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FAC.

CIENCIAS BIOLOGICAS
Curso 241.131
DEPTO. BIOLOGIA CELULAR /


Trabajo Prctico N 3

COMPOSICION QUIMICA CELULAR ASOCIADAS
I. Introduccin

Las molculas que forman de las clulas estn formados por los mismos tomos que se
encuentran en el medio inanimado. Sin embargo, en el origen y evolucin de las clulas se
seleccionaron algunos de estos tomos para construir las biomolculas. El 99% de la masa
celular est formada sobre la base de hidrgeno, carbono, oxgeno y nitrgeno. Son estos
tomos los que interaccionan a travs de enlaces covalentes, inicos, puentes de hidrgenos
y fuerzas de van der Waals para formar las diferencias molculas; unas de naturaleza
inorgnica (agua y sales minerales) y las otras, orgnicas (hidratos de carbono, lpidos,
protenas, cidos nucleicos, etc.). Sin tomar en cuenta la abundancia e importancia del agua,
existen un predominio absoluto de los compuestos del carbono, por lo tanto, son estas
molculas y sus propiedades qumicas las ms abundantes para el establecimiento de la
vida sobre la tierra.

En un nivel de organizacin superior de la materia viviente, la estructura celular se
establece gracias a la combinacin de molculas y macromolculas organizadas en un
orden muy preciso. Hoy en da, se conocen los principios generales de la organizacin
molecular de la mayor parte de estas estructuras celular, como un todo y de sus organelos
en particular de cromosomas, ribosomas, cloroplastos, etc..

Cada nivel superior siempre requiere de grandes aportes de energa para su formacin y
mantencin y adems. Cada peldao est regido, por las leyes de la fsica y de la qumica.
As, toda expresin de la materia viva tales como la irritabilidad, la conductividad, el
movimiento, la absorcin, la biosntesis, el crecimiento y la reproduccin estn regidos por
estas leyes.

Las sustancias que intervienen en las reacciones qumicas entran o salen de la clula bajo la
forma de una partcula de tamao definido, con algn grado de solubilidad sea en el agua o
en los lpidos, es decir, solubilizadas como molculas sin carga elctrica neta o a la forma
de iones. En el interior celular, existir una fuerza inica y un pH celular con pocas
variaciones, las necesarias para originar los desequilibrios necesarios para que la vida se
mantenga. Por otro lado, debido a su tamao y propiedades elctricas, las macromolculas
formarn coloides, que atraen y pierden agua segn las condiciones actuales.


II.Objetivos:

1) Establecer una discusin en torno a la composicin qumica de la clula y de los
tamaos moleculares.
2) Reconocer la presencia de algunos de los componentes moleculares presentes en
toda clula.
3) Comprobar la universalidad de las leyes dela fsica y qumica. Para esta
comprobacin se realizar algunos experimentos simples que permitan extrapolar
sus resultados y conclusiones a la materia biolgica.
4) Demostrar algunas de las funciones que cumplen las membranas biolgicas.


III. DESARROLLO DEL PRCTICO

1.- GRADOS DE DIVISION DE LA MATERIA VIVA.

Suspensiones groseras: es un sistema formado por partculas mayores de 100 nm.
Agite una probeta llena de agua y que adems contiene restos vegetales y minerales. En
forma inmediata, muchas de las partculas, visibles a simple vista, sedimentarn, otras lo
harn en forma ms lentas. Haga otras observaciones de la probeta que ha permanecido sin
movimiento despus de un tiempo (1 hora). Explique lo que est viendo y como proyectar
estos fenmenos fsicos a las clulas.

b) Cristaloides: es un sistema formado por partculas solubilizadas cuyo tamao es inferior
a 1 nm. Para comprobar la presencia de partculas de este tamao, coloque una gota de
dicromato de potasio en un extremo del portaobjeto, en el otro extremo otra gota de
permanganato de potasio. Cbralas con un portaobjeto y observe estas soluciones
verdaderas al MOC. Luego, cuidadosamente, a cierta distancia, sobre la llama de un
mechero, evapore total o parcialmente al agua. Reinstale su portaobjeto y observe al MOC,
los cambios ocurridos.

c) Coloides: es un sistema formado por partculas cuyos tamaos varan entre 1 100 nm.
Para comprobar su presencia y algunas de sus caractersticas, coloque 1 gramo de gelatina
en polvo en un tubo de ensayo, agregue unos 2 ml de agua y caliente agitando
cuidadosamente sobre la llama de un mechero, hasta solubilizar completamente la gelatina.
Comente con sus compaeros acerca de la composicin de esta gelatina (usada como
postre). Luego, enfre el tubo, directamente bajo un chorro de agua de la llave. Qu
ocurri?


