Ciclo de Krebs

El ciclo de Krebs (tambin llamado ciclo del cido ctrico o ciclo de los cidos tricarboxlicos) es
una ruta metablica, es decir, una sucesin dereacciones qumicas, que forma parte de
la respiracin celular en todas las clulas aerbicas. En clulas eucariotas se realiza en la
mitocondria. En las procariotas, el ciclo de Krebs se realiza en el citoplasma, especficamente
en el citosol.
En organismos aerbicos, el ciclo de Krebs es parte de la va catablica que realiza la oxidacin
de glcidos, cidos grasos y aminocidos hasta producir CO2, liberando energa en forma
utilizable (poder reductor y GTP).
El metabolismo oxidativo de glcidos, grasas y protenas frecuentemente se divide en tres
etapas, de las cuales, el ciclo de Krebs supone la segunda. En la primera etapa, los carbonos de
estas macromolculas dan lugar a molculas de acetil-CoA de dos carbonos, e incluye las vas
catablicas de aminocidos (p. ej. desaminacin oxidativa), la beta oxidacin de cidos grasos y
la gluclisis. La tercera etapa es la fosforilacin oxidativa, en la cual el poder reductor (NADH y
FADH2) generado se emplea para la sntesis de ATP segn la teora del acomplamiento
quimiosmtico.
El ciclo de Krebs tambin proporciona precursores para muchas biomolculas, como ciertos
aminocidos. Por ello se considera una va anfiblica, es decir, catablica y anablica al
mismo tiempo.
El Ciclo de Krebs fue descubierto el por el alemn Hans Adolf Krebs, quien obtuvo el Premio
Nobel
Etapas del ciclo de Krebs
Reaccin 1: Citrato sintasa (De oxalacetato a citrato)
El sitio activo de la enzima, activa el acetil-CoA para hacerlo afn a un centro carbonoso del
oxalacetato. Como consecuencia de la unin entre las dos molculas, el grupo tioster (CoA) se
hidroliza, formando as la molcula de citrato.
La reaccin es sumamente exoergnica (?G'=-31.4 kJ/mol), motivo por el cual este paso es
irreversible. El citrato producido por la enzima, adems, es capaz de inhibir competitivamente
la actividad de la enzima. Incluso estando la reaccin muy favorecida (porque es exoergnica),
la citrato sintasa puede ser perfectamente regulada. Este aspecto tiene una notable importancia
biolgica, puesto que permite una completa regulacin del ciclo de Krebs completo,
convirtiendo a la enzima en una especie de marcapasos del ciclo.
Reaccin 2: Aconitasa (De citrato a isocitrato)
La aconitasa cataliza la isomerizacin del citrato a isocitrato, por la formacin de cis-aconitato.
La enzima cataliza tambin la reaccin inversa, pero en el ciclo de Krebs tal reaccin es
unidireccional a causa de la ley de accin de masa: las concentraciones (en condiciones
estndar) de citrato (91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de isocitrato (6%), empujan
decididamente la reaccin hacia la produccin de isocitrato.
En el sitio activo de la enzima est presente un clster hierro-azufre que, junto a algunos
residuos de aminocidos polares, liga el sustrato. En concreto, la unin al sustrato se asegura
por la presencia de un resto de serina, de arginina, de histidina y de aspartato, que permiten
slo la unin estereospecifica del citrato 1R,2S, rechazando la forma opuesta.
Reaccin 3: Isocitrato deshidrogenasa (De isocitrato a oxoglutarato)
La isocitrato deshidrogenasa mitocondrial es una enzima dependiente de la presencia de NAD+
y de Mn2+ o Mg2+. Inicialmente, la enzima cataliza la oxidacin del isocitrato a oxalsuccinato,
lo que genera una molcula de NADH a partir de NAD+. Sucesivamente, la presencia de un in
bivalente, que forma un complejo con los oxgenos del grupo carboxilo en posicin alfa,
aumenta la electronegatividad de esa regin molecular. Esto genera una reorganizacin de los
electrones en la molcula, con la consiguiente rotura de la unin entre el carbono en posicin
gamma y el grupo carboxilo adyacente. De este modo se tiene una descarboxilacin, es decir, la
salida de una molcula de CO2, que conduce a la formacin de a-cetoglutarato, caracterizado
por dos carboxilos en las extremidades y una cetona en posicin alfa con respecto de uno de los
dos grupos carboxilo.
