microorganismos patgenos............................................. 47
5.5.1. Evaluacin de la presencia de Salmonella sp........................................ 47
5.5.2. Evaluacin de la presencia de Listeria sp.............................................. 48
5.5.3. Evaluacin de la presencia de Staphylococcus aureus.......................... 48
5.5.4. Evaluacin de la presencia de Campylobacter sp. ............................... 48
5.6. Anlisis fsico qumicos......... .................................................................. 48
5.7. Anlisis estadstico................................................................................... 49
5.7.1. Anlisis de anova para grupos microbianos.......................................... 49
5.7.1.1. Hiptesis planteada............................................................................. 49
5.7.2. Comparacin mltiple de scheff para grupos microbianos................. 50
5.7.3. Comparacin de la proporcin de crecimiento por bacteria para cada
tanque...............................................................................................................

50

12
5.7.4. Anlisis de correlacin de las variables fisco-qumicas con los
recuentos microbianos por tanque...................................................................

50
6. RESULTADOS Y DISCUSIN................................................................ 52
6.1. Muestreo................................................................................................... 52
6.2. Recuentos microbianos obtenidos............................................................ 53
6.2.1. Grupo de microorganismos hetertrofos............................................... 53
6.2.2. Grupo de coliformes.............................................................................. 56
6.2.3. Grupo de mohos y levaduras................................................................. 61
6.3. Resultados de anlisis fsico qumicos..................................................... 65
6.3.1. Comportamiento de DQO.................................................................... 65
6.3.2. Comportamiento del pH...................................................................... 67
6.3.3. Correlacin entre cidos grasos voltiles y alcalinidad......................... 68
6.4. Correlacin de variables fsico-qumicas con los grupos microbianos... 71
6.5. Microorganismos identificados................................................................ 72
6.5.1. Evaluacin de microorganismos patgenos.......................................... 80
7. CONCLUSIONES...................................................................................... 83
8. RECOMENDACIONES............................................................................. 84
BIBLIOGRAFA
ANEXOS

13
INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Puntos crticos de contaminacin de los vertimientos cerveceros..... 4
Tabla 2. Caractersticas tpicas de un efluente de cervecera......................... 5
Tabla 3. Parmetros de las aguas residuales y concentraciones mximas
permisibles para verter a un cuerpo de agua y/o red de alcantarillado
pblico. ............................................................................................................

8
Tabla 4. Procesos preliminares del tratamiento de aguas residuales............... 10
Tabla 5. Diferencias entre los sistemas de tratamiento aerobio y anaerobio... 12
Tabla 6. Principales sistemas de tratamiento anaerobio.................................. 13
Tabla 7. Compuestos txicos........................................................................... 17
Tabla 8. Procesos de tratamiento terciario....................................................... 18
Tabla 9. Microorganismos patgenos.............................................................. 33
Tabla 10. Legislacin internacional................................................................. 36
Tabla 11. Concentraciones mximas permisibles para verter a un cuerpo de
agua y/o red de alcantarillado pblico segn la resolucin 1074 del
DAMA.............................................................................................................

37
Tabla 12. Nmero de asignacin de los muestreos......................................... 44
Tabla 13. Anlisis de anova para los grupos microbianos evaluados............. 49
Tabla 14. Comparacin mltiple de scheff para el gr upo de hetertrofos.... 55
Tabla 15. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de coliformes....... 59
Tabla 16. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de mohos y
levaduras..........................................................................................................

64
Tabla 17.Comparacin mltiple de scheff para los valores de DQO............ 66
Tabla 18. Valores mximos y mnimos de pH en cada tanque........................ 67
Tabla 19. Comparacin mltiple de scheff para los valores de pH............... 68
Tabla 20. Comparacin mltiple de scheff para los valores de AGV y
Alcalinidad.......................................................................................................

71
Tabla 21. Niveles de correlacin de las variables fsico-qumicas con los
recuentos microbianos en las etapas del tratamiento.......................................

72
Tabla 22. Descripcin macroscpica y microscpica de las colonias
identificadas.....................................................................................................

73
Tabla 23. Gneros de microorganismos identificados..................................... 76
Pg.

14
Tabla 24. Valores de Z Calculado para las proporciones de crecimiento en
relacin a la etapa de tratamiento....................................................................

79
Tabla 25. Prueba de ausencia-presencia de microorganismos patgenos....... 80

15
INDICE DE FIGURAS
Pg.
Figura 1. Puntos crticos de los vertimientos producidos durante la
elaboracin de la cerveza.................................................................................

3
Figura 2. Reaccin general de la digestin anaerobia..................................... 13
Figura 3. Reactor UASB.................................................................................. 15
Figura 4. Metabolismo de la digestin anaerobia............................................ 21
Figura 5. Reacciones bioqumicas durante la hidrlisis.................................. 22
Figura 6. Reacciones bioqumicas durante la acidificacin............................ 24
Figura 7. Reacciones bioqumicas durante la acetognesis............................. 24
Figura 8. Reacciones bioqumicas dur ante la metanognesis.......................... 25
Figura 9. Origen de los vertimientos que llegan a la planta de tratamiento
de aguas residuales..........................................................................................

26
Figura 10. Diagrama de la planta de tratamiento de aguas residuales en
estudio..............................................................................................................
28
Figura 11. Diagrama de los reactores de mezcla completa versin UAS........ 31
Figura 12. Localizacin de los puntos de muestreo......................................... 43
Figura 13. Procesamiento de muestras............................................................ 45
Figura 14. Esquema de operaciones que afectaron las corrientes vertidas a
la ptar durante Abril y Junio de 1999.............................................................

52
Figura 15. Comportamiento de hetertrofos en la ptar en el tanque de
ecualizacin en los meses de abril y junio de 1999.........................................

53
Figura 16. Comportamiento de hetertrofos en la ptar en el tanque de
acidificacin en los meses de abril y junio de 1999........................................

53
Figura 17. Comportamiento de hetertrofos en la ptar en la corriente de
salida durante los meses de abril y junio de 1999...........................................

54
Figura 18. Comportamiento de hetertrofos en la ptar en los tanques de
ecualizacin, acidificacin y corriente de salida en los meses de abril y
junio de 1999...................................................................................................

54

16
Figura 19. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de
hetertrofos......................................................................................................

55
Figura 20. Porcentaje de remocin de hetertrofos......................................... 56
Figura 21. Crecimiento de coliformes totales en cromocult durante los
muestreos.........................................................................................................
56
Figura 22. Comportamiento del grupo coliforme en la ptar (tanque de
ecualizacin, meses de Abril y Junio de 1999)...............................................

57
Figura 23. Comportamiento del grupo coliforme en la ptar (tanque de
acidificacin, meses de Abril y Junio de 1999)...............................................

57
Figura 24. Comportamiento del grupo coliforme en la ptar (corriente de
salida, meses de Abril y Junio de 1999)..........................................................

57
Figura 25. Comportamiento de coliformes en la ptar en los tanques de
ecualizacin, acidificacin y corriente de salida en los meses de Abril y
Junio de 1999...................................................................................................

58
Figura 26. Porcentaje de remocin microbiana de coliformes....................... 59
Figura 27. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de coliformes...... 59
Figura 28. Confirmacin de coliformes en la PTAR en los tanques de
ecualizacin, acidificacin y corriente de salida durante los meses de abril y
junio de 1999 por medio de la tcnica de NMP..............................................

60
Figura 29. Reaccin positiva de fluorescencia en caldo fluorocult................. 60
Figura 30. Comportamiento de mohos y levaduras en la PTAR ( tanque de
ecualizacin, meses de Abril y Junio de 1999)...............................................

62
Figura 31. Comportamiento de mohos y levaduras en la PTAR ( tanque de
acidificacin, meses de Abril y Junio de 1999)...............................................

62
Figura 32. Comportamiento de mohos y levaduras en la PTAR (corriente
de salida, meses de Abril y Junio de 1999).....................................................

62
Figura 33. Comportamiento de mohos y levaduras en la ptar en los tanques
de ecualizacin, acidificacin y corriente de salida en los meses de Abril y
Junio 1999.......................................................................................................

63
Figura 34. Porcentaje de remocin microbiana de mohos y levaduras........... 63
Figura 35. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de mohos y
levaduras.........................................................................................................

64

17
Figura 36. Morfologa macroscpica de los hongos identificados.................. 64
Figura 37. Valores de DQO registrados en la PTAR en los tanques de
ecualizacin, acidificacin y salida durante los meses de Abril y Junio de
1999.................................................................................................................

65
Figura 38. Comparacin mltiple de scheff para la DQO............................. 66
Figura 39. Valores de pH registrados en la PTAR en los tanques de
ecualizacin, acidificacin y salida durante los meses de abril y junio de
1999.................................................................................................................

67
Figura 40. Comparacin mltiple de scheff para el pH................................. 68
Figura 41. Valores de AGVs y Alcalinidad registrados en la PTAR en el
tanque de ecualizacin en los meses de abril y aunio de 1999......................

69
Figura 42. Valores de AGV y Alcalinidad registrados en la PTAR en el
tanque de acidificacin en los meses de abril y junio de 1999........................

69
Figura 43. Comportamiento de la relacin AGVs/Alcalinidad durante los
meses de abril y junio de 1999........................................................................

70
Figura 44. Comparacin mltiple de scheff para los valores de AGV y
Alcalinidad.......................................................................................................

71
Figura 45. Reacciones bioqumicas observadas en la prueba de API 20 E..... 72
Figura 46. Porcentaje de aparicin de gneros bacterianos identificados en
cada etapa del tratamiento ..............................................................................

74
Figura 47. Porcentaje de aparicin de levaduras identificadas en cada etapa
del tratamiento.................................................................................................

75
Figura 48. Reacciones bioqumicas observadas en la prueba para
identificacin de levaduras..............................................................................

78
Figura 49. Prueba rpida de identificacin para Salmonella sp..................... 81
Figura 50. Prueba rpida de identificacin para Listeria sp........................... 81

18
INDICE DE ANEXOS

Anexo 1.Formulacin de medios de cultivo
Anexo 2. Tcnicas empleadas
Anexo 3. Frmulas y clculos estadsticos
Anexo 4. Datos numricos obtenidos
Anexo 5. Perfil bioqumico de los microorganismos identificados

19
RESUMEN

Los sistemas de digestin anaerobia y en especial el Manto de Lodos de Flujo
Ascendente (UASB Upflow Anaerobic Sludge Blanket), representan una
alternativa importante para el tratamiento de aguas residuales industriales de alta
carga orgnica, dadas las condiciones de operacin del mismo, los bajos costos de
operacin y la remocin de materia orgnica junto con la produccin de biogs.

En Colombia, la industria ha implementado sistemas de tratamiento de aguas
residuales a fin de aumentar la calidad de los efluentes; industrias como la
cervecera utilizan tratamientos anaerobios siendo la tecnologa UASB
ampliamente utilizada.
Teniendo en cuenta que el sistema UASB no tiene como objetivo la remocin de
microorganismos, la caracterizacin microbiana de los efluentes da a conocer a la
industria cervecera la composicin de los mismos en vista de que legislaciones
Colombianas pudieran ser implementadas a corto plazo, exigiendo una mayor
calidad de los vertimientos industriales descargados en sistemas de alcantarillado
pblico o cuerpos de agua receptores.

En el presente estudio se realiz un diagnstico microbiolgico en los tanques de
ecualizacin, acidificacin y en la corriente de salida de la planta de tratamiento
de aguas residuales en una industria cervecera, la cual cuenta con un sistema
anaerobio de reactores de mezcla completa versin UAS. Para tal fin se
realizaron recuentos microbianos de hetertrofos, coliformes, hongos y levaduras;
encontrando porcentajes de remocin del 11%, 12% y 47% respectivamente, en el
efluente con relacin a la corriente de entrada. Entre los microorganismos
identificados predominaron bacterias entricas destacndose gneros como
Enterobacter (16%), Escherichia (33%), Klebsiella (12%) y Serratia (6%) con
el mayor porcentaje de aparicin. As mismo las bacterias identificadas aisladas
sobre el agar Cromocult mostraron a Escherichia coli como el principal
coliforme; dada su persistencia en las etapas del tratamiento evaluado. Dentro del
diagnstico microbiolgico se evalu la presencia de patgenos como Salmonella

20
sp., Listeria sp., Staphylococcus aureus, y Campylobacter sp.(ausencia/presencia),
encontrndose Listeria sp y Campylobacter sp. en una de las muestras de la
corriente de salida. Los parmetros fsico qumicos como DQO, cidos grasos
voltiles, pH y alcalinidad evaluados en las etapas del tratamiento, permitieron
determinar la influencia de los mismos sobre el comportamiento microbiano;
encontrndose una relacin inversa del 42% entre la DQO y coliformes en la
etapa de acidificacin.

1
1. INTRODUCCION

El creciente desarrollo industrial del pas, ha contribuido a la produccin de
residuos slidos, lquidos y gaseosos, descargados en la mayora de los casos sin
ningn tipo de tratamiento. Los vertimientos generados en la industria cervecera,
por su alto contenido de materia orgnica constituyen uno de los principales
aspectos de la problemtica medioambiental, haciendo necesario introducir
regulaciones legislativas destinadas a proteger el medio ambiente (Arrieta, 1998).
En Colombia el marco legal para la disposicin de aguas residuales est
contemplado en el Decreto 1594 del Ministerio de Salud, 1984 que reglamenta los
usos del Agua y el manejo de los Residuos Lquidos; as como en la Resolucin
1074 del 28 de octubre de 1997 del Departamento Administrativo del Medio
Ambiente DAMA.

Una de las alternativas para el tratamiento de aguas residuales es el tratamiento
biolgico, en el que se reduce la materia orgnica. Los sistemas de tratamiento
anaerobio de tipo UASB han sido de amplia aplicacin en la industria cervecera y
de bebidas, dada su adaptabilidad para aguas con alta carga orgnica, siendo la
digestin anaerobia la solucin ms conveniente para transformar la materia
orgnica en cidos grasos voltiles para la produccin de metano y dixido de
carbono; teniendo en cuenta que este sistema no ha sido diseado para la
remocin de microorganismos.

Dentro del marco de la problemtica ambiental la industria cervecera se ha
interesado en conocer las poblaciones microbianas predominantes en sus
vertimientos, as como la eventual presencia de microorganismos patgenos que a
nivel de salud pblica puedan representar un riesgo para la poblacin;
realizndose as un trabajo de base a fin de cuantificar e identificar la carga
microbiana caracterstica, en las etapas de ecualizacin, acidificacin y en la
corriente de salida.

2
2. MARCO TEORICO

2.1. Indus tria cervecera
La creciente concientizacin de la industria cervecera en su problemtica medio
ambiental y la implantacin de un marco legal que garantice la proteccin del
medio ambiente mediante el control de los vertimientos industriales, ha hecho
necesario el tratamiento adecuado de desechos lquidos mediante procesos
biolgicos que aseguren la remocin de materia orgnica (Arrieta, 1998).

2.1.1. Proceso de elaboracin de la cerveza
El proceso de elaboracin de la cerveza consta de tres etapas: la preparacin de
la malta a partir de la cebada, preparacin del mosto de cerveza y fermentacin
(Figura 1).
Materias primas empleadas en la produccin de la cerveza: agua, cebada,
malta, triturado de arroz y azcar, los cuales son recibidos en tolvas que
cuentan con extractores de polvo. En el rea de cocinas son mezcladas las
materias primas de las cuales se obtiene inicialmente una solucin
compleja de sustancias solubles en suspensin que con ayuda de aumento
en la temperatura reaccionan entre s, a fin de obtener azcares
fermentables, dextrinas no fermentables, y el mnimo de protenas solubles
(principales constituyentes del mosto), despus de la ebullicin el mosto es
bombeado a la
olla especial para que mediante una sedimentacin se separen las protenas
coagulantes insolubles.
Fermentacin: luego de un proceso de aireacin y enfriamiento el mosto es
enviado a la cava de fermentacin, en donde se adiciona la levadura; las
cepas para la fabricacin de la cerveza son de dos tipos principales; las
levaduras que fermentan en la parte superior y las que fermentan en el
fondo, siendo las primeras las que permanecen distribuidas de modo
uniforme en el mosto en fermentacin y son llevadas a la parte superior
por el CO2 generado

3

Figura 1. Puntos crticos de los vertimientos producidos durante la
elaboracin de la cerveza

4
durante el proceso de fermentacin, en tanto que las levaduras del fondo se
asientan en los tanques. Las levaduras de la superficie se usan en la
fabricacin de ales, y las levaduras del fondo se usan para fabricar las
cervezas Lager (Brock, 1999).
Maduraci n: ocurrida la fermentacin, la cerveza es conducida a las cavas
de maduracin en donde se clarifica y estabiliza el sabor por la reduccin
del cido sulfhdrico, acetaldehdo, diacetilo y la sedimentacin de resina
de lpulo y levadura. Posteriormente la cerveza es filtrada y carbonatada
para ser enviada a la envasadora de donde se pasa al proceso de
pasteurizacin. Finalmente ya embotellada es etiquetada y dispuesta en
canastas para su distribucin (Pabn, 1998).

2.1.2. Puntos crticos de contaminacin de los efluentes cerveceros
Los elementos contaminantes en un vertido cervecero son principalmente de
naturaleza orgnica, resultado de prdidas en el proceso de fabricacin que van a
parar al drenaje, al igual que los vertidos provenientes de aguas de lavado y aguas
sanitarias.

En estudios realizados se ha encontrado que dentro del proceso de fabricacin de
la cerveza existen puntos crticos que aportan en mayor grado la carga
contaminante, afectando la calidad del efluente final (Figura 1, Tabla 1).
Tabla 1. Puntos crticos de contaminacin de los vertimientos cerveceros
SECCION APORTE DE CONTAMINANTES
Cavas y Cocina Sedimentos producto del lavado de las ollas de coccin.
Soda castica de lavado.
Agua de enjuague y restos de cerveza.
Levadura y Tierra diatomcea.
Envase Soda castica de lavado de botellas.
Residuos de lubricantes de trenes de transporte.
Cerveza por rotura de botellas.
Sala de mquinas Aceites y grasas de maquinaria.
Planta de llenado
de latas
Residuos de cerveza envasada.
Lubricantes de maquinaria.
Aceites solubles.

Fuente: Pabn, 1998

5

2.1.3. Caractersticas de los vertimientos de una industria cervecera
El consumo especfico de agua en la industria cervecera se puede situar en el
rango de los 6-9 Hl/Hl cerveza (Hectolitros/ Hectolitros), con un valor frecuente
de 7Hl/Hl cerveza. La mayor parte del agua utilizada en la elaboracin de
cerveza acaba en la red de drenajes de fbrica (entre un 70-80% del consumo).

Las caractersticas tpicas de un efluente de cervecera se muestran en la Tabla 2.
Las concentraciones de contaminantes dependen del consumo especfico de agua
o radio vertido/produccin, de las prdidas que tienen lugar durante la fabricacin,
el destino de los subproductos o residuos, y del tipo de reactivos qumicos
empleados (Galdos, 1989).
Tabla 2. Caractersticas tpicas de un efluente de cervecera
PARAMETRO UNIDAD VALOR PROMEDIO
Consumo de Agua Hl/Hl 7.5
Volumen de Vertidos Hl/Hl 6
DQO mg/l
Kg/m
3
cerveza
2700
16
DBO mg/l
Kg/m
3
cerveza
1400
8.5
DBO/DQO - 0.55
N-NH4 mg/l 20
P-PO4 mg/l 10
SO4 mg/l 300
PH 7.5
Temperatura C 30
Fuente: Arrieta, 1998

Es as como tanto la naturaleza como la composicin son muy variables a lo largo
de un da de trabajo o en temporadas de alta y baja producci n. Esto se debe a la
naturaleza discontinua del proceso de elaboracin de la cerveza (proceso por
lotes), razn por la cual el efluente varia en caudal y concentracin en cortos
perodos de tiempo, coincidiendo con los momentos en el da en los que se
produce una determinada operacin.
Adems de lo anterior se tienen en cuenta las frecuentes incidencias durante
determinadas operaciones tanto de coccin como de embotellado, que ocasionan
vertidos accidentales altamente cargados o con elevado pH (ORourke, 1992).

6

Durante la elaboracin del mosto se vierten aguas de lavado de la malta, en su
molturacin, as como aguas de aclarado en tanques de almacenamiento, que
contienen materias primas y aditivos. Tambin se vierte mosto, en las operaciones
finales de la olla de filtracin; bagazo, y turbio caliente en las paradas de limpieza
producidas en la etapa de coccin.

Durante la adicin de la levadura, la fermentacin y maduracin, se vierte mosto y
cerveza al final de las operaciones de transferencia desde cocimiento hasta
fermentacin y desde sta a maduracin. En la filtracin se vierte cerveza,
levadura y las tierras diatomceas y adicionalmente el principio y fin de cada
filtracin se vierte normalmente al drenaje. En las operaciones de envasado se
vierte cerveza por rebose ya sea durante las operaciones de llenado de botellas o
por roturas de las mismas en el embalaje. Tambin se vierten papel, adhesivos,
tintas, agentes de limpieza alcalinos (soda), cidos (ntrico y fosfrico),
detergentes y desinfectantes (Arrieta, 1998).

El agua residual proveniente de la industria de la fermentaciones se caracteriza
por velocidades de flujo variable (137m
3
/h), alta carga orgnica (6 a 20kg
DQO/m
3
), bajo pH y una relacin alta C-N. Dada las caractersticas del agua
residual es necesario un pretratamiento in situ antes de ser descargada en sistemas
de alcantarillado local y si es posible un eventual tratamiento secundario
(Fernndez & Polanco, 1996).

2.2. Aguas residuales
Las aguas residuales son las corrientes de agua que ya han tenido uso alguno o
han sido empleadas durante un determinado proceso de produccin; presentando
elevados niveles de contaminacin por concentraciones de materia orgnica y
slidos. Su descarga directa en los cuerpos receptores de agua alteran ymodifican
la calidad de la misma, siendo indispensable el tratamiento previo (CEPIS, 1993).

7
Las aguas residuales pueden ser clasificadas de acuerdo al origen del cual
provienen y de acuerdo a la funcin para la cual fueron empleadas en domsticas,
industriales y agrcolas. Las aguas residuales domsticas provienen de las
necesidades diarias de la comunidad, incluyendo las aguas sanitarias, mientras las
industriales incluyen el agua que ha sido utilizada para el proceso de produccin,
lavado, y aguas sanitarias de la planta de produccin a diferencia de las aguas
residuales agrcolas que provienen de la escorrenta superficial de las zonas
agrcolas (Orozco, 1992).

Los vertimientos industriales presentan grandes diferencias en cuanto a sus
propiedades fsicas y sus constituyentes qumicos y biolgicos dependiendo de las
materias primas empleadas. La mayor parte de los residuos se descargan en las
alcantarillas pblicas para su tratamiento en las plantas locales de aguas negras, y
algunas veces la descarga se hace en un ro, canal, estuario o en el mar
ocasionando la contaminacin de cuerpos de agua receptores (Winkler, 1995).

2.2.1. Caractersticas de las aguas residuales
La calidad de agua residual es medida de acuerdo con los parmetros fsicos,
qumicos y biolgicos que indican el grado y tipo de contaminacin del agua.
Entre los parmetros fsicos se encuentran color, turbiedad, olor, temperatura y
conductividad; entre los qumicos estn parmetros como la demanda qumica de
oxgeno(DQO), demanda bioqumica de oxgeno(DBO), oxgeno disuelto (OD),
slidos suspendidos totales (SST), gases (cido sulfhdrico y metano), pH y
constituyentes qumicos inorgnicos como: alcalinidad, cloruros, metales pesados,
nitrgeno, fsforo y azufre (Tabla 3). Las caracter sticas biolgicas se determinan
por los principales grupos de microorganismos y la evaluacin de organismos
patgenos (CEPIS, 1993).

8
Tabla 3. Parmetros de las aguas residuales y concentraciones mximas permisibles
para verter a un cuerpo de agua y/o re d de alcantarillado pblico
PARMETROS CARACTERSTICAS NORMA REFERENCIA

Temperatura
Temperaturas del rango mesfilo
desde 25C hasta 40C con una
temperatura ptima de 35C.

