Tcnica de laboratorio (parafina)

1. Obtencin de la muestra
2. Fijacin (formol)
3. Deshidratacin (alcohol)
4. Aclaramiento (xileno)
5. Inclusin (parafina)
6. Formacin del bloque
7. Se corta en un microtomo (5 a 8 micras) y se pone en el portaobjetos.
8. Se rehidrata (agua)
9. Se tie


Colorantes:

Eosina: tie bases de color rosa (citoplasma).
Hematoxilina: tie cidos de color azul (ncleo).


Histoqumica: aplicacin de reacciones qumicas en la tcnica histolgica, con el fin de localizar
ciertas sustancias o su actividad y molculas especficas.


Inmunohistoqumica: reaccin de un antgeno-anticuerpo en un tejido (inmuno-oro,
inmunofluorescencia, inmunoperoxidasa).
o Mtodo directo: se marca el anticuerpo con una molcula fluorescente.
o Mtodo indirecto: aplicacin de dos anticuerpos consecutivos: el 1ro busca el antgeno y el 2do
reconoce al 1er anticuerpo.
Anticuerpo monoclonal: de una misma clula plasmtica.
Anticuerpo policlonal: de varias clulas plasmticas.
Fluorsforo: molcula capaz de ser excitada por la luz ultravioleta.


Tcnica de PaS: reaccin del cido perydico induce la formacin de grupos aldehdo en los
azcares, formando un color rosado.


Hibridacin in situ: visualiza una secuencia de ADN (ligasa) o ARN (transcriptasa) justo en el
sitio fsico en el que se encuentra, permitiendo analizar su distribucin en clulas y tejidos. Se basa
en la capacidad de los cidos nuclicos de buscar su cadena homloga.


Criofractura:
1. Se congela la muestra con nitrgeno lquido.
2. Se corta.
3. Se eliminan los restos con detergente.
4. Se le pone una placa metlica.
5. Observa en el microscopio electrnico de transmisin.


Autorradriografa: la radiactividad es capaz de impresionar una placa fotogrfica, se basa en los
radio istopos.
1. Se coloca la muestra sobre una placa protegida de la luz en un cassette.
2. Se espera el tiempo suficiente para que la radiactividad impresione la placa.
3. Se revela la placa por procesos normales.
4. Se obtiene una imagen impresionada.
MICROSCOPIO

Consta de dos partes:
o Mecnica: piezas que no intervienen en la formacin de la imagen.
o ptica: ampliacin de la imagen y direccin de la luz.
Apertura numrica: magnitud de los ngulos de refraccin de la luz, es la mitad del ngulo de
refraccin.
Poder de resolucin: aumentos totales de un microscopio.
Lmite de resolucin: distancia mnima entre 2 puntos para poder verse por separado.
Objetivo: sistema de focal pequea que forma una imagen real e invertida del objeto.
Ocular: forma una imagen virtual aumentada.
Condensador: orienta y concentra los rayos de luz.
Microscopio simple: una sola lente biconvexa, aumenta la imagen hasta 5 veces.
Microscopio compuesto: 2 sistemas de lentes.
Microscopio electrnico de transmisin: dirige un haz de electrones para aumentar la imagen, la
muestra se corta en finas capas y colocarse en una placa.
Microscopio electrnico de barrido: recorre la muestra con un haz muy concentrado de electrones
formando una imagen tridimensional.


CITOLOGA

Robert Hooke: utiliz un microscopio compuesto para describir celdillas de corcho, las llam
clulas.
Rudolf Virchow: padre de la histologa, present la teora celular Omnis cellula e cellula (toda
clula proviene de otra preexistente),
Clula: unidad ms pequea con vida. Estructuras altamente organizadas, en su interior
constituidas cada una con organelos y una funcin especfica.
Organelo: estructura metablica activa limitada por una membrana.


