MTODOS DE DIAGNSTICO

INMUNOLGICO
Adalucy Alvarez Aldana. Bacteriloga, MSc, PhD(c)
MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
INTRODUCCIN: El reconocimiento del Ag por el Ac implica
una unin reversible no covalente.
Interacciones no covalentes:
1.- Puentes de hidrgeno
2.- Interacciones electrostticas
3.-Interacciones hidrofbicas
4.- Fuerzas de van der Waals
o intermoleculares













AFINIDAD DE UN Ac:
-Las fuerzas atractivas y repulsivas entre un sitio de unin de un
Ac y el correspondiente eptope.
-Se representa mediante la K de equilibrio segn la ley de accin
de masas concentracin del Ag necesaria para ocupar la
mitad de las molculas del Ac presentes en una solucin del Ac
Entre < es la Kd > es la afinidad 10
-7
M y 10
-11
M (En
condiciones fisiolgicas).
-En el suero hay mezcla de Acs con distintas afinidades por el Ag

REACCIONES Ag-Ac



MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
Avidez: Es la fuerza global de la interaccin entre el Ac y el
Ag, es por tanto la sumatoria de todas las interacciones con
todos los eptopes del Ag.
En los Acs existe la misma afinidad para cada eptope pero
la avidez es la sumatoria de todas las interacciones del Ac
con todos los eptopos del Ag polivalente IgM > IgG.



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Avidez: Es la fuerza global de la interaccin entre el Ac y el
Ag IgM > IgG.

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CONCEPTO DE INMUNODIAGNSTICO:
Conjunto de tcnicas, basadas en la reaccin Ag-Ac, que
se aplican en el estudio del proceso infeccioso.
Deteccin de antgenos o anticuerpos en muestras
biolgicas (principalmente suero) para saber si un
paciente est infectado (infeccin aguda), ha respondido
inmunolgicamente a una infeccin (infeccin pasada) o
a una vacuna.
Con el termino inmunodiagnstico nos referirnos a todos
los mtodos de diagnstico de las enfermedades
infecciosas basados en la reaccin antgeno-anticuerpo.

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INTRODUCCIN
El laboratorio de Microbiologa tiene un importante papel
en el diagnstico de las enfermedades infecciosas.

El diagnstico microbiolgico de una enfermedad infecciosa
puede ser:
1) Directo cuando se busca el microorganismo o alguno de
sus componentes (antgenos/cidos nucleicos).

2) Indirecto cuando se detecta la respuesta del sistema
inmunitario de la persona que padece la infeccin, al
agente biolgico que la produce (anticuerpos).

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TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
A. REACCIONES CLSICAS: Se caracterizan por que cuando se
encuentran el antgeno y su anticuerpo especfico se produce la
formacin de complejos Ag.-Ac, que no son visibles y se
evidencian por una propiedad que manifiesta el complejo:
Aglutinacin
Precipitacin
Fijacin del complemento.
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TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
A. REACCIONES CLSICAS:
Produccin de complejos Ag.-Ac insolubles, PRECIPITACIN.

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Inmunoprecipitacin:
El Ag y Ac solubles interactan y forman un enrejado en la zona
de equivalencia y producen un precipitado visible. El Ac debe ser
bivalente y el Ag debe ser bivalente o multivalente o reaccionar
con Acs policlonales.

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Reacciones de precipitacin en gel: Inmunodifusin
El Ag y Ac se difunden uno o ambos hacia el otro en una matriz
de agar Forma una lnea visible de precipitacin.
Ejemplos: Inmunodifusin radial (Mancini) o la inmunodifusin
doble (Ouchterlony)

MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
Inmunoelectroforsis:
Es la combinacin de la electroforesis e inmunodifusin
doble.
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TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
A. REACCIONES CLSICAS:
Formacin de agregados que se ven a simple vista, aglutinacin.

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Aglutinacin directa: Una clula se aglutina directamente al
reaccionar con el Ac. Ejemplo: Tipificacin del grupo
sanguneo ABO.

MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
Aglutinacin indirecta o pasiva: Ags solubles son acoplados
a partculas inertes y al reaccionar con el Ac se aglutinan
aglutinacin de ltex.













MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
A. REACCIONES CLSICAS:
Unin del complemento a los complejos Ag.-Ac Fijacin del
complemento.

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TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
B. TCNICAS DE INMUNODIAGNSTICO QUE
EMPLEAN REACTIVOS MARCADOS PARA EVIDENCIAR LA
REACCIN Ag-Ac.

Inmunoenzimticas
Inmunofluorescencia
Radioinmunoensayo

C. WESTERN BLOT

MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
B. TCNICAS DE INMUNODIAGNSTICO QUE
EMPLEAN REACTIVOS MARCADOS PARA EVIDENCIAR LA
REACCIN AG.-AC.
Inmunoenzimticas


MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
B. TCNICAS DE INMUNODIAGNSTICO QUE
EMPLEAN REACTIVOS MARCADOS PARA EVIDENCIAR LA
REACCIN AG.-AC.

Inmunofluorescencia


MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
B. TCNICAS DE INMUNODIAGNSTICO QUE
EMPLEAN REACTIVOS MARCADOS PARA EVIDENCIAR LA
REACCIN AG.-AC.

Radioinmunoensayo: Mtodo reemplazado por la
colorimetra de ELISA

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TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
B. WESTERN BLOT.
Identificacin de una protena especfica en una mezcla
compleja de protenas se separa por electroforesis
en gel de poliacrilamida SSD (SDS-PAGE)




MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
TIPOS DE REACCIN Ag-Ac
B. WESTERN BLOT.
Las bandas de protenas se
transfieren a una membrana
de nylon mediante
electroforesis y las bandas
individuales de protenas se
identifican con Ac
especficos unidos a
enzimas.




MTODOS DE DIAGNSTICO INMUNOLGICO
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
LIBROS:

Abbas, A K, et al. Celular and Molecular Immunology. 7 ElSevier Saunders, 545 pages.

Rojas, W et al. Inmunologa, 16. edicin, Ed. Corporacin para Investigaciones
Biolgicas, 2012,

Kindt TJ. et al. Inmunologa de Kuby. 6 Ed. Interamericana- McGraw Hill. Espaa.2008.
665 Pags.