< 30 C
Biton, 1994
DAMA
Res.1074
Color Tonalidad causada por la materia
orgnica y contaminantes

No aplica

Winkler, 1995
Olor Gases producidos por la
descomposicin de la materia
orgnica.

No aplica
Winkler, 1995
Slidos
Sedimentables
Materia disuelta en el agua, que por
decantacin forma sedimentos
2.0 ml / l DAMA
Res.1074
F
S
I
C
O
S

Slidos
Suspendidos
Totales
Materia flotante y en suspensin, en
dispersin coloidal y el disolucin.

800 mg / l
DAMA
Res.1074

pH
El rango de pH utilizado oscila entre
6.7 a 7.4 pero raramente entre 7.0 a
7.2.

5 - 9
Biton, 1994
DAMA
Res.1074
AGV/Alcalinidad
La proporcin entre el total de cidos
grasos voltiles (como cido actico) y
el total de la alcalinidad (como
carbonato de calcio).
Mantenerla
por debajo
de 0.1.

Sahm, 1984

DQO
Volumen de oxgeno requerido para
oxidar la fraccin orgnica de una
muestra susceptible de oxidacin al
dicromato o permanganato, en cido.

2000 mg / l

Biton, 1994
DAMA
Res.1074

DBO
Medida de la cantidad de oxgeno
requerido para la oxidacin de la
materia orgnica biodegradable
presente en la muestra del agua y
como resultado de la accin de
oxidacin bioqumica aerobia

1000 mg / l

Biton, 1994
DAMA
Res.1074
Q
U
M
I
C
O
S

Metales
Plata Ag
Niquel Ni
Plomo Pb
0.5 mg / l
0.2 mg / l
0.1 mg / l

DAMA
Res.1074

Coliformes

Se detectan a travs de la tcnica del
NMP para coliformes.

10
2

UFC/100ml

Keith, 1999
Bacterias
Patgenas
Evaluacin de la presencia de Listeria
sp. Campylobacter sp, Salmonella sp,
E. coli.

Ausencia

Baker, 1999
Virus Virus entrico, colifagos somticos y F Ausencia Baker, 1997
M
I
C
R
O
B
I
O
L
G
I
C
O
S

Parsitos Evaluacin de protozoos y helmintos. 1 huevo /
litro
OMS, 1989

9

2.3. Tratamiento de aguas residuales
Es un proceso que busca la eliminacin de los componentes contaminantes, o con
efectos nocivos para el medio ambiente, y ajustar la calidad del agua vertida a las
especificaciones legales (DAMA, 1984).
La mejor forma de tratar una agua residual depende de una serie de factores como
caudal, composicin, calidad requerida del efluente y las posibilidades de
reutilizacin o vertido a una depuradora municipal.
Caudal : es la cantidad de agua residual tratada por unidad de tiempo, depende
del tipo y el tamao de la industria, as como del grado de reutilizacin del
agua y el pretratamiento de la misma. La fluctuacin de los caudales es
elevada al generarse descargas intermitentes.
Composicin: se refiere a las cantidades de constituyentes qumicos, fsicos y
biolgicos presentes en las aguas residuales; la composicin en los residuos
lquidos puede variar segn el tipo de proceso industrial.
Calidad requerida del efluente: para evitar impactos ambientales adversos, la
calidad de los efluentes tratados y vertidos debe ser coherente con los usos
posteriores de los mismos, teniendo en cuenta parmetros como (OD, SS, pH,
y qumicos txicos)
Posibilidades de reutilizacin: refirindose al uso del agua residual para fines
beneficiosos tales como el riego agrcola; refrigeracin industrial, o la
incorporacin a un sistema de abastecimiento.
Posibilidad de vertido a una depuradora municipal: es importante la
evaluacin de los diferentes mtodos de evacuacin del agua tratada, ya sea
por vertido y dilucin en aguas al medio ambiente o por aplicacin en cuerpos
de agua receptores (Orozco, 1992).

As teniendo en cuenta las caractersticas y el origen de los vertimientos a tratar
es posible disear un sistema de tratamiento adecuado mediante el cual se alcance
el nivel de depuracin requerida bien sea con posibilidades de reutilizacin o tan
slo bajo los estndares contemplados en la legislacin.
El tratamiento de aguas residuales comnmente es llevado a cabo por medio de
diferentes etapas que disminuyen el grado de contaminacin en relacin con la

10
cantidad de materia or gnica; bsicamente son llevados a cabo procedimientos
fsicos, biolgicos y qumicos, que constituyen las tres principales etapas de los
sistemas de tratamiento.

2.3.1. Pretratamientos o tratamientos primarios
Los pretratamientos de las aguas residuales implican la reduccin de slidos en
suspensin o el acondicionamiento de las aguas para su descarga bien en los
receptores o para pasar a un tratamiento secundario.

Pueden emplearse medios fsicos diferentes para realizar la separacin de los
materiales de mayor tamao, entre ellos se encuentran: rejas, tamices
autolimpiantes, tamices inclinados, microfiltros; y para la separacin de
materiales muy finos es posible montar procesos de desarenacin, en donde la
sedimentacin es la base de la separacin. Tambin pueden emplearse procesos
qumicos para la precipitacin de slidos suspendidos y coloidales, con el fin de
eliminar los slidos flotantes y grasas (Metcalf & Eddy, 1995).

As estos tratamientos primarios pretenden tambin llevar a cabo la separaci n de
aceites, grasas y otros materiales menos densos que el agua, puede realizarse
aprovechando la diferencia de densidades (Tabla 4).

Tabla 4. Procesos preliminares del tratamiento de aguas residuales
OPERACIN
O PROCESO

FUNCIN
Dilaceracin Trituracin de los slidos remanentes despus del desbaste grueso.
Preaireacin Suministro de Oxgeno disuelto para mejorar la distribucin
hidrulica
Cribado Reduccin de slidos en suspensin de tamaos distintos
Tamices Desbaste do slidos gruesos mediante un giro continuo o
intermitente de agua a travs de un disco inclinado con ranuras
fresadas de cobre o bronce.
Floculacin Mejora de las caractersticas de sedimentacin de los slidos en
suspensin
Sedimentacin Eliminacin de slidos en suspensin del mismo tamao de
acuerdo a la diferencia del peso especfico entre las partculas
slidas y el lquido donde se encuentran.
Desarenado Retencin de arenillas, tierra, cscaras de huevo, semillas y dems
partculas con gravedades especficas cercanas, para prevenir el
taponamiento de las tuberias. (Velocidad prxima a 0.3m/s)

11
Flotacin Eliminacin de slidos suspendidos y flotantes previo a la
decantacin primaria.
Precipitacin
qumica
Eliminacin de slidos sedimentables y coloidales y del fsforo.
Fuente: Metcalf & Eddy, 1995

2.3.1.1. Homogenizacin y regulacin del caudal
La homogenizacin tiene por objeto uniformizar los caudales y caractersticas del
efluente cuando los vertidos son irregulares, discontinuos o diferentes de unos
momentos a otros, evitando que descargas puntuales puedan afectar todo el
proceso posterior. Para conseguir la homogenizacin y evitar la sedimentacin de
slidos, el depsito o tanque donde se lleve a cabo este proceso debe estar
provisto de un sistema de agitacin, mecnico o por aire.

2.3.2. Tratamientos secundarios
Los tratamientos secundarios comprenden una gran variedad de procesos
biolgicos en donde las bacterias y varias poblaciones de microorganismos son
los encargados de destruir y metabolizar la materia orgnica soluble y coloidal,
reduciendo la DBO y la DQO a valores inferiores a 100mg/l cuando se trata de
sistemas aerobio y anaerobio complementario. La velocidad de degradacin
depende de la presencia de los microorganismos adecuados, teniendo en cuenta
las caractersticas metablicas requeridas en cada una de las etapas del tratamiento
seleccionado.

En general los procesos biolgicos tambin llamados procesos de tratamiento
secundario, son utilizados para la conversin de la materia orgnica disuelta y
finamente dividida, en flculos biolgicos sedimentables y en slidos siendo
eliminados en los fangos de sedimentacin, generando as la reduccin de la
materia orgnica (Metcalf & Eddy, 1995). En un tratamiento secundario no se
busca la eliminacin de microorganismos patgenos o carga microbiana en
general, bsicamente se centra en la reduccin de la materia orgnica.

Los procesos biolgicos se pueden clasificar en dos grandes grupos, aerobios y
anaerobios. Los primeros emplean bacterias que se desarrollan en presencia de

12
oxgeno disuelto en el agua, mientras que en los segundos las bacterias sobreviven
en ausencia de oxgeno. En ambos casos las poblaciones microbianas convierten
la materia orgnica en nueva biomasa o fango, dixido de carbono y metano.

Las caractersticas de ambos tipos de procesos presentan ventajas y desventajas
con relacin a las caractersticas de diseo, condiciones tcnico econmicas y
eficiencias de remocin de la carga contaminante; as los procesos anaerbicos
ofrecen una diversidad de atractivos a diferencia de los procesos aerbicos, dado
que la tasa a la que se puede llevar a cabo el tratamiento no est limitada por la
tasa a la que se pueda suministrar el oxgeno. El anaerobio tiene bajas tasas de
produccin de lodos residuales, y no requiere de la introduccin de un sistema de
aeracin; lo que reduce sustancialmente los costos de operacin, siendo su
principal desventaja la remocin incompleta de DBO (70-80%) (Arrieta,
1998)(Tabla 5).

Tabla 5. Diferencias entre los sistemas de tratamiento aerobio y anaerobio
TRATAMIENTO AEROBIO TRATAMIENTO ANAEROBIO
Rendimientos de eliminacin de DQO
mayor al 90%
Rendimiento de eliminacin de DQO entre 70-
80%
Gran consumo energtico, requerido
en la aireacin. Genera de 3 a 20
veces mas lodos.
Muy bajo consumo energtico. Produce bajas
cantidades de lodo.
Mayor consumo de nutrientes
(DQO:N:P =100:5:1)
Baja cantidad de nutrientes (DQO:N:P=
100:0.5:0.1)
Adecuado para DQO > 2000mg/l Adecuado para DQO mayores a 1500mg/l
No permite paradas sin sustrato, ni
aireacin
Requiere control de olores, y mayor control de pH
(6.5-7.5)

13
2.3.2.1. Tratamientos anaerobios
Para las aguas residuales con alta carga orgnica (2000-30000 o ms mg DBO/l)
la degradacin anaerobia puede representar la digestin ms conveniente. En
dicho proceso la materia orgnica se descompone por la accin de los
microorganismos en la ausencia de oxgeno produciendo metano y dixido de
carbono (Figura 2). La gran variedad de gneros microbianos predominantes en
vertimientos tan fluctuantes y con altos niveles de materia orgnica como son los
de la industria de alimentos y bebidas permiten que la digestin anaerobia
constituya una buena alternativa para el tratamiento secundario, obteniendo altos
porcentajes de remocin, aproximadamente de un 90% (Winkler, 1995).
Figura 2. Reaccin general de la digestin anaerobia
Fuente: Schroeder, 1990

Bsicamente en un reactor anaerobio cerrado, para evitar el contacto del aire, la
materia orgnica soluble y coloidal, se transforma en cidos voltiles que a su vez,
se transforman en metano y CO
2
. Esos procesos fermentativos son mediados por
diferentes tipos de bacterias que llegan a producir un 65% de metano en el gas
producido, lo cual permite aprovecharlo para mantener la temperatura idnea de la
digestin.
As el tratamiento anaerobio se puede operar en distintos sistemas, variando las
condiciones en el flujo de la corriente a tratar, los materiales de construccin y los
soportes de acuerdo a las caractersticas y los caudales tratados (Tabla 6).

Tabla 6. Principales sistemas de tratamiento anaerobio
SISTEMA FUNCIONAMIENTO REFERENCIA
Reactores de
Contacto
(CSTR)
El sistema donde la biomasa no tiene soporte fsico y
mediante agitacin se favorece el contacto bacterias-
sustrato, evitando las sedimentaciones de slidos en el
interior del reactor.

Ramalho, 1991
Filtro
Anaerobio
En el interior del reactor un material de relleno acta de
soporte fsico para la biomasa, y el agua circula en el
interior en direccin ascendente.

Fernndez, 1996
Reactores de
Lecho Fijo
En estos reactores los microorganismos se adhieren al
medio inerte, que puede ser cualquiera de los medios

Hernandez, 1992
Materia Orgnica CH
4
+ CO
2
+ H
2
+ NH
3
+ H
2
S

14
usados en los lechos bacterianos. Se destacan reactores de
lecho expandido, fundido y reciclado.
Reactor
UASB
Sistema a travs del cual el agua residual fluye
ascencionalmente a travs del fango anaerobio
alcanzndose la depuracin y la retencin de la biomasa
por medio de los separadores de tres fases. (Agua fango
gas)

Arrieta, 1998
CSTR: Continually Stirred Tank Reactor UASB: Upflow Anaerobic Sludge Blanket

Uno de los sistemas anaerobios ms utilizado para el tratamiento de aguas
residuales es el sistema UASB (Upflow Anaerobic Sludge Banket), dicho sistema
fue introduc ido a mediados de la dcada de los setenta por Lettinga y
colaboradores en la Universidad Agrcola de Wageningen (UAW) en Holanda
para el tratamiento de aguas residuales industriales generadas de la industria
alimenticia (Orozco & Giraldo, 1986).
En los aos 80 se reconoci el potencial de la aplicacin de la tecnologa UASB
para el tratamiento de aguas residuales domsticas e industriales en pases en va
de desarrollo.

En Colombia se ha llevado a cabo la implementacin de sistemas anaerobios de
tipo UASB en industrias productoras de levaduras (NABISCO ROYAL
COLOMBIANA), con un 60% de remocin de DQO; embotelladora de bebidas
gaseosas (con un 85% de remocin de DQO), industria cervecera (con un 80% de
remocin de DQO), y efluentes de matadero y frigorfico (con un 75% de
remocin de DQO)(Aldo & Magallana, 1999). En el campo cervecero
reconocidas industrias han implementado sistemas de tratamiento combinados
entre biolgicos, fsicos y qumicos que logran obtener eficiencias de remocin de
DQO entre el 96 y el 98% obteniendo un efluente de alta calidad fisicoqumica y
microbiolgica (Toquica, 1999).

Este tipo de sistema no lleva ningn material de soporte de los microorganismos,
pues la propia biomasa produce unos flculos o granos relativamente densos que
actan de auto soporte. El sistema UASB se adapta muy bien al tratamiento de
afluentes con alto contenido de materia orgnica, siendo empleado en casos

15
donde la eliminacin o conversin de la misma en metano es el objetivo
principal.

Las partes ms destacables del reactor UASB son el sistema de alimentacin, la
distribucin del influente y el separador de fases. En este tipo de reactor el agua se
reparte por toda la seccin inferior a travs de una capa densa de fango anaerobio
atravesando sta en su movimiento ascensional, donde la DQO removida es
convertida parcialmente en biogs (Figura 3).

Figura 3. Reactor UASB
Fuente: Industria cervecera, 1999

En la parte superior del reactor se encuentra el separador que descarga el efluente
tratado, el fango y el biogs. A medida que el biogs es separado y evacuado a
travs del sistema de campanas colectoras que conforman el separador, se reduce
la turbulencia restablecindose la tranquilidad y el fango pesado se decanta en el
reactor (Metcalf & Eddy, 1995).

El proceso de digestin anaerobia es afectado por mltiples factores como la
temperatura, el tiempo de retencin, el pH, la composicin qumica del agua
Efluente
Corriente a
tratar
Campana colectora
Tolva
Sistema de
Recirculacion de lodos
Reactor
Deflector

16
residual, la competencia de las metanognicas con las bacterias sulfato-reductoras,
y la presencia de txicos; siendo el principal problema de este sistema la
retencin de la biomasa dentro del reactor, trabajando con tiempos de retencin
hidrulicos bajos (velocidades de agua elevadas). La actividad metanognica
potencial de dicha biomasa se ve principalmente afectada por aspectos fsicos de
diseo (capacidad y tiempo de retencin, contacto biomasa-agua, inhibicin por
retroalimentacin y compuestos txicos) del reactor que limitan su capacidad de
tratamiento.

Capacidad de retencin
En los reactores UASB la retencin de la biomasa en el interior del reactor se
logra por medio de los separadores de tres fases (agua, fango y gas) colocados en
la parte superior. Si la velocidad del agua a travs del separador es demasiado alta,
o a la altura del separador existe una gran turbulencia originada por una gran
produccin de
biogs, el efluente arrastra ms fango del que se crea en el interior del reactor, lo
que se traduce en una prdida paulatina de la biomasa y de la capacidad de
tratamiento (Arrieta, 1998).
La mayor ventaja del UASB a travs de su diseo es que permite la retencin de
una gran cantidad de biomasa activa en comparacin con otros sistemas
anaerobios, tolerando as altas descargas orgnicas. El flujo ascendente es uno de
los principales factores para la formacin de lodo granular responsable de la alta
tasa de depuracin (Lettinga et al, 1990). Para el tratamiento de aguas residuales
de industrias de bebidas se ha optado por la implementacin de sistemas UASB
gracias a la habilidad para retener grandes cantidades de biomasa debida a la
adhesin de clulas bacterianas en grnulos de biomasa manteniendo un ambiente
nutricionalmente favorable dado el gran flujo de nutrientes que se presenta
(MacLeod , 1990).
Tiempo de retencin
El tiempo de retencin hidrulico (TRH), depende de las caractersticas y
condiciones de diseo, ste debe ser el suficiente para que se lleve a cabo el
metabolismo anaerobio bacteriano en el digestor. Los digestores que presentan un

17
crecimiento uniforme tienen un TRH ms bajo que aquellos digestores que
presentan un crecimiento disperso. En el caso de tanques de acidificacin se ha
encontrado un tiempo de retencin adecuado de 3 horas, y en los reactores hasta 6
horas, cuando se trabaja con reactores de fases separadas (Polprasert, 1989).
Contacto biomasa/agua
El segundo aspecto limitante para la plena utilizacin de la capacidad de la
biomasa en la eliminacin de la materia orgnica del agua residual es el contacto
fango/agua. Este contacto se mejora con una buena expansin o fluidificacin del
manto de fangos en el interior del reactor, as como una buena distribucin del
influente sobre toda la seccin del reactor (Arrieta, 1998).
Formacin y acumulacin de H
2
S
La presencia de sulfatos en aguas residuales estimula la actividad de bacterias
reductoras de sulfato (BSR) durante el tratamiento anaerbico de estos vertidos.
La actividad de estas bacterias limita la produccin de metano al competir, por
algunos substratos comunes (Hidrgeno y Acetato), con las bacterias
metanognicas, ya que stas utilizan el acetato como fuente de electrones (Smul
& Verstraete, 1999).
Presencia de compuestos txicos
Un amplio rango de txicos son los responsables de fallas en el proceso de
digestin anaerobio. La inhibicin en el proceso es evidenciada en la reduccin
de la produccin de metano y un aumento en la concentracin de cidos voltiles
(Tabla 7).
Tabla 7. Compuestos txicos
COMPUESTOS EFECTOS REFERENCIA
Oxgeno Inactiva enzimas claves en la actividad
metanognica.
Wolfe, 1989
Amonio Disminuye la retencin de slidos y
aumenta el tiempo de retencin.
Concentraciones entre 1500-3000 g/l son
txicas e inhibitorias de la actividad
metanognica.
Parkin, 1989
Metales Pesados
Pb
+2
,Cd
+2
, Ni
+2,

Zn
+2
, Cr
+6

Inhiben la actividad metanognica,
cuando la afinidad del metal por el lodo
disminuye.
Parkin, 1989
Sulfuro Se difumina a travs de la membrana
celular. Estos son txicos cuando los
niveles exceden 150-200 mg/l.
Rinzema, 1988
Acidos Grasos de Acidos como el caprlico, laurlico, Wolfe, 1989

18
cadena larga mirystico y oleico, inhiben la actividad
de las bacterias acetoclsticas.

2.3.3. Tratamientos terciarios
Este tipo de tratamientos complementa el tratamiento de las aguas residuales
cuando se requiere una depuracin mayor de la conseguida con los tratamientos
primarios y secundarios. Esta etapa del tratamiento incluye procesos especficos
como precipitacin, adsorcin en carbn activo, oxidacin qumica, inyeccin con
aire a vapor, intercambio inico, smosis inversa y electrodilisis (Cepis, 1993)
(Tabla 8).
Tabla 8. Procesos de tratamiento terciario
PROCESO FUNCIONAMIENTO REFERENCIA
Filtracin Eliminacin de slidos arrastrados, el medio de
filtracin puede ser arena, grava, antracita, u otro
material adecuado.

Hernandez,
1992
Adsorcin Concentracin de un soluto en la superficie de un
slido, acumulndose una capa de molculas de
soluto en la superficie del slido por el desequilibrio
de las fuerzas superficiales.

Rozano, 1995
Ozonificacin Oxidacin con ozono O
3
para la eliminacin de
compuestos orgnicos no saturados presentes en el
AR, reduccin de la formacin de espuma.

Rigola, 1989
Cloracin Desinfeccin con cloro por la fuerte capacidad de
oxidacin de iones metlicos y cianuros a productos
inocuos, por la reduccin de la DBO, y la eliminacin
de colores y olores.

Rozano, 1995
Desinfeccin
con UV
Exposicin a radiaciones UV con longitud de onda de
254nm, es una alternativa efectiva para evitar los
efectos nocivos de la cloracin.
Domnec et al.,
1999
AR: Agua Residual UV: Ultravioleta

La importancia de la implementacin de los sistemas terciarios radica en la
necesidad de destruir agentes patgenos que signifique un grave riesgo sobre la
salud pblica. Los procesos de desinfeccin son esenciales como barrera entre los
agentes causantes de enfermedades y el hombre. Los sistemas terciarios
existentes comprenden procesos fsico y qumicos.

19
La cloracin es uno de los esquemas de desinfeccin mas utilizados como sistema
tradicional, en sus var iantes hipoclorito de calcio (estado slido), hipoclorito de
sodio (estado lquido) y cloro gaseoso, dado su fcil acceso y variedad de costos.
La desinfeccin del cloro acta por la alteracin y ruptura de la pared celular,
ocasionando la desintegracin celular (Bosch, 1993). Sin embargo el gran
problema de la utilizacin de cloro para la desinfeccin de aguas residuales es la
formacin de trihalometanos como cloroformo, diclorometano, bromoformo,
1,2docloroetano; compuestos considerados carcingenos (Archer, 1992).

La ozonizacin es uno de los sistemas de desinfeccin ms efectivos para la
remocin de patgenos sin embargo dados los costos que puede significar su
implementacin no es usado ampliamente solo cuando se requieren efluentes de
alta calidad (Kuo & Yamashita, 1999).

El ozono es un agente fuertemente oxidante y es muy efectivo para la remocin de
olor, sabor y color. Este oxidante es utilizado para la inactivacin de patgenos
(bacterias y parsitos) y para la oxidacin de hierro y manganeso; compuestos
causantes del olor, sabor y color. En medio acuoso el ozono produce radicales
libres que inactivan los microorganismos, afectando la permeabilidad, la actividad
enzimtica y el DNA bacteriano (Ishizaki, 1984). Algunos efectos adversos
relacionados con el uso del ozono son los incrementos en la mutagenicidad con
valores >3 mg/l, sin embargo esto puede contrarrestarse con filtros de carbn
activado (Matsuda, 1992).

La desinfeccin con radiacin ultravioleta UV utiliza lmparas de mercurio
encerradas en tubos de cuarzo para permitir la irradiacin bajo las corrientes de
agua ejerciendo as un efecto germicida a 2.537 nm debido a que en los cidos
nucleicos (ADN y ARN) microbianos son producidas mutaciones, impidiendo su
reproduccin y causando as su destruccin. Una de las dificultades para la
aplicacin de la radiacin ultravioleta consiste en calculo de la dosis necesaria a
un flujo determinado para la desinfeccin del agua residual. Otras desventajas
son los altos costos de mantenimiento y limpieza y en algunas ocasiones es

20
necesario agregar cloro posterior. Sin embargo es eficiente en la inactivacin de
bacterias , virus y parsitos, no presenta problemas de olores, no requiere mucho
espacio ni almacenaje de qumicos (Bitton, 1994).

