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Prof. G. Enders
Institut fr Virologie, Infektiologie und Epidemiologie e.V.
Vorsitzende: Prof. Dr. med. Gisela Enders

LABOR ENDERS
Prof. Dr. med. G. Enders & Partner
Rosenbergstrae 85 70193 Stuttgart Telefon 0711/6357-0 Telefax 0711/6357-202

Info-Nr.:59, Februar 2003, August 2010, Update: Dezember 2011

ANA-Stufendiagnostik

Die Stufendiagnostik im Rahmen der Abklrung einer Autoimmunerkrankung beginnt mit der
Bestimmung von Autoantikrpern (AAK) gegen Zellkerne, auch ANA (antinuklere Antikrper)
genannt.
Das ANA-Screening wird mittels Immunfluoreszenztest (IFT) auf Objekttrgern mit fixierten
Zellen (HEp-2-Zellen und Affenleberzellen) durchgefhrt. Lokalisation und Muster der
Fluoreszenz deuten auf die Spezifitt der vorliegenden Autoantikrper hin. Das
Immunfluoreszenzmuster ist meist typisch, jedoch nicht spezifisch, da hnliche Muster bei
zahlreichen AAK mit oft unbekannten Antigenen vorkommen. Manchmal berlappen sich
mehrere Fluoreszenzmuster (z.B. wird ein gesprenkeltes Muster hufig von einem homogenen
Muster berdeckt).
Bei positivem Screeningtest sollten weitere Untersuchungen zur genauen Bestimmung der AAK-
Spezifitt folgen. Nur die weitere Differenzierung ermglicht die Einordnung des Befundes im Rahmen
der klinischen Fragestellung.
Wichtigste Fluoreszenzmuster und die mit ihnen assoziierten Autoantikrper sind in den
Tabellen 1 und 2 dargestellt.

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Tabelle 1: AAK gegen Kernantigene
Beschreibung des
Fluoreszenzmusters
Verdacht auf Antikrper gegen: Bild-Beispiel
Homogen, positive Frbung der
Chromosomen im Mitosestadium
dsDNS, Histone und
Nukleosomen

Gesprenkelt, negative Frbung der
Chromosomen im Mitosestadium
SS-A (Ro60 und Ro52), SS-B,
U1-RNP, Sm; Ku und Mi-2

Nukleolr, negative Frbung der
Chromosomen im Mitosestadium
Fibrillarin, Pm-Scl, NOR-90,
RNAP und To/Th

Nukleolr + homogen, positive
Frbung der Chromosomen im
Mitosestadium
Scl-70

Sprenkelung in den
Interphasekernen und im
kondensierten Chromosomen-
Material der mitotischen Zellen
Zentromere

Nuklere Tupfen (dots) Sp100

Kernmembran Lamin, gp210

Pleomorph PCNA

Die Immunfluoreszenzbilder wurden uns freundlicherweise von der Fa. Euroimmun zur Verfgung gestellt

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Bei gesprenkeltem und wegen der Gefahr der berdeckung auch bei homogenem
Fluoreszenzmuster der ANA mssen weitere Teste zur Bestimmung von Antikrpern gegen ENA
(extrahierbare nuklere Antigene) durchgefhrt werden.
Bei der Bestimmung von ENA-AAK werden die Seren im ersten Analyseschritt mit einem Screening-
EIA untersucht. Diese EIA-Riegel sind mit einem Antigenpool aus folgenden Antigenen beschichtet:
SS-A (ro60 und Ro52), SS-B, U1-RNP, RNP70, Sm, Scl-70, Jo1und Centromere B. Bei positivem
Ergebnis erfolgt die Differenzierung der AAK-Spezifitt mittels Einzelantigen-EIA.
Bei positiver Frbung der Chromosomen im Mitosestadium mssen zustzlich zu den Antikrpern
gegen ENA noch Antikrper gegen dsDNS, Histone und Nukleosomen mittels ELISA bestimmt
werden.
Alle nukleolren AAK gelten als Marker fr die Sklerodermie und deren Overlap-Phnomene und
bedrfen deshalb nicht zwingend einer weiteren Differenzierung.
Der Immunfluoreszenztest auf Objekttrgern mit fixierten HEp-2-Zellen ermglicht neben der
Bestimmung von AAK gegen Kernantigene auch den Nachweis von AAK gegen
Zytoplasmabestandteile.

Tabelle 2: AAK gegen Zytoplasmabestandteile
Beschreibung des
Fluoreszenzmusters
Verdacht auf Antikrper gegen: Bild-Beispiel
Feingesprenkelt Ribosomen, Jo-1 und andere
Synthetasen

Grobgesprenkelt Mitochondrien

Filaments Aktin, Myosin und andere
Mikrofilamenten

Die Immunfluoreszenzbilder wurden uns freundlicherweise von der Fa. Euroimmun zur Verfgung gestellt
Bei feiner granulrer Fluoreszenz des Zytoplasmas mssen ELISA-Teste zum Nachweis von AAK
gegen Ribosomen und Jo-1 durchgefhrt werden.
Grobgesprenkelte Muster deuten auf antimitochondriale AAK (AMA) hin.
Eine filamentse Fluoreszenz ist fr AAK gegen glatte Muskulatur (SMA) typisch. Diese AAK-
Spezifitten mssen zustzlich durch IFTs auf Organschnitten besttigt werden.