2.- TRANSPORTE DE SOLUTOS A TRAVES DE LA MEMBRANA PLASMATICA

a) Difusin libre: en un tubo de ensayo, lleno de agua, deje caer algunos cristales de
permanganato de potasio. Sin agitar, instlele en la gradilla existente un su mesn
de trabajo (situacin inicial). Al finalizar el prctico, vuelva a observar (situacin
final). Comente con sus compaeros y extrapole sus conclusiones a la clula.
b) Tonicidad: sobre un portaobjeto coloque un trozo de hoja de Elodea, una planta
acutica cuyo nombre cientfico es Egeria densa; agregue una gota de agua y
suavemente instale un cubreobjeto sobre la hoja. Observe el MOC con diferentes
aumentos, ponga mayor atencin e la pared celular y los cloroplastos (situacin
inicial). Levante el cubreobjeto, seque un poco y agregue unas gotas de solucin
concentrada de cloruro de sodio, vuelva a instalar al cubreobjeto y en forma rpida
observe de nuevo al MOC. Cmo se explica las dramticos cambios que han
ocurrido en la clula?, Podra volver a la situacin citolgica inicial?. Explique.

3.- RECONOCIMIENTO DE SUSTANCIAS QUIMICAS DE LA CELULA

a) Almidn: sobre una tajada de para agregue una gota de solucin de Lugol (Yodo
5% +yoduro de potasio 10%). Observe la coloracin que toma el tejido. Tome nota.
Solicite un portaobjeto y 2 cubreobjetos. Coloque en cada extremo del portaobjetos
una gota de macerado de papas. A una de las gotas agregue una gota de lugol.
Cubra ambas gotas con un cubreobjeto y observe al MOC. Explique.

b) Protenas: para demostrar la presencia de protenas en una solucin, se colocar en
un tubo de ensayo 2 ml de una solucin se albmina de huevo. Sobre esta solucin
se aade 1ml de sulfato de cobre disuelto en NaOH 0.1 N. Observe el cambio en la
coloracin. Explique lo ocurrido.

c) Lpidos: para demostrar la presencia de los lpidos Se ha hecho una preparacin
histolgica de un corte de hgado graso; corte que ha sido teido con el colorante
Sudn III. Observe al MOC y explique.

d) cidos nucleicos: Solicite una preparacin histolgica en la cual se ha procesado un
corte transversal de raz de cebolla, teido con los colorantes pironina y verde de
metilo. Observe con los 3 objetivos de su microscopio, pero sus observaciones
detalladas del citoplasma y ncleo celular debe hacerlas con el objetivo mayor
(40X). Dibuje y esplique lo observado.


TINCION CITOLOGICA ESPECIFICA DE ADN

Desde comienzos del siglo pasado (1916), se dispone de una tincin exclusiva para detectar
la presencia y an determinar de ADN celular. Esta es la conocida Tincin de Feulgen en
honor de su creador.

Para teir al ADN presente en la cromatina de una clula vegetal se procede de la siguiente
manera:
a) fijar el tejido (meristema apical de la raz) en Carnoy (metanol/cido actico, en
proporcin 3: 1) por ms de 6 hrs.,
b) Lavar las races en agua destilada,
c) Incubar en bao Mara a 60C por 10 min con HCl 1N,
d) lavar las races en agua destilada,
e) sumergir las races por 30 min. en el Reactivo de Schiff,
f) lavar las races en agua destilada,
g) sobre un portaobjeto separe la porcin de la raz que contiene a la zona meristemtica,
h) agregue 1 2 gotas de cido actico 20% y disgregue al tejido, finalmente
i) aplaste el tejido con u cubreobjeto y observe al MOC.