Otros sistemas terciarios son los de tipo fsico que consisten en microfiltracin y
filtracin por membranas, procesos de sedimentacin y coagulacin por agentes
qumicos. Estos sistemas son mucho mas econmicos y pueden ser una
alternativa en los tratamiento de aguas residuales, permiten la remocin de
partculas as como de parsitos y bacterias (Edzwald & Kelley, 1998).

2.4. Metabolismo y bioqumica de la digestin anaerobia
La digestin anaerobia se realiza en tres etapas en las cuales la materia org nica es
transformada por la accin de microorganismos en 78% de biogs (mezcla de CH
4
+ CO
2
); 20% de materia orgnica degradada que contina en disolucin; y 1-2%
en nuevos microorganismos (crecimiento anaerobio). La degradacin de materia
orgnica se realiza a travs de una serie compleja de reacciones bioqumicas que
transcurren tanto en paralelo como en serie (Fernndez, 1996).

Las distintas reacciones bioqumicas que tienen lugar en el tratamiento anaerobio
se pueden agrupar en 4 fases diferenciadas que incluyen hidrlisis, acidificacin,
acetogensis y metanogensis (Figura 4).

21
MATERIA ORGANICA

PROTEINAS CARBOHIDRATOS LIPIDOS

HIDRLISIS

AMINOCIDOS AZUCARES ACIDOS GRASOS

PRODUCTOS INTERMEDIARIOS
PROPIONATO, BUTIRATO, LACTATO

Fermentacin Oxidacin Anaerbica

2.4.1. Hidrlisis
La materia orgnica en suspensin con estructura compleja se transforma en
compuestos solubles por actuacin de exoenzimas. Las protenas son
transformadas en simples aminocidos, las grasas en glicerol y cidos grasos y los
carbohidratos en azcares; esta degradacin se da con el fin de facilitar la
penetracin de sustratos al interior de la clula (Figura 5).

Dado el alto contenido de hidratos de carbono (almidn y azcares) presente en el
efluente cervecero, dicho polisacrido es atacado por el complejo de amilasas
microbianas produciendo as sustratos ms asimilables por las poblaciones
microbianas que intervienen en las etapas posteriores de la digestin anaerobia.

Figura 4. Metabolismo de la digestin anaerobia

METANO
ACETATO HIDROGENO

22

Hidrlisis de Carbohidratos
C6H12O6 C4H9OH + 2CO2 + H2O
Glucosa Butanol Dixido de carbono Agua
C4H9OH + H2O 3CH4 + CO2 + H2O
Butanol Agua Metano Dixido de carbono Agua

Hidrlisis de Protenas
CO(NH2)2 + H2O CO2 + 2NH3 + H2S + 4(CH2NH2.COOH) + 2H2O
Agua D. de carbono Amoniaco Sulfuro de H Agua
4(CH
2
NH
2
.COOH) + 2H
2
O 3CH
4
+ 5CO
2
+ 4NH
3
Agua Metano D. de carbono Amoniaco

Hidrlisis de Grasas
C
3
H
5
(CH
3
.(CH
2
)
16
.COO)
3
+ 3H
2
O C
3
H
5
(OH)
3
+ 3(CH
3
.(CH
2
)
16
.COOH)
Agua Glicerol
4(C
3
H
5
(OH)
3
) - 2H
2
O 7CH
4
+ 5CO
2
Metano D. de carbono
12(CH
3
.(CH
2
)
16
.COOH) + 3H
2
O 52CH
4
+ 20CO
2


59CH
4
+ 25CO
2


Durante el proceso de hidrlisis estn asociados microorganismos anaerobios
pertenecientes a los gneros Bacteroides, Acetivibrio, Ruminococcus, Closttridium
y Anaerovibrio entre otros y microorganismos facultativos pertenecientes a los
gneros Pseudomonas, Bacillus y mohos como Aspergillus sp y Penicillium sp
(Speece, 1983).

2.4. 1.1.Tanque de ecualizacin o igualacin
Este se hace necesario cuando las variaciones en el flujo o composicin del agua
residual son muy altas. La principal funcin de este depsito es regular el flujo de
un desecho y homogenizar las caractersticas de los caudales a fin de dar inicio al
proceso de transformaciones bioqumicas previas al tratamiento anaerobio.
Adems es un sistema de amortizacin para altas descargas orgnicas,
permitiendo mejorar la transferencia de (Carvajal, 1997).

Figura 5. Reacciones bioqumicas durante la hidrlisis
Fuente: Hernndez, 1992

23
2.4.2. Acidificacin
Las bacterias acidificantes transforman la materia orgnica disuelta aminocidos,
azcares, y cidos grasos de cadena larga, en cidos grasos voltiles como el cido
lctico, actico, propinico, y butrico principalmente, en funcin del sustrato
base, y CO2 + H2 . As la cintica del proceso es rpida a pH bajo (5.8 6.2).

Durante el proceso de acidognesis, estn bacterias fermentativas pertenecientes a
los gneros Clostridium, Bacteroides, Lactobacillus, Acetivibrio entre otros y
algunos microorganismos facultativos que conciernen a los gneros Escherichia,
Salmonella y Klebsiella, correspondientes a la familia Enterobacteriaceae.
Este proceso es esencial para que se lleve a cabo la digestin anaerobia, pues la
produccin de dichos cidos libera compuest os simples como hidrgeno y
acetato primordiales para las poblaciones microbianas presentes en los
reactores (Figura 6).

De igual manera previo a la entrada de los reactores es necesario un proceso de
neutralizacin de los vertidos. Esta neutralizacin persigue eliminar la acidez
mezclando vertidos de pH opuesto, de manera que los vertidos cidos se
neutralizan por adicin de un lcali, en general cal, por razones econmicas,
aunque a veces es necesario utilizar solucin concentrada de NaOH o Na2CO3, de
reaccin ms rpida y que no pueden dar problemas de precipitacin de sulfato de
calcio. El principal fin de esta neutralizacin es alcanzar un pH de 6.5 a 7.0
ptimo para el crecimiento de las poblaciones metanognicas presentes en los
reactores (Rozano, 1995).

En la industria cervecera es llevado a cabo un proceso de neutralizacin a travs
de gaseado con dixido de carbono o soda custica para ajuste del pH neutro, as
mismo durante la etapa de acidificacin se lleva a cabo la adicin de
micronutr ientes como Sulfato de magnesio heptahidratado, cloruro de calcio,
cloruro frrico, sulfato de manganeso y macronutrientes como urea y cido
fosfrico (Metcalf, 1998).

24

AA-Azcares-Ac.Grasos Ac.Orgnicos + Alcoholes -Cetonas + Acetato + CO2 + H2
Actico, Frmico
Propinico, Lctico
Butrico, Succnico
A.A: Aminocidos azufrados H
2
S

Figura 6. Reacciones bioqumicas durante la acidificacin
Fuente: Bitton, 1994

2.4.3. Acetognesis
En esta etapa del proceso las bacterias acetognicas convierten los productos de
las acidificantes en cido actico, hidrgeno y dixido de carbono; estas conviven
con y dependen de las metanognicas ya que solo pueden metabolizar cuando las
metanognicas o las sulfatoreductoras mantienen suficientemente baja la
concentracin de acetato y la presin parcial del hidrgeno en el lquido (Arrieta,
1998) (Figura 7).

Etanol + Ac.Propinico + Ac. Butrico Acido Actico
CH
3
CH
2
OH + CO
2
CH
3
COOH + 2H
2
Etanol Ac. Actico
CH
3
CH
2
COOH + 2H
2
O CH
3
COOH + CO
2
+ 3H
2
Ac. Propinico Ac. Actico
CH
3
CH
2
CH
2
COOH + 2H
2
O 2CH
3
COOH + 2H
2

Ac. Butrico Ac. Actico

Figura 7. Reacciones bioqumicas durante la acetognesis
Fuente: Bitton, 1994

En el proceso de acetognesis estn asociados Syntrophobacter wolinii y
Syntrophobacter wolfei (Boone et al, 1980), Syntrophomonas sp. (McInerney et
al, 1981) y Syntrophus sp.

2.4.4. Metanognesis
Es el proceso final en donde las bacterias metanognicas producen CH4 a partir de
mezclas de acetato y CO
2
+ H
2
, este proceso tiene lugar en condiciones
estrictamente anaerobias, a un pH ptimo de 7.0 y temperatura ptima de 35C.

25
La produccin de metano se lleva a cabo mediante dos rutas metablicas, la
reduccin del dixido de carbono y el hidrgeno (metanognicas hidrogenoflicas)
y la fermentacin del cido actico (metanognicas acetoclsticas) (Figura 8)
(Bitton, 1994).

Metanognicas Hidrogenofilicas CO
2
+ 4H
2
CH
4
+ 2H
2
O
D. de carbono Hidrgeno Metano Agua

Metanognicas Acetoclsticas CH
3
COOH CH
4
+ CO
2
Ac. Actico Metano D. de carbono

El grupo de metanognicas se localiza al final de la cascada de nutrientes y son los
encargados de convertir el CO
2
, H
2
, y acetato a metano (MacLeod et al, 1990).
Investigaciones realizadas por MacLeod et al (1990) en lodos de digestores
anaerobios , identificaron como el principal metangeno hidroflico
Methanospirillum hungatei tambin se identific Methanobrevibacter sp, y
Methanosarcina sp en pequeos agregados (Dubourguier, 1993).

2.5. Sistema actual de tratamiento de aguas residuales de la cervecera en
estudio
La planta de tratamiento de aguas residuales estudiada se encuentra ubicada
dentro del rea de la planta de produccin de la industria cervecera. Cuenta con
un tratamiento primario constituido por sistemas de desbaste de slidos y un
tratamiento secundario de tipo anaerobio con reactores de mezcla completa
versin UAS presentados como ANAPULSE (reactor anaerobio de manto de
lodos pulsado). La llegada de los vertimientos a la planta proviene de dos
grandes corrientes; la principal, correspondiente al drenaje de tapas, maltera,
cocinas, cavas, y casino, incluyendo aguas sanitarias; y la corriente que proviene
del saln de envases y planta de llenado de latas, entra a la planta como una
corriente diferente (Figura 9).

Figura 8. Reacciones bioqumicas durante la metanognesis Fuente:
Hernndez, 1992

26

Planta de Tratamiento de
Aguas Residuales
Planta de
Llenado de
latas
Saln de
Envase
Cavas
Cocinas
Nordon

Cocina
Steineker

Sala de
mquinas
y calderas
Alcantarillado
Casino
Tapas y Malteria
Figura 9. Origen de los vertimientos que llegan a la planta de tratamiento de
aguas residuales

27
2.5.1. Tratamiento primario
La planta cuenta con un tratamiento primario en donde por medio de procesos
fsicos como el desbaste por rejillas y tamices, se lleva a cabo la separacin de
slidos de mayor tamao, y una posterior desarenacin en donde se retiran por
sedimentacin arenillas, tierra diatomcea y en general slidos suspendidos.
En vista que los vertimientos tratados en la planta, son recibidos en dos grandes
corrientes; la corriente de tapas, maltera, cocinas, cavas, casino, y aguas
sanitarias sufre un procesos fsico de desbaste por tamices estticos; mientras que
la corriente de envases y de la planta de llenado de latas sufre un desbaste por
tamices gruesos rotatorios, dado el tamao de los slidos a separar provenientes
de esta corriente (tapas, colillas y etiquetas principalmente).

2.5.2. Tratamiento secundario
En el tratamiento secundario se lleva a cabo un proceso biolgico de tipo
anaerobio, el cual involucra los procesos de hidrlisis, acidificacin, acetognesis,
y metanognesis.

2.5.2.1. Homogenizacin de caudales
Posterior al tratamiento fsico por desbaste y desarenacin la dos corrientes se
unen al llegar al tanque de ecualizaci n, donde es llevada a cabo la
homogenizacin de caudales. Este tanque tiene una capacidad volumtrica de
770m
3
, maneja un caudal promedio de 216m
3
/h, un tiempo de retencin hidrulica
de 3.6h y un pH que varia entre 6-10; condiciones dadas al momento del estudio
(Figura 10).

28

Cavas y Cocinas
Recoleccin de Cascarilla
TAMIZADO
DESARENADOR
TK. ECUALIZACIN
Volumen: 1680m
3
TRH= 7.8h
TK. ACIDIFICACIN
Envase-Planta de llenado de latas
TK. NEUTRALIZACIN 35 m
3

Bomba sumergible
Mezclador sumergible
TRATAMIENTO PRIMARIO TRATAMIENTO SECUNDARIO
Q= 216 m
3
/h
TRH= 3.6h pH= 6-10

TK. BOMBEO 86 m
3
Tamices gruesos
rotatorios
Figura 10. Planta de tratamiento de aguas residuales en estudio
Fuente: Industria cervecera, 1999

29
2.5.2.2. Acidificacin
El proceso de acidificacin es llevado a cabo en un tanque cuyas condiciones de
operacin estn determinadas por una capacidad volumtrica de 1680m
3
, un
tiempo de retencin hidrulica de 7.8 horas, y un pH entre 5.8 - 6.2. En esta etapa
del proceso se lleva a cabo la adicin de micronutrientes como son sales de hierro,
zinc, cobalto y molibdeno, al igual que macronutrientes como urea (Figura 10).

Transcurrido el tiempo de retencin en este tanque el agua pasa por rebose al
tanque de neutralizacin a fin de controlar las condiciones de pH previo a la
entrada a los reactores, esto se lleva a cabo mediante sensores de pH dispuestos
en las tuberas, siendo controlado con adicin de soda custica hasta alcanzar un
pH de 6.8 7.2.
Posteriormente la corriente pasa por rebose al tanque de bombeo en donde
sensores de flujo unidos a las tuberas facilitan la medicin del caudal.

2.5.2.3. Proceso metanognico
Para llevar a cabo el proceso metanognico el sistema cuenta con cuatro reactores
anaerobios de mezcla completa de versin UAS de manto de lodos de lecho
pulsado con recirculacin de lodos desde un decantador lateral utilizando para ello
el mismo biogs.

Las condiciones de operacin de los reactores estn determinadas por una
capacidad volumtrica de 1620m
3
, un volumen de reaccin de 655m
3
, y dado que
los reactores operan por pulsos ma nejan un caudal promedio de 6080m
3
cada 10
minutos y tienen un tiempo de retencin hidrulica de 4 horas. Posteriormente el
agua tratada se dirige hacia una canaleta Parshall, de all es vertida al
alcantarillado, donde tiene como cuerpo receptor el ro Bogot, siendo en parte
utilizada para riego agrcola (Figura 11).

La planta de tratamiento de aguas residuales cuenta con un sistema de eliminacin
de olores en el cual el control del H2S producido en los tanques de ecualizacin,
acidificacin, neutralizacin y bombeo, se realiza extrayendo el colchn de gas

30
formado en estos tanques y hacindolo pasar por una resina empacada la cual
absorbe el H2S (Pabn, 1998).
El biogs producido es llevado a travs de una tubera hacia una tea de
combustin siendo regulado el caudal y la presin del mismo mediante un
gasmetro.

31

T. Neutralizacin
Volumen : 1620m
3
V. de reaccin: 655m
3

Temperatura:
26 - 27 grados C
pH: 7.17

Bomba sumergible
Reactor 1 Reactor 2
Canaleta PARSHALL
T. Neutralizacin T. de bombeo.
Figura 11. Diagrama de los reactores de mezcla completa
versin UAS
Fuente: Industria cervecer a, 1999

32
2.6. Microorganismos indicadores de la calidad del agua residual
Dentro de los organismos patgenos para el hombre que se transmiten por el agua
se incluyen virus, bacterias y protozoarios, stos organismos se desarrollan en el
intestino y abandonan al organismo en las heces. Entonces la contaminacin fecal
de los suministros de agua puede ocurrir y si sta no es tratada adecuadamente los
patgenos penetran en un nuevo husped al consumir agua (Brock & Madigan,
1999).

Dado el impacto que pueden ocasionar los microorga nismos patgenos sobre la
salud pblica; recientes investigaciones se han dedicado a la deteccin rpida de
los indicadores tradicionales como lo son los coliformes y otros organismos que
actan como patgenos emergentes transmitidos por el flujo de agua en caso de
ser reutilizada para suministro directo en operaciones de limpieza o
indirectamente en el riego de cultivos, lo que generara un alto riesgo de
contaminacin para el hombre, representado en infecciones gastrointestinales,
enfermedades transmitidas por alimentos que ha sido regados con aguas tratadas y
en general el desencadenamiento de brotes epidemiolgicos por contacto con
dichos patgenos, afectando por ende la calidad de vida (Baker, 1998).

Como consecuencia de la contaminacin fecal, las aguas residuales presentan
regularmente una contaminacin con varios patgenos, incluyendo Salmonella
sp., Helicobacter sp. , Listeria sp. , y Campylobacter sp. ; adems algunas
investigaciones han mostrado la prevalencia de gastroenteritis en los trabajadores
de las plantas de tratamiento de aguas residuales en donde sntomas
gastrointestinales y constantes dolores abdominales se han atribuido a la presencia
de patgenos entricos en las corrientes tratadas (Kearney et al., 1993, Baker et
al., 1999)
Estudios realizados en sistemas de digestin anaerobia han demostrado la
presencia de bacterias entricas como E.coli, Salmonella typhimurium, Yersinia
enterocolitica, Listeria monocytogenes y Campylobacter jejuni tras tratamientos
de tipo anaerobio, teniendo en cue nta que las aguas residuales tratadas incluan

33
aguas sanitarias (aguas domsticas), siendo estas la principal fuente de
contaminacin de origen fecal (Kearney et al, 1994).

En los pases desarrollados el principal objetivo del tratamiento es la remocin de
materia orgnica y nutrientes, pues una tifoidea o un caso de parasitismo son
excepcionales. En cambio, en los pases en desarrollo, el objetivo prioritario de
tratamiento de las aguas residuales debe ser la remocin de parsitos, bacterias y
virus patgenos que ocasionan enfermedades endmicas (CEPIS, 1995).
Las excretas y las aguas residuales contienen generalmente elevadas
concentraciones de agentes patgenos, sobre todo en pases donde predominan las
enfermedades diarreicas y los parsitos intestinale s. Dada la importancia que
reviste a nivel de salud pblica; es necesario mantener un sistema de vigilancia
para la evaluacin de microorganismos patgenos que pudieran desencadenar
brotes epidemiolgicos. Las aguas superficiales juegan un papel importante en la
transmisin de agentes patgenos descargados a travs de las heces humanas y
animales. Estos agentes llegan a esta agua, provenientes de aguas residuales
domsticas e industriales y pueden retornar a los humanos por varias vas como el
uso de esta a gua para recreacin, deportes, riego, as como agua potable (Tabla 9)
(Khuder, 1998).
Tabla 9. Microorganismos patgenos
PATOGENOS CARACTERSTICA FOTOGRAFIA RFERENCIA
Salmonella sp.

Bacilo Gram negativo de la
familia Enterobacteriaceae,
anaerobio facultativo, patgeno
en humanos causante de
gastroenteritis y septicemia.

Le Minor,
Bergeys
Manual 1984
Listeria sp
Bacilo Gram positivo, aerobio y
anaerobio facultativo, habitante
de aguas residuales, suelo y
ensilajes, esta asociada con
enfermedades de riesgo severo
como septicemia, cefalea y
meningitis

Seeliger &
Jones,
Bergeys
Manual 1984

34
Staphylococcus
aureus
Coco Gram positivo, es la
especie ms patgena de la
familia Micrococaceae, capaz de
producir dolores abdominales,
vmito, diarrea y nauseas.

Koneman,
1993
Campylobacter
sp.
Bacilo curvo gramnegativo,
microaerbico, se transmite al
hombre por los alimentos
contaminados o por aguas
residuales y superficiales no
sometidas a cloracin

Brock, 1993
Sebald &
Veron,
Bergeys
Manual 1984

Es evidente que la reutilizacin de aguas residuales representa un alto riesgo tanto
para la salud pblica como para los trabajadores del sistema de depuracin, ya que
la exposicin a microorganismos patgenos y a sustancias txicas es ms elevada
en estos casos. Auque el contacto con agentes patgenos que generen peligro en la
salud de la poblacin no se refiere tan slo a la ingestin del agua residual
depurada o al contacto con la piel o mucosas, pues en los sistemas de reutilizacin
pueden resultar afectadas diversas matrices ambientales, entre las cuales se
destaca el aire, las aguas subterrneas, la tierra y los vegetales regados con aguas
tratadas. (CEPIS, 1995)
Los principales patgenos encontrados en las aguas residuales hacen referencia a
los causantes de enfermedades gastrointestinales, como Salmonella y E.coli, pues
en Amrica Latina y en el Caribe estas figuran entre las diez primeras causas de
muerte (Ynez, 1994).

Algunas investigaciones realizadas recientemente en Mxico muestran la
presencia de Salmonella sp. en diferentes sitios de una planta de tratamiento de
aguas residuales y la presencia de dicha bacteria en los operadores de la planta,
dado que a principios de 1972, en Mxico se presento una epidemia de tifoidea
ocasionada por la ingesta de agua contaminada procedente de un canal destinado
al riego agrcola con aguas residuales. En vista de que las enfermedades
infecciosas como salmonellosis y fiebre

35
tifoidea son enfermedades con mortalidad relativamente alta, se han relacionado
con la presencia de Salmonella sp. en aguas residuales empleadas para riego, dado
que esta bacteria en estado de resistencia o vida vegetativa sobrevive
extraordinariamente a los sistemas de digestin anaerbica (Garza, 1999).

Es importante tener en cuenta que la calidad final del efluente depende en gran
manera del tratamiento que se le de al agua, pues los tratamientos previos
mediante rejas o dilaceracin no tiene ningn efecto en el contenido de patgenos
en agua residual, al igual que sistemas de tratamiento como la digestin anaerobia,
los cuales no han sido diseados para la remocin de patgenos como
Campylobacter sp. y Listeria sp. pues las facultades adaptativas de estas bacterias
a las condiciones anoxignicas les permiten sobrevivir al tratamiento (Curtis,
1999).

Los tratamientos con lodos activados tienen realmente poca efectividad en la
remocin de patgenos, mientras que los estanques o lagunas para el tratamiento
de aguas residuales son capaces de conseguir cua lidades microbiolgicas
suficientemente buenas con tiempos de retencin de 15 a 30 das, ofreciendo as
buenas condiciones para la sedimentacin de protozoos y helmintos.

A pesar de esto para la eliminacin completa y continua de organismos patgenos
en aguas residuales es necesario implantar sistemas de tratamiento terciario que
complementen los tratamientos biolgicos; siendo la cloracin uno de los
esquemas de desinfeccin mas ampliamente utilizados.

