DISCUSSO DOS RESULTADOS:

Transferncia de caldo nutritivo previamente esterilizado.

Figura 1 Tubos contendo caldo nutritivo enumerados de 1 a 5.
Neste experimento deveramos avaliar a transferncia de caldo nutritivo de
maneira gradativa entre cinco tubos. O objetivo deste experimento era avaliar a
capacidade de transferncia desse caldo nutritivo de maneira assptica, evitando
contaminaes e consequentemente crescimento bacteriano.
Para isso, as tcnicas de flambagem da pipeta utilizada e tambm dos tubos,
antes e depois da transferncia do caldo nutritivo, foram empregadas. Alm disso, o
manuseio das vidrarias e equipamentos atrs da chama do bico de Bunsen. O
manuseio correto e adequado dos equipamentos pode evitar contaminao e
proliferao bacteriana. Observa-se nesta etapa que a posio dos dedos e a forma
como as vidrarias so abertas e fechadas so primordiais para um resultado
satisfatrio. O bico de Bunsen utilizado para evitar a contaminao do manipulador,
do material esterilizado ou das culturas de microrganismos. Ele cria uma rea de
segurana (estril) ao seu redor, porque o ar frio chega (com microrganismos em
suspenso) e ao esquentar, se dispersa, dispersando com ele os microrganismos. As
manipulaes devem ser feitas, preferencialmente, por trs da chama do bico de
Bunsen. Alm disso, o ele empregado na flambagem dos materiais.
Realizando os devidos procedimentos, obtivemos os seguintes resultados
(Tabela 1):





Tabela 1 Aspecto dos tubos aps 48-72 horas
Tubo Aspecto
Tubo 1 Lmpido
Tubo 2 Lmpido
Tubo 3 Lmpido
Tubo 4 Lmpido
Tubo 5 Turvo

O aspecto do caldo nutritivo (turvo ou lmpido) indica a presena ou no de
contaminao durante o processo de transferncia. A soluo contida no tubo A era
esterilizada e tinha um aspecto lmpido. Observando-se os resultados obtidos, os
tubos 1, 2, 3 e 4 apresentaram aspecto lmpido. Comparando-se os aspectos desses
tubos com o tubo A, conclumos que estes estavam livres de contaminao e
consequentemente sem proliferao bacteriana. J o tubo 5 foi contaminado
propositalmente por E. Coli e apresentou um aspecto turvo. Este procedimento
proposital de contaminao foi realizado para obter-se um padro de controle, com a
finalidade de comparao. Isso refora o resultado dos tubos 1, 2, 3 e 4, livres de
contaminantes.
Eficcia da luz ultravioleta sobre microrganismos
A luz ultravioleta (UV) causa danos ao DNA das clulas expostas, produzindo
ligaes entre as bases pirimdicas adjacentes, normalmente timinas nas cadeias de
DNA, inibindo a replicao correta do DNA durante a reproduo da clula. Os
comprimentos de onda UV mais eficazes para matar os microrganismos so os de
cerca de 260 nm, pois so absorvidos especificamente pelo DNA celular. A
desvantagem desse mtodo que a radiao no muito penetrante, assim, os
microrganismos a serem mortos devem ser expostos diretamente aos raios.
Organismos protegidos por slidos e coberturas como papel, vidro e tecidos no so
afetados ou so pouco afetados.
Esses resultados podem ser visualizados nas figuras 2 e 3. Na figura 2
observamos um grande crescimento bacteriano (E. coli), representado pelas manchas
castanhas. O crescimento possvel devido proteo de vidro e o baixo poder de
penetrao da luz ultravioleta. Na figura 3 o crescimento bacteriano menos
pronunciado, pois a luz ultravioleta atinge diretamente as bactrias. Entretanto, um
resultado no esperado observado crescimento bacteriano na poro central da
placa de Petri. Este resultado pode ser explicado pelo tempo de exposio
inadequado, assim como interferncias na incidncia da luz UV.