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Ab welchem ANA-Titer ist eine weitere Stufendiagnostik sinnvoll?
Tabelle 3: Prozentanteil der positiven Nachweise fr dsDNS-AAK und ENA-AAK, bezogen auf die
Anzahl der Gesamtuntersuchungen (Phadia EliA, Daten Labor Prof. G. Enders).
ANA-Titer dsDNS-
positive
Seren (%)
ENA-
positive
Seren (%)


<1:80 0,6 2,7

1:801:160 3,0 4,8

>=1:320

26,1 37,8
Die Wahrscheinlichkeit eines positiven dsDNS- oder ENA-
Nachweises hngt von der Hhe des ANA-Titers ab (Tabelle 3).
Eine weitere Stufendiagnostik nach einem positiven ANA-
Screening sollte daher in der Regel ab einem ANA-Titer von
1:320 durchgefhrt werden. Bei anhaltendem Verdacht auf eine
Autoimmunerkrankung kann die Bestimmung der dsDNS- und
ENA-AAK schon ab einem Titer von 1:80 versucht werden. Bei
schwangeren Frauen sollte der ENA-ELISA auch bei negativem
ANA-Test durchgefhrt werden, um das Vorliegen von SS-A-AAK
auszuschlieen.
Wie sind ANA-Befunde zu interpretieren?
Der Nachweis von dsDNS-AAK und ENA-AAK ist hoch spezifisch fr eine Autoimmunerkrankung
[Conrad 2006, Kavanaugh 2000]. Mit bestimmten Krankheitsbildern assoziierte Autoantikrperprofile
sind in der Tabelle "Autoimmundiagnostik nach Leitsymptomen und Krankeitsbildern" und im
Laborprogramm zu finden.
Leider knnen nicht alle positiven Immunfluoreszenz-Befunde mit hohem ANA-Titer mittels ELISA
weiter differenziert werden, da zahlreiche Antigene noch nicht bekannt sind. Unsere eigene,
mehrjhrige Erfahrung hat gezeigt, dass in Seren mit ANA-Titer von >1:320 in ca. 2030 % ds-DNS-
AAK und in ca. 3040 % ENA-AAK nachgewiesen werden.
AAK in hohen Titern, die in dsDNS- und ENA-ELISA negativ sind, weisen auf eine Erkrankung hin, bei
der es sich jedoch nicht zwingend um eine Kollagenose handeln muss. Diese AAK werden auch im
Rahmen anderer Erkrankungen und bei klinisch Gesunden gefunden [Vaile 2000, ]. Dabei muss
jedoch bercksichtigt werden, dass hohe ANA-Titer schon vor Auftreten einer SLE-typischen
Symptomatik nachgewiesen werden knnen [Arbuckle 2003].
Niedrige ANA-Titer (1:80 bis 1:320) kommen hufig auch bei Gesunden vor (bis zu 30 %) [Craig 1999,
Tan 1997]. Andererseits schliet ein niedriger AAK-Titer bzw. ein negativer Befund eine
Autoimmunerkrankung nicht gnzlich aus (15 % der SLE Patienten sind ANA-negativ). Die
erhobenen Laborergebnisse sollen deshalb immer nur im Zusammenhang mit dem klinischen Bild
beurteilt werden.
Literatur:
Arbuckle MR et al. Development of autoantibodies before the clinical onset of systemic lupus
erythematosus. N Engl J Med. 2003 Oct 16;349(16):1526-33.
Conrad K, Schler W, Hiepe F. Autoantikrper bei systemischen Autoimmunerkrankungen. Ein
diagnostischer Leitfaden. Pabst Science Publischers, D-49525 Lengerich 2006
Craig WY et al. The distribution of antinuclear anti-body titers in "normal" children and adults. J
Rheumatol. 1999 Apr;26(4):914-9.
Kavanaugh A, et al Guidelines for clinical use of the antinuclear antibody test and tests for specific
autoantibodies to nuclear antigens. American College of Pathologists. Arch Pathol Lab Med. 2000
Jan;124(1):71-81
Sack U et al. die deutsche EASI-Gruppe (European Autoimmunity Standardization Initiative).
Autoantibody detection by indirect immunofluorescence on HEp-2 cells Dtsch Med Wochenschr. 2009
Jun;134(24):1278-82
Tan EM et al. Range of antinuclear antibodies in "healthy" individuals. Arthritis Rheum. 1997
Sep;40(9):1601-11
Vaile JH et al. Is high titre ANA specific for connective tissue disease? Clin Exp Rheumatol. 2000
Jul-Aug;18(4):433-8
Verstegen G et al. Detection and identification of antinuclear antibodies (ANA) in a large community
hospital. Acta Clin Belg. 2009 Jul-Aug;64(4):317-23.




Dr. med. Elena Ladwig Dr. med. F. Tewald Prof. Dr. med. Gisela Enders