Vous êtes sur la page 1sur 43

Dra. Ktia R. P.

de Arajo Sgrillo
katiasgrillo@uesc.br
So protenas sintetizadas nas clulas
vivas que catalizam ou aceleram uma
reao termodinamicamente possvel, de
modo que seja compatvel com o
processo bioqumico essencial para a
prpria clula.
As enzimas so altamente
especficas, interagindo com um
ou alguns substratos e catalizando
somente um tipo de reao
qumica.
Localizao intracelular de algumas vias
bioqumicas importantes
tempo
Q
u
a
n
t
i
d
a
d
e

d
e

p
r
o
d
u
t
o

f
o
r
m
a
d
o

(
B
)
Reao: A B
com
enzima
sem enzima
Em geral as enzimas aumentam de
1 milho at mais de 1 trilho de
vezes a velocidade da reao, em
relao a reao correspondente
sem a presena da enzima.
A enzima no consumida
no processo.
Uma mesma molcula de enzima pode agir repetidamente agir repetidamente
na converso de muitas molculas de A em B. No modifica
a constante de equilbrio de uma reao. Trabalha em
concentraes extremamente baixas.
Praticamente todas as reaes qumicas tm uma barreira de
energia separando os reagentes e produtos. Esta barreira
denominada de energia livre de ativao.
A T B
reagente estado de
transio
produto
Intermedirio de
alta energia livre
As molculas de enzimas contm um
bolso ou fendas especial denominado
Os stios ativos contm aminocidos cujas cadeias laterais
criam uma superfcie tridimensional complementar ao
substrato.
substrato enzima
stio ativo
complexo
enzima-substrato
+ = (ES)
Toda enzima possui um
SITIO ATIVO. O sitio ativo sitio ativo
da enzima e o substrato
apresentam estruturas
complementares e desse
modo ajustam-se como uma
chave-fechadura. Enquanto
eles esto unidos no
complexo enzima-substrato,
a reao cataltica ocorre.
Os produtos da reao
deixam a superfcie da
enzima, liberando-a para
que combine com uma
outra molcula.
Enzima desnaturada partes
do sitio ativo no esto mais
em proximidade.
B)
O stio ativo consiste em diferentes partes da cadeia protica
(a enzima). Estas partes so colocadas juntas atravs do
dobramento e da flexo da cadeia protica (estruturas
secundrias e tercirias), e assim o stio ativo ocupa uma rea
relativamente pequena.
A)
B)
A)
Representao esquemtica
de um sitio ativo em uma
enzima.
De fato uma molcula, para ser
aceita como substrato substrato, deve ter
a forma espacial adequada forma espacial adequada
para alojar-se no no centro ativo
da enzima e os grupos qumicos
capazes de estabelecer reaes
precisas com os radicais do
centro ativo.
Como cada enzima possui uma
organizao estrutural especfica, o seu
centro ativo permite a ligao apenas centro ativo permite a ligao apenas
do seu substrato do seu substrato, trazendo grande
especificidade para a catalise.
especificidade de reao especificidade de reao
catalisam certos tipos de
reaes. Por exemplo : a
