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Catalase: Inibio Enzimtica | Bioqumica

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UESB - UNIVERSIDADE ESTADUAL DO SUDOESTE DA BAHIA.
DEPARTAMENTO DE QUMICA E EXATAS.
DISCIPLINA: BIOQUMICA.
DOCENTE: Prof
a
. Dr
a
.

LUZIA PANDO.




Catalase: Inibio Enzimtica

Sayonara Carib.
Emanuela Mota.
Dandara Caldas.
Gessica Costa.
Silvana Costa.



Jequi-Bahia
Maio/2014

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Catalase: Inibio Enzimtica | Bioqumica

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I - Introduo
A atividade enzimtica pode ser afetada pela presena de molculas que funcionam como
inibidores enzimticos. A inibio enzimtica pode assumir dois aspectos, sendo uma
inibio reversvel quando o inibidor dissocia-se rapidamente da enzima, ou inibio
irreversvel, quando o inibidor combina-se permanentemente com a enzima, inativando,
ou mesmo destruindo-a. O gs ciandrico e grande nmero de pesticidas, como o DDT,
so inibidores irreversveis de enzimas intervenientes na respirao e da o perigo da sua
utilizao. Tais inibidores so pois venenos metablicos.
A inibio reversvel pode ser competitiva ou no competitiva: Inibio competitiva
ocorre quando um composto estruturalmente semelhante ao substrato, mas resistente
ao enzimtica, existe em concentrao mais elevada que a do substrato. Este inibidor
liga-se ao centro ativo da enzima, impedindo a ligao do verdadeiro substrato. Pelo
inverso este efeito diminui quando a concentrao de substrato aumenta. Assim, o
substrato e o inibidor competem pelo centro ativo. A inibio competitiva depende, pois,
da relao entre a concentrao do inibidor e a concentrao do substrato. O inibidor no
tem estrutura semelhante do substrato e forma com a enzima um complexo enzima-
inibidor, num local da superfcie, diferente do centro ativo. Este inibidor provoca uma
alterao na estrutura globular da enzima, modificando a conformao do centro ativo,
deixando a enzima de ficar ativa. O inibidor e o substrato no competem pela ocupao
do centro ativo, dependendo apenas da concentrao do inibidor.
Muitos inibidores so substncias celulares que regulam a atividade enzimtica
combinando-se reversivelmente com enzima. Assim, o produto de uma reao enzimtica
pode controlar a atividade de outra enzima, especialmente em casos de sequncias de
reaes enzimticas muito comuns no metabolismo. Quando o produto final formado em
excesso, as respectivas molculas vo inibir a primeira enzima da cadeia enzimtica,
provocando a paragem da sequncia de reaes, sendo retomada logo que pare de haver
excesso do produto final. Muitos frmacos utilizados em quimioterapia desempenham
uma ao teraputica atuando precisamente como inibidores.


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II Objetivo
Verificar a atividade de catalase na presena e ausncia de um on metlico.
Diferenciar inibio competitiva e no competitiva.














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III Metodologia
Materiais
Banho de gelo;
Liquidificador;
Becker;
Pipetas;
Peneira.

Reagentes
Soluo de CuSO4 20%;
Perxido de hidrognio;
Batatinha


Procedimento

PARTE A: PREPARO DAS SOLUES
1. Cortou-se a batata em pequenos pedaos e bateu no liquidificador com 250 ml
de gua destilada, at triturar bem.
2. Em seguida, colocou-se 10 ml de perxido de hidrognio em um becker.

PARTE B: INIBIO DA CATALASE
Presente tambm na batata, a catalase uma enzima que acelera a transformao
do perxido de hidrognio (gua oxigenada, H
2
O
2
) em gua e oxignio. Essa
reao pode ser observada pela liberao do oxignio, na forma de pequenas
bolhas de gs:

2H
2
O
2

(aq)
+ catalase 2H
2
O + O
2 (g)


1. Colocou-se 5 mL da soluo de perxido em um becker e adicionou 2,5 mL da
suspenso obtida de batata. Agitou a mistura durante 10 minutos e observou
durante o processo.

2. Colocou-se 5 mL da soluo de perxido em um copo e adicionou 2,5 mL da
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soluo de sulfato de cobre. Agitar bem e em seguida acrescentou 2,5 mL da
soluo de batata. Novamente agitou, observando a mistura.

3. No mesmo tubo, foi adicionadas novamente 5 mL da soluo de perxido de
hidrognio. A soluo foi novamente agitada e observou os resultados.

4. Colocou-se 5 mL da soluo de perxido de hidrognio em um becker e 2,5 mL
da suspenso de batata em outro. Deixou em banho de gelo por 20 minutos e,
ento colocou a soluo de batata no mesmo copo da soluo de perxido. A
soluo foi agitada e colocada novamente no banho de gelo. A mistura foi
observada por 10 minutos nessas condies.