MEMBRANA CELULAR



Componentes:
o Estructurales: fosfolpidos, protenas y, en menor cantidad, carbohidratos (glucocliz).
o Funcionales: receptores, mensajeros, transportadores.
Se compone por protenas integrales y de transporte. Tiene fluidez, es decir, un estado de
movimiento que se adapta a las cabezas polares. Es una capa fosfolipdica con una capa intermedia
de protenas (estructurales, de transporte, receptoras).
Funciones: en organismos multicelulares, el intercambio de informacin por mensajeros qumicos,
comienza en la vida embrionaria y constituye, durante toda la vida, el principal medio de
comunicacin entre las clulas.
Glucocliz: cadena de carbohidratos que se unen con una protena, lpidos o ambos, sirve para
comunicacin intercelular.
Proteoplasma: sustancia viva de la clula.
o Citoplasma: donde estn los organelos.
Citosol: sustancia acuosa.
Citoesqueleto: da sostn.
o Carioplasma: forma el ncleo.
RIBOSOMA



Se ensamblan en el nuclelolo, estn formados por 2 subunidades, una grande de alto valor de
sedimentacin (60 s) y otra pequea de bajo valor de sedimentacin (40 s). Hay 2 tipos:
o Anclados al RER: para secrecin de protenas.
o Libres o polirribosomas: produccin de protenas de consumo propio.


APARATO DE GOLGI



Cara CIS: es convexa, es la cercana al RER y es la entrada de protenas.
Parte medial: es intermedia, los azcares complejos se unen a las protenas, stas se modifican por
hiroxilacin, fosforilacin y glicosilacin.
Cara TRANS: es cncava, es el lugar donde se envuelven los productos en vesculas de clatrina
para su secrecin.
o Secrecin constitutiva: secreta de manera automtica.
o Secrecin activa: espera una seal para la secrecin.


VESCULAS



Son cuerpos pequeos rodeados de membrana que provienen de diferentes compartimentos. La
CLATRINA es una protena de sealizacin que dirige las vesculas.
Peroxisoma: vesculas de membrana implicadas en el metabolismo de los cidos grasos de cadena
larga.
Proteosoma: complejos protenicos que tienen como cargo la protelisis de protenas mal
formadas y marcadas con UBIQUITINA.
Lisosoma: (va regulada por secrecin de CLATRINA) parte del sistema vesicular cido para la
hidrlisis, implica la degradacin de protenas. Hay lisosomas primarios (no funcionales) y
secundarios (fusin de un no funcional con fagosoma). Contienen hidrolasas como la CATEPSINA
B y la glucoronidasa.
Autofagia: reciclamiento de organelos viejos mediante autofagolisosomas.
Endocitosis: proceso en el cual la clula degrada macromolculas.
o Fagocitosis: degrada molculas grandes.
o Pinocitosis: degrada molculas pequeas.


RETCULO ENDOPLSMICO LISO



Formado por cisternas de membrana celular que contiene ancladas diversas protenas (enzimas).
Su funcin es la sntesis de triglicridos, fosfolpidos y esteroides y la destoxificacin de
numerosas sustancias.


RETCULO ENDOPLSMICO RUGOSO



Formado por cisternas y contiene anclados abundantes ribosomas. Es abundantes en clulas con
alta produccin de protenas que son secretadas y que se ubican en la luz de las cisternas.
Microsomas: trozos pequeos de RER limitados por una membrana.


CITOESQUELETO



Son filamentos protenicos que dan forma a la clula.
Filamentos delgados (de actina): estn compuestos por actina que junto con la miosina le dan
movimiento a la clula.
Filamentos intermedios: establecen la estructura tridimensional de la clula.
Microtbulos: estructuras largas y rectas que actan como vas intracelulares, con la protena
TUBULINA. El centrosoma es el centro del microtbulo. Proporciona rigidez, conserva la forma,
regula el movimiento intracelular y de cilios.


NCLEO



Es el organelo ms grande, es el sitio en donde se encuentra la informacin gentica.
Cromatina: hebras de ADN en forma condensada o inactiva (heterocormatina) y no condensada,
dispersa o activa (eucromatina).
Nucleosoma: protena histona envuelta por filamentos de ADN.


