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4.

el mtodo de ionizacin ESI difiere de todos los dems [1] porque para un analito de peso
molecular m, en lugar de detectarse una nica seal a m/z con z = 1, se detecta una familia de
seales con diferentes m/z siendo z > 1. Como por ejemplo en la siguiente figura se muestra el
espectro ESI-MS de la mioglobina, analizado en modo positivo, no se detecta el in molecular
monocargado a m/z = 16951 Da sino que se detecta una familia de seales con valores de m/z
comprendidos entre 808,221 y 1413,631 Da. Estos son iones policargados por poliprotonacin
[M(H)n]n+ , con valores de z comprendidos entre 21 y 12 (m/21 = 808,221 y m/12 = 1413,631
Da).

O sea que en realidad se obtiene una serie del tipo [M+nH]n+ , [M+(n+1)H](n+1)+ ,
[M+(n+m)H](n+m)+ Como se ve, se genera una serie de seales debidos a quasi-iones
moleculares que difieren una de otra en un hidrgeno en su quasi-peso molecular m y en
unidad de carga en su valor de z.

Del vuelo de las protenas y de cmo lograrlo (Espectrometra de masa ESI) ROSA ERRA-
BALSELLS. CIHIDECAR-CONICET, Departamento de Qumica Orgnica, Facultad de Ciencias
Exactas y Naturales, UBA
[en lnea] consultar en: http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/v3n3/erra1.pdf .consultado
25/02/20014


En nuestro caso encontramos 5 seales que correspondes sencillamente a la molcula con
diferentes grados de protonacin, como tenemos un peso molecular de 5000 Daltons en
estado neutro el resultado de agregarle un protn para formar una especie cargada es 5001
Da y como sabemos la relacin masa carga es el resultado de dividir el peso de la especie entre
la carga, como la carga es igual a uno la seal se ver en 5001 y as sucesivamente.

= 2501 entonces corresponde a la especie con dos protones.

=1668 entonces corresponde a la protena con tres protones.
















Con base en el espectro responda (explique detalladamente su respuesta):
a) La seal en m/z 5001 corresponde a un in ms/menos protonado que el de la
seal en m/z 2501.
rta: con base en la relacin m/z mencionada anteriormente se puede concluir
que la especie menos cargada es la que aparece en 5001 m/z ya que solo
posee una carga por consiguiente la carga es mayor en 2501 m/z, si
ordenamos las especies que aparecen en el espectro de acuerdo a su carga
quedara: 1001>1251>1688>2501>5001 [m/z]







Protena
protonada
Protena bi-
protonada
Protena tri-
protonada
Protena
tetra-
protonada
Protena
penta-
protonada
b) Las seales que se observan en el espectro corresponden a: Iones cuasi-
moleculares protonados. Iones cuasi-moleculares deprotonados. Cationes
radicales protonados. Cationes radicales deprotonados.

Rta:
Las seales provenientes del espectro corresponden a iones cuasimolculares
protonados ya que su masa no vara significativamente con respecto a la de la
molcula entera, como hemos mencionado en la clase terica este mtodo es de
ionizacin suave lo cual no nos genera fragmentacin de la molcula,
descartndonos as la formacin de otro tipo de cationes radicales. Las
caractersticas de las protenas, estas al tener una estructura bastante grande
podemos depositar en ellas ms de un protn por consiguiente se generan otras
seales dependiendo la carga que este en esta.

c) Los mecanismos ms comunes para explicar la formacin de iones en ESI son
(ILSTRELOS)
Rta: Esta descripcin del principio por el que se produce el "electrospray" (ES)
y su comportamiento bajo la accin de un fuerta campo elctrico, incluye el
modelo que contempla la formacin de cargas residuales (CRM) el que ha
sobrevivido como la mejor descripcin fsica del enigmtico proceso de
ioniacin por "electrospray" (ESI) (Fig. 3). De acuerdo a este modelo, las
microgotas cargadas electrostticamente sometida a un fuerte campo elctrico,
sufren primero una contraccin de volumen y sus componentes pasan al
estado gaseoso, cuando el nmero de cargas electrostticas del mismo signo,
que se encuentran en la superficie, es mayor que las que puede estabilizar una
gota del mismo tamao teniendo en cuenta las repulsiones de Coulomb. En
ese momento, se produce la explosin de Raleigh que no es ms que la
eyeccin de molculas de la superficie de la gota que pasan al estado gaseoso
llevndose una o varias cargas, con el objeto de disminuir el nmero de cargas
y las fuerzas repulsivas en la superficie. Esta explosin origina a una
microgota cargada de tamao menor, la cual sigue teniendo en su superficie un
nmero alto de cargas electrotticas del mismo signo. sta bajo la accin del
fuerte campo elctrico vuelve a contraerse. Si en esta gota menor no se
cumple de nuevo la relacin nmero de cargas repulsivas a superficie total de
la gota adecuada, vuelve a producirse una explosin de Raleigh, con pasaje
al estado gaseoso de ms molculas mono o policargadas componentes de la
gota. Esta sucesin de contracciones-explosiones (evaporaciones
superficiales) disminucin del tamao de la gota contracciones- explosiones
(Evaporaciones superficiales) etc., va generando molculas gaseosas
ionizadas de los componentes de la gota orignal y por lo tanto, de la solucin
de partida (Fig. 3). Las fuerzas repulsivas que provocan estas explosiones no
inducen en general la ruptura de uniones qumicas. Por lo tanto, es posible
Generar, a partir de soluciones diludas, iones moleculares gaseosos intactos
de cualquier analito presente en la solucin. La particularidad de este mtodo
de volatilizacin / ionizacin no es solamente su suavidad (produccin del in
molecular intacto) sino adems la generacin de una familia de iones debido a
que el in molecular intacto puede alojar un nmero variable de cargas (ion
molecular policargado; m/z, para un dado m, z, familia de nmero de cargas; z=
1, 2, 3,..n).