esterases catalisam a hidrlise
de steres em geral, e as
carboidrases, a hidrlise de
carboidratos.
especificidade por grupos especificidade por grupos - -
catalisam somente certos grupos
especficos. Por exemplo : a
quimiotripsina catalisa a hidrlise
somente de protenas contendo
fenilalanina, triptofano ou tirisina.
ligao espec ligao espec fica fica rompe
ligaes apenas entre grupos
especficos. Por exemplo : a enzima
trombina rompera as ligaes entre
aminocidos arginina e glicina e no
afetara as ligaes entre os outros
aminocidos.
estereoespecificidade estereoespecificidade tais enzimas
podem detectar a diferena entre
ismeros pticos e selecionar apenas um
desses ismeros. Por exemplo : a
enzima arginase catalisa a hidrlise da L-
arginina, mas no tem qualquer efeito na
hidrlise da D-arginina.
especificidade absoluta especificidade absoluta
atuam unicamente sobre um nico
substrato. Por exemplo: succinato
desidrogenase que catalisa a
converso de c. succinico para c.
fumrico, produz apenas o ismero
trans e nunca o ismero cis.
Com grau de especificidade varivel, algumas enzimas apresentam :
Substrato + Enzima se transformam em um complexo ES que
dissocia-se em enzima e produto.
O nmero de molculas de substrato convertidas em produto por
molcula de enzima por segundo denominado nmero de nmero de tunover tunover. .
Milhares de reaes qumicas
enzimaticamente catalisadas nas
clulas so funcionalmente
organizadas em muitas seqncias
diferentes de reaes consecutivas,
chamadas
O ATP o intermedirio qumico
que une os processos celulares
liberadores de energia com aqueles
que a consomem. Na clula, seu
papel anlogo quele do dinheiro na
economia: ele produzido/ganho
nas reaes exergnicas e
gasto/consumido naquelas
endergnicas.
As enzimas so protenas e portanto esto
sujeitas a todas as reaes que as protenas
podem sofrer. Portanto as enzimas podem ser
coaguladas quando expostas as calor, lcool,
cidos fortes, reagentes alcalidicos
(agentes agentes desnaturantes desnaturantes).
As enzimas sofrem influncia de inmeros fatores,
tendo sua melhor atuao em condies ideais de
temperatura, pH, concentrao da
enzima e do substrato.
O,oh...
Muitas enzimas tem sido atualmente
preparadas na forma cristalina.
40 - 45C
Temperatura tima
para a maioria das
enzimas
A velocidade de todas as
reaes qumicas e afetada
pela temperatura: quanto
maior a temperatura, mais
rpida e a reao. Isto
tambm e verdadeiro nas
reaes envolvendo
enzimas. Contudo, se a
temperatura for
exageradamente elevada, a
enzima (protena) ser
desativada por
desnaturao e perdera sua
funo biolgica.
Efeito da temperatura sobre a atividade enzimtica
Efeito da temperatura sobre a atividade enzimtica Efeito da temperatura sobre a atividade enzimtica
30 C
60 C
50 C
A
t
i
v
i
d
a
d
e
e
n
z
i
m