2.7. Legislacin sobre vertimientos
2.7.1. Legislacin internacional
El tratamiento de aguas residuales ha empezado a centrarse en los problemas de
salud pblica relacionados con la descarga al medio ambiente de contaminantes
qumicos y biolgicos, causando impactos medioambientales producidos por los
vertidos de aguas residuales. Por esta razn se ha hecho necesaria la
implementacin de legislaciones estrictas que establezcan parmetros que se

36
ajusten a las condiciones locales, teniendo en cuenta los factores epidemiolgicos,
socioculturales y ambientales; con el fin de que los pases puedan promulgar una
legislacin racional para controlar el aprovechamiento de las aguas residuales
(OMS, 1989).
En cuanto a estndares internacionales la OMS establece los aspectos sanitarios
del uso de aguas residuales en el informe tcnico 778 de 1989; as mismos pases
como Mxico poseen la norma oficial mexicana NOM-001-ECOL de 1996, que
establece los limites mximos permisibles de contaminantes en las descargas de
aguas residuales en aguas y bienes nacionales.
En Inglate rra la agencia ambiental controla la regulacin de descargas de aguas
residuales en aguas costeras, superficiales y aguas subterrneas a travs del
Environmental Quality Standards.
En pases como Estados Unidos existen leyes a nivel estatal como en el estado de
Virginia donde existe el Water Quality Standard, Cap. 260, Seccin 160, Agency
25 controla la calidad de los vertimientos excretados en cuerpos de agua. Las
normas del departamento de salud pblica del estado de California establecen
lineamientos ms estrictos para la calidad de agua residual con fines de riego.
(NPDES, 1996) (Tabla 10)
Tabla 10. Legislacin internacional
INSTITUCIN
O PAIS
NORMAS REFERENCIA
OMS Establece un limite permisible de 1000coliformes
fecales/100ml para las verduras consumidas regadas
con aguas residuales tratadas.
OMS, Informe
778. 1989

Estados Unidos

El departamento de salud pblica del estado de
California permite un total de 23 0 2,2
coliformes/100ml de agua segn el cultivo regado y el
mtodo de riego empleado.
CEPIS-OMS-
OPS,1997

Canad
El ministerio del medio ambiente en Ontario decreta
como limites permisibles DBO
5
15 mg/L max. OD
2 mg/L max.
SS 15 mg/L max.
Coliformes Fecales 200/100ml max.
Ontario Ministry
of the
Environment,
1978
Japn DBO
5
20 mg/L max. SS 70 mg/L max
Coliformes Fecales 30/100ml max
Tamaki, 1980

Mxico
pH 5- 10 Coliformes Fecales 1000-
2000/100ml (NMP)
Temperatura 40C Parsitos 1 huevo de helminto/
litro de agua
DBO5 200mg/ L
NOM-001-
ECOL de 1996

37
2.7.2. Marco legal colombiano
En Colombia la resolucin 1074 del 26 de Octubre de 1997 por la cual se
establecen estndares ambientales en materia de vertimientos y el Director del
Departamento Tcnico Administrativo del Medio Ambiente DAMA en uso de sus
facultades legales, en especial las conferidas en el Artculo 66 de la Ley 99 de
1993, el decreto 673 de 1995 y el Artculo 10 del Acuerdo 19 de 1996,
consideran:
Que el decreto 1594 de 1984, reglamenta los usos del agua y el manejo de los
residuos lquidos. (Tabla 11)
Que todo vertimiento, adems de las disposiciones contempladas en el artculo
82 del Decreto 1594 de 1984, deber cumplir con las normas que sobre estos
se establezcan.
Que segn lo establecido en los artculos 113 y 120 del decreto 1594 de 1984
las personas naturales y jurdicas que recolecten, transporten y dispongan
residuos lquidos, debern cumplir con las normas de vertimiento y obtener el
permiso correspondiente.
Que el artculo primero del Decreto Distrital 673 de 1995, dispone que el
DAMA es la autoridad ambiental dentro del permetro urbano del Distrito
Capital.

Tabla 11. Concentraciones mximas permisibles para verter a un cuerpo de agua y/o
red de alcantarillado pblico segn la resolucin 1074 del DAMA
PARAMETRO EXPRESADA COMO NORMA (mg/l)
Arsnico
Bario
Cadmio
Carbamatos
Cianuro
Zinc
Cloroformo Extracto de
carbn
Cobre
Compuestos fenlicos
Compuestos organoclorados
Compuestos organofosforados
Cromo hexavalente
Cromo total
DBO5
As (mg/l)
Ba (mg/l)
Cd (mg/l)
Agente activo
CN (mg/l)
Zn (mg/l)
ECC (mg/l)
Cu (mg/l)
Fenol
Concentracin de agente activo
Cr
+6
(mg/l)
Cr total (mg/l)
(mg/l)
Dicloroetileno
0.1
5.0
0.03
0.1
*
1.0
5.0
1.0
0.25
0.2
0.05
*

0.1
*

0.5
1.0
1000
1.0

38
Dicloroetileno
Difenilpoliclorados
DQO
Grasas y aceites
Manganeso
Mercurio
Mercurio orgnico
Niquel
pH
Plata
Plomo
Selenio
Slidos sedimentables
Slidos suspendidos totales
Sulfuro de carbono
Tetracloruro de carbono
Tricloroetileno
Temperatura
Tensoactivos (SAAM)
(mg/l)
(mg/l)
Mn (mg/l)
Hg (mg/l)
Hg (mg/l)
Ni (mg/l)
Unidades
Ag (mg/l)
Pb (mg/l)
Se (mg/l)
SS (mg/l)
SST (mg/l)
Sulfuro de carbono
(mg/l)
Tetracloruro de carbono (mg/l)
Tricloroetileno (mg/l)
Grados centgrados (C)
(mg/l)
N.D.
**

2000
100
0.II2
0.02
N.D.
**

0.2
5 9
0.5
0.1
0.1
2.0
800
1.0
1.0
1.0
<30
0.5
*
Concentracin de txico que produce la muerte del organismo
**
Se entendera por valor no detectable (N.D.) a la concentracin de la sustancia que
registra valores por debajo de los lmites de deteccin empleando los mtodos del manual
Standard Methods for the Examination of Water and Waste Water (Ultima Edicin).
nation of Water and Waste Water (Ultima Edicin).

39
3. JUSTIFICACIN

El manejo inadecuado de las aguas residuales generadas en el proceso de
produccin industrial constituye uno de los principales aspectos que afectan la
salud pblica y causan deterioro ambiental, e impacto en el desarrollo econmico
y el bienestar de una sociedad. Ambientalmente efectos como la reduccin en el
nivel de oxgeno disuelto, la eutroficacin de recursos hdricos y la toxicidad a
organismos acuticos debido a altas cargas de material contaminante y nutrientes
como fsfor o y nitrgeno, han llevado en los ltimos aos a la investigacin y
optimizacin de procesos para su remocin (Amaya, 1995).

En Colombia y especficamente en Bogot dada la necesidad de que las aguas
residuales se ajusten a las normas legales consignadas en el Decreto 1594 de 1984
del Ministerio de Salud y la resolucin 1074 de 1997 del DAMA que reglamenta
los usos del agua y el manejo de los residuos lquidos, industrias como la
cervecera han realizado grandes inversiones en Plantas de Tratamiento de Aguas
Residuales que garanticen una mejor calidad de sus efluentes en relacin con la
disminucin de la carga orgnica.

A pesar de las medidas establecidas por las entidades de salud pblica en los
pases de Amrica Latina y el Caribe, las enfermedades gastrointestinales figuran
entre las diez primeras causas de muerte. Una de las principales causas de la alta
mortalidad y morbilidad es la inadecuada disposicin de un 90% de las aguas
residuales que son descargadas indiscriminadamente en cuerpos de aguas
receptores. As la presencia de patgenos como Salmonella sp., Listeria sp.,
Staphylococcus aureus y Campylobacter sp. que pueden mantenerse en la
corriente de salida representan un gran riesgo para la salud pblica, ms an
cuando las aguas residuales estn siendo usadas para el riego de cultivos en
vegetales de consumo crudo, incrementndose as la posibilidad de desencadenar
brotes epidemiolgicos de enfermedades endmicas como diarreas, parasitismo,
fiebre tifoidea y salmonellosis.

40
Esta crtica situacin ha promovido en pases como Mxico y Per el
establecimiento de legislaciones ms estrictas a fin de ejercer un mayor control
sobre la calidad de los vertimientos, razn por la cul crece la posibilidad de que
en un futuro cercano en Colombia la legislacin se ajuste a parmetros ms
estrictos.

Esto ha generado en la industria cervecera en estudio la preocupacin por conocer
la calidad microbiolgica de sus efluentes en trminos de microorganismos
patgenos pues teniendo en cuenta que el sistema UAS no ha sido diseado para
la remocin de carga microbiana ni patgenos, la presencia de stos
microorganismos en la corriente de salida podra poner en riesgo la salud de la
poblacin y ocasionar problemas futuros para la empresa en miras de que los
vertimientos tuvieran que ajustarse a normas legales ms estrictas.

Por tal razn en el presente trabajo se realiz un diagnstico microbiolgico en los
tanques de ecualizacin, acidificacin y en la corriente de salida de la planta de
tratamiento de aguas residuales de la industria cervecera en estudio, evaluando la
presencia de patgenos en el efluente, con el objeto de proporcionar a la empresa
una herramienta til frente a la solucin de futuros problemas.

41
4. OBJETIVOS

4.1. OBJETIVO GENERAL
Realizar un diagnstico de la carga microbiana predominante en los tanques de
ecualizacin, acidificacin y salida de la Planta de Tratamiento de Aguas
Residuales de la industria cervecera.

4.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS

Identificar los gneros microbianos predominantes en las etapas de
ecualizacin, acidificacin y salida durante el proceso de Tratamiento de
Aguas Residuales.

Determinar la presencia de microorganismos patgenos en los
vertimientos finales de la planta en estudio.

Correlacionar con los parmetros fsico-qumicos la carga microbiana
presente en cada una de las etapas del proceso de tratamiento estudiadas.

Evaluar la disminucin de la carga microbiana patgena durante el
tratamiento evaluado.

42
5. METODOLOGA

5.1. Ubicacin
El presente trabajo de investigacin se realiz en su totalidad en las instalaciones
de la planta de tratamiento de aguas residuales y en el laboratorio que corresponde
a la Divisin de Produccin, Departamento de Investigacin y Desarrollo de una
Industria Cervecera de Bogot.

5.2. Temporalidad
El muestreo se realiz durante los meses de Abril y Junio del ao de 1999; las
muestras se tomaron los das lunes, mircoles y viernes en cada uno de los puntos
de muestreo.

5.3. Muestreo
La recoleccin de las muestras tuvo lugar en los tanques de Ecualizacin y
Acidificacin de la planta de tratamiento de aguas residuales en estudio; as como
tambin los efluentes de dicha planta (mezcla de 4 reactores) (Figura 12), con el
fin de realizar de esta manera la identificacin de la carga microbiana
predominante en estas etapas del proceso y la evaluacin de microorganismos
patgenos en la corriente de salida.

Las muestras se tomaron en frascos Pyrex de 100ml, adicionados con tiosulfato;
en el momento de tomar las muestras las llaves de salida fueron desinfectadas con
oxonia (0.1%).

5.3.1. Frecuencia de muestreo
Se realiz un muestreo de tipo aleatorio estratificado, en donde los tanques de
ecualizacin, acidificacin y la corriente de salida representan cada uno de los
estratos; el tamao de la muestra se hall de acuerdo a un muestreo piloto en
donde fueron tomadas y procesadas 12 muestras, los das lunes, mircoles y
viernes, durante el mes de Abril de 1999(Anexo 3); incluyendo los datos de este
muestreo piloto para el anlisis final de los resultados.

43

Figura 12. Localizacin de los puntos de muestreo

44
Los muestreos fueron realizados durante los meses de Abril y Junio de 1999
(Tabla 12) ; llevando a cabo durante el mes de Mayo la identificacin de las
colonias aisladas a partir de los muestreos del mes de abril. Las muestras fueron
tomadas entre las 8:00 10:00 am., los das lunes, mircoles y viernes, con el fin
de tener un cubrimiento del ciclo de produccin semanal de la industria cervecera,
en donde tienen una produccin que inicia los lunes y cesa los sbados al
medioda con operaciones de limpieza de equipos y locaciones en general.

Tabla 12. Nmero de asignacin de los muestreos
DIAS
MUESTRADOS
NUMERO DE
MUESTREO
DIAS
MUESTRADOS
NUMERO DE
MUESTREO
Abril 5 1 Junio 15 15
Abril 23 9 Julio 7 23
Abril 26 10 Julio 9 24
Abril 28 11 Junio 17 a
Junio 23
1
Abril 30 12 Julio 21 a
Julio 28
2
Junio 10 13
P
a
t
g
e
n
o
s

Agosto 7 a
Agosto 13
3
Junio 11 14

5.4. Procesamiento de muestras
Una vez tomadas las muestras fueron llevadas al laboratorio de la Divisin de
Produccin, en donde se procesaron y se realizaron los anlisis microbiolgicos
(Figura 13).

45

Figura 13. Procesamiento de muestras

46
5.4.1. Anlisis microbiolgicos
5.4.1.1. Recuento de hetertrofos
Tomadas las muestras de los tanques de ecualizacin, acidificacin y en la
corriente de salida se realizaron diluciones seriadas hasta 10
-13
, sembrando 1ml en
profundidad de cada dilucin, y adicionando 15ml de Agar Plate Count fundido
a 45C (Merck, 1994) (Anexo 1), efectuando controles del medio y del agua de
dilucin; con posterior incubacin a 37C durante 48 horas.

5.4.1.2. Recuento de coliformes
Se realizaron diluciones seriadas de las muestras hasta la dilucin 10
-8
, sembrando
en profundidad y por duplicado 1ml de las diluciones respectivas, adicionando
15ml de Agar Cromocult fundido a 45C (Merck, 1994) (Anexo 1), realizando los
respectivos controles del medio y del agua de dilucin; con posterior incubacin
a 37C durante 48 horas.

Simultneamente en la muestra tomada el da mircoles, se cuantificaron
coliformes fecales por la tcnica del NMP (Anexo 2) en caldo Fluorocult (Merck,
1994) (Anexo 1), para confirmar los recuentos obtenidos en placa.

5.4.1.3. Recuento de mohos y levaduras
Se realizaron diluciones seriadas de las muestras hasta la dilucin 10
-7
, sembrando
en profundidad y por duplicado 1ml de las diluciones respectivas, adicionando
15ml de Agar YGC (Extracto de Levadura-Glucosa-Cloranfenicol) fundido a
45C (Merck, 1994) ) (Anexo 1), con los respectivos controles del medio y del
agua de dilucin; y llevando a incubar a 25C durante 5 a 7 das.

5.4.1.4. Aislamiento y recuperacin de cepas
A partir de las colonias obtenidas en los recuentos realizados, se obtuvieron
aislamientos en Agar Mac Conkey y Agar Nutritivo (Merck, 1994) (Anexo 1)para
las colonias recuperadas en los recuentos de Hetertrofos y Coliformes, y en Agar
Saboureaud y Agar PDA (Papa, Dextrosa, Agar) (Merck, 1994) ) (Anexo 1)para

47
las colonias recuperadas en el recuento de Mohos y Levaduras. A partir de las
colonias aisladas se realiz una descripcin macroscpica y coloracin de Gram.
Una vez recuperadas las cepas completamente puras se reaislaron utilizando Agar
Nutritivo y Agar Saboureaud, para bacterias y levaduras respectivamente.

5.4.1.5. Identificacin de cepas aisladas
Para la identificacin de las cepas se realizaron aislamientos de colonias puras en
medios de cultivo no selectivos como Agar nutritivo y Agar saboureaud
(Merck, 1994), para bacterias y levaduras respectivamente; una vez realizada la
coloracin de Gram y la descripcin macroscpica se realizaron las pruebas de
catalasa y oxidasa. (Anexo 2), llevndose a cabo la identificacin bioqumica de
las colonias mediante la metodologa API (Biomrieux, 1999) (Anexo 2).

5.5. Evaluacin de microorganismos patgenos
La evaluacin de microorganismos patgenos se llev a cabo en la corriente de
salida de la planta de tratamiento de aguas residuales en estudio, por medio de
pruebas rpidas de diagnstico.

5.5.1. Evaluacin de la presencia de Salmonella sp.
Se realiz mediante Salmonella Rapid Test Oxoid (Anexo 2), la cual es una
prueba diseada para la deteccin presuntiva de Salmonella sp. mvil en
alimentos, materia prima, producto terminado y muestras ambientales. El
principio de esta prueba se basa en inocular la muestra homogenizada y
preenriquecida en un vaso de cultivo que contiene Medio Selectivo para
Salmonella sp. y dos tubos. Cada tubo contiene dos capas, una inferior con medio
selectivo y otra superior con medio indicador, separadas por una interfase porosa.
As, si la muestra procesada contiene Salmonella sp. , sta migrar activamente a
travs del medio inferior hacia el superior, donde su presencia se pondr de
manifiesto por un cambio de color (Oxoid, 1995).

48
5.5.2. Evaluacin de la presencia de Listeria sp.
La evaluacin se realiz por medio de Listeria Rapid Test Oxoid (Anexo 2); esta
prueba esta diseada para la deteccin de especies de Listeria sp. en alimentos,
vegetales, muestras ambientales, cermica, materiales de porcelana y vidrio. El
protocolo permite la obtencin de resultados en 2 das de trabajo tras la recepcin
de la muestra en el laboratorio. El procedimiento contempla la utilizacin de dos
pasos de enriquecimiento cuidadosamente seleccionados para la mxima
recuperacin y crecimiento de Listeria sp., seguido por un inmunoensayo en un
dispositivo para la prueba; este sencillo sistema permite una visin clara de los
resultados en 20 minutos tras la adicin de la muestra calentada y enfriada (Oxoid,
1995).

5.5.3. Evaluacin de la presencia de Staphylococcus aureus
La evaluacin se llev a cabo por medio de la Prueba de Staphylase DR595
(Oxoid, 1995). Esta prueba detecta la presencia del factor de agregacin de
Staphylococcus aureus (produccin de coagulasa libre o ligada)por agregacin de
eritrocitos de oveja sensibilizados con fibringeno (Anexo 2).

5.5.4. Evaluacin de la presencia de Campylobacter sp.
Se llevo a cabo por medio de siembra en medio base de Agar selectivo exento de
sangre para Campylobacter sp. El medio fue preparado de acuerdo a las
instrucciones del proveedor (Oxoid, 1995) y despus de esterilizado se adicion el
suplemento selectivo CCDA, suplemento Cefoperazona OXOID (SR 125), el cual
contiene Anfotericina B para evitar el desarrollo de hongos o levaduras que
pueden actuar como contaminantes (Anexo 2).

5.6. Anlisis fsico qumicos
Los anlisis fsico qumicos fueron realizados en las instalaciones de la planta de
tratamiento de aguas residuales y fueron tomados de los registros diarios de
operacin de la planta las determinaciones correspondientes a la demanda qumica
de oxgeno (DQO), cidos grasos voltiles (AGV), alcalinidad y pH, todos ellos
realizados siguiendo la metodologa Standard Methods, 1989.

49
5.7. Anlisis estadstico
Con el fin de validar estadsticamente los resultados obtenidos se aplic un
anlisis de varianza y una comparacin mltiple de Scheffe aplicando un Modelo
Experimental de Efectos Fijos Unifactorial; para determinar si los recuentos
obtenidos en cada una de las etapas del tratamiento evidenciaban una variacin
significativa, lo que mostrara una remocin.

El mismo anlisis se realiz con cada una de las bacterias y de las levaduras
identificadas con el fin de observar si exista remocin en cuanto a los gneros
con relacin a las etapas del tratamiento; teniendo en cuenta las implicaciones en
la salud pblica que algunos de ellos pueden tener. En relacin con los datos de
los registros fisicoqumicos se evalu la variacin de los parmetros DQO, AGVs,
Alcalinidad y pH; para cada una de las etapas del proceso.

5.7.1. Anlisis de anova para grupos microbianos
5.7.1.1. Hiptesis planteada
La hiptesis planteada para este anlisis se bas en que el valor promedio de los
recuentos microbianos obtenidos en el tanque de ecualizacin es igual al valor
promedio de los recuentos microbianos obtenidos en el tanque de acidificacin y
en la corriente de salida.
Ho:
Hetertrofos

Tk. Ecualizacin
=
Hetertrofos Tk. Acidificacin
=
Hetertrofos Salida
(1)

Ho:
Coliformes Tk. Ecualizacin
=
Coliformes Tk. Acidificacin
=
Coliformes Salida

(2)
Ho:
Hongos Tk. Ecualizacin
=
C Hongos Tk. Acidificacin
=
Hongos Salida
(3)
Hi : Por lo menos un es (4)
Ecuaciones correspondientes a la estadstica de prueba (Anexo 3), las tablas de
anova para los grupos microbianos evaluados aparecen en la tabla 13.

Tabla 13. Anlisis de anova para los grupos microbianos evaluados
Fuente de
variacin
Grados de
Libertad
Suma de
Cuadrados
Cuadrados
Medios
F
calculada
Tanque 2 19.4531 9.72656 1.07 Hetertrofos
Error 61 555.018 9.09866

50
Total 63 574.471
Tanque 2 6.92407 3.46204 0.78
Error 61 271.062 4.44364
Coliformes
Total 63 277.986
Tanque 2 208.165 104.083 22.40
Error 61 283.392 4.64577
Mohos y
Levaduras
Total 63 491.557

5.7.2. Comparacin mltiple de scheff para grupos microbianos
La hiptesis planteada para este anlisis se bas en que el valor promedio de los
recuentos microbianos obtenidos en el tanque de ecualizacin es igual al valor
promedio de los recuentos microbianos obtenidos en el tanque de acidificacin y
en la corriente de salida.
Ho
*
:
Hetertrofos K
=
Hetertrofos l
Hi
*
:
Hetertrofos K

Hetertrofos l
(5)
Ho
*
:
Coliformes K
=
Coliformes l
Hi
*
:
Coliformes K

Coliformes l
(6)
Ho
*
: Hongos K
= Hongos l
Hi
*
: Hongos K
Hongos l
(7)
K (Ecualizacin, Acidificacin, Salida) l (Ecualizacin, Acidificacin, Salida)
Ecuaciones correspondientes a la estadstica de prueba (Anexo 3)

5.7.3. Comparacin de la proporcin de crecimiento por bacteria para cada
tanque
La hiptesis planteada para este anlisis se bas en que la proporcin de
crecimiento de cada microorganismo identificado es igual en las tres etapas
evaluadas dentro del tratamiento (ecualizacin, acidificacin y corriente de salida)
Ho
**
: Poblacin Bacteriana
Ecualizacin
= Poblacin Bacteriana
Acidificacin
(8)
Hi
**
: Poblacin Bacteriana
Ecualizacin
Poblacin Bacteriana
Acidificacin
(9)

5.7.4. Anlisis de correlacin de las variables fisco-qumicas con los recuentos
microbianos por tanque

51
La hiptesis planteada para este anlisis se bas en que la relacin que existe entre
la carga microbiana y los parmetros fsico-quimicos es igual a cero (No existe
relacin ni inversa, ni directa).
Ho
**
: C carga bacteriana Vs. parmetros FQ = 0 (10)
Hi
**
: C carga bacteriana Vs. parmetros FQ 0 (11)

52
6. RESULTADOS Y DISCUSIN
6.1. Muestreo
Para la mayor comprensin e interpretacin de los resultados obtenidos en los
recuentos microbianos, se empleo un sistema de codificacin para cada uno de las
muestras obtenidas (Tabla 12). As mismo los datos obtenidos se analizaron con
base en las operaciones de la cervecera que afectaron las corrientes vertidas a la
planta de tratamiento de aguas residuales durante los muestreos realizados (Figura
14).

Das de Muestreo
Figura 14. Esquema de operaciones que afectaron las corrientes
vertidas a la PTAR durante abril y junio de 1999
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
Circuito de aseo en dos tanques (60Hl) Soda 3.15%
Aseo Tanque #5, Equipo 1 Soda 0.9% (70m
3
)
Aseo Olla Whirpool Cocina Steineker
Descarga de Soda Equipo 1 Tk. #5 (2.0% 70m
3
)
Aseo Tanque Whirpool
Aseo Cocina Steineker
Aseo Filtro Prensa Soda al 4%
Aseo Equipo 5 Tk. #7 Soda 1.6%
3
Aseo Enfriador de Mosto Descarga de Soda al 1.6%
Descarga de Soda al 2.5%
Aseo Equipo 4 Soda al 0.4% (30m
3
)
Incremento en pH
Incremento en Carga Orgnica
Aseo Secador de levadura
Incremento en Carga Orgnica y pH

I
N
Y
E
C
C
I
N

D
E

L
O
D
O
S

53
6.2. Recuentos microbianos obtenidos
Una vez colectadas las muestras y realizado el recuento de microorganismos se
realiz un anlisis grfico para cada uno de los grupos de microorganismos
(hetertrofos, coliformes y hongos) con el fin de observar el comportamiento de
cada uno de ellos en relacin con los 24 muestreos realizados.