Reaccin 4: a-cetoglutarato deshidrogenasa (De oxoglutarato a Succinil-CoA)
Despus de la conversin del isocitrato en a-cetoglutarato se produce una segunda reaccin de
descarboxilacin oxidativa, que lleva a la formacin de succinil CoA. La descarboxilacin
oxidativa del a-chetoglutarato es muy parecida a la del piruvato, otro a-cetocido.
Ambas reacciones incluyen la descarboxilacin de un a-cetocido y la
consiguiente produccin de una unin tioster a alta energa con la coenzima A. Los complejos
que catalizan tales reacciones son parecidos entre ellos.
La a-cetoglutarato deshidrogenasa (o, ms correctamente, oxoglutarato deshidrogenasa), est
compuesta de tres enzimas diferentes:
Subunidad E1: las dos cetoglutarato deshidrogenasas.
Subunidad E2: la transuccinilasa.
(La subunidad E1 y E2 presentan una gran homologa con las de la piruvato
deshidrogenasa.)
Subunidad E3: la dihidrolipoamida deshidrogenasa, que es el mismo polipptido presente
en el otro complejo enzimtico.
Reaccin 5: Succinil-CoA sintetasa (De Succinil-CoA a succinato)
El succinil-CoA es un tioster a alta energa (su ?G' de hidrlisis est en unos -33.5 kJ mol-1,
parecido al del ATP que es de -30.5 kJ mol-1). La citrato sintasa se sirve de un intermediario
con tal unin a alta energa para llevar a cabo la fusin entre una molcula con dos tomos de
carbono (acetil-CoA) y una con cuatro (oxalacetato). La enzima succinil-CoA sintetasa se sirve
de tal energa para fosforilar un nuclesido difosfato purinico como el GDP.
La energa procedente del tioster viene convertida en energa ligada a una unin fosfato. El
primer paso de la reaccin genera un nuevo intermediario a alta energa, conocido como
succinil fosfato. Sucesivamente, una histidina presente en el sitio cataltico remueve el fosfato
de la molcula glucdica, generando el producto succinato y una molcula de fosfohistidina, que
dona velozmente el fosfato a un nuclesido difosfato, recargndolo a trifosfato. Se trata del
nico paso del ciclo de Krebs en el que se produce una fosforilacin a nivel de sustrato.
El GTP est implicado principalmente en las rutas de transduccin de seales, pero su papel en
un proceso energtico como el ciclo de Krebs es, encambio, esencialmente trasladar grupos
fosfato hacia el ATP, en una reaccin catalizada por la enzima nuclesido difosfoquinasa.
Reaccin 6: Succinato deshidrogenasa (De succinato a fumarato)
La parte final del ciclo consiste en la reorganizacin de molculas a cuatro tomos de carbono
hasta la regeneracin del oxalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el
succinato tiene que convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la
beta oxidacin de los cidos grasos, tal conversin ocurre mediante tres pasos: una primera
oxidacin, una hidratacin y una segunda oxidacin. Estos tres pasos, adems de regenerar
oxalacetato, permiten la extraccin ulterior de energa mediante la formacin de FADH2 y
NADH.
La primera reaccin de oxidacin es catalizada por el complejo enzimtico de la succinato
deshidrogenasa, la nica enzima del ciclo que tiene como aceptor de hidrgeno al FAD en vez
de al NAD+. El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un residuo de histidina. La
enzima se vale del FAD ya que la energa asociada a la reaccin no es suficiente para reducir el
NAD+.
El complejo enzimtico tambin es el nico del ciclo que pasa dentro de la membrana
mitocondrial. Tal posicin se debe a la implicacin de la enzima en la cadena de transporte de
los electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se introducen directamente en la cadena
gracias a la unin estable entre la enzima y el cofactor mismo.
Reaccin 7: Fumarasa (De fumarato a L-malato)
La fumarasa cataliza la adicin en trans de un protn y un grupo OH- procedentes de una
molcula de agua. La hidratacin del fumarato produce L-malato.
Reaccin 8: Malato deshidrogenasa (De L-malato a oxalacetato)
La ltima reaccin del ciclo de Krebs consiste en la oxidacin del malato a oxalacetato. La
reaccin, catalizada por la malato deshidrogenasa, utiliza otra molcula de NAD+ como aceptor
de hidrgeno, produciendo NADH.
La energa libre de Gibbs asociada con esta ltima reaccin es decididamente positiva, a
diferencia de las otras del ciclo. La actividad de la enzima es remolcada por el consumo de
oxalacetato por parte de la citrato sintasa, y de NADH por parte de la cadena de transporte de
electrones.