MEDIO TSI (TRES AZUCARES):

Medio diferencial complejo (de color rojo) compuesto por 3 azcares (lactosa, sucrosa y dextrosa y un ligador
que es en este caso el hierro). La siemra se realiza tanto en la superficie del agar (aeroiosis) como en la
profundidad de !ste (anaeroiosis).
Medio " (alcalino) de color rojo. Medio # ($cido) de color amarillo.
K/A
%i la acteria metaoliza s&lo la glucosa' en la superficie la utilizar$ por ()a respiratoria, y donde la tensi&n de
ox)geno disminuya lo suficiente, emplear$ una peque*a proporci&n por ()a fermentati(a. +sto generar$ una
peque*a cantidad de $cidos que ser$n neutralizados por las aminas deri(adas de la decaroxilaci&n oxidati(a
de las prote)nas.
,omo resultado, el medio mantendr$ su color rojo en la superficie, al no haer camiado de p-. .or el
contrario, las acterias crecidas en la profundidad emplear$n desde el primer momento la glucosa por ()a
fermentati(a, generando $cidos que no ser$n neutralizados, pro(oc$ndose un descenso del p- y el color del
medio en el fondo del tuo camiar$ a amarillo.
A/A
%i la acteria, adem$s fermenta lactosa' los $cidos producidos modificar$n tami!n el p- de la superficie del
medio. Las aminas no son capaces de neutralizar la cantidad de $cidos producidos en esta fermentaci&n, ya
que la lactosa se encuentra en el medio a mayor concentraci&n que la glucosa. +l color del medio en la
superficie camiar$ a amarillo.
K/K
%i la acteria es aeroia estricta (no fermentadora), el medio permanece de color rojo. Los azcares son
respirados, degrad$ndose completamente hasta ,/0, que se elimina y no modifica el p-.
K/A(H2S)
aparici&n de un precipitado de color negro en el fondo del tuo. #lgunas acterias respiradoras
anoxoi&nticas son capaces de emplear el tiosulfato s&dio como aceptor final de electrones en la cadena
transportadora. +ste compuesto se reduce a $cido sulh)drico que reacciona con el hierro 1e02 presente en el
medio formando un precipitado negro de sulfuro de hierro.

PRUEBA DE HEMOLISIS EN AGAR SANGRE
3etecta la presencia de hemolisina, enzima que permite la clasificaci&n de los %treptococcus en alfa
(hem&lisis parcial, incompleta que torna color (erdoso), eta (hem&lisis total) y gamma hemol)ticos (no existe
hem&lisis).
Muchas otras acterias, aparte de los %treptococcus, pueden tener esta enzima. %e usa el culti(o para
demostrar el grado de hem&lisis (hem&lisis eta) en la cual se puede oser(ar claramente por detr$s de la
siemra.
PRUEBA DE COAGULASA PARA Staphyl!!!"#:
.ermite diferenciar %taphylococcus aureus (coagulasa positi(o) del resto de especies de %taphylococcus
(coagulasas negati(os). La t!cnica en tuo detecta coagulasa lire y ligada.
Mecanismo de acci&n de la coagulasa lire' procoagulasa (enzima extracelular acteriana) reacciona con un
factor acti(ador presente en el plasma sangu)neo similar a la protromina, dando lugar a un complejo an$logo
a la tromina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con firin&geno formando un co$gulo de firina
en ausencia de ,a02.
La coagulasa ligada o factor de agregaci&n acta directamente sore el firin&geno y lo con(ierte en firina.
4o requiere la presencia de acti(adores plasm$ticos.
PRUEBA DE CATALASA (PARA DI$ERENCIAR Staphyl!!!"# %& St'&pt!!!"#):
5acterias que (i(en en amientes aeroios requieren de catalasa para con(ertir el per&xido de hidr&geno en
agua y ox)geno molecular.
+s positi(a la pruea cuando se ponen en contacto una acteria con acti(idad catalasa con -0/0 36 y se
producen urujas de ox)geno.
%e emplea para diferenciar el g!nero %taphylococcus (catalasa positi(o) del g!nero %treptococcus (catalasa
negati(o).
MANITOL SALADO AGAR.
Medio de culti(o selecti(o y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciaci&n de estafilococos.
+s recomendado para el aislamiento de estafilococos patog!nicos a partir de muestras cl)nicas, alimentos,
productos cosm!ticos y otros materiales de importancia sanitaria.
7ami!n, este medio puede utilizarse para el culti(o de especies hal&filas de 8irio, si no se dispone de
medios apropiados (7,5% Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.
1undamento
%e trata de un medio altamente selecti(o deido a su alta concentraci&n salina. Los estafilococos coagulasa
positi(a hidrolizan el manitol acidificando el medio9 las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
rillante. Los estafilococos coagulasa negati(os, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las
colonias sospechosas, se repicar$n en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles,
posteriormente, la pruea de la coagulasa.
+n el medio de culti(o, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carono, nitr&geno,
(itaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carono fermentale, el cloruro de sodio (que se encuentra
en alta concentraci&n) es el agente selecti(o que inhie el desarrollo de la flora acompa*ante, y el rojo fenol
es el indicador de p-.
Las acterias que crecen en un medio con alta concentraci&n de sal y fermentan el manitol, producen $cidos,
con lo que se modifica el p- del medio y (ira el indicador de p- del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positi(a fermentan el manitol y se (isualizan como colonias amarillas rodeadas
de una zona del mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se (isualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del
mismo color o prpura.
TECNICA DE TINCION GRAM(Staphyl!!!"# %& St'&pt!!!"# #( )'a*(+)):
REALIZACIN
:. .reparar los frotis acterianos.
0. 7e*ir con cristal (ioleta :min.
3. La(ar con aundante agua el exceso de colorante.
;. ,urir con Lugol :min.
<. La(ar con agua el exceso de Lugol.
=. 3ecolorar con alcohol>acetona o simplemente con alcohol hasta que la preparaci&n deje de perder color
(3?seg)
@. La(ar con aundante agua para eliminar el resto de disol(ente.
A. 7e*ir con safranina :min.
B. La(ar con agua para eliminar el colorante de contraste.
:?. %ecar la preparaci&n.
::. +xaminar al microscopio fij$ndose sore todo en el color de cada preparaci&n.
MEDIO O$( O,IDACI-N . $ERMENTACI-N)
Staphylococcus' es fermentaci&n positi(a (amarillo)