6.2.1. Grupo de microorganismos hetertrofos
Las figuras 15 18 muestran el comportamiento bastante fluctuante en la etapa
de ecualizacin, sin observarse una reduccin marcada en el tanque de
acidificacin e incluso llegndose a incrementar los recuentos como en el da 12.
Este mismo comportamiento se presenta en relacin con la corriente de salida, en
donde no se observa una disminucin estadsticamente considerable en los
recuentos microbianos de Hetertrofos. Los datos correspondientes a los
recuentos de hetertrofos indican poblaciones del orden de 10
5
a 10
12
ufc/ml,
destacndose los das de muestreo 10, 12, y 16 con mayor poblacin (Anexo 4).

0
5
10
15
20
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
22
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

Figura 15. Comportamiento de
hetertrofos en la PTAR en el
tanque de ecualizacin en los
meses de abril y junio de 1999.
hetertrofos en la PTAR en el
tanque de acidificacin en los

54
0
2
4
6
8
10
12
14
16
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l
ECUALIZACION ACIDIFICACION SALIDA

Los elevados recuentos de este grupo de microorganismos posiblemente se deben
a la gran variedad de gneros bacterianos que se presentan en los vertimientos,
con elevados niveles de materia orgnica a la entrada de la planta de tratamiento
como es el caso de las aguas residuales procedentes de industrias de fermentacin
como la cervecera (Grismer et al., 1999).

Teniendo en cuenta que el grupo de hetertrofos encierra todos los
microorganismos cuya proliferacin es favorecida por un medio como el Agar
Plate Count, es comprensible que se hallan obtenido recuentos elevados. Como se
observa en la Figura 18, en los das de muestreo 10, 11, 12 y 16 se presentaron los
recuentos ms elevados para el grupo de hetertrofos, el incremento de la carga
microbiana en estos das se debi a operaciones de aseo y limpieza en equipos de
hetertrofos en la PTAR en la
corriente de salida durante los
Figura 18. Comportamiento de hetertrofos en la PTAR en
los tanques de ecualizacin, acidificacin y corriente de salida
en los meses de abril y junio de 1999

55
las cocinas, dado que al realizar la limpieza de los tanques y equipos se arrastran
los sedimentos depositados en los mismos (Figura 14).
En vista de que estos materiales tienen un alto contenido de materia orgnica
producto de la coccin del mosto (sustrato para la fermentacin que da origen a la
cerveza), el agua de lavado incrementa la contaminacin de la corriente que llega
al sistema de drenaje (registros control de fuente PTAR 1999).

El anlisis estadstico realizado permiti evidenciar que no existe diferencia entre
las poblaciones microbianas encontradas en cada una de las etapas del proceso de
tratamiento de aguas residuales, razn por la cual el grupo de hetertrofos tuvo un
comportamiento homogneo respecto a los tanques de Ecualizacin, Acidificacin
y la Corriente de Salida (Tabla 14, Figura 19).
Tabla 14. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de hetertrofos
TANQUE PORCENTAJE MEDIA GRUPOS HOMOGNEOS
Ecualizacin
Acidificacin
Salida
24
24
16
11.25
11.04
12.40
X
X
X

10
11
12
13
14
EQUALIZACION ACIDIFICACION SALIDA
ETAPA DEL TRATAMIENTO EVALUADA
R
E
C
U
E
N
T
O

D
E

H
E
T
E
R
O
T
R
O
F
O
S

En relacin con el porcentaje de remocin microbiana para el grupo de
hetertrofos, fue de un 11% respecto a los niveles de hetertrofos encontrados a la
entrada del tratamiento, corroborando esto los resultados del anlisis estadstico
(Figura 20).
hetertrofos

56

89%
11%
% Remocin de Hetertrofos
% No Removido

6.2.2. Grupo de coliformes
La cuantificacin de este grupo de microorganismos es importante en vista de los
criterios de seleccin que les hacen un grupo indicador de contaminacin fecal,
entre ellos la posibilidad de estar presentes en el t racto gastrointestinal en grandes
cantidades, la prevalencia por ms tiempo en el agua que las bacterias patgenas y
la capacidad que poseen para comportarse de igual manera que los patgenos en
los sistemas de desinfeccin (Campos, 1999). La figura 21 muestra como se
evidencio el crecimiento de coliformes en el medio Cromocult.

Las figuras 22-25 muestran el comportamiento del grupo coliforme durante los
muestreos realizados, sin presentarse reduccin en los recuentos en la etapa de
acidificacin con respecto a la entrada (ecualizacin) e incluso llegndose a
incrementar en la corriente de salida como en el caso del da 14.

Figura 20. Porcentaje de remocin microbiana de hetertrofos
Figura 21. Crecimiento de coliformes totales
en cromocult durante los muestreos

57
0
2
4
6
8
10
12
14
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

0
2
4
6
8
10
12
14
16
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

0
2
4
6
8
10
12
14
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

Figura 22. Comportamiento del
grupo coliforme en la PTAR
(tanque de ecualizacin, meses
de abril y junio de 1999)
Figura 23. Comportamiento del grupo
coliforme en la PTAR (tanque de
acidificacin, meses de abril y junio de
1999)
Figura 24. Comportamiento del
grupo coliforme en la PTAR
(corriente de salida, meses de abril
y junio de 1999)

58
0
2
4
6
8
10
12
14
16
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l
ECUALIZACION ACIDIFICACION SALIDA

Teniendo en cuenta que el tratamiento de aguas residuales en la industria
cervecera estudiada es de tipo anaerobio, es factible que se mantengan recuentos
de coliformes a la salida dado que el tratamiento anaerobio de tipo UASB no
remueve microorganismos.

Algunos estudios realizados con sistemas anaerobios han obtenido recuentos de
coliformes del orden de 10
2
ufc/100ml, demostrando que tras un tratamiento
anaerobio pueden mantenerse coliformes en la corriente de salida, con ordenes de
magnitud significativamente reducidos en comparacin con los valores de
entrada; tan solo cuando posterior a los reactores son utilizados procesos de
flotacin y filtracin, seguidos por una desinfeccin con ozono y rayos
ultravioleta a fin de lograr la remocin de E.coli y coliformes totales (Ceysz,
1991).
Esto puede explicar los elevados recuentos de coliformes en la corriente de salida
obtenidos en el presente estudio, pues posterior al proceso UAS la planta no
cuenta con tratamientos terciarios que aseguren la reduccin de carga microbiana.

La figura 26 confirma la poca variacin que se presento en los recuentos, razn
por la cual se evidencio un porcentaje de remocin del 12%; as mismo el diseo
estadstico aplicado permiti evidenciar que no existe diferencia entre los
Figura 25. Comportamiento de coliformes en la PTAR en los
tanques de ecualizacin, acidificacin y corriente de salida en
los meses de abril y junio de 1999

59
recuentos de coliformes, los cuales presentaron un comportamiento homogneo
durante los muestreos realizados, sin observarse diferencias estadsticamente
significativas de los mismos con relacin a las etapas del tratamiento evaluadas
(Tabla 15, Figura 27).
12%
88%
%Remocin de Coliformes
%No Removido

Tabla 15. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de coliformes
TANQUE PORCENTAJE MEDIA GRUPOS HOMOGNEOS
Ecualizacin
Acidificacin
Salida
24
24
16
9.21
9.50
8.65
X
X
X

6,7
7,3
7,9
8,5
9,1
9,7
10,3
ETAPA DEL TRATAMIENTO EVALUADA
R
E
C
U
E
N
T
O

D
E

C
O
L
I
F
O
R
M
E
S

La presencia de microorganismos entricos en las etapas del tratamiento evaluado
y en especial en la corriente de salida fue confirmada mediante la identificacin de
las colonias recuperadas a partir del recuento en placa en Agar Cromocult.
Con el fin de confirmar los recuentos obtenidos mediante la tcnica de siembra en
profundidad en Agar Cromocult se realiz un anlisis semanal por medio de la
tcnica del NMP (Nmero Ms Probable) en caldo Fluorocult. Los recuentos
Figura 26. Porcentaje de remocin microbiana de coliformes
coliformes

60
obtenidos al realizar esta prueba como se observa en la Figura 28 muestran un
comportamiento paralelo entre el NMP y la tcnica de siembra en profundidad en
Agar Cromocult para la deteccin de coliformes totales y fecales.

0
2
4
6
8
10
12
14
L
O
G

U
F
C
/
1
0
0
m
l
1 2 3 4 5 6 7 8
SEMANAS DE MUESTREO
Ecualizacin Acidificacin Salida

En todas las pruebas realizadas se evidenci una reaccin de fluorescencia al ser
expuestos los tubos bajo luz UV, siendo ocasionada por la hidrlisis del sustrato
fluorognico (MUG) 4-metil-umberifenilglucuronido por la accin de la enzima
glucuronidasa propia de Escherichia coli (Elmund et al, 1999) (Figura 29).

Figura 29. Reaccin positiva de fluorescencia en caldo fluorocult

La cuantificacin de E.coli realizada mediante la tcnica del NMP basada en
sustratos fluorognicos muestra recuentos del orden de 10
8
NMP/100ml, llegando
estas cifras a reflejar la presencia de patgenos entricos de origen fecal.
Figura 28. Confirmacin de coliformes en la PTAR en los tanques
de ecualizacin, acidificacin y corriente de salida durante los
meses de abril y junio de 1999 por medio de la tcnica de NMP

61
Teniendo en cuenta la futura implementacin de legislaciones ms estrictas en
materia de vertimientos en Colombia es importante tener un conocimiento previo
de la caracterizacin microbiana de los efluentes de la industria en estudio,
contemplando la posibilidad de aumentar la calidad de los efluentes en caso de
tener que ajustarse a una normatividad ms rgida.

En pases como Estados Unidos donde la legislacin esta encaminada a la
reutilizacin de las aguas residuales se han realizado estudios en tratamientos de
aguas residuales, encontrando recuentos de coliformes fecales a la salida del orden
de 33x10
2
UFC/100ml (Elmund et al. 1999).

A nivel latinoamericano dada la problemtica de salud publica asociada a
enfermedades gastrointestinales, organizaciones como CEPIS y la OMS en el
informe tcnico 778 de 1989 estiman como valor mximo permisible 1000
coliformes fecales/100ml, en caso de que las aguas residuales sean utilizadas para
riego de vegetales de consumo crudo.

En pases como Per, el primer criterio de calidad para el uso de aguas residuales
en la agricultura radica en la remocin de coliformes; se recomienda una
reduccin hasta de 10
3
coliformes fecales por 100ml, mientras en Mxico la
norma NOM-001-ECOL de 1996, permite un rango de Coliformes Fecales de
1000-2000/100ml (NMP). Existen tambin normas an ms estrictas como las del
Departamento de Salud Pblica del Estado de California, las cuales permiten un
total de slo 23 coliformes por cada 100 ml, segn el cultivo regado y el mtodo
de riego empleado (Cepis, 1997).

6.2.3. Grupo de mohos y levaduras
El grupo de mohos y levaduras como lo muestran las figuras 30-33 presentaron un
comportamiento fluctuante en los das de muestreo, pero a diferencia de los otros
grupos microbianos, los recuentos de mohos y levaduras obtenidos muestran una
diferencia marcada en la corriente de salida con relacin al tanque de
ecualizacin.

62
Los datos correspondientes a este recuento (Anexo 4) como se observa en la
figura 30, los das 20 y 22 se obtuvieron los recuentos ms elevados en el orden
de 10
13
ufc/ml en el tanque de ecualizacin, posiblemente debido a que en estos
das fueron efectuadas operaciones de limpieza en el secador de levadura, lo cual
generara un aumento en la concentracin de levadura de la corriente que llega al
sistema de drenaje (Figura 18).
0
2
4
6
8
10
12
14
16
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

0
2
4
6
8
10
12
14
16
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

Figura 30. Comportamiento de mohos
y levaduras en la PTAR ( tanque de
ecualizacin, meses de abril y junio de
1999)
mohos y levaduras en la PTAR
(tanque de acidificacin, meses de
abril y junio de 1999)

Figura 32. Comportamiento de mohos y
levaduras en la PTAR (corriente de
salida, meses de abril y junio de 1999)

63
La Figura 33 muestra la reduccin de la carga microbiana respecto a poblaciones
de mohos y levaduras en el tanque de acidificacin; se observa una diferencia muy
marcada en los recuentos microbianos obtenidos en la corriente de salida, en
relacin con la carga presente en el tanque de ecualizacin.

0
2
4
6
8
10
12
14
16
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
L
O
G

U
F
C
/
m
l

Este grupo de microorganismos present una remocin del 47% (Figura 34), la
cual posiblemente se present debido a las condiciones de anaerobiosis estricta y
a situaciones de competencia en los reactores que inhiben el crecimiento de
hongos y levaduras, desfavoreciendo su prevalencia tras el tratamiento.
47%
53%
% Remocin de Mohos y Levaduras
% No Removido

Con relacin a este grupo de microorganismos el diseo estadstico aplicado no
mostr una diferencia entre los recuentos microbianos obtenidos en el tanque de
acidificacin respecto al de ecualizacin, pero si se presenta una diferencia
significativa entre estos y la corriente de salida (Tabla 16, Figura 35).
Figura 33. Comportamiento de mohos y levaduras en la PTAR en los
tanques de ecualizacin, acidificacin y corriente de salida en los meses de
abril y junio de 1999
Figura 34. Porcentaje de remocin microbiana de mohos y

64

Tabla 16. Comparacin mltiple de scheff para el grupo de mohos y levaduras
TANQUE
PORCENTAJE
MEDIA
GRUPOS HOMOGNEOS
Ecualizacin
Acidificacin
Salida
24
24
16
11.02
9.85
6.44
X
X
X

5,4
7,4
9,4
11,4
13,4
ETAPAS DEL TRATAMIENTO EVALUADO
R
E
C
U
E
N
T
O

D
E

M
O
H
O
S

Y

L
E
V
A
D
U
R
A
S

En cuanto a la identificacin realizada a partir de los recuentos se evidenci la
presencia de hongos como Penicillum sp. , Aspergillus sp. , Cladosporium sp. y
gneros pertenecientes a la familia de los Mucorales, todos ellos hongos edficos
en las aguas residuales (Gerhard-Jagnow.1991) (Figura 36).

Penicillium sp. Mucoral
Figura 35 .Comparacin mltiple de scheff para el
grupo de mohos y levaduras
Figura 36. Morfologa macroscpica de los hongos
identificados

65
6.3. Resultados de anlisis Fsico Qumicos
Para la realizacin del anlisis fueron tomados datos correspondientes a DQO
(mgO
2
/l), pH, cidos grasos voltiles y alcalinidad en los tanques de Ecualizacin
y Acidificacin y DQO (mgO
2
/l) y pH en la corriente de salida. Los datos fueron
tomados directamente de los registros diarios de operacin de la Planta de
Tratamiento de Aguas Residuales (Anexo 4).

6.3.1. Comportamiento de DQO
En relacin a la demanda qumica de oxgeno se observaron valores con un
comportamiento fluctuante (Figura 37). En la etapa de ecualizacin o entrada se
observaron fluctuaciones que van desde un valor mnimo de 1212 mgO
2
/l hasta un
valor mximo de 5368 mgO
2
/l, con valores medios cercanos a 2276 mgO
2
/l; dicha
variacin en los niveles de materia orgnica posiblemente se debi a la
programacin en los niveles de produccin, pues en el caso de las operaciones de
lavado se puede generar un mayor gasto de agua, tal es el caso ocurrido el da 17
(18 de junio) con un valor de 5368 mgO2/l, da en el cual fue realizado aseo en el
tanque whirpool de la cocina Nordon. Otros factores como el lavado de botellas y
situaciones generalizadas de aseo influyen directamente en las caractersticas del
afluente.
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
DIAS DE MUESTREO
D
Q
O

(
m
g
O
2
/
L
)
DQO permitido
2000mgO2/L

DQO establecido segn Resolucin 1074 del DAMA con relacin a la
corriente de salida
Figura 37. Valores de DQO registrados en la PTAR en los tanques de ecualizacin,
acidificacin y salida durante los meses de abril y junio de 1999
ECUALIZACION ACIDIFICACIN SALIDA

66
En relacin con las etapas posteriores se observ en el tanque de acidificacin un
comportamiento similar a ecualizacin, encontrndose un nivel mximo de 2938
mgO
2
/l y un nivel mnimo de 1394 mgO
2
/l.

La aplicacin del anlisis estadstico de los datos obtenidos para la DQO nos
permiti demostrar que no existe una diferencia significativa entre los valores de
la DQO en los tanques de ecualizacin y acidificaci n observndose un
comportamiento homogneo, pero si se evidencian diferencias significativas entre
stos y la corriente de salida donde se encontraron valores de DQO entre 215
mgO
2
/l a 976 mgO
2
/l (Tabla 17, Figura 38).

La eficiencia de remocin de la carga orgnica en el sistema de digestin
anaerobio versin UAS en promedio durante el tiempo de muestreo fue de un
73%; siendo un valor comprendido dentro de los parmetros para sistemas
anaerobios cuyos rendimientos en la eliminacin de DQO estn entre un 70-80%.
Adems segn la resolucin 1074 de DAMA 1997 dictamina un nivel permisible
de DQO hasta 2000 mgO2/l, cumpliendo de esta manera con la ley.

TANQUE PORCENTAJE MEDIA GRUPOS HOMOGENEOS
Ecualizacin* 24 2276 X
Acidificacin 24 1927 X
Salida 16 543 X
Tabla 17. Comparacin mltiple de scheff para los valores de DQO
* Ecualizacin representa la entrada al sistema de tratamiento.
Figura 38. Comparacin mltiple de scheff para la DQO

0
500
1000
1500
2000
2500
3000
Equalizacion acidificacion salida
D
Q
O

(
m
g
/
l
)

67
6.3.2. Comportamiento del pH
Los valores de pH presentaron fluctuaciones en los tanques de Ecualizacin,
acidificacin a diferencia de la corriente de salida cuyos niveles de pH se
mant uvieron constantes alrededor de un valor neutro (Figura 39, Tabla 18).

0
2
4
6
8
10
12
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
DIAS DE MUESTREO
p
H
SALIDA ACIDIFICACION ECUALIZACION
pH permitido (5-9 UN)

pH establecido segn Resolucin 1074 del DAMA
con relacin a la corriente de salida
Figura 39. Valores de pH registrados en la PTAR en los tanques de ecualizacin,
acidificacin y salida durante los meses de abril y junio de 1999

Tabla 18. Valores mximos y mnimos de pH en cada tanque
TANQUE VALOR DE pH mnimo
(UN)
VALOR DE pH mximo
(UN)
Ecualizacin 6.17 9.93
Acidificacin 5.51 6.93
Salida 6.74 7.80

Los valores de pH presentados en el tanque de ecualizacin tienen un
comportamiento cambiante debido a descargas de soda durante operaciones de
aseo, como la presentada el da 5, en el cual se obtuvo un valor de pH de 9.93 por
descarga de soda al 2.3% proveniente del aseo de la olla Whirlpool de la cocina
Steineker. Dichas descargas fueron controladas en el tanque de ecualizacin a
travs de la neutralizacin con CO
2
, as como la homogenizacin de los caudales
que con el objeto de conseguir un caudal constante, reduce las cargas de choque al
diluirlas logrando la estabilizacin del pH (Metcalf & Eddy, 1995).

68
En el tanque de acidificacin se present un comportamiento uniforme con
tendencia a mantener valores de pH entre 5 y 6, fenmeno entendido por la
produccin de cidos orgnicos; mientras que en relacin con la corriente de
salida se evidencio un comportamiento con tendencia a un valor neutro. Tras la
aplicacin del anlisis estadstico a los valores de pH no existi una diferencia
estadsticamente significativa para los tanques de ecualizacin, acidificacin y
corriente de salida (Tabla 19, Figura 40).

0
2
4
6
8
10
12
14
Equalizacion acidificacion salida
p
H

(
U
)

Figura 40. Comparacin mltiple de scheff para el pH

6.3.3. Correlacin entre cidos grasos voltiles y alcalinidad
El monitoreo de los valores de AGV y alcalinidad constituyen un parmetro muy
sensible para determinar la capacidad tampn del sistema y permite adoptar
medidas preventivas para evitar la cada del pH e inhibicin de la actividad
metanognica (Bitton, 1994).
El desempeo de las reacciones anaerbicas se puede caracterizar por la
produccin de metano, sin embargo se emplean medidas indirectas como los AGV
que son productos intermedios del proceso previo a la metanognesis.
En el tanque de ecualizacin se observ un comportamiento fluctuante de los
valores de AGV y alcalinidad, evidencindose valores superiores de alcalinidad
TANQUE PORCENTAJE MEDIA GRUPOS
HOMOGENEOS
Ecualizacin 24 7.68 X
Acidificacin 24 5.98 X
Salida 16 6.99 X
Tabla 19. Comparacin mltiple de scheff para los valores de pH

69
respecto a los valores de AGV (Figura 41). Tal fenmeno se relaciona con el
incremento en la concentracin de cidos orgnicos en la medida en que la
degradacin de materia orgnica es llevada a cabo.
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
DIAS DE MUESTREO
U
N
I
D
A
D
E
S
AGV Alcalinidad
(>700 mg/L CaCO3)
estandar alcalinidad
(<250 mg/L)
estndar AGV

Figura 41. Valores de AGVs y alcalinidad registrados en la PTAR
en el tanque de ecualizacin en los meses de abril y junio de 1999

La figura 42 ilustra el comportamiento de los AGVs y la alcalinidad en el tanque
de acidificacin, observando valores de alcalinidad en promedio de
535mgCaCO3/l respecto a los AGVs 435 mg CH3COOH/l en promedio.

0
200
400
600
800
1000
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
U
N
I
D
A
D
E
S
AGV Alcalinidad

Figura 42. Valores de AGVs y alcalinidad registrados en la PTAR
en el tanque de acidificacin en los meses de abril y junio de 1999

70
Teniendo en cuenta que en el tanque de acidognesis se inicia la produccin de
AGV es importante su seguimiento, dada la tendencia a mantener valores bajos
de pH (en promedio de 5.98) evidenciado en las altas relaciones AGV/Alcalinidad
encontradas, en promedio de 0.8 durante los muestreos (Figura 43). Esta alta
relacin AGV/Alcalinidad es corregida posteriormente en el tanque de
neutralizacin donde la dosificacin de soda custica control el pH mantenie ndo
la capacidad tampn del sistema previo a la entrada a los reactores.

0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
1,40
1,60
1 3 5 7 9 11 13 15 17 19 21 23
DIAS DE MUESTREO
U
N
0.1 *

* Valor estandar para la relacin AGV/alcalinidad en los reactores, Samh, 1984.
Figura 43. Comportamiento de la re lacin AGVs/alcalinidad en el tanque
de acidificacin durante los meses de abril y junio de 1999

La relacin de AGV/alcalinidad es una medida de la capacidad tampn del
sistema; sugirindose mantener esta proporcin por debajo de 0.3 (Pabn, 1998,
Samh, 1984) para reactores anaerobios de una sola unidad; en vista de que la
planta en estudio cuenta con un sistema en unidades separadas, las elevadas
relaciones AGV/Alcalinidad no afectan directamente la capacidad tampn del
sistema dada la neutralizacin llevada a cabo en la corriente a tratar previo a su
entrada a los reactores.

Tras la aplicacin del anlisis estadstico para los valores de Alcalinidad se
evidenci que no existe una diferencia significativa entre los tanques de
ecualizacin y acidificacin, mientras que los valores de AGV muestran una

71
diferencia significativa dado el incremento de los mismos en la etapa de
acidificacin (Tabla 20, Figura 44).

