PRÁCTICA Nº 5

TEMA: PRUEBA DE KIRBY- BAUER: SENSIBILIDAD Y RESISTENCIA

BACTERIANA

OBJETIVO GENERAL:
Determinar la sensibilidad de un agente microbiano frente a un antibiótico.

FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA

La formación del halo se debe a la difusión radial del antibiótico, el tamaño del halo se
debe a:

1.- La concentración de la droga

2.- Sensibilidad bacteriana

3.- Coeficiente de difusión de la droga en el agar

4.- Tiempo y Temperatura de incubación

5.- pH y composición del medio.

6.- Profundidad del medio en las placas. Esto está estandarizado: se emplean placas de 9
cm. de diámetro, y se agrega siempre el mismo volumen de medio de cultivo: 15 ml. por
placa. De esta manera las palcas poseen siempre la misma altura de agar

7.- Tamaño del inóculo. Debe estar estandarizado ya que si éste es muy pequeño dará
una sensibilidad mayor de la real y si el inóculo es muy denso pueden aparecer mutantes
resistentes.

PROCEDIMIENTO

1. Seleccionar las colonias

2. Preparar una suspensión del inóculo
3. Estandarizar la suspensión del inóculo
4. Inocular la placa
5. Colocar discos de antimicrobiano
6. Incubar la placa
7. Medir las zonas de inhibición
8. Interpretar los resultados

La elección de los antibióticos a probar depende del germen y del foco de infección. Se
incuba la placa por 18/24 horas a 37 ºC (respetar este parámetro, porque temperaturas
menores pueden disminuir la velocidad del crecimiento del germen y la difusión del
antibiótico dando halos irregulares difíciles de medir
1.- 2,3-

4.- 5.-

MATERIALES

 Medio de cultivo que contiene una bacteria aislada en estado puro

 Substrato o medio de Muller para la inoculación de la bacteria con espesor de 4
mm.
 Discos impregnados de antibióticos
 Pinza de punta fina estéril para descargar los discos
 Torunda estéril para la inoculación de la especie pura
 Regla

RESULTADOS E INTERPRETACIÓN

Los halos de inhibición de desarrollo y se interpretan de acuerdo a tablas

confeccionadas previamente.

 de 15-25 mm. de diámetro= sensible

 de 10-15 mm de diámetro= medianamente sensible
 menos de 10 mm de diámetro= resistente
 menos de 6 mm de diámetro= definitivamente resistente.

LIMITACIONES DEL MÉTODO

Es un método solo cualitativo, orientado al tratamiento. No es aplicable a gérmenes de

crecimiento lento ni a gérmenes anaerobios. Antibióticos como polimixina o
vancomicina no tienen buena difusión en agar.

GLOSARIO

AGENTES BACTERIOSTÁTICOS: Los agentes bacteriostáticos tales como

tetraciclina inhiben el crecimiento y multiplicación de las bacterias. A partir de la
exposición a un agente bacteriostático, las células en una población susceptible cesan su
división. Sin embargo, si el agente es retirado, las células vuelven a multiplicarse.
AGENTES BACTERICIDAS: Como las fluoroquinolonas, no solo inhiben el
crecimiento
de las células sino también desencadenan mecanismos dentro de la célula que conducen
a la muerte celular.
BETA- LACTAMASAS DE ESPECTRO EXTENDIDO O BLEEs; ESBLs
Las beta lactamasas de espectros extendidos son enzimas producidas por algunas E.
coli y Klebsiella spp (algunas veces otras Enterobacteriaceae), inactivan las penicilinas,
las cefalosporinas de espectro extendido y el Aztreonam
CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA (CIM) La concentración inhibitoria
mínima (CIM) de un agente antimicrobiano es la mínima concentración del agente
antimicrobiano que inhibe la multiplicación y producción de un crecimiento visible de
una cepa bacteriana dada en el sistema de prueba.
ESTÁNDAR DE Mc FARLAND: El Estándar 0,5 de McFarland corresponde a
aproximadamente 1,5 × 108 CFU/ml. Es usado cuando se ajustan suspensiones del
inóculo para pruebas de susceptibilidad.
E-Test (Prueba -E o Epsilométrical): Un tipo de prueba de susceptibilidad
antimicrobiana comercial en la que tiras de plástico impregnadas de concentraciones
gradientes de antimicrobianos son colocadas en la superficie de un agar que
previamente ha sido inoculado con la bacteria del paciente. Luego de incubar toda la
noche, la actividad antimicrobiana se puede observar como una elipse de inhibición de
crecimiento alrededor de la tira. La superficie de la tira E-test tiene una escala numérica
que permite ver el valor que el aislado obtuvo en el punto donde la elipse cruza con la
escala.
Resistente: Es un término terapéutico, resistencia significa que un microorganismo no
es inhibido por una concentración del agente antimicrobiano que puede alcanzar en un
fluido del cuerpo luego de una dosis estándar terapéutica.
Susceptible (sensible): Significa que un microorganismo es inhibido por una
concentración del agente antimicrobiano que puede alcanzar en un fluido corporal luego
de una dosis terapéutica