t
i
c
a
40 C
tempo
Mistura de reao
deve ser controlada
por tampes
Cada enzima apresenta uma
faixa de pH na qual o seu
funcionamento melhor. Essa
chamada de faixa tima de faixa tima de
pH pH, para aquela enzima em
particular. Como os fluidos
corporais so tamponados, o
pH geralmente no varia
muito alm dos valores
timos.
Afeta o carter inico dos
grupos carboxlicos e aminos
Do mesmo modo que nas reaes
qumicas, a velocidade da reao velocidade da reao
aumentada com o aumento nas aumentada com o aumento nas
concentraes dos reagentes concentraes dos reagentes. Com
uma maior concentrao de substrato,
a velocidade de reao aumentar at
que a enzima disponvel torne enzima disponvel torne- -se se
saturada com o substrato saturada com o substrato. Alm
disso, com o aumento da quantidade
de enzima, a velocidade de reao
aumentar supondo um suprimento
ilimitado de substrato.
Algumas enzimas necessitam ser ativadas
para atuarem como catalisadores.
Exemplo: a papana papana, uma enzima proteoltica fica inerte
quando exposta ao oxignio; quando se adiciona um redutor
adequado para converter -S-S- em -SH, a papana se torna
completamente ativada (desde que seja protegida do O).
cofator
cofator
Coenzimas - molcula orgnica pequena, estvel
ao calor, que se dissocia facilmente da enzima.
Ativadores metlicos - grande nmero de enzimas
exigem ctions (K
+
, Mn
2+
, Mg
2+
, Ca
2+
ou Zn
2+
)
como ativadores
Grupos prostticos - cofator firmemente preso
protena enzimtica
ajudante
Um complexo enzima cofator enzima cofator catalicamente ativo
chamado de holoenzima holoenzima. A protena enzimaticamente
inativa inativa resultante da remoo do co-fator da holoenzima
chamado de apoenzima apoenzima, isto :
Apoenzima (inativa) + cofator Holoenzima Holoenzima (ativa)
As coenzimas so quimicamente
modificadas pelas reaes
enzimticas em que participam.
Portanto devem ser regeneradas.
As vitaminas so
coenzimas que no
podem ser
sintetizadas pelo
organismo e que
portanto devem estar
presentes na dieta.
Fatores de crescimento para
microrganismos
Substncias que curam
doenas causadas por
deficincias nutricionais
Por exemplo a nicotinamida, que uma
poro que compe o NAD
+
ou seu cido
carboxlico anlogo. O cido nicotnico,
alivia a doena, que pode ser fatal,
causada pela deficincia nutricional da
nicotinamida em seres humanos,
conhecida por pelagra (sintomas: diarria,
dermatite e demncia).
O termo niacina o nome oficial
para a vitamina representada pelo
cido nicotnico ou nicotinamida.
Funo
bioqumica:
Os nucleotdeos de
piridina so
coenzimas para
enzimas conhecidas
como desidrogenases
que catalizam reaes
de xido-reduo.
denominados
nicotinamida-
adenina
dinucleotdeo
(NAD
+
) ou
coenzima I e
fosfato de
nicotinamida-
adenina
dinucleotdeo
(NADP
+
) ou
coenzima II.
As formas coenzimticas da vitamina so os nucleotdeos de piridina
NAD
+
coenzima I NADP
+
coenzima II
enzimas substrato produto coenzima
Desidrogenase
alcolica
etanol acetaldedo
Desidrogenase
isoctroca
isocitrato
-cetoglutarato + CO
2
NADP+
Desidrogenase
lctica
lactato
piruvato
cofator
apoenzima
Mlica L-malato piruvato + CO
2
Desidrogenase de
glicose-6-fosfato
Glicose-6-fosfato c. 6-fosfoglicnico
NAD+
Desidrogenase
glutmica
c. L-glutmico
-cetoglutarato + NH
3
C
O
-
S CoA

