USO: Para la determinacin cuantitativa de Acido Urico en suero. HISTORIA DEL METODO: El cido rico ha sido determinado por mtodos de fosfotungstato, 1 variantes de este mtodo y por mtodos de reduccin de hierro, estos son influenciados por muchas sustancias en el proceso. a en!ima uricasa ha sido ampliamente usada para la determinacin del cido rico por su especificidad. "ecientemente el per#ido de hidrgeno $producto de la reaccin uricasa%cido rico&. se a unido a otras reacciones en!imticas para dar un producto final de color, 'ue se puede medir a ()*nm. PRINCIPIOS: Acido Urico O H O Alantoin CO H O Uricasa + + + + ) ) ) ) ) ) ) + + ) ) ) H O Aminoantipirina DHBS crom geno H O HPD + + + El cido rico es o#idado por la uricasa Alantoin y per#ido de hidrgeno. ,-./ 0 +%Aminoantipirina 0 Per#ido de hidrgeno, en presencia de pero#idasa, produce un cromgeno coloreado 'ue es medido a ()* nm. a intensidad y color a ()* nm es proporcional a la concentracin del cido rico en la muestra. REACTIVOS: "eactivo de cido rico $las concentraciones se refieren al reactivo reconstituido& +% Aminoantipirina *.1 m2, 1%( ,icloro%)% -idro#i3en!enosulfanato )m2, uricasa 1(*U4 Pero#idasa (*** U4, .uffer 5.( *.1, Esta3ili!adores no reactivos y llenado. PRECAUCIONES: Usar el reactivo solamente para diagnostico 67n 8itro6 PREPARACION DEL REACTIVO: "econstituya el reactivo con el volumen de agua destilada 'ue se9ale el vial, disolver suavemente. ALMACEN DEL REACTIVO: 1. 2antngalo a )%: o ;. en almacenamiento. ). El reactivo reconstituido es esta3le por dos d<as a temp. am3iente y 11 d<as a )%: o ;. DETERIORO DEL REACTIVO: NO USE EL REACTIVO SI: 1. -a entrado agua al vial y se ha formado una pasta. ). El 3lanco tiene una a3sor3ancia mayor de *.+** o mayor a ()* nm. un color rosa es normal. COLECCION DE LA MUESTRA: 1. El suero no hemoli!ado se recomienda. ). El cido rico en suero es esta3le por 1 d<as )%: o ;. y mas de = meses congelado. INTERFERENCIAS: 1. a 3ilirru3ina y el cido ascr3ico dan niveles 3a>os de cido rico. ). as prue3as lipmicas dan niveles de cido rico muy elevados. 1. 8ea young para una lista de sustancias 'ue interfieren MATERIALES PROVEIDOS: 1. "eactivo cido rico. MATERIALES REQUERIDOS Y NO PROPORCIONADOS: 1. 7nstrumentos de pipeteo. ). ?u3os4@radilla 1. "elo>. +. .locA trmico. (. Espectro capa! de leer ()* nm. PROCEDIMIENTO MANUAL: 1. "econstituya de acuerdo a instrucciones. ). Eti'uete los tu3os $.lanco, Estndar, Pacientes y ;ontroles&. 1. Pipetee 1.* ml. de reactivo en todos los tu3os. +. Pre%7ncu3e los tu3os a 15 o ;. por cinco minutos. (. Agregue *.*)( ml.$)( ul& de muestra en los tu3os respectivos. =. 7ncu3e los tu3os a 15 o ;. por ( minutos. 5. Ponga en cero con 3lanco de reactivo a ()* nm y lea la a3sor3ancia de todos los tu3os. :. Para determinar los resultados vea clculos. NOTAS: 1. /i re'uiere un volumen mayor de 1.* ml. use *.*( ml. $(* ul& de muestra y ).( ml. de reactivo. ). as muestras con valores mayores 'ue )( mg4dl diluya 1B1 con solucin salina. 1. as muestra lipmicas de3en correrse con un 3lanco de suero +. .lanco de sueroB Agregue *.*)( ml. $)( ul& de muestra a 1 ml. de agua ;olo'ue el cero con agua en el espectofotmetro, leer y anotar las a3sor3ancias, hacer los calculos necesarios. CALIBRACION: Use estndar de cido rico $( mg4dl& o use un cali3rador apropiado. CONTROL DE CALIDAD: Use suero control normal y anormal para el monitoreo de la reaccin. CALCULOS: A Absorbancia A desconocida Conc del Estandard Acido Urico mg dl A estndard = = . . $ 4 &
Ejemplo A Desconocida A Estandard Conc Std mg dl Entonces mg dl B . . . . 4 B . 4 .
1)=
= = = = * 1)= * 1** ( ( = 1 * 1** UNIDADES SI (mM/L): 2ultipli'ue el resultado $mg4dl& por 1* para convertir dl por y divida entre 1=: $Peso molecular del ac. rico&. mg 4 dl # 1* C m24 mg4dl # .*(D( C m24 1=: VALORES ESPERADOS: ).( % 5.5 mg4dl DESEMPEO: 1. inearidad B )( mg4dl ). PrecisinB Entre r!e"#$ C%n&' D'E . C'V'( (.: *.*( *.D D.+ *.*( *.( C%n%&' D'E' C'V'( (.D *.*= 1.* D.( *.*= *.= REFERENCIAS: 1. Eolin, ,. ,ennis, F., G. ;hen. 11B+=D $1D11&. ). ;araHay, F. ?., ;lin. ;hem. +B)1D $1D=1&. 1. 2orin, . @., G. ;lin. Path. =*B=D1 $1D51& +. 2orin, . @., ;lin. ;hem )*B(1 $1D5+& (. .rochner%2ortenson, I., 2edicine 1DB1=1 $1D+*& =. AlacAar, -. 2., G. .iol ;hem. 1=5B+)D $1D+5& 5. Praetorius, E., Poulson, -., /cand. G. ;lin. 7nvest. (B)51 $1D(1&. :. -enry, ". G., ;linical ;hemistryB Principles and ?echnics, )nd ed., -agerstoHn $2,&, -arper J (+1 $1D5+& D. Koung, ,. /., et al. ;lin. ;hem. )1B1, $1D5(&. ,7/?"7.U7,L PL"B MYM L#"%r#t%r) #n* Me*+&#, S!,)- In&' :=:+ Avenida de la Euente /uite 1+ /an ,iego ;A, D)1(+ ?el. $=1D& 51*%*1)= Ea#. $=1D& 51*%*)D5 HHH.mymsupply.com