Tabla 20. Comparacin mltiple de scheff para los valores de AGV y alcalinidad
TANQUE PORCENTAJE MEDIA
(UN)
GRUPOS
HOMOGNEOS
Ecualizacin 24 134.83 X AGV
Ecualizacin 24 539.17 X Alcalinidad

0
100
200
300
400
500
600
700
Ecualizacin Acidificacin

Figura 44. Comparacin mltiple de scheff
para los valores de AGV y alcalinidad

6.4. Correlacin de variables fsico-qumicas con los grupos microbianos
La estadstica empleada para el anlisis de correlacin de variables fsico-
qumicas con los grupos microbianos, se realiz teniendo en cuenta el p-valor de
0,05 y con un nivel de confianza del 95% para cada tanque, aceptando o
rechazando la hiptesis (10) y (11)(Tabla 21)(Anexo 3). Teniendo en cuenta que
el signo de los niveles de correlacin indican el sentido de la misma se entender
el signo (+) cuando se presenta una relacin directa entre las variables y el signo
(-) cuando se presente una relacin inversa, indicando si el comportamiento entre
variables es independiente o no.
Tras el anlisis de correlacin de variables fsico-qumicas con los grupos
microbianos en el tanque de ecualizacin y la corriente de salida no se encontr
relacin entre el comportamiento de cada uno de los grupos microbianos
AGV
AGV
Alcalinidad Alcalinidad

72
evaluados con los parmetros fsico-qumicos (Tablas 21). En el tanque de
acidificacin se encontr una relacin inversa del 42,14% entre los recuentos de
coliformes y los valores de DQO, lo que indica que una reduccin de la carga
orgnica incrementara los niveles de coliformes al ser empleada como sustrato en
el metabolismo microbiano, con consecuente aumento en la biomasa.

Tabla 21. Niveles de correlacin de las variables fsico-qumicas con los recuentos
microbianos en las etapas del tratamiento

ETAPA DEL
TRATAMIENTO
PARMETRO HETERTROFOS COLIFORMES HONGOS
AGV -0.2007 -0.1790 0.0401
Alcalinidad 0.1908 0.0386 -0.0132
pH -0.4635 0.0651 -0.2960
Ecualizacin
DQO -0.0881 0.1213 0.0703
AGV -0.0329 0.1562 0.1749
Alcalinidad -0.0090 0.1994 0.2354
pH -0.1754 0.4614 -0.1466
Acidificacin
DQO -0.3820 -0.2038 -0.2986
pH 0.0175 -0.0658 -0.1196
Salida
DQO 0.2756 0.1744 -0.0485
p valor < 0.05.

6.5. Microorganismos identificados
La identificacin de las colonias aisladas a partir de los recuentos de grupos
microbianos permiti identificar 15 gneros de bacterias y 9 gneros de levaduras;
con base en sus caractersticas microscpicas y su comportamiento frente a las
pruebas bioqumicas de la bateria de identificacin API.(Biomereux, 1999)
(Figura 45).

73

Se lleg a aislar e identificar bacterias que por sus caractersticas morfolgicas
(Tabla 22) y su perfil bioqumico (Anexo 5), corresponden a gneros como:
Enterobacter , Escherichia, Pseudomonas, Pantoea, y Klebsiella. entre otros,
presentndose diferentes frecuencias de aparicin (Figura 46); destacndose la
presencia de estos microorganismos en el tanque de ecualizacin dado que
corresponde a la etapa del tratamiento con recuentos ms elevados.

Estos resultados se corroboran con otras investigaciones en reactores anaerobios
UASB, donde aislaron e identificaron bacterias como Pseudomonas
paucimobilis, P. fluorescens, Salmonella sp., Escherichia coli, y Enterobacter
faecium (Riffat et al., 1999), as como en investigaciones realizadas por Rose,
1996 donde las bacterias entricas fueron los gneros comnmente identificados
en la caracterizacin de aguas residuales.

Tabla 22. Descripcin macroscpica y microscpica de las colonias identificadas
No.
COLONIA
MICROORGANISMOS
IDENTIFICADOS
DESCRIPCIN
MACROSCOPICA
DESCRIPCIN
MICROSCOPICA
01 Burkolderia cepacia Colonia crema claro,
circular, brillante, borde
irregular
Bacilo Gram
Negativo
02 Enterobacter aerogenes Colonias crema, borde
irregular
Bacilo Gram
Negativo
03 Enterobacter sakazakii Colonias de borde
irregular, amarillo claro,
brillantes
Bacilo Gram
Negativo
04 Enterobacter
cancerogenus
Colonia de borde
irregular, naranja claro,
brillante
Bacilo Gram
Negativo
05 Enterobacter cloacae Colonia de borde
irregular, brillante,
Amarillo intenso
Bacilo Gram
Negativo
06 Escherichia coli Colonia pequea, circular,
plana, de color azul en
Agar Cromocult
Bacilo Gram
Negativo
Figura 45. Reacciones bioqumicas observadas en la prueba de API 20 E

74
07 Escherichia vulneris Colonia circular, borde
regular, brillante,
levantada, rosada intense
en Agar Cromocult
Bacilo Gram
Negativo
08 Klebsiella pneumonie Colonia circular pequea,
colo rojo a fucsia en Agar
Cromocult
Bacilo Gram
Negativo
09 Klebsiella terrgena Colonia circular, brillante,
crema-beige, borde
regular
Bacilo Gram
Negativo
10 Pantoea sp. Colonia pequea, amarillo
claro, brillante, levantada
Bacilo Gram
Negativo
11 Pseudomonas sp Colonias brillantes,
crecimiento extendido,
color crema
Bacilo Gram
Negativo
12 Serratia ficaria Colonia redonda, grande,
levantada, opaca, de color
rosado claro.
Bacilo Gram
Negativo
13 Pseudomonas fluorecens Colonia grande,
extendida, cremosa,
brillante, de color crema
Bacilo Gram
Negativo
14 Serratia liquefaciens Colonia pequea, opaca,
plana, de color blanco
Bacilo Gram
Negativo
15 Stenotrophomonas
maltophilia
Colonia color crema.
Brillante, borde irregular,
levantada
Bacilo Gram
Negativo
16 Candida glabrata Forma levaduriforme
ovalada
Levadura
17 Candida guillermondi Forma levaduriforme
ovalada
Levadura
18 Candida krusei Forma levaduriforme
circular
Levadura
16 Candida lusitaniae Forma levaduriforme
ovalada
Levadura
20 Cryptococcus laurenti Forma levaduriforme
circular
Levadura
21 Cryptococcus neoformans Forma levaduriforme
ovalada
Levadura
22 Cryptococcus terreus Forma levaduriforme
ovalada
Levadura
23 Rhodotorula glutinis Forma levaduriforme
ovalada
Levadura
24 Saccharomyces cerevisiae Forma levaduriforme
circular
Levadura

75
0
5
10
15
20
25
30
35
Enterobacter E. coli Klebsiella Pseudomonas Serratia Pantoea
Bacterias identificadas
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

d
e

a
p
a
r
i
c
i
n
Ecualizacin Acidificacin Salida

En la identificacin de microorganismos realizada se observa la predominancia de
bacterias Gram negativas en el sistema de tratamiento de aguas residuales
representados en gneros aerobios y facultativos que derivan su fuente de carbono
y energa a partir de compuestos orgnicos; en vista de que los efluentes de la
industria cervecera son ricos en materia orgnica, en su mayor parte hidratos de
carbono (almidn, azcares ycelulosa), protenas, alcohol y constituyentes de los
restos de la cerveza, las poblaciones microbianas que pertenecen a la familia
Enterobacteriacea como los gneros, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella, y
Serratia, metabolizan estos compuestos hasta cidos orgnicos como el cido
lctico, actico y butrico, alcoholes, acetato, CO
2
e Hidrgeno; los cuales son los
sustratos utilizados por las bacterias acetognicas y metanognicas para la
produccin de metano.

As mismo la Figura 47 muestra el porcentaje de aparicin de los diferentes
gneros de levaduras identificados en relacin con cada una de las etapas
evaluadas en el tratamiento.

Figura 46. Porcentaje de aparicin de gneros bacterianos
identificados en cada etapa del tratamiento

76

0
10
20
30
40
50
60
70
Rhodotorula sp. Saccharomyces
cerevisiae
Candida sp. Cryprtococcus sp.
Levaduras identificadas
P
o
r
c
e
n
t
a
j
e

d
e

a
p
a
r
i
c
i
n
Ecualizacin Acidificacin
S a l i d a

La Tabla 23 muestra la frecuencia de aparicin de cada uno de los
microorganismos identificados durante los 24 das de muestreo en los tanques de
Ecualizacin, Acidificacin, y la Corriente de salida durante los meses de Abril y
Junio de 1999 en la planta de aguas residuales en estudio.
Tabla 23. Gneros de microorganismos identificados
FRECUENCIA DE APARICION (*)
MICROORGANISMOS Ecualizacin Acidificacin Salida
Burkolderia cepacia 0 1 0
Enterobacter aerogenes 1 6 4
Enterobacter sakazakii 7 5 2
Enterobacter cancerogenus 2 2 0
Enterobacter cloacae 5 5 2
Escherichia coli 15 17 12
Escherichia vulneris 4 6 5
Klebsiella pneumonie 8 7 4
Klebsiella terrgena 3 7 2
Pantoea sp. 11 14 8
Pseudomonas sp 5 10 5
Serratia ficaria 9 5 3
Pseudomonas fluorecens 5 3 2
Serratia liquefaciens 5 3 0

B
A
C
T
E
R
I
A
S

Stenotrophomonas maltophilia 1 3 2
Candida glabrata 2 2 2
Candida guillermondi 7 7 1
Candida krusei 3 1 1
Candida lusitaniae 2 2 1
Cryptococcus laurenti 5 3 1
Cryptococcus neoformans 11 13 6
Cryptococcus terreus 12 15 7
Rhodotorula glutinis 6 4 0
L
E
V
A
D
U
R
A
S

Saccharomyces cerevisiae 15 10 3
Figura 47. Porcentaje de aparicin de levaduras
identificadas en cada etapa del tratamiento
(*) Nmero de colonias aisladas en cada una de las etapas de tratamiento

77
Es importante tener en cuenta la presencia de muchas de estas bacterias entricas
en la corriente de salida de la planta de tratamiento de aguas residuales en estudio,
en vista de que estos bacilos Gram negativos estn ampliamente dispersos en la
naturaleza; se encuentran en suelo agua y plantas y en el tubo digestivo de
humanos y animales. Adems pueden estar asociadas al desarrollo de procesos de
gastroenteritis y trastornos en el sistema digestivo (Koneman, 1997).
La alta prevalencia de E. coli durante cada una de las etapas del tratamiento
puede ser explicada dado el metabolismo fermentativo que le permite estar
presente en los procesos de hidrlisis y acidificacin, pues la glucosa y otros
carbohidratos son fermentados para producir piruvato, el cual a la vez puede ser
convertido en cido lctico, actico y frmico (Castellani & Chalmers, 1980).
Adems E. coli usualmente puede usar el acetato como nica fuente de carbono y
parte del cido frmico que produce por medio de un complejo de hidrogenoliasa
es transformado en cantidades semejantes de CO
2
y H
2
, as la alta prevalencia de
E. coli en la corriente de salida es entendida en vista de que favorece el
crecimiento de las poblaciones metanognicas al suministrar los sutratos
esenciales para la produccin de metano (acetato, CO
2
y H
2
), e igualmente dado el
metabolismo anaerobio facultativo le permite tolerar las condiciones de
anaerobiosis del reactor, dado que una pequea fraccin de la poblacin
fermentativa es tambin capaz de utilizar el oxgeno. Se plantea que en general
aproximadamente el 1% de la poblacin no metanognica en un digestor esta
compuesta por bacterias anaerobias facultativas como E. coli (Pabn, 1998).

Otros gneros de enterobacterias identificados como Enterobacter y Klebsiella,
presentaron un comportamiento similar con altos porcentajes de aparicin con
relacin a los dems gneros identificados, en vista del metabolismo anaerbico
facultativo que los caracteriza as como la capacidad que poseen para fermentar la
glucosa y producir cidos orgnicos como lctico, actico y frmico y la
produccin de gas (CO2 y H2) con mayor proporcin en CO2, dichas
caractersticas explican la razn por la cual estos dos gneros tuvieron una mayor
prevalencia en el tanque de acidificacin (Trevisan, 1984).

78
Uno de los gneros pertenecientes a la familia enterobacteriaceae como Serratia
present un alto porcentaje de aparicin en el tanque de ecualizacin posiblemente
por sus enzimas hidrolticas que actan sobre lpidos y protenas presentes en esta
etapa del tratamiento, en las etapas posteriores se observa una marcada reduccin
dado que esta bacteria no es un productor importante de cidos orgnicos ni de
gases como CO
2
y H
2
, sustratos esenciales para la digestin anaerobia (Bizio,
1984).
Cabe resaltar la presencia Pantoea sp. perteneciente a la familia
enterobacteriaceae anteriormente ubicada dentro del gnero Enterobacter. En
especial P. aglomerans es asociada con enfermedades infecciosas como
bacteremia y endocarditis. Dadas las implicaciones que a nivel clnico reviste
Pantoea sp, podramos asumir que su aporte proviene de las aguas sanitarias
descargadas a la planta y que dado su metabolismo fermentativo le permite tomar
parte activa en la formacin de cidos orgnicos (Olenginski,1991).

Tambin es importante resaltar la presencia de los gneros de levaduras
identificadas (Figura 48)en vista de la posible implicacin de las mismas en
enfer medades infecciosas entre ellas Cryptococcus terreus y Cryptococcus
neoformans; considerados microorganismos patgenos asociados a infecciones
del sistema nervioso central y tracto genitourinario (Koneman, 1994). La mayor
frecuencia de aparicin la present Saccharomyces cerevisiae la cual no se
considera patgena para el hombre (Koneman, 1994) y es considerada normal
dadas las caractersticas del efluente tratado, por lo tanto se deduce que recuentos
altos de dicha levadura alcanzan a llegar al sistema de drenaje como consecuencia
de las operaciones de lavado de los tanques de fermentacin y del proceso de
filtracin, donde se separa la levadura de la cerveza (Arrieta, 1998).

Figura 48. Reacciones bioqumicas observadas en la prueba para
identificacin de levaduras

79
Anlisis de las proporciones de crecimiento
Teniendo en cuenta las frecuencias de aparicin de los gneros de
microorganismos identificados se realiz un anlisis de las proporciones de
crecimiento y su variacin en relacin con las etapas del tratamiento evaluado.
Para la aceptacin o rechazo de las hiptesis planteadas (8) y (9) se manejo un
nivel de confianza del 95% y un margen de error de 0.05 con un Z calculado de
1.96.
Los valores de Z calculado para cada microorganismo permitieron evidenciar que
el sistema de tratamiento de aguas residuales tipo UAS es eficaz para la remocin
de Serratia liquefaciens , Candida guillermondi, Rhodotorula glutinis y
Sacharomyces cerevisiae; dado que los valores de Z calculado se encontraban
dentro de la zona de rechazo (-1.96 - 1.96)(Tabla 24).

Tabla 24. Valores de Z calculado para las proporciones de crecimiento
en relacin a la etapa de tratamiento.
MICROORGANISMO Z Calculado
E Vs A
Z Calculado
E Vs S
Z Calculado
A Vs S
Burkolderia cepacia
-1.0105 IGUALDAD 1.0105
Enterobacter aerogenes -2.0447 -1.4174 0.7108
Enterobacter sakazakii 0.6666 1.8490 1.2268
Enterobacter cancerogenus 0 1.4446 1.4446
Enterobacter cloacae 0 1.2268 1.2268
Escherichia coli -0.6123 0.8728 1.4757
Escherichia vulneris -0.7108 -0.3698 0.3434
Klebsiella ornithinolytica 0.3113 1.3333 1.0302
Klebsiella oxitoca -1.4216 0.4724 1.8490
Klebsiella pneumonie -0.8667 0.8854 1.7380
Klebsiella terrgena -1.5569 0 1.5569
Pantoea sp. 1.4446 1.4446 IGUALDAD
Pseudomonas fluorecens 0.7745 1.2268 0.4724
Serratia ficaria 0.6666 1.4216 0.7745
Serratia liquefaciens 0.7745 2.3624 1.7888
Stenotrophomonas maltophilia -1.0444 -0.5962 0.4724
Candida glabrata 0 0 0
Candida guillermondi 0 2.3237 2.3237
Candida krusei 1.0444 1.0444 0
Candida lusitaniae 0 0.5962 0.5962
Cryprtococcus laurenti 0.7745 1.7457 1.0444
Cryptococcus neoformans -0.5773 1.5089 2.0660
Cryptococcus terreus -0.8728 1.4757 2.3174
Rhodotorula glutinis 0.7108 2.6186 2.0889
Saccharomyces cerevisiae 1.4446 3.5777 2.2735
E: Ecualizacin A: Acidificacin S: Salida.

80
As mismo no se presentaron diferencias estadsticamente significativas en los
dems gneros de microorganismos identificados; es importante resaltar el alto
porcentaje de aparicin de gneros pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae,
dentro de los cuales se destacan Escherichia coli, Enterobacter sp., Klebsiella sp.,
Pantoea sp, y Pseudomonas sp. que prevalecieron a travs de las etapas del
tratamiento sin evidenciarse una diferencia estadsticamente significativa. Es
importante caracterizar el origen de Escherichia coli para determinar su
patogenicidad.

Teniendo en cuenta que los microorganismos ms importantes en la evaluacin de
la calidad del agua son los microorganismos entricos y que entre ellos los
coliformes han sido empleados como indicadores de la eficiencia en plantas de
tratamiento de aguas residuales, es importante resaltar la persistencia de
Escherichia coli en cada una de las etapas del tratamiento evaluado, por lo cual
podra ser utilizado como un indicador de la eficiencia de la planta en estudio.

6.5.1. Evaluacin de microorganismos patgenos
La importancia de la evaluacin de microorganismos patgenos en aguas
residuales radica en que uno de los objetivos principales para el aprovechamiento
de estas aguas es la eliminacin de agentes patgenos, dado que los riesgos para la
salud pblica (diarreas sintomticas, infecciones entricas e intestinales, fiebre
tifoidea, diarrea originada por rotavirus, hepatitis infecciosa y clera entre otros)
atribuidos al uso de las aguas residuales o excretas pueden estar relacionados con
la supervivencia de los mismos (CEPIS, 1997). En el presente estudio se evalu
la presencia de algunos patgenos por el mtodo ausencia-presencia, en vista del
riesgo potencial que significa su aparicin en la corriente de salida.

Los resultados obtenidos en los anlisis de microorganismos patgenos como
Salmonella sp., Staphylococcus aureus, Listeria sp y Campylobacter sp, indican
la ausencia de Salmonella sp.,y Staphylococcus aureus en los efluentes de la
Planta de Tratamiento de Aguas Residuales de las cervecera estudiada (Tabla 25).

81

Tabla 25. Prueba de ausencia-presencia de microorganismos patgenos
FECHA Salmonella sp. Listeria sp. S. aureus Campylobacter sp.
A P A P A P A P
Junio 17 X X X X
Junio 21 X X X X
Junio 23 X X X X
Julio 21 X X X X
Julio 23 X X X X
Julio 26 X X X X
Julio 28 X X X X
Agosto 9 X X X X
Agosto 11 X X X X
Agosto 13 X X X X

Con relacin a esto es importante resaltar la ausenc ia de Salmonella sp., siendo
este un patgeno que ha sido aislado de aguas residuales an despus de procesos
de cloracin (Kinde et al., 1997); teniendo en cuenta el grado de sensibilidad de la
Prueba Salmonella Rapid Test que es de un 96.8% en relacin al mtodo
tradicional que tiene una sensibilidad del 90.13% (Figura 49).

As mismo se present un resultado positivo de la prueba de Ausencia-Presencia
para Listeria sp y Campylobacter sp (Figura 50)en la corriente de salida; factor
que representa un alto riesgo de contaminacin para la salud pblica dado que en
el efluente posterior al tratamiento anaerobio no existe ningn tipo de tratamiento
terciario.

Figura 49. Prueba rpida de
identificacin para Salmonella sp.
Figura 50. Prueba rpida de
identificacin para Listeria sp.
A: Ausencia P: Presencia

82
A pesar de haberse hallado slo en dos de las muestras de la corriente de salida al
igual que la presencia de algunos patgenos entricos pigmentados como Serratia
sp. y Enterobacter sp. es importante establecer un programa de seguimiento
peridico, pues su incremento se puede llegar a constituir en un problema de salud
pblica dada la produccin de sustancias txicas que pueden ser inhaladas o
ingeridas en caso de que el agua residual fuera utilizada para riego de
cultivos(Russin et al., 1997).

Adems para el caso especfico de Campylobacter sp. la positividad de una de
las pruebas es un resultado significativo ya que segn Baker et al.1999 y de
acuerdo con estudios realizados por Khuder et al.1998, se ha encontrado que
Campylobacter sp. es un patgeno emergente en aguas, altamente vinculado con
casos de gastroenteritis asociadas con la ingestin de agua. Ha llegado a ser
reconocido como una causa importante de la enfermedades diarreicas humanas, y
su presencia en el ambiente y en especial en aguas residuales llegando a ser un
riesgo en caso de que los lodos de los digestores anaerobios fueran utilizados
como abono o en el caso de que las aguas residuales tratadas se utilizaran como
aguas de riego (Park & Sanders, 1992).

Finalmente cabe resaltar la presencia de Stenotrophomonas maltophila durante
las etapas de tratamiento y an en la corriente de salida, siendo este un
microorganismo no encontrado a partir del anlisis de patgenos, sino segn los
aislamientos e identificaciones de los recuentos de hetertrofos, de acuerdo a la
metodologa API (BioMrieux, 1999). La presencia de dicho microorganismo es
importante dado que este microorganismo anteriormente clasificado dentro del
gnero Pseudomonas, acta como un patgeno nosocomial emergente (Baker et
al, 1999).

83
7. CONCLUSIONES

Durante las etapas del tratamiento de aguas residuales de la cervecera en
estudio predominaron los gneros de la familia enterobacteriaceae entre
los cuales se destacaron Klebsiella (12%) , Enterobacter (16%), Pantoea
(16%) y Escherichia (33%) con las mayores frecuencias de aparicin en
la corriente de salida.

La frecuencia de aparicin de Escherichia coli no present variacin en
cada una de las etapas evaluadas, evidenciando as que no existe
disminucin para este microorganismo en el sistema de tratamiento.

La evaluacin de microorganismos patgenos en la corriente de salida
mostr la presencia de Listeria sp. y Campylobacter sp. representando un
factor de alto riesgo para la salud pblica, dado que estos microorganismos
se han reportado como patgenos emergentes.

Existe una correlacin inversa del 42% entre el comportamiento del grupo
de coliformes y los valores de la DQO sin establecerse una relacin entre
las dems variables fsico qumicas y los grupos microbianos evaluados.

El proceso de tratamiento de aguas residuales de la cervecera en estudio,
es efectivo para la remocin de Mohos y Levaduras; sin presentarse
diferencias estadsticamente significativas en relacin con los grupos de
hetertrofos y coliformes.

84
8. RECOMENDACIONES

Realizar un monitoreo de patgenos emergentes, mediante la evaluacin
peridica de la presencia de Listeria sp. y Campylobacter sp. en la corriente de
salida, en vista de que la presencia de estos patgenos en aguas tratadas se han
encontrado asociada a trastornos gastrointestinales desencadenando brotes
epidemiolgicos.

Serotipificar la cepa de Escherichia coli con el fin de conocer su
patogenicidad a fin de garantizar su uso como indicador de contaminacin
fecal, ya que esta bacteria al formar parte del grupo de coliformes fecales
permanece por ms tiempo en el agua que los patgenos y tiene el mismo
comportamiento de estos frente a los sistemas de desinfeccin.

Evaluar la posibilidad de implantar un sistema de tratamiento terciario;
estudiando diferentes alternativas de tratamientos fsicos (floculacin,
sedimentacin y filtracin) a fin de eliminar los residuos de lodo que puedan
haber sido arrastrados a la salida de la tolva de sedimentacin; o tratamientos
qumicos como la cloracin a fin de alcanzar una mejor calidad en el efluente
tratado, garantizando la oxidacin de la materia orgnica y la remocin de
patgenos.