SINERGISMO ANTIBIÓTICO

Cuando se combinan antimicrobianos, el sinergismo puede lograrse por varios

mecanismos:

 Por bloqueo de una vía metabólica microbiana por 2 o más fármacos; tal es el
caso de la combinación trimetroprín-sulfametoxazol.
 Por incremento de la captación de un fármaco a través de la pared celular se
aumenta así el efecto bactericida global; algunos inhibidores de la síntesis de la
 pared celular (penicilinas, cefalosporinas ) pueden aumentar la penetración de
los aminoglucósidos y de esta manera producen sinergismo.
 Cuando a través de un segundo agente puede prevenirse la inactivación de un
antimicrobiano por las enzimas bacterianas, también puede lograrse un efecto
sinérgico; tal es el caso del ácido clavulánico y el sulbactam capaces de inhibir
la producción de betalactamasas

ANTAGONISMO ANTIBIÓTICO: Se da cuando al combinarse los fármacos, el uno

disminuya o anule la acción del otro.

MODOS DE ACCIÓN DE LOS ANTIMICROBIANOS

MECANISMOS DE RESISTENCIA ANTIMICROBIANA

Producción de Enzimas
 Las beta-lactamasas.
 Enzimas que modifican los aminoglucósidos: Las bacterias gram-negativas
pueden producir enzimas adenilantes, fosforilantes o acetilantes que modifican
un aminoglucósido para inactivarlo.
Impermeabilidad de la Membrana Bacteriana Externa
 Alteración de porinas
Alteración de los Blancos
 Las PBPs tanto en bacterias gram-positivas y gram-negativas pueden ser
alteradas mediante mutación.
 Los ribosomas. La metilación del ARN ribosómico confiere resistencia a los
macrólidos.
 ADN girasa y topoisomerasa Mutaciones en los genes de éstas enzimas
confieren resistencia a las quinolonas.
Bombas de efl ujo: Mediado por proteínas trans-membrana insertadas en la membrana
citoplásmica y, en el caso de los organismos gram-negativos involucra también
componentes en la membrana externa y periplasma. Estas proteínas forman canales que
exportan activamente a un agente antimicrobiano fuera de la célula tan rápido como
entra.
Alteración de Rutas Metabólicas: Las bacterias desarrollan una ruta metabólica
alterada que elude la reacción inhibida por el antimicrobiano
EVALUACIÓN (ESTUDIO DE UN CASO)

En un paciente se aisló por tercera ocasión Pseudomonas aeruginosa de una aspiración

traqueal. Los dos primeros aislamientos fueron susceptibles a gentamicina y
tobramicina; sin embargo, el tercer aislamiento fue resistente a ambos agentes. Como se
presenta a continuación, los resultados de otros cuatro antimicrobianos fueron los
mismos en esos tres días.

¿Por qué los resultados del 9/11 podrían ser diferentes de aquellos obtenidos en los dos
días previos?
A. El aislamiento adquirió resistencia.
B. El paciente adquirió una nueva cepa de P. aeruginosa.
C. Hubo cambios o problemas en el sistema de prueba.
D. a, b, y c

BIBLIOGRAFÍA:

o WIKIPEDIA, Método Kirby- Bauer, última modificación 3 de junio del 2009

http://es.wikipedia.org/wiki/M%C3%A9todo_Kirby-Bauer
o OPS, Sociedad Americana de Microbiología, Manual de pruebas de
susceptibilidad antimicrobiana
o http://www.paho.org/spanish/ad/ths/ev/PAGINA%20PRINCIPAL.pdf
o Cordiés L., Machado L., Combinaciones de antimicrobianos, ACTA MEDICA
1998;8(1):101-4 http://bvs.sld.cu/revistas/act/vol8_1_98/act14198.htm
o Salazar W., Guía de Prácticas de Laboratorio de Microbiología, 1989, Pág. 35-
36