cromatografo de lquidos, puesto que es en ella donde tiene lugar la separacin. Construidas normalmente con acero inoxidable. Columna adecuada= Buenos resultados Partes de la columna Caractersticas de la columna que influye sobre la capacidad de separacin Dimetro interno Longitud Conexiones (reducciones) Relleno Tamao de partcula del relleno Dimetro interno La eleccin del dimetro interno de la columna se realiza en funcin de la cantidad de muestra a separar. Para las separaciones a escala analtica se suelen usar columnas de pequeos dimetros (1 a 6 mm) mientras que en los trabajos a escala preparativa se superan los 10 mm de dimetro interno Columnas de dimetro pequeo Dimetro: entre 2 y 0.5 mm Longitud: entre 25 y 100 cm . Para reducir el consumo de disolventes, por lo que facilitan acoplar esta cromatografa a otras tcnicas analticas (espectrometra de masas) Longitud de la columna Las columnas de cromatografa liquida en ningn caso pueden tener longitudes muy grandes. Para tamaos de partcula de 10 a 5 nm deben ser columnas de una longitud menos a 30 cm. Para tamaos de partcula de 3 nm la longitud no debe ser superior a 20 cm. Conexiones Unin entre el tubo de la columna con el capilar que conecta con el resto de los dispositivos del cromatografo. Estas uniones no deben presentar volumen muerto, deben permitir el paso de secciones anchas de tubo a capilares deben ser fcilmente montables y desmontables. Relleno Tamao de partcula Los tamaos de partcula habituales se encuentran comprendidos entre 10 y 3 nm de dimetro, aunque la gran mayora de los casos, los anlisis se estn realizando con rellenos de 10 o 5 nm. Columna mas utilizada en HPLC Las columnas mas utilizadas en cromatografa de lquidos son las de relleno; que consiste en un tubo de acero, relleno de una fase estacionaria adecuada. El dimetro interno varia entre 2 y 60 mm dependiendo su utilizacin, a escala analtica o semipreparativa y su longitud varia entre 5 y 30 cm. FASES FASE DIRECTA fase estacionaria polar fase mvil de baja polaridad
FASE REVERSA fase estacionaria de polaridad baja fase mvil de polaridad alta
Las fases estacionarias en HPLC, estn constituidas generalmente por partculas de materiales rgidos o semirrgidos. La ms comn es slice.
Funciones de la slice: Superficie adsorbente, soporte de la fase estacionaria y substrato micro poroso. Propiedades de la slice que proporcionan su utilizacin como soporte: Gran resistencia mecnica, amplia gama de formas, tamaos y dimetros de poro y gran variedad de slices en cuanto a superficie especifica. Slica (90%) y almina (10%) son las fases estacionarias ms comunes. Tanto las molculas de solutos como de disolvente son atradas hacia los lugares activos polares de la fase estacionaria. Unos solutos sern ms atrados que otros por la fase estacionaria y as se lograr su migracin diferencial. Se usan mezclas de disolventes para conseguir el poder de elucin y la selectividad adecuadas. Normalmente un disolvente apolar (n-hexano) unido a otro ms activo (acetona, cloruro de metilo, etc.). Fuentes de informacin http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografi a/cromatografia_liquida_de_alta_eficacia.pdf http://www.upct.es/~minaeees/fundamentos_analisis_cromatografico.pdf http://eprints.uanl.mx/1795/1/1080128425.PDF