85
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95
ANEXO 1

Formulacin de los Medios de Cultivo Empleados

1. Agar Plate Count 2. Agar Chromocult
Agar Triptona Glucosa Levadura g/l
g/l Peptona 3.0
Triptona 5.0 Cloruro Sdico 5.0
Extracto de levadura 2.5 KH
2
PO
4
1.7
Glucosa 1.0 K
2
HPO
4
3.0
Agar 9.0 Piruvato Sdico 1.0
pH 7.0 +/ - 0.2 Triptfano 1.0
Agar-Agar 12
Laurilsulfato Sdico 0.1
Mezcla de Cromgenos 0.2
pH 6.8 +/ - 0.1 a 25C

3. Agar YGC 4. Caldo BHI
Agar Extracto de levadura-Glucosa-
g/l
Cloranfenicol Infusin de slidos de
g/l cerebro de ternera 112.5
Extracto de levadura 5.0 Infusin de slidos de
D(+)-glucosa 20.0 cerebro de bovino 5.0
Cloranfenicol 0.1 Proteosa peptona 10.0
Agar-Agar 14.9 Glucosa 2.0
pH 6.6 +/ - 0.2 Cloruro sdico 5.0
Fosfato disdico 2.5
pH 7.4 +/ - 0.2

5. Agar Nutritivo 6. Agar MakConkey
g/l g/l
Polvo Lab Lemco 1.0 Peptona de casena 17.0
Extracto de levadura 2.0 Peptona de carne 3.0
Peptona 5.0 Cloruro sdico 5.0
Cloruro sdico 5.0 Lactosa 10.0
Agar 15.0 Mezcla de sales biliares 1.5
pH 7.4 +/ - 0.2 Rojo Neutro 0.03
Violeta Cristal 0.001
Agar-agar 13.5
pH 7.1+/ - 0.1

7. Agar Baird Parker (Agar selectivo para Estafilococos)
Base de Agar Aditivos
g/l Emulsin de yema de huevo 50ml
Peptona de casena 10.0
Extracto de carne 5.0

96
Extracto de levadura 1.0
Piruvato sdico 10.0
Glicina 12.0
Cloruro de litio 5.0
Agar-agar 15.0
pH 6.8 +/ - 0. 2

8. Agar Selectivo para Campylobacter
Medio selectivo Exento de Sangre para Campylobacter
Base de Agar Selectivo Exento
de Sangre para Campylobacter Suplemento Selectivo CCDA
g/l Cada vial es suficiente para
Caldo Nutritivo 25.0 suplementar 500ml de medio
Carbn bacteriolgico 4.0 g/l
Hidrolizado de casena 3.0 Cefoperazona 16mg
Desoxicolato de sodio 1.0 Anfotericina B 5mg
Sulfato Ferroso 0.25
Piruvato de sodio 0.25
Agar 12
pH 7.4 +/ - 0.2

9. Sabouraud 10. PDA (Patata-Dextrosa-Agar)
g/l g/l
Peptona de casena 5.0 Infusin de papa(*) 4.0
Peptona de carne 5.0 D(+)-glucosa 20.0
D(+)-glucosa 10.0 Agar-agar 15.0
Maltosa 10.0 (*) Preparada a partir de 200g de
Agar-agar 15.0 Papa.
pH 5.6 +/ - 0.1 pH 5.6 +/ - 0.1

11. Fluorocult
g/l
Peptona 10.0
Lactosa 10.0
Bilis de buey desecada 20.0
Verde Brillante 0.0133
L-triptfano 1.0
4-metilumberifenil--
D-glucurnido 0.1
pH 7.2 +/ - 0.1

97
ANEXO 2

Tcnicas Empleadas

1. NMP
Materiales
5 Tubos con caldo Fluorocult a doble
10 Tubos con caldo Fluorocult a simple concentracin

Tcnica
Inocular la serie de 5 tubos con doble concentracin y una serie de
concentracin simple con 1ml de la muestra.
Inocular la serie de 5 tubos de simple concentracin restante con 1ml de una
dilucin 10
-1
de la muestra.
Llevar a incubar las tres series de 5 tubos a 37C durante 24 48 horas.

Lectura
El viraje de color del caldo de amarillo a verde azulado indica la
positividad de la prueba para coliformes totales.
La presencia de fluorescencia al observar los tubos con una
lmpara de luz ultravioleta, indica la positividad de la prueba para E.coli
Posteriormente se cuenta el nmero de tubos positivos en cada una
de las series y las respectivas combinaciones se leen en la tabla de tres series de
cinco tubos.
Interpretar los resultados comparando en la tabla de NMP y
reportar / 100ml.

2. Catalasa
El objetivo de esta prueba es determinar si la bacteria produce la catalasa
que transforma el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno; en vista de que
el perxido se forma como uno de los productos finales del metabolismo
oxidativo o aerbico de los hidrat os de carbono.

Tcnica
Colocar sobre una lmina portaobjetos una o dos gotas de una solucin de
perxido de hidrgeno al 3%
A partir de una colonia pura y aislada en un medio no selectivo, se transfieren
las clulas del centro de la colonia con palillos estriles y se ponen en contacto
con la gota de perxido de hidrgeno al 3% colocada sobre la lmina
portaobjetos.

Lectura

98
La rpida aparicin y produccin sostenida de burbujas de gas o efervescencia,
indica una prueba positiva.
Control Positivo: Staphylococcus aureus
Control Negativo: Streptococcus

99
3. Salmonella Rapid Test
Salmonella Rapid Text Oxoid ha sido especialmente diseado para la deteccin
presuntiva de Salmonellas mviles en alimentos, materia prima y `producto
terminado y muestras ambientales.

Principio
Una muestra homogeneizada y preenriquecida en un medio adecuado se iocula
ene l vaso de cultivo que contiene Medio Electivo para Salmonella y dos tubos.
Cada tubo contiene dos capas, una inferior con medio selectivo y otra superior con
medio indicador, separadas por una interface porosa. Si la muestra procesada
contiene Salmonella, sta migrar activamente a travs del medio inferior hacia el
superior, donde su presencia se pondr de manifiesto por un cambio de color.

Preparacin de la muestra
Preenriquecer la muestra en un medio adecuado por ejemplo por homogenizacin
a dilucin 1:10 en buffered water, (Oxoid Cdigo CM509).

Procedimiento
Preparacin del vaso de cultivo
Manipular aspticamente durante todo el proceso. Cada vaso de cultivo debe
prepararse hasta el paso 6 antes de preparar el siguiente.

1. Golpear en ngulo el vaso de cultivo para facilitar la uniformidad del medio
que puede haberse compactado en los tubos. Destapar el vaso.
2. Aadir agua destilada estril hasta la lnea inferior (lnea 1) sealizada a un
lado del vaso de cultivo (aproximadamente 27 ml). Comprobar que la parte
inferior de los tubos A y B quedan por debajo del nivel del lquido.
3. Manteniendo la aguja en la funda protectora acoplar a la jeringa. Retirar la
funda y cuidadosamente introducir la aguja a travs del agujero central del
tapn azl del tubo A. suavemnte retirar el embolo de la jeringa hasta que el
nivel del lquido en el tubo alcance la lnea 3 sealizada en el vaso de cultivo.
El tiempo empleado en la operacin de retirada del mbolo debe ser 5
segundos. Retirar jeringa y aguja introduciendo sta en su funda protectora.
Tener sumo cuidado en no desplazar los tubos de su posicin en el vaso, as
como de no aflojar el tapn de los tubos.
4. Inmediatamente repetir el mismo procedimiento (paso 3) con el tubo B (tapn
rojo).
5. Tapar el vaso de cultivo, presionar firmemente un lateral del vaso de cultivo
conteniendo los dos tubos contra un mezclador vortex y accionar ste. Es
muy importante que los lquidos contenidos en los tubos sean vigorosamente
agitados durante 5 segundos. Tras la agitacin, dejar reposar 5 minutos. En
este paso puede mantenerse hasta 4 haras antes de continuar con el paso.
6. Destapar el vaso cuidadosamente. Verter Salmonella Rapid Test Elective
Medium (SRTEM) estril y enfriado al vaso de cultivo hasta que el nivel de
lquido alcance la lnea 2 que figura en la pared del vaso (preparar el Medio
SRTEM segn las directrices que figuran en la etiqueta del envase de CM857).
7. Aspticamente aadir un disco de novobiocina.
NOTA: Mantener el vaso de cultivo en vertical durante todo el procedimiento.

100
8. Por medio de la llave que se suministra retirar los tapones azl y rojo de los
tubos. Durante esta operacin se EVITARA TOCAR los tubos as como el
interior de las paredes del vaso de cultivo.
Desechar los tapones
9. Tapar el vaso de cultivo. Ahora est preparado para utilizar.

Utilizacin del vaso de cultivo
1. El caldo de pre-enriquecimiento debe agitarse tras la incubacin y dejar
reposar hasta que sedimenten las partculas mas gruesas.
2. Registrar la identificacin de la muestra en las etiquetas que se suministran y
pegar al vaso de cultivo.
3. Retirar la tapa del vaso de cultivo preparado y adicionar 1 ml del pre-
enriquecido.
4. Tapar de nuevo el vaso de cultivo.
5. Incubar durante 24 horas en una estufa a 41C + o 0.5C. (el vaso de cultivo
debe mantenerse vertical durante todo el tiempo).

Lectura e interpretacin de Resultados
1. Tras 24 horas de incubacin, retirar el vaso de cultivo de la estufa y a la luz
examinar la parte superior (medio indicador) de los tubos para visualizar el
viraje! Puede aparecer ennegrecimiento en la parte inferior de los tubos, pero
slo deben considerarse los cambios de color de la parte superiores.
2. La posible presencia de Salmonella se evidencia por un cmabio de color en la
parte superior (medio indicador) de uno o de ambos tubos.

POSITIVO:
Tubo A- ENNEGRECIMIENTO EN MAYOR O MENOR GRADO
Tubo B- ENROJECIMIENTO O EBNNEGRECIMEINTO EN MAYOR O
MENOR GRADO.

NEGATIVO:
Tubo A- AUSENCIA DE COLORACIN NEGRA
Tubo B- AUSENCIA DE COLORACIN ROJA O NEGRA.

NOTA: El propsito de esta escala de color es exclusivamente a modo de guia
general. Si se observan reacciones mas debiles, los cultivos deben ensayarse con
salmonella latex text.

3. Los tubos positivos deben procesarse con Salmonella Latex Test Oxoid
(Cdigo FT203). Aquellas muestras cuyos tubos den positivo con Salmonella
Ltex Test deben informarse como presuntivamente portadoras de
Salmonella. El hallazgo debe confirmarse mediante cultivo tradicional y
tcnicas serolgicas, subcultivando una porcin de la parte indicadora supeirr
del tubo que haya dado un resukltado psitivo en la aglutinacin de ltex, en un
medio de enriquecimiento selectivo.

PRECAUCIONES
Manipular aspticamente durante todo el proceso.

101
No pipetear con la boca.
Los vasos de cultivo deben autoclavarse antes de desechar.

4. Listeria Rapid Test
Principio
El antgeno flagelar de Listeria ha sido extraido de una muestra que ha sido
cultivada en dos enriquecimient os secunciales. El test inmunoenzimtico
consiste en una tira de membrana ( la unidad de prueba visual) sobre la cual es
inmovilizado un anticuerpo especfico para el flagelo de Listeria dejndolo
inmovilizado. La mayora de los anticuerpos especificos para Listeria, se unen
provocnado reacciones cromgenas por las partculas de latex, ocurridas en la tira
del test en presencia de la muestra ha evaluar.
Si el antgeno de Listeria est presente en la muestra, se forma una reaccin
sndwich con latex marcado y anticuerpos inmovilizados, resultando en una linea
azl, la cual indica un resultado positivo. Una segunda lnea de anticuerpos no
especfica es inmovilizada en la tira del test. Estos une el exceso de latex marcado
si el antgeno est presente o no, proporcionando un control integral.

Procedieminto
1. Adicione la muestra a 9 volumenes de caldo Fraser.
2. Homogenizar bien la mezcla. Incubar a 30C por un mnimo de 21 horas sin
exceder 24 horas.
3. Transferir 0.1ml de la mezcla incubada a 10 ml de Caldo enriquecido buffer
Listeria (BLEB). Incubar a 30C de 21 a 24 horas.
4. Transferir 2 ml del caldo incubado BLEB dentro de un tubo de vidrio a bao
de agua a 80C por 20 minutos.
5. Dejar enfriar la mezcla a temperatura ambiente, y adicionar 135l en la
ventana de muestra del Clearviw Listeria Test Unit.
6. Observe la unidad de prueba despus de 20 minutos. Si aaprece una lnea azl
en la ventana de resultados, la prueba es positivo para Listeria. Una lnea
azl en la ventana de control demuestra que el test se ha realizado
correctamente.

5. Campylobacter
La tcnica empleada para la bsqueda del microorganismo consisti en hacer una
dilucin 1:10 de la muestra de agua de la corriente de salida de la planta de
tratamiento de aguas residuales en estudio, utilizando como diluyente agua
peptonada al 0.1%, realizando posteriormente una siembra masiva con hisopos de
algodn estriles, sobre las cajas petri con el medio slido; llevndolas a
incubacin a 37C durante 48 horas, en una atmsfera entre 5-6% de oxgeno,
10% de CO2 y 84-85% de Nitrgeno, confirmando posteriormente la presencia de
Campylobacter por la morfologa tpica de esta bacteria en la coloracin de Gram.

6. Prueba de STAPHYLASE DR595
Prinicipio

102
La prueba Staphylasa de Oxoid, detecta la presencia del factor de agregacin por
agregacin de eritrocitos de oveja sensibilizados con fibringeno. La especificidad
de la reaccin se confirma por una prueba simultanea con un reactivo control
(eritrocitos de oveja sin sensibilizar), donde, naturalmente no debe observarse
dicha agregacin.

Procedimiento
1. Las muestras a identificar pueden sembrarse bien sobre medios selectivos
(Manitol SALT Agar, Baird-Parker Mdium) o sobre medios no selectivos
(Agar sangre)
2. Realizar tincin de Gram y prueba de catalasa a las colonias sospechosas, para
confirmar la presencia de cocos Gram-positivos, catalasa positivos.
3. Agitar los reactivos de prueba y control y asegurarse la formacin de una
suspensin homognea. Cualquier resto de clulas que haya podido quedar
atrapado en el goteador debe mezclarse con la suspensin.
4. Por medio de un asa, recoger de 1 a 3 colonias sospechosas y extender sobre
el circulo de prueba y el de control de la tarjeta de reaccin.
5. Aadir 1 gota del reactivo de prueba al circulo de prueba y 1 gota del reactivo
control al circulo control.
6. Mezclar el contenido del circulo de prueba por medio de un asa. Flamear el
asa y mezclar el contenido del circulo control.
Observar la aparicin de aglutinacin mientras se mezcla.
7. Desechar la tarjeta de reaccin en desinfectante.

Resultados
Se obtiene un resultado positivo si se observa agregacin de la suspensin
celular mientras se mezcla. Esto indica la presencia de Staphylococcus aureus.
Los resultados no se pueden interpretar si aparece agregacin en el control. En
estos casos debe examinarse la pureza e identidad del cultivo.

7. Baterias Bioqumicas API

API 20 E
Sistema de identificacin para enterobacteriaceae y otros bacilos gram-negativos.

API 20 E es un sistema para identificacin de las enterobacteriaceae y otros
bacilos gram-negativos y no exigentes, mediante 23 tests bioqumicos
estandarizados y miniaturizados, y una base de datos. La lista completa de las
bacterias que pueden identificarse utilizando este sistema aparece en la tabla de
identificacin.

Princ ipio
La galera API 20 E consta de 20 micro tubos que contienen los substratos
deshidratados. Los tests se inoculan con una suspensin bacteriana que rehidrata
los medios. Durante la inoculacin el metabolismo de la bacteria produce cambios
de color espontneos o bien al aadir reactivos.

103
La lectura de las reacciones se hace de acuerdo con la tabla de lectura y la
identificacin mediante la tabla de identificacin, API 20 E INDEX o el programa
informatico para identificacin.

La caja API 20 E permite realizar 25 identificaciones y se compone de:
25 galeras API20 E.
25 cmaras de incubacin.
25 hojas de resultados.
1 sistema de cierre.
1ficha tcnica.

TCNICA
Preparacin de la galera
Preparar una cmara de incubacin con su tapa correspondiente y repartir
5 ml. De agua en los alvolos para proporcionar una atmsfera hmeda.
Anotar la referencia de la muestra en la lengeta lateral de la cubeta.
Colocar la galera en la cmara de incubacin.
Paralelamente, realizar el TEST DE LA OXIDASA:
- Colocar un trozo de papel de filtro sobre un portaobjetos.
- Humedecer el papel con una gota de agua .
- Aadir una gota de reactivo OX.
- Si en el intervalo de 1 a 2 minutos aparece una tonalidad prpura
oscura, se trata de una reaccin positiva.
NOTA: API 20E debe utilizarse con los bacilos Gram negativos y no
exigentes. Los microorganismos difciles y exigentes para los cuales se
necesita tener precauciones especiales de manipulacin (ej.: Brucella y
Francisella) no forman parte de la base de datos API 20 E. Excluir o
confirmar su presencia.

Preparacin del inoculo
Abrir una ampolla de Medio suspensin API 20E (ref. 20, 110) o agua
destilada estril .
Por medio de una pipeta Pasteur estril tomar una colonia bien aislada.
Realizar una suspensin homognea delas bacterias en el medio.

Inoculacin de la galera
Llenar el tubo y la cpula de los test CIT, VP, GEL, con la suspensin
anterior
Llenar los tubo pero no las cpulas de los dems tests.
Llenar las cpulas de los tests ADH, LDC, ODC, URE, H2S, con aceite de
parafina para obtener anaerobiosis.
Cerrar la cmara de incubacin e incubar a 35-37
o
C durante 18-24 horas.

104
Lectura de la galera
Despus de 18-24 horas a 35-37
o
C debe hacerse la lectura dela galera segn
la tabla de lectura.
Anotar en la hoja de resultados las reacciones espontneas.
Si la glucosa es positiva y /o 3 o ms tests son positivos: efectuar el revelado
de los tests que requieren reactivos.
- TEST VP: Aadir una gota de VP 1 y VP 2. Esperar 10 minutos. Un color
rojo o rosa fuerte indican una reaccin POSITIVA.
- TEST TDA: Aadir una gota de reactivo TDA. Un color marrn oscuro
indica una reaccin POSITIVA.
- TEST IND: Aadir una gota de reactivo JAMES. La aparicin inmediata
de un coloracin rosa indica que la reaccin es POSITIVA, Aadir una
gota de reactivo IND y espere dos minutos, la aparicin de un amarillo rojo
indica que la reaccin es POSITIVA.
- TEST NO2: Aadir una gota de reactivo NIT 1 y NIT 2en un tubo GLU.
Esperar 2 a 3 minutos. Un color rojo indica una reaccin POSITIVA. Una
reaccin negativa puede deberse a la reduccin de los nitratos a N
2
(acompaada muchas veces de la formacin de burbujas); Aadir de 2 a3
mg de reactivo de Zn. Si despus de 5 minutos el tubo permanece amarillo
indica una reaccin POSITIVA. Si la reaccin da color rosa o rojo la
reaccin es negativa.

Si la glucosa es negativa y el numero de tests positivos es inferior o igual a 2:
no aadir reactivos.
- Inocular 2 medios API OF para comprobar el metabolismo de la glucosa.
- Sembrar en MAC CONKEY.
- Comprobar la movilidad. Inocular 1 medio API M.
- Reincubar la galera 24 horas ms.
- Aadir los reactivos.
- Anotar los resultados de la galera y los resultados de los tests
complementarios en la hoja de resultados .

Identificacin
Mediante la tabla de identificacin: Comparar las reacciones de la hoja de
resultados con los de la tabla.
Con el API 20E Index o el programa informtico para identificacin: Del
conjunto de reacciones debe obtener un perfil numrico. En la hoja de resulta
dos los tests estn separados en grupos de tres y un valor de 1,2 4 est
indicado para cada uno. La galera API 20E consta de 20 tests, los numero en
el interior de cada grupo corresponde a las reacciones positivas. El test de la
oxidasa es el n
o
21 y si es positivo se le asigna el valor 4. Sumando los valores
de los tests positivos par cada grupo se obtiene un cdigo de 7 cifras. En
algunos casos, el perfil de 7 cifras no discrimina suficientemente, debiendo
realizar los tests complementarios siguientes:

- Reduccin de los nitratos a nitritos (NO2)
- Reduccin de los nitratos a nitrgeno (N2)

105
- Movilidad (MOB)
- Cultivo en Mac Conkey (McC)
- Oxidacin de la glucosa (OF-O)
- Fermentacin de la glucosa (OF-F)

Esterilizacin
Despus de obtener la identificacin correspondiente, todo el material empleado
debe ser esterilizado mediante autoclave, incineracin o inmersin en un
germicida.

Limitaciones
El sistema API 20E esta concebido para identificar bacilos Gram negativos y no
exigentes incluidos en la base de datos. No puede identificar microorganismos que
no estn incluidos en dicha base de datos.
La interpretacin de los resultados debe ser realizada por un analista teniendo en
cuenta el contexto clnico, el origen de la muestra estudiada y el aspecto macro y
microscpico. Eventualmente deben tenerse en cuenta otros resulta dos incluido el
antibiograma

API 20 NE
Sistema de identificacin de bacilos Gram-negativos no enterobacterias.

API 20 NE es un micro-mtodo estandarizado que combina 8 tests
convencionales y 12 tests de asimilacin para la identificacin de bacilos Gram-
negativos no exigentes y no enterobacterias ( por ej., Pseudomonas,
Acinetobacter, Flavobacterium, Moraxella,Vibrio, Aeromonas ,etc). Los
microorganismos fastidiosos, exigentes y que requieren precauciones especiales
de manipulacin (ej.,Brusella y Francisella) no forman parte de la base de datos
API 20 NE.
Conviene utilizar otras tcnicas para excluir o confirmar su presencia. La lista
completa de las bacterias que es posible identificar con este sistema se presenta en
la tabla de identificacin.

Princ ipios
La galera API 20 NE se compone de 20 cpulas que contienen medios y /o
sustratos deshidratados.
Los tests convencionales son inoculados con una suspensin bacteriana salina que
reconstituye los medios. Las reacciones que se producen durante la incubacin se
traducen en variaciones de coloracin espontneas o reveladas mediante la adicin
de reactivos.
Los tests de asimilacin son con un medio mnimo y las bacterias se reproducen
slo si son capaces de utilizar el sustrato correspondiente.
La lectura de estas reacciones se lleva a cabo utilizando la tabla de lectura y la
identificacin se realiza con la ayuda del catalogo analtico o de un programa de
identificacin.

106
REACTIVOS
Composicin del envase (25 tests)
25 galeras API 20 NE.
25 cmaras de incubacin.
25 ampollas de medio sinttico AUX Mdium.
25 hojas de resultados.
1 ficha tcnica.

TCNICA
Preparacin de la galera
Preparar una cmara de incubacin con su tapa correspondiente y repartir
5 ml. De agua en los alvolos para proporcionar una atm sfera hmeda.
Anotar la referencia de la muestra en la lengeta lateral de la cubeta.
Colocar la galera en la cmara de incubacin.
Paralelamente, realizar el TEST DE LA OXIDASA:
- Colocar un trozo de papel de filtro sobre un portaobjetos.
- Humedecer el papel con una gota de agua .
- Aadir una gota de reactivo OX.
- Si en el intervalo de 1 a 2 minutos aparece una tonalidad prpura
oscura, se trata de una reaccin positiva.
NOTA: API 20E debe utilizarse con los bacilos Gram negativos y no
exigentes. Los microorganismos difciles y exigentes para los cuales se
necesita tener precauciones especiales de manipulacin (ej.: Brucella y
Francisella) no forman parte de la base de datos API 20 E. Excluir o
confirmar su presencia.