+
:CH
2
H
+
Acetil-CoA como
um nuclefilo
C
O
-
S CoA

+
:CH
3
As frmulas do acetilCoA
tem uma tpica estrutura em
que um nuclefilo tal como
H
2
O, R-S:- ou o
-carbono do acetilCoA
pode atacar o local com
carga positiva.
Acetil-CoA metablito
central. Participa do
metabolismo de
lipdeos, carboidratos e
protenas.
Acetil-CoA como
um eletrfilo
Segundo a propriedade Segundo a propriedade
especfica da enzima especfica da enzima
1. xidorredutases -
enzimas que catalizam reaes
de oxi-reduo (desidrogenases,
oxidases, oxigenases).
2. Transferases -
enzimas que catalizam
reaes de transferncia de
grupos (transaminases,
quinases, transacetilases).
3. Hidrolases - enzimas
que catalizam reaes de
hidrlise de vrios compostos
(hidrolases do substrato -
hidrolase de ster do glicerol)
5. Isomerases -
enzimas que catalizam
diferentes tipos de
isomerao (racemases,
epimerases, cis-trans
isomerase, cetol
isomerases
intramoleculares,
mutases)
6. Ligases -
enzimas que catalizam
unindo duas molculas
conjugadamente com a
ruptura de uma ligao
pirofosfrica
4. Liases - enzimas que
catalizam reversivelmente a
remoo no hidroltica de
grupos (furase,
descarboxilase).
Enzima Enzima: uma biomolcula, protena, que catalisa uma
reao qumica especifica. Ela no no afeta o equilbrio da
reao catalisada; ela aumenta a velocidade da
reao atravs do fornecimento de uma via de reao
com menor energia de ativao.
Cofator Cofator: : on inorgnico ou uma coenzima necessria
para atividade de uma enzima.
Coenzima: Coenzima: cofator orgnico necessrio para a ao de
certas enzimas; freqentemente utiliza uma vitamina como
um dos componentes.
Grupo pro Grupo pros sttico ttico: : on metlico ou composto orgnico
(diferente de um aminocido), que se liga covalentemente a
uma protena e essencial para sua atividade.
Holoenzima: Holoenzima: a molcula cataliticamente ativa de uma
enzima, incluindo todas as subunidades necessrias,
grupos protticos e cofatores.
Dra. Ktia R. P. de Arajo Sgrillo
katiasgrillo@uesc.br
A concentrao de
enzimas intracelulares no
plasma e centenas de
vezes menor que no
interior das clulas, onde
elas so sintetizadas.
Em condies patolgicas,
quando as clulas so lesadas,
suas concentraes plasmticas concentraes plasmticas
tornam tornam- -se anormalmente elevadas se anormalmente elevadas,
revelando a instalao da
molstia. Ainda mais o tipo de tipo de
enzima cuja concentrao enzima cuja concentrao
plasmtica aumenta pode indicar o plasmtica aumenta pode indicar o
tecido ou rgo que sofreu a tecido ou rgo que sofreu a
injuria injuria. Por isso a dosagem de
enzimas no plasma e pratica
corrente para a elucidao e o
acompanhamento de muitos casos
patolgicos.
Enzimas cujas concentraes plasmticas so alteradas em
determinadas condies patolgicas
Enzimas cujas concentraes plasmticas so alteradas em
determinadas condies patolgicas
Enzimas Enzimas Molstias Molstias
Transaminases
Creatinina quinase, lactato
desidrogenase
Amilase, lipase
Fosfatase alcalina, -glutamil
transferase
Fosfatase cida
Creatinina quinase
Lactato desidrogenase
Amilase
Hepatite
Enfarte do miocrdio
Pancreatite
Processos obstrutivos
biliares
Neoplasia de prstata
Leso cerebral grave
Anemia hemoltica
Parotidite (caxumba)
Valores de referncia Marzzoco pag. 74
A regulao da velocidade de reao das enzimas essencial
para o organismo coordenar seus inmeros processos
metablicos.
Algumas enzimas com funes
reguladoras especializadas
respondem a efetores alostricos.
Enzima Reguladora: Enzima Reguladora: enzima que possui
uma funo reguladora graas a sua
capacidade de apresentar alteraes na capacidade de apresentar alteraes na
sua atividade cataltica por mecanismos sua atividade cataltica por mecanismos
alostrico alostrico ou por modificaes covalentes.
Enzimas alostricas Enzimas alostricas
so reguladas por
molculas denominadas
efetores efetores que se ligam de
modo no no- -covalente covalente a
um stio diferente do diferente do
stio ativo stio ativo. .
Efetores - so o molculas que
se ligam de modo no no- -
covalente covalente a um stio diferente diferente
do stio ativo. do stio ativo. Podem ser: o o
prprio prprio
substrato
substrato
( (homotrfico homotrfico) ) ou ou algum algum
produto
produto da da
via
via
metablica
metablica ( (heterotrfico heterotrfico) ). .
Efetores
Homotrficos: quando o
prprio substrato serve como
efetor. Normalmente funciona
como efetor positivo.
A presena de uma molcula
em um stio na enzima aumenta