An no existe una explicacin 100% aceptada de lo que le sucede a las gotas,
pero algunas de las teoras son:
1. Modelo de Residuo Cargado (charged residue model) de Dole. Las gotas
sufren repentinamente de explosiones coulombicas produciendo gotas ms
pequeas y ms pequeas que finalmente contendrn solo una molcula cargada
y quiz algunas molculas de solvente.
2. Modelo de Evaporacin Inica (ion evaporation model) de Iribarne y Thomson.
Ocurre la expulsin de molculas cargadas para reducir la densidad de carga de la
superficie.
3. La gota original sobrevive despus de haber expulsado algunas micro gotas
cargadas.
d) El mecanismo ms comn para explicar la formacin de iones en MALDI es
(ILSTRELO)
Rta: Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization (MALDI)
Esta tcnica de ionizacin, comnmente llamada MALDI, fue descrita por Karas y Hillenkamp
en 1988. En este mtodo de ionizacin los analitos son disueltos en una solucin de un
compuesto que absorbe UV, llamado matriz (matrix), y colocado dentro del espectrmetro de
masas. Debido a que los solventes se van secando, los compuestos de la matriz cristalizan y los
analitos quedan contenidos dentro de la matriz de cristales


Pulsos de lser de luz UV (3-5 ns, 337 nm, 107 W/cm2) son utilizados para vaporizar pequeas
cantidades de la matriz donde se incluyen los iones del analito y llevados a fase gaseosa en el
proceso. La ionizacin ocurre por protonacin en el ambiente cido producido por los
compuestos de la matriz y por la adicin de cido diluido en la muestra. La protonacin de
pptidos es particularmente eficiente en ambientes cidos, haciendo de MALDI, un mtodo
efectivo para producir pptidos protonados. Debido a que con la desorcin por lser la
produccin de iones es discreta y es pequeos paquetes, el MALDI esta comnmente
combinado con un analizador de tipo time-of-flight (TOF) dando un sistema de alta
sensibilidad.
Mientras que ESI es afectado por especies contaminantes, MALDI puede tolerar niveles
variables de algunos contaminantes. Cada pulso lser genera una pequea cantidad de plasma
que se expande en vaco, del cual se extraen los iones (positivos o negativos) del analito que
son acelerados por un potencial de 10-30 kV y controlados por medio de campos
electromagnticos. Debido a diferencias de velocidades que resultan de sus diferencias en
masas los iones llegan al detector en diferentes tiempos. Los tiempos de vuelo son del rango
de 10-100 ms. Una muestra de 1 ml de la solucin del analito o de la solucin analito/matriz es
aplicada en un contenedor y se seca, formando una capa delgada y cristalina. Los
contenedores son de acero pulido, plata o cromo plateado.
La funcin de la matriz es en primer lugar absorber la energa del lser. Por lo que las matrices
para MALDI estn formadas de compuestos aromticos (Figura). La ionizacin del analito
puede ser afectada por deprotonacin, al aceptar o ceder un electrn, por unin de cationes o
fotoionizacin, por lo que los iones generados por MALDI son de una amplia variedad de
molculas, ya que dependiendo de la combinacin entre el analito y la matriz ser el tipo de
iones predominantes en el espectro obtenido.

ESPECTROMETRA DE MASAS. UNIVERSIDAD AUTNOMA DE MEXICO. PLASCENCIA Villa
Germn. [En lnea] consultar en:
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/Spec_Masas.pdf