NUCLEOLO



Es el sitio para el ensamble de las subunidades ribosmicas.


MITOCONDRIA



Son organelos membranosos que se autoduplican, poseen ADN propio y llevan a cabo
fosforilacin oxidativa y sntesis de lpidos. Hay hiptesis de que son clulas procariotas en
simbiosis con las eucariotas, ya que tienen propio ADN y sintetiza protenas. Tienen forma alargada
con 2 membranas, una interna y otra externa, se definen dos espacios: intermembranoso y de la
matriz.
Membrana externa: contiene PORINAS (protenas de transporte) que la hacen permeable.
Espacio intermembranoso: contiene
Sustratos metablicos que difunden a travs de la membrana externa.
ATP generado de la mitocondria.
Iones que han sido expulsados de la matriz durante la fosforilacin oxidativa.
Membrana interna: es impermeable porque contiene CARDIOLIPINA, contiene pliegues que
forman crestas para la sntesis de ATP.
o Crestas: contienen las enzimas de la cadena respiratoria y ATPsintetasa.
Matriz: contiene el ADNmitocondrial.






CICLO CELULAR



Serie de eventos celulares que preparan la clula para dividirse. La divisin celular comprende la
divisin del ncleo (MITOSIS, que dura de 30 min a 7 hrs) y la divisin del citoplasma
(CITOCINESIS).
Las protenas que controlan la divisin celular son:
o CICLINAS
o QUINASAS: dependen de las ciclinas.
o Protena p53 o supresora de tumores: frena la divisin a nivel de G1, hace que la clula entre en
apoptosis si tiene alteraciones en el ADN.
MITOSIS: reproduccin asexual, en donde la clula madre se divide y forma a dos clulas hijas
con igual nmero de cromosomas o diploides.
o Interfase: la clula aumenta de tamao y duplica su ADN tomando nutrimentos. Subfases:
G1: la clula adquiere y sintetiza el material necesario para dividirse. Se lleva a cabo la
diferenciacin celular.
G0: se suspende el crecimiento de la clula (ej: neurona).
S: sntesis de ADN, replica su ADN.
G2: segunda fase de crecimiento en donde termina de crecer.
o Profase: los cromosomas se duplican y se condensan, se forman los mictorbulos de huso.
o Metafase: alineacin de los cormosomas en el plano ecuatorial, el cinetocoro regula la longitud de
los microtbulos de huso.
o Anafase: las cromtidas hermanas se separan hacia los polos de la clula, sta toma una forma
ovoide.
o Telofase: se forma la envoltura nuclear y se lleva a cabo la citocinesis.
Citocinesis: divisin del citoplasma, proporciona a las clulas hijas nutrimentos para que vivan.
Diferenciacin: proceso en el cual las clulas asumen funciones especializadas.
MEIOSIS: divisin celular que resulta con 4 clulas haploides.
o Interfase
o MEIOSIS I: produce 2 clulas con 4n cada una.
o Profase I:
Leptoneno: los cromosomas se condensan.
Zigoteno: los cromosomas homlogos se aparean.
Paquiteno: las cromtidas homlogas intercambian su ADN (Crossing over), se forman los
quiasmas (lugares de recombinacin).
Diploteno: los cromosomas siguen condensndose y los quiasmas se hacen ms evidentes.
Diacinesis: la envoltura nuclear se desintegra y aparecen los microtbulos de huso.
o Metafase I: los cromosomas se alinean alrededor de la clula.
o Anafase I: los homlogos se separan hacia los polos opuestos, el cromosoma materno se va a un
polo y el paterno a otro.
o Telofase I: se lleva a cabo la citocinesis, reaparece la envoltura nuclear y puede o no suceder la
intercinesis (como una interfase breve).
o MEIOSIS II: proceso igual a la mitosis, produce 4 clulas con 2n cada una.
Profase II
Metafase II
Anafase II
Telofase II