Preparacin del inoculo
Abrir una ampolla de NaCl 0.85% Medio suspensin API 2 ml o agua
destilada estril.
Por medio de una pipeta Pasteur estril tomar una colonia bien aislada.
Realizar una suspensin homognea delas bacterias en el medio, para
obtener una suspensin bacteriana de turbidez igualk ala del patron 0,5 de
McFarland.

Inoculacin de la galera
Llenar el tubo y no las cpulas de los test NO3, PNPGL, con la suspensin
anterior.
Abrir una ampolla de AUX medio y transferir en ella aproximadamente
200 L (6-8 gotas) de las suspensin precedente, homogenizar evitando la
formacin de burbujas,
Llenar los tubos y cpulas de los tests GLU a PAC, cuidando que quede ek
nivel horizontal o ligeramente convexo pero jams cncavo. Las cpulas
incompletamente o demasiado llenas pueden generar res ultados
incorrectos.
Llenar de aceite de parafina las cpulas de los tests subrayados (GLU
ADH, URE), para formar un menisco convexo.
Cerrar la cmara de incubacin e incubar a 30
o
C durante 24 horas.

107

Lectura de la galera
Despus de 24 horas a 30
o
C debe hacerse la lectura dela galera segn la tabla
de lectura.
Anotar en la hoja de resultados las reacciones espontneas ( GLU ADH, URE,
ESC, GEL, PNPG ).
El revelado de los dos test NO3 y TRP debe hacerse protegiendo los test de
asimilacin d eun acontaminacin por ekl aaire. Para ello, colocar la tapa de la
cmara de incubacin por encima de los test.

- TEST NO
3
: Aadir una gota de reactivo NIT 1 y NIT 2en un tubo NO
3
.
Esperar 5 minutos. Un color rojo indica una reaccin POSITIVA. Una
reaccin negativa puede deberse a la reduccin de los nitratos a N2
(acompaada muchas veces de la formacin de burbujas); Aadir de 2 a3
mg de reactivo de Zn. Si despus de 5 minutos el tubo permanece amarillo
indica una reaccin POSITIVA. Si la reaccin da color rosa o rojo la
reaccin es negativa.
- TEST TRP: agregar una gota del reactivo de James. Una coloracin
rosada que se difunde por toda la cpula indica una reaccin positiva.
- TEST DE ASIMILACIN: observar el crecimiento bacteriano. Una
cpula turbia indica una reacci n positiva. Pueden observarse crecimiento
de intensidad intermedia que se pueden anotar, -+ +-. Una vez realizada
esta lectura, la identificacin debe realizarse como se indica en el prrafo
identificacin.

Identificacin
Mediante la tabla de identificacin: Comparar las reacciones de la hoja de
resultados con los de la tabla.
Con el API 20 NE Index o el programa informtico para identificacin:
Del conjunto de reacciones debe obtener un perfil numrico. En la hoja de
resulta dos los tests estn separados en grupos de tres y un valor de 1,2 4 est
indicado para cada uno. La galera API 20E consta de 20 tests, los numero en
el interior de cada grupo corresponde a las reacciones positivas. El test de la
oxidasa es el n
o
21 y si es positivo se le asigna el valor 4. Sumando los valores
de los tests positivos par cada grupo se obtiene un cdigo de 7 cifras

Esterilizacin
Despus de obtener la identificacin correspondiente, todo el material empleado
debe ser esterilizado mediante autoclave, incineracin o inmersin en un
germicida.

Limitaciones
El sistema API 20NE esta concebido para identificar bacilos Gram negativos no
enterobacterias y no exigentes incluidos en la base de datos, y solo a stos. No
puede identificar microorganismos que no estn incluidos en dicha base de datos.

108
La interpretacin de los resultados debe ser realizada por un analista teniendo en
cuenta el contexto clnico, el origen de la muestra estudiada y el aspecto macro y
microscpico. Eventualmente deben tenerse en cuenta otros resultados incluido el
antibiograma

API 20 C AUX
Sistema de identificacin de levaduras.
PRINCIPIO
La galeria API 20 C AUX se compone de 20 cpulas que contiene sustratos
deshidratados que permiten realizar 19 tests de asimilacin. Las cpulas son
inoculadas con un medio mnimo semislido y las levaduras se reproducen solo si
son capaces de utilizar el sustrato correspondiente.
Las lecturas de estas reacciones se hace por comparacin con un control de
crecimiento y la identificacin se obtiene mediante el Catlogo Analtico o un
programa informtico de identificacin.

REACTIVOS
Composicin del envase (26 tests):
Suspensin Mdium, 2ml (ref. 70 700) o NaCl 0,85% Mdium, 2ml (ref. 20
070)
RAT Mdium [Riz Agar Tween] (ref. 41 794)
SABOURAUD Medium (ref. 42 026 0 43 171)
Pipetas o PSIpettes (ref. 79 250)
McFarland Standard (ref. 70 900), punto 2
Catlogo Anlitico API 20 C AUX (ref. 20 290) o programa informtico de
identificacin (consultar a bioMrieux)
Una gradilla (ref. 70 200)

Material de Laboratorio Necesario:
Estufa (30C)
Refrigerador
Mechero de Bunsen
Rotulador

LISTA DE LAS PRUEBAS
GLU Glucosa MDG Metil-D-Glucosido
GlY Glicerol NAG N Acetil-D-Glucosamina
2KG 2-Ceto-D-Gluconato CEL Celobiosa
ARA L-Arabinosa LAC Lactosa
XLY D-Xylosa MAL Maltosa
ADO Adonitol SAC Sacarosa
XLT Xylitol TRE Trehalosa
GAL Galactosa MLZ Melezitosa
INO Inositol RAF Rafinosa
SOR Sorbitol

109
TCNICA
Las muestras y los cultivos de levaduras deben ser considerados como
potencialmente infecciosos y deben ser manejados de manera adecuada por
personal competente y preparado.
Las tcnicas aspticas y las precauciones habituales para la manipulacin de las
levaduras deben ser respetadas a lo largo de toda la manipulacin.

Preparacin de la Galera
Reunir el fondo y la tapa de una cmara de incubacin y repartir
aproximadamente 5ml de agua destilada o desmineralizada [o toda agua sin
aditivos o derivados susceptibles de liberar gases (Ej: Cl
2
, CO
2
...)] en los
alvolos del fondo con el fin de crear una atmsfera hmeda.
Escribir la referencia de la muestra en la lengeta lateral de la cmara.
Retirar la galera de su embalaje individual y depositarla en la cmara de
incubacin.

Preparacin del Inculo
Abrir una ampolla de suspensin Mdium o de NaCl 0.85% Mdium o utilizar
un tubo que contenga 2ml de la misma solucin sin aditivo.
Realizar una suspensin de levaduras de turbidez igual a 2 de McFarland. Para
ello, retirar una fraccin de colonia mediante una pipeta por aspiracin o por
toques sucesivos.
Depositar una gota de suspensin de levaduras en el RAT Mdium [Riz Agar
Tween] -
Abrir una ampolla de C Mdium y transferir en ella 100l (es decir 2 a 4
gotas) de una pipeta de la suspensin anterior. Homogenizar con la pipeta,
evitando la formacin de burbujas.

Inoculacin de la Galera
Llenar las cpulas con la suspensin obtendida en C Mdium. Evitar la
formacin de burbujas apoyando la punta de la pipeta en el borde de la
cmara. Cuidar de crear un nivel horizontal o ligeramente convexo, pero jams
cncavo. Las cmaras incompletamente o demasiado llenas pueden generar
resultados incorrectos.
Cerrar la cmara de incubacin e incubar durante 48-72 horas a 30C.

Lectura de la Galera
Despus de 24, 48 o eventualmente 72 horas de incubacin, si los tests y en
particular la glucosa, no son suficientemente patentes despus de 48 horas,
observar el crecimiento de levaduras. La cmara 0 sirve de testigo negativo. Una
cmara ms turbia que el testigo indica una reaccin positiva, que debe anotarse
en la hoja de resultados.
NOTA: En caso de que la lectura no pueda realizarse a las 72 horas, pueden
interpretarse los resultados en las 24 horas que siguen.
Con el fin de evitar cualquier contaminacin por reincubacin, retirar la tapa slo
durante el perodo de lectura.

110
Identificacin
La identificacin puede hacerse:
Con el Catlogo Analtico: Codificar el conjunto de las reacciones obtenidas
en un perfil numrica:
En la hoja de resultados, los tests estn separados en grupos de tres y se indica
para cada uno un valor de 1,2 4. Sumando al interior de cada grupos los
nmeros que corresponden a reacciones positivas, se obtienen 7 cifras.

Eliminacin del Material Utilizado
Despus de utilizarlas, las ampollas, cajas, pipetas y galeras deben ser incineradas
o decontaminadas en un autoclave o sumergindolas en un desinfectante, antes de
eliminarlas.

Limitaciones
El Sistema API 20 C AUX est destinado a la identificacin de levaduras
presentes en la base de datos.

111
ANEXO 3

Frmulas y Clculos Estadsticos

1. Tamao de la Muestra
De acuerdo a los datos obtenidos en el muestreo piloto que se incluyen en el
Anexo 4, mediante las siguientes frmulas se calcul el tamao de la muestra,
teniendo en cuenta que los clculos fueron realizados con los datos
cor respondientes al tanque de ecualizacin, dado que en esta etapa del tratamiento
se obtuvieron los recuentos ms elevados.

Muestreo Piloto del Tanque de Ecualizacin

estratos
MEDIA
ARITMETICA
VARIANZA
(
2
h)
TAMAO
ESTRATO (Nh)

Nh x
2
h
Hetertrofos 9,57 9.70 12 116.4
Coliformes 8.15 4.54 12 54.48
Mohos y Levaduras 9.43 5.92 12 71.04

Nh x
2
h = 241.92 W = Nh W = 12 = 0.33
N 36

N = N
2
x Nh x
2
h donde N = Tamao de la muestra de la poblacin
N
2
e
2
+ Nh x
2
h e = 5
Z
2
Z = 1.96

N = (36)
2
x (241.92) = 36
(36)
2
5
2
+ (241.92)
(1.96)
2

Tamao de muestra en cada Estrato: W x N = 0.33 x 36 = 12 Muestras

2. Anlisis de Anava

Planteamiento del Modelo:
Y = + i + Eij
Y = Respuesta (Recuento de Microorganismos)
= Crecimiento Microbiano

i
= Efecto sobre la respuesta en el tanque i = Equalizacin,
Acidificacin, Salida.
Eij = Error experimental

Nivel de Significancia = 0.05

Estadstica de Prueba

112

Anlisis de varianza
Tabla de Anava
Fuente de
variacin
Grados de
libertad
Suma de
cuadrados
Cuadrados
Medios F calculada
Tanque - 1 Yi
2
- Y
2

n N
SC Tanque
a - 1
CM Tanque
CM Error
Error Por diferencia Por diferencia SC Tanque
GL Error

Total N - 1 Yij
2
- Y
2

N

Regla de decisin: Si F calculada > > F terica Rechazo Ho

2. Comparacin Mltiple de Scheff


S
= Scv (a - 1) F
Terica

Scv = CMError 1 + 1
nK nl

Regla de decisin Si Diferencia > S
Rechazo Ho
*

4. Anlisis de correlacin de las variables Fsico-qumicas con los recuentos
microbianos.

Para los anlisis de correlacin se trabaj con un nivel de confianza del 95% (p
valor 0,05).

Regla de Decisin si p-valor < 0.05 Rechazo Ho
**

Tabla 23. Niveles de correlacin de las variables fsico-qumicas con los recuentos
microbianos en las etapas del tratamiento
ETAPA DEL
TRATAMIENT
O
PARMETR
O
HETERTROFO
S
COLIFORME
S
HONGO
S
AGV -0.2007
1
(24)
2
0.5318
3
-0.1790
(24)
0.5779
0.0401
(24)
0.9016
Ecualizacin
Alcalinidad 0.1908
(24)
0.4635
0.0386
(24)
0.9051
-0.0132
(24)
0.9676

113
pH -0.4635
(24)
0.1291
0.0651
(24)
0.8407
-0.2960
(24)
0.3503

DQO -0.0881
(24)
0.7854
0.1213
(24)
0.7072
0.0703
(24)
0.8281
AGV -0.0329
(24)
0.1949
0.1562
(24)
0.4661
0.1749
(24)
-0.0329
Alcalinidad -0.0090
(24)
0.3512
0.1994
(24)
0.3502
0.2354
(24)
-0.0090
pH -0.1754
(24)
0.0655
0.4614
(24)
0.3395
-0.1466
(24)
0.1563

Acidificacin
DQO -0.3820
(24)
0.4122
-0.2038
(24)
0.0403
-0.2986
(24)
0.4942
PH 0.0175
(24)
0.9486
-0.0658
(24)
0.8086
-0.1196
(24)
0.6591
Salida
DQO 0.2756
(24)
0.3016
0.1744
(24)
0.5182
-0.0485
(24)
0.8585
1.
Nivel de Correlacin
2.
Nmero de muestras
3.
p-valor.

4. Comparacin de la proporcin de crecimiento por bacteria para cada Tanque

Z = P1 - P2

p q 1 + 1
n
1
n
2

donde p = n
1
P
1
+ n
2
P
2
q = 1 + P
n
1
+ n
2

Regla de decisin Si Zcal > Zk/2 Rechazo Ho

115
ANEXO 4
Datos Numricos Obtenidos
1. Recuentos Microbianos
HETERTROFOS COLIFORMES MOHOS Y LEVADURAS DIAS DE
MUESTREO Ecualizacin Acidificacin Salida Ecualizacin Acidificacin Salida Ecualizacin Acidificacin Salida
1 41x10
5
22x10
4
- 35x10
1
23x10
3
- 90x10
2
52x10
3
-
2 16x10
5
20x10
6
- 34x10
6
69x10
5
- 39x10
6
17x10
6
-
3 97x10
5
97x10
8
- 36x10
7
91x10
6
- 92x10
8
43x10
8
-
4 50x10
8
12x10
9
- 28x10
9
15x10
9
- 60x10
8
52x10
8
-
5 12x10
5
15x10
5
- 24x10
5
42x10
8
- 62x10
7
10x10
7
-
6 27x10
7
22x10
9
- 23x10
9
54x10
6
- 11x10
7
87x10
6
-
7 49x10
6
12x10
5
- 28x10
7
13x10
6
- 10x10
7
90x10
6
-
8 28x10
8
13x10
10
- 66x10
6
13x10
7
- 19x10
11
17x10
7
-
9 67x10
10
65x10
10
23x10
5
14x10
9
14x10
10
80x10
2
50x10
11
13x10
13
12x10
2

10 10x10
13
10x10
12
99x10
9
21x10
7
14x10
8
24x10
7
15x10
11
10x10
8
61x10
4

11 66x10
12
14x10
14
44x10
13
42x10
5
25x10
8
38x10
6
11x10
9
10x10
10
11x10
4

12 11x10
13
10x10
13
58x10
11
38x10
7
29x10
7
31x10
7
77x10
8
21x10
8
12x10
4

13 24x10
10
30x10
10
16x10
9
30x10
9
23x10
9
18x10
8
10x10
10
23x10
7
54x10
6

14 18x10
11
29x10
11
28x10
10
28x10
6
12x10
8
15x10
9
26x10
9
15x10
8
97x10
4

15 24x10
11
24x10
11
26x10
10
26x10
9
20x10
8
14x10
8
10x10
9
96x10
8
70x10
2

16 24x10
14
15x10
10
22x10
9
79x10
9
19x10
11
12x10
8
16x10
11
19x10
10
20x10
6

17 28x10
12
28x10
10
49x10
12
20x10
6
10x10
9
13x10
7
51x10
12
34x10
9
83x10
5

18 50x10
10
70x10
11
19x10
11
27x10
10
20x10
10
27x10
8
70x10
12
26x10
10
18x10
8

19 28x10
12
54x10
11
41x10
11
67x10
11
50x10
11
41x10
11
69x10
12
66x10
10
98x10
5

20 13x10
12
96x10
11
62x10
9
10x10
8
20x10
10
19x10
7
23x10
13
22x10
11
56x10
7

21 43x10
12
23x10
12
22x10
11
14x10
10
11x10
9
25x10
5
17x10
11
12x10
9
90x10
5

22 18x10
12
14x10
10
25x10
11
21x10
9
32x10
12
47x10
7
96x10
13
16x10
11
61x10
5

23 11x10
11
25x10
10
10x10
10
65x10
10
35x10
9
22x10
8
50x10
9
32x10
9
50x10
5

24 64x10
11
14x10
10
83x10
10
15x10
10
20x10
10
30x10
8
12x10
12
76x10
10
75x10
5

116
2. Logaritmo de los Recuentos Microbianos
hetertrofos COLIFORMES MOHOS Y LEVADURAS DIAS DE
MUESTREO
Ecualizacin Acidificacin Salida Ecualizacin Acidificacin Salida Ecualizacin Acidificacin Salida
1 6,61 5,34 - 2,54 4,36 - 3,95 4,72 -
2 6,20 7,30 - 7,53 6,84 - 7,59 7,23 -
3 6,99 9,99 - 8,56 7,96 - 9,96 9,63 -
4 9,70 10,08 - 10,45 10,18 - 9,78 9,72 -
5 6,08 6,18 - 6,38 9,623 - 8,79 8,00 -
6 8,43 10,34 - 10,36 7,73 - 8,04 7,94 -
7 7,69 6,08 - 8,45 8,11 - 8,00 7,95 -
8 9,45 11,11 - 7,82 7,11 - 12,28 8,23 -
9 11,83 11,81 6,36 10,13 11,15 3,90 12,70 14,11 3,08
10 14,02 13,01 11,00 8,32 9,15 8,38 12,18 9,00 5,79
11 13,82 15,16 14,64 8,62 9,4 7,58 10,04 11,00 5,04
12 14,04 14,01 12,76 8,58 8,46 8,49 9,89 9,32 5,08
13 11,38 11,48 10,20 10,48 10,36 9,26 11,00 8,36 7,73
14 12,26 12,46 11,45 7,45 9,08 10,18 10,41 9,18 5,99
15 12,38 12,38 11,41 10,43 9,30 9,15 10,00 9,98 3,85
16 15,38 11,18 10,34 10,90 12,28 9,08 12,20 11,28 7,30
17 13,45 11,45 13,69 7,30 10 8,11 13,71 10,53 6,92
18 11,70 12,85 12,28 11,43 11,30 9,43 13,85 11,41 9,26
19 13,45 12,73 12,61 12,83 12,70 12,61 13,84 11,82 6,99
20 13,11 12,98 10,79 9 11,30 8,28 14,41 12,34 8,75
21 13,63 13,36 12,34 11,15 10,04 6,40 12,23 10,08 6,95
22 13,26 11,15 12,40 10,32 13,51 8,67 14,98 12,20 6,79
23 12,04 11,40 11,00 11,81 10,54 9,34 10,70 10,51 6,70
24 12,81 11,15 11,92 11,18 11,30 9,48 13,08 11,88 6,88

117
3. Datos Obtenidos de los Registros Fisico-quimicos
DIAS DE
MUESTREO
ECUALIZACIN ACIDIFICACIN SALIDA
DQO
mg O
2
/L
pH

AGV

Alkalinidad
CaCO
3
/L
DQO
mg O
2
/L
pH

AGV

Alkalinidad
CaCO
3
/L
DQO
mg O
2
/L
pH

1 2131 8.49 2119 5.99 375 343 617 7.2
2 2247 7.59 2286 5.93 199 439 692 7.14
3 2092 8.95 1976 6.07 360 304 731 7.05
4 2441 9.21 2170 5.66 393 261 930 7.06
5 2441 9.93 2938 6.34 676 918 976 7.14
6 2275 9.74 1619 6.24 333 478 938 7.26
7 1246 7.01 1324 6.93 540 597 615 7.02
8 1869 6.62 2102 5.51 450 518 631 7.03
9 2726 8.96 2102 5.53 510 479 945 7.8
10 2102 6.72 1815 5.84 445 354 681 6.99
11 2141 6.77 2071 5.97 481 497 729 7.07
12 1545 6.95 1625 6.02 445 534 689 7.02
13 2204 6.17 135 622 1572 5.86 403 372 221 6.8
14 2104 6.57 154 381 1742 5.78 408 367 225 6.85
15 2359 7.72 104 346 1889 6.01 515 695 412 6.9
16 2779 7.25 56 895 1492 6.45 630 756 215 6.9
17 5368 7.4 232 441 2484 5.81 378 655 402 6.78
18 1886 6.98 153 471 1944 5.66 447 680 342 6.88
19 1212 6.45 102 639 1394 6.21 397 584 376 6.93
20 2642 7.39 103 364 2109 5.81 273 429 339 6.77
21 2329 6.6 210 365 2660 6.17 471 739 339 6.74
22 2219 8.04 168 910 1504 5.64 684 747 269 6.88
23 2560 9.47 86 697 1559 6.27 308 623 484 6.74
24 1729 7.23 115 339 1769 5.77 321 483 235 6.77
X 2276.96 7.68 134.83 539. 17 1927.71 5.98 435.08 535.50 543.04 6.99
DS 774.07 1.14 51.28 209.67 403.72 0.32 118.70 166.97 253.68 0.23

118

BACTERIAS

PRUEBAS BIOQUIMICAS Microorganismo
Identificado

%
(*)
ONPG ADH LDC ODC CIT H2S URE TDA IND VP GEL GLU MAN INO SOR RHA SAC MEL AMY ARA OX NO2
Burkolderia
cepacia
94.0 + - - + + - - + - + + - + + + - + + + + + -
Enterobacter
aerogenes
86.8 + - + + - - - - - + - + + + + + + + + + - +
Enterobacter
sakazakii
91.1 + + - + + - - - + + - + + - + + + + + + - +
Enterobacter
cancerogenus
99.9 + + - - - - - - - + - + + - - + - - + + - -
Enterobacter
cloacae
99.0 + + + + + - - - - + - + + - + + + + + + - +
Escherichia coli 96.1 + - + - - - - - + - - + + - + - - + + + - -
Escherichia
vulneris
95.7 + + - - - - - - - + - + + - - + - + + + - -
Klebsiella
pneumonie
97.6 + - + - + - + - - + - + + + + + + + + + - +
Klebsiella
terrgena
92.4 + - + - - - - - - - - + + + + + + + + + - +
Pantoea sp. 85.5 - - - - - - - - - - - - - - - + + + + + - -
Pseudomonas sp 75.0 - - - + + - - + - - - + + - - - + - - - - +
Serratia ficaria 98.4 + - - - + - - - - + + + + - + + + + + + - +
Pseudomonas
fluorecens
96.0 - + - - + - - - - - - + + - - - - + - + + -
Serratia
liquefaciens
74.8 + + - + + - - + - - + + + + + - + - + + - +
Stenotrophomonas
maltophilia
88.3 + - - + + - - + - - + + - - - - - - - - - -
ANEXO 5.
Perfil Bioqumico de Microorganismos Identificados
(*) PORCENTAJE DE CONFIANZA DE LA PRUEBA

119

PRUEBAS BIOQUIMICAS Microorganismo
Identificado

%
(*)
o GLU GLY 2KG ARA XYL ADO XLT GAL INO SOR MDG NAG CEL LAC MAL SAC TRE MLZ RAF
Candida
glabrata
99.3 - + - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Candida
guillermondi
87.8 - + + - + + - + + + + + + + - + + + + +
Candida krusei 99.5 - + - + + + + - + - + - + + + + + - - +
Candida
lusitaniae
88.5 - + + + - + + + + - + - - - - + + + + -
Cryprtococcus
laurenti
99.5 - + - + + + + - + - + - + + + + + - - +
Cryptococcus
neoformans
99.8 - + + + + - - + + + + + - - - + + + - +
Cryptococcus
terreus
99.6 - + + + - - - + + + + - + - - - - + + +
Rhodotorula
glutinis
99.9 - + - - + + - - + - - - - - - + + + + +
Saccharomyces
cer evisiae
93.5 - + - - - - - - + - - - - + - + + - - +
(*) PORCENTAJE DE CONFIANZA DE LA PRUEBA
LEVADURAS

Tesistratamientodeaguasresiduales 120526125722 Phpapp02

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