5. Os resultados obtidos nos experimentos foram comparados.























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IV Resultados e discurso

Experimento 01
Notou-se na soluo de catalase a presena de bolhas de gs e espuma. O que
significa que a enzima est ativa e houve uma reao competitiva.
Quando a catalase entra em contato com o perxido de hidrognio, acaba
transformando esse perxido de hidrognio (H
2
O
2
) em gua (H
2
O) e gs oxignio
(O
2
). A catalase faz isso de maneira extremamente eficiente, com at 200 mil
reaes por segundo.
Reao:
2H
2
O
2

(aq)
+ catalase 2H
2
O + O
2 (g)


Experimento 02
No apresentou reaes, pois o sulfato inibiu a ao da catalase. Mostrando assim
ser um inibidor no-competitivo.
Os inibidores no-competitivos podem ligar-se enzima e ao substrato ao mesmo
tempo, ou seja, nunca se ligam ao stio ativo. Quer o complexo E-I, quer o
complexo E-I-S, so enzimaticamente inativos. Tanto o K
m
aparente como o V
max

mudam neste caso, pois o inibidor no pode ser desligado da enzima por aumento
da concentrao de substrato (em contraste com o que acontece na inibio
competitiva).

Experimento 03
No ocorreu reao, pois a concentrao de substrato no altera a ao do
inibidor, portanto, houve uma reao de inibio no competitiva.

Experimento 04
Observou-se que o segundo experimento liberou oxignio mais rapidamente que o
primeiro, pois o poder de catalase maior em condies de baixa temperatura. A
catalase decompe muito mais molculas de perxido de hidrognio em baixa
temperatura.




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V- Concluso

Foi possvel observar a partir da anlise das reaes que a catalase acelera a
velocidade da transformao de perxido de hidrognio (H
2
O
2
) em gua e
oxignio.
Ao misturar perxido soluo de batata, observou-se que houve a liberao de
bolhas, caracterizando a sada de oxignio da soluo. Na presena de inibidores
no competitivos como o sulfato de cobre, a ao enzimtica quase nula. Ao
resfriar a reao, sua velocidade aumentou em relao a temperatura ambiente.



























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VI Referncias

1. ATKINS, P. JONES L. Princpios de qumica: questionando a vida moderna e o
meio ambiente. 1 edio. Porto Alegre: Bookman, 2001.

2. Campbell, Mary K. Bioqumica. 2 edio, ARTMED Editora, Porto Alegre, 2000.
Fatores que afetam a enzima. Disponvel em: www.sobiologia.com/quimica













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VII Anexos
1- Qual o tipo de inibio observada?
A inibio no-competitiva. Nela, o indicador no-competitivo liga-se a um stio
diferente do que liga o substrato. Quando o inibidor est ligado, tendo ou no
substrato, a enzima fica inativa e o inibidor diminui a V. mxima aparente,
abaixando a concentrao da enzima ativa.

2- De quais fatores dependem o grau de inibio causada por um inibidor
competitivo?
O grau de inibio depende das concentraes relativas do inibidor competitivo e
do ligante habitual, bem como a afinidade da protena pelos dois.

3- O grau de inibio competitiva aumenta ou diminui quando a concentrao
de substrato aumenta e do inibidor fica constante?
No tipo de inibio em discusso as hiprboles tendem a encontrar-se quando a
concentrao de substrato aumenta, ou seja, o V
max
no afetado e o grau de
inibio diminui quando a concentrao de substrato aumenta.
Este tipo de inibio diz-se competitiva pois que, para uma dada concentrao de
inibidor, o grau de inibio sempre mais marcado em ensaios com baixas
concentraes de substrato que com altas concentraes de substrato.
Aumentando a concentrao de substrato pode ser possvel anular (V
max

invariante) ou, pelo menos, diminuir o grau de inibio: o substrato e o inibidor
parecem ter afinidade para um mesmo stio ativo na enzima e competirem na
ligao a esse stio ativo. Se o substrato e I forem estruturalmente semelhantes
esta ideia fica reforada.

4- Quando da presena de um inibidor no-competitivo parece ocorrer uma
quantidade maior ou menor de enzima em sua relao? Por que?
Os inibidores no competitivos atuam diminuindo o V
max
aparente e o grau de
inibio invariante com a concentrao de substrato. A hiprbole S representa v
0

versus [S] na ausncia de inibidor e a hiprbole S+I, v
0
versus [S] na presena de
uma determinada concentrao do inibidor I. V
max
e V
max
representam
respetivamente o V
max
observvel na ausncia e presena do inibidor. Na presena
do inibidor o valor de V
max
diminui mas o valor de Km no se modifica.