Figura 2 E. coli exposta luz UV em uma placa de Petri fechada (tampa de vidro)

Figura 3 E. coli exposta luz UV em uma placa de Petri aberta

Antissepsia de mos: experimento de Price
Neste experimento o objetivo era visualizar a presena de microrganismos
existente nas mos e a eficcia da lavagem das mos e o uso de antissptico na
reduo de microrganismos da pele.
Os sabes e detergentes possuem pouco valor como antissptico, mas tem
uma importante funo na remoo mecnica dos microrganismos. A pele possui
clulas, mortas, p, suor seco, microrganismos e leos. O sabo rompe o filme oleoso
em pequenas gotculas, denominadas emulsificao, que juntamente com a gua,
removem os resduos medida que a pele lavada. J o mecanismo de ao do
lcool a desnaturao de protenas, mas tambm pode romper membranas e


dissolver lipdeos. Agem efetivamente contra as bactrias, fungos, mas no contra
endsporos e vrus envelopados.
Os resultados obtidos ficaram distantes do esperado (Figura 4). Para um
resultado adequado a rea mais contaminada da placa de Petri deveria ser a
identificada com os dizeres Mos sem lavar. A rea mos lavadas deveria
apresentar pouca contaminao e a rea mos com antissepsia deveria apresentar
pouca ou nenhuma contaminao (Figura 5). Algumas explicaes para o resultado
so o manuseio incorreto das vidrarias e materiais, principalmente a placa de Petri;
antissepsia incorreta das mos, utilizao incorreta do bico de Bunsen, soluo salina
contaminada e abertura da placa de Petri fora da chama.

Figura 4 Placa de Petri divida em 3 partes: mos sem lavar, mos lavadas e mos com
antissepsia

Figura 5 Resultado experimental esperado para o experimento de Price. A) Mos sem lavar;
B) Mos lavadas e C) Mos com antissepsia


Preparo de meios de cultura e vidraria utilizadas em rotina de microbiologia,
esterilizao e tcnicas de manipulao assptica:

Neste experimento diversas tcnicas utilizadas em laboratrios de
microbiologia so empregadas, tais como: preparo e acondicionamento dos meios de
cultura e materiais de laboratrio, esterilizao por autoclave (calor mido) e
manipulao assptica. A manipulao e realizao correta desses procedimentos
garante um resultado satisfatrio e longe de contaminaes.
As manipulaes asspticas so um conjunto de procedimentos que visa a
manuteno de culturas, de meios de cultura ou de solues estreis isento de
contaminao (microrganismos estranhos) enquanto manipulado, ou seja, so
tcnicas laboratoriais usadas para minimizar contaminaes. Assim, a manipulao de
meios estreis ou de culturas puras devem ser feitas em condies que minimizem a
possibilidade de contaminao do objeto em estudo. As tcnicas de manipulao
assptica incluem: lavar as mos e fazer antissepsia com lcool 70% ou iodado, limpar
e desinfetar a superfcie da bancada de trabalho, manipular perto da chama do bico de
Bunsen; esterilizar previamente qualquer material que entre em contato com o meio
em estudo; manter fechado os recipientes com culturas ou solues estreis flambar
chama sempre que for abrir e fechar os recipientes; pipetar esterilmente flambar
extremidades das pipetas estreis; evitar contato do material estril com superfcies
no-estreis.
A tcnica de autoclave (calor mido) visa matar os microrganismos
principalmente pela coagulao proteica (desnaturao), que causada pela ruptura
de ligaes de hidrognio que mantm as protenas em sua estrutura tridimensional.
um mtodo utilizado para esterilizar meios de cultura, instrumentos, vestimentas,
aplicadores, solues e diversos outros itens que podem suportar altas temperaturas e
presses.
Como observado na Figura 6, os meios de cultura apresentaram algumas
contaminaes e consequentemente proliferao bacteriana. Os motivos para a
contaminao pode ser explicada pela falha em algum dos processos de manipulao
assptica (fatores mencionas anteriormente) ou esterilizao.




Figura 6 Meio de cultura LB slido em Placa de Petri








BIBLIOGRAFIA

TORTORA, Gerard J. Microbiologia. 10. ed. Porto Alegre: Artmed, 2012. p 193,
194, 416 e 871.

MURRAY, Patrick R. Microbiologia Mdica. 6. ed. So Paulo: Elsevier, 2008. p
264. 265 e 280.