as propriedades catalticas dos
outros stios de ligao ao
substrato. Stios exibem
cooperatividade.
Heterotrficos: efetor
diferente do substrato.
Exemplo: A enzima que
converte A em B possui um
stio alostrico, que se liga
ao produto final E. Se a [E]
aumenta a enzima inicial na
rota inibida. Inibio por
feedback serve para coordenar o
fluxo de molculas de substrato
nas reaes de acordo com a
necessidade da clula (rota
especfica).
A B C D E
Quanto Quanto + + substrato substrato
tem, tem, mas mas a a enzima enzima
funciona funciona
A velocidade da
maioria das enzimas
sensvel a alteraes
na concentrao de
substrato [S]
>>> [S] >>>>Vo
A velocidade de uma reao (v) catalisada por uma enzima
aumenta conforme a concentrao do substrato ate atingir uma
velocidade velocidade maxima maxima ( (Vmax Vmax) ). A obteno de um plat na
velocidade de reao em altas concentraes de substrato
reflete a saturao pelo substrato de todos os stios ativos de
ligao disponveis na enzima.
Descreve como a velocidade de
reao varia com a [S]
S + E ES P + E
K
2
K
1
K
-1
Onde:
S - substrato
E - enzima
ES - complexo transitrio enzima-substrato
P - produto
K
1
, K
-1
e K
2
-constantes de velocidade
V
o
= V
max
[S]
K
m
+ [S]
Onde: Onde:
V V
o o
- - velocidade inicial de reao velocidade inicial de reao
V V
max max
velocidade mxima velocidade mxima
K K
m m
- - constante de Michaelis constante de Michaelis- -Menten Menten = = (K (K
1 1
+ K + K
2 2
)/ )/ K K
1 1
[S] [S] - - concentrao do substrato concentrao do substrato
K
m
- caracterstico da enzima
e do substrato. No varia com a
concentrao da enzima.
K K
m m
pequeno pequeno - numericamente
pequeno (baixo) reflete alta
afinidade da enzima com o
substrato.
K K
m m
grande grande - numericamente
grande (alto) reflete baixa
afinidade da enzima com o
substrato.
Km = Km = (K (K
1 1
+ K + K
2 2
)/ )/ K K
1 1
Primeira ordem: Primeira ordem: quando a [S] muito menor que
o K
m
, a velocidade de reao proporcional
concentrao do substrato.
Efeito da concentrao do substrato Efeito da concentrao do substrato
na velocidade de reao para uma na velocidade de reao para uma
reao catalisada por enzimas reao catalisada por enzimas
Ordem zero: Ordem zero: quando a [S] muito maior
que o K
m
, a velocidade de reao constante
e igual a Vmax.
Nem sempre possvel determinar quando Vmax foi atingida. (ver
grfico anterior).
Quando se traa o grfico 1/Vo versus 1/ [S] , uma linha reta obtida. Esta
curva denominada de Lineweaver-Burke ou curva duplo-recproca, e pode
ser usada para calcular o Km e Vmax, bem como para determinar o
mecanismos de ao dos inibidores enzimticos.
Obs.: 1/Vmax onde a curva corta o eixo Y
e 1/Km onde a curva corta o eixo X.
Equao descrevendo a curva
de Lineweaver-Burke
1 = K
m
+ 1
V
o V
max
[S] V
max
Compostos que tem a capacidade de se
combinar com certas enzima e bloqueiam
a sua capacidade cataltica.
competitivos
No
competitivos
O tipo de inibio que no pode ser
anulado com o aumento da
concentrao do substrato.
Quando um composto compete com o
substrato ou com uma coenzima pelo
stio ativo na protena enzimtica
A. Efeito do inibidor competitivo na curva de
velocidade de reao (Vo) versus substrato.
B. Grfico de Lineweaver-Burke da inibio
competitiva de uma enzima
A. Efeito do inibidor no-competitivo na curva de velocidade de reao (Vo)
versus substrato.
B. Grfico de Lineweaver-Burke da inibio no-competitiva de uma enzima.
Enzima Enzima Alostric Alostrica a: uma enzima reguladora com
atividade cataltica modulada pela ligao no
covalente de um metablito especfico em um stio
diferente do stio ativo.
Enzima Enzima Homotr Homotr pica pica: : enzima alostrica que utiliza
seu substrato como modulador.
Enzima Enzima Heterotr Heterotr pica pica: enzima alostrica que
requer um outro modulador diferente do seu substrato.
Enzima Reguladora: Enzima Reguladora: enzima que possui uma funo
reguladora graas a sua capacidade de apresentar
alteraes na sua atividade cataltica por mecanismos
alostrico ou por modificaes covalentes.
Enzima Enzima repress repress vel vel: : ocorre normalmente nas bactrias,
enzima cuja sntese inibida quando o seu produto de
reao estiver facilmente disponvel.
Enzimas Constitutivas: Enzimas Constitutivas: enzimas necessrias clulas
durante todo o tempo e presentes em nvel quase constante;
por exemplo, muitas enzimas das vias metablicas centrais.
Algumas vezes so chamadas de enzimas da administrao
interna.