AISLAMIENTO DE LINFOCITOS Y MONOCITOS DE SANGRE

PERIFRICA.
1.- INTRODUCCIN
El primer paso de numerosos anlisis inmunolgicos es el aislamiento de la raccin
!mononuclear!" es decir" linocitos # monocitos" de sangre peri$rica. El m$todo de aislamiento ms
utili%ado se undamenta en las dierentes densidades &ue presentan cada uno de los tipos celulares
de la sangre '(igura 1).
*ara conseguir la separacin" la muestra de sangre se deposita so+re un l,&uido de densidad 1.-..
g/ml" denominado 0#mp1oprep o Isol#mp1" # se centriuga para acelerar la separacin. El
0#mp1oprep est compuesto por icoll # metri%oato sdico. El icoll aglutina los eritrocitos" de
manera &ue aumenta su 2elocidad de sedimentacin. El metri%oato sdico es el compuesto &ue da la
densidad adecuada.
3.- O45ETI6O7
8l inali%ar la prctica el alumno ser capa% de9
8islar la raccin linomonocitaria de una muestra de sangre anticoagulada.
:.- E;UI*8<IENTO
- Tu+os de poliestireno de =ml # gradilla.
- *ipetas # puntas
- Centr,uga
>.- RE8CTI6O7
- *47 p? ..3
- <edio de separacin de linocitos (icoll @ <etri%oato sdico 'eA. 0#mp1oprep )
- <uestras de sangre anticoagulada 'eA. tu+os anticoagulados con EDT8 descartes de
1emogramas )
*ROCEDI<IENTO
1) 7angre anticoagulada 'EDT8" citrato" 1eparina...) o sangre desi+rinada.
3) Diluir 1/3 con *47 o suero salino.
:) *ipetear cuidadosamente so+re medio 2olumen de 0#mp1oprep 'p.eA. Bml sangre diluida 9
:ml de 0#mp1oprep). E2itar &ue la sangre # el medio de separacin se me%clen.
>) Centriugar a C--g D 3- min a T.8 'apr. 3-EC) en un rotor oscilante. 7i la sangre 1a sido
eDtraida 1ace ms de 3 1oras" centriugar :- min.
=) Recoger la raccin mononuclear # diluir con *47 o suero salino.
B) Centriugar a 3=-g D 1- min a T.8.
.) Decantar o aspirar el so+renadante 'rico en pla&uetas) # repetir el paso B.
C) Resuspender el pellet celular en medio